RU2811736C1 - New chemical compound that stimulates production of human interferon-beta by activating sting signaling pathway and method of its preparation - Google Patents
New chemical compound that stimulates production of human interferon-beta by activating sting signaling pathway and method of its preparation Download PDFInfo
- Publication number
- RU2811736C1 RU2811736C1 RU2023129160A RU2023129160A RU2811736C1 RU 2811736 C1 RU2811736 C1 RU 2811736C1 RU 2023129160 A RU2023129160 A RU 2023129160A RU 2023129160 A RU2023129160 A RU 2023129160A RU 2811736 C1 RU2811736 C1 RU 2811736C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- beta
- thiophene
- oxobenzo
- dimethoxy
- interferon
- Prior art date
Links
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims abstract description 13
- 101001054334 Homo sapiens Interferon beta Proteins 0.000 title claims abstract description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 title abstract description 6
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 title abstract description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 4
- 101150037787 Sting gene Proteins 0.000 title 1
- 101150060741 Sting1 gene Proteins 0.000 title 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 title 1
- APCLRHPWFCQIMG-UHFFFAOYSA-N 4-(5,6-dimethoxy-1-benzothiophen-2-yl)-4-oxobutanoic acid Chemical compound C1=C(OC)C(OC)=CC2=C1SC(C(=O)CCC(O)=O)=C2 APCLRHPWFCQIMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 19
- -1 isopropyl ether 5,6-dimethoxy-γ-oxobenzo[b]thiophene-2-butanoic acid Chemical compound 0.000 claims abstract description 18
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 230000001028 anti-proliverative effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- FYSNRJHAOHDILO-UHFFFAOYSA-N thionyl chloride Chemical compound ClS(Cl)=O FYSNRJHAOHDILO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 claims description 7
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 3
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 claims description 2
- 238000004237 preparative chromatography Methods 0.000 claims description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 claims description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical class [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 claims 1
- 108090000467 Interferon-beta Proteins 0.000 abstract description 20
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 16
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 12
- 230000004913 activation Effects 0.000 abstract description 7
- 230000006698 induction Effects 0.000 abstract description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 4
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 abstract description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 abstract description 2
- 101710196623 Stimulator of interferon genes protein Proteins 0.000 abstract 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 19
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 18
- 102000003996 Interferon-beta Human genes 0.000 description 16
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 229960001388 interferon-beta Drugs 0.000 description 15
- 229940125791 MSA-2 Drugs 0.000 description 13
- 101710162106 Merozoite surface antigen 2 Proteins 0.000 description 13
- 101000643024 Homo sapiens Stimulator of interferon genes protein Proteins 0.000 description 11
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 11
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 11
- 102100035533 Stimulator of interferon genes protein Human genes 0.000 description 8
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 8
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 7
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 7
- 229940044665 STING agonist Drugs 0.000 description 7
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 7
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 6
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 6
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 6
- XGOYIMQSIKSOBS-UHFFFAOYSA-N vadimezan Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C3=CC=C(C)C(C)=C3OC2=C1CC(O)=O XGOYIMQSIKSOBS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N Trichloro(2H)methane Chemical compound [2H]C(Cl)(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N 0.000 description 5
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 5
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 5
- 229950008737 vadimezan Drugs 0.000 description 5
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 238000012552 review Methods 0.000 description 4
- 108010005716 Interferon beta-1a Proteins 0.000 description 3
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 102000050022 human STING1 Human genes 0.000 description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 101000959820 Homo sapiens Interferon alpha-1/13 Proteins 0.000 description 2
- 102100040019 Interferon alpha-1/13 Human genes 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 241000700647 Variola virus Species 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 description 2
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 102000006602 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 2
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 2
- 210000004964 innate lymphoid cell Anatomy 0.000 description 2
- 229960004461 interferon beta-1a Drugs 0.000 description 2
- 230000002601 intratumoral effect Effects 0.000 description 2
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 2
- 210000004985 myeloid-derived suppressor cell Anatomy 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 2
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 2
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- KKHFRAFPESRGGD-UHFFFAOYSA-N 1,3-dimethyl-7-[3-(n-methylanilino)propyl]purine-2,6-dione Chemical compound C1=NC=2N(C)C(=O)N(C)C(=O)C=2N1CCCN(C)C1=CC=CC=C1 KKHFRAFPESRGGD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010000871 Acute monocytic leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 102000008096 B7-H1 Antigen Human genes 0.000 description 1
- 108010074708 B7-H1 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 102000004091 Caspase-8 Human genes 0.000 description 1
- 108090000538 Caspase-8 Proteins 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 241001050985 Disco Species 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 101150066783 Ecrg4 gene Proteins 0.000 description 1
- 108700039887 Essential Genes Proteins 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 206010062904 Hormone-refractory prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 229940076838 Immune checkpoint inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 102000037984 Inhibitory immune checkpoint proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091008026 Inhibitory immune checkpoint proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000002227 Interferon Type I Human genes 0.000 description 1
- 108010014726 Interferon Type I Proteins 0.000 description 1
- 102100040018 Interferon alpha-2 Human genes 0.000 description 1
- 102100026720 Interferon beta Human genes 0.000 description 1
- 108010005714 Interferon beta-1b Proteins 0.000 description 1
- 108010079944 Interferon-alpha2b Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- 238000012313 Kruskal-Wallis test Methods 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 208000035489 Monocytic Acute Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 102100026456 POU domain, class 3, transcription factor 3 Human genes 0.000 description 1
- 101710133393 POU domain, class 3, transcription factor 3 Proteins 0.000 description 1
- 229920000297 Rayon Polymers 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 1
- 102000001742 Tumor Suppressor Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010040002 Tumor Suppressor Proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 230000014102 antigen processing and presentation of exogenous peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- RFCBNSCSPXMEBK-INFSMZHSSA-N c-GMP-AMP Chemical compound C([C@H]1O2)OP(O)(=O)O[C@H]3[C@@H](O)[C@H](N4C5=NC=NC(N)=C5N=C4)O[C@@H]3COP(O)(=O)O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H]2N1C(N=C(NC2=O)N)=C2N=C1 RFCBNSCSPXMEBK-INFSMZHSSA-N 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 description 1
- 230000007012 clinical effect Effects 0.000 description 1
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- AQEFLFZSWDEAIP-UHFFFAOYSA-N di-tert-butyl ether Chemical compound CC(C)(C)OC(C)(C)C AQEFLFZSWDEAIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- IJKVHSBPTUYDLN-UHFFFAOYSA-N dihydroxy(oxo)silane Chemical compound O[Si](O)=O IJKVHSBPTUYDLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 1
- 238000002330 electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000000119 electrospray ionisation mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 239000012274 immune-checkpoint protein inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 1
- 229960003161 interferon beta-1b Drugs 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000006674 lysosomal degradation Effects 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 230000000869 mutational effect Effects 0.000 description 1
- OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N n-methyl-1-(2-naphthalen-1-ylsulfanylphenyl)methanamine Chemical compound CNCC1=CC=CC=C1SC1=CC=CC2=CC=CC=C12 OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000955 neuroendocrine Effects 0.000 description 1
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 239000012286 potassium permanganate Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 239000002964 rayon Substances 0.000 description 1
- 229940038850 rebif Drugs 0.000 description 1
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 239000012047 saturated solution Substances 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 239000004066 vascular targeting agent Substances 0.000 description 1
Images
Abstract
Description
Настоящее изобретение относится к области медицины, фармацевтики и онкологии, а именно к новому химическому соединению к изопропиловому эфиру 5,6-диметокси-γ-оксобензо[b]тиофен-2-бутановой кислоты, обладающему антипролиферативной активностью, опосредованной иммунными клетками человека, индукцией активности гена интерферона бета, активацией сигнального пути STING.The present invention relates to the field of medicine, pharmaceuticals and oncology, namely to a new chemical compound of 5,6-dimethoxy-γ-oxobenzo[b]thiophene-2-butanoic acid isopropyl ester, which has antiproliferative activity mediated by human immune cells, inducing activity interferon beta gene, activation of the STING signaling pathway.
Предшествующий уровень техникиPrior Art
Роль иммунной системы в поддержании генетической стабильности организма является первостепенной. К основным факторам, приводящим к нарушениям генетического постоянства организма, относятся вторжение микроорганизмов и мутационная изменчивость собственных клеток, способная приводить к образованию злокачественных опухолей. Неудивительно, что иммунные реакции, направленные на уничтожение патогенов и на элиминацию злокачественных новообразований, могут пересекаться. Сигнальные пути, связанные с активацией синтеза интерферонов 1 типа, изначально считались компонентом врожденного иммунитета, направленного на уничтожение зараженных вирусами клеток и самих вирусов. Однако действие интерферонов 1 типа не ограничивается противовирусной активностью, антипролиферативное действие интерферонов позволяет рассматривать их в качестве противоопухолевых препаратов.The role of the immune system in maintaining the genetic stability of the body is paramount. The main factors leading to violations of the genetic constancy of the body include the invasion of microorganisms and mutational variability of its own cells, which can lead to the formation of malignant tumors. It is not surprising that immune responses aimed at destroying pathogens and eliminating malignancies can overlap. Signaling pathways associated with the activation of the synthesis of
На сегодняшний день на отечественном рынке доступны несколько десятков препаратов с действующим веществом интерферон-альфа 2b и интерферон-бета, как для парэнтерального, так и для местного введения. Всего в России 14 фармацевтических компаний владеют регистрационными удостоверениями на препараты интерферонов альфа или бета. Показания для применения препаратов интерферона альфа - вирусные и онкологические заболевания; для препаратов интерферона бета - рассеянный склероз.Today, several dozen drugs with the active ingredients interferon-alpha 2b and interferon-beta are available on the domestic market, both for parenteral and local administration. In total, 14 pharmaceutical companies in Russia hold registration certificates for alpha or beta interferon preparations. Indications for the use of interferon alpha drugs are viral and oncological diseases; for interferon beta drugs - multiple sclerosis.
Интерфероны были открыты в 50-х годах прошлого века, когда два японских вирусолога Yasu-ichi Nagano и Yasuhiko Kojima работали в Токийском университете над созданием вакцины против оспы. Тогда ими было замечено, что после подкожного введения кроликам гомогената убитых вирусных частиц в дальнейшем на этих участках кожи вирус размножался хуже, чем на других участках, причем этот эффект распространялся не только на вирус оспы, но и на другие вирусы. Свои наблюдения ученые опубликовали в 1954 году во французском журнале "Journal de la Société de Biologie" [Nagano Y, Kojima Y (October 1954). "Pouvoir immunisant du virus vaccinal inactivé par des rayons ultraviolets" (in French). C. R. Seances Soc. Biol. Fil. 148 (19-20): 1700-2]. В то же время в Лондоне ученые Alick Isaacs и Jean Lindenmann наблюдали подобные явления с вирусом гриппа на куриных эмбрионах, о чем они рассказали в 1957 году в издании Proc. R. Soc. Lond., В, Biol. Sci. [Isaacs A, Lindenmann J (September 1957). "Virus interference. I. The interferon". Proc. R. Soc. Lond., B, Biol. Sci. 147 (927): 258-67], впервые назвав вещество, мешающее размножению вирусов, интерфероном. По-видимому, это вещество представляло собой смесь интерферонов I типа, куда относятся интерфероны альфа, бета и омега.Interferons were discovered in the 50s of the last century, when two Japanese virologists Yasu-ichi Nagano and Yasuhiko Kojima worked at the University of Tokyo to create a vaccine against smallpox. Then they noticed that after subcutaneous injection of a homogenate of killed viral particles into rabbits, the virus multiplied worse in these areas of the skin than in other areas, and this effect extended not only to the smallpox virus, but also to other viruses. Scientists published their observations in 1954 in the French journal “Journal de la Société de Biologie” [Nagano Y, Kojima Y (October 1954). "Pouvoir immunisant du virus vaccine inactivé par des rayons ultraviolets" (in French). C. R. Seances Soc. Biol. Fil. 148 (19-20): 1700-2]. At the same time, in London, scientists Alick Isaacs and Jean Lindenmann observed similar phenomena with the influenza virus on chicken embryos, which they reported in 1957 in the publication Proc. R. Soc. Lond., B, Biol. Sci. [Isaacs A, Lindenmann J (September 1957). "Virus interference. I. The interferon." Proc. R. Soc. Lond., B, Biol. Sci. 147 (927): 258-67], for the first time naming a substance that interferes with the reproduction of viruses as interferon. Apparently, this substance was a mixture of type I interferons, which include alpha, beta and omega interferons.
В настоящее время известно, по меньшей мере, 23 различные формы интерферона-альфа (ИФНа), представляющего собой белок молекулярной массы 19-26 кДа и длиной 156-172 аминокислотных остатков. Все типы ИФНа имеют консервативный участок 115-151 ак, тогда как N- и С- концы являются вариабельными. Многие типы ИФНа отличаются всего лишь по 1-2 аминокислотам. Дисульфидные связи в молекуле интерферона- альфа формируются между 1-98 и 29-138 аминокислотами. Дисульфидная связь между 29 и 138 аминокислотами является необходимой для биологической активности ИФНа, тогда как дисульфидная связь 1-98 может быть восстановлена без потери биологической активности. Все формы ИФН-а имеют потенциальный участок для гликозилирования, однако большинство из них не гликозилировано.Currently, at least 23 different forms of interferon-alpha (IFNa), which is a protein with a molecular weight of 19-26 kDa and a length of 156-172 amino acid residues, are known. All types of IFNa have a conserved region of 115-151 aa, while the N- and C-termini are variable. Many types of IFN differ in only 1-2 amino acids. Disulfide bonds in the interferon-alpha molecule are formed between amino acids 1-98 and 29-138. The disulfide bond between amino acids 29 and 138 is essential for the biological activity of IFN, while the disulfide bond 1-98 can be reduced without loss of biological activity. All forms of IFN-α have a potential site for glycosylation, but most are not glycosylated.
Для интерферона-бета (ИФНб) известна только одна природная форма, тогда как рекомбинантный интерферон-бета может быть как гликозилированный (интерферон-бета 1а), так и негликозилированный (интерферон-бета 1b). Негликозилированный ИФНб получают в клетках бактерий, и по активности он уступает гликозилированному интерферону из клеток млекопитающих [Алиев Т.К., Панина А.А., Свешников П.Г., Солопова О.Н. Способ количественного определения антипролиферативной активности интерферона-бета человека. Патент на изобретение РФ 2739261 С1, 22.12.2020]. Для гликозилированных форм интерферона-бета в антипролиферативных тестах на опухолевой линии НТ29 в присутствии мононуклеаров периферической крови человека (МПК) показатель полуингибирующей концентрации IC50 составил от 1.5×10-12 М для препарата Ребиф, до 2.0×10-12 М для препарата Синновекс, тогда как значения IC50 в подобных тестах для применяющихся в онкологии цитостатиков, например, цисплатина, лежат в микромолярном диапазоне. Антипролиферативная активность интерферона-бета, превышающая таковую цитостатиков на 5-7 порядков, делает его привлекательным агентом для разработки противоопухолевых средств.For interferon beta (IFNb), only one natural form is known, while recombinant interferon beta can be either glycosylated (interferon beta 1a) or non-glycosylated (interferon beta 1b). Non-glycosylated IFNb is produced in bacterial cells, and its activity is inferior to glycosylated interferon from mammalian cells [Aliev T.K., Panina A.A., Sveshnikov P.G., Solopova O.N. Method for quantitative determination of antiproliferative activity of human interferon-beta. RF patent for invention 2739261 C1, 12/22/2020]. For glycosylated forms of interferon-beta in antiproliferative tests on the HT29 tumor line in the presence of human peripheral blood mononuclear cells (PBMCs), the semi-inhibitory concentration IC50 ranged from 1.5×10 -12 M for the drug Rebif, to 2.0×10 -12 M for the drug Synnovex, then as IC50 values in similar tests for cytostatics used in oncology, for example, cisplatin, lie in the micromolar range. The antiproliferative activity of interferon-beta, which exceeds that of cytostatics by 5-7 orders of magnitude, makes it an attractive agent for the development of antitumor agents.
Помимо прямого воздействия на опухоль, ИФНб запускает целый каскад местных иммунологических реакций: стимуляция Т-клеток, естественных киллеров (ЕК), дендритных клеток, врожденных лимфоидных клеток (ILCs); негативная регуляция супрессоров: миелоидных супрессорных клеток (MDSCs) и регуляторных Т-клеток (Treg); ингибирование пролиферации, модуляция апоптоза, дифференциация опухолевых клеток, экспрессия поверхностных антигенов, активация опухолевого супрессора Ecrg4, активация каспазы-8, индукция вторичных медиаторов (интерлейкинов) и др. [Belinda S. Parker, Jai Rautela & Paul J. Hertzog. Antitumour actions of interferons: implications for cancer therapy. Nature Reviews Cancer, 16,131-144(2016)].In addition to the direct effect on the tumor, IFNb triggers a whole cascade of local immunological reactions: stimulation of T cells, natural killer (NK) cells, dendritic cells, innate lymphoid cells (ILCs); negative regulation of suppressor cells: myeloid-derived suppressor cells (MDSCs) and regulatory T cells (Treg); inhibition of proliferation, modulation of apoptosis, differentiation of tumor cells, expression of surface antigens, activation of the tumor suppressor Ecrg4, activation of caspase-8, induction of secondary mediators (interleukins), etc. [Belinda S. Parker, Jai Rautela & Paul J. Hertzog. Antitumor actions of interferons: implications for cancer therapy. Nature Reviews Cancer, 16,131-144(2016)].
Несмотря на значительные усилия [Dicitore A, Grassi ES, Borghi MO, Gelmini G, Cantone MC, Gaudenzi G, Persani L, Caraglia M, Vitale G.J. Antitumor activity of interferon-β1a in hormone refractory prostate cancer with neuroendocrine differentiation. Endocrinol Invest. 2017 Mar 1], [Iwamura T, Narumi H, Suzuki T, Yanai H, Mori K, Yamashita K, Tsushima Y, Asano T, Izawa A, Momen S, Nishimura K, Tsuchiyama H, Uchida M, Yamashita Y, Okano K, Taniguchi A novel pegylated IFN-β as strong suppressor of the malignant ascites in a peritoneal metastasis model of human cancer. T.Cancer Sci. 2017 Jan 27], [Rybchenko VS, Panina AA, Aliev TK, Solopova ON, Balabashin DS, Novoseletsky VN, Dolgikh DA, Sveshnikov PG, Kirpichnikov MP. Bispecific Antibodies for IFN-β Delivery to ErbB2+Tumors. Biomolecules. 2021 Dec 20;11(12): 1915. doi: 10.3390/biom11121915. PMID: 34944558; PMCID: PMC8699518], ни одного препарата на основе интерферона-бета для лечения онкологических заболеваний на сегодняшний день не зарегистрировано. Очевидное препятствие для применения интерферона-бета в практику лечения злокачественных новообразований - широкий спектр тяжелых побочных явлений при системном введении ИФНб. Локальное действие ИФНб на опухоль может быть достигнуто либо доставкой в опухоль вектора, несущего ген интерферона-бета, либо активацией интерфероновых сигнальных путей в опухолевом узле.Despite significant efforts [Dicitore A, Grassi ES, Borghi MO, Gelmini G, Cantone MC, Gaudenzi G, Persani L, Caraglia M, Vitale G.J. Antitumor activity of interferon-β1a in hormone refractory prostate cancer with neuroendocrine differentiation. Endocrinol Invest. 2017 Mar 1], [Iwamura T, Narumi H, Suzuki T, Yanai H, Mori K, Yamashita K, Tsushima Y, Asano T, Izawa A, Momen S, Nishimura K, Tsuchiyama H, Uchida M, Yamashita Y, Okano K , Taniguchi A novel pegylated IFN-β as a strong suppressor of the malignant ascites in a peritoneal metastasis model of human cancer. T.Cancer Sci. 2017 Jan 27], [Rybchenko VS, Panina AA, Aliev TK, Solopova ON, Balabashin DS, Novoseletsky VN, Dolgikh DA, Sveshnikov PG, Kirpichnikov MP. Bispecific Antibodies for IFN-β Delivery to ErbB2+Tumors. Biomolecules. 2021 Dec 20;11(12): 1915. doi: 10.3390/biom11121915. PMID: 34944558; PMCID: PMC8699518], not a single drug based on interferon-beta for the treatment of cancer has been registered to date. An obvious obstacle to the use of interferon-beta in the treatment of malignant neoplasms is the wide range of severe side effects with systemic administration of IFNb. The local effect of IFNb on the tumor can be achieved either by delivery to the tumor of a vector carrying the interferon-beta gene, or by activation of interferon signaling pathways in the tumor node.
Первый подход, реализованный в препаратах для клинических исследований, пока не увенчался получением препарата, эффективность которого подтверждена клинически, но исследования в этом направлении продолжаются. NCT00107861, NCT00031083, NCT00299962, NCT00107861, NCT01628640], [Predina JD, Keating J, Venegas О, Nims S, Singhal S. Neoadjuvant intratumoral immuno-gene therapy for non-small cell lung cancer. Discov Med. 2016 Apr;21(116):275-81. PMID: 27232513].The first approach, implemented in drugs for clinical trials, has not yet resulted in a drug whose effectiveness has been clinically confirmed, but research in this direction continues. NCT00107861, NCT00031083, NCT00299962, NCT00107861, NCT01628640], [Predina JD, Keating J, Venegas O, Nims S, Singhal S. Neoadjuvant intratumoral immuno-gene therapy for non-small cell lung cancer. Disco Med. 2016 Apr;21(116):275-81. PMID: 27232513].
Второй подход получил мощный толчок для развития с опубликованием в 2013 году патента «Use of STING agonist as cancer treatment)) [T.F. Gajewski, S. Woo, L. Corrales, Use of sting agonist as cancer treatment. Патент WO 2015077354 A1 https://patents.google.com/patent/WO2015077354A1/en]. Авторы патента экспериментально на мышиных моделях показали, что внутриопухолевая стимуляция интерферонового сигнального пути посредством активации белка STING приводит к полной и необратимой элиминации опухолевого узла. Основной фокус в данном патенте был сосредоточен на исследовании активности агонистов STING dimethylxanthone acetic acid (DMXAA) и ML RR-S2 CDA. Впоследствии было проведено несколько клинических испытаний DMXAA (NCT00863733, NCT00111618, NCT01057342, NCT01299415, NCT00003697 и др.), но клинического эффекта показано не было. Как оказалось, DMXAA специфичен к мышиному, но не к человеческому STING [Conlon J, Burdette DL, Sharma S, Bhat N, Thompson M, Jiang Z et al. (May 2013). "Mouse, but not human STING, binds and signals in response to the vascular disrupting agent 5,6-dimethylxanthenone-4-acetic acid". Journal of Immunology. 190 (10): 5216-25. doi:10.4049/jimmunol.1300097]. Кроме того, для достижения значимого противоопухолевого эффекта на мышиных моделях требовалось введение очень больших дозировок DMXAA: в экспериментах, описанных в указанном выше патенте и последующих работах, вводимые дозировки составляли 100-500 мкг на одно введение. Это побудило исследователей к поиску новых агонистов STING с максимальной активностью по отношению к человеческому STING. К 2019 году было известно уже несколько десятков молекул, их свойства подробно описаны в обзоре [11. Zhang Н, You QD, Xu XL. Targeting Stimulator of Interferon Genes (STING): A Medicinal Chemistry Perspective. J Med Chem. 2020 Apr 23;63(8):3785-3816. doi: 10.1021/acs.jmedchem.9b01039. Epub 2019 Dec 20. PMID: 31820978]. Соединение, описанное в этом обзоре под номером 62, а также в патенте WO 2018067423 - BENZO[B]THIOPHENE COMPOUNDS AS STING AGONISTS, было выбрано из 2,4 миллионов соединений путем скрининга на клетках и опубликовано в журнале Science под названием MSA-2. [Bo-Sheng Pan et al. An orally available non-nucleotide STING agonist with antitumor activity. Science369, eaba 6098(2020). DOI: 10.1126/science.aba6098].The second approach received a powerful impetus for development with the publication in 2013 of the patent “Use of STING agonist as cancer treatment)” [T.F. Gajewski, S. Woo, L. Corrales, Use of sting agonist as cancer treatment. Patent WO 2015077354 A1 https://patents.google.com/patent/WO2015077354A1/en]. The authors of the patent experimentally showed in mouse models that intratumoral stimulation of the interferon signaling pathway through activation of the STING protein leads to complete and irreversible elimination of the tumor node. The main focus of this patent was to study the activity of the STING agonists dimethylxanthone acetic acid (DMXAA) and ML RR-S2 CDA. Subsequently, several clinical trials of DMXAA were conducted (NCT00863733, NCT00111618, NCT01057342, NCT01299415, NCT00003697, etc.), but no clinical effect was shown. DMXAA was found to be specific for murine, but not human STING [Conlon J, Burdette DL, Sharma S, Bhat N, Thompson M, Jiang Z et al. (May 2013). "Mouse, but not human STING, binds and signals in response to the vascular disrupting agent 5,6-dimethylxanthenone-4-acetic acid." Journal of Immunology. 190(10):5216-25. doi:10.4049/jimmunol.1300097]. In addition, to achieve a significant antitumor effect in mouse models, very large dosages of DMXAA were required: in the experiments described in the above patent and subsequent works, the administered dosages were 100-500 μg per administration. This has prompted researchers to search for new STING agonists with maximum activity against human STING. By 2019, several dozen molecules were already known; their properties are described in detail in the review [11. Zhang N, You QD, Xu XL. Targeting Stimulator of Interferon Genes (STING): A Medicinal Chemistry Perspective. J Med Chem. 2020 Apr 23;63(8):3785-3816. doi: 10.1021/acs.jmedchem.9b01039. Epub 2019
Помимо соединения 62 или MSA-2 в обзоре [Zhang Н, You QD, Xu XL. Targeting Stimulator of Interferon Genes (STING): A Medicinal Chemistry Perspective. J Med Chem. 2020 Apr 23;63(8):3785-3816. doi: 10.1021/acs.jmedchem.9b01039. Epub 2019 Dec 20. PMID: 31820978] приводятся различные производные MSA-2, среди которых под номером 66 третбутиловый эфир, активность которого существенно ниже, чем у MSA-2: 16% от активности cGAMP, природного активатора STING, против 129% для MSA-2. Отсюда авторы делают заключение, что свободная карбоксильная группа имеет решающее значение для активности соединения.In addition to compound 62 or MSA-2 in the review [Zhang N, You QD, Xu XL. Targeting Stimulator of Interferon Genes (STING): A Medicinal Chemistry Perspective. J Med Chem. 2020 Apr 23;63(8):3785-3816. doi: 10.1021/acs.jmedchem.9b01039. Epub 2019
На сегодняшний день активность MSA-2 показана во многих исследованиях, как в моно режиме, так и в сочетании с различными противоопухолевыми агентами, главным образом ингибиторами контрольных точек иммунитета. [Serrano R, Lettau М, Zarobkiewicz М, Wesch D, Peters С, Kabelitz D. Stimulatory and inhibitory activity of STING ligands on tumor-reactive human gamma/delta T cells. Oncoimmunology. 2022 Feb 1;11(1):2030021. doi: 10.1080/2162402X.2022.2030021.eCollection2022.], [14. Combination of oral STING agonist MSA-2 and anti-TGF-β/PD-L1 bispecific antibody YM101: a novel immune cocktail therapy for non-inflamed tumors. Yi M, Niu M, Wu Y, Ge H, Jiao D, Zhu S, Zhang J, Yan Y, Zhou P, Chu Q, Wu K. J Hematol Oncol. 2022 Oct 8;15(1):142. doi: 10.1186/sl3045-022-01363-8], [15. Lu Z, Chen J, Yu P, Atherton MJ, Gui J, Tomar VS, Middleton JD, Sullivan NT, Singhal S, George SS, Woolfork AG, Weljie AM, Hai T, Eruslanov EB, Fuchs SY. Tumor factors stimulate lysosomal degradation of tumor antigens and undermine their cross-presentation in lung cancer. Nat Commun. 2022 Nov 4;13(1):6623. doi: 10.1038/s41467-022-34428-w. PMID: 36333297; PMCID: РМС9636202].To date, the activity of MSA-2 has been shown in many studies, both in mono mode and in combination with various antitumor agents, mainly immune checkpoint inhibitors. [Serrano R, Lettau M, Zarobkiewicz M, Wesch D, Peters S, Kabelitz D. Stimulatory and inhibitory activity of STING ligands on tumor-reactive human gamma/delta T cells. Oncoimmunology. 2022
Задачей настоящего изобретения является создание нового химического соединения, стимулирующего продукцию интерферона-бета человека.The objective of the present invention is to create a new chemical compound that stimulates the production of human interferon-beta.
Технический результат: получено и описано новое химическое соединение, стимулирующее продукцию интерферона-бета человека, и способ его получения.Technical result: a new chemical compound that stimulates the production of human interferon-beta and a method for its preparation have been obtained and described.
Технический результат достигается тем, что синтезирован изопропиловый эфир 5,6-диметокси-γ-оксобензо[b]тиофен-2-бутановой кислоты, стимулирующий продукцию интерферона-бета формулыThe technical result is achieved by the synthesis of isopropyl ester of 5,6-dimethoxy-γ-oxobenzo[b]thiophene-2-butanoic acid, which stimulates the production of interferon-beta of the formula
Получение соединенияGetting a connection
Синтез изопропилового эфира 5,6-диметокси-γ-оксобензо[b]тиофен-2-бутановой кислоты:Synthesis of 5,6-dimethoxy-γ-oxobenzo[b]thiophene-2-butanoic acid isopropyl ester:
5,6-диметокси-γ-оксобензо[b]тиофен-2-бутановую кислоту перемешивали в безводном изопропиловом спирте и добавляли по каплям хлористый тионил (1-5 экв.), не допуская повышения температуры выше 0°С. Затем перемешивали при комнатной температуре 12 часов.5,6-dimethoxy-γ-oxobenzo[b]thiophene-2-butanoic acid was stirred in anhydrous isopropyl alcohol and thionyl chloride (1-5 eq.) was added dropwise, not allowing the temperature to rise above 0°C. Then it was stirred at room temperature for 12 hours.
После завершения реакции (контроль прохождения реакции по ТСХ до исчезновения исходной кислоты) растворитель упаривали до небольшого объема и, добавляя насыщенный раствор бикарбоната натрия, рН доводили примерно до 8, экстрагировали хлористым метиленом, органическую фазу собирали и очищали препаративной хроматографией. Выход 85-94%.After completion of the reaction (control of the reaction by TLC until the starting acid disappeared), the solvent was evaporated to a small volume and, adding a saturated solution of sodium bicarbonate, the pH was adjusted to approximately 8, extracted with methylene chloride, the organic phase was collected and purified by preparative chromatography. Yield 85-94%.
Физико-химические свойства изопропилового эфира 5,6-диметокси-γ-оксобензо[b]тиофен-2-бутановой кислотыPhysicochemical properties of 5,6-dimethoxy-γ-oxobenzo[b]thiophene-2-butanoic acid isopropyl ester
Применяемые аналитические методы и оборудованиеAnalytical methods and equipment used
Аналитическую ВЭЖХ проводили на хроматографе Agilent 1260 Series. Спектры ESI-MS регистрировали на приборе "Agilent LC/MS 1200" при ионизации пробы электрораспылением в режиме регистрации положительных ионов.Analytical HPLC was performed on an Agilent 1260 Series chromatograph. ESI-MS spectra were recorded on an Agilent LC/MS 1200 instrument with sample ionization by electrospray in positive ion detection mode.
Спектры ЯМР 1Н получены на Фурье ЯМР-спектрометре Bruker 600 МГц, внутренний стандарт - тетраметилсилан в дейтерохлороформе CDCl3. Химические сдвиги приведены в миллионных долях (δ), КССВ - в герцах. ТСХ проводили на пластинах Merck TLC Silica gel 60 F254, проявление в УФ и растворе перманганата калия. 1H NMR spectra were obtained on a Bruker 600 MHz Fourier NMR spectrometer, internal standard - tetramethylsilane in deuterochloroform CDCl3. Chemical shifts are given in parts per million (δ), VSWR - in hertz. TLC was carried out on Merck
Спектр 1Н ЯМР (CDCl3, δ м.д., J, Гц): 7.92 (уш.с, 1Н), 7.34-7.23 (м, 2Н), 5.06 (м, 1H), 3.98 (уш.с, 6Н), 3.33 (т, J=6.94, 2Н), 2.79 (т, J=6.94, 2Н), 1.28 (д, J=6.61, 6Н), ESI-MS, m/z 667,3 [2M+Na]+. 1H NMR spectrum (CDCl3, δ ppm, J, Hz): 7.92 (br.s, 1H), 7.34-7.23 (m, 2H), 5.06 (m, 1H), 3.98 (br.s, 6H ), 3.33 (t, J=6.94, 2H), 2.79 (t, J=6.94, 2H), 1.28 (d, J=6.61, 6H), ESI-MS, m/z 667.3 [2M+Na] + .
Изобретение иллюстрируется фигурами 1-3.The invention is illustrated in figures 1-3.
На фиг. 1 представлены графики зависимости уровня ингибирования пролиферации клеток карциномы человека НТ29 от концентрации MSA-2 или эквимолярной концентрации растворителя ДМСО в присутствии или в отсутствие мононуклеаров периферической крови человека.In fig. Figure 1 shows graphs of the dependence of the level of inhibition of proliferation of human HT29 carcinoma cells on the concentration of MSA-2 or an equimolar concentration of the solvent DMSO in the presence or absence of human peripheral blood mononuclear cells.
На фиг. 2 - представлены графики зависимости уровня ингибирования пролиферации клеток карциномы человека НТ29 от концентрации изопропилового эфира 5,6-диметокси-γ-оксобензо[b]тиофен-2-бутановой кислоты или эквимолярной концентрации растворителя ДМСО в присутствии или в отсутствие мононуклеаров периферической крови человека.In fig. 2 - graphs show the dependence of the level of inhibition of proliferation of human HT29 carcinoma cells on the concentration of 5,6-dimethoxy-γ-oxobenzo[b]thiophene-2-butanoic acid isopropyl ester or an equimolar concentration of DMSO solvent in the presence or absence of human peripheral blood mononuclear cells.
На фиг. 3 - Относительный уровень экспрессии интерферона-бета при стимуляции клеток линии ТНР-1 различными концентрациями MSA-2 и изопропилового эфира 5,6-диметокси-γ-оксобензо[b]тиофен-2-бутановой кислоты.In fig. 3 - Relative level of interferon-beta expression upon stimulation of THP-1 cells with various concentrations of MSA-2 and 5,6-dimethoxy-γ-oxobenzo[b]thiophene-2-butanoic acid isopropyl ester.
Биологическая активность изопропилового эфира 5,6-диметокси-γ-оксобензо[b]тиофен-2-бутановой кислоты в сравнении с ближайшим аналогом MSA-2.Biological activity of 5,6-dimethoxy-γ-oxobenzo[b]thiophene-2-butanoic acid isopropyl ester in comparison with the closest analogue MSA-2.
Пример 1. Антипролиферативная активность изопропилового эфира 5,6-диметокси-γ-оксобензо[b]тиофен-2-бутановой кислоты на клеточной линии карциномы толстой кишки человека НТ29.Example 1. Antiproliferative activity of 5,6-dimethoxy-γ-oxobenzo[b]thiophene-2-butanoic acid isopropyl ester on the human colon carcinoma cell line HT29.
Эксперимент проводили по следующей схеме:The experiment was carried out according to the following scheme:
клетки линии НТ29 культивировали в течение 8 суток в среде DMEM с добавлением 3% телячьей сыворотки следующим образом:HT29 cells were cultured for 8 days in DMEM supplemented with 3% calf serum as follows:
- клетки сеяли в 96-луночные планшеты до конечной концентрации 10 тыс.клеток в мл;- cells were seeded into 96-well plates to a final concentration of 10 thousand cells per ml;
- в лунки добавляли мононуклеары периферической крови человека до конечной концентрации либо 0 клеток в мл (без МПК), либо 100 тыс.клеток в мл (+МПК);- human peripheral blood mononuclear cells were added to the wells to a final concentration of either 0 cells per ml (without MIC) or 100 thousand cells per ml (+ MIC);
- в лунки добавляли серийные разведения MSA-2 либо изопропилового эфира 5,6-диметокси-γ-оксобензо[b]тиофен-2-бутановой кислоты до конечных концентраций от 0 мкМ до 100 мкМ в трех повторах;- serial dilutions of MSA-2 or 5,6-dimethoxy-γ-oxobenzo[b]thiophene-2-butanoic acid isopropyl ester were added to the wells to final concentrations from 0 μM to 100 μM in triplicate;
- в качестве контроля добавляли серийные разведения ДМСО до конечных концентраций от 0 до 2‰, что соответствует содержанию ДМСО в лунках с MSA-2 и изопропиловым эфиром 5,6-диметокси-γ-оксобензо[b]тиофен-2-бутановой кислоты.- as a control, serial dilutions of DMSO were added to final concentrations from 0 to 2‰, which corresponds to the DMSO content in the wells with MSA-2 and 5,6-dimethoxy-γ-oxobenzo[b]thiophene-2-butanoic acid isopropyl ester.
Пролиферацию оценивали в тесте МТТ, оптическую плотность в лунках измеряли при длине волны 560 нм, находили средние значения в повторах.Proliferation was assessed in the MTT test, the optical density in the wells was measured at a wavelength of 560 nm, and the average values were found in replicates.
Уровень ингибирования пролиферации определяли по методике, описанной в патенте [3].The level of proliferation inhibition was determined according to the method described in the patent [3].
Строили графики зависимости уровня ингибирования пролиферации в % от концентрации активного вещества. Значение IC50 находили графическим способом.Graphs were made of the dependence of the level of proliferation inhibition in % on the concentration of the active substance. The IC50 value was found graphically.
Результаты приведены на фигурах 1 и 2.The results are shown in Figures 1 and 2.
Результат: изопропиловый эфир 5,6-диметокси-γ-оксобензо[b]тиофен-2-бутановой кислоты обладает антипролиферативной активностью в отношении клеток опухолевой линии НТ29 в присутствии мононуклеаров периферической крови человека. Показатель полуингибирующей концентрации изопропилового эфира 5,6-диметокси-γ-оксобензо[b]тиофен-2-бутановой кислоты IC50 составил 0,1 мкМ, что в 30 раз ниже аналогичного показателя для MSA-2.Result: 5,6-dimethoxy-γ-oxobenzo[b]thiophene-2-butanoic acid isopropyl ester has antiproliferative activity against cells of the HT29 tumor line in the presence of human peripheral blood mononuclear cells. The semi-inhibitory concentration of 5,6-dimethoxy-γ-oxobenzo[b]thiophene-2-butanoic acid isopropyl ester IC50 was 0.1 μM, which is 30 times lower than that for MSA-2.
IC50 (MSA-2): 3 мкМ;IC50 (MSA-2): 3 µM;
IC50 (изопропиловый эфир 5,6-диметокси-γ-оксобензо[b]тиофен-2-бутановой кислоты): 0,1 мкМ.IC50 (5,6-dimethoxy-γ-oxobenzo[b]thiophene-2-butanoic acid isopropyl ester): 0.1 µM.
Пример 2. Оценка индукции экспрессии интерферона-бета человека разными концентрациями изопропилового эфира 5,6-диметокси-γ-оксобензо[b]тиофен-2-бутановой кислоты в сравнении с MSA-2.Example 2. Evaluation of the induction of human interferon-beta expression by different concentrations of 5,6-dimethoxy-γ-oxobenzo[b]thiophene-2-butanoic acid isopropyl ester in comparison with MSA-2.
Действие соединения на культуру моноцитов острого моноцитарного лейкоза ТНР-1 оценивали по уровню экспрессии интерферона-бета человека с помощью ПЦР-РВ.The effect of the compound on the culture of monocytes of acute monocytic leukemia THP-1 was assessed by the level of expression of human interferon-beta using RT-PCR.
Индукцию проводили в чашках Петри диаметром 35 mm;Induction was carried out in Petri dishes with a diameter of 35 mm;
~1,25*106 кл/чашка;~1.25*10 6 cells/cup;
2 контроля в двух повторах: стандартный и DMSO;2 controls in duplicate: standard and DMSO;
3 рабочие концентрации изопропилового эфира 5,6-диметокси-γ-оксобензо[b]тиофен-2-бутановой кислоты (50 mM сток) в двух повторах: 10 мкМ, 50 мкМ и 100 мкМ.3 working concentrations of 5,6-dimethoxy-γ-oxobenzo[b]thiophene-2-butanoic acid isopropyl ester (50 mM stock) in two replicates: 10 µM, 50 µM and 100 µM.
Инкубацию с соединением осуществляли в течение 5 часов, после чего проводили выделение суммарной РНК из клеток и, соответственно, ПЦР-РВ. В качестве референсного гена для оценки уровня экспрессии использовали ген «домашнего хозяйства» глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы (GAPDH). Обработка данных проводилась с использованием критерия Краскела-Уоллиса и программного обеспечения Statistica.Incubation with the compound was carried out for 5 hours, after which total RNA was isolated from the cells and, accordingly, RT-PCR was performed. The housekeeping gene glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) was used as a reference gene to evaluate the expression level. Data processing was carried out using the Kruskal-Wallis test and Statistica software.
Результаты приведены на фигуре 3.The results are shown in Figure 3.
Приведенные диаграммы демонстрируют значительное увеличение уровня экспрессии интерферона-бета человека (×1000) при воздействии на клетки ТНР-1. При этом наблюдаемый эффект носит дозозависимый характер.The above diagrams demonstrate a significant increase in the expression level of human interferon-beta (×1000) when exposed to THP-1 cells. In this case, the observed effect is dose-dependent.
Claims (6)
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2811736C1 true RU2811736C1 (en) | 2024-01-16 |
Family
ID=
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2015077354A1 (en) * | 2013-11-19 | 2015-05-28 | The University Of Chicago | Use of sting agonist as cancer treatment |
| WO2018067423A1 (en) * | 2016-10-04 | 2018-04-12 | Merck Sharp & Dohme Corp. | BENZO[b]THIOPHENE COMPOUNDS AS STING AGONISTS |
| RU2806274C2 (en) * | 2018-04-03 | 2023-10-30 | МЕРК ШАРП И ДОУМ ЭлЭлСи | Benzothiophenes and related compounds as sting agonists |
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2015077354A1 (en) * | 2013-11-19 | 2015-05-28 | The University Of Chicago | Use of sting agonist as cancer treatment |
| WO2018067423A1 (en) * | 2016-10-04 | 2018-04-12 | Merck Sharp & Dohme Corp. | BENZO[b]THIOPHENE COMPOUNDS AS STING AGONISTS |
| RU2806274C2 (en) * | 2018-04-03 | 2023-10-30 | МЕРК ШАРП И ДОУМ ЭлЭлСи | Benzothiophenes and related compounds as sting agonists |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Zhang, Han et al. "Targeting Stimulator of Interferon Genes (STING): A Medicinal Chemistry Perspective." Journal of medicinal chemistry, 2020 vol. 63(8), рр.3785-3816. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Baltina | Chemical modification of glycyrrhizic acid as a route to new bioactive compounds for medicine | |
| Zahedipour et al. | Molecular mechanisms of anticancer effects of Glucosamine | |
| CN107148424B (en) | Cyclic dinucleotides for inducing cytokines | |
| EP3062784B1 (en) | Antimicrobial compounds | |
| KR20060057027A (en) | Gamma-glutamyl and beta-aspartyl containing immunomodulator compounds and methods therewith | |
| WO2021139395A1 (en) | High-efficiency low-toxicity anti-cancer compound synthesized by autocatalysis in cells and living bodies and synthesis method for anti-cancer compound | |
| CN103159646A (en) | Hydroxamic acid compound, and preparation method and application thereof | |
| Leite et al. | Phthaloyl amino acids as anti-inflammatory and immunomodulatory prototypes | |
| RU2811736C1 (en) | New chemical compound that stimulates production of human interferon-beta by activating sting signaling pathway and method of its preparation | |
| KR20080029967A (en) | Indole derivatives having antitumor activity | |
| Du et al. | Identification and immunological evaluation of novel TLR2 agonists through structure optimization of Pam3CSK4 | |
| Liu et al. | Discovery of CAPE derivatives as dual EGFR and CSK inhibitors with anticancer activity in a murine model of hepatocellular carcinoma | |
| Cai et al. | Platinum (IV) complexes as inhibitors of STAT3 and regulators of the tumor microenvironment to control breast cancer | |
| RU2267496C2 (en) | Anti-tumor and antiviral peptides | |
| CN109942452A (en) | A kind of Olefination derivative of tyrosine and its preparation and application | |
| Wei et al. | Synthesis and biological evaluation of novel 2-arylvinyl-substituted naphtho [2, 3-d] imidazolium halide derivatives as potent antitumor agents | |
| WO2023011668A1 (en) | Perinaphthenone compound and use thereof | |
| Varol et al. | Anti-lung cancer and anti-angiogenic activities of new designed boronated phenylalanine metal complexes | |
| TWI225400B (en) | Prodrugs to D-prolines | |
| RU2385324C1 (en) | Corrective agent for paraneoplastic damages and toxic effects of cytostatic polychemotherapy | |
| KR20220091528A (en) | 4-Amino-imidazoquinoline compounds and uses thereof | |
| RU2425680C1 (en) | Agent for correction of cytostatic polychemotherapy with anti-inflammatory activity | |
| Miller et al. | Bottromycin. Separation of biologically active compounds and preparation and testing of amide derivatives | |
| CN116621900B (en) | Tetravalent platinum aminohexose complex based on regulation and control of Mucin type O-glycosylation targeting CRPC and application thereof | |
| Cui et al. | Anti-cancer activity and mechanism of flurbiprofen organoselenium compound RY-1-92 in non-small cell lung cancer |