RU2814327C1 - ПРИМЕНЕНИЕ СУЛЬФАТНЫХ СОЛЕЙ N-(3-(4-(3-(ДИИЗОБУТИЛАМИНО)ПРОПИЛ)ПИПЕРАЗИН-1-ИЛ)ПРОПИЛ)-1Н-БЕНЗО[d]ИМИДАЗОЛ-2-АМИНА И ИХ СОЛЬВАТОВ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ ДВИГАТЕЛЬНЫХ НЕЙРОНОВ И НАРУШЕНИЙ НЕРВНО-МЫШЕЧНЫХ СОЕДИНЕНИЙ - Google Patents
ПРИМЕНЕНИЕ СУЛЬФАТНЫХ СОЛЕЙ N-(3-(4-(3-(ДИИЗОБУТИЛАМИНО)ПРОПИЛ)ПИПЕРАЗИН-1-ИЛ)ПРОПИЛ)-1Н-БЕНЗО[d]ИМИДАЗОЛ-2-АМИНА И ИХ СОЛЬВАТОВ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ ДВИГАТЕЛЬНЫХ НЕЙРОНОВ И НАРУШЕНИЙ НЕРВНО-МЫШЕЧНЫХ СОЕДИНЕНИЙ Download PDFInfo
- Publication number
- RU2814327C1 RU2814327C1 RU2023107656A RU2023107656A RU2814327C1 RU 2814327 C1 RU2814327 C1 RU 2814327C1 RU 2023107656 A RU2023107656 A RU 2023107656A RU 2023107656 A RU2023107656 A RU 2023107656A RU 2814327 C1 RU2814327 C1 RU 2814327C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- propyl
- diisobutylamino
- benzo
- lateral sclerosis
- piperazin
- Prior art date
Links
- 208000005264 motor neuron disease Diseases 0.000 title claims abstract description 69
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 title claims abstract description 32
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title claims description 27
- 239000012453 solvate Substances 0.000 title abstract description 36
- 208000018360 neuromuscular disease Diseases 0.000 title description 2
- 206010002026 amyotrophic lateral sclerosis Diseases 0.000 claims description 55
- 208000002320 spinal muscular atrophy Diseases 0.000 claims description 49
- 208000029402 Bulbospinal muscular atrophy Diseases 0.000 claims description 37
- 208000027747 Kennedy disease Diseases 0.000 claims description 37
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 36
- 208000032319 Primary lateral sclerosis Diseases 0.000 claims description 34
- 206010046298 Upper motor neurone lesion Diseases 0.000 claims description 34
- 201000010901 lateral sclerosis Diseases 0.000 claims description 34
- 201000002241 progressive bulbar palsy Diseases 0.000 claims description 33
- 208000008675 hereditary spastic paraplegia Diseases 0.000 claims description 32
- 208000013315 neuromuscular junction disease Diseases 0.000 claims description 22
- 201000008752 progressive muscular atrophy Diseases 0.000 claims description 20
- 206010028424 Myasthenic syndrome Diseases 0.000 claims description 13
- 206010028417 myasthenia gravis Diseases 0.000 claims description 13
- SXMCNGUNDUIJCO-UHFFFAOYSA-N n-[3-[4-[3-[bis(2-methylpropyl)amino]propyl]piperazin-1-yl]propyl]-1h-benzimidazol-2-amine;sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O.C1CN(CCCN(CC(C)C)CC(C)C)CCN1CCCNC1=NC2=CC=CC=C2N1 SXMCNGUNDUIJCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 201000010743 Lambert-Eaton myasthenic syndrome Diseases 0.000 claims description 12
- 208000026072 Motor neurone disease Diseases 0.000 claims description 12
- 206010069681 Monomelic amyotrophy Diseases 0.000 claims description 11
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 claims description 10
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 9
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 claims description 7
- 102100022548 Beta-hexosaminidase subunit alpha Human genes 0.000 claims description 5
- 208000021811 Sandhoff disease Diseases 0.000 claims description 5
- 208000022292 Tay-Sachs disease Diseases 0.000 claims description 5
- 206010072148 Stiff-Person syndrome Diseases 0.000 claims description 4
- 230000005855 radiation Effects 0.000 claims 1
- KLKKWCPJBTXWOV-UHFFFAOYSA-N n-[3-[4-[3-[bis(2-methylpropyl)amino]propyl]piperazin-1-yl]propyl]-1h-benzimidazol-2-amine Chemical class C1CN(CCCN(CC(C)C)CC(C)C)CCN1CCCNC1=NC2=CC=CC=C2N1 KLKKWCPJBTXWOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 22
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 16
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 14
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 230000002232 neuromuscular Effects 0.000 abstract 2
- 210000002161 motor neuron Anatomy 0.000 description 51
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 33
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 32
- 102100040347 TAR DNA-binding protein 43 Human genes 0.000 description 30
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 27
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 26
- 210000002241 neurite Anatomy 0.000 description 22
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 21
- 201000011240 Frontotemporal dementia Diseases 0.000 description 20
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 20
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 19
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 19
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 19
- 101710150875 TAR DNA-binding protein 43 Proteins 0.000 description 18
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 17
- -1 N-(3-(4-(3-(diisobutylamino)propyl)piperazin-1-yl)propyl)-1H-benzo[d]imidazol-2-amine disulfate Chemical group 0.000 description 16
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 description 14
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 14
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 13
- 108010021188 Superoxide Dismutase-1 Proteins 0.000 description 13
- 102000008221 Superoxide Dismutase-1 Human genes 0.000 description 13
- 101150014554 TARDBP gene Proteins 0.000 description 12
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 12
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 10
- 210000000715 neuromuscular junction Anatomy 0.000 description 10
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 10
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 102100023174 Methionine aminopeptidase 2 Human genes 0.000 description 9
- 108090000192 Methionyl aminopeptidases Proteins 0.000 description 9
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 9
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 9
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 9
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 9
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 9
- 208000010428 Muscle Weakness Diseases 0.000 description 8
- 206010028372 Muscular weakness Diseases 0.000 description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 8
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 8
- FTALBRSUTCGOEG-UHFFFAOYSA-N Riluzole Chemical compound C1=C(OC(F)(F)F)C=C2SC(N)=NC2=C1 FTALBRSUTCGOEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 7
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 7
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 7
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 7
- 229960004181 riluzole Drugs 0.000 description 7
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 6
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 6
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 6
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 6
- 210000002250 primary motor neuron Anatomy 0.000 description 6
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 6
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 5
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 5
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 5
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 5
- 210000002414 leg Anatomy 0.000 description 5
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 5
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 5
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 5
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 5
- 102000004219 Brain-derived neurotrophic factor Human genes 0.000 description 4
- 108090000715 Brain-derived neurotrophic factor Proteins 0.000 description 4
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 4
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 4
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 4
- 101710173440 Ubiquilin-2 Proteins 0.000 description 4
- 102100039933 Ubiquilin-2 Human genes 0.000 description 4
- OIPILFWXSMYKGL-UHFFFAOYSA-N acetylcholine Chemical compound CC(=O)OCC[N+](C)(C)C OIPILFWXSMYKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229960004373 acetylcholine Drugs 0.000 description 4
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 4
- VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N alprazolam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N2C(C)=NN=C2CN=C1C1=CC=CC=C1 VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 4
- 229940077737 brain-derived neurotrophic factor Drugs 0.000 description 4
- VFNGKCDDZUSWLR-UHFFFAOYSA-N disulfuric acid Chemical class OS(=O)(=O)OS(O)(=O)=O VFNGKCDDZUSWLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 4
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 4
- 230000000848 glutamatergic effect Effects 0.000 description 4
- 210000003128 head Anatomy 0.000 description 4
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 4
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 4
- 239000012109 Alexa Fluor 568 Substances 0.000 description 3
- 206010003694 Atrophy Diseases 0.000 description 3
- 206010012289 Dementia Diseases 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 101001092197 Homo sapiens RNA binding protein fox-1 homolog 3 Proteins 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 description 3
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 3
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 3
- 208000010366 Postpoliomyelitis syndrome Diseases 0.000 description 3
- 102100035530 RNA binding protein fox-1 homolog 3 Human genes 0.000 description 3
- 208000034799 Tauopathies Diseases 0.000 description 3
- 230000037444 atrophy Effects 0.000 description 3
- 210000005056 cell body Anatomy 0.000 description 3
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 3
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- 238000003205 genotyping method Methods 0.000 description 3
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 3
- 230000035987 intoxication Effects 0.000 description 3
- 231100000566 intoxication Toxicity 0.000 description 3
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 3
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 201000000585 muscular atrophy Diseases 0.000 description 3
- 210000003098 myoblast Anatomy 0.000 description 3
- 210000001087 myotubule Anatomy 0.000 description 3
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 3
- 230000000324 neuroprotective effect Effects 0.000 description 3
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 3
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 210000003594 spinal ganglia Anatomy 0.000 description 3
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101710159080 Aconitate hydratase A Proteins 0.000 description 2
- 101710159078 Aconitate hydratase B Proteins 0.000 description 2
- 239000012103 Alexa Fluor 488 Substances 0.000 description 2
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 2
- 239000012583 B-27 Supplement Substances 0.000 description 2
- 108700030955 C9orf72 Proteins 0.000 description 2
- 102000052510 DNA-Binding Proteins Human genes 0.000 description 2
- 101710096438 DNA-binding protein Proteins 0.000 description 2
- 102000007260 Deoxyribonuclease I Human genes 0.000 description 2
- 108010008532 Deoxyribonuclease I Proteins 0.000 description 2
- 206010013033 Diplegia Diseases 0.000 description 2
- 208000001308 Fasciculation Diseases 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N Guanidine Chemical compound NC(N)=N ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100029301 Guanine nucleotide exchange factor C9orf72 Human genes 0.000 description 2
- 101000664887 Homo sapiens Superoxide dismutase [Cu-Zn] Proteins 0.000 description 2
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 2
- 208000008238 Muscle Spasticity Diseases 0.000 description 2
- 206010028289 Muscle atrophy Diseases 0.000 description 2
- 206010028293 Muscle contractions involuntary Diseases 0.000 description 2
- HOKKHZGPKSLGJE-GSVOUGTGSA-N N-Methyl-D-aspartic acid Chemical compound CN[C@@H](C(O)=O)CC(O)=O HOKKHZGPKSLGJE-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 2
- 206010056677 Nerve degeneration Diseases 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 208000027089 Parkinsonian disease Diseases 0.000 description 2
- 206010034010 Parkinsonism Diseases 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000019204 Progranulins Human genes 0.000 description 2
- 108010012809 Progranulins Proteins 0.000 description 2
- 102000044126 RNA-Binding Proteins Human genes 0.000 description 2
- 101710105008 RNA-binding protein Proteins 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- 230000035508 accumulation Effects 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 238000011360 adjunctive therapy Methods 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000001946 anti-microtubular Effects 0.000 description 2
- 210000003050 axon Anatomy 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 210000000133 brain stem Anatomy 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 2
- OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N chlorobutanol Chemical compound CC(C)(O)C(Cl)(Cl)Cl OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 2
- 230000008602 contraction Effects 0.000 description 2
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 2
- 229960001334 corticosteroids Drugs 0.000 description 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 2
- 101150047356 dec-1 gene Proteins 0.000 description 2
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 238000002224 dissection Methods 0.000 description 2
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 2
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 2
- QELUYTUMUWHWMC-UHFFFAOYSA-N edaravone Chemical compound O=C1CC(C)=NN1C1=CC=CC=C1 QELUYTUMUWHWMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229950009041 edaravone Drugs 0.000 description 2
- 239000008157 edible vegetable oil Substances 0.000 description 2
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 2
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 2
- 210000003414 extremity Anatomy 0.000 description 2
- 210000001508 eye Anatomy 0.000 description 2
- 208000019995 familial amyotrophic lateral sclerosis Diseases 0.000 description 2
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 2
- 208000013967 frontotemporal dementia and/or amyotrophic lateral sclerosis 1 Diseases 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 230000030214 innervation Effects 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000001153 interneuron Anatomy 0.000 description 2
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 2
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 2
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 2
- 210000000663 muscle cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000032405 negative regulation of neuron apoptotic process Effects 0.000 description 2
- 210000001640 nerve ending Anatomy 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 2
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 2
- 229920000729 poly(L-lysine) polymer Polymers 0.000 description 2
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 description 2
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 2
- 201000002212 progressive supranuclear palsy Diseases 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 230000011514 reflex Effects 0.000 description 2
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 2
- 102220309994 rs1554198179 Human genes 0.000 description 2
- 208000018198 spasticity Diseases 0.000 description 2
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 2
- 230000009747 swallowing Effects 0.000 description 2
- 230000024587 synaptic transmission, glutamatergic Effects 0.000 description 2
- 102000013498 tau Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010026424 tau Proteins Proteins 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 2
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- LNAZSHAWQACDHT-XIYTZBAFSA-N (2r,3r,4s,5r,6s)-4,5-dimethoxy-2-(methoxymethyl)-3-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3,4,5-trimethoxy-6-(methoxymethyl)oxan-2-yl]oxy-6-[(2r,3r,4s,5r,6r)-4,5,6-trimethoxy-2-(methoxymethyl)oxan-3-yl]oxyoxane Chemical compound CO[C@@H]1[C@@H](OC)[C@H](OC)[C@@H](COC)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](OC)[C@@H](OC)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OC)[C@H](OC)O[C@@H]2COC)OC)O[C@@H]1COC LNAZSHAWQACDHT-XIYTZBAFSA-N 0.000 description 1
- 101150084750 1 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000035657 Abasia Diseases 0.000 description 1
- 244000215068 Acacia senegal Species 0.000 description 1
- 235000006491 Acacia senegal Nutrition 0.000 description 1
- 206010000370 Accident at home Diseases 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 206010001497 Agitation Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 101710195183 Alpha-bungarotoxin Proteins 0.000 description 1
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 208000035943 Aphagia Diseases 0.000 description 1
- 241000416162 Astragalus gummifer Species 0.000 description 1
- 206010003591 Ataxia Diseases 0.000 description 1
- 206010006542 Bulbar palsy Diseases 0.000 description 1
- 206010068597 Bulbospinal muscular atrophy congenital Diseases 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010009685 Cholinergic Receptors Proteins 0.000 description 1
- 208000028698 Cognitive impairment Diseases 0.000 description 1
- 208000032170 Congenital Abnormalities Diseases 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 206010011878 Deafness Diseases 0.000 description 1
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 208000012239 Developmental disease Diseases 0.000 description 1
- 208000003164 Diplopia Diseases 0.000 description 1
- 206010013887 Dysarthria Diseases 0.000 description 1
- 206010013975 Dyspnoeas Diseases 0.000 description 1
- 206010066482 Exaggerated startle response Diseases 0.000 description 1
- 102000018233 Fibroblast Growth Factor Human genes 0.000 description 1
- 108050007372 Fibroblast Growth Factor Proteins 0.000 description 1
- 206010064571 Gene mutation Diseases 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- 101000976075 Homo sapiens Insulin Proteins 0.000 description 1
- 101000693844 Homo sapiens Insulin-like growth factor-binding protein complex acid labile subunit Proteins 0.000 description 1
- 101000891579 Homo sapiens Microtubule-associated protein tau Proteins 0.000 description 1
- 208000029084 Hyperlordosis Diseases 0.000 description 1
- 206010021118 Hypotonia Diseases 0.000 description 1
- 208000026350 Inborn Genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 241000219729 Lathyrus Species 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 1
- 208000034819 Mobility Limitation Diseases 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 208000007101 Muscle Cramp Diseases 0.000 description 1
- 208000007379 Muscle Hypotonia Diseases 0.000 description 1
- 206010049565 Muscle fatigue Diseases 0.000 description 1
- CHJJGSNFBQVOTG-UHFFFAOYSA-N N-methyl-guanidine Natural products CNC(N)=N CHJJGSNFBQVOTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011887 Necropsy Methods 0.000 description 1
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000007072 Nerve Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 208000028389 Nerve injury Diseases 0.000 description 1
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 description 1
- 208000036110 Neuroinflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 101710138657 Neurotoxin Proteins 0.000 description 1
- 102000043141 Nuclear RNA Human genes 0.000 description 1
- 108020003217 Nuclear RNA Proteins 0.000 description 1
- 238000009004 PCR Kit Methods 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 206010033799 Paralysis Diseases 0.000 description 1
- 206010033885 Paraparesis Diseases 0.000 description 1
- CXOFVDLJLONNDW-UHFFFAOYSA-N Phenytoin Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C1(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 CXOFVDLJLONNDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010034912 Phobia Diseases 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- RVOLLAQWKVFTGE-UHFFFAOYSA-N Pyridostigmine Chemical compound CN(C)C(=O)OC1=CC=C[N+](C)=C1 RVOLLAQWKVFTGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004570 RNA-binding Effects 0.000 description 1
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 1
- 206010039203 Road traffic accident Diseases 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 208000005392 Spasm Diseases 0.000 description 1
- 208000002548 Spastic Paraparesis Diseases 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 208000034188 Stiff person spectrum disease Diseases 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229920001615 Tragacanth Polymers 0.000 description 1
- 206010047571 Visual impairment Diseases 0.000 description 1
- 102000016913 Voltage-Gated Sodium Channels Human genes 0.000 description 1
- 108010053752 Voltage-Gated Sodium Channels Proteins 0.000 description 1
- 208000006269 X-Linked Bulbo-Spinal Atrophy Diseases 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 102000034337 acetylcholine receptors Human genes 0.000 description 1
- 208000013284 acquired motor neuron disease Diseases 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000036982 action potential Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 238000009098 adjuvant therapy Methods 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- JBDGDEWWOUBZPM-XYPYZODXSA-N ambroxol Chemical compound NC1=C(Br)C=C(Br)C=C1CN[C@@H]1CC[C@@H](O)CC1 JBDGDEWWOUBZPM-XYPYZODXSA-N 0.000 description 1
- 229960005174 ambroxol Drugs 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 201000008257 amyotrophic lateral sclerosis type 1 Diseases 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940125681 anticonvulsant agent Drugs 0.000 description 1
- 239000001961 anticonvulsive agent Substances 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 1
- 210000001130 astrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 238000013475 authorization Methods 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 239000004067 bulking agent Substances 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000000378 calcium silicate Substances 0.000 description 1
- 229910052918 calcium silicate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960003340 calcium silicate Drugs 0.000 description 1
- 235000012241 calcium silicate Nutrition 0.000 description 1
- OYACROKNLOSFPA-UHFFFAOYSA-N calcium;dioxido(oxo)silane Chemical compound [Ca+2].[O-][Si]([O-])=O OYACROKNLOSFPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000623 carbamazepine Drugs 0.000 description 1
- FFGPTBGBLSHEPO-UHFFFAOYSA-N carbamazepine Chemical compound C1=CC2=CC=CC=C2N(C(=O)N)C2=CC=CC=C21 FFGPTBGBLSHEPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 210000003710 cerebral cortex Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 229960004926 chlorobutanol Drugs 0.000 description 1
- 238000011260 co-administration Methods 0.000 description 1
- 208000010877 cognitive disease Diseases 0.000 description 1
- 230000001149 cognitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- ZHMWOVGZCINIHW-UHFFFAOYSA-N conduritol epoxide Chemical compound OC1C(O)C(O)C(O)C2OC21 ZHMWOVGZCINIHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003792 cranial nerve Anatomy 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 230000007711 cytoplasmic localization Effects 0.000 description 1
- 231100000895 deafness Toxicity 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 210000003520 dendritic spine Anatomy 0.000 description 1
- 239000007933 dermal patch Substances 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- SWSQBOPZIKWTGO-UHFFFAOYSA-N dimethylaminoamidine Natural products CN(C)C(N)=N SWSQBOPZIKWTGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 208000029444 double vision Diseases 0.000 description 1
- 239000006196 drop Substances 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 239000000890 drug combination Substances 0.000 description 1
- 239000003596 drug target Substances 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 210000005069 ears Anatomy 0.000 description 1
- 230000001432 effect on motor function Effects 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 206010015037 epilepsy Diseases 0.000 description 1
- BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N ethenylcyclopentane Chemical compound C=CC1CCCC1 BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 230000001815 facial effect Effects 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 1
- 229940126864 fibroblast growth factor Drugs 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000003205 fragrance Substances 0.000 description 1
- 239000012458 free base Substances 0.000 description 1
- 230000007760 free radical scavenging Effects 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 229940014259 gelatin Drugs 0.000 description 1
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 1
- 208000016361 genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 150000002305 glucosylceramides Chemical class 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 150000002306 glutamic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 208000016354 hearing loss disease Diseases 0.000 description 1
- 102000057063 human MAPT Human genes 0.000 description 1
- 102000056070 human SOD1 Human genes 0.000 description 1
- 150000004677 hydrates Chemical class 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 229960003444 immunosuppressant agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N insulin (human) Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 230000000366 juvenile effect Effects 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 235000021374 legumes Nutrition 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000004973 liquid crystal related substance Substances 0.000 description 1
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 1
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 1
- 239000007937 lozenge Substances 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 210000005230 lumbar spinal cord Anatomy 0.000 description 1
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 238000002483 medication Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- XLTANAWLDBYGFU-UHFFFAOYSA-N methyllycaconitine hydrochloride Natural products C1CC(OC)C2(C3C4OC)C5CC(C(C6)OC)C(OC)C5C6(O)C4(O)C2N(CC)CC31COC(=O)C1=CC=CC=C1N1C(=O)CC(C)C1=O XLTANAWLDBYGFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 1
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000337 motor cortex Anatomy 0.000 description 1
- 230000010300 motor neuron apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 230000020763 muscle atrophy Effects 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000008764 nerve damage Effects 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 1
- 230000003959 neuroinflammation Effects 0.000 description 1
- 230000000926 neurological effect Effects 0.000 description 1
- 230000004693 neuron damage Effects 0.000 description 1
- 230000016273 neuron death Effects 0.000 description 1
- 230000006764 neuronal dysfunction Effects 0.000 description 1
- 230000008587 neuronal excitability Effects 0.000 description 1
- 230000006576 neuronal survival Effects 0.000 description 1
- 239000002581 neurotoxin Substances 0.000 description 1
- 231100000618 neurotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 239000002858 neurotransmitter agent Substances 0.000 description 1
- 239000003900 neurotrophic factor Substances 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000036963 noncompetitive effect Effects 0.000 description 1
- 210000001331 nose Anatomy 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 210000004248 oligodendroglia Anatomy 0.000 description 1
- 229940126701 oral medication Drugs 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000007331 pathological accumulation Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 238000005325 percolation Methods 0.000 description 1
- 210000001428 peripheral nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 208000033808 peripheral neuropathy Diseases 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 229960003742 phenol Drugs 0.000 description 1
- 229960002036 phenytoin Drugs 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 1
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 239000002574 poison Substances 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000001242 postsynaptic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001144 postural effect Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 229960005205 prednisolone Drugs 0.000 description 1
- OIGNJSKKLXVSLS-VWUMJDOOSA-N prednisolone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 OIGNJSKKLXVSLS-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- LZFIOSVZIQOVFW-UHFFFAOYSA-N propyl 2-hydroxybenzoate Chemical class CCCOC(=O)C1=CC=CC=C1O LZFIOSVZIQOVFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000003004 ptosis Diseases 0.000 description 1
- 210000002804 pyramidal tract Anatomy 0.000 description 1
- 229960002290 pyridostigmine Drugs 0.000 description 1
- 239000002516 radical scavenger Substances 0.000 description 1
- 238000011552 rat model Methods 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004202 respiratory function Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000011808 rodent model Methods 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 238000009097 single-agent therapy Methods 0.000 description 1
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 1
- 210000001057 smooth muscle myoblast Anatomy 0.000 description 1
- 239000004334 sorbic acid Substances 0.000 description 1
- 229940075582 sorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000010199 sorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 1
- 230000001148 spastic effect Effects 0.000 description 1
- 201000001716 specific phobia Diseases 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 208000019929 sporadic amyotrophic lateral sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000012058 sterile packaged powder Substances 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 150000003890 succinate salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 230000005062 synaptic transmission Effects 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 235000010487 tragacanth Nutrition 0.000 description 1
- 239000000196 tragacanth Substances 0.000 description 1
- 229940116362 tragacanth Drugs 0.000 description 1
- 238000011824 transgenic rat model Methods 0.000 description 1
- 230000018405 transmission of nerve impulse Effects 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 210000001364 upper extremity Anatomy 0.000 description 1
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 1
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 1
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 208000029257 vision disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004393 visual impairment Effects 0.000 description 1
- 230000021542 voluntary musculoskeletal movement Effects 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- LYTCVQQGCSNFJU-LKGYBJPKSA-N α-bungarotoxin Chemical compound C(/[C@H]1O[C@H]2C[C@H]3O[C@@H](CC(=C)C=O)C[C@H](O)[C@]3(C)O[C@@H]2C[C@@H]1O[C@@H]1C2)=C/C[C@]1(C)O[C@H]1[C@@]2(C)O[C@]2(C)CC[C@@H]3O[C@@H]4C[C@]5(C)O[C@@H]6C(C)=CC(=O)O[C@H]6C[C@H]5O[C@H]4C[C@@H](C)[C@H]3O[C@H]2C1 LYTCVQQGCSNFJU-LKGYBJPKSA-N 0.000 description 1
Abstract
Настоящее изобретение относится к сульфатным солям N-(3-(4-(3-(диизобутиламино)пропил)пиперазин-1-ил)пропил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-амина и их фармацевтически приемлемым сольватам для применения при лечении и/или предупреждении заболеваний двигательных нейронов и нарушений нервно-мышечных соединений. 2 н. и 6 з.п. ф-лы, 4 ил., 2 пр.
Description
Настоящее изобретение относится к новым применениям сульфатных солей N-(3-(4-(3-(диизобутиламино)пропил)пиперазин-1-ил)пропил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-амина и их фармацевтически приемлемых сольватов для лечения и/или предупреждения заболеваний двигательных нейронов и нарушений нервно-мышечных соединений.
Предпосылки создания изобретения
Заболевания двигательных нейронов (MND) и нарушения нервно-мышечных соединений (NJD) – те и другие – рассматриваются как нервно-мышечные нарушения, которые ведут к мышечной слабости и усталости, которые со временем становятся более выраженными.
Двигательные нейроны представляют собой нейронные клетки, присутствующие в центральной нервной системе (двигательная кора, ствол головного мозга, спинной мозг ...) и в периферической нервной системе, ответственные за управление такими органами, как мышцы и железы. Двигательные нейроны классифицируются как верхние или нижние двигательные нейроны. Верхние двигательные нейроны (UMN) расположены в коре головного мозга и в стволе головного мозга, они передают сигналы интернейронам и нижним двигательным нейронам (LMN) посредством глутаматергической нейротрансмиссии. LMN расположены в спинном мозге и иннервируют волокна скелетных мышц (нервно-мышечные соединения), где высвобождается ацетилхолин для переноса сигнала через мембрану мышечных клеток, передавая мышце сигнал к сокращению или расслаблению. Как UMN, так и LMN необходимы для произвольных движений, равновесия, регулировки положения тела и управления мышцами в целом.
Прогрессирующая дегенерация двигательных нейронов является отличительной чертой заболеваний двигательных нейронов, она в конечном итоге вызывает апоптоз двигательных нейронов и фасцикуляцию двигательных единиц (единица, определяющая двигательный нейрон - его аксон - нервно-мышечное соединение - отдельные мышечные волокна, которые она иннервирует в целом), препятствуя передаче нервного импульса, управляющего мышцами. Гибель клеточных тел мотонейронов является первичным процессом при МND и происходит в сочетании с отложением агрегированных белков в мотонейронах и олигодендроцитах, а также нейровоспалением. Такие заболевания, которые могут поражать или UMN, или LMN и даже те и другие, вызывают мышечную слабость, гипотонию, замедленность движений, нарушение рефлексов и мышечную атрофию.
Существует множество заболеваний двигательных нейронов, и боковой амиотрофический склероз (ALS) является наиболее распространенным приобретенным заболеванием двигательных нейронов, которое может повлиять на UMN и LMN. Спорадический ALS является наиболее распространенной формой ALS (≥90% случаев), диагностируемой у пациентов, у которых нет известных членов семьи, страдающих таким заболеванием. Семейный ALS имеет генетическое происхождение и протекает в семьях, м несколько генных мутаций идентифицировано и связано с ним. Наиболее распространенная находится в открытой рамке считывания 72 хромосомы 9 (C9ORF72) и может вызывать у пациентов также когнитивные дефекты: ALS-FTD является особой формой ALS, при которой пациенты также страдают от лобно-височной деменции (FTD). Боковой амиотрофический склероз с комплексом паркинсонизма-деменции 1 (ALS-PDC) или болезнь литико-бодига является формой ALS, при которой пациенты испытывают симптомы ALS, деменции и болезни Паркинсона (PD). Другие известные гены, ассоциированные с семейным и спорадическим ALS, включают гены, кодирующие супероксиддисмутазу 1 (SOD1), ДНК-связывающий белок TAR в 43 кДа (TDP-43), РНК-связывающий белок (FUS/TLS: слитый при саркоме/транслоцированный при саркоме) и убиквилин 2 (UBQLN2). Такие мутации могут вызывать токсическое накопление этих белков в двигательных нейронах и астроцитах, что впоследствии ведет к гибели нейронов. Показано, что ДНК-связывающий белок TAR в 43 кДа (TDP-43) накапливается в цитоплазме двигательных нейронов в большинстве случаев ALS. TDP-43 представляет собой ядерный РНК-связывающий белок, участвующий в нескольких аспектах процессинга РНК, который активно перемещается между ядром и цитоплазмой. При ALS TDP-43 исключен из ядра, но такая неправильная цитоплазматическая мислокализация является обычной при повреждении нейронов или стрессе, а TDP-43-позитивные включения могут представлять собой вторичную патологию при заболеваниях двигательных нейронов.
Другие заболевания двигательных нейронов могут поражать или только UMN, такие как первичный боковой склероз (PLS), или только LMN, такие как прогрессирующая мышечная атрофия (PMA). Более того, дегенерация LMN и ALS могут влиять на нервно-мышечное соединение (Dupuis L. et al., Curr. Drug Targets, 2010; 11(10): 1250-1261 - Gromova A. et al., Trends Neurosci., 2020, Sep; 43(9): 709-724 - Hashizume A. et al., J. Neurol. Neurosurg. Psychiatry, 2020, Oct; 91(10): 1085-1091). NJD имеет целью такую критическую область и блокирует нервный импульс, обычно передаваемый к мышце для облегчения движения или ее сокращения. Миастенические синдромы (миастения гравис и синдром Итона-Ламберта) влияют на эффективность синаптической передачи посредством или иммунологических или генетических процессов. При таких патологиях абсолютное число NMJ остается примерно таким же, но их эффективность для запуска потенциала мышечного действия в ответ на стимуляцию двигательных нейронов снижается, что ведет к быстрой утомляемости из-за мышечной слабости (Gilhus NE et al. Curr. Opin. Neurol., 2012, Oct; 25(5): 523-9). Кроме того, признано, что разработка методов лечения для укрепления и стабилизации оставшихся NMJ, общего конечного пути заболеваний с дегенерацией LMN, была бы одинаково полезна для пациентов с ALS, спинальной мышечной атрофией (SMA) и спинально-бульбарной мышечной атрофией (SBMA).
В настоящее время Управление по контролю за продуктами питания и лекарствами США (FDA) и Европейское агентство по лекарственным средствам (EMA) одобрили только один способ лечения для пациентов с ALS. Рилузол представляет собой пероральное лекарственное средство, которое блокирует глутаматергическую нейротрансмиссию в ЦНС. Полагают, что такое действие может происходить частично из-за инактивации вольтаж-зависимых натриевых каналов на глутаматергических нервных окончаниях. Рилузол также блокирует некоторые постсинаптические действия глутаминовой кислоты путем неконкурентной блокады рецепторов N-метил-D-аспартата (NMDA). Кроме того, рилузол не оказывает влияния на двигательные и дыхательные функции и не подходит ни для лечения запущенных форм ALS, ни для лечения других заболеваний двигательных нейронов.
Средство для удаления свободных радикалов эдаварон, вводимое внутривенно, показало эффективность у небольшой подгруппы людей с ALS в 3-й фазе клинического испытания. Исследование показало значительно меньшее снижение пересмотренной оценки по функциональной шкале оценки ALS по сравнению с плацебо. До настоящего времени нет никаких указаний на то, что эдаравон может быть эффективен у более широкой популяции пациентов с ALS, которые не соответствуют критериям (Abe et al., Lancet Neurol., 2017, 16(7), 505-512), и заявка на получение разрешения на маркетинг от EMA для лечения ALS была отозвана.
Не имеется доступного конкретного лечения нарушений нервно-мышечных соединений, кроме кортикостероидов или иммунодепрессантов, которые могут иметь серьезные побочные действия.
Сульфатные соли N-(3-(4-(3-(диизобутиламино)пропил)пиперазин-1-ил)пропил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-амина и их сольваты, ранее раскрытые в WO 2014/102339, применимы для лечения и/или предупреждения нейродегенеративных заболеваний, амилоидопатии, тауопатии и заболевания развития. Такие соединения особенно интересны при болезни Альцгеймера, болезни Паркинсона и тауопатиях: в настоящее время проходит фаза 2A клинического испытания с дисульфатной солью N-(3-(4-(3-(диизобутиламино)пропил)пиперазин-1-ил)пропил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-амина – лечение пациентов, страдающих прогрессирующим надъядерным параличом (PSP). Такие соли способны модулировать фосфорилирование Taу и повышать уровни нейротрофического фактора програнулина (PGRN), дефицит которого, как известно, ускоряет отложение и фосфорилирование Taу, как показано на мышах, экспрессирующих человеческий tau (J. Neuropathol. Exp. Neurol. 74, 158–165 (2015)). Следовательно, такие соединения особенно применимы для лечения тауопатий, таких как лобно-височная деменция, и поэтому предложены конкретно для лечения ALS-FTD.
Ограниченное количество методов лечения доступно пациентам, страдающим заболеваниями двигательных нейронов или нарушениями нервно-мышечных соединений, и в технике все еще существует потребность в новых химических соединениях, которые можно было бы использовать для лечения или профилактики таких заболеваний, поэтому Заявитель исследовал потенциал применения сульфатных солей N-(3-(4-(3-(диизобутиламино)пропил)пиперазин-1-ил)пропил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-амина и их сольватов для такой цели.
Сущность изобретения
Настоящее изобретение основано на неожиданных выводах, что сульфатные соли N-(3-(4-(3-(диизобутиламино)пропил)пиперазин-1-ил)пропил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-амина оказывает нейрозащитное действие на двигательные нейроны и нервно-мышечные соединения.
Таким образом, изобретение относится к сульфатным солям N-(3-(4-(3-(диизобутиламино)пропил)пиперазин-1-ил)пропил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-амина и их сольватам для применения при лечении и/или предупреждении заболеваний двигательных нейронов и нарушений нервно-мышечных соединений.
Более того, Заявитель показывает, что сульфатные соли N-(3-(4-(3-(диизобутиламино)пропил)пиперазин-1-ил)пропил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-амина и их сольваты способны уменьшать аномальную транслокацию TDP43 из ядра к цитоплазме двигательных нейронов – патологическая особенность, наблюдаемая в большинстве случаев ALS.
Подробное описание изобретения
Заявитель показывает, что сульфатные соли N-(3-(4-(3-(диизобутиламино)пропил)пиперазин-1-ил)пропил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-амина и их фармацевтически приемлемые сольваты оказывают благотворное воздействие на первичную культуру двигательных нейронов спинного мозга как крыс дикого типа, так и крыс SOD1G93A tg, способствуя их выживанию и целостности сети нейритов после повреждений, вызванных глутаматом. Кроме того, аномальная транслокация TDP-43 из ядра в цитоплазму двигательных нейронов является патологической особенностью, наблюдаемой в большинстве случаев ALS. Результаты, представленные в разделе «Примеры», показывают, что указанные сульфатные соли могут также реверсировать аномальную транслокацию TDP-43 из ядра в цитоплазму при глутаматергическом стрессе.
Более того, сульфатные соли N-(3-(4-(3-(диизобутиламино)пропил)пиперазин-1-ил)пропил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-амина и их фармацевтически приемлемые сольваты успешно защищают нервно-мышечные соединения и сеть нейритов от глутаматергического стресса в совместной культуре миобластов и эксплантатов спинного мозга.
Все эти выводы подтверждают, что сульфатные соли N-(3-(4-(3-(диизобутиламино)пропил)пиперазин-1-ил)пропил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-аминиа и их фармацевтически приемлемые сольваты могут являться эффективной терапией для улучшения при заболеваниях двигательных нейронов, таких как ALS, SMA и SBMA, а также расстройствах нервно-мышечных соединений, таких как миастения гравис и синдром Итона-Ламберта.
Заболевания двигательных нейронов и нарушения нервно-мышечных соединений включают, но без ограничений, боковой амиотрофический склероз без FTD, первичный боковой склероз (PLS), наследственную спастическую параплегию (HSP), нейролатиризм, Конзо, болезнь Тея-Сакса, болезнь Сандхоффа, прогрессирующую мышечную атрофию (PMA), мономелическую амиотрофию, спинальную мышечную атрофию (SMA), спинально-бульбарную мышечную атрофию (SBMA), прогрессирующий бульбарный паралич (PBP), постполиомиелитический синдром, пострадиационный синдром, синдром скованного человека, нарушения двигательных единиц в результате несчастного случая, миастению гравис и синдром Итона-Ламберта.
Боковой амиотрофический склероз без FTD обозначает формы спорадического или семейного бокового амиотрофического склероза, которые не связаны с лобно-височной деменцией, и включает боковой амиотрофический склероз с комплексом паркинсонизм-деменция 1 (ALS-PDC), семейный боковой амиотрофический склероз, вызванный мутацией одного из генов, кодирующих супероксиддисмутазу 1 (SOD1), ДНК-связывающий белок TAR в 43 кДа (TDP-43), РНК-связывающий белок (FUS/TLS: слитый при саркоме/транслоцированный при саркоме) или убиквилин 2 (UBQLN2). При ALS пациенты с бульбарным началом прогрессируют быстрее, чем пациенты с началом заболевания конечностей или с проявлением LMN. Недавние описания региональных вариантов предполагают, что у некоторых пациентов ALS локализован в одной области позвоночника, включая плечевую амиотрофическую диплегию, амиотрофическую диплегию ног и изолированный бульбарный паралич, которые все в данном случае являются вариантами бокового амиотрофического склероза без FTD. ALS без FTD также включает ALS с респираторным началом, редкий вариант, который составляет примерно 3% всех случаев ALS, при котором начальными симптомами являются затрудненное дыхание при физическом напряжении в состоянии покоя.
Первичный боковой склероз (PLS) представляет собой тип заболевания двигательных нейронов, которое вызывает медленное разрушение нервов в головном мозгу. Это делает нервы неспособными активировать двигательные нейроны в спинном мозгу, которые управляют мышцами.
Наследственная спастическая параплегия (HSP), также известная как семейный спастический парапарез (FSP), вызывается верхними двигательными нейронами, которые медленно дегенерируют, вызывая прогрессирующую спастичность и слабость ног. Это приводит к затруднению ходьбы. По мере продолжения дегенерации симптомы ухудшаются, включая нарушение зрения, атаксию, эпилепсию, когнитивные нарушения, периферическую невропатию и/или глухоту.
Нейролатиризм вызывается токсином, поступающим при потреблении большого количества определенных бобовых рода Lathyrus, содержащих высокие концентрации нейротоксина аналога глутамата β-оксалил-L-α,β-диаминопропионовой кислоты (ODAP). ODAP является ядом митохондрий, приводящим к избыточной гибели клеток, особенно в двигательных нейронах; этот токсин вызывает паралич, характеризующийся отсутствием силы или неспособностью двигать нижними конечностями, и может поражать пирамидные пути, вызывая признаки повреждения верхних двигательных нейронов.
Прогрессирующая мышечная атрофия (РМА), также известная как мышечная атрофия Дюшенна-Арана, клинически характеризуется признаками дисфункции нижних двигательных нейронов и может развиться в ALS. Симптомы РМА включают атрофию, мышечную слабость, отсутствие рефлексов и отсутствие спастичности, симптомы могут быть ограничены руками, ногами или теми и другими.
Мономелическая амиотрофия, также известная как доброкачественная фокальная амиотрофия, ювенильная сегментарная атрофия и болезнь Хираямы, представляет собой редкое доброкачественное заболевание нижних двигательных нейронов, характеризующееся мышечной слабостью и истощением в дистальных отделах верхних конечностей в подростковом возрасте с последующей спонтанной остановкой прогрессирования и стабилизацией симптомов.
Спинальная мышечная атрофия (SМА) является заболеванием, которое лишает людей физической силы, поражая двигательные нервные клетки в спинном мозгу, лишая способности ходить, есть или дышать. SMA вызывается мутацией в гене 1 выживания двигательного нейрона (SMN1). Это является критичным для функционирования нервов, которые управляют мышцами. Без него нервные клетки не могут должным образом функционировать и в конечном итоге погибают, что приводит к изнурительной и иногда фатальной мышечной слабости.
Спинально-бульбарная мышечная атрофия (SBMA), также известная как бульбоспинальная мышечная атрофия и болезнь Кеннеди, представляет собой генетическое заболевание, при котором потеря двигательных нейронов влияет на произвольные движения мышц, в частности лицевых мышц и мышц, участвующих в глотании, а также мышц рук и ног, особенно мышц, ближайших к центру тела.
Прогрессирующий бульбарный паралич (РВР) поражает как верхнюю, так и нижнюю двигательную систему. Такая форма МND часто вызывает трудности с речью или глотанием. Если поражены нижние двигательные нейроны, язык имеет тенденцию к атрофии с видимой фасцикуляцией и сниженной подвижностью. Это приводит скорее к носовому типу речи. Если поражены верхние двигательные нейроны, язык становится спастичным и имеет тенденцию вызывать дизартрию, трудности с механикой речи.
Синдром скованного человека, также известный как расстройство спектра скованности человека, представляет собой неврологическое расстройство, поражающее головной и спинной мозг, вызывающее колебания жесткости туловища и конечностей, болезненные мышечные спазмы, специфическую фобию, преувеличенную реакцию испуга и анкилозирующие деформации, такие как фиксированный поясничный гиперлордоз.
«Расстройства двигательных единиц в результате несчастного случая» при использовании в настоящем описании относятся к расстройствам, при которых двигательные единицы нарушены из-за повреждения нерва после несчастного случая, например, бытового или дорожно-транспортного происшествия.
Миастения гравис представляет собой аутоиммунное расстройство, которое ослабляет передачу ацетилхолина в нервно-мышечном соединении, т.е., антитела, которые атакуют рецепторы ацетилхолина, что приводит к мышечной слабости. Наиболее распространенными симптомами миастении гравис являются слабые, опущенные веки, слабые глазные мышцы, которые вызывают двоение в глазах, и чрезмерная слабость пораженных мышц после их использования.
Синдром Итона-Ламберта представляет собой аутоиммунное заболевание, при котором антитела препятствуют высвобождению рецепторов нейротрансмиттера ацетилхолина в нервно-мышечном соединении. Это вызывает мышечную слабость, которая имеет склонность начинаться в бедре и мышцах бедра, затем обычно распространяется на мышцы плеча, а затем вниз по рукам и ногам к кистям и стопам. Нервы, которые соединяют голову, лицо, глаза, нос, мышцы и уши с мозгом (черепно-мозговые нервы), поражаются последними.
В одном воплощении сульфатные соли N-(3-(4-(3-(диизобутиламино)пропил)пиперазин-1-ил)пропил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-амина представляют собой соединения формулы I
,
где х равен 0,5 – 4, предпочтительно x равен 0,5 – 3,5, предпочтительнее x равен 0– 3.
Другими словами, сульфатная соль N-(3-(4-(3-(диизобутиламино)пропил)пиперазин-1-ил)пропил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-амина содержит 0,5 – 4 эквивалента, предпочтительно 0,5 – 3,5 эквивалента, предпочтительнее 0,9 – 3 эквивалента сульфата на одну молекулу N-(3-(4-(3-(диизобутиламино)пропил)пиперазин-1-ил)пропил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-амина.
В одном предпочтительном воплощении х равен 1,7 – 2,3, предпочтительно х равен 1,9 – 2,1, предпочтительнее х равен примерно 2 или х равен 2,
В одном особенно предпочтительном воплощении сульфатная соль представляет собой дисульфат N-(3-(4-(3-(диизобутиламино)пропил)пиперазин-1-ил)пропил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-амина.
В одном воплощении сульфатная соль формулы I находится в форме фармацевтически приемлемого сольвата, предпочтительно гидрата. Стехиометрия сольвата составляет от 0,5 до 5, предпочтительно от 1 до 4, предпочтительнее от 1,5 до 2,5, еще предпочтительнее от 1 до 2,2, даже предпочтительнее 2 или примерно 2 молекулы сольвата на 1 молекулу соли сульфата формулы I.
Таким образом, сульфатные соли N-(3-(4-(3-(диизобутиламино)пропил)пиперазин-1-ил)пропил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-амина и их фармацевтически приемлемые сольваты применимы в качестве лекарственного средства, в частности, для лечения или предупреждения заболеваний двигательных нейронов, нарушений нервно-мышечных соединений и всех заболеваний, при которых наблюдается аномальная транслокация TDP43 из ядра двигательных нейронов в цитоплазму.
Следовательно, изобретение также относится к сульфатной соли N-(3-(4-(3-(диизобутиламино)пропил)пиперазин-1-ил)пропил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-амина или ее фармацевтически приемлемым сольватам, определенным в настоящем описании, для применения при лечении и/или предупреждении заболеваний двигательных нейронов и нарушений нервно-мышечных соединений, в частности, выбранных из бокового амиотрофического склероза без FTD, первичного бокового склероза (PLS), наследственной спастической параплегии (HSP), нейролатиризма, Конзо, болезни Тея-Сакса, болезни Сандхоффа, прогрессирующей мышечной атрофии (PMA), мономелической амиотрофии, спинальной мышечной атрофии (SMA), спинально-бульбарной мышечной атрофии (SBMA), прогрессирующего бульбарного паралича (PBP), постполиомиелитического синдрома, пострадиационного синдрома, синдрома скованного человека, нарушений двигательных единиц в результате несчастного случая, миастении гравис, синдрома Итона-Ламберта. Предпочтительно заболевание выбирают из бокового амиотрофического склероза без FTD, первичного бокового склероза (PLS), наследственной спастической параплегии (HSP), прогрессирующей мышечной атрофии (PMA), мономелической амиотрофии, спинальной мышечной атрофии (SMA), спинально-бульбарной мышечной атрофии (SBMA), прогрессирующего бульбарного паралича (PBP), миастении гравис, синдрома Итона-Ламберта, нарушений двигательных единиц в результате несчастного случая. Предпочтительнее заболевание выбирают из бокового амиотрофического склероза без FTD, первичного бокового склероза (PLS), наследственной спастической параплегии (HSP), спинальной мышечной атрофии (SMA), спинально-бульбарной мышечной атрофии (SBMA), прогрессирующего бульбарного паралича (PBP), Даже предпочтительнее заболеванием является боковой амиотрофический склероз без FTD.
Другими словами, изобретение также относится к способу лечения и/или предупреждения заболевания двигательных нейронов или нарушения нервно-мышечных соединений, в частности, перечисленных выше, а также их воплощений, включающему введение пациенту, нуждающемуся в этом, фармацевтически эффективного количества сульфатной соли N-(3-(4-(3-(диизобутиламино)пропил)пиперазин-1-ил)пропил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-амина или ее фармацевтически приемлемого сольвата, описанных в настоящем описании. В отдельном воплощении заболевание выбирают из бокового амиотрофического склероза без FTD, первичного бокового склероза (PLS), наследственной спастической параплегии (HSP), спинальной мышечной атрофии (SMA), спинально-бульбарной мышечной атрофии (SBMA), прогрессирующего бульбарного паралича (PBP).
Другими словами, изобретение также относится к применению сульфатной соли N-(3-(4-(3-(диизобутиламино)пропил)пиперазин-1-ил)пропил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-амина или ее фармацевтически приемлемого сольвата, описанных в настоящем описании, в производстве лекарственного средства для лечения и/или предупреждения заболевания двигательных нейронов или нарушения нервно-мышечных соединений, в частности, перечисленных выше, а также их воплощений. В отдельном воплощении заболевание выбирают из бокового амиотрофического склероза без FTD, первичного бокового склероза (PLS), наследственной спастической параплегии (HSP), спинальной мышечной атрофии (SMA), спинально-бульбарной мышечной атрофии (SBMA), прогрессирующего бульбарного паралича (PBP).
В отдельном воплощении изобретение также относится к сульфатной соли N-(3-(4-(3-(диизобутиламино)пропил)пиперазин-1-ил)пропил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-амина или ее фармацевтически приемлемому сольвату, определенным в настоящем описании, для применения при отсрочке начала у пациента заболеваний двигательных нейронов и нарушений нервно-мышечных соединений, в частности, выбранных из бокового амиотрофического склероза без FTD, первичного бокового склероза (PLS), наследственной спастической параплегии (HSP), нейролатиризма, Конзо, болезни Тея-Сакса, болезни Сандхоффа, прогрессирующей мышечной атрофии (PMA), мономелической амиотрофии, спинальной мышечной атрофии (SMA), спинально-бульбарной мышечной атрофии (SBMA), прогрессирующего бульбарного паралича (PBP), постполиомиелитического синдрома, пострадиационного синдрома, синдрома скованного человека, нарушений двигательных единиц в результате несчастного случая, миастении гравис, синдрома Итона-Ламберта. Предпочтительно заболевание выбирают из бокового амиотрофического склероза без FTD, первичного бокового склероза (PLS), наследственной спастической параплегии (HSP), прогрессирующей мышечной атрофии (PMA), мономелической амиотрофии, спинальной мышечной атрофии (SMA), спинально-бульбарной мышечной атрофии (SBMA), прогрессирующего бульбарного паралича (PBP), миастении гравис, синдрома Итона-Ламберта, нарушений двигательных единиц в результате несчастного случая. Предпочтительнее заболевание выбирают из бокового амиотрофического склероза без FTD, первичного бокового склероза (PLS), наследственной спастической параплегии (HSP), спинальной мышечной атрофии (SMA), спинально-бульбарной мышечной атрофии (SBMA), прогрессирующего бульбарного паралича (PBP), Даже предпочтительнее, заболеванием является боковой амиотрофический склероз без FTD.
Другими словами, изобретение относится к способу отсрочки у пациента начала заболеваний двигательных нейронов или нарушений нервно-мышечных соединений, в частности, перечисленных выше, а также их воплощений, включающему введение пациенту, нуждающемуся в этом, фармацевтически эффективного количества сульфатной соли N-(3-(4-(3-(диизобутиламино)пропил)пиперазин-1-ил)пропил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-амина или ее фармацевтически приемлемого сольвата. В отдельном воплощении заболевание выбирают из бокового амиотрофического склероза без FTD, первичного бокового склероза (PLS), наследственной спастической параплегии (HSP), спинальной мышечной атрофии (SMA), спинально-бульбарной мышечной атрофии (SBMA), прогрессирующего бульбарного паралича (PBP).
Другими словами, изобретение также относится к применению сульфатной соли N-(3-(4-(3-(диизобутиламино)пропил)пиперазин-1-ил)пропил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-амина или ее фармацевтически приемлемого сольвата, описанных в настоящем описании, при производстве лекарственного средства для отсрочки у пациента начала заболевания двигательных нейронов или нарушения нервно-мышечных соединений, в частности, из перечисленных выше, а также их воплощений. В отдельном воплощении заболевание выбирают из бокового амиотрофического склероза без FTD, первичного бокового склероза (PLS), наследственной спастической параплегии (HSP), спинальной мышечной атрофии (SMA), спинально-бульбарной мышечной атрофии (SBMA), прогрессирующего бульбарного паралича (PBP).
Согласно другому отличительному признаку изобретение относится к способу уменьшения аномальной транслокации TPD43 из ядра двигательных нейронов в цитоплазму у пациента, предпочтительно теплокровного животного и даже предпочтительнее у человека, нуждающегося в таком лечении, который включает введение указанному пациенту фармацевтически эффективного количества сульфатной соли N-(3-(4-(3-(диизобутиламино)пропил)пиперазин-1-ил)пропил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-амина или ее фармацевтически приемлемого сольвата.
Согласно одному воплощению, сульфатные соли N-(3-(4-(3-(диизобутиламино)пропил)пиперазин-1-ил)пропил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-амина, а также их фармацевтически приемлемые сольваты можно вводить как часть комбинированной терапии. Таким образом, в объем настоящего изобретения включается совместное введение композиций и лекарственных средств, которые содержат в качестве активного соединения, кроме сульфатной соли N-(3-(4-(3-(диизобутиламино)пропил)пиперазин-1-ил)пропил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-амина или его фармацевтически приемлемого сольвата, другие терапевтические агенты и/или активные ингредиенты. Такие схемы введения нескольких лекарственных средств, обычно называемые «комбинированной терапией», можно использовать при лечении и/или предупреждении любого заболевания двигательных нейронов и/или нарушения нервно-мышечного соединения. Применение таких комбинаций терапевтических агентов особенно уместно в отношении лечения вышеуказанных заболеваний двигательных нейронов у пациента, нуждающегося в лечении, или человека, рискующего стать таким пациентом.
Кроме требования терапевтической эффективности, что может потребовать применения активных агентов в дополнение к сульфатным солям N-(3-(4-(3-(диизобутиламино)пропил)пиперазин-1-ил)пропил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-амина или их фармацевтически приемлемым сольватам, могут быть дополнительные обоснования, которые вынуждают или настоятельно рекомендуют использование комбинаций лекарственных средств, включающих активные ингредиенты, которые представляют собой дополнительную терапию, т.е., которые дополняют функцию, выполняемую сульфатными солями N-(3-(4-(3-(диизобутиламино)пропил)пиперазин-1-ил)пропил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-амина или их фармацевтически приемлемыми сольватами. Подходящие дополнительные терапевтические средства, применяемые с целью вспомогательного лечения, включают лекарственные средства, которые вместо непосредственного лечения и/или предупреждения заболевания или состояния, опосредуемого или связанного с дегенерацией двигательных нейронов, дегенерацией нервно-мышечных соединений и/или патологическим накоплением TDP-43 в цитоплазме двигательных нейронов, лечат заболевания или состояния, которые непосредственно вытекают из или косвенно сопровождают указанные дегенерации.
Согласно другому отличительному признаку настоящего изобретения, в комбинированной терапии сукцинатную соль N-(3-(4-(3-(диизобутиламино)пропил)пиперазин-1-ил)пропил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-амина, ее фармацевтически приемлемый сольват можно использовать с другими лекарствами, используемыми для лечения заболеваний двигательных нейронов, таких как ALS, SMA, SBMA, и нарушений нервно-мышечных соединений, таких как миастения гравис и синдром Итона-Ламберта. Конкретнее, соединение формулы I, а также его фармацевтически приемлемые сольваты можно использовать в качестве дополнительной терапии в комбинации с рилузолом, эдавароном, пиридостигмином, ингибиторами разложения глюкозилцерамида, такими как амброксол и эпоксид кондуритола В, индукторами высвобождения ацетилхолина, такими как гуанидин, кортикостероидами, такими как преднизолон, противосудорожными лекарствами, такими как карбамазепин и фенитоин, или лекарствами, которые в настоящее время проходят клинические испытания для лечения ALS, как описано в Van Eijk et al., Current opinion in neurology, 2020, 33(5), 655.
Таким образом, в способах лечения и фармацевтических композициях по настоящему изобретению N-(3-(4-(3-(диизобутиламино)пропил)пиперазин-1-ил)пропил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-амин или его фармацевтически приемлемый сольват можно использовать в монотерапии заболеваний двигательных нейронов и нарушений нервно-мышечных соединений. Однако указанные способы и композиции также можно использовать для множественной терапии, в которой одно или несколько соединений N-(3-(4-(3-(диизобутиламино)пропил)пиперазин-1-ил)пропил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-амина или его фармацевтически приемлемых солей или сольватов вводят в комбинации совместно с одним или несколькими другими терапевтическими агентами.
В вышеописанном воплощении комбинации N-(3-(4-(3-(диизобутиламино)пропил)пиперазин-1-ил)пропил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-амина или его фармацевтически приемлемых солей или сольватов с другими терапевтически активными агентами можно вводить, с точки зрения лекарственных форм, или по отдельности или в сочетании друг с другом и, с точки зрения времени их введения, или с периодами или одновременно. Таким образом, введение одного составляющего агента может происходить до, одновременно или последовательно с введением другого(их) составляющего(их) агента(ов).
Как правило, для фармацевтического применения сульфатные соли N-(3-(4-(3-(диизобутиламино)пропил)пиперазин-1-ил)пропил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-амина или их фармацевтически приемлемые сольваты можно получить в виде фармацевтической композиции, включающей по меньшей мере по меньшей мере одну сульфатную соль N-(3-(4-(3-(диизобутиламино)пропил)пиперазин-1-ил)пропил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-амина или ее фармацевтически приемлемый сольват и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель, эксципиент и/или адъювант, и необязательно одно или несколько дополнительных терапевтических агентов и/или активных ингредиентов.
Как неограничивающие примеры, фармацевтическая композиция может находиться в лекарственной форме, подходящей для перорального введения, для парентерального введения (такого как внутривенная, внутримышечная или подкожная инъекция или внутривенная инфузия), для местного применения, для введения путем ингаляции, с помощью кожного пластыря, имплантата, суппозитория и т.д.. Такие подходящие для введения формы – которые могут являться твердыми, полутвердыми или жидкими, в зависимости от способа введения, – а также способы и носители, разбавители и эксципиенты для использования при их получении будут ясны для специалиста; дается ссылка на последнее издание Remington’s Pharmaceutical Sciences. Фармацевтические композиции можно получить в твердой форме и повторно растворить или суспендировать перед применением.
Некоторые предпочтительные, но неограничивающие примеры лекарственных форм включают таблетки, пилюли, порошки, пастилки, саше, кашицы, эликсиры, суспензии, эмульсии, растворы, сиропы, аэрозоли, мази, кремы, лосьоны, мягкие и твердые желатиновые капсулы, суппозитории, капли, стерильные растворы для инъекций и стерильные упакованные порошки (которые обычно восстанавливают перед применением) для введения в виде болюса и/или для непрерывного введения, которые можно получить с использованием носителей, эксципиентов и разбавителей, которые per se подходят для таких препаратов, таких как лактоза, декстроза, сахароза, сорбит, маннит, крахмалы, агар, аравийская камедь, фосфат кальция, альгинаты, трагакант, желатин, силикат кальция, микрокристаллическая целлюлоза, поливинилпирролидон, полиэтиленгликоль, целлюлоза, (стерильная) вода, метилцеллюлоза, метил- и пропилгидроксибензоаты, тальк, стеарат магния, пищевые масла, растительные масла и минеральные масла или их подходящие смеси. Фармацевтические композиции могут необязательно содержать другие вещества, которые обычно используются в фармацевтических препаратах, такие как лубриканты, смачиватели, эмульгаторы и суспендирующие агенты, диспергирующие агенты, разрыхлители, стабилизаторы, агенты для придания изотоничности, агенты для придания объема, наполнители, консерванты, подсластители, корригенты, отдушки, красители, антибактериальные средства и/или противогрибковые средства, такие как парабены, хлорбутанол, фенол, сорбиновая кислота, дозирующие средства, регуляторы расхода, способствующие высвобождению агенты и т.д. Композиции также могут быть составлены таким образом, чтобы обеспечивать быстрое, длительное или отсроченное высвобождение активного соединения(ий), содержащегося(ихся) в них.
Фармацевтические композиции по изобретению предпочтительно находятся в стандартной лекарственной форме и могут быть соответствующим образом упакованы, например, в коробку, блистер, флакон, пузырек, саше, ампулу или в любой другой подходящий контейнер для однократной или многодозовой упаковки (который может быть надлежащим образом маркирован); необязательно с одной или несколькими листовками, содержащими информацию о продукте и/или инструкции по применению. Как правило, такие стандартные дозы будут содержать от 0,05 до 1000 мг и обычно от 1 до 500 мг по меньшей мере одного соединения по изобретению, например, примерно 10, 25, 50, 100, 200, 300 или 400 мг на стандартную дозу.
Обычно, в зависимости от состояния, подлежащего профилактике или лечению, и способа введения, активное соединение по изобретению обычно вводят от 0,01 до 100 мг на килограмм, чаще от 0,1 до 50 мг, например, от 1 до 25 мг, например, примерно 0,5, 1, 2, 5, 10, 15, 20 или 25 мг на килограмм массы тела пациента в день, которые можно вводить в виде однократной суточной дозы, в виде разделенной на одну или более суточных доз, или по существу непрерывно, например, с использованием капельной инфузии.
Все ссылки на соединения формулы I включают ссылки на сольваты, в частности гидраты, их многокомпонентные комплексы и жидкие кристаллы.
Соединения, раскрытые в настоящей заявке, названы с использованием ChemDraw® Ultra, версия 11.0 (CambridgeSoft, Cambridge, MA, USA).
Свободное основание N-(3-(4-(3-(диизобутиламино)пропил)пиперазин-1-ил)пропил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-амин можно получить так, как описано в WO 2006/051489, его сульфатные соли и их сольваты получают в соответствии с процедурами, описанными в WO 2014/102339.
Определения
Приведенные ниже определения и пояснения относятся к терминам, используемым во всей заявке, включая как описание и фигуры, так и формулу изобретения.
Термин «введение» или его вариант (например, «вводимое») означает предоставление активного агента или активного ингредиента (например, N-(3-(4-(3-(диизобутиламино)пропил)пиперазин-1-ил)пропил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-амина), отдельно или как части фармацевтически приемлемой композиции, пациенту, у которого/которой необходимо лечить или предупреждать состояние, симптом или заболевание.
Термин «человек» относится к субъекту обоих полов и на любой стадии развития (т.е. новорожденному, младенцу, подростку, юноше, взрослому).
Термин «пациент» относится к теплокровному животному, предпочтительнее к человеку, которое/который ожидает получения или получает медицинскую помощь или является/будет объектом медицинской процедуры.
Под «фармацевтически приемлемым» подразумевается, что ингредиенты фармацевтической композиции совместимы друг с другом и не наносят вреда пациенту, которому ее назначают.
Термины «предупреждать», «предупреждающий» и «предупреждение», используемые в настоящей заявке, относятся к способу отсрочки или исключения наступления состояния или заболевания и/или сопутствующих симптомов, недопущения приобретения пациентом состояния или заболевания или снижения риска приобретения пациентом состояния или заболевания.
Выражение «уменьшение», используемое в настоящей заявке, относится к частичному уменьшению или полному уменьшению.
Термин «сольват» используется в настоящем описании для описания соединения в данном изобретении, которое содержит стехиометрические или субстехиометрические количества одной или нескольких молекул фармацевтически приемлемого растворителя, такого как этанол. Термин «гидрат» используется, когда указанным растворителем является вода. Молекулы фармацевтически приемлемого растворителя могут совместно кристаллизоваться с соединением по изобретению и/или присутствовать в его твердых кристаллической и/или аморфной фазах и/или адсорбироваться в них.
Термин «терапевтически эффективное количество» (или проще «эффективное количество»), используемый в настоящей заявке, означает количество активного агента или активного ингредиента (например, N-(3-(4-(3-(диизобутиламино)пропил)пиперазин-1-ил)пропил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-амина), которое является достаточным для достижения желательного терапевтического или профилактического эффекта у пациента, которому/кому его вводят.
Термины «лечить», «лечащий» и «лечение», используемые в настоящей заявке, включают облегчение, ослабление или аннулирование состояния или заболевания и/или сопутствующих им симптомов.
Настоящее изобретение будет лучше понято с обращением к следующим далее примерам. Эти примеры предназначены для представления конкретных воплощений изобретения и не предназначены для ограничения объема изобретения.
Краткое описание чертежей
Фиг. 1 показывает влияние инкубации дисульфата N-(3-(4-(3-(диизобутиламино)пропил)пиперазин-1-ил)пропил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-амина в течение 48 час после 20 мин повреждения глутаматом в первичной культуре двигательных нейронов спинного мозга крысы на выживаемость (А), сеть нейритов (В) и на внеядерный TDP-43 (eTDP43) (С) MAP-2 положительных МНС. Результаты выражены в процентах от контроля как среднее значение ± SEM (n=5-6/группа). Односторонний ANOVA с последующим тестом PLSD Фишера.
Фиг. 2 показывает влияние 24-часовой предварительной инкубации дисульфата N-(3-(4-(3-(диизобутиламино)пропил)пиперазин-1-ил)пропил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-амин) до 20-мин повреждения глутаматом плюс 24-час инкубация после травмы на выживаемость (A), сеть нейритов (B) и на внеядерный TDP-43 (eTDP43) (C) MAP-2 положительных МНС. Результаты выражены в процентах от контроля как среднее значение ± SEM (n=5-6/группа). Односторонний ANOVA с последующим тестом PLSD Фишера.
Фиг. 3 показывает влияние дисульфата N-(3-(4-(3-(диизобутиламино)пропил)пиперазин-1-ил)пропил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-амина по сравнению с рилузолом (Ril) и эдавароном (Eda) в первичной культуре SOD1G93A Tg двигательных нейронов спинного мозга крысы, поврежденные глутаматом. (A) Число нейронов (A), целостность сети нейритов (B) и транслокация TDP43 (C). Результаты выражены в процентах от контроля как среднее значение +/- SEM (n = 4-6). Односторонний ANOVA с последующим тестом PLSD Фишера.
Фиг. 4 показывает влияние дисульфата N-(3-(4-(3-( диизобутиламино)пропил)пиперазин-1-ил)пропил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-амина по сравнению с рилузоном (Ril) в совместной культуре эксплантата и миобластов спинного мозга, поврежденных глутаматом: (А) число NMJ, (В) размер NMJ и (С) сеть нейритов NFH (+) MN. Результаты выражены в процентах от контроля как среднее значение +/- SEM (n = 4-6). Односторонний ANOVA с последующим тестом PLSD Фишера.
Биологические примеры
Пример 1. Влияние дисульфата N-(3-(4-(3-(диизобутиламино)пропил)пиперазин-1-ил)пропил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-амина на первичные двигательные нейроны крысы, поврежденные глутаматом
Культивирование первичных двигательных нейронов
Двигательные нейроны крыс (MN) культивируют как описано ранее в Martinou et al., Neuron., 1992, Apr; 8(4), 737-44, и Wang et al. Hum. Mol. Genet., 2013 Dec 1; 22(23), 4706-19. Беременных самок крыс с 14-дневным сроком беременности (Rats Wistar; Janvier Labs France) умерщвляют с использованием глубокой анестезии CO2 с последующим смещением шейных позвонков. Затем из матки извлекают плоды и немедленно помещают в охлажденную на льду среду Лейбовица L15 с 2% пенициллина (10000 Е/мл) и раствором стрептомицина (10 мг/мл) (PS) и 1% бычьего сывороточного альбумина (BSA). Спинной мозг обрабатывают в течение 20 мин при 37°C раствором трипсин-этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТК) в конечной концентрации 0,05% трипсина и 0,02% ЭДТК. Диссоциацию останавливают добавлением модифицированной по способу Дульбекко среды Игла (DMEM) с 4,5 г/л глюкозы, содержащей ДНКазу I II степени (конечная концентрация 0,5 мг/мл) и 10% фетальной телячьей сыворотки (FCS). Клетки механически диссоциируют тремя принудительными проходами через кончик 10-мм пипетки. Затем клетки центрифугируют при 180 × g в течение 10 мин при +4°C на слое BSA (3,5%) в среде L15. Супернатант отбрасывают, и осадок ресуспендируют в определенной питательной среде, состоящей из нейробазальной среды с 2% раствором добавки B27, 2 ммоль/литр L-глутамина, 2% раствора PS и 10 нг/мл нейротрофического фактора головного мозга (BDNF). Жизнеспособные клетки подсчитывают на цитометре Нойбауэра с использованием теста исключения трипанового синего. Клетки высевают при плотности 20000 на лунку в 96-луночные планшеты (иммуноокрашивание), предварительно покрытые поли-L-лизином, и культивируют при 37°C в инкубаторе воздух (95%) - CO2 (5%). Среду меняют каждые 2 дня. Двигательные нейроны после 13 дней культивирования повреждены глутаматом.
Обработка соединениями
На день 13 культивирования добавляют глутамат до конечной концентрации 5 мкМ, разведенный в контрольной среде в присутствии соли сульфата, в течение 20 мин. Через 20 мин глутамат промывают и добавляют свежую питательную среду с солью сульфатом в течение 48 часов.
Оценка конечных точек – 48-час совместная инкубация
После 14 или 15 дней культивирования (48 час после повреждения глутаматом) собирают супернатант клеточной культуры и фиксируют МНС спинного мозга холодным раствором из этанола (95%) и уксусной кислоты (5%) в течение 5 мин при -20°C. После просачивания 0,1% сапонина клетки блокируют в течение 2 час PBS, содержащим 1% фетальной телячьей сыворотки. Затем клетки инкубируют с указанными ниже антителами.
а) Мышиное моноклональное антитело к ассоциированному с антимикротрубочками белку 2 (MAP-2), разведение 1/400 в PBS, содержащем 1% фетальной телячьей сыворотки и 0,1% сапонина. Такое антитело специфически связывает MAP-2, присутствующий в клеточных телах и нейритах всех МN. Это антитело обнаруживают с помощью Alexa Fluor 488 - Goat Anti-Mouse IgG. Ядра нейронов помечают флуоресцентным маркером (раствор Hoechst).
б) Кроличье поликлональное антитело против TDP43 в разведении 1/100 в PBS, содержащем 1% фетальной телячьей сыворотки и 0,1% сапонина. Исследуют цитоплазматическую локализацию TDP43. Это антитело выявляют с помощью Alexa Fluor 568 - Goat Anti-Rabbit IgG.
Для каждого условия автоматически делается по 30 снимков на лунку (представляющих 90% площади лунки) с использованием ImageXpress (Molecular Devices) с увеличением 20х. Все изображения получают в одинаковых условиях (время экспозиции, усиление и интенсивность лазера). Анализ различных конечных точек выполняется автоматически с помощью редактора пользовательских модулей (Molecular Devices). Двигательные нейроны (MAP-2) отличают от интернейронов (окрашивание MAP-2), используя следующие морфологические критерии: диаметр тела клетки >15 мм и наличие минимум трех нейритных отростков (Ferraiuolo et al. Brain, 2011: 134; 2627-2641).
Конечными точками являются
- выживаемость MN (число MN),
- полный нейритный отросток MN (выражается в мкм),
- TDP43 (внеядерный, eTDP43) в MN (выражается как площадь eTDP43-мкм2/число MN).
Статистический анализ
Все величины выражаются как среднее +/- SEM. Статистический анализ проводят с помощью одностороннего ANOVA с последующим тестом PLSD Фишера. Neuro-Sys выполняет графики и статистический анализ различных состояний, используя программное обеспечение GraphPad Prism, версия 7.04. *p<0,05 считается значимым.
Результаты
• Выживаемость двигательных нейронов: как и ожидалось, интоксикация глутаматом значительно снижает выживаемость клеток по сравнению с контрольной группой (средняя выживаемость 55%; фиг. 1А). Низкие дозы дисульфата N-(3-(4-(3-(диизобутиламино)пропил)пиперазин-1-ил)пропил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-амина (10 нМ – 30 нМ) показывают положительное и значительное влияние на выживаемость по сравнению с состоянием с глутаматом. Максимальный эффект получают при дозе 30 нМ (средняя выживаемость 82%).
• Целостность сети нейритов: глутамат значительно уменьшает сеть нейритов (фиг. 1B). Все исследованные дозы применяемого дисульфата N-(3-(4-(3-(диизобутиламино)пропил)пиперазин-1-ил)пропил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-амина позволяют улучшить сеть нейритов после повреждения глутаматом с максимальным эффектом при 30 нМ (средняя длина 80%).
• Внеядерный TDP-43: применение глутамата значительно усиливает аномальный цитоплазматический сигнал TDP-43 (фиг. 1C). Дисульфатная соль в концентрациях 10 и 30 нМ способна предотвращать накопление TDP-43 в цитоплазме.
Пример 2. Влияние предварительной обработки дисульфатом N-(3-(4-(3-(диизобутиламино)пропил)пиперазин-1-ил)пропил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-амина на первичные двигательные нейроны крысы, поврежденные глутаматом, по схеме 24-час предварительная обработка – повреждение – 24-час обработка
Культивирование первичных двигательных нейронов
Культивирование выполняют так, как описано в примере 1.
Обработка соединениями – 24-час предварительная инкубация + 24-час совместная инкубация
В день 12 культивирования первичные двигательные нейроны обрабатывают солью сульфатом в течение 24 часов. В день 13 культивирования добавляют глутамат в конечной концентрации 5 мкМ, разведенный в контрольной среде в присутствии сульфата, в течение 20 мин. Через 20 мин глутамат промывают, и добавляют свежую питательную среду с сульфатной солью еще в течение 24 часов.
Оценка конечной точки
Оценку конечной точки выполняют так, как описано в примере 1.
Статистический анализ
Статистический анализ выполняют так, как описано в примере 1.
Результаты
• Выживаемость двигательных нейронов: как и ожидалось, глутамат значительно снижает выживаемость клеток по сравнению с контрольной группой (средняя выживаемость 65%; фиг. 2А). Низкие дозы сульфатной соли (3 нМ – 30 нМ) показывают положительное и значительное влияние на выживаемость по сравнению с состоянием с глутаматом. Максимальный эффект получают при дозе сульфатной соли 30 нМ (средняя выживаемость 87%).
• Целостность сети нейритов: глутамат сильно нарушает сеть нейритов двигательных нейронов спинного мозга (фиг. 1B). Все исследованные дозы сульфатной соли способны защитить сеть нейритов от повреждения глутаматом с максимальным эффектом при 30 нМ (средняя длина 91%).
• Внеядерный TDP-43: применение глутамата значительно увеличивает цитоплазматический сигнал TDP43 (средний сигнал eTDP-43 128% по сравнению с контролем, фиг. 1C). Сульфатная соль (в дозах 10 нМ – 30 нМ способна полностью предотвращать распределение TDP-43.
Пример 3. Влияние дисульфата N-(3-(4-(3-(диизобутиламино)пропил)пиперазин-1-ил)пропил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-амина на созревание SOD1 первичных двигательных нейронов крысы после повреждения глутаматом
Используют генетические модели грызунов для изучения патогенеза ALS, включающие крыс, сверхэкспрессирующих супероксиддисмутазу 1 человека (SOD1) с мутациями, известными как вызывающие семейный ALS человека (например, крыс SOD1G93A). Крысиная модель ALS, экспрессирующая мутированную форму hSOD-1G93A, демонстрирует признаки, которые в точности повторяют клинические и гистопатологические особенности заболевания человека (Nagai et al., The Journal of Neuroscience, December 1, 2001, 21(23): 9246-9254). В исследованиях на людях или грызунах (модели SOD1) потере MN предшествует повышенная возбудимость. Так как повышенная возбудимость нейронов коррелирует со структурными изменениями в дендритных стволах и шипиках, наблюдается атрофия дендритов и выпадение шипика в полосатых нейронах средней колючести (MSNS) и нижних MN поясничного отдела спинного мозга (Ferrucci et al., Neurobiology of Disease, 37 (2010), 370–383; Avossa et al., Neuroscience, 138 (2006), 1179–1194).
Генотипирование эмбрионов по SOD1 двигательных нейронов
В день вскрытия (беременных самок на 14-й день беременности) кусочек головки каждого эмбриона (~3 мм3) с помощью нового скальпеля помещают в 2-мл пробирку без ДНКазы. ДНК экстрагируют с помощью набора для ПЦР тканей SYBR Green Extract-N-Amp (Sigma Aldrich). Коротко, на каждый кусочек головок эмбрионов наносят 120 мкл экстракционного раствора. Затем их инкубируют в течение 10 мин при комнатной температуре. По окончании этого периода инкубации головки инкубируют в течение 5 мин при 95°C. Сразу после этой последней инкубации добавляют 100 мкл нейтрализующего раствора; каждый экстракт ДНК разбавляют 1/40 и хранят при +4°C до использования. Ген SOD1G93A определяют с использованием фрагмента генома с праймерами SOD1 человека (5'-CATCAGCCCTAATCCATCTGA-3'; 5'- CGCGACTAACAATCAAAGTGA-3'). Праймеры SOD1 разводят при 3 мкМ в стерильной сверхчистой воде. Коротко, получают смесь для ПЦР из сверхчистой воды (4 мкл на образец), праймера 3 мкМ (2 мкл на образец) и мастер-микс (10 мкл на образец). В каждую лунку 96-луночного планшета для ПЦР добавляют по 16 мкл смеси для ПЦР. Добавляют по 4 мкл каждой разведенной ДНК в соответствии с программой осаждения.
ОT-ПЦР проводят с использованием системы CFX96 Biorad RT-PCR, используя следующую программу:
- начало: 95°C – 20 с,
- 45 циклов: 95°C – 10 с, 65°C – 10 с, 72°C – 30 с (сбор данных),
- кривая плавления: 95°C – 15 с, 64°C – 1 мин, 90°C – 30 с (непрерывный сбор данных), 60°C 15 с.
Графики амплификации и кривые плавления анализируют с благодарностью с помощью программного обеспечения Biorad.
Результаты для каждого образца сравнивают с отрицательным контролем (сверхчистая вода) и с положительным контролем, чтобы сделать вывод о генотипе каждого эмбриона (WT или Tg).
Культивирование SOD1-двигательных нейронов спинного мозга
Двигательные нейроны спинного мозга (SC) крысы культивируют так, как описано в Martinou et al., Neuron., 1992, Apr; 8(4), 737-44; и в Wang et al., Hum. Mol. Genet., 2013 Dec 1; 22(23), 4706-19. Беременных самок крыс на 14 дни беременности умерщвляют путем смещения шейных позвонков. Плоды собирают и сразу же помещают в охлажденную льдом среду Лейбовица с 2% пенициллина (10000 Е/мл) и раствором стрептомицина (10 мг/мл) (PS) и 1% сывороточного бычьего альбумина (BSA). Каждый плод расправляют в нумерованной чашке Петри (диаметром 35 мм). Хвосты плодов режут, помещают в 1,5-мл пробирку без ДНКазы; экстрагируют ДНК с помощью набора Extract-N-Amp Tissue Kit.
Генотипирование плодов SOD tg выполняют с помощью набора Fast SYBR Green Master Mix. Такое генотипирование проводят во время рассекания спинного мозга, следовательно, рассечение осуществляют по окончании культивирования SOD Tg спинного мозга и WT спинного мозга. Спинной мозг извлекают и помещают в охлажденную льдом среду Лейбовица (L15).
SC греют в течение 20 мин при 37°C с раствором трипсин-ЭДТК при конечной концентрации 0,05% трипсина и 0,02% ЭДТК. Диссоциацию останавливают путем добавления модифицированной по способу Дульбекко среды Игла (DMEM) с 4,5 г/л глюкозы, содержащей ДНКазу I степени II (конечная концентрация 0,5 мг/мл) и 10% фетальной телячьей сыворотки (FCS). Клетки механически диссоциируют тремя принудительными проходами через кончик 10-мл пипетки. Затем клетки центрифугируют при 180 × g в течение 10 мин at +4°C на слое BSA (3,5%) в среде L15. Супернатант отбрасывают, и остаток ресуспендируют в определенной питательной среде, состоящей из нейробазальной среды с 2% раствором добавки of B27, 2 ммоль/л L-глутамина, 2% раствор в PS, и 10 нг/мл нейротрофического фактора головного мозга (BDNF). Жизнеспособные клетки подсчитывают на цитометре Нойбауэра с использованием теста исключения трипанового синего. Клетки высевают при плотности 20000 на лунку в 96-луночные планшеты (иммуноокрашивание), предварительно покрытые поли-L-лизином, и культивируют при 37°C в инкубаторе воздух (95%) - CO2 (5%). Среду меняют каждые 2 дня.
Обработка соединениями – 48-час совместная инкубация
В день 13 среду удаляют, и на культуры воздействуют испытываемыми соединениями дисульфатом N-(3-(4-(3-(диизобутиламино)пропил)пиперазин-1-ил)пропил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-амин в сравнении с рилузолом и эдавароном и глутаматом (5 мкМ) в течение 20 мин при 37°C в определенной среде. После воздействия глутамата культуры промывают определенной средой при 37°C, затем помещают в свежую питательную среду, содержащую испытываемое соединение, еще на 48 часов.
Оценка конечных точек
После 15 дней культивирования (48 час после повреждения глутаматом) собирают супернатант клеточной культуры и фиксируют двигательные нейроны спинного мозга холодным раствором из этанола (95%) и уксусной кислоты (5%) в течение 5 мин при -20°C.
После просачивания 0,1% сапонина клетки инкубируют в течение 2 час с указанными ниже антителами.
- Мышиное моноклональное антитело к ассоциированному с антимикротрубочками белку 2 (MAP-2), разведение 1/400 в PBS, содержащем 1% фетальной телячьей сыворотки и 0,1% сапонина (такое антитело окрашивает все двигательные нейроны, зрелые и ранней дифференцировки), такое антитело будет обнаруживаться Alexa Fluor 488 - Goat Anti-Mouse IgG.
- Кроличье поликлональное антитело против TDP43 в разведении 1/100 в PBS, содержащем 1% фетальной телячьей сыворотки и 0,1% сапонина (такое антитело связывается с TDP43, белком, подвергаемым при ALS аномальной транслокации). Рассматривают TDP43 (ядерный или цитоплазматический). Такое антитело обнаруживают с помощью Alexa Fluor 568 - Goat Anti-Rabbit IgG. Ядра нейронов будут помечаться флуоресцентным маркером (раствор Hoechat).
Конечными точками являются
- общая выживаемость MN (число МАР-2 положительных MN),
- вся сеть нейритов (длина выражается в мкм) МАР-2 положительных нейритов,
- цитоплазматический TDP43 (внеядерный, eTDP43) в MN, выражается как площадь (мкм2)/число MN.
Статистический анализ
Статистический анализ выполняют так, как описано в примере 1.
Результаты
Применение глутамата значительно снижает число MN, уменьшает длину сети их нейритов и запускает аномальное распределение TDP43 в сторону цитоплазмы (см. фиг. 3).
Во всех исследованных дозах дисульфат N-(3-(4-(3-(диизобутиламино)пропил)пиперазин-1-ил)пропил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-амина является нейрозащитным веществом. Защитное действие на выживаемость нейронов и на распределение TDP-43 зависит от дозы. При дозе 300 нМ защитное действие дисульфата N-(3-(4-(3-(диизобутиламино)пропил)пиперазин-1-ил)пропил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-амина выше, чем у рилузола или эдаравона, даже при их более высоких концентрациях 1 мкМ и 5 мкМ соответственно.
Пример 4. Влияние дисульфата N-(3-(4-(3-(диизобутиламино)пропил)пиперазин-1-ил)пропил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-амина на нервно-мышечные соединения спинного мозга и мышц, поврежденные глутаматом
Культивирование миобластов человека и эксплантатов спинного мозга крысы
Все эксперименты проводят в соответствии с Руководством Национальных институтов здравоохранения по уходу и использованию лабораторных животных и в соответствии с действующими правилами Европейского Союза (Директива 2010/63/EU).
Создают линию мышечных клеток человека из диссоциированных клеток (22000 клеток на лунки). Их помещают на 48-луночный планшет с покрытием из 0,1% раствора желатина в воде и дают расти в среде для пролиферации, состоящей из смеси 62% среды MEM и 25% среды M199 с добавлением 2 мМ глютамина, 10 мкг/мл человеческого инсулина, 10 нг/мл человеческого рекомбинантного эпидермального фактора роста (EGF), 2 нг/мл основного рекомбинантного фактора роста фибробластов человека (bFGF), 10% фетальной телячьей сыворотки (FCS) и 10000 Е/мл 2% пенициллина и 10000 мкг/мл стрептомицина (PS). Среда будет меняться каждые 2 дня.
Через пять дней после начала культивирования, сразу после слияния клеток-сателлитов, на мышечный монослой помещают целые поперечные срезы спинного мозга с прикрепленными 4 дорсальными корневыми ганглиями (DRG), взятые у 13-дневных эмбрионов крыс Wistar (Janvier Labs, Франция) (один эксплантат на лунку в центральной области). Наличие DRG необходимо для достижения хорошего коэффициента иннервации. Иннервированные культуры поддерживают в смешанной среде, состоящей из MEM и среды 199 (67%/25%) с добавлением 5% FCS, 5 мкг/мл инсулина, 2 мМ глутамина и 2% PS. После 24-час совместного культивирования обычно наблюдают элонгацию нейритов из эксплантатов спинного мозга. Такие нейриты вступают в контакт с миотрубочками и индуцируют образование нервно-мышечных соединений, и первые сокращения наблюдают через ~8 дней совместного культивирования. Вскоре после этого иннервированные мышечные волокна, расположенные в непосредственной близости от эксплантатов спинного мозга, практически непрерывно сокращаются. Иннервированные волокна морфологически и пространственно отличаются от неиннервированных, и их можно легко отличить от них. Планшеты выдерживают при 37°C в увлажненном инкубаторе, в атмосфере воздух (95%) - CO2 (5%).
Обработка соединениями – 48-час совместная инкубация
В день 27 (совместное культивирование) культуры инкубируют с дисульфатом N-(3-(4-(3-(диизобутиламино)пропил)пиперазин-1-ил)пропил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-амина и с применением глутамата. Глутамат добавляют в конечной концентрации 60 мкМ, разведенный в контрольной среде, в присутствии дисульфатной соли в течение 20 мин.
После 20-мин интоксикации супернатант удаляют, и добавляют свежую питательную среду с дисульфатом N-(3-(4-(3-(диизобутиламино)пропил)пиперазин-1-ил)пропил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-амина еще в течение 48 час.
Оценка конечных точек
Иммуноокрашивание
После 48-час интоксикиции клетки инкубируют с 500 нM α-бунгаротоксина в сочетании с Alexa 488 в течение 15 мин в питательной среде при 37°C для обнаружения окончаний двигательных нервов. После 2 промывок в PBS, клетки фиксируют 4% раствором параформальдегида в PBS, pH = 7,3, в течение 20 мин при комнатной температуре.
Клетки дважды промывают в PBS. Раствор PBS, содержащий 0,1% сапонина и 1% FCS, в течение 15 мин при комнатной температуре для проницаемости клеток и блокирования неспецифических участков.
Затем совместные культуры инкубируют с мышиным моноклональным антителом против нейрофиламента в 200 кД (NFH) при разведении 1/400 в PBS, содержащем 1% FCS, 0,1% сапонина, в течение 2 час при комнатной температуре. Антитело против NFH окрашивает нейриты и аксон двигательного нейрона. Такое антитело обнаруживают с помощью Alexa Fluor 568 - Goat Anti-Mouse IgG в разведении 1/400 в PBS, содержащем 1% FCS, 0,1% сапонина, в течение 1 часа при комнатной температуре. Ядра нейронов помечают ядерным флуоресцентным маркером раствором Hoechst в концентрации 1 мкм/мл в том же растворе.
Анализ
Проводят одно совместное культивирование (6 лунок на условие). Для каждого условия автоматически делается 20 снимков на лунку с помощью ImageXpress (Molecular devices) с увеличением 10×. Все изображения получают в одинаковых условиях.
Автоматически измеряют следующие конечные точки:
(1) число NMJ,
(2) средний размер NMJ (площадь NMJ в мкм2),
(3) общая длина нейритов (мкм) (= сеть иннервации).
Статистический анализ
Статистический анализ выполняют так, как описано в примере 1.
Результаты
Применение глутамата (60 мкМ, 20 мин) приводит к значительному уменьшению числа (А) и общей площади (В) NMJ в культуре. Кроме того, повреждение ведет к значительной потере нейрита (С). Дисульфатная соль (300 нМ) проявляет нейрозащитное действие дозозависимым образом, так как увеличивает число, общую площадь NMJ и общую сеть нейритов, она успешно защищает нервно-мышечные соединения и сеть нейритов от глутаматергического стресса.
Claims (11)
1. Применение сульфатной соли N-(3-(4-(3-(диизобутиламино)пропил)пиперазин-1-ил)пропил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-амина для лечения и/или предупреждения заболеваний двигательных нейронов и нарушений нервно-мышечных соединений, выбранных из бокового амиотрофического склероза без FTD, первичного бокового склероза (PLS), наследственной спастической параплегии (HSP), нейролатиризма, болезни Тея-Сакса, болезни Сандхоффа, прогрессирующей мышечной атрофии (PMA), мономелической амиотрофии, спинально-бульбарной мышечной атрофии (SBMA), прогрессирующего бульбарного паралича (PBP), пострадиационного синдрома, синдрома скованного человека, нарушений двигательных единиц в результате несчастного случая, миастении гравис, синдрома Итона-Ламберта.
2. Применение сульфатной соли N-(3-(4-(3-(диизобутиламино)пропил)пиперазин-1-ил)пропил)-1Н-бензо[d]имидазол-2-амина для отсрочки начала у пациента заболеваний двигательных нейронов и нарушений нервно-мышечных соединений, выбранных из бокового амиотрофического склероза без FTD, первичного бокового склероза (PLS), наследственной спастической параплегии (HSP), нейролатиризма, болезни Тея-Сакса, болезни Сандхоффа, прогрессирующей мышечной атрофии (PMA), мономелической амиотрофии, спинально-бульбарной мышечной атрофии (SBMA), прогрессирующего бульбарного паралича (PBP), пострадиационного синдрома, синдрома скованного человека, нарушений двигательных единиц в результате несчастного случая, миастении гравис, синдрома Итона-Ламберта.
3. Применение по п. 1 или 2, где сульфатная соль имеет формулу I
Формула I,
где х равен 0,5-4.
4. Применение по п. 3, где x равен около 2.
5. Применение по п. 4, где сульфатная соль представляет собой N-(3-(4-(3-(диизобутиламино)пропил)пиперазин-1-ил)пропил)-1H-бензо[d]имидазол- 2-аминодисульфат.
6. Применение по п. 1 или 2, где заболевания двигательных нейронов и нарушения нервно-мышечных соединений выбирают из бокового амиотрофического склероза без FTD, первичного бокового склероза (PLS), наследственной спастической параплегии (HSP), прогрессирующей мышечной атрофии (PMA), мономелической амиотрофии, спинально-бульбарной мышечной атрофии (SBMA), прогрессирующего бульбарного паралича (PBP), миастении гравис, синдрома Итона-Ламберта, нарушений двигательных единиц в результате несчастного случая.
7. Применение по п. 6, где заболевания двигательных нейронов выбирают из бокового амиотрофического склероза без FTD, первичного бокового склероза (PLS), наследственной спастической параплегии (HSP), спинально-бульбарной мышечной атрофии (SBMA), прогрессирующего бульбарного паралича (PBP).
8. Применение по п. 7, где заболеванием двигательных нейронов является боковой амиотрофический склероз без FTD.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP20306168.4 | 2020-10-07 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2814327C1 true RU2814327C1 (ru) | 2024-02-28 |
Family
ID=
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2006051489A1 (en) * | 2004-11-10 | 2006-05-18 | Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) | Use of 1,4-bis (3-aminoalkyl) piperazine derivatives in the treatment of neurodegenerative diseases |
WO2014102339A1 (en) * | 2012-12-27 | 2014-07-03 | Alzprotect | Sulphate salts of n-(3-(4-(3-(diisobutylamino)propyl)piperazin-1-yl)propyl)-1h-benzo[d]imidazol-2-amine, preparation thereof and use of the same |
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2006051489A1 (en) * | 2004-11-10 | 2006-05-18 | Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) | Use of 1,4-bis (3-aminoalkyl) piperazine derivatives in the treatment of neurodegenerative diseases |
WO2014102339A1 (en) * | 2012-12-27 | 2014-07-03 | Alzprotect | Sulphate salts of n-(3-(4-(3-(diisobutylamino)propyl)piperazin-1-yl)propyl)-1h-benzo[d]imidazol-2-amine, preparation thereof and use of the same |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Zilai Wang, Presynaptic and postsynaptic interaction of the amyloid precursor protein promotes peripheral and central synaptogenesis, J Neurosci. 2009 Sep 2; 29(35): 10788-801. doi: 10.1523/JNEUROSCI.2132-09.2009. Wolfgang N. Löscher et al. Atlas of Neuromuscular Diseases, A Practical Guideline, Second Edition, Motor Neuron Diseases, 2014, pp. 293-290. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US9212204B2 (en) | Treatment of rett syndrome using glycyl-L-2-methylprolyl-L-glutamic acid | |
US20100178277A1 (en) | Methods and compositions for stimulating cells | |
US20220202798A1 (en) | Use of pridopidine for the treatment of fragile x syndrome | |
JP4970932B2 (ja) | コレスト−4−エン−3−オンの誘導体の医薬としての使用、これらを含む医薬組成物、新規誘導体及びそれらの製造方法 | |
US20210220342A1 (en) | Pridopidine for the treatment of mitochondrial-associated diseases and disorders and endoplasmic reticulum (er) stress | |
JP7500875B2 (ja) | 運動ニューロン疾患及び神経筋接合部障害の処置のためのn-(3-(4-(3-(ジイソブチルアミノ)プロピル)ピペラジン-1-イル)プロピル)-1h-ベンゾ[d]イミダゾール-2-アミン硫酸塩及びそれらの溶媒和物の使用 | |
US20220105106A1 (en) | Compositions and methods relating to use of agonists of alpha5-containing gabaa receptors | |
RU2814327C1 (ru) | ПРИМЕНЕНИЕ СУЛЬФАТНЫХ СОЛЕЙ N-(3-(4-(3-(ДИИЗОБУТИЛАМИНО)ПРОПИЛ)ПИПЕРАЗИН-1-ИЛ)ПРОПИЛ)-1Н-БЕНЗО[d]ИМИДАЗОЛ-2-АМИНА И ИХ СОЛЬВАТОВ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ ДВИГАТЕЛЬНЫХ НЕЙРОНОВ И НАРУШЕНИЙ НЕРВНО-МЫШЕЧНЫХ СОЕДИНЕНИЙ | |
AU2021356110B2 (en) | Use of N-(3-(4-(3-(diisobutylamino)propyl)piperazin-1-yl)propyl)-1H-benzo[d]imidazol-2-amine sulphate salts and solvates thereof for the treatment of motor neuron diseases and neuromuscular junction disorders | |
AU2022422257A1 (en) | USE OF N-(3-(4-(3-(DIISOBUTYLAMINO)PROPYL)PIPERAZIN-1-YL)PROPYL)-1H-BENZO[d]IMIDAZOL-2-AMINE SUCCINATE SALTS AND SOLVATES THEREOF FOR THE TREATMENT OF MOTOR NEURON DISEASES AND NEUROMUSCULAR JUNCTION DISORDERS | |
WO2023117990A1 (en) | USE OF N-(3-(4-(3-(DIISOBUTYLAMINO)PROPYL)PIPERAZIN-1-YL)PROPYL)-1H-BENZO[d]IMIDAZOL-2-AMINE SUCCINATE SALTS AND SOLVATES THEREOF FOR THE TREATMENT OF MOTOR NEURON DISEASES AND NEUROMUSCULAR JUNCTION DISORDERS | |
US20240165129A1 (en) | Methods of treating pain and depression | |
WO2021241504A1 (ja) | 神経筋接合部の保護及び/又は再生剤 |