RU2812019C2 - Неклеточный наполнитель корневого канала и неклеточный набор, стимулирующий регенерацию тканей зуба - Google Patents
Неклеточный наполнитель корневого канала и неклеточный набор, стимулирующий регенерацию тканей зуба Download PDFInfo
- Publication number
- RU2812019C2 RU2812019C2 RU2021127889A RU2021127889A RU2812019C2 RU 2812019 C2 RU2812019 C2 RU 2812019C2 RU 2021127889 A RU2021127889 A RU 2021127889A RU 2021127889 A RU2021127889 A RU 2021127889A RU 2812019 C2 RU2812019 C2 RU 2812019C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cellular
- root canal
- regeneration
- dental pulp
- canal filler
- Prior art date
Links
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 title claims abstract description 95
- 210000004262 dental pulp cavity Anatomy 0.000 title claims abstract description 86
- 239000000945 filler Substances 0.000 title claims abstract description 57
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 title description 44
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 title description 12
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 claims abstract description 76
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 claims abstract description 76
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims abstract description 62
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 claims abstract description 13
- 102000012479 Serine Proteases Human genes 0.000 claims abstract description 11
- 108010022999 Serine Proteases Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 8
- DNIMKEPBPBPBFN-WLHGVMLRSA-N (E)-but-2-enedioic acid 4-[[2-[6-fluoro-3-[(4-fluorophenyl)methyl]-3,4-dihydro-1H-isoquinolin-2-yl]ethylamino]methyl]-N-propan-2-ylaniline Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O.C1=CC(NC(C)C)=CC=C1CNCCN1C(CC=2C=CC(F)=CC=2)CC2=CC(F)=CC=C2C1 DNIMKEPBPBPBFN-WLHGVMLRSA-N 0.000 claims abstract description 6
- QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N Ethylamine Chemical compound CCN QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- OMTYJLWYMJDIKD-UHFFFAOYSA-N N-[3-[[2-[6-fluoro-3-[(4-fluorophenyl)methyl]-3,4-dihydro-1H-isoquinolin-2-yl]ethylamino]methyl]phenyl]methanesulfonamide 2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O.CS(=O)(=O)NC1=CC=CC(CNCCN2C(CC3=CC(F)=CC=C3C2)CC=2C=CC(F)=CC=2)=C1 OMTYJLWYMJDIKD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 claims abstract description 3
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 claims description 35
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 claims description 35
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 claims description 35
- 239000005482 chemotactic factor Substances 0.000 claims description 17
- 102000004269 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 claims description 13
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 claims description 13
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 13
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 claims description 9
- 108090000379 Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 claims description 8
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 claims description 6
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 claims description 6
- 102100021669 Stromal cell-derived factor 1 Human genes 0.000 claims description 6
- 101710088580 Stromal cell-derived factor 1 Proteins 0.000 claims description 6
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 claims description 6
- 101000856199 Homo sapiens Chymotrypsin-like protease CTRL-1 Proteins 0.000 claims description 5
- 102100024785 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 claims 2
- 210000003074 dental pulp Anatomy 0.000 abstract description 86
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 abstract description 21
- 210000004268 dentin Anatomy 0.000 abstract description 20
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 10
- 210000004053 periapical tissue Anatomy 0.000 abstract description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- IOEPOEDBBPRAEI-UHFFFAOYSA-N 1,2-dihydroisoquinoline Chemical class C1=CC=C2CNC=CC2=C1 IOEPOEDBBPRAEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 abstract 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 55
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 22
- 210000005258 dental pulp stem cell Anatomy 0.000 description 21
- LVTJOONKWUXEFR-FZRMHRINSA-N protoneodioscin Natural products O(C[C@@H](CC[C@]1(O)[C@H](C)[C@@H]2[C@]3(C)[C@H]([C@H]4[C@@H]([C@]5(C)C(=CC4)C[C@@H](O[C@@H]4[C@H](O[C@H]6[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O6)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]6[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O6)[C@H](CO)O4)CC5)CC3)C[C@@H]2O1)C)[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 LVTJOONKWUXEFR-FZRMHRINSA-N 0.000 description 19
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 17
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 16
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 16
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 15
- 239000002101 nanobubble Substances 0.000 description 15
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 15
- NDZYPHLNJZSQJY-QNWVGRARSA-N 1-(5-acetyl-4-methyl-1,3-thiazol-2-yl)-3-[(1r,2s)-2-[[(3s)-3-[(4-fluorophenyl)methyl]piperidin-1-yl]methyl]cyclohexyl]urea Chemical compound CC1=C(C(=O)C)SC(NC(=O)N[C@H]2[C@@H](CCCC2)CN2C[C@H](CC=3C=CC(F)=CC=3)CCC2)=N1 NDZYPHLNJZSQJY-QNWVGRARSA-N 0.000 description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 description 10
- 210000002241 neurite Anatomy 0.000 description 10
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 10
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 9
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 9
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 9
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 9
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 9
- 238000011476 stem cell transplantation Methods 0.000 description 9
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 102100025038 Ubiquitin carboxyl-terminal hydrolase isozyme L1 Human genes 0.000 description 8
- 101710186825 Ubiquitin carboxyl-terminal hydrolase isozyme L1 Proteins 0.000 description 8
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 8
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 8
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 8
- 230000023597 hemostasis Effects 0.000 description 7
- -1 tetrahydroisoquinoline compound Chemical class 0.000 description 7
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 7
- 102100023688 Eotaxin Human genes 0.000 description 6
- 102000003974 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 description 6
- 101000978392 Homo sapiens Eotaxin Proteins 0.000 description 6
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 6
- 238000007490 hematoxylin and eosin (H&E) staining Methods 0.000 description 6
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 6
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 5
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 5
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 5
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 5
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 5
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 5
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 5
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 5
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 5
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 5
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 5
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 5
- 125000003161 (C1-C6) alkylene group Chemical group 0.000 description 4
- 125000006376 (C3-C10) cycloalkyl group Chemical group 0.000 description 4
- 102100024167 C-C chemokine receptor type 3 Human genes 0.000 description 4
- 101710149862 C-C chemokine receptor type 3 Proteins 0.000 description 4
- 239000005708 Sodium hypochlorite Substances 0.000 description 4
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 4
- 108010045569 atelocollagen Proteins 0.000 description 4
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 4
- PGBHMTALBVVCIT-VCIWKGPPSA-N framycetin Chemical compound N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](N)C[C@@H](N)[C@@H]2O)O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O2)N)O[C@@H]1CO PGBHMTALBVVCIT-VCIWKGPPSA-N 0.000 description 4
- 238000002695 general anesthesia Methods 0.000 description 4
- 239000003178 glass ionomer cement Substances 0.000 description 4
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 4
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 4
- 238000011206 morphological examination Methods 0.000 description 4
- 210000004416 odontoblast Anatomy 0.000 description 4
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 4
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 4
- SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N sodium hypochlorite Chemical compound [Na+].Cl[O-] SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 4
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101000799189 Homo sapiens Activin receptor type-1B Proteins 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 3
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 3
- 108010038512 Platelet-Derived Growth Factor Proteins 0.000 description 3
- 102000010780 Platelet-Derived Growth Factor Human genes 0.000 description 3
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 3
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 3
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 3
- 238000011316 allogeneic transplantation Methods 0.000 description 3
- 239000004568 cement Substances 0.000 description 3
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 3
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- UWYZHKAOTLEWKK-UHFFFAOYSA-N tetrahydro-isoquinoline Natural products C1=CC=C2CNCCC2=C1 UWYZHKAOTLEWKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 3
- 102100034134 Activin receptor type-1B Human genes 0.000 description 2
- 102100034135 Activin receptor type-1C Human genes 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 241000219726 Griffonia simplicifolia Species 0.000 description 2
- 101000799193 Homo sapiens Activin receptor type-1C Proteins 0.000 description 2
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 2
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 210000001808 exosome Anatomy 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 230000008717 functional decline Effects 0.000 description 2
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 2
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 210000004623 platelet-rich plasma Anatomy 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 210000004918 root sheath Anatomy 0.000 description 2
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 2
- 239000012453 solvate Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 210000004746 tooth root Anatomy 0.000 description 2
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 1
- HCDMJFOHIXMBOV-UHFFFAOYSA-N 3-(2,6-difluoro-3,5-dimethoxyphenyl)-1-ethyl-8-(morpholin-4-ylmethyl)-4,7-dihydropyrrolo[4,5]pyrido[1,2-d]pyrimidin-2-one Chemical compound C=1C2=C3N(CC)C(=O)N(C=4C(=C(OC)C=C(OC)C=4F)F)CC3=CN=C2NC=1CN1CCOCC1 HCDMJFOHIXMBOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LGLSWIYCJZCHHJ-UHFFFAOYSA-N 4-[[2-[6-fluoro-3-[(4-fluorophenyl)methyl]-3,4-dihydro-1h-isoquinolin-2-yl]ethylamino]methyl]-n-(2-methoxyethyl)aniline Chemical compound C1=CC(NCCOC)=CC=C1CNCCN1C(CC=2C=CC(F)=CC=2)CC2=CC(F)=CC=C2C1 LGLSWIYCJZCHHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SBBFSIQOOZQKKP-UHFFFAOYSA-N 4-[[2-[6-fluoro-3-[(4-fluorophenyl)methyl]-3,4-dihydro-1h-isoquinolin-2-yl]ethylamino]methyl]-n-propan-2-ylaniline Chemical compound C1=CC(NC(C)C)=CC=C1CNCCN1C(CC=2C=CC(F)=CC=2)CC2=CC(F)=CC=C2C1 SBBFSIQOOZQKKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010062877 Bacteriocins Proteins 0.000 description 1
- 108090000715 Brain-derived neurotrophic factor Proteins 0.000 description 1
- 102000004219 Brain-derived neurotrophic factor Human genes 0.000 description 1
- 102100032528 C-type lectin domain family 11 member A Human genes 0.000 description 1
- 101710167766 C-type lectin domain family 11 member A Proteins 0.000 description 1
- 235000015256 Chionanthus virginicus Nutrition 0.000 description 1
- 229920002101 Chitin Polymers 0.000 description 1
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 1
- 108090000317 Chymotrypsin Proteins 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940126062 Compound A Drugs 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 238000004435 EPR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 1
- 102000009024 Epidermal Growth Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010074864 Factor XI Proteins 0.000 description 1
- 108010074860 Factor Xa Proteins 0.000 description 1
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 1
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 1
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 1
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 1
- 241000234271 Galanthus Species 0.000 description 1
- 241000234283 Galanthus nivalis Species 0.000 description 1
- 108091010837 Glial cell line-derived neurotrophic factor Proteins 0.000 description 1
- 102000034615 Glial cell line-derived neurotrophic factor Human genes 0.000 description 1
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 1
- 229920002971 Heparan sulfate Polymers 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NLDMNSXOCDLTTB-UHFFFAOYSA-N Heterophylliin A Natural products O1C2COC(=O)C3=CC(O)=C(O)C(O)=C3C3=C(O)C(O)=C(O)C=C3C(=O)OC2C(OC(=O)C=2C=C(O)C(O)=C(O)C=2)C(O)C1OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 NLDMNSXOCDLTTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000990915 Homo sapiens Stromelysin-1 Proteins 0.000 description 1
- 101710172072 Kexin Proteins 0.000 description 1
- 101710197072 Lectin 1 Proteins 0.000 description 1
- 208000002720 Malnutrition Diseases 0.000 description 1
- KGIRCIQLZWQLNY-UHFFFAOYSA-N N1=CC=C(C=C1)NC(CN1CC2=CC=C(C=C2CC1CC1=CC=C(C=C1)F)F)C Chemical compound N1=CC=C(C=C1)NC(CN1CC2=CC=C(C=C2CC1CC1=CC=C(C=C1)F)F)C KGIRCIQLZWQLNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000015336 Nerve Growth Factor Human genes 0.000 description 1
- 208000001132 Osteoporosis Diseases 0.000 description 1
- 108010067372 Pancreatic elastase Proteins 0.000 description 1
- 102000016387 Pancreatic elastase Human genes 0.000 description 1
- 208000024216 Periapical disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037581 Persistent Infection Diseases 0.000 description 1
- 229920001244 Poly(D,L-lactide) Polymers 0.000 description 1
- 229920000954 Polyglycolide Polymers 0.000 description 1
- 101710098940 Pro-epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 201000004328 Pulpitis Diseases 0.000 description 1
- 206010037464 Pulpitis dental Diseases 0.000 description 1
- 102100030416 Stromelysin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108090000787 Subtilisin Proteins 0.000 description 1
- 101710174704 Subtilisin-like serine protease Proteins 0.000 description 1
- 102100033456 TGF-beta receptor type-1 Human genes 0.000 description 1
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 1
- RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N Titanium Chemical compound [Ti] RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000008312 Tooth Loss Diseases 0.000 description 1
- 108010011702 Transforming Growth Factor-beta Type I Receptor Proteins 0.000 description 1
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 1
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 229960001126 alginic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 description 1
- 150000004781 alginic acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 1
- 230000001656 angiogenetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002491 angiogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000003618 cementogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000003399 chemotactic effect Effects 0.000 description 1
- 229960002376 chymotrypsin Drugs 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000011833 dog model Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 1
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 description 1
- 229910052588 hydroxylapatite Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000001071 malnutrition Effects 0.000 description 1
- 235000000824 malnutrition Nutrition 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- WDUANCPTTZQWSY-UHFFFAOYSA-N n-[3-[[2-[6-fluoro-3-[(4-fluorophenyl)methyl]-3,4-dihydro-1h-isoquinolin-2-yl]ethylamino]methyl]phenyl]methanesulfonamide Chemical compound CS(=O)(=O)NC1=CC=CC(CNCCN2C(CC3=CC(F)=CC=C3C2)CC=2C=CC(F)=CC=2)=C1 WDUANCPTTZQWSY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 230000001338 necrotic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 230000000269 nucleophilic effect Effects 0.000 description 1
- 208000015380 nutritional deficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000604 odontoblastic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000002188 osteogenic effect Effects 0.000 description 1
- XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D pentacalcium;hydroxide;triphosphate Chemical compound [OH-].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 108010025647 phosphate-binding proteolipid Proteins 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- UNQNIRQQBJCMQR-UHFFFAOYSA-N phosphorine Chemical compound C1=CC=PC=C1 UNQNIRQQBJCMQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 1
- 229920001606 poly(lactic acid-co-glycolic acid) Polymers 0.000 description 1
- 229920001610 polycaprolactone Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 1
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 1
- 125000001453 quaternary ammonium group Chemical group 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 208000001076 sarcopenia Diseases 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 125000000467 secondary amino group Chemical group [H]N([*:1])[*:2] 0.000 description 1
- 230000035807 sensation Effects 0.000 description 1
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000009168 stem cell therapy Methods 0.000 description 1
- 238000009580 stem-cell therapy Methods 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 210000002536 stromal cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 125000001302 tertiary amino group Chemical group 0.000 description 1
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 description 1
- 210000004357 third molar Anatomy 0.000 description 1
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 1
- 239000003634 thrombocyte concentrate Substances 0.000 description 1
- 239000010936 titanium Substances 0.000 description 1
- 229910052719 titanium Inorganic materials 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 229960001322 trypsin Drugs 0.000 description 1
Abstract
Группа изобретений относится к области стоматологии и касается применения дигидроизохинолиновых соединений, которые стимулируют регенерацию тканей зуба. Предлагается применение (+)-4-[[2-[6-фтор-3-(4-фторбензил)-3,4-дигидроизохинолин-2(1H)-ил]этиламино]метил]-N-изопропиланилина монофумарата или (+)-N-[3-(метансульфониламино)бензил]-2-[6-фтор-3-(4-фторбензил)-3,4-дигидроизохинолин-(1H)-ил]этанамина моноцитрата для приготовления неклеточного наполнителя корневого канала. Предлагается также применение средства предварительной обработки, содержащего сериновую протеазу, и неклеточного наполнителя корневого канала, содержащего (+)-4-[[2-[6-фтор-3-(4-фторбензил)- 3,4-дигидроизохинолин-2(1H)-ил]этиламино]метил]-N-изопропиланилина монофумарат или (+)- N-[3-(метансульфониламино)бензил]-2-[6-фтор-3-(4-фторбензил)-3,4-дигидроизохинолин- 2(1H)-ил]этанамина моноцитрат для приготовления неклеточного набора, стимулирующего регенерацию тканей зуба. Использование группы изобретений обеспечивает стимулирование регенерации тканей зуба, зубной пульпы, дентина и периапикальных тканей, без применения стволовых клеток или компонентов стволовых клеток. 2 н. и 10 з.п. ф-лы, 7 ил., 4 пр.
Description
Область техники, к которой относится настоящее изобретение
[0001] Настоящее изобретение относится к неклеточному наполнителю корневого канала и неклеточному набору, стимулирующему регенерацию тканей зуба, который стимулирует регенерацию зубной пульпы, дентина и периапикальных тканей, без применения стволовых клеток или компонентов стволовых клеток.
Уровень техники настоящего изобретения
[0002] Здоровые зубы и способность хорошо жевать важны для здорового долголетия в обществе сверхстарения. Однако более 20% людей среднего и пожилого возраста имеют заболевание (инфицированный корневой канал), при котором зуб, нервы которого уже были удалены (пульпэктомия), подвергается повторному инфицированию несколько десятилетий спустя и заполняется гноем под корнем. Приблизительно 25% этих случаев трудно полностью излечить даже после лечения. Такие хронические инфекционные поражения имеют большое системное влияние на пожилых людей с ослабленной иммунной системой. Многим пожилым людям, которым вводят терапевтическое лекарственное средство для лечения остеопороза, не следует удалять зуб. Даже если удаление зуба выполняется, количество случаев, при которых можно использовать имплантат, уменьшается у людей среднего и пожилого возраста.
[0003] Между тем, потеря зубов приводит к ухудшению прикуса зубов, речи, вкуса, тактильных ощущений или эстетического вида, или снижению QOL (качества жизни). В последнее время возникли опасения, что слабость полости рта, приписываемая ухудшению функции зубов или полости рта, может привести к саркопении, такой как снижение мышечной силы или снижение функций организма, или функциональным ухудшениям, приписываемым недостаточному питанию или тому подобному, что в конечном итоге приводит к тому, что люди среднего и пожилого возраста нуждаются в уходе.
[0004] Соответственно, для поддержания функций зубов и полости рта была разработана терапия для регенерации зубной пульпы, которая включает аутологичную трансплантацию стволовых клеток зубной пульпы, отделенных от лишнего собственного зуба, или аллогенную трансплантацию стволовых клеток зубной пульпы, отделенных от лишнего зуба другого субъекта, для восстановления зуба в его исходное состояние без инфицирования корневого канала и удаления зуба после пульпэктомии (Патентные документы 1-3). Хотя зубная пульпа регенерируется аутологичной или аллогенной трансплантацией не только стволовых клеток зубной пульпы, но и стволовых клеток других тканей, происходящих из костного мозга или жировой ткани, такая трансплантация стволовых клеток ткани уступает по количеству регенерированной зубной пульпы, количеству ангиогенеза и количеству регенерированных нервов по сравнению с трансплантацией стволовых клеток зубной пульпы (Патентный документ 4). Клинические исследования уже подтвердили, что терапия для регенерации зубной пульпы путем аутологичной трансплантации стволовых клеток зубной пульпы безопасна, предполагая, что она эффективна (Непатентный документ 1).
[0005] Терапия для регенерации зубной пульпы включает терапию стволовыми клетками, как описано выше, а также хоминг клеток. Для зубов человека молодого возраста с незрелыми корнями обычно применяют способ заполнения сгустка крови в корневой канал без применения стволовых клеток зубной пульпы (Непатентный документ 2). Альтернативный способ предусматривает введение PRP (тромбоцитарно обогащенной плазмы) вместо сгустка крови (Непатентный документ 3). Однако такие подходы, как сообщается, приводят к регенерации только фиброзных или костеподобных тканей, богатых в основном кровеносными сосудами, тогда как регенерация специфичных для зубной пульпы тканей наблюдается редко (Непатентный документ 4). В ходе экспериментов на животных были разработаны способы на основе хоминга клеток, которые предусматривают использование фактора роста клеток или цитокина, такого как стромальный клеточный фактор 1α (SDF1α), основной фактор роста фибробластов (bFGF), фактор роста тромбоцитов (PDGF), фактор роста стволовых клеток (SCF) и гранулоцитарный колониестимулирующий фактор (G-CSF), в качестве хемотаксического фактора без применения стволовых клеток (Непатентный документ 5). Однако было сообщено, что такие подходы не позволяют регенерировать достаточное количество зубной пульпы и в основном регенерируют относительно плотные грубоволокнистые соединительные ткани с кровеносными сосудами, в то время как весь корневой канал может быть кальцифицирован (Непатентные документы 6 и 7). На основании этих данных полагают, что стволовые клетки необходимы для регенерации тканей зубной пульпы, особенно в зубах со зрелыми корнями (Непатентный документ 8).
[0006] Однако аутологичная трансплантация стволовых клеток имеет недостатки, состоящие в том, что для использования стволовых клеток зубной пульпы необходим лишний собственный зуб, такой как зуб мудрости, подтверждение безопасности обработанных клеточных продуктов является дорогостоящим, клетки не могут быть предоставлены немедленно после возникновения необходимости, а у субъектов среднего и пожилого возраста свойства стволовых клеток изменены, что приводит к уменьшению общего количества стволовых клеток зубной пульпы, которые могут быть отделены, и их культивирование занимает много времени. При аллогенной трансплантации затраты на подтверждение безопасности после получения и обработки клеток меньше по сравнению с аутологичной трансплантацией из-за увеличения количества клеточных продуктов на партию, в то время как остаются нерешенными вопросы, такие как проблема источника зуба с обеспечением безопасности, юридические проблемы, такие как права и вознаграждения человеческих доноров зубов при коммерциализации человеческих стволовых клеток зубной пульпы, а также проблема безопасности иммунных ответов у людей.
[0007] Соответственно необходимо разработать способ стимуляции регенерации тканей зуба, т.е. зубной пульпы, дентина и периапикальных тканей, после пульпэктомии или лечения инфицированного корневого канала без применения стволовых клеток или происходящих из стволовых клеток компонентов. Кроме того, дальнейшие исследования источников стволовых клеток, которые способствуют миграции клеток-хозяев, позволяют предположить, что соответствующие сигнальные факторы могут быть выбраны для использования при регенерации зубной пульпы. В частности, желательно разработать способ регенерации зубной пульпы с применением соответствующего сигнального фактора, который способствует миграции стволовых клеток-хозяев, обладающих ангиогенной способностью и способностью дифференциации в нервы, и подавляет миграцию клеток, обладающих остеогенными и цементогенными свойствами (Непатентный документ 9).
[0008] В частности, регенерация зубной пульпы у субъектов среднего и пожилого возраста замедлена по сравнению с регенерацией зубной пульпы у субъектов молодого возраста. Недавно в ходе экспериментов на животных с участием собак было подтверждено, что при терапии для регенерации зубной пульпы посредством трансплантации стволовых клеток зубной пульпы у субъектов среднего и пожилого возраста регенерация зубной пульпы стимулируется посредством трансплантации анти-CCL11 нейтрализующего антитела/антагониста CCR3 или ингибитора ALK5 со стволовыми клетками зубной пульпы. Регенерация зубной пульпы также стимулируется посредством предварительной обработки трипсином корневых каналов зуба у субъектов среднего и пожилого возраста перед трансплантацией стволовых клеток зубной пульпы (Патентный документ 5). Анти-CCL11 нейтрализующее антитело или антагонист CCR3 ингибирует связывание CCL11 с CCR3 и, таким образом, блокирует сигнальную трансдукцию. Фактор роста и дифференцировки 11 (GDF11) связывается с рецепторами суперсемейства трансформирующего фактора роста β (TGF-β) ACVR1B (также называемым ALK4), TGFBR1 (также называемым ALK5) и ACVR1C (также называемым ALK7) и передает сигналы через ALK4 и ALK5. Ингибитор ALK5 блокирует сигнальную трансдукцию GDF11. Полагают, что в ходе регенерации зубной пульпы секретируемые факторы из стволовых клеток зубной пульпы, накопленные в дентине, высвобождаются из дентина, стимулируя регенерацию зубной пульпы (Непатентный документ 10). Добавление антагониста CCR3 к супернатанту культуры, содержащему секретируемые факторы из стареющих стволовых клеток зубной пульпы, значительно повышало in vitro эффект стимуляции распространения нейритов и эффект стимуляции миграции супернатанта культуры. Добавление к нему ингибитора ALK5 значительно повышало ангиогенетическую способность супернатанта культуры и его эффект стимуляции распространения нейритов. Эти результаты позволили предположить, что эффект антагониста CCR3 или ингибитора ALK5 стимуляции регенерации зубной пульпы у собак среднего и пожилого возраста основан на эффектах стимуляции индукции кровеносных сосудов, стимуляции распространения нейритов и стимуляции миграции. Однако трансплантация стволовых клеток зубной пульпы с антагонистом CCR3 или ингибитором ALK5 оказалась неэффективной для регенерации зубной пульпы у собак молодого возраста (Патентный документ 5).
[0009] Трипсин применяют в качестве лекарственного средства для расщепления некротических тканей, сгустков крови или денатурированных белков, тем самым делая поверхность раны нормальной, чтобы облегчить действие антибиотиков (Непатентный документ 11). Посев стволовых клеток зубной пульпы на поверхности дентина, обработанные трипсином, in vitro увеличивал адгезию клеток и демонстрировал усиление дифференциации в одонтобласты. Было высказано предположение, что эффект стимуляции регенерации зубной пульпы предварительной обработки трипсином у собак среднего и пожилого возраста основан на инактивации ингибирующих факторов, накопленных в дентине субъекта среднего или пожилого возраста, или активации факторов, усиливающих дифференциацию, посредством расщепления предшественников, увеличения адгезии клеток к дентину и усиления дифференциации стволовых клеток зубной пульпы в одонтобласты. Однако предварительная обработка трипсином оказалась неэффективной для стимуляции регенерации зубной пульпы у молодых собак (Патентный документ 5). Регенерация зубной пульпы редко наблюдалась только при предварительной обработке трипсином без трансплантации стволовых клеток зубной пульпы или при простом использовании антагониста CCR3 или ингибитора ALK5 без трансплантации стволовые клетки зубной пульпы (Патентный документ 5).
Перечень процитированных документов
Патентные документы
[0010]
Патентный документ 1: патент Японии №5621105.
Патентный документ 2: патент Японии №6031658.
Патентный документ 3: патент Японии №5748194.
Патентный документ 4: патент Японии №5939559.
Патентный документ 5: WO 2017/170996
Непатентные документы
[0011]
Непатентный документ 1: Nakashima Μ., Iohara K., Murakami Μ., Nakamura Η., Sato Υ., Ariji Υ., Matsushita Κ.: Pulp regeneration by transplantation of dental pulp stem cells in pulpitis: A pilot clinical study. Stem Cell Res Therapy. 8 (1): 61, 2017.
Непатентный документ 2: Galler KM.: Clinical procedures for revitalization: current knowledge and considerations. Int Endod J. 2016 Oct; 49 (10): 926-36.
Непатентный документ 3: Kontakiotis EG, Filippatos CG, Tzanetakis GN, Agrafioti Α.: Regenerative endodontic therapy: a data analysis of clinical protocols. J Endod. 41 (2): 146-54. 2015.
Непатентный документ 4: Del Fabbro M, Lolato A, Bucchi C, Taschieri S, Weinstein RL: Autologous platelet concentrates for pulp and dentin regeneration: a literature review of animal studies. J Endod. 42 (2): 250-7, 2016.
Непатентный документ 5: Yang J., Yuan G., Chen Z.: Pulp Regeneration: Current Approaches and Future Challenges. Front Physiol.: 7: 58, 2016.
Непатентный документ 6: He L, Kim SG, Gong Q, Zhong J, Wang S, Zhou X, Ye L, Ling J, Mao JJ.: Regenerative endodontics for adult patients. J Endod. 43 (9S): S57-S64, 2017.
Непатентный документ 7: Iohara K, Murakami Μ, Takeuchi Ν, Osako Y, Ito M, Ishizaka R, Utunomiya S, Nakamura H, Matsushita K, Nakashima M.: A novel combinatorial therapy with pulp stem cells and granulocyte colony-stimulating factor for total pulp regeneration. Stem Cells Transl. Med. 2 (7): 521-533, 2013.
Непатентный документ 8: Cao Y, Song M, Kim E, Shon W, Chugal N, Bogen G, Lin L, Kim RH, Park NH, Kang MK.: Pulp-dentin Regeneration: Current State and Future Prospects. J Dent Res. 94 (11): 1544-51, 2015.
Непатентный документ 9: Yang J, Yuan G, Chen Z.: Pulp Regeneration: Current Approaches and Future Challenges. Front Physiol. 7: 58, 2016. eCollection 2016.
Непатентный документ 10: Kawamura R, Hayashi Y, Murakami H, Nakashima M.: EDTA soluble chemical components and the conditioned medium from mobilized dental pulp stem cells contain an inductive microenvironment, promoting cell proliferation, migration and odontoblastic differentiation. Stem Cell Res. Ther. 7 (1): 77, 2016.
Непатентный документ 11: The Japanese journal of dermatology and venereology: official organ of the Japanese Dermatological Association, Vol.64, Yoshikuni Noguchi, et al., p.497-506, 1954.
Краткое раскрытие настоящего изобретения
Решаемая техническая задача
[0012] Настоящее изобретение создано в свете проблем, описанных выше. Задача настоящего изобретения состоит в обеспечении неклеточного наполнителя корневого канала, который способен эффективно регенерировать ткани зуба без трансплантации аутологичных или аллогенных стволовых клеток или компонентов, происходящих из стволовых клеток (внеклеточно секретируемых белков и экзосом, и т.д.) при проведении регенерации тканей зуба. Другая задача настоящего изобретения состоит в обеспечении неклеточного набора, стимулирующего регенерацию тканей зуба, в котором применяется неклеточный наполнитель корневого канала.
Решение задачи
[0013] Авторы настоящего изобретения провели фундаментальные исследования и в качестве результата обнаружили тетрагидроизохинолиновое соединение, которое стимулирует регенерацию тканей зуба.
[0014] Согласно одному варианту осуществления настоящее изобретение в частности относится к неклеточному наполнителю корневого канала, содержащему тетрагидроизохинолиновое соединение, представленное следующей формулой (1):
[Формула 1]
где
R1, R2, R3 и R4 каждый независимо представляет собой -Н, -галоген, замещенный или незамещенный C1-6 алкил, -ОН, -O-C1-6 алкил, -SH, -S-C1-6 алкил, -СООН, -CO-G1-6 алкил, -CO-O-C1-6 алкил, -CO-NH-C1-6 алкил, -NO2, -NH2, -NH-C1-6 алкил, -N(C1-6 алкил)2 или -NH-CO-C1-6 алкил,
R5 представляет собой замещенный или незамещенный C1-6 алкил, замещенный или незамещенный С3-10 циклоалкил, замещенный или незамещенный С6-14 арил, -C1-6 алкилен-замещенный или незамещенный С3-10 циклоалкил или -C1-6 алкилен-замещенный или незамещенный С6-14 арил,
R6 представляет собой -Н, замещенный или незамещенный -C1-6 алкил или -Υ'-Α',
X представляет собой C1-6 алкилен,
Υ и Y' каждый независимо представляет собой простую связь или C1-6 алкилен,
А и А' каждый независимо представляет собой замещенный или незамещенный С6-14 арил или замещенную или незамещенную 3-15-ти членную гетероциклическую группу, и
n представляет собой 0 или 1,
или его фармацевтически приемлемую соль или его сольват.
[0015] Неклеточный наполнитель корневого канала предпочтительно содержит (+)-4-[[2-[6-фтор-3-(4-фторбензил)-3,4-дигидроизохинолин-2(1Н)-ил]этиламино]метил]-N-изопропиланилина монофумарат или (+)-N-[3-(метансульфониламино)бензил]-2-[б-фтор-3-(4-фторбензил)-3,4-дигидроизохинолин-2(1Н)-ил]этанамина моноцитрат.
[0016] Неклеточный наполнитель корневого канала может дополнительно содержать внеклеточный матрикс.
[0017] Неклеточный наполнитель корневого канала может дополнительно содержать анти-CCL11 нейтрализующее антитело и/или ингибитор ALK5.
[0018] Неклеточный наполнитель корневого канала может дополнительно содержать по меньшей мере один хемотаксический фактор, выбранный из группы, состоящей из G-CSF, bFGF и SDF-1.
[0019] Неклеточный наполнитель корневого канала можно применять для регенерации тканей зуба у субъекта молодого возраста или субъектов среднего и пожилого возраста, предпочтительно у субъекта молодого возраста.
[0020] Согласно одному варианту осуществления настоящее изобретение также относится к набору, стимулирующему регенерацию тканей зуба, содержащему средство предварительной обработки, содержащее сериновую протеазу, и неклеточный наполнитель корневого канала.
[0021] Набор, стимулирующий регенерацию тканей зуба, предпочтительно применяют для регенерации тканей зуба у субъектов среднего и пожилого возраста.
[0022] Сериновая протеаза предпочтительно представляет собой химотрипсиноподобную сериновую протеазу, более предпочтительно трипсин.
Полезные эффекты настоящего изобретения
[0023] Неклеточный наполнитель корневого канала и набор, стимулирующий регенерацию тканей зуба, согласно настоящему изобретению способны эффективно регенерировать ткани зуба без необходимости трансплантации аутологичных или аллогенных стволовых клеток зубной пульпы или ее происходящих из стволовых клеток компонентов и, таким образом, являются полезными.
Краткое описание чертежей
[0024]
[Фиг. 1] На Фиг. 1 показаны результаты сравнения неклеточного набора, стимулирующего регенерацию зубной пульпы, с применением соединения В с неклеточным набором, стимулирующим регенерацию зубной пульпы, с применением SB 328437. На Фиг. 1А показано изображение окрашивания НЕ среза ткани зуба, обработанного неклеточным набором, стимулирующим регенерацию зубной пульпы, с применением соединения В. На Фиг. 1В показано изображение (высокое разрешение) окрашивания НЕ среза ткани зуба, обработанного неклеточным набором, стимулирующим регенерацию зубной пульпы, с применением соединения В. На Фиг. 1С показано изображение окрашивания НЕ среза ткани зуба, обработанного неклеточным набором, стимулирующим регенерацию зубной пульпы, с применением SB 328437. На Фиг. 1D показано изображение (высокое разрешение) окрашивания НЕ среза ткани зуба, обработанного неклеточным набором, стимулирующим регенерацию зубной пульпы, с применением SB 328437. На Фиг. 1Е приведен график, показывающий результаты количественного анализа количеств зубной пульпы, регенерированных неклеточным набором, стимулирующим регенерацию зубной пульпы, с применением соединения В и неклеточным набором, стимулирующим регенерацию зубной пульпы, с применением SB 328437.
[Фиг.2] На Фиг. 2 показаны результаты сравнения неклеточного набора, стимулирующего регенерацию зубной пульпы, с применением соединения В с неклеточным набором, стимулирующим регенерацию зубной пульпы, с применением SB 328437. На Фиг. 2А показано изображение окрашивания лектином среза ткани зуба, обработанного неклеточным набором, стимулирующим регенерацию зубной пульпы, с применением соединения В. На Фиг. 2В показано изображение окрашивания лектином среза ткани зуба, обработанного неклеточным набором, стимулирующим регенерацию зубной пульпы, с применением SB 328437. На Фиг. 2С показано изображение иммуноокрашивания с PGP9.5 среза ткани зуба, обработанного неклеточным набором, стимулирующим регенерацию зубной пульпы, с применением соединения В. На Фиг. 2D показано изображение иммуноокрашивания с PGP9.5 среза ткани зуба, обработанного неклеточным набором, стимулирующим регенерацию зубной пульпы, с применением SB 328437.
[Фиг.3] На Фиг. 3 показаны результаты сравнения неклеточного набора, стимулирующего регенерацию зубной пульпы, с применением соединения В с неклеточным набором, стимулирующим регенерацию зубной пульпы, без применения соединения В. На Фиг. 3А показано изображение окрашивания НЕ среза ткани зуба, обработанного неклеточным набором, стимулирующим регенерацию зубной пульпы, с применением соединения В. На Фиг. 3В показано изображение (высокое разрешение) окрашивания НЕ среза ткани зуба, обработанного неклеточным набором, стимулирующим регенерацию зубной пульпы, с применением соединения В. На Фиг. 3С показано изображение окрашивания НЕ среза ткани зуба, обработанного неклеточным набором, стимулирующим регенерацию зубной пульпы, без применения соединения В. На Фиг. 3D показано изображение (высокое разрешение) окрашивания НЕ среза ткани зуба, обработанного неклеточным набором, стимулирующим регенерацию зубной пульпы, без применения соединения В. На Фиг. 3Е приведен график, показывающий результаты количественного анализа количеств зубной пульпы, регенерированных неклеточным набором, стимулирующим регенерацию зубной пульпы, с применением соединения В и неклеточным набором, стимулирующим регенерацию зубной пульпы, без применения соединения В.
[Фиг.4] На Фиг. 4 показаны результаты сравнения неклеточного набора, стимулирующего регенерацию зубной пульпы, с применением соединения В с неклеточным набором, стимулирующим регенерацию зубной пульпы, без применения соединения В. На Фиг. 4А показано изображение окрашивания лектином среза ткани зуба, обработанного неклеточным набором, стимулирующим регенерацию зубной пульпы, с применением соединения В. На Фиг. 4 В показано изображение окрашивания лектином среза ткани зуба, обработанного неклеточным набором, стимулирующим регенерацию зубной пульпы, без применения соединения В. На Фиг. 4С показано изображение иммуноокрашивания с PGP9.5 среза ткани зуба, обработанного неклеточным набором, стимулирующим регенерацию зубной пульпы, с применением соединения В. На Фиг. 4D показано изображение иммуноокрашивания с PGP9.5 среза ткани зуба, обработанного неклеточным набором, стимулирующим регенерацию зубной пульпы, без применения соединения В.
[Фиг.5] На Фиг. 5 показаны результаты сравнения эффекта неклеточного наполнителя корневого канала с применением соединения В с предварительной обработкой трипсином и без нее. На Фиг. 5А показано изображение окрашивания НЕ среза ткани зуба с предварительной обработкой трипсином. На Фиг. 5В показано изображение (высокое разрешение) окрашивания НЕ среза ткани зуба с предварительной обработкой трипсином. На Фиг. 5С показано изображение окрашивания НЕ среза ткани зуба без предварительной обработки трипсином. На Фиг. 5D показано изображение (высокое разрешение) окрашивания НЕ среза ткани зуба без предварительной обработки трипсином. На Фиг. 5Е приведен график, показывающий результаты количественного анализа количеств зубной пульпы, регенерированных неклеточным наполнителем корневого канала с применением соединения В, с предварительной обработкой трипсином или без нее.
[Фиг.6] На Фиг. 6 показаны результаты сравнения эффекта неклеточного наполнителя корневого канала с применением соединения В с предварительной обработкой трипсином или без нее. На Фиг. 6А показано изображение окрашивания лектином среза ткани зуба, обработанного неклеточным набором, стимулирующим регенерацию зубной пульпы, с предварительной обработкой трипсином. На Фиг. 6В показано изображение окрашивания лектином среза ткани зуба, обработанного неклеточным набором, стимулирующим регенерацию зубной пульпы без предварительной обработки трипсином. На Фиг. 6С показано изображение иммуноокрашивания с PGP9.5 среза ткани зуба с предварительной обработкой трипсином. На Фиг. 6D показано изображение иммуноокрашивания с PGP9.5 среза ткани зуба без предварительной обработки трипсином.
[Фиг.7] На Фиг. 7 показаны результаты сравнения неклеточного набора, стимулирующего регенерацию зубной пульпы с применением соединения С с неклеточным набором, стимулирующим регенерацию зубной пульпы, без применения соединения С.На Фиг. 7А показано изображение окрашивания НЕ среза ткани зуба, обработанного неклеточным набором, стимулирующим регенерацию зубной пульпы, с применением соединения С.На Фиг. 7 В показано изображение (высокое разрешение) окрашивания НЕ среза ткани зуба, обработанного неклеточным набором, стимулирующим регенерацию зубной пульпы, с применением соединения С. На Фиг. 7С показано изображение окрашивания НЕ среза ткани зуба, обработанного неклеточным набором, стимулирующим регенерацию зубной пульпы, без применения соединения С. На Фиг. 7D показано изображение (высокое разрешение) окрашивания НЕ среза ткани зуба, обработанного неклеточным набором, стимулирующим регенерацию зубной пульпы, без применения соединения С. На Фиг. 7Е приведен график, показывающий результаты количественного анализа регенерации тканей зуба неклеточным набором, стимулирующим регенерацию зубной пульпы, с применением соединения С и неклеточным набором, стимулирующим регенерацию зубной пульпы, без применения соединения С на основе площади дентина. На Фиг. 7F приведен график, показывающий результаты количественного анализа регенерации тканей зуба неклеточным набором, стимулирующим регенерацию зубной пульпы, с применением соединения С и неклеточным набором, стимулирующим регенерацию зубной пульпы, без применения соединения С на основе плотности одонтобластов.
Описание вариантов осуществления
[0025] Далее настоящее изобретение описано более подробно. Однако настоящее изобретение не ограничено вариантами осуществления, раскрытыми в описании настоящего изобретения.
[0026] Согласно первому варианту осуществления настоящее изобретение относится к неклеточному наполнителю корневого канала, содержащему тетрагидроизохинолиновое соединение, представленное формулой (1):
[Формула 2]
где
R1, R2, R3 и R4 каждый независимо представляет собой -Н, -галоген, замещенный или незамещенный C1-6 алкил, -ОН, -O-C1-6 алкил, -SH, -S-C1-6 алкил, -СООН, -CO-C1-6 алкил, -CO-O-C1-6 алкил, -CO-NH-C1-6 алкил, -NO2, -NH2, -NH-C1-6 алкил, -N(C1-6 алкил)2 или -NH-CO-C1-6 алкил,
R5 представляет собой замещенный или незамещенный C1-6 алкил, замещенный или незамещенный С3-10 циклоалкил, замещенный или незамещенный С6-14 арил, -C1-6 алкилен-замещенный или незамещенный С3-10 циклоалкил или -C1-6 алкилен-замещенный или незамещенный C6-14 арил,
R6 представляет собой -Н, замещенный или незамещенный -C1-6 алкил или -Υ'-Α',
X представляет собой C1-6 алкилен,
Υ и Υ' каждый независимо представляет собой простую связь или C1-6 алкилен,
А и А' каждый независимо представляет собой замещенный или незамещенный C6-14 арил или замещенную или незамещенную 3-15-ти членную гетероциклическую группу, и
n представляет собой 0 или 1,
или его фармацевтически приемлемую соль или его сольват (далее упоминаемое в описании настоящего изобретения как «группа соединений А»).
[0027] Термин «неклеточный» означает, что клетки или происходящие из клеток компоненты (например, внеклеточно секретируемые белки и экзосомы) не включены. Термин «корневой канал» относится к каналу в корневой части зуба, в котором находится зубная пульпа.
[0028] Неклеточный наполнитель корневого канала согласно варианту осуществления настоящего изобретения может содержать только одно соединение или смесь двух или более соединений, выбранных из группы соединений А, в качестве активного ингредиента. Соединением группы соединений А является антагонист CCR3, который оказывает эффект ингибирования связывания CCL11 с CCR3 посредством связывания с CCR3 и может подавлять сигнальную трансдукцию CCL11.
[0029] Соединение группы соединений А, применяемое в варианте осуществления настоящего изобретения, предпочтительно представляет собой N-[3-(метансульфониламино)бензил]-2-[6-фтор-3-(4-фторбензил)-3,4-дигидроизохинолин-2(1Н)-ил]этанамин (Пример 126 в WO 2008/123582, согласно формуле (2)), 4-[[2-[6-фтор-3-(4-фторбензил)-3,4-дигидроизохинолин-2(1Н)-ил]этиламино]метил]-N-изопропиланилин (Пример 138 в WO 2008/123582, согласно формуле (3)), 4-[[2-[6-фтор-3-(4-фторбензил)-3,4-дигидроизохинолин-2(1Н)-ил]этиламино]метил]-N-(2-метоксиэтил)анилин (Пример 150 в WO 2008/123582, согласно формуле (4)) или N-(пиридин-4-ил)метил-2-[6-фтор-3-(4-фторбензил)-3,4-дигидроизохинолин-2(1Н)-ил]этанамин (Пример 180 в WO 2008/123582, согласно формуле (5)), или их фармацевтически приемлемую соль.
[0030]
[Формула 3]
[0031] Соединение группы соединений А, применяемое в варианте осуществления настоящего изобретения, особенно предпочтительно представляет собой (+)-4-[[2-[6-фтор-3-(4-фторбензил)-3,4-дигидроизохинолин-2(1Н)-ил]этиламино]метил]-N-изопропиланилина монофумарат (раскрыт в JP 2009-173571 А, фумарат формулы (3), также упоминаемый как «соединение В» в описании настоящего изобретения) или (+)-N-[3-(метансульфониламино)бензил]-2-[6-фтор-3-(4-фторбензил)-3,4-дигидроизохинолин-2(1Н)-ил]этанамина моноцитрат (раскрыт в JP 2009-191048 А, цитрат формулы (2), также упоминаемый как «соединение С» в описании настоящего изобретения).
[0032] Соединение группы соединений А может быть получено путем соответствующего комбинирования способа химического синтеза, описанного в WO 2008/123582, и эквивалентного ему способа химического синтеза с различными традиционными способами, известными в данной области техники.
[0033] Неклеточный наполнитель корневого канала согласно варианту осуществления настоящего изобретения может состоять только из активного ингредиента и может дополнительно содержать внеклеточный матрикс, анти-CCL11 нейтрализующее антитело и/или ингибитор ALK5, и/или по меньшей мере один хемотаксический фактор, выбранный из группы, состоящей из G-CSF, bFGF и SDF-1, в качестве необязательного компонента.
[0034] Примеры внеклеточного матрикса, который может применяться в неклеточном наполнителе корневого канала согласно варианту осуществления настоящего изобретения, включают без ограничения коллаген, искусственный протеогликан, желатин, гидрогель, фибрин, фосфофорин, гепарансульфат, гепарин, ламинин, фибронектин, альгиновую кислоту, гиалуроновую кислоту, хитин, хитозан, PLA, PLGA, PEG, PGA, PDLLA, PCL, гидроксиапатит, β-TCP и карбонат кальция. В качестве альтернативы внеклеточный матрикс может применяться в форме покрытия на металлической подложке, такой как золото или титан.
[0035] Анти-CCL11 нейтрализующее антитело, которое можно применять в неклеточном наполнителе корневого канала согласно варианту осуществления настоящего изобретения, может представлять собой любое антитело, известное в данной области техники. Анти-CCL11 нейтрализующее антитело обладает эффектом ингибирования связывания CCL11 с CCR3 посредством связывания с CCL11 и может подавлять сигнальную трансдукцию CCL11. Анти-CCL11 нейтрализующее антитело является коммерчески доступным, и такой коммерчески доступный продукт можно применять в варианте осуществления настоящего изобретения.
[0036] Ингибитор ALK5, который можно применять в неклеточном наполнителе корневого канала согласно варианту осуществления настоящего изобретения, может представлять собой любое соединение, известное в данной области техники, которое ингибирует сигнальную трансдукцию GDF11. Различные ингибиторы ALK5 являются коммерчески доступными, и такой коммерчески доступный продукт можно применять в варианте осуществления настоящего изобретения. Примеры ингибитора ALK5 согласно варианту осуществления настоящего изобретения включают без ограничения любое из следующих соединений.
[0037]
[Формула 4]
[Формула 5]
[Формула 6]
[0038] Примеры хемотаксического фактора, который можно применять в неклеточном наполнителе корневого канала согласно варианту осуществления настоящего изобретения, включают без ограничения G-CSF, SDF-1, bFGF, TGF- β, NGF, PDGF, BDNF, GDNF, EGF, VEGF, SCF, ММР3, Slit, GM-CSF, LIF и HGF. Можно применять только один хемотаксический фактор или комбинации двух или более хемотаксических факторов, выбранных из них. Хемотаксический фактор может способствовать хемотаксической активности стволовых клеток, окружающих ткани зуба. Хемотаксический фактор, который можно применять в варианте осуществления настоящего изобретения, предпочтительно выбран из группы, состоящей из G-CSF, bFGF и SDF-1. Все из этих хемотаксических факторов являются коммерчески доступными, и такой коммерчески доступный продукт можно применять в варианте осуществления настоящего изобретения.
[0039] В неклеточном наполнителе корневого канала согласно варианту осуществления настоящего изобретения содержание каждого из компонентов может лежать в диапазоне, например, от 50 нг/мл до 200 мкг/мл, и предпочтительно составляет от 3 мкг/мл до 100 мкг/мл. Соотношение в смеси между активным ингредиентом (соединение группы соединений А) и дополнительными необязательными компонентами не ограничено конкретным образом и может составлять, например, от 10 мас. %: 90 мас. % до 90 мас. %: 10 мас. %. Неклеточный наполнитель корневого канала согласно варианту осуществления настоящего изобретения может быть получен из компонентов, надлежащим образом объединенных с фармацевтически приемлемым разбавителем, носителем, вспомогательным веществом или подобным веществом, известным в данной области техники, при необходимости.
[0040] Неклеточный наполнитель корневого канала согласно варианту осуществления настоящего изобретения является применимым как для субъектов молодого возраста, так и для субъектов среднего и пожилого возраста, и его предпочтительно применяют для субъекта молодого возраста. В этом контексте субъект молодого возраста не ограничен конкретным образом и представляет собой, например, человека в возрасте 1 года или старше и в возрасте 29 лет или младше, крысу в возрасте 1 недели или старше и в возрасте 29 недель или младше, или собаку в возрасте 1 недели или старше и в возрасте 1 года или младше.
[0041] Неклеточный наполнитель корневого канала согласно варианту осуществления настоящего изобретения можно применять посредством введения в корневой канал, как в случае обычных наполнителей зубного корневого канала, известных в данной области техники.
[0042] Согласно второму варианту осуществления настоящее изобретение относится к набору, стимулирующему регенерацию тканей зуба, содержащему средство предварительной обработки, содержащее сериновую протеазу, и неклеточный наполнитель корневого канала.
[0043] В контексте варианта осуществления настоящего изобретения термин «ткань зуба» означает ткань, которая охватывает по меньшей мере одно из зубной пульпы, дентина и периапикальных тканей.
[0044] Согласно варианту осуществления настоящего изобретения «средство предварительной обработки» применяют перед вставкой неклеточного наполнителя корневого канала в корневой канал. Он может расщеплять фактор, ингибирующий регенерацию ткани, в тканях зуба и корневых оболочках и/или превращать латентную форму хемотаксического фактора или фактора, усиливающего дифференциацию, в активную форму.
[0045] Средство предварительной обработки, применяемое в наборе согласно варианту осуществления, представляет собой протеазу (протеолитический фермент), имеющую сериновый остаток, который осуществляет нуклеофильную атаку в качестве каталитического остатка. Сериновая протеаза классифицируется на субтилизиноподобную сериновую протеазу и химотрипсиноподобную сериновую протеазу по подобию в аминокислотной последовательности или конформации. Первая включает субтилизин ΒΡΝ', термитазу, протеиназу К, лантибиотическую пептидазу, кексин, кукумизин и тому подобное, а вторая включает трипсин, химотрипсин, тромбин, фактор Ха, эластазу и тому подобное. Сериновая протеаза, которую можно применять в варианте осуществления настоящего изобретения, может представлять собой только один фермент или комбинацию двух или более ферментов, выбранных из них, и предпочтительно представляет собой химотрипсиноподобную сериновую протеазу, более предпочтительно трипсин.
[0046] Концентрация сериновой протеазы в средстве предварительной обработки, применяемом в наборе согласно варианту осуществления настоящего изобретения, не ограничена конкретным образом до тех пор, пока сериновая протеаза при этой концентрации может расщеплять фактор, ингибирующий регенерацию ткани, в тканях зуба и тканях корневой оболочки и/или преобразовывать латентную форму хемотаксического фактора или фактора, усиливающего дифференциацию, в активную форму. Концентрация может составлять, например, от 10 мкг/мл (0,001%) до 50 мг/мл (5%) и предпочтительно от 500 мкг/мл (0,05%) до 5 мг/мл (0,5%).
[0047] Средство предварительной обработки, применяемое в варианте осуществления настоящего изобретения, может дополнительно содержать нанопузырьки. В контексте настоящего изобретения «нанопузырек» относится к пузырьку воздуха, имеющему диаметр, измеряемый в нанометрах, или липидной везикуле, содержащей газ или предшественник газа в ее полости и имеющей диаметр, измеряемый в нанометрах. Диаметр нанопузырька, применяемого в средстве предварительной обработки в наборе согласно варианту осуществления настоящего изобретения, составляет, например, от 10 до 500 нм, предпочтительно от 70 до 300 нм. Диаметр нанопузырька может быть измерен с помощью, например, устройства для измерения распределения наночастиц (SALD-7100, Shimadzu Corp.). Липидный состав, заряженное состояние, плотность, массу и т.д. нанопузырька можно определить надлежащим образом. Липид для применения для получения нанопузырьков не ограничен конкретным образом и может представлять собой, например, фосфолипид, глицерогликолипид и/или сфингогликолипид, или может представлять собой катионный липид, содержащий первичную аминогруппу, вторичную аминогруппу, третичную аминогруппу или группу четвертичного аммония, введенную в такой липид. Концентрация нанопузырьков в средстве предварительной обработки не ограничена конкретным образом и может составлять, например, от 2×107 нанопузырьков/см3 до 2×109 нанопузырьков/см3. Концентрация нанопузырьков может быть количественно проанализирована посредством, например, электронного спинового резонанса (ESR).
[0048] Предварительную обработку можно проводить посредством введения средства предварительной обработки в корневой канал. Время предварительной обработки может быть определено надлежащим образом в соответствии с типом и концентрацией подлежащей применению сериновой протеазы. Время предварительной обработки может составлять, например, от 3 до 30 минут, предпочтительно составляет от 5 до 20 минут и более предпочтительно составляет 10 минут.
[0049] Набор согласно варианту осуществления настоящего изобретения может дополнительно содержать дополнительный буферный раствор, реагент, инструкцию и тому подобное, в дополнение к средству предварительной обработки и неклеточному наполнителю корневого канала.
[0050] Набор согласно варианту осуществления настоящего изобретения является применимым как для субъектов молодого возраста, так и для субъектов среднего и пожилого возраста, и предпочтительно применяется для субъектов среднего и пожилого возраста. В контексте настоящего изобретения субъект среднего возраста не ограничен конкретным образом и может представлять собой, например, человека в возрасте 30 лет или старше и в возрасте 49 лет или младше, крысу в возрасте 30 недель или старше и 39 недель или младше, собаку в возрасте 2 лет или старше или в возрасте 4 лет или младше. Субъект старшего возраста не ограничен конкретным образом и может представлять собой, например, человека в возрасте 50 лет или старше, крысу в возрасте 40 недель или старше, или собаку в возрасте 5 лет или старше. Таким образом, набор согласно варианту осуществления настоящего изобретения предпочтительно применяют для субъекта, которым является человек в возрасте 30 лет или старше, крыса в возрасте 30 недель или старше, или собака в возрасте 2 лет или старше.
Примеры
[0051] Далее настоящее изобретение описано со ссылкой на Примеры. Однако настоящее изобретение никоим образом не ограничено этими примерами.
[0052] Пример 1. Регенерация зубной пульпы после пульпэктомии у собак молодого возраста
После общей анестезии проводили пульпэктомию в отношении верхних и нижних правых и левых передних зубов у собак молодого возраста (в возрасте 12-ти месяцев). Отверстия удлиняли до верхушки корня зуба с применением №55, затем промывали альтернативно 5% раствором гипохлорита натрия и 3% раствором пероксида водорода, далее промывали солевым раствором, сушили, а затем временно полностью запечатывали смолой. Через от 3 до 12 дней после пульпэктомии временные пломбы удаляли, и отверстия промывали альтернативно и снова промывали солевым раствором. Затем корневые каналы заполняли 3% EDTA (Smear Clean, Nippon Shika Yakuhin Co., Ltd.), обрабатывали в течение 2 минут, далее промывали солевым раствором и сушили. Затем корневые каналы предварительно обрабатывали с применением препарата трипсина (5 мг порошка Francetin Τ (2500 USP кристаллического трипсина на 10 мг, Mochida Pharmaceutical Co., Ltd.) /мл 0,5% воды с нанопузырьками (полученной с помощью Foamest 8 (NAC Corp.); см. Koichiro Iohara and Misako Nakajima "Enhanced Delivery of Antibacterial Nanopolymers with Nanobubbles for the Complete Disinfection of the Root Canal System in a Canine Model of Intractable Periapical Disease", The Japanese Journal Of Conservative Dentistry, Vol.63, No. 1, p.73-82) в течение 10 минут, и затем промывали солевым раствором. Затем антагонист CCR3 (1,25 мкг соединения В или 0,83 мкг SB328437 (Tocris Bioscience)) в качестве соединения, стимулирующего регенерацию, и 150 нг G-CSF (Neutrogin, Chugai Pharmaceutical Co., Ltd.) в качестве хемотаксического фактора добавляли к 20 мкл коллагена внеклеточного матрикса (Koken Atelocollagen Implant, Koken Co., Ltd.) с получением неклеточного наполнителя корневого канала, который затем заполняли в корневые каналы. Затем на него помещали желатиновую губку для гемостаза (Spongel, Astellas Pharma Inc.) и полости полностью герметизировали стеклоиономерным цементом и фотополимеризуемой смолой. Затем через 28 дней после трансплантации зубы удаляли и получали парафиновые срезы размером 5 мкм на продольных срезах в соответствии со стандартным методом, окрашивали Н-Е и затем подвергали морфологическому исследованию. Количество регенерированной зубной пульпы оценивали посредством измерения соотношения площади регенерированной зубной пульпы и площади полости зубной пульпы по четырем срезам на образец и вычисления среднего значения для четырех примеров. Ангиогенез оценивали путем окрашивания образцов на 28 день с помощью меченного флуоресцеином Лектина I из Griffonia simplicifolia (Bandeiraea simplicifolia) (GSL I, BSL I) и меченного флуоресцеином Лектина из Galanthus Nivalis (Snowdrop) (GNL) (Vector Laboratories) (20 мкг/мл) в течение 15 минут с последующим сравнительным исследованием. Распространение нейритов оценивали путем иммуноокрашивания образцов на 28-й день анти-PGP9.5 антителом (UltraClone, 1: 10000) с последующим сравнительным исследованием.
[0053] Результаты показаны на Фиг. 1 и 2. Неклеточные наполнители корневого канала, содержащие SB328437 или соединение В в качестве антагониста CCR3, как было обнаружено, вызывают регенерацию зубной пульпы рыхлой соединительной ткани, обогащенной кровеносными сосудами, тогда как не наблюдалось ни инфильтрации, ни внутренней абсорбции воспалительных клеток (Фиг. 1A-1D). Соотношение регенерированной зубной пульпы и полости зубной пульпы показано на Фиг. 1Е. Не наблюдалось статистически значимой разницы в количестве регенерированной зубной пульпы между неклеточными наполнителями корневого канала, содержащими SB328437 или соединение В в качестве антагониста CCR3 (Фиг. 1Е). Ангиогенез (фиг. 2А и 2В) и распространение нейритов (Фиг. 2С и 2D) были подтверждены для обоих неклеточных наполнителей корневого канала, содержащих SB328437 или соединение В в качестве антагониста CCR3, демонстрируя, что одонтобластоподобные клетки прикрепляются к боковой стенке дентина с образованием дентиноподобных твердых тканей.
[0054] Пример 2. Сравнение регенерации зубной пульпы после пульпэктомии у собак молодого возраста в присутствии и в отсутствии соединения В
После общей анестезии проводили пульпэктомию в отношении верхних и нижних правых и левых передних зубов у собак молодого возраста (в возрасте 11 месяцев). Отверстия удлиняли до верхушки корня зуба с применением №55, затем промывали альтернативно 5% раствором гипохлорита натрия и 3% раствором пероксида водорода, и затем промывали солевым раствором. Корневые каналы тщательно сушили бумажным штифтом и временно полностью герметизировали цементом и смолой после гемостаза. Затем через 8 дней после пульпэктомии временные пломбы удаляли, и отверстия промывали альтернативно и снова промывали солевым раствором. Затем корневые каналы заполняли 3% EDTA (Smear Clean, Nippon Shika Yakuhin Co., Ltd.), обрабатывали в течение 2 минут, далее промывали солевым раствором и сушили. Затем корневые каналы предварительно обрабатывали посредством применения препарата трипсина (5 мг порошка Francetin Τ (2500 USP кристаллического трипсина на 10 мг, Mochida Pharmaceutical Co., Ltd.)/мл 0,5% воды с нанопузырьками (полученной с помощью Foamest 8 (NAC Corp.), как описано в Примере 1)) в течение 10 минут, а затем промывали солевым раствором. Затем 1,25 мкг соединения В в качестве соединения, стимулирующего регенерацию, и 150 нг G-CSF (Neutrogin, Chugai Pharmaceutical Co., Ltd.) в качестве хемотаксического фактора добавляли к 20 мкл коллагена внеклеточного матрикса (Koken Atelocollagen Implant, Koken Co., Ltd.) с получением неклеточного наполнителя корневого канала, который затем заполняли в корневые каналы. С другой стороны, неклеточный наполнитель корневого канала, имеющий такой же состав как описано выше, за исключением отсутствия соединения В, заполняли в корневые каналы посредством тех же методик, как описано выше, и применяли в качестве контроля. Затем на них помещали желатиновую губку для гемостаза (Spongel, Astellas Pharma Inc.) и полости полностью герметизировали стеклоиономерным цементом и фотополимеризуемой смолой. Затем через 28 дней после трансплантации зубы удаляли и получали парафиновые срезы размером 5 мкм на продольных срезах в соответствии со стандартным методом, окрашивали Н-Е и затем подвергали морфологическому исследованию таким же образом, как в Примере 1. Ангиогенез и распространение нейритов подтверждали посредством окрашивания лектином BS-1 и иммуноокрашивания с PGP9.5, соответственно, таким же образом, как в примере 1.
[0055] Результаты показаны на Фиг. 3 и 4. Обработка неклеточным наполнителем корневого канала, содержащим соединение В, как было обнаружено, регенерирует ткани, подобные зубной пульпе, в достаточной степени (Фиг. 3А и 3В), тогда как обработка неклеточным наполнителем корневого канала, не содержащим соединение В, как было обнаружено, регенерирует такие ткани только в очень небольшом количестве (Фиг. 3С и 3D). Между ними наблюдалось статистически значимое различие в количестве регенерированной зубной пульпы (Фиг. 3Е). С другой стороны, в обоих случаях наблюдали подобный ангиогенез (Фиг. 4А и 4В) и распространение нейритов (Фиг. 4С и 4D). Эти результаты указывают на то, что соединение В является эффективным компонентом для регенерации тканей зубной пульпы.
[0056] Пример 3. Сравнение регенерации зубной пульпы после пульпэктомии ν собак молодого возраста в присутствии и в отсутствии предварительной обработки трипсином
После общей анестезии проводили пульпэктомию в отношении верхних и нижних правых и левых передних зубов у собак молодого возраста (в возрасте 11 месяцев). Отверстия удлиняли до верхушки корня зуба с применением №50, затем промывали альтернативно 5% раствором гипохлорита натрия и 3% раствором пероксида водорода и далее промывали солевым раствором. Корневые каналы тщательно сушили бумажным штифтом и временно полностью герметизировали цементом и смолой после гемостаза. После пульпэктомии временные пломбы удаляли и отверстия промывали альтернативно и снова промывали солевым раствором. Затем корневые каналы заполняли 3% EDTA (Smear Clean, Nippon Shika Yakuhin Co., Ltd.), обрабатывали в течение 2 минут, далее промывали солевым раствором и сушили. Затем левые корневые каналы предварительно обрабатывали посредством применения препарата трипсина (5 мг порошка Francetin Τ (2500 USP кристаллического трипсина на 10 мг, Mochida Pharmaceutical Co., Ltd.) /мл 0,5% воды с нанопузырьками (полученной с помощью Foamest 8 (NAC Corp.), как описано в Примере 1)) в течение 10 минут, а затем промывали солевым раствором. С другой стороны, правые корневые каналы не подвергали предварительной обработке (контроль). Затем 1,25 мкг соединения В в качестве соединения, стимулирующего регенерацию, и 150 нг G-CSF (Neutrogin, Chugai Pharmaceutical Co., Ltd.) в качестве хемотаксического фактора добавляли к 20 мкл коллагена внеклеточного матрикса (Koken Atelocollagen Implant, Koken Co., Ltd.) с получением неклеточного наполнителя корневого канала, который затем заполняли в правые и левые корневые каналы. Затем на них помещали желатиновую губку для гемостаза (Spongel, Astellas Pharma Inc.) и полости полностью герметизировали стеклоиономерным цементом и фотополимеризуемой смолой. Затем через 28 дней после трансплантации зубы удаляли и получали парафиновые срезы размером 5 мкм на продольных срезах в соответствии со стандартным методом, окрашивали Н-Е, а затем повергали морфологическому исследованию таким же образом, как в примере 1. Ангиогенез и распространение нейритов подтверждали посредством окрашивания лектином BS-1 и иммуноокрашивания с применением PGP9.5, соответственно, таким же образом, как в примере 1.
[0057] Результаты показаны на Фиг. 5 и 6. Регенерация тканей зубной пульпы наблюдалась независимо от того, проводилась предварительная обработка трипсином или нет (Фиг. 5A-5D). Проведенная предварительная обработка трипсином имела тенденцию к небольшому увеличению количества регенерированной зубной пульпы, хотя и без статистически значимой разницы (Фиг. 5Е). Кроме того, проведенная предварительная обработка трипсином имела тенденцию к обеспечению прикрепления большего количества одонтобластоподобных клеток к боковой стенке дентина и образованию дентиноподобных твердых тканей в слегка большем количестве (Фиг. 5А и 5В). Ангиогенез (Фиг. 6А и 6В) и распространение нейритов (Фиг. 6С и 6D) подобным образом наблюдались в этих обоих случаях. Эти результаты продемонстрировали, что введение неклеточного наполнителя корневого канала без предварительной обработки трипсином регенерирует зубную пульпу с ангиогенезом и распространением нейритов и, как и в случае с предварительной обработкой трипсином, позволяет одонтобластоподобным клеткам прикрепляться к боковой стенке дентина, и стимулирует дифференциацию в одонтобласты и образование дентиноподобных твердых тканей.
[0058] Пример 4. Сравнение регенерации зубной пульпы после пульпэктомии у собак молодого возраста в присутствии и в отсутствии соединения С
После общей анестезии проводили пульпэктомию в отношении верхних и нижних правых и левых передних зубов у собак молодого возраста (в возрасте 11 месяцев). Отверстия удлиняли до верхушки корня зуба с применением №60, затем промывали альтернативно 5% раствором гипохлорита натрия и 3% раствором пероксида водорода и далее промывали солевым раствором. Корневые каналы тщательно сушили бумажным штифтом и временно полностью герметизировали цементом и смолой после гемостаза. После пульпэктомии временные пломбы удаляли и отверстия промывали альтернативно и снова промывали солевым раствором. Затем корневые каналы заполняли 3% EDTA (Smear Clean, Nippon Shika Yakuhin Co., Ltd.), обрабатывали в течение 2 минут, далее промывали солевым раствором и сушили. Затем корневые каналы предварительно обрабатывали посредством применения препарата трипсина (5 мг порошка Francetin Τ (2500 USP кристаллического трипсина на 10 мг, Mochida Pharmaceutical Co., Ltd.) /мл 0,5% воды с нанопузырьками (полученной с помощью Foamest 8 (NAC Corp.), как описано в Примере 1)) в течение 10 минут, а затем промывали солевым раствором. Затем 1,2 мкг соединения С в качестве соединения, стимулирующего регенерацию, и 150 нг G-CSF (Neutrogin, Chugai Pharmaceutical Co., Ltd.) в качестве хемотаксического фактора добавляли к 20 мкл коллагена внеклеточного матрикса (Koken Atelocollagen Implant, Koken Co., Ltd.) с получением неклеточного наполнителя корневого канала, который затем заполняли в корневые каналы. С другой стороны, неклеточный наполнитель корневого канала, имеющий такой же состав, за исключением отсутствия соединения С, заполняли в корневые каналы посредством тех же методик, как описано выше, и применяли в качестве контроля. Затем на них помещали желатиновую губку для гемостаза (Spongel, Astellas Pharma Inc.) и полости полностью герметизировали стеклоиономерным цементом и фотополимеризуемой смолой. Затем через 28 дней после трансплантации зубы удаляли и получали парафиновые срезы размером 5 мкм на продольных срезах в соответствии со стандартным методом, окрашивали Н-Е, а затем подвергали морфологическому исследованию таким же образом, как в Примере 1. Площадь дентина оценивали путем измерения соотношения площади дентина к площади зуба по одному срезу на три образца и вычисления среднего значения для трех образцов. Плотность клеток дентина вычисляли путем измерения количества клеток дентина, находящихся в диапазоне 1 мм от боковой стенки корневого канала, по одному срезу на три образца.
[0059] Результаты показаны на Фиг. 7. Обработка неклеточным наполнителем корневого канала, содержащим соединение С, как было обнаружено, регенерирует ткани, подобные зубной пульпе, в достаточной степени (Фиг. 7А и 7В), тогда как обработка неклеточным наполнителем корневого канала, не содержащим соединение С, как было обнаружено, регенерирует такие ткани только в очень небольших количествах (Фиг. 7С и 7D). Обработка неклеточным наполнителем корневого канала, содержащим соединение С, имеет тенденцию к увеличению площади дентина (Фиг. 7Е) и увеличению плотности клеток дентина (Фиг. 7F), по сравнению с обработкой неклеточным наполнителем корневого канала, не содержащим соединение С. Эти результаты указывают на то, что соединение С является эффективным компонентом для регенерации тканей зубной пульпы.
Claims (12)
1. Применение (+)-4-[[2-[6-фтор-3-(4-фторбензил)-3,4-дигидроизохинолин-2(1H)-ил]этиламино]метил]-N-изопропиланилина монофумарата или (+)-N-[3-(метансульфониламино)бензил]-2-[6-фтор-3-(4-фторбензил)-3,4-дигидроизохинолин-(1H)-ил]этанамина моноцитрата для приготовления неклеточного наполнителя корневого канала.
2. Применение по п. 1, где неклеточный наполнитель корневого канала дополнительно содержит внеклеточный матрикс.
3. Применение по п. 1 или 2, где неклеточный наполнитель корневого канала дополнительно содержит анти-CCL11 нейтрализующее антитело и/или ингибитор ALK5.
4. Применение по любому из пп. 1-3, где неклеточный наполнитель корневого канала дополнительно содержит по меньшей мере один хемотаксический фактор, выбранный из группы, состоящей из G-CSF, bFGF и SDF-1.
5. Применение по любому из пп. 1-4, где неклеточный наполнитель корневого канала применяется для регенерации тканей зуба у субъекта молодого возраста.
6. Применение средства предварительной обработки, содержащего сериновую протеазу, и неклеточного наполнителя корневого канала, содержащего (+)-4-[[2-[6-фтор-3-(4-фторбензил)- 3,4-дигидроизохинолин-2(1H)-ил]этиламино]метил]-N-изопропиланилина монофумарат или (+)- N-[3-(метансульфониламино)бензил]-2-[6-фтор-3-(4-фторбензил)-3,4-дигидроизохинолин- 2(1H)-ил]этанамина моноцитрат, для приготовления неклеточного набора, стимулирующего регенерацию тканей зуба.
7. Применение по п. 6, где неклеточный наполнитель корневого канала дополнительно содержит внеклеточный матрикс.
8. Применение по п. 6 или 7, где неклеточный наполнитель корневого канала дополнительно содержит анти-CCL11 нейтрализующее антитело и/или ингибитор ALK5.
9. Применение по любому из пп. 6-8, где неклеточный наполнитель корневого канала дополнительно содержит по меньшей мере один хемотаксический фактор, выбранный из группы, состоящей из G-CSF, bFGF и SDF-1.
10. Применение по любому из пп. 6-9, где сериновая протеаза представляет собой химотрипсиноподобную сериновую протеазу.
11. Применение по любому из пп. 6-10, где химотрипсиноподобная сериновая протеаза представляет собой трипсин.
12. Применение по любому из пп. 6-11 для регенерации тканей зуба у субъекта среднего и пожилого возраста.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2019-062054 | 2019-03-28 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2021127889A RU2021127889A (ru) | 2023-03-23 |
| RU2812019C2 true RU2812019C2 (ru) | 2024-01-22 |
Family
ID=
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2310454C1 (ru) * | 2006-03-09 | 2007-11-20 | Константин Олегович Самойлов | Способ стимулирования дентинобразующей функции пульпы зуба |
| KR20150031210A (ko) * | 2013-09-13 | 2015-03-23 | 서울대학교산학협력단 | 프롤릴 히드록실라아제 저해제 또는 히스톤 탈아세틸라아제 저해제, 및 항생제를 포함하는 치수 재생 치료 또는 치근첨 형성 유도 치료용 약학적 조성물, 및 이를 포함하는 합성고분자 나노섬유메시 |
| WO2017170996A1 (ja) * | 2016-03-31 | 2017-10-05 | 国立研究開発法人国立長寿医療研究センター | 歯科用前処理材及び歯組織再生キット |
| WO2018131003A1 (en) * | 2017-01-16 | 2018-07-19 | Cells For Cells, S.A | Composition comprising a substantially pure population of multipotent stromal cells encapsulated in platelet-poor plasma (ppp) |
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2310454C1 (ru) * | 2006-03-09 | 2007-11-20 | Константин Олегович Самойлов | Способ стимулирования дентинобразующей функции пульпы зуба |
| KR20150031210A (ko) * | 2013-09-13 | 2015-03-23 | 서울대학교산학협력단 | 프롤릴 히드록실라아제 저해제 또는 히스톤 탈아세틸라아제 저해제, 및 항생제를 포함하는 치수 재생 치료 또는 치근첨 형성 유도 치료용 약학적 조성물, 및 이를 포함하는 합성고분자 나노섬유메시 |
| WO2017170996A1 (ja) * | 2016-03-31 | 2017-10-05 | 国立研究開発法人国立長寿医療研究センター | 歯科用前処理材及び歯組織再生キット |
| WO2018131003A1 (en) * | 2017-01-16 | 2018-07-19 | Cells For Cells, S.A | Composition comprising a substantially pure population of multipotent stromal cells encapsulated in platelet-poor plasma (ppp) |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| YANG J. et al. Pulp Regeneration: Current Approaches and Future Challenges. Front Physiol, 2016, V. 7, article 58, [онлайн], [найдено 28.07.2023]. Найдено в PubMed, PMID: PMID: 27014076, doi: 10.3389/fphys.2016.00058. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP2476442B1 (en) | Root canal filler for non-extracted tooth and non-extraction method for regenerating dental tissue | |
| JP5572291B2 (ja) | 歯髄及び／又は象牙質形成促進のための薬剤及びその利用 | |
| El Ashiry et al. | Tissue engineering of necrotic dental pulp of immature teeth with apical periodontitis in dogs: radiographic and histological evaluation | |
| US20160339060A1 (en) | Method and device for bioengineering bone tissue and modulating the homeostasis of osteogenesis | |
| JP5313209B2 (ja) | 歯周病と歯髄疾患の治療剤と治療方法 | |
| JP2020505345A (ja) | 乏血小板血漿（ｐｐｐ）に封入された実質的に純粋な多能性間質細胞集団を含む組成物 | |
| US20220401528A1 (en) | Dental pretreatment material and dental tissue regeneration kit | |
| JP2022116298A (ja) | 非細胞性根管充填材及び非細胞性歯組織再生促進キット | |
| Demirel et al. | Tooth replantation with adipose tissue stem cells and fibrin sealant: microscopic analysis of rat’s teeth | |
| EP3949991A1 (en) | Acellular root canal filler and acellular dental tissue regeneration promoting kit | |
| RU2812019C2 (ru) | Неклеточный наполнитель корневого канала и неклеточный набор, стимулирующий регенерацию тканей зуба | |
| RU2320285C2 (ru) | Способ восстановления кости альвеолярного гребня челюсти и тканей пародонта с редуцированным регенераторным потенциалом | |
| JP5424353B2 (ja) | 硬組織再生治療用組成物 | |
| Keyhan et al. | Regenerative Approaches in Oral and Maxillofacial Surgery | |
| Rubine | Evaluation of Effectiveness of Concentrated Growth Factor with Bovine Porous Bone Mineral as Compared to Bovine Porous Bone Mineral Alone in the Treatment of Intra Bony Defects: A Split Mouth Study | |
| Alqahtani | Decellularized Dental Pulp Extracellular Matrix as a Biological Scaffold for Dental Pulp Regenerative Therapy | |
| Nadra et al. | Platelet-Rich Plasma Lysate-Incorporating Gelatin Hydrogel as a Scaffold for Bone Reconstruction. Bioengineering 2022, 9, 513 | |
| EP3695803A1 (en) | Kit and method for improved bone regeneration | |
| Kaur | Periodontal tissue engineering | |
| Gomes-Filho et al. | PULP-DENTIN COMPLEX | |
| Sun et al. | Platelet-rich preparation may serve as a powerful tool for therapeutic dental pulp regeneration |