RU2814594C1 - Nutrient medium for growing milk-clotting enzyme producer piptoporus betulinus - milk-clotting enzyme producer - Google Patents
Nutrient medium for growing milk-clotting enzyme producer piptoporus betulinus - milk-clotting enzyme producer Download PDFInfo
- Publication number
- RU2814594C1 RU2814594C1 RU2022130489A RU2022130489A RU2814594C1 RU 2814594 C1 RU2814594 C1 RU 2814594C1 RU 2022130489 A RU2022130489 A RU 2022130489A RU 2022130489 A RU2022130489 A RU 2022130489A RU 2814594 C1 RU2814594 C1 RU 2814594C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- nutrient medium
- milk
- enzyme
- producer
- clotting enzyme
- Prior art date
Links
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 title claims abstract description 58
- 241000123196 Piptoporus betulinus Species 0.000 title claims abstract description 11
- 108010005090 rennin-like enzyme (Aspergillus ochraceus) Proteins 0.000 title claims abstract description 10
- 235000018185 Betula X alpestris Nutrition 0.000 claims abstract description 20
- 235000018212 Betula X uliginosa Nutrition 0.000 claims abstract description 20
- 241000208818 Helianthus Species 0.000 claims abstract description 17
- 235000003222 Helianthus annuus Nutrition 0.000 claims abstract description 17
- 239000010903 husk Substances 0.000 claims abstract description 17
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 8
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 claims abstract description 5
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims abstract description 5
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 claims abstract description 4
- OSGAYBCDTDRGGQ-UHFFFAOYSA-L calcium sulfate Chemical compound [Ca+2].[O-]S([O-])(=O)=O OSGAYBCDTDRGGQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000000320 mechanical mixture Substances 0.000 claims description 6
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 239000011707 mineral Substances 0.000 claims description 5
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 claims description 3
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 claims description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 abstract description 43
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 abstract description 43
- 239000006286 aqueous extract Substances 0.000 abstract description 17
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 abstract description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 8
- 229910052925 anhydrite Inorganic materials 0.000 abstract 1
- XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N heavy water Substances [2H]O[2H] XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 16
- 208000012868 Overgrowth Diseases 0.000 description 10
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 10
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 10
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 8
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 5
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 5
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 5
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 5
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 description 4
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 4
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 3
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 3
- -1 monosubstituted potassium phosphate Chemical class 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 3
- 235000015099 wheat brans Nutrition 0.000 description 3
- 241000221198 Basidiomycota Species 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000222511 Coprinus Species 0.000 description 2
- 240000000588 Hericium erinaceus Species 0.000 description 2
- 235000007328 Hericium erinaceus Nutrition 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 240000002129 Malva sylvestris Species 0.000 description 2
- 235000006770 Malva sylvestris Nutrition 0.000 description 2
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 2
- 241000221987 Russula Species 0.000 description 2
- 241001653680 Russula decolorans Species 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 2
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 2
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 2
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 2
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 2
- 235000020247 cow milk Nutrition 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N sodium nitrate Chemical compound [Na+].[O-][N+]([O-])=O VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010563 solid-state fermentation Methods 0.000 description 2
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 2
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 2
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 2
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 2
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 5,8-dihydroxy-2-methoxy-6-methyl-7-(2-oxopropyl)naphthalene-1,4-dione Chemical compound CC1=C(CC(C)=O)C(O)=C2C(=O)C(OC)=CC(=O)C2=C1O UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- 244000075850 Avena orientalis Species 0.000 description 1
- 235000007319 Avena orientalis Nutrition 0.000 description 1
- 235000003932 Betula Nutrition 0.000 description 1
- 241000219429 Betula Species 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001236803 Coprinopsis lagopides Species 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241001246273 Endothia Species 0.000 description 1
- 241001480537 Fomitopsis Species 0.000 description 1
- 241000123150 Fomitopsis pinicola Species 0.000 description 1
- 241000223218 Fusarium Species 0.000 description 1
- 241000222336 Ganoderma Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 241000123222 Hericium Species 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 241000222342 Irpex Species 0.000 description 1
- 241000222344 Irpex lacteus Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 102000014171 Milk Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010011756 Milk Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000235395 Mucor Species 0.000 description 1
- 208000031888 Mycoses Diseases 0.000 description 1
- 208000028571 Occupational disease Diseases 0.000 description 1
- 241000228143 Penicillium Species 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 241000222354 Trametes Species 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 235000019658 bitter taste Nutrition 0.000 description 1
- 235000010633 broth Nutrition 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- PASHVRUKOFIRIK-UHFFFAOYSA-L calcium sulfate dihydrate Chemical compound O.O.[Ca+2].[O-]S([O-])(=O)=O PASHVRUKOFIRIK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 239000000413 hydrolysate Substances 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 1
- 235000021239 milk protein Nutrition 0.000 description 1
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 1
- 150000002823 nitrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 235000020200 pasteurised milk Nutrition 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000005070 ripening Effects 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000010344 sodium nitrate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004317 sodium nitrate Substances 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 1
- 230000028070 sporulation Effects 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical class [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Abstract
Description
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к ферментной технологии и может найти применение в биотехнологической или молочной промышленности при получении различных типов сыров и творога.The invention relates to biotechnology, in particular to enzyme technology, and can find application in the biotechnological or dairy industry in the production of various types of cheeses and cottage cheese.
Для получения молокосвертывающих ферментов грибного происхождения в промышленности в основном используют культуры микроскопических мицелиальных грибов родов Mucor, Endothia, Aspergillus, Penicillium, Fusarium. Однако использование в технологии производства ферментов спорообразующих микроскопических грибов сопровождается повышенным риском профзаболеваний персонала (микозы, аллергические реакции), связанным с биологической природой применяемых продуцентов. Помимо этого, использование ферментов из микроскопических грибов часто приводит к получению сыров низкого качества, с легким или выраженным привкусом горечи из-за высокого уровня общего неспецифического протеолиза белков молока.To obtain milk-clotting enzymes of fungal origin, the industry mainly uses cultures of microscopic filamentous fungi of the genera Mucor, Endothia, Aspergillus, Penicillium, and Fusarium. However, the use of spore-forming microscopic fungi in the production technology of enzymes is accompanied by an increased risk of occupational diseases of personnel (mycoses, allergic reactions) associated with the biological nature of the producers used. In addition, the use of enzymes from microscopic fungi often results in low-quality cheeses with a slight or pronounced bitter taste due to a high level of general non-specific proteolysis of milk proteins.
В настоящее время ведется активный поиск молокосвертывающих ферментов среди продуцентов высших базидиомицетов. Известны продуценты ферментов среди культур высших базидиальных грибов родов Irpex, Trametes, Fomitopsis, Ganoderma, Russula, Coprinus. Мицелий высших грибов в отличие от микроскопических не имеет стадию спорообразования, что значительно упрощает технологию его культивирования, в частности выделения и очистки фермента.Currently, there is an active search for milk-clotting enzymes among producers of higher basidiomycetes. Producers of enzymes are known among cultures of higher basidiomycetes of the genera Irpex, Trametes, Fomitopsis, Ganoderma, Russula, Coprinus. The mycelium of higher fungi, unlike microscopic ones, does not have a sporulation stage, which greatly simplifies the technology of its cultivation, in particular the isolation and purification of the enzyme.
Большинство технологий получения молокосвертывающих ферментов основаны на глубинной ферментации продуцентов. Однако использование технологии твердофазной ферментации позволяет существенно снизить энергозатраты за счет статических условий культивирования продуцентов в простых конструкциях биореакторов. Известно, что около 30-40% стоимости производства ферментов приходится на стоимость питательных сред, поэтому технология твердофазного культивирования мицелия высших грибов является экономически выгодной за счет использования лигноцеллюлозных отходов сельскохозяйственной и деревоперерабатывающей промышленности.Most technologies for producing milk-clotting enzymes are based on deep fermentation of producers. However, the use of solid-state fermentation technology makes it possible to significantly reduce energy costs due to static conditions for cultivating producers in simple bioreactor designs. It is known that about 30-40% of the cost of enzyme production is accounted for by the cost of nutrient media, therefore the technology of solid-phase cultivation of the mycelium of higher fungi is economically profitable due to the use of lignocellulosic waste from the agricultural and wood processing industries.
Вышеперечисленные грибы, за исключением Russula и Coprinus, относятся к дереворазрушающим, что дает возможность культивировать мицелий твердофазным способом на лигноцеллюлозных субстратах. Однако из уровня техники известны питательные среды для получения молокосвертывающих ферментов из высших грибов с использованием технологии глубинного культивирования [1, 2]. Питательные среды для твердофазного культивирования высших грибов - продуцентов ферментов молокосверты-вающего действия представлены в ограниченном количестве.The above fungi, with the exception of Russula and Coprinus, are classified as wood-destroying, which makes it possible to cultivate the mycelium using the solid-phase method on lignocellulosic substrates. However, nutrient media for obtaining milk-clotting enzymes from higher fungi using deep cultivation technology are known from the prior art [1, 2]. Nutrient media for solid-phase cultivation of higher fungi - producers of milk-clotting enzymes - are presented in limited quantities.
Известна питательная среда для культивирования продуцентов ферментов среди высших грибов Fomitopsis pinicola (штамм АТСС 20036) и Irpex lacteus (штамм IFO 5367). Культивирование биомассы мицелия осуществляют на питательной среде, состоящей из источников углеводов (крахмал, декстрин, сахароза, лактоза, мальтоза, глюкоза, меласса, гидролизат древесины), азота (соли аммония, нитраты, кукурузный отвар, пептон, мясной экстракт, соевый порошок, пшеничные отруби, дрожжи, дрожжевой экстракт, мочевина), минеральных веществ (соли кальция, магния, натрия, цинка, меди, железа) и витаминов [3]. Однако получаемые ферменты на предложенной питательной среде обладают недостаточно высокой молокосвертывающей активностью (МСА) и высокой протеолитической активностью, что приводит к разжижению молочного сгустка в процессе созревания сыра.A nutrient medium is known for cultivating enzyme producers among the higher fungi Fomitopsis pinicola (strain ATCC 20036) and Irpex lacteus (strain IFO 5367). Cultivation of mycelial biomass is carried out on a nutrient medium consisting of sources of carbohydrates (starch, dextrin, sucrose, lactose, maltose, glucose, molasses, wood hydrolysate), nitrogen (ammonium salts, nitrates, corn broth, peptone, meat extract, soybean powder, wheat bran, yeast, yeast extract, urea), minerals (calcium, magnesium, sodium, zinc, copper, iron) and vitamins [3]. However, the resulting enzymes on the proposed nutrient medium have insufficiently high milk-clotting activity (MCA) and high proteolytic activity, which leads to liquefaction of the milk clot during the ripening of cheese.
Известен субстрат для твердофазного культивирования высших грибов ежовика гребенчатого (Hericium erinaceum), содержащий 100 г пшеничных отрубей и 120 мл дистиллированной воды [4]. Основным недостатком предлагаемого субстрата является продолжительный период культивирования биомассы мицелия (зарастание в течение 14 суток 100 г субстрата) из-за затрудненного воздухообмена, возникающего в результате слипания пшеничных отрубей при добавлении воды. MCA Hericium erinaceum на представленном субстрате зависит от способов выделения, очистки и концентрирования ферментов и составляет до 450 ед/мл.A known substrate for solid-phase cultivation of higher mushrooms (Hericium erinaceum), containing 100 g of wheat bran and 120 ml of distilled water [4]. The main disadvantage of the proposed substrate is the long period of cultivation of mycelial biomass (overgrowth of 100 g of substrate within 14 days) due to difficult air exchange resulting from the clumping of wheat bran when water is added. MCA of Hericium erinaceum on the presented substrate depends on the methods of isolation, purification and concentration of enzymes and is up to 450 units/ml.
Наиболее близким по своей технической сущности к предложенному изобретению относится питательная среда для выращивания базидиальных грибов Russula decolorans следующего состава, %: мука кукурузная - 0,9-1,6; натрий азотнокислый - 0,1-0,3; дрожжи - 0,1-0,4; калий фосфорнокислый однозамещенный - 0,01-0,08; калий фосфорнокислый двузамещенный - 0,02-0,06; кальций хлористый - 0,05-0,05; магний сернокислый - 0,03-0,1; вода - остальное. На среде указанного состава максимальный уровень МСА составляет 400 ед/мл [5, прототип]. Недостатком питательной среды является дороговизна источника углеводов, невысокий уровень МСА в сравнении с предлагаемым способом, а также сравнительно легкая подверженность питательной среды и культуры контаминации посторонней микрофлорой.The closest in its technical essence to the proposed invention is a nutrient medium for growing basidiomycetes Russula decolorans of the following composition,%: corn flour - 0.9-1.6; sodium nitrate - 0.1-0.3; yeast - 0.1-0.4; monosubstituted potassium phosphate - 0.01-0.08; disubstituted potassium phosphate - 0.02-0.06; calcium chloride - 0.05-0.05; magnesium sulfate - 0.03-0.1; water - the rest. On the medium of the specified composition, the maximum level of MSA is 400 units/ml [5, prototype]. The disadvantage of the nutrient medium is the high cost of the source of carbohydrates, the low level of MSA in comparison with the proposed method, as well as the relatively easy susceptibility of the nutrient medium and culture to contamination with foreign microflora.
Задачей изобретения является разработка состава питательной среды для культивирования биомассы мицелия грибов Piptoporus betulinus - продуцента фермента молокосвертывающего действия с целью повышения уровня МСА с высокой скоростью зарастания.The objective of the invention is to develop the composition of a nutrient medium for cultivating biomass of the mycelium of the fungi Piptoporus betulinus - a producer of a milk-clotting enzyme in order to increase the level of MSA with a high rate of overgrowth.
Поставленная задача решается тем, что в питательной среде состава - лигноцеллюлозное сырье, минеральные компоненты, вода, используют березовые опилки, лузгу подсолнечника в виде механической смеси и следующем соотношении, масс. %: березовые опилки - 60,0-80,0; лузга подсолнечника - 18,5-38,5; СаСО3 - 1,2; CaSO4×2H2O - 0,3; вода для создания относительной влажности 50-70% (сверх 100%), а в качестве продуцента фермента используют мицелий Piptoporus betulinus (сверх 100%).The problem is solved by the fact that in the nutrient medium of the composition - lignocellulosic raw materials, mineral components, water, birch sawdust, sunflower husks are used in the form of a mechanical mixture and the following ratio, mass. %: birch sawdust - 60.0-80.0; sunflower husk - 18.5-38.5; CaCO 3 - 1.2; CaSO 4 × 2H 2 O - 0.3; water to create a relative humidity of 50-70% (over 100%), and the mycelium of Piptoporus betulinus (over 100%) is used as an enzyme producer.
Технический результат - повышение уровня МСА водного экстракта, содержащего фермент, высокая скорость зарастания питательной среды, достигается за счет того, что используют питательную среду для культивирования продуцента фермента P. betulinus, состоящую из механической смеси березовых опилок, лузги подсолнечника и минеральных компонентов в следующем соотношении, масс. %: березовые опилки - 60,0-80,0; лузга подсолнечника - 18,5-38,5; СаСОз - 1,2; CaSO4×2H2O - 0,3; вода для создания относительной влажности 60% (сверх 100%).The technical result is an increase in the MCA level of an aqueous extract containing an enzyme, a high rate of overgrowing of the nutrient medium, achieved by using a nutrient medium for cultivating the enzyme producer P. betulinus, consisting of a mechanical mixture of birch sawdust, sunflower husks and mineral components in the following ratio , mass %: birch sawdust - 60.0-80.0; sunflower husk - 18.5-38.5; CaCO z - 1.2; CaSO 4 × 2H 2 O - 0.3; water to create a relative humidity of 60% (over 100%).
Для достижения заявленного технического результата используют лигноцеллюлозные отходы деревоперерабатывающей промышленности и сельского хозяйства - березовые опилки и лузгу подсолнечника. Переработка сырья мицелием грибов - продуцентами ферментов в ценные продукты, является перспективным направлением современной биотехнологии. Использование технологии твердофазной ферментации позволяет существенно снизить энергозатраты за счет статических условий культивирования продуцентов в простых конструкциях биореакторов.To achieve the stated technical result, lignocellulosic waste from the wood processing industry and agriculture is used - birch sawdust and sunflower husks. Processing of raw materials by fungal mycelium - enzyme producers - into valuable products is a promising area of modern biotechnology. The use of solid-state fermentation technology can significantly reduce energy costs due to static conditions for cultivating producers in simple bioreactor designs.
Березовые опилки и лузга подсолнечника являются лигноцеллюлозным сырьем и выступают в роли источника углерода и азота для питания и роста грибного мицелия. Кроме того, березовые опилки имеют состав, соответствующий составу ствола березы Betula, которая в природных условиях является естественным питанием для трутовика березового Piptoporus betulinus. Соответственно, используемый продуцент имеет хорошо адаптированную к используемому компоненту питательной среды систему целлюлозоразрушающих ферментов. Также обеспечивается высокая скорость зарастания питательной среды гифами мицелия продуцента.Birch sawdust and sunflower husks are lignocellulosic raw materials and act as a source of carbon and nitrogen for the nutrition and growth of mushroom mycelium. In addition, birch sawdust has a composition corresponding to the composition of the Betula birch trunk, which in natural conditions is a natural food for the birch polypore Piptoporus betulinus. Accordingly, the producer used has a system of cellulose-degrading enzymes well adapted to the component of the nutrient medium used. It also ensures a high rate of overgrowing of the nutrient medium by the hyphae of the producer mycelium.
Лузга подсолнечника представляет собой легко усвояемый и доступный для продуцента источник азота и углерода что обеспечивает высокую скорость зарастания. Карбонат кальция и двуводный сульфат кальция используются как раскислители для создания необходимого уровня рН питательной среды. Указанные компоненты в совокупности состава питательной среды позволяют продуценту генерировать водный экстракт фермента с высокой МСА и высокой скоростью зарастания.Sunflower husks are a source of nitrogen and carbon that is easily digestible and accessible to the producer, which ensures a high rate of overgrowth. Calcium carbonate and calcium sulfate dihydrate are used as deoxidizers to create the required pH level of the nutrient medium. These components, together with the composition of the nutrient medium, allow the producer to generate an aqueous extract of the enzyme with a high MSA and a high rate of overgrowth.
Использование механической смеси компонентов позволяет выровнять концентрацию каждого из компонентов в составе композиции питательной среды, обеспечить хороший доступ гифов мицелия к источникам питания, создать благоприятные условия для растворения водорастворимых компонентов питательной среды и, в итоге, продуцирование фермента с высокой МСА и высокую скорость зарастания. Применение питательной среды не в форме механической смеси не позволяет получить водный экстракт фермента с высокой МСА.The use of a mechanical mixture of components makes it possible to equalize the concentration of each component in the composition of the nutrient medium, ensure good access of mycelial hyphae to food sources, create favorable conditions for the dissolution of water-soluble components of the nutrient medium and, ultimately, the production of an enzyme with high MSA and a high rate of overgrowth. The use of a nutrient medium not in the form of a mechanical mixture does not allow obtaining an aqueous extract of the enzyme with a high MSA.
Вода в композиции с содержанием 60% (масс.) сверх 100% используется для создания необходимой влажности субстрата, растворения водорастворимых компонентов питательной среды, сорбции ряда продуктов разложения лигноцеллюлозных компонентов питательной среды, создания условий для высокой скорости зарастания. При концентрации свыше 60% сильно снижается концентрация ферментов продуцента, снижается их выход, ослабевает МСА водного экстракта фермента. При концентрации ниже 60% снижается скорость диффузии водорастворимых компонентов питательной среды и возрастает срок зарастания.Water in a composition containing 60% (wt.) in excess of 100% is used to create the necessary humidity of the substrate, dissolve water-soluble components of the nutrient medium, sorption of a number of decomposition products of lignocellulosic components of the nutrient medium, and create conditions for a high rate of overgrowth. At a concentration above 60%, the concentration of producer enzymes is greatly reduced, their yield decreases, and the MSA of the aqueous extract of the enzyme is weakened. At a concentration below 60%, the rate of diffusion of water-soluble components of the nutrient medium decreases and the overgrowth period increases.
Соотношение березовых опилок и лузги подсолнечника в диапазоне от 3:1 до 3:2 (масс.) позволяет обеспечить высокую скорость зарастания мицелием питательной среды и целлюлозоразрушающую активность синтезируемого продуцентом фермента, соответственно - требуемый выход фермента, а также его высокую МСА. При ином соотношении скорость роста мицелия продуцента и выход фермента крайне низки, сильно снижается МСА водного экстракта фермента.The ratio of birch sawdust and sunflower husk in the range from 3:1 to 3:2 (wt.) makes it possible to ensure a high rate of mycelial overgrowth of the nutrient medium and the cellulose-destructive activity of the enzyme synthesized by the producer, respectively, the required yield of the enzyme, as well as its high MCA. With a different ratio, the growth rate of the producer mycelium and the yield of the enzyme are extremely low, and the MSA of the aqueous extract of the enzyme is greatly reduced.
Использование в качестве продуцента мицелия Piptoporus betulinus (сверх 100%) в заявляемой питательной среде позволяет обеспечить хорошее усвоение компонентов питательной среды и синтез фермента с высокой МСА и высокой скоростью зарастания. Использование в качестве продуцента другого мицелия не позволяет получить водный экстракт фермента с высокой МСА и высокой скоростью зарастания.The use of Piptoporus betulinus mycelium (over 100%) as a producer in the inventive nutrient medium allows for good absorption of the components of the nutrient medium and the synthesis of an enzyme with high MSA and a high rate of overgrowth. Using another mycelium as a producer does not allow obtaining an aqueous extract of the enzyme with a high MCA and a high overgrowth rate.
Для создания относительной влажности питательной среды 60% (сверх 100%)) в их состав добавляется нагретая до 80-100°С водопроводная вода. Готовые питательные среды распределяют по полипропиленовым контейнерам объемом 2000 см3, закрывают крышками с фильтрующим материалом, стерилизуют при 1,0 атм в течение 1,5 часов в автоклаве ВК-75 и засевают чистой культурой мицелия (сверх 100%), выращенной на агари-зованной среде. Питательную среду, инокулированную мицелием грибов, помещают в термостатируемое помещение и инкубируют в течение 12-30 суток при температуре 22-28°С.To create a relative humidity of the nutrient medium of 60% (over 100%)), tap water heated to 80-100°C is added to their composition. The prepared nutrient media are distributed into polypropylene containers with a volume of 2000 cm 3 , covered with lids with filter material, sterilized at 1.0 atm for 1.5 hours in a VK-75 autoclave and inoculated with a pure mycelial culture (over 100%) grown on agar. called environment. The nutrient medium inoculated with fungal mycelium is placed in a thermostated room and incubated for 12-30 days at a temperature of 22-28°C.
Экстракцию ферментов осуществляют дистиллированной водой. Для этого твердофазную культуру диспергируют в 100 мл дистиллированной воды (соотношение питательная среда-растворитель 1:10) и энергично встряхивают на шейкере при 240 об/мин, температуре 25°С в течение 10 минут. После чего смесь фильтруют через складчатый бумажный фильтр (синяя лента). Полученный фильтрат центрифугируют при 10000 об/мин, температуре +4°С в течение 10 мин. Надосадочную жидкость используют в качестве неочищенных ферментов для определения МСА [4].Enzyme extraction is carried out with distilled water. To do this, the solid-phase culture is dispersed in 100 ml of distilled water (nutrient-solvent ratio 1:10) and shaken vigorously on a shaker at 240 rpm, temperature 25°C for 10 minutes. The mixture is then filtered through a folded paper filter (blue ribbon). The resulting filtrate is centrifuged at 10,000 rpm, temperature +4°C for 10 minutes. The supernatant is used as crude enzymes for the determination of MCA [4].
Общую МСА определяют по методу N. Mukai и М. Kawai после полного зарастания питательной среды мицелием грибов. В пробирки объемом 20 мл вносят по 10 мл коровьего молока жирностью 3,2%, добавляют 1,7 мл 10% раствора хлорида кальция. Полученную смесь нагревают до температуры 35°С на водяной бане в течение 1-2 минут. Далее в опытные пробирки вносят по 2 мл водного извлечения, содержащих ферменты. В контрольные пробирки с молочным субстратом и хлоридом кальция добавляют по 2 мл предварительно прокипяченного водного экстракта. Смеси в пробирках встряхивают, ставят в термостат при температуре 35°С и начинают отсчет времени до момента образования молочного сгустка.Total MCA is determined by the method of N. Mukai and M. Kawai after the nutrient medium is completely overgrown with fungal mycelium. 10 ml of cow's milk with a fat content of 3.2% is added to test tubes with a volume of 20 ml, and 1.7 ml of a 10% calcium chloride solution is added. The resulting mixture is heated to a temperature of 35°C in a water bath for 1-2 minutes. Next, 2 ml of aqueous extract containing enzymes is added to the test tubes. Add 2 ml of pre-boiled aqueous extract to control test tubes with milk substrate and calcium chloride. The mixtures in test tubes are shaken, placed in a thermostat at a temperature of 35°C and the countdown begins until the milk clot forms.
За единицу МСА принимают количество водного извлечения, которое сворачивает 100 мл коровьего молока за 40 минут при температуре 35°С.One MSA unit is the amount of aqueous extract that curdles 100 ml of cow's milk in 40 minutes at a temperature of 35°C.
Молокосвертывающую активность определяют по формуле:Milk-clotting activity is determined by the formula:
где К - коэффициент разведения изучаемого фермента;where K is the dilution factor of the enzyme being studied;
П - время, за которое образуется плотный молочный сгусток, в минутах;P is the time during which a dense milk clot is formed, in minutes;
40 - среднее время производства сыра;40 - average cheese production time;
2 - количество внесенного фермента мл [1].2 - amount of enzyme added ml [1].
Культивирование мицелия грибов на питательной среде, состоящей из лигноцеллюлозных компонентов, с последующей экстракцией дистиллированной водой позволяет получать водные извлечения, обладающие молокосвертывающей активностью, превышающей прототип в 3,7 раза.Cultivation of fungal mycelium on a nutrient medium consisting of lignocellulosic components, followed by extraction with distilled water makes it possible to obtain aqueous extracts with milk-clotting activity that is 3.7 times higher than the prototype.
Примеры, иллюстрирующие использование рекомендуемой питательной среды для выращивания P. betulinus - продуцента фермента моло-косвертывающего действия, представлены ниже.Examples illustrating the use of the recommended nutrient medium for growing P. betulinus, a milk-clotting enzyme producer, are presented below.
Пример 1Example 1
Питательная среда для культивирования продуцента молокосверты-вающего фермента содержит следующие компоненты (мас. %):The nutrient medium for cultivating a milk-clotting enzyme producer contains the following components (wt.%):
Березовые опилки - 60Birch sawdust - 60
Лузга подсолнечника - 38,5Sunflower husk - 38.5
СаСО3 - 1,2CaCO 3 - 1.2
CaSO4×2H2O - 0,3CaSO 4 × 2H 2 O - 0.3
Компоненты используют в питательной среде в форме механической смеси. Относительную влажность питательной среды доводят водопроводной водой до 60%. Питательную среду помещают в полипропиленовые контейнеры объемом 2000 см3 стерилизуют, охлаждают, затем вносят посевной материал из расчета 4% от объема засеваемой питательной среды и выращивают с соблюдением разработанных условий. Продолжительность зарастания питательной среды мицелием грибов P. betulinus составляет 14 суток. Общая МСА водного извлечения, содержащего фермент, составляет 1260 ед/мл.The components are used in a nutrient medium in the form of a mechanical mixture. The relative humidity of the nutrient medium is adjusted to 60% with tap water. The nutrient medium is placed in polypropylene containers with a volume of 2000 cm 3 , sterilized, cooled, then seed is added at the rate of 4% of the volume of the nutrient medium inoculated and grown in compliance with the developed conditions. The duration of overgrowing of the nutrient medium with P. betulinus fungal mycelium is 14 days. The total MSA of the aqueous extract containing the enzyme is 1260 U/ml.
Пример 2Example 2
Питательная среда для культивирования продуцента фермента содержит следующие компоненты (мас. %):The nutrient medium for cultivating the enzyme producer contains the following components (wt.%):
Березовые опилки - 70Birch sawdust - 70
Плодовые оболочки овса - 28,5Fruit shells of oats - 28.5
СаСО3 - 1,2 CaCO 3 - 1.2
CaSO4×2H2O - 0,3CaSO 4 × 2H 2 O - 0.3
Отличие состава питательной среды от примера 1 заключается в изменении соотношения лигноцеллюлозных компонентов березовых опилок и лузги подсолнечника. Подготовка питательной среды к засеву и культивированию осуществляется по способу, описанному в примере 1. Продолжительность зарастания питательной среды мицелием грибов составляет 16 суток. Общая МСА водного экстракта составляет 1290 ед/мл.The difference in the composition of the nutrient medium from example 1 lies in the change in the ratio of lignocellulosic components of birch sawdust and sunflower husk. The preparation of the nutrient medium for sowing and cultivation is carried out according to the method described in example 1. The duration of overgrowing of the nutrient medium with fungal mycelium is 16 days. The total MSA of the aqueous extract is 1290 U/ml.
Пример 3Example 3
Питательная среда для культивирования продуцента фермента содержит следующие компоненты (мас. %):The nutrient medium for cultivating the enzyme producer contains the following components (wt.%):
Березовые опилки - 75Birch sawdust - 75
Лузга подсолнечника - 23,5Sunflower husk - 23.5
СаСО3 - 1,2CaCO 3 - 1.2
CaSO4×2H2O - 0,3CaSO 4 × 2H 2 O - 0.3
Пример отличается соотношением основного древесного компонента питательной среды, взятого в меньшем количестве и лузги подсолнечника. Подготовка питательной среды к культивированию осуществляется по примеру 1. Продолжительность зарастания питательной среды мицелием грибов составляет 12 суток. Общая МСА водного извлечения составляет 1490 ед/мл.The example differs in the ratio of the main wood component of the nutrient medium, taken in smaller quantities, and sunflower husks. The preparation of the nutrient medium for cultivation is carried out according to example 1. The duration of overgrowing of the nutrient medium with fungal mycelium is 12 days. The total MSA of the aqueous extract is 1490 U/ml.
Пример 4Example 4
Питательная среда для культивирования продуцента фермента содержит следующие компоненты (мас. %):The nutrient medium for cultivating the enzyme producer contains the following components (wt.%):
Березовые опилки - 80Birch sawdust - 80
Лузга подсолнечника - 18,5Sunflower husk - 18.5
СаСО3 - 1,2CaCO 3 - 1.2
CaSO4×2H2O - 0,3CaSO 4 × 2H 2 O - 0.3
Отличие состава питательной среды от описанных примеров заключается в использовании большего количества березовых опилок. Подготовка питательной среды к культивированию осуществляется по примеру 1. Продолжительность зарастания питательной среды мицелием грибов составляет 18 суток. Общая МСА водного экстракта составляет 1230 ед/мл.The difference in the composition of the nutrient medium from the described examples is the use of more birch sawdust. The preparation of the nutrient medium for cultivation is carried out according to example 1. The duration of overgrowing of the nutrient medium with fungal mycelium is 18 days. The total MCA of the aqueous extract is 1230 U/ml.
Таким образом, разработанные составы питательных сред для культивирования мицелия грибов P. betulinus позволяют получать водные извлечения, обладающие высоким уровнем МСА (до 1490 ед/мл). Для более высоких показателей МСА необходимо проводить очистку и концентрирование ферментных растворов.Thus, the developed compositions of nutrient media for cultivating P. betulinus fungal mycelium make it possible to obtain aqueous extracts with a high level of MCA (up to 1490 units/ml). For higher MCA values, it is necessary to purify and concentrate enzyme solutions.
Использование предлагаемой питательной среды в сравнении с существующей позволяет повысить молокосвертывающую активность водного экстракта, содержащего фермент, в 3,7 раза.The use of the proposed nutrient medium in comparison with the existing one makes it possible to increase the milk-clotting activity of an aqueous extract containing the enzyme by 3.7 times.
Список использованных источниковList of sources used
1. Novel milk-clotting enzyme produced by Coprinus lagopides basidial mushroom / M. Shamtsyan, T. Dmitriyeva, B. Kolesnikov, N. Denisova // Le-bensmittel-Wissenschaft und-Technologie. - 2014. - Vol. 58(2). - Pp. 343-347. DOI: 10.1016/j.lwt.2013.10.0091. Novel milk-clotting enzyme produced by Coprinus lagopides basidial mushroom / M. Shamtsyan, T. Dmitriyeva, B. Kolesnikov, N. Denisova // Le-bensmittel-Wissenschaft und-Technologie. - 2014. - Vol. 58(2). - Pp. 343-347. DOI: 10.1016/j.lwt.2013.10.009
2. Пат. 2354698 Российская Федерация, МПК C12N 9/58. Способ получения молокосвертывающего фермента / Т.А. Дмитриева, М.М. Шамцян, Н.П. Денисова, И.В. Змитрович, А.В. Корчмарева; заявитель и патентообладатель Т.А. Дмитриева, М.М. Шамцян, Н.П. Денисова, И.В. Змитрович, А.В. Корчмарева. - №2006133208/13; заявл. 20.03.2008; опубл. 10.05.2009, Бюл. №13.2. Pat. 2354698 Russian Federation, IPC C12N 9/58. Method for producing milk-clotting enzyme / T.A. Dmitrieva, M.M. Shamtsyan, N.P. Denisova, I.V. Zmitrovich, A.V. Korchmareva; applicant and patent holder T.A. Dmitrieva, M.M. Shamtsyan, N.P. Denisova, I.V. Zmitrovich, A.V. Korchmareva. - No. 2006133208/13; application 03/20/2008; publ. 05/10/2009, Bulletin. No. 13.
3. Пат. 3858492 USA, МПК C12N 9/00. Flavor enhancement of milk foodstuffs / N. Mukai; M. Kawai; заявитель и патентообладатель Kyowa Hakko Kogyo Kabushiki Kaisha. - №145515; заявл. 20.05.1971; опубл. 07.01.1975.3. Pat. 3858492 USA, IPC C12N 9/00. Flavor enhancement of milk foodstuffs / N. Mukai; M. Kawai; applicant and patentee Kyowa Hakko Kogyo Kabushiki Kaisha. - No. 145515; application 05/20/1971; publ. 01/07/1975.
4. Crude enzymes from a Hericium edible mushroom isolated in Japan: variability in milk-clotting activity and the ability to coagulate ultra-high-temperature pasteurized milk / M. Kishimoto, K. Nakamura, K. Kanemaru, T. Tasaki, T. Nakamura, K. Sato, M. Tanimoto // Food science and technology Research. - 2018. - Vol. 24 (1). - Pp. 139-143. doi.org/10.3136/fstr.24.1394. Crude enzymes from a Hericium edible mushroom isolated in Japan: variability in milk-clotting activity and the ability to coagulate ultra-high-temperature pasteurized milk / M. Kishimoto, K. Nakamura, K. Kanemaru, T. Tasaki, T. Nakamura, K. Sato, M. Tanimoto // Food science and technology Research. - 2018. - Vol. 24 (1). - Pp. 139-143. doi.org/10.3136/fstr.24.139
5. A.c. 753895 Союз Советских Социалистических Республик, МПК С12 В 3/00, C12D 13/10. Питательная среда для выращивания продуцента молокосвертывающего фермента Russula decolorans I А.Е. Епифанов, П.Н. Евтихов, Н.П. Круглова, В.А. Королев, Т.Н. Макарова, В.Д. Маковкина, Л.Н. Федорова; заявитель и патентообладатель Ефремовский ордена Трудового Красного Знамени биохимический завод. - 2606910/28-13; заявл. 14.04.1978; опубл. 07.08.1980, Бюл. №29. (прототип).5. A.c. 753895 Union of Soviet Socialist Republics, IPC C12 B 3/00, C12D 13/10. Nutrient medium for growing milk-clotting enzyme producer Russula decolorans I A.E. Epifanov, P.N. Evtikhov, N.P. Kruglova, V.A. Korolev, T.N. Makarova, V.D. Makovkina, L.N. Fedorov; applicant and patent holder Efremovsky Order of the Red Banner of Labor biochemical plant. - 2606910/28-13; application 04/14/1978; publ. 08/07/1980, Bull. No. 29. (prototype).
Claims (1)
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2814594C1 true RU2814594C1 (en) | 2024-03-01 |
Family
ID=
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU753895A1 (en) * | 1978-04-14 | 1980-08-07 | Ефремовский Ордена Трудового Красного Знамени Биохимический Завод | Culture medium for culturing russula decolorans milk coagulating enzyme producent |
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU753895A1 (en) * | 1978-04-14 | 1980-08-07 | Ефремовский Ордена Трудового Красного Знамени Биохимический Завод | Culture medium for culturing russula decolorans milk coagulating enzyme producent |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| МИНАКОВА М.В. и др. "Исследование процесса глубинного культивирования высших грибов для получения молокосвертывающих ферментов"; Материалы XV Всероссийской научно-практической конференции студентов, аспирантов и молодых ученых с международным участием, "Технологии и оборудвание химической, биотехнологической и пищевой промышленности", 18-20 мая 2022, Бийск, с.324-327. ДМИТРИЕВА Т.А. "Изучение молокосвертывающей активности высших базидиомицетов"; Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук, 2011, Санкт-Петербург, с.1-20. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Hadar et al. | Chemical composition of the edible mushroom Pleurotus ostreatus produced by fermentation | |
| JP4628482B2 (en) | Meat analog production method using mushroom mycelium, meat analog produced thereby, low calorie substitute meat containing meat analog, meat flavoring agent, and meat flavor enhancer | |
| KR20210111870A (en) | Methods for the production and use of myceliated high protein food compositions | |
| Block et al. | Mushroom mycelium, experiments with submerged culture | |
| Ibrahim Rajoka et al. | Production of single cell protein from rice polishings using Candida utilis | |
| CN101579106B (en) | Fermentation method of soybean paste | |
| US2693664A (en) | Method of enhancing mushroom mycelium flavor | |
| US2850841A (en) | Method of growing mushroom mycelium and the resulting products | |
| CN109197380A (en) | A kind of planting technology of novel edible bacterium | |
| US3966554A (en) | Process for the production of a protein-vitamin concentrate by using yeasts from animal or vegetable fats and for its transformation into a product | |
| Khademi et al. | Optimization of fungal rennet production by local isolate of Rhizomucor nainitalensis under solid substrate fermentation system | |
| RU2814594C1 (en) | Nutrient medium for growing milk-clotting enzyme producer piptoporus betulinus - milk-clotting enzyme producer | |
| CN107867934A (en) | A kind of culture medium for being used for true pleurotus cornucopiae and white beech mushroom and its preparation method and application | |
| CN85103034A (en) | Xianggu mashroom open cultivate technique by bagasse mixed with liquid fungus species | |
| CN109006182A (en) | A kind of culture base-material and preparation method thereof with Lenlinus edodes slag for cultivating oyster mushroom | |
| Block | Developments in the production of mushroom mycelium in submerged liquid culture | |
| CN110551773A (en) | Method for replacing yeast powder with soybean meal enzymolysis liquid in threonine production | |
| Eyal | Mushroom mycelium grown in submerged culture—Potential food applications | |
| RU2650689C1 (en) | Method for obtaining protein feed | |
| WO2020179613A1 (en) | Food material using mushroom mycelium | |
| PL173237B1 (en) | Method of making a seasoning sauce and seasoning sauce as such | |
| KR20010004813A (en) | The use of soybean waste for the cultivation of mushroms | |
| SU908092A1 (en) | Method of obtaining riboflavin | |
| JPS6214759A (en) | Production of food material | |
| CN109548557A (en) | A kind of method of the plantation of bamboo ear |