RU2806274C2 - Benzothiophenes and related compounds as sting agonists - Google Patents
Benzothiophenes and related compounds as sting agonists Download PDFInfo
- Publication number
- RU2806274C2 RU2806274C2 RU2020132585A RU2020132585A RU2806274C2 RU 2806274 C2 RU2806274 C2 RU 2806274C2 RU 2020132585 A RU2020132585 A RU 2020132585A RU 2020132585 A RU2020132585 A RU 2020132585A RU 2806274 C2 RU2806274 C2 RU 2806274C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- group
- independently selected
- general formula
- compound
- alkyl
- Prior art date
Links
Abstract
Description
ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯFIELD OF THE INVENTION
Настоящее раскрытие относится к соединениям и их производным, которые могут быть полезны в качестве агонистов STING (стимулятор генов интерферона), активирующих путь STING. Настоящее раскрытие также относится к композициям, содержащим такие соединения, способам синтеза таких соединений и к применению таких соединений, включая введение таких соединений для индукции иммунного ответа, индукции STING-зависимой продукции интерферона типа I и/или для лечения нарушения пролиферации клеток, такого как рак.The present disclosure relates to compounds and derivatives thereof that may be useful as STING (stimulator of interferon gene) agonists that activate the STING pathway. The present disclosure also relates to compositions containing such compounds, methods for synthesizing such compounds, and uses of such compounds, including administration of such compounds to induce an immune response, induce STING-dependent type I interferon production, and/or to treat a cell proliferation disorder such as cancer. .
ССЫЛКА НА ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ, ПРЕДСТАВЛЕННЫЙ ЭЛЕКТРОННЫМ ОБРАЗОМLINK TO ELECTRONICALLY PROVIDED SEQUENCE LIST
Перечень последовательностей настоящей заявки представлен в электронном виде через EFS-Web в виде перечня последовательностей в формате ASCII с именем файла «24578_SEQLIST-FEB2019», датой создания 1 марта 2019 г. и размером 25 КБ. Этот перечень последовательностей, представленный через EFS-Web, является частью описания и полностью включен в настоящий документ посредством ссылки.The sequence listing of this application is submitted electronically via EFS-Web as a sequence listing in ASCII format with the file name “24578_SEQLIST-FEB2019”, creation date March 1, 2019, and size 25 KB. This sequence listing provided via EFS-Web is part of the specification and is incorporated herein by reference in its entirety.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИBACKGROUND OF THE ART
Иммунная система сформировалась в процессе эволюции, чтобы распознавать и нейтрализовать различные типы угроз в целях поддержания гомеостаза хозяина, и обычно подразделяется на две ветви: адаптивную и врожденную. Адаптивная иммунная система специализируется на распознавании в качестве чужеродных тех антигенов, которые не экспрессируются в природе в организме хозяина, и на создании анти-антигенного ответа посредством скоординированных действий многих подгрупп лейкоцитов. Отличительной чертой адаптивных иммунных ответов является способность обеспечивать «память» или длительный иммунитет против обнаруженного антигена. Хотя этот специфический и продолжительный эффект имеет решающее значение для здоровья и выживания хозяина, адаптивный иммунный ответ требует времени для выработки полноценного ответа.The immune system has evolved to recognize and neutralize various types of threats in order to maintain host homeostasis and is generally divided into two branches: adaptive and innate. The adaptive immune system specializes in recognizing as foreign those antigens that are not naturally expressed in the host and in generating an anti-antigen response through the coordinated actions of many subsets of leukocytes. A hallmark of adaptive immune responses is the ability to provide “memory” or long-lasting immunity against a detected antigen. Although this specific and long-lasting effect is critical for the health and survival of the host, the adaptive immune response takes time to develop a full response.
Врожденная иммунная система компенсирует эту задержку по времени и специализируется на быстром реагировании на различные повреждающие факторы или сигналы опасности. Она обеспечивает первую линию защиты от бактерий, вирусов, паразитов и других инфекционных угроз, но также сильно реагирует на определенные сигналы опасности, связанные с повреждением клеток или тканей. Врожденная иммунная система не обладает антигенной специфичностью, но реагирует на множество эффекторных механизмов. Опсонизация, фагоцитоз, активация системы комплемента и продукция растворимых биоактивных молекул, таких как цитокины или хемокины, все это является механизмами, с помощью которых врожденная иммунная система опосредует свой ответ. Реагируя на эти молекулярные паттерны, ассоциированные с повреждением (DAMP), или патоген-ассоциированные молекулярные паттерны (РАМР), описанные выше, врожденная иммунная система способна обеспечить широкую защиту от широкого спектра угроз для хозяина.The innate immune system compensates for this time delay and specializes in quickly responding to various damaging factors or danger signals. It provides the first line of defense against bacteria, viruses, parasites, and other infectious threats, but also responds strongly to certain danger signals associated with cell or tissue damage. The innate immune system is not antigen specific but responds to a variety of effector mechanisms. Opsonization, phagocytosis, activation of the complement system, and production of soluble bioactive molecules such as cytokines or chemokines are all mechanisms by which the innate immune system mediates its response. By responding to these damage-associated molecular patterns (DAMPs) or pathogen-associated molecular patterns (PAMPs) described above, the innate immune system is able to provide broad protection against a wide range of threats to the host.
Свободные цитозольные ДНК и РНК входят в число этих РАМР и DAMP. Недавно было продемонстрировано, что основным сенсором цитозольной ДНК является cGAS (циклическая GMP-AMP-синтаза). При распознавании цитозольной ДНК cGAS катализирует образование циклического динуклеотида 2'3'-cGAMP, атипичного второго мессенджера, который прочно связывается с ER-трансмембранным адаптерным белком STING. STING после связывания с cGAMP претерпевает конформационное изменение, он перемещается в перинуклеарный компартмент и индуцирует активацию критических факторов транскрипции IRF-3 и NF-κВ. Это приводит к сильной индукции интерферонов типа I и продукции провоспалительных цитокинов, таких как IL-6, TNF-α и IFN-γ.Free cytosolic DNA and RNA are among these PAMPs and DAMPs. It has recently been demonstrated that the main sensor of cytosolic DNA is cGAS (cyclic GMP-AMP synthase). Upon recognition of cytosolic DNA, cGAS catalyzes the formation of the cyclic dinucleotide 2'3'-cGAMP, an atypical second messenger that binds tightly to the ER transmembrane adapter protein STING. STING, after binding to cGAMP, undergoes a conformational change; it moves to the perinuclear compartment and induces the activation of the critical transcription factors IRF-3 and NF-κB. This leads to a strong induction of type I interferons and the production of proinflammatory cytokines such as IL-6, TNF-α and IFN-γ.
Важность интерферонов типа I и провоспалительных цитокинов для различных клеток иммунной системы была установлена очень хорошо. В частности, эти молекулы в значительной степени усиливают активацию Т-клеток, повышая способность дендритных клеток и макрофагов захватывать, процессировать, презентировать и кросс-презентировать антигены Т-клеткам. Стимулирующая способность этих антигенпрезентирующих клеток активировать Т-клетки усиливается за счет активации критических костимулирующих молекул, таких как CD80 или CD86. Наконец, интерфероны типа I могут быстро взаимодействовать со своими когнатными рецепторами и запускать активацию интерферон-чувствительных генов, которые могут вносить значительный вклад в активацию адаптивных иммунных клеток.The importance of type I interferons and proinflammatory cytokines for various cells of the immune system has been very well established. In particular, these molecules significantly enhance T cell activation by enhancing the ability of dendritic cells and macrophages to uptake, process, present, and cross-present antigens to T cells. The stimulatory ability of these antigen-presenting cells to activate T cells is enhanced by the activation of critical co-stimulatory molecules such as CD80 or CD86. Finally, type I interferons can rapidly interact with their cognate receptors and trigger the activation of interferon-responsive genes, which can contribute significantly to the activation of adaptive immune cells.
С терапевтической точки зрения показано, что интерфероны типа I обладают противовирусной активностью, напрямую подавляя репликацию вируса гепатита В и вируса гепатита С человека, а также стимулируя иммунные ответы на инфицированные вирусом клетки. Соединения, которые могут индуцировать продукцию интерферона I типа, применяются в вакцинах, где они действуют как адъюванты, усиливая специфические иммунные ответы на антигены и минимизируя побочные эффекты за счет снижения дозировки и расширения иммунного ответа.From a therapeutic point of view, type I interferons have been shown to have antiviral activity by directly inhibiting the replication of the human hepatitis B virus and hepatitis C virus, as well as stimulating immune responses to virus-infected cells. Compounds that can induce type I interferon production are used in vaccines, where they act as adjuvants, enhancing specific immune responses to antigens and minimizing side effects by reducing dosage and broadening the immune response.
Кроме того, интерфероны и соединения, которые могут индуцировать продукцию интерферона, потенциально могут применяться при лечении онкологических заболеваний у человека. Такие молекулы являются потенциально полезными в качестве противораковых агентов с разнообразными путями активности. Интерфероны могут напрямую ингибировать пролиферацию опухолевых клеток человека и могут действовать синергетически с различными одобренными химиотерапевтическими агентами. Интерфероны типа I могут значительно усиливать противоопухолевые иммунные ответы, индуцируя активацию клеток как адаптивной, так и врожденной иммунной системы. Наконец, инвазивность опухоли может подавляться интерферонами путем модуляции экспрессии ферментов, связанных с ремоделированием тканей.In addition, interferons and compounds that can induce interferon production have potential use in the treatment of cancer in humans. Such molecules are potentially useful as anticancer agents with diverse pathways of activity. Interferons can directly inhibit the proliferation of human tumor cells and can act synergistically with various approved chemotherapeutic agents. Type I interferons can significantly enhance antitumor immune responses by inducing activation of cells of both the adaptive and innate immune systems. Finally, tumor invasiveness can be suppressed by interferons by modulating the expression of enzymes associated with tissue remodeling.
Принимая во внимание перспективность интерферонов типа I и соединений, индуцирующих интерферон типа I, в качестве противовирусных и противораковых агентов, остается потребность в новых агентах, которые могут индуцировать эффективную продукцию интерферона типа I. В связи с растущим объемом данных, демонстрирующих, что путь cGAS-STING, сенсор цитозольной ДНК, обладает значительной способностью индуцировать интерфероны типа I, разработка агентов, активирующих STING, быстро занимает важное место в сегодняшнем направлении противоопухолевой терапии.Given the promise of type I interferons and type I interferon-inducing compounds as antiviral and anticancer agents, there remains a need for new agents that can induce effective type I interferon production. With growing evidence demonstrating that the cGAS pathway STING, a cytosolic DNA sensor, has significant ability to induce type I interferons, and the development of STING-activating agents is rapidly gaining importance in today's anticancer therapeutics.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯSUMMARY OF THE INVENTION
Настоящее изобретение включает соединения общей формулы (I), соединения общей формулы (II), соединения общей формулы (III), соединения общей формулы (IV), соединения общей формулы (V), соединения общей формулы (VI) и их фармацевтически приемлемые соли. Эти соединения и их фармацевтически приемлемые соли могут быть полезны в качестве агентов для индукции иммунных ответов, для индукции STING-опосредованной продукции интерферона типа I и/или для лечения нарушения пролиферации клеток.The present invention includes compounds of general formula (I), compounds of general formula (II), compounds of general formula (III), compounds of general formula (IV), compounds of general formula (V), compounds of general formula (VI) and pharmaceutically acceptable salts thereof. These compounds and their pharmaceutically acceptable salts may be useful as agents for inducing immune responses, for inducing STING-mediated production of type I interferon and/or for treating a cell proliferation disorder.
Настоящее изобретение относится к новым соединениям общей формулы (I). В частности, настоящее изобретение относится к соединениям, имеющим общую структурную формулу (I):The present invention relates to new compounds of general formula (I). In particular, the present invention relates to compounds having the general structural formula (I):
или их фармацевтически приемлемым солям, как описано в настоящем документе. Также раскрыты применения соединений общей формулы (I) и способы получения соединений общей формулы (I).or pharmaceutically acceptable salts thereof, as described herein. Uses of compounds of general formula (I) and methods for preparing compounds of general formula (I) are also disclosed.
Настоящее изобретение также относится к новым соединениям общей формулы (II). В частности, настоящее изобретение относится к соединениям, имеющим общую структурную формулу (II):The present invention also relates to new compounds of general formula (II). In particular, the present invention relates to compounds having the general structural formula (II):
или их фармацевтически приемлемым солям, как описано в настоящем документе. Также раскрыты применения соединений общей формулы (II) и способы получения соединений общей формулы (II).or pharmaceutically acceptable salts thereof, as described herein. Uses of compounds of general formula (II) and methods for preparing compounds of general formula (II) are also disclosed.
Настоящее изобретение также относится к новым соединениям общей формулы (III). В частности, настоящее изобретение относится к соединениям, имеющим общую структурную формулу (III):The present invention also relates to new compounds of general formula (III). In particular, the present invention relates to compounds having the general structural formula (III):
или их фармацевтически приемлемым солям, как описано в настоящем документе. Также раскрыты применения соединений общей формулы (III) и способы получения соединений общей формулы (III).or pharmaceutically acceptable salts thereof, as described herein. Uses of compounds of general formula (III) and methods for preparing compounds of general formula (III) are also disclosed.
Настоящее изобретение также относится к новым соединениям общей формулы (IV). В частности, настоящее изобретение относится к соединениям, имеющим общую структурную формулу (IV):The present invention also relates to new compounds of general formula (IV). In particular, the present invention relates to compounds having the general structural formula (IV):
или их фармацевтически приемлемым солям, как описано в настоящем документе. Также раскрыты применения соединений общей формулы (IV) и способы получения соединений общей формулы (IV).or pharmaceutically acceptable salts thereof, as described herein. Also disclosed are applications of compounds of general formula (IV) and methods for preparing compounds of general formula (IV).
Настоящее изобретение также относится к новым соединениям общей формулы (V). В частности, настоящее изобретение относится к соединениям, имеющим общую структурную формулу (V):The present invention also relates to new compounds of general formula (V). In particular, the present invention relates to compounds having the general structural formula (V):
или их фармацевтически приемлемым солям, как описано в настоящем документе. Также раскрыты применения соединений общей формулы (V) и способы получения соединений общей формулы (V).or pharmaceutically acceptable salts thereof, as described herein. Uses of compounds of general formula (V) and methods for preparing compounds of general formula (V) are also disclosed.
Настоящее изобретение также относится к новым соединениям общей формулы (VI). В частности, настоящее изобретение относится к соединениям, имеющим общую структурную формулу (VI):The present invention also relates to new compounds of general formula (VI). In particular, the present invention relates to compounds having the general structural formula (VI):
или их фармацевтически приемлемым солям, как описано в настоящем документе. Также раскрыты применения соединений общей формулы (VI) и способы получения соединений общей формулы (VI).or pharmaceutically acceptable salts thereof, as described herein. Uses of compounds of general formula (VI) and methods for preparing compounds of general formula (VI) are also disclosed.
Другие варианты осуществления, аспекты и отличительные признаки настоящего изобретения либо дополнительно описаны, либо будут очевидны из последующего описания, примеров и прилагаемой формулы изобретения.Other embodiments, aspects and features of the present invention are either further described or will be apparent from the following description, examples and the appended claims.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯDETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
Настоящее изобретение включает соединения общей формулы (I), соединения общей формулы (II), соединения общей формулы (III), соединения общей формулы (IV), соединения общей формулы (V), соединения общей формулы (VI) и их фармацевтически приемлемые соли. Эти соединения и их фармацевтически приемлемые соли могут быть полезны в качестве агентов для индукции иммунных ответов, для индукции STING-опосредованной продукции интерферона типа I и/или для лечения нарушения пролиферации клеток.The present invention includes compounds of general formula (I), compounds of general formula (II), compounds of general formula (III), compounds of general formula (IV), compounds of general formula (V), compounds of general formula (VI) and pharmaceutically acceptable salts thereof. These compounds and their pharmaceutically acceptable salts may be useful as agents for inducing immune responses, for inducing STING-mediated production of type I interferon and/or for treating a cell proliferation disorder.
Первый вариант осуществления относится к соединениям общей формулы (I):The first embodiment relates to compounds of general formula (I):
или их фармацевтически приемлемой соли, где каждый A-R1 независимо выбран из группы, состоящей из C-R1 и N; каждый R1 независимо выбран из группы, состоящей из Н, галогена, OR6, N(R6)2, C1-C6 алкила, C1-С6 галоалкила, C1-С6 алкила, замещенного OR6, C1-C6 алкила, замещенного N(R6)2, COOR6, и C(O)N(R6)2; каждый R2 независимо выбран из группы, состоящей из Н, галогена, CN, OR6, N(R6)2, COOR6, C(O)N(R6)2, SO2R6, C1-C6 алкила, C1-C6 галоалкила, C1-C6 алкила, замещенного OR6, C2-C6 алкенила, C2-C6 галоалкенила, C2-C6 алкенила, замещенного OR6, С2-С6 алкинила, С2-С6 галоалкинила, С2-С6 алкинила, замещенного OR6, С3-С6 циклоалкила, и от 3- до 6-членного гетероциклического кольца, включая 1-2 кольцевых члена, выбранных из группы, состоящей из О, S и N(R6); R3 и R4 независимо выбраны из группы, состоящей из O-(C1-C4 алкилен или галоалкилен), С1-С5 алкилена или галоалкилена и N(R6)-(C1-C4 алкилен или галоалкилен); необязательно, R4 может быть взят совместно с соседним C-R1 и атомом, к которому они присоединены, с образованием конденсированного кольца Е, которое выбрано из фенила или 5- или 6-членного гетероциклического кольца, включая 1-2 кольцевых члена, выбранных из группы, состоящей из О, S, N и N(R6), где связь с R3 от указанного кольца Е проходит от атома на указанном кольце Е с открытой валентностью для замещения, и где указанные фенил или гетероциклическое кольцо необязательно замещены одним или более членами группы, состоящей из галогена, С1-С3 алкила, и С1-С3 галоалкила; каждый R6 независимо выбран из группы, состоящей из Н, C1-С6 алкила, и C1-С6 галоалкила; каждый X1 независимо выбран из группы, состоящей из С=O, -СН2-, -CHF-, и -CF2-; каждый X2 независимо выбран из (C(R8)2)(1-3), где каждый R8 независимо выбран из группы, состоящей из Н, галогена, C1-C6 алкила, CN, OR6, N(R6)2, C1-С6 галоалкила, С3-С6 циклоалкила, C1-C6 алкила, замещенного OR6, и C1-C6 алкила, замещенного N(R6)2; необязательно, 2 R8 на разных атомах углерода могут быть взяты вместе совместно с атомами, к которым они присоединены, с образованием от 3- до 6-членного конденсированного кольца; и необязательно, 2 R8 на одном атоме углерода могут быть взяты вместе совместно с атомом, к которому они присоединены, с образованием от 3- до 6-членного спироцикла; каждый X3 независимо выбран из группы, состоящей из COOR6, C(O)SR6, C(S)OR6, SO2R6, C(O)N(R9)2, и CN; и каждый R9 независимо выбран из группы, состоящей из Н, COOR, и SO2R6.or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein each AR 1 is independently selected from the group consisting of CR 1 and N; each R 1 is independently selected from the group consisting of H, halogen, OR 6 , N(R 6 ) 2 , C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 haloalkyl, C 1 -C 6 alkyl substituted with OR 6 , C 1 -C 6 alkyl substituted with N(R 6 ) 2 , COOR 6 , and C(O)N(R 6 ) 2 ; each R 2 is independently selected from the group consisting of H, halogen, CN, OR 6 , N(R 6 ) 2 , COOR 6 , C(O)N(R 6 ) 2 , SO 2 R 6 , C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 haloalkyl, C 1 -C 6 alkyl substituted with OR 6 , C 2 -C 6 alkenyl, C 2 -C 6 haloalkenyl, C 2 -C 6 alkenyl substituted with OR 6 , C 2 -C 6 alkynyl, C 2 -C 6 haloalkynyl, C 2 -C 6 alkynyl substituted with OR 6 , C 3 -C 6 cycloalkyl, and a 3- to 6-membered heterocyclic ring, including 1-2 ring members selected from the group consisting from O, S and N(R 6 ); R 3 and R 4 are independently selected from the group consisting of O-(C 1 -C 4 alkylene or haloalkylene), C 1 -C 5 alkylene or haloalkylene and N(R 6 )-(C 1 -C 4 alkylene or haloalkylene) ; Optionally, R 4 can be taken together with an adjacent CR 1 and the atom to which they are attached to form a fused ring E, which is selected from phenyl or a 5- or 6-membered heterocyclic ring, including 1-2 ring members selected from the group consisting of O, S, N and N(R 6 ), wherein the bond to R 3 from said ring E is from an atom on said ring E with open valence for substitution, and wherein said phenyl or heterocyclic ring is optionally substituted by one or more members a group consisting of halogen, C 1 -C 3 alkyl, and C 1 -C 3 haloalkyl; each R 6 is independently selected from the group consisting of H, C 1 -C 6 alkyl, and C 1 -C 6 haloalkyl; each X 1 is independently selected from the group consisting of C=O, -CH 2 -, -CHF-, and -CF 2 -; each X 2 is independently selected from (C(R 8 ) 2 ) (1-3) wherein each R 8 is independently selected from the group consisting of H, halogen, C 1 -C 6 alkyl, CN, OR 6 , N(R 6 ) 2 , C 1 -C 6 haloalkyl, C 3 -C 6 cycloalkyl, C 1 -C 6 alkyl substituted with OR 6 and C 1 -C 6 alkyl substituted with N(R 6 ) 2 ; optionally, the 2 R 8 on different carbon atoms can be taken together with the atoms to which they are attached to form a 3- to 6-membered fused ring; and optionally, the 2 R 8 on one carbon atom can be taken together with the atom to which they are attached to form a 3- to 6-membered spirocycle; each X 3 is independently selected from the group consisting of COOR 6 , C(O)SR 6 , C(S)OR 6 , SO 2 R 6 , C(O)N(R 9 ) 2 , and CN; and each R 9 is independently selected from the group consisting of H, COOR, and SO 2 R 6 .
В первом аспекте первого варианта осуществления каждый A-R1 независимо выбран из группы, состоящей из C-R1 и N. В конкретных примерах этого аспекта каждый независимо выбран из группы, состоящей из и В более конкретных случаях этого аспекта каждый независимо выбран из группы, состоящей из и В этом аспекте все другие группы являются такими, как указано выше в общей формуле (I) первого варианта осуществления.In the first aspect of the first embodiment, each AR 1 is independently selected from the group consisting of CR 1 and N. In specific examples of this aspect, each independently selected from a group consisting of And In more specific cases of this aspect, each independently selected from a group consisting of And In this aspect, all other groups are as defined above in the general formula (I) of the first embodiment.
Во втором аспекте первого варианта осуществления каждый R1 независимо выбран из группы, состоящей из Н, галогена, OR6, N(R6)2, C1-C6 алкила, C1-C6 галоалкила, C1-C6 алкила, замещенного OR6, C1-С6 алкила, замещенного N(R6)2, COOR6, и C(O)N(R6)2. В случаях этого аспекта каждый R1 независимо выбран из группы, состоящей из Н, галогена, C1-С3 алкила, и C1-С3 галоалкила. В конкретных примерах этого аспекта каждый R1 независимо выбран из группы, состоящей из Н и галогена. В более конкретных случаях этого аспекта каждый R1 независимо выбран из группы, состоящей из Н и F. В этом аспекте все другие группы являются такими, как указано выше в общей формуле (I) первого варианта осуществления или в первом аспекте выше.In the second aspect of the first embodiment, each R 1 is independently selected from the group consisting of H, halogen, OR 6 , N(R 6 ) 2 , C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 haloalkyl, C 1 -C 6 alkyl , substituted OR 6 , C 1 -C 6 alkyl, substituted N(R 6 ) 2 , COOR 6 , and C(O)N(R 6 ) 2 . In cases of this aspect, each R 1 is independently selected from the group consisting of H, halogen, C 1 -C 3 alkyl, and C 1 -C 3 haloalkyl. In specific examples of this aspect, each R 1 is independently selected from the group consisting of H and halogen. In more specific cases of this aspect, each R 1 is independently selected from the group consisting of H and F. In this aspect, all other groups are as defined above in the general formula (I) of the first embodiment or in the first aspect above.
В третьем аспекте первого варианта осуществления каждый R2 независимо выбран из группы, состоящей из Н, галогена, CN, OR6, N(R6)2, COOR6, C(O)N(R6)2, SO2R6, C1-C6 алкила, C1-С6 галоалкила, C1-С6 алкила, замещенного OR6, С2-С6 алкенила, С2-С6 галоалкенила, С2-С6 алкенила, замещенного OR6, С2-С6 алкинила, С2-С6 галоалкинила, С2-С6 алкинила, замещенного OR6, С3-С6 циклоалкила, и от 3- до 6-членного гетероциклического кольца, включая 1-2 кольцевых члена, выбранных из группы, состоящей из О, S и N(R6). В случаях этого аспекта каждый R2 независимо выбран из группы, состоящей из Н, галогена, C1-С3 алкила, С1-С3 галоалкила, ОС1-С3 алкила, С2-С3 алкенила, и N(R6)2. В конкретных примерах этого аспекта каждый R2 независимо выбран из группы, состоящей из Н, Br, Cl, СН3, СН2СН3, СН=СН2, ОСН3, OCFH2, OCF2H, OCF3, и N(R6)2. В более конкретных случаях этого аспекта каждый R2 независимо выбран из группы, состоящей из Н, СН3, ОСН3, и OCF2H. В этом аспекте все другие группы являются такими, как указано в общей формуле (I) первого варианта осуществления или в первом или втором аспектах, описанных выше.In the third aspect of the first embodiment, each R 2 is independently selected from the group consisting of H, halogen, CN, OR 6 , N(R 6 ) 2 , COOR 6 , C(O)N(R 6 ) 2 , SO 2 R 6 , C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 haloalkyl, C 1 -C 6 alkyl substituted with OR 6 , C 2 -C 6 alkenyl, C 2 -C 6 haloalkenyl, C 2 -C 6 alkenyl substituted with OR 6 , C 2 -C 6 alkynyl, C 2 -C 6 haloalkynyl, C 2 -C 6 alkynyl substituted with OR 6 , C 3 -C 6 cycloalkyl, and 3- to 6-membered heterocyclic ring, including 1-2 ring members , selected from the group consisting of O, S and N(R 6 ). In cases of this aspect, each R 2 is independently selected from the group consisting of H, halogen, C 1 -C 3 alkyl, C 1 -C 3 haloalkyl, OC 1 -C 3 alkyl, C 2 -C 3 alkenyl, and N(R 6 ) 2 . In specific examples of this aspect, each R 2 is independently selected from the group consisting of H, Br, Cl, CH 3 , CH 2 CH 3 , CH=CH 2 , OCH 3 , OCFH 2 , OCF 2 H, OCF 3 , and N( R 6 ) 2 . In more specific cases of this aspect, each R 2 is independently selected from the group consisting of H, CH 3 , OCH 3 , and OCF 2 H. In this aspect, all other groups are as specified in the general formula (I) of the first embodiment or in the first or second aspects described above.
В четвертом аспекте первого варианта осуществления R3 и R4 независимо выбраны из группы, состоящей из O-(C1-C4 алкилен или галоалкилен), С1-С5 алкилена или галоалкилена, и N(R6)-(C1-C4 алкилен или галоалкилен); необязательно, R4 может быть взят совместно с соседним C-R1 и атомом, к которому они присоединены, с образованием конденсированного кольца Е, которое выбрано из фенила или 5- или 6-членного гетероциклического кольца, включая 1-2 кольцевых члена, выбранных из группы, состоящей из О, S, N и N(R6), где связь с R3 от указанного кольца Е проходит от атома на указанном кольце Е с открытой валентностью для замещения, и где указанные фенил или гетероциклическое кольцо необязательно замещены одним или более членами группы, состоящей из галогена, C1-С3 алкила, и C1-С3 галоалкила. В примерах этого четвертого аспекта R3-R4 выбран из группы, состоящей из -(СН2)2-8-, -O(CH2)1-7-, -O(СН2)1-6О-, -NH(CH2)1-7-, и -NH(CH2)1-6O-. В определенных примерах этого четвертого аспекта R3-R4 выбран из группы, состоящей из -(СН2)2-, -(CH2)3-, -(СН2)4-, -O(СН2)2-, -O(СН2)3-, -O(CH2)4-, -O(СН2)2O-, -O(СН2)3О-, -ОСН2СН(СН3)CH2O-, -O(CH2)4O-, -O(CH2)5O-, -NH(CH3)2-, -NH(CH2)3-, и -NH(CH2)3O-. В конкретных примерах этого четвертого аспекта R4 может быть взят совместно с соседним C-R1 и атомом, к которому они присоединены, с образованием конденсированного кольца Е, которое выбрано из фенила или 5- или 6-членного гетероциклического кольца, включая 1-2 кольцевых члена, выбранных из группы, состоящей из О, S, N и N(R6), где связь с R3 от указанного кольца Е проходит от атома на указанном кольце Е с открытой валентностью для замещения, и где указанные фенил или гетероциклическое кольцо необязательно замещены одним или более членами группы, состоящей из галогена, С1-С3 алкила, и С1-С3 галоалкила. В этом случае структура общей формулы (I) представляет собой формулу (Ia):In the fourth aspect of the first embodiment, R 3 and R 4 are independently selected from the group consisting of O-(C 1 -C 4 alkylene or haloalkylene), C 1 -C 5 alkylene or haloalkylene, and N(R 6 )-(C 1 -C 4 alkylene or haloalkylene); Optionally, R 4 can be taken together with an adjacent CR 1 and the atom to which they are attached to form a fused ring E, which is selected from phenyl or a 5- or 6-membered heterocyclic ring, including 1-2 ring members selected from the group consisting of O, S, N and N(R 6 ), wherein the bond to R 3 from said ring E is from an atom on said ring E with open valence for substitution, and wherein said phenyl or heterocyclic ring is optionally substituted by one or more members group consisting of halogen, C 1 -C 3 alkyl, and C 1 -C 3 haloalkyl. In examples of this fourth aspect, R 3 -R 4 is selected from the group consisting of -(CH 2 ) 2-8 -, -O(CH 2 ) 1-7 -, -O(CH 2 ) 1-6 O-, - NH(CH 2 ) 1-7 -, and -NH(CH 2 ) 1-6 O-. In certain examples of this fourth aspect, R 3 -R 4 is selected from the group consisting of -(CH 2 ) 2 -, -(CH 2 ) 3 -, -(CH 2 ) 4 -, -O(CH 2 ) 2 -, -O(CH 2 ) 3 -, -O(CH 2 ) 4 -, -O(CH 2 ) 2 O-, -O(CH 2 ) 3 O-, -OSH 2 CH(CH 3 )CH 2 O- , -O(CH 2 ) 4 O-, -O(CH 2 ) 5 O-, -NH(CH 3 ) 2 -, -NH(CH 2 ) 3 -, and -NH(CH 2 ) 3 O-. In specific examples of this fourth aspect, R 4 can be taken together with an adjacent CR 1 and the atom to which they are attached to form a fused ring E that is selected from phenyl or a 5- or 6-membered heterocyclic ring, including 1-2 ring members selected from the group consisting of O, S, N and N(R 6 ), wherein the bond to R 3 from said ring E is from an atom on said ring E with open valence for substitution, and wherein said phenyl or heterocyclic ring is optionally substituted one or more members of the group consisting of halogen, C 1 -C 3 alkyl, and C 1 -C 3 haloalkyl. In this case, the structure of the general formula (I) is formula (Ia):
где все группы имеют значения, указанные в общей формуле (I). В этом аспекте все другие группы являются такими, как указано в общей формуле (I) первого варианта осуществления или в первом-третьем аспектах, описанных выше.where all groups have the meanings specified in the general formula (I). In this aspect, all other groups are as specified in the general formula (I) of the first embodiment or in the first to third aspects described above.
В пятом аспекте первого варианта осуществления каждый R6 независимо выбран из группы, состоящей из Н, C1-С6 алкила, и C1-С6 галоалкила. В примерах этого аспекта каждый R6 независимо выбран из группы, состоящей из Н, C1-С3 алкила, и C1-С3 галоалкила. В конкретных примерах этого аспекта каждый R6 независимо выбран из группы, состоящей из Н, СН3, и CHF2. В этом аспекте все другие группы являются такими, как указано в общей формуле (I) первого варианта осуществления или в первом-четвертом аспектах, описанных выше.In the fifth aspect of the first embodiment, each R 6 is independently selected from the group consisting of H, C 1 -C 6 alkyl, and C 1 -C 6 haloalkyl. In examples of this aspect, each R 6 is independently selected from the group consisting of H, C 1 -C 3 alkyl, and C 1 -C 3 haloalkyl. In specific examples of this aspect, each R 6 is independently selected from the group consisting of H, CH 3 , and CHF 2 . In this aspect, all other groups are as specified in the general formula (I) of the first embodiment or in the first to fourth aspects described above.
В шестом аспекте первого варианта осуществления каждый X1 независимо выбран из группы, состоящей из С=O, -CH2-, -CHF-, и -CF2-. В примерах этого аспекта X1 выбран из группы, состоящей из С=O и -СН2-. В конкретных примерах этого аспекта X1 представляет собой С=O. В этом варианте осуществления все другие группы являются такими, как указано в общей формуле (I) первого варианта осуществления или в первом-пятом аспектах, описанных выше.In the sixth aspect of the first embodiment, each X 1 is independently selected from the group consisting of C=O, -CH 2 -, -CHF-, and -CF 2 -. In examples of this aspect, X 1 is selected from the group consisting of C=O and -CH 2 -. In specific examples of this aspect, X 1 is C=O. In this embodiment, all other groups are as specified in the general formula (I) of the first embodiment or in the first to fifth aspects described above.
В седьмом аспекте первого варианта осуществления каждый X2 независимо выбран из (C(R8)2)(1-3), где каждый R8 независимо выбран из группы, состоящей из Н, галогена, C1-C6 алкила, CN, OR6, N(R6)2, C1-С6 галоалкила, С3-С6 циклоалкила, C1-C6 алкила, замещенного OR6, и C1-C6 алкила, замещенного N(R6)2; необязательно, 2 R8 на разных атомах углерода могут быть взяты вместе совместно с атомами, к которым они присоединены, с образованием от 3- до 6-членного конденсированного кольца; и, необязательно, 2 R8 на одном атоме углерода могут быть взяты вместе, совместно с атомом, к которому они присоединены, с образованием от 3- до 6-членного спироцикла. В первом случае этого аспекта каждый X2 представляет собой CH2CHR8, где R8 выбран из группы, состоящей из Н, С1-С3 алкила, C1-С3 алкила, замещенного ОН, С1-С3 алкила, замещенного ОС1-С3 алкилом, и С3-С6 циклоалкила. В конкретных примерах этого первого случая каждый X2 представляет собой CH2CHR8, где R8 выбран из группы, состоящей из Н, СН3, СН2ОН, СН2СН3, СН2СН2СН3, СН(СН3)2, СН2ОСН3, и циклопропила. Во втором случае этого аспекта каждый X2 представляет собой CHR8CHR8, где каждый R8 независимо выбран из группы, состоящей из Н, С1-С3 алкила, С1-С3 алкила, замещенного ОН, С1-С3 алкила, замещенного ОС1-С3 алкилом, и С3-С6 циклоалкила, и, необязательно, 2 R8 на разных атомах углерода взяты вместе совместно с атомами, к которым они присоединены, с образованием от 3- до 6-членного конденсированного кольца. В конкретных примерах этого второго случая каждый X2 представляет собой CHR8CHR8, где каждый R8 независимо выбран из группы, состоящей из Н и C1-С3 алкила, и, необязательно, 2 R8 на разных атомах углерода взяты вместе совместно с атомами, к которым они присоединены, с образованием от 3- до 6-членного конденсированного кольца. В третьем случае этого аспекта каждый X2 представляет собой CH2C(R8)2, где каждый R8 независимо выбран из группы, состоящей из Н, C1-С3 алкила, C1-С3 алкила, замещенного ОН, C1-С3 алкила, замещенного ОС1-С3 алкилом, и С3-С6 циклоалкила, и, необязательно, 2 R8 на одном атоме углерода взяты вместе совместно с атомами, к которым они присоединены, с образованием от 3- до 6-членного спироцикла. В конкретных примерах этого третьего случая каждый X2 представляет собой CH2C(R8)2, где каждый R8 независимо выбран из группы, состоящей из Н и C1-С3 алкила, и, необязательно, 2 R8 на одном атоме углерода взяты вместе совместно с атомами, к которым они присоединены, с образованием от 3- до 6-членного спироцикла. В этом аспекте все другие группы являются такими, как указано в общей формуле (I) первого варианта осуществления или в первом-шестом аспектах, описанных выше.In the seventh aspect of the first embodiment, each X 2 is independently selected from (C(R 8 ) 2 ) (1-3) , wherein each R 8 is independently selected from the group consisting of H, halogen, C 1 -C 6 alkyl, CN, OR 6 , N(R 6 ) 2 , C 1 -C 6 haloalkyl, C 3 -C 6 cycloalkyl, C 1 -C 6 alkyl substituted with OR 6 , and C 1 -C 6 alkyl substituted with N(R 6 ) 2 ; optionally, the 2 R 8 on different carbon atoms can be taken together with the atoms to which they are attached to form a 3- to 6-membered fused ring; and, optionally, 2 R 8 on one carbon atom can be taken together, together with the atom to which they are attached, to form a 3- to 6-membered spirocycle. In the first case of this aspect, each X 2 represents CH 2 CHR 8 where R 8 is selected from the group consisting of H, C 1 -C 3 alkyl, C 1 -C 3 alkyl substituted with OH, C 1 -C 3 alkyl, substituted OS 1 -C 3 alkyl, and C 3 -C 6 cycloalkyl. In specific examples of this first case, each X 2 is CH 2 CHR 8 , where R 8 is selected from the group consisting of H, CH 3 , CH 2 OH, CH 2 CH 3 , CH 2 CH 2 CH 3 , CH(CH 3 ) 2 , CH 2 OCH 3 , and cyclopropyl. In the second case of this aspect, each X 2 is CHR 8 CHR 8 wherein each R 8 is independently selected from the group consisting of H, C 1 -C 3 alkyl, C 1 -C 3 alkyl substituted with OH, C 1 -C 3 alkyl substituted with OC 1 -C 3 alkyl, and C 3 -C 6 cycloalkyl, and optionally 2 R 8 on different carbon atoms are taken together with the atoms to which they are attached to form a 3- to 6-membered fused rings. In specific examples of this second case, each X 2 is CHR 8 CHR 8 , where each R 8 is independently selected from the group consisting of H and C 1 -C 3 alkyl, and, optionally, 2 R 8 on different carbon atoms are taken together together with the atoms to which they are attached to form a 3- to 6-membered fused ring. In a third embodiment of this aspect, each X 2 is CH 2 C(R 8 ) 2 , wherein each R 8 is independently selected from the group consisting of H, C 1 -C 3 alkyl, C 1 -C 3 alkyl, substituted OH, C 1 -C 3 alkyl substituted with OC 1 -C 3 alkyl, and C 3 -C 6 cycloalkyl, and optionally 2 R 8 on one carbon atom are taken together with the atoms to which they are attached to form 3- to 6-membered spirocycle. In specific examples of this third case, each X 2 is CH 2 C(R 8 ) 2 , where each R 8 is independently selected from the group consisting of H and C 1 -C 3 alkyl, and optionally 2 R 8 on one atom carbons are taken together with the atoms to which they are attached to form a 3- to 6-membered spirocycle. In this aspect, all other groups are as specified in the general formula (I) of the first embodiment or in the first to sixth aspects described above.
В восьмом аспекте первого варианта осуществления каждый X3 независимо выбран из группы, состоящей из COOR6, C(O)SR6, C(S)OR6, SO2R6, C(O)N(R9)2, и CN. В примерах этого аспекта каждый X3 независимо выбран из группы, состоящей из COOR6, SO2R6, C(O)N(R9)2, и CN. В конкретных примерах этого аспекта каждый X3 независимо выбран из группы, состоящей из COOR6, C(O)N(R9)2, и CN. В даже более конкретных случаях этого аспекта каждый X3 независимо выбран из группы, состоящей из СООН, СООСН3, CONH2, и CN. В этом аспекте все другие группы являются такими, как указано в общей формуле (I) первого варианта осуществления или в первом-седьмом аспектах, описанных выше.In the eighth aspect of the first embodiment, each X 3 is independently selected from the group consisting of COOR 6 , C(O)SR 6 , C(S)OR 6 , SO 2 R 6 , C(O)N(R 9 ) 2 , and CN. In examples of this aspect, each X 3 is independently selected from the group consisting of COOR 6 . SO 2 R 6 , C(O)N(R 9 ) 2 , and CN. In specific examples of this aspect, each X 3 is independently selected from the group consisting of COOR 6 , C(O)N(R 9 ) 2 , and CN. In even more specific cases of this aspect, each X 3 is independently selected from the group consisting of COOH, COOCH 3 , CONH 2 , and CN. In this aspect, all other groups are as specified in the general formula (I) of the first embodiment or in the first to seventh aspects described above.
В девятом аспекте первого варианта осуществления каждый R9 независимо выбран из группы, состоящей из Н, COOR6, и SO2R6. В примерах этого аспекта каждый R9 независимо представляет собой Н. В этом аспекте все другие группы являются такими, как указано в общей формуле (I) первого варианта осуществления или в первом-восьмом аспектах, описанных выше.In the ninth aspect of the first embodiment, each R 9 is independently selected from the group consisting of H, COOR 6 , and SO 2 R 6 . In the examples of this aspect, each R 9 independently represents H. In this aspect, all other groups are as specified in the general formula (I) of the first embodiment or in the first to eighth aspects described above.
Десятый аспект первого варианта осуществления относится к фармацевтической композиции, где указанная фармацевтическая композиция содержит (а) соединение в соответствии с приведенной выше общей формулой (I) первого варианта осуществления или с первым-девятым аспектами, описанными выше, или его фармацевтически приемлемую соль; и (b) фармацевтически приемлемый носитель.The tenth aspect of the first embodiment relates to a pharmaceutical composition, wherein said pharmaceutical composition contains (a) a compound according to the above general formula (I) of the first embodiment or the first to ninth aspects described above, or a pharmaceutically acceptable salt thereof; and (b) a pharmaceutically acceptable carrier.
Одиннадцатый аспект первого варианта осуществления относится к способам индукции иммунного ответа у пациента, нуждающегося в терапии, включающим введение пациенту терапевтически эффективного количества соединения в соответствии с приведенной выше общей формулой (I) первого варианта осуществления или с первым-девятым аспектами, описанными выше, или его фармацевтически приемлемой соли.An eleventh aspect of the first embodiment relates to methods of inducing an immune response in a patient in need of therapy, comprising administering to the patient a therapeutically effective amount of a compound according to the above general formula (I) of the first embodiment or the first to ninth aspects described above, or pharmaceutically acceptable salt.
Двенадцатый аспект первого варианта осуществления относится к способам индукции иммунного ответа у пациента, нуждающегося в терапии, включающим введение пациенту терапевтически эффективного количества композиции согласно десятому аспекту, описанному выше.A twelfth aspect of the first embodiment relates to methods of inducing an immune response in a patient in need of therapy, comprising administering to the patient a therapeutically effective amount of a composition according to the tenth aspect described above.
Тринадцатый аспект первого варианта осуществления относится к способам индукции STING-зависимой продукции интерферона типа I у пациента, нуждающегося в терапии, включающим введение пациенту терапевтически эффективного количества соединения согласно приведенной выше общей формуле (I) первого варианта осуществления или с первого по девятый аспектам, описанным выше, или его фармацевтически приемлемой соли.A thirteenth aspect of the first embodiment relates to methods for inducing STING-dependent production of type I interferon in a patient in need of therapy, comprising administering to the patient a therapeutically effective amount of a compound according to the above general formula (I) of the first embodiment or the first to ninth aspects described above , or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
Четырнадцатый аспект первого варианта осуществления относится к способам индукции STING-зависимой продукции интерферона I типа у пациента, нуждающегося в терапии, включающим введение этому пациенту терапевтически эффективного количества композиции согласно десятому аспекту, описанному выше.A fourteenth aspect of the first embodiment relates to methods of inducing STING-dependent type I interferon production in a patient in need of therapy, comprising administering to the patient a therapeutically effective amount of a composition according to the tenth aspect described above.
Пятнадцатый аспект первого варианта осуществления относится к способам индукции STING-зависимой продукции цитокинов у пациента, нуждающегося в терапии, включающим введение этому пациенту терапевтически эффективного количества соединения согласно приведенной выше общей формуле (I) первого варианта осуществления или с первого по девятый аспектам, описанным выше, или его фармацевтически приемлемой соли.A fifteenth aspect of the first embodiment relates to methods for inducing STING-dependent cytokine production in a patient in need of therapy, comprising administering to the patient a therapeutically effective amount of a compound according to the above general formula (I) of the first embodiment or the first to ninth aspects described above, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
Шестнадцатый аспект первого варианта осуществления относится к способам индукции STING-зависимой продукции цитокинов у пациента, нуждающегося в терапии, включающим введение этому пациенту терапевтически эффективного количества композиции согласно десятому аспекту, описанному выше.A sixteenth aspect of the first embodiment relates to methods of inducing STING-dependent cytokine production in a patient in need of therapy, comprising administering to the patient a therapeutically effective amount of a composition according to the tenth aspect described above.
Семнадцатый аспект первого варианта осуществления относится к способам лечения нарушения пролиферации клеток у пациента, нуждающегося в терапии, включающим введение этому пациенту терапевтически эффективного количества соединения общей формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В случаях этого семнадцатого аспекта первого варианта осуществления нарушение пролиферации клеток представляет собой рак.A seventeenth aspect of the first embodiment relates to methods of treating a cell proliferation disorder in a patient in need of therapy, comprising administering to the patient a therapeutically effective amount of a compound of general formula (I) or a pharmaceutically acceptable salt thereof. In cases of this seventeenth aspect of the first embodiment, the cell proliferation disorder is cancer.
Восемнадцатый аспект первого варианта осуществления относится к способам лечения нарушения пролиферации клеток у пациента, нуждающегося в терапии, при этом указанный способ включает введение пациенту терапевтически эффективного количества композиции в соответствии с одиннадцатым аспектом, описанным выше. В случаях этого восемнадцатого аспекта первого варианта осуществления нарушение пролиферации клеток представляет собой рак.An eighteenth aspect of the first embodiment relates to methods of treating a cell proliferation disorder in a patient in need of therapy, the method comprising administering to the patient a therapeutically effective amount of a composition in accordance with the eleventh aspect described above. In cases of this eighteenth aspect of the first embodiment, the cell proliferation disorder is cancer.
В каждом аспекте первого варианта осуществления, описанного в настоящем документе, переменные R1, R2, R3, R4, R6, R8, R9, А, X1, X2 и X3 общей формулы (I) первого варианта осуществления и его различных аспектов и случаев, каждый независимо выбран из каждого, при условии, что, по меньшей мере, один из R1, R2, R3, R4, R6, R8, и R9 не представляет собой Н.In each aspect of the first embodiment described herein, the variables R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 6 , R 8 , R 9 , A, X 1 , X 2 and X 3 of the general formula (I) of the first embodiment and its various aspects and instances, each independently selected from each, with the proviso that at least one of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 6 , R 8 , and R 9 is not N.
Второй вариант осуществления относится к соединениям общей формулы (II):The second embodiment relates to compounds of general formula (II):
или их фармацевтически приемлемой соли, где каждый A-R1 независимо выбран из группы, состоящей из C-R1 и N; где каждый R1 независимо выбран из группы, состоящей из Н, галогена, OR6, N(R6)2, C1-С6 алкила, C1-C6 галоалкила, C1-С6 алкила, замещенного OR6, C1-С6 алкила, замещенного N(R6)2, COOR6, и C(O)N(R6)2; каждый R2 независимо выбран из группы, состоящей из Н, галогена, CN, OR6, N(R6)2, COOR6, C(O)N(R6)2, SO2R6, C1-C6 алкила, C1-С6 галоалкила, C1-С6 алкила, замещенного OR6, С2-С6 алкенила, С2-С6 галоалкенила, С2-С6 алкенила, замещенного OR6, С2-С6 алкинила, С2-С6 галоалкинила, С2-С6 алкинила, замещенного OR6, С3-С6 циклоалкила, и от 3- до 6-членного гетероциклического кольца, включая 1-2 кольцевых члена, выбранных из группы, состоящей из О, S и N(R6); R3 и R4 независимо выбраны из группы, состоящей из O-(C1-C4 алкилен или галоалкилен), С1-С5 алкилена или галоалкилена, и N(R6)-(C1-C4 алкилен или галоалкилен); необязательно, R4 может быть взят совместно с соседним C-R1 и атомом, к которому они присоединены, с образованием конденсированного кольца Е, которое выбрано из фенила или 5- или 6-членного гетероциклического кольца, включая 1-2 кольцевых члена, выбранных из группы, состоящей из О, S, N и N(R6), где связь с R3 от указанного кольца Е проходит от атома на указанном кольце Е с открытой валентностью для замещения, и где указанные фенил или гетероциклическое кольцо необязательно замещены одним или более членами группы, состоящей из галогена, C1-С3 алкила, и C1-С3 галоалкила; каждый R6 независимо выбран из группы, состоящей из Н, C1-C6 алкила, и C1-С6 галоалкила; каждый X1 независимо выбран из группы, состоящей из С=O, -СН2-, -CHF-, и -CF2-; каждый X2 независимо выбран из (C(R8)2)(1-3), где каждый R8 независимо выбран из группы, состоящей из Н, галогена, C1-С6 алкила, CN, OR6, N(R6)2, C1-С6 галоалкила, С3-С6 циклоалкила, C1-C6 алкила, замещенного OR6, и C1-C6 алкила, замещенного N(R6)2; необязательно, 2 R8 на разных атомах углерода могут быть взяты вместе совместно с атомами, к которым они присоединены, с образованием от 3- до 6-членного конденсированного кольца; и, необязательно, 2 R8 на одном атоме углерода могут быть взяты вместе совместно с атомом, к которому они присоединены, с образованием от 3- до 6-членного спироцикла; каждый X3 независимо выбран из группы, состоящей из COOR6, C(O)SR6, C(S)OR6, SO2R6, C(O)N(R9)2, и CN; и каждый R9 независимо выбран из группы, состоящей из Н, COOR6, и SO2R6.or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein each AR 1 is independently selected from the group consisting of CR 1 and N; where each R 1 is independently selected from the group consisting of H, halogen, OR 6 , N(R 6 ) 2 , C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 haloalkyl, C 1 -C 6 alkyl substituted with OR 6 , C 1 -C 6 alkyl substituted with N(R 6 ) 2 , COOR 6 , and C(O)N(R 6 ) 2 ; each R 2 is independently selected from the group consisting of H, halogen, CN, OR 6 , N(R 6 ) 2 , COOR 6 , C(O)N(R 6 ) 2 , SO 2 R 6 , C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 haloalkyl, C 1 -C 6 alkyl substituted with OR 6 , C 2 -C 6 alkenyl, C 2 -C 6 haloalkenyl, C 2 -C 6 alkenyl substituted with OR 6 , C 2 -C 6 alkynyl, C 2 -C 6 haloalkynyl, C 2 -C 6 alkynyl substituted with OR 6 , C 3 -C 6 cycloalkyl, and a 3- to 6-membered heterocyclic ring, including 1-2 ring members selected from the group consisting from O, S and N(R 6 ); R 3 and R 4 are independently selected from the group consisting of O-(C 1 -C 4 alkylene or haloalkylene), C 1 -C 5 alkylene or haloalkylene, and N(R 6 )-(C 1 -C 4 alkylene or haloalkylene ); Optionally, R 4 can be taken together with an adjacent CR 1 and the atom to which they are attached to form a fused ring E, which is selected from phenyl or a 5- or 6-membered heterocyclic ring, including 1-2 ring members selected from the group consisting of O, S, N and N(R 6 ), wherein the bond to R 3 from said ring E is from an atom on said ring E with open valence for substitution, and wherein said phenyl or heterocyclic ring is optionally substituted by one or more members a group consisting of halogen, C 1 -C 3 alkyl, and C 1 -C 3 haloalkyl; each R 6 is independently selected from the group consisting of H, C 1 -C 6 alkyl, and C 1 -C 6 haloalkyl; each X 1 is independently selected from the group consisting of C=O, -CH 2 -, -CHF-, and -CF 2 -; each X 2 is independently selected from (C(R 8 ) 2 ) (1-3) wherein each R 8 is independently selected from the group consisting of H, halogen, C 1 -C 6 alkyl, CN, OR 6 , N(R 6 ) 2 , C 1 -C 6 haloalkyl, C 3 -C 6 cycloalkyl, C 1 -C 6 alkyl substituted with OR 6 and C 1 -C 6 alkyl substituted with N(R 6 ) 2 ; optionally, the 2 R 8 on different carbon atoms can be taken together with the atoms to which they are attached to form a 3- to 6-membered fused ring; and, optionally, the 2 R 8 on one carbon atom can be taken together with the atom to which they are attached to form a 3- to 6-membered spirocycle; each X 3 is independently selected from the group consisting of COOR 6 , C(O)SR 6 , C(S)OR 6 , SO 2 R 6 , C(O)N(R 9 ) 2 , and CN; and each R 9 is independently selected from the group consisting of H, COOR 6 , and SO 2 R 6 .
В первом аспекте второго варианта осуществления каждый A-R1 независимо выбран из группы, состоящей из C-R1 и N. В конкретных примерах этого аспекта каждый независимо выбран из группы, состоящей из и В более конкретных случаях этого аспекта каждый независимо выбран из группы, состоящей из и В этом аспекте все другие группы имеют значения, указанные в приведенной выше общей формуле (II) второго варианта осуществления.In the first aspect of the second embodiment, each AR 1 is independently selected from the group consisting of CR 1 and N. In specific examples of this aspect, each independently selected from a group consisting of And In more specific cases of this aspect, each independently selected from a group consisting of And In this aspect, all other groups have the meanings specified in the above general formula (II) of the second embodiment.
Во втором аспекте второго варианта осуществления каждый R1 независимо выбран из группы, состоящей из Н, галогена, OR6, N(R6)2, C1-C6 алкила, C1-C6 галоалкила, C1-C6 алкила, замещенного OR6, C1-С6 алкила, замещенного N(R6)2, COOR6, и C(O)N(R6)2. В примерах этого аспекта каждый R1 независимо выбран из группы, состоящей из Н, галогена, C1-С3 алкила и C1-С3 галоалкила. В конкретных примерах этого аспекта каждый R1 независимо выбран из группы, состоящей из Н и галогена. В более конкретных случаях этого аспекта каждый R1 независимо выбран из группы, состоящей из Н и F. В этом аспекте все другие группы имеют значения, указанные в приведенной выше общей формуле (II) второго варианта осуществления или в первом аспекте.In a second aspect of the second embodiment, each R 1 is independently selected from the group consisting of H, halogen, OR 6 , N(R 6 ) 2 , C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 haloalkyl, C 1 -C 6 alkyl , substituted OR 6 , C 1 -C 6 alkyl, substituted N(R 6 ) 2 , COOR 6 , and C(O)N(R 6 ) 2 . In examples of this aspect, each R 1 is independently selected from the group consisting of H, halogen, C 1 -C 3 alkyl, and C 1 -C 3 haloalkyl. In specific examples of this aspect, each R 1 is independently selected from the group consisting of H and halogen. In more specific cases of this aspect, each R 1 is independently selected from the group consisting of H and F. In this aspect, all other groups have the meanings specified in the above general formula (II) of the second embodiment or in the first aspect.
В третьем аспекте второго варианта осуществления каждый R2 независимо выбран из группы, состоящей из Н, галогена, CN, OR6, N(R6)2, COOR6, C(O)N(R6)2, SO2R6, C1-C6 алкила, C1-С6 галоалкила, C1-C6 алкила, замещенного OR6, С2-С6 алкенила, С2-С6 галоалкенила, С2-С6 алкенила, замещенного OR6, С2-С6 алкинила, С2-С6 галоалкинила, С2-С6 алкинила, замещенного OR6, С3-С6 циклоалкила, и от 3- до 6-членного гетероциклического кольца, включая 1-2 кольцевых члена, выбранных из группы, состоящей из О, S и N(R6). В примерах этого аспекта каждый R2 независимо выбран из группы, состоящей из Н, галогена, С1-С3 алкила, С1-С3 галоалкила, ОС1-С3 алкила, С2-С3 алкенила и N(R6)2. В конкретных примерах этого аспекта каждый R2 независимо выбран из группы, состоящей из Н, Br, Cl, СН3, СН2СН3, СН=СН2, ОСН3, OCFH2, OCF2H, OCF3, и N(R6)2. В более конкретных случаях этого аспекта каждый R2 независимо выбран из группы, состоящей из Н, СН3, ОСН3, и OCF2H. В этом аспекте все другие группы имеют значения, указанные в общей формуле (II) второго варианта осуществления или в первом или втором аспектах, описанных выше.In a third aspect of the second embodiment, each R 2 is independently selected from the group consisting of H, halogen, CN, OR 6 , N(R 6 ) 2 , COOR 6 , C(O)N(R 6 ) 2 , SO 2 R 6 , C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 haloalkyl, C 1 -C 6 alkyl substituted with OR 6 , C 2 -C 6 alkenyl, C 2 -C 6 haloalkenyl, C 2 -C 6 alkenyl substituted with OR 6 , C 2 -C 6 alkynyl, C 2 -C 6 haloalkynyl, C 2 -C 6 alkynyl substituted with OR 6 , C 3 -C 6 cycloalkyl, and 3- to 6-membered heterocyclic ring, including 1-2 ring members , selected from the group consisting of O, S and N(R 6 ). In examples of this aspect, each R 2 is independently selected from the group consisting of H, halogen, C 1 -C 3 alkyl, C 1 -C 3 haloalkyl, OC 1 -C 3 alkyl, C 2 -C 3 alkenyl, and N(R 6 ) 2 . In specific examples of this aspect, each R 2 is independently selected from the group consisting of H, Br, Cl, CH 3 , CH 2 CH 3 , CH=CH 2 , OCH 3 , OCFH 2 , OCF 2 H, OCF 3 , and N( R 6 ) 2 . In more specific cases of this aspect, each R 2 is independently selected from the group consisting of H, CH 3 , OCH 3 , and OCF 2 H. In this aspect, all other groups have the meanings set forth in the general formula (II) of the second embodiment or in the first or second aspects described above.
В четвертом аспекте второго варианта осуществления R3 и R4 независимо выбраны из группы, состоящей из O-(C1-C4 алкилен или галоалкилен), С1-С5 алкилена или галоалкилена, и N(R6)-(C1-C4 алкилен или галоалкилен); необязательно, R4 может быть взят совместно с соседним C-R1 и атомом, к которому они присоединены, с образованием конденсированного кольца Е, которое выбрано из фенила или 5- или 6-членного гетероциклического кольца, включая 1-2 кольцевых члена, выбранных из группы, состоящей из О, S, N и N(R6), где связь с R3 от указанного кольца Е проходит от атома на указанном кольце Е с открытой валентностью для замещения, и где указанные фенил или гетероциклическое кольцо необязательно замещены одним или более членами группы, состоящей из галогена, С1-С3 алкила, и С1-С3 галоалкила. В примерах этого четвертого аспекта R3-R4 выбран из группы, состоящей из -(CH2)2-8-, -O(CH2)1-7-, -O(CH2)1-6O-, -NH(CH2)1-7-, и -NH(CH2)1-6O-. В отдельных случаях этого четвертого аспекта R3-R4 выбран из группы, состоящей из -(СН2)2-, -(СН2)3-, -(СН2)4-, -O(СН2)2-, -O(СН2)3-, -O(СН2)4-, -O(СН2)2O-, -O(СН2)3O-, -ОСН2СН(СН3)CH2O-, -O(CH2)4O-, -O(CH2)5O-, -NH(CH2)2-, -NH(CH2)3-, и -NH(CH2)3O-. В конкретных случаях этого четвертого аспекта R4 может быть взят совместно с соседним C-R1 и атомом, к которому они присоединены, с образованием конденсированного кольца Е, которое выбрано из фенила или 5- или 6-членного гетероциклического кольца, включая 1-2 кольцевых члена, выбранных из группы, состоящей из О, S, N и N(R6), где связь с R3 от указанного кольца Е проходит от атома на указанном кольце Е с открытой валентностью для замещения, и где указанные фенил или гетероциклическое кольцо необязательно замещены одним или более членами группы, состоящей из галогена, C1-С3 алкила и C1-С3 галоалкила. В этом случае структура общей формулы (II) представляет собой формулу (IIa):In the fourth aspect of the second embodiment, R 3 and R 4 are independently selected from the group consisting of O-(C 1 -C 4 alkylene or haloalkylene), C 1 -C 5 alkylene or haloalkylene, and N(R 6 )-(C 1 -C 4 alkylene or haloalkylene); Optionally, R 4 can be taken together with an adjacent CR 1 and the atom to which they are attached to form a fused ring E, which is selected from phenyl or a 5- or 6-membered heterocyclic ring, including 1-2 ring members selected from the group consisting of O, S, N and N(R 6 ), wherein the bond to R 3 from said ring E is from an atom on said ring E with open valence for substitution, and wherein said phenyl or heterocyclic ring is optionally substituted by one or more members a group consisting of halogen, C 1 -C 3 alkyl, and C 1 -C 3 haloalkyl. In examples of this fourth aspect, R 3 -R 4 is selected from the group consisting of -(CH 2 ) 2-8 -, -O(CH 2 ) 1-7 -, -O(CH 2 ) 1-6 O-, - NH(CH 2 ) 1-7 -, and -NH(CH 2 ) 1-6 O-. In certain cases of this fourth aspect, R 3 -R 4 is selected from the group consisting of -(CH 2 ) 2 -, -(CH 2 ) 3 -, -(CH 2 ) 4 -, -O(CH 2 ) 2 -, -O(CH 2 ) 3 -, -O(CH 2 ) 4 -, -O(CH 2 ) 2 O-, -O(CH 2 ) 3 O-, -OSH 2 CH(CH 3 )CH 2 O- , -O(CH 2 ) 4 O-, -O(CH 2 ) 5 O-, -NH(CH 2 ) 2 -, -NH(CH 2 ) 3 -, and -NH(CH 2 ) 3 O-. In particular cases of this fourth aspect, R 4 can be taken together with an adjacent CR 1 and the atom to which they are attached to form a fused ring E that is selected from phenyl or a 5 or 6 membered heterocyclic ring, including 1-2 ring members selected from the group consisting of O, S, N and N(R 6 ), wherein the bond to R 3 from said ring E is from an atom on said ring E with open valence for substitution, and wherein said phenyl or heterocyclic ring is optionally substituted one or more members of the group consisting of halogen, C 1 -C 3 alkyl and C 1 -C 3 haloalkyl. In this case, the structure of the general formula (II) is formula (IIa):
где все группы имеют значения, указанные в общей формуле (II). В этом аспекте все другие группы имеют значения, указанные в общей формуле (II) второго варианта осуществления или в первом-третьем аспектах, описанных выше.where all groups have the meanings indicated in the general formula (II). In this aspect, all other groups have the meanings specified in the general formula (II) of the second embodiment or in the first to third aspects described above.
В пятом аспекте второго варианта осуществления каждый R6 независимо выбран из группы, состоящей из Н, C1-С6 алкила и C1-С6 галоалкила. В примерах этого аспекта каждый R6 независимо выбран из группы, состоящей из Н, C1-С3 алкила, и С1-С3 галоалкила. В конкретных примерах этого аспекта каждый R6 независимо выбран из группы, состоящей из Н, СН3, и CHF2. В этом аспекте все другие группы имеют значения, указанные в общей формуле (II) второго варианта осуществления или в первом-четвертом аспектах, описанных выше.In the fifth aspect of the second embodiment, each R 6 is independently selected from the group consisting of H, C 1 -C 6 alkyl and C 1 -C 6 haloalkyl. In examples of this aspect, each R 6 is independently selected from the group consisting of H, C 1 -C 3 alkyl, and C 1 -C 3 haloalkyl. In specific examples of this aspect, each R 6 is independently selected from the group consisting of H, CH 3 , and CHF 2 . In this aspect, all other groups have the meanings specified in the general formula (II) of the second embodiment or in the first to fourth aspects described above.
В шестом аспекте второго варианта осуществления каждый X1 независимо выбран из группы, состоящей из С=O, -CH2-, -CHF-, и -CF2-. В примерах этого аспекта X1 выбран из группы, состоящей из С=O и -СН2-. В конкретных примерах этого аспекта X1 представляет собой С=O. В этом варианте осуществления все другие группы имеют значения, указанные в общей формуле (II) второго варианта осуществления или в первом-пятом аспектах, описанных выше.In the sixth aspect of the second embodiment, each X 1 is independently selected from the group consisting of C=O, -CH 2 -, -CHF-, and -CF 2 -. In examples of this aspect, X 1 is selected from the group consisting of C=O and -CH 2 -. In specific examples of this aspect, X 1 is C=O. In this embodiment, all other groups have the meanings specified in the general formula (II) of the second embodiment or in the first to fifth aspects described above.
В седьмом аспекте второго варианта осуществления каждый X2 независимо выбран из (C(R8)2)(1-3), где каждый R8 независимо выбран из группы, состоящей из Н, галогена, C1-C6 алкила, CN, OR6, N(R6)2, C1-С6 галоалкила, С3-С6 циклоалкила, C1-C6 алкила, замещенного OR6, и C1-С6 алкила, замещенного N(R6)2; необязательно, 2 R8 на разных атомах углерода могут быть взяты вместе совместно с атомами, к которым они присоединены, с образованием от 3- до 6-членного конденсированного кольца; и, необязательно, 2 R8 на одном атоме углерода могут быть взяты вместе совместно с атомом, к которому они присоединены, с образованием от 3- до 6-членного спироцикла. В первом случае этого аспекта каждый X2 представляет собой CH2CHR8, где R8 выбран из группы, состоящей из Н, C1-С3 алкила, C1-С3 алкила, замещенного ОН, C1-С3 алкила, замещенного ОС1-С3 алкилом, и С3-С6 циклоалкила. В отдельных примерах этого первого случая каждый X2 представляет собой CH2CHR8, где R8 выбран из группы, состоящей из Н, СН3, СН2ОН, СН2СН3, СН2СН2СН3, СН(СН3)2, СН2ОСН3, и циклопропила. Во втором случае этого аспекта каждый X2 представляет собой CHR8CHR8, где каждый R8 независимо выбран из группы, состоящей из Н, С1-С3 алкила, С1-С3 алкила, замещенного ОН, С1-С3 алкила, замещенного ОС1-С3 алкилом, и С3-С6 циклоалкила, и, необязательно, 2 R8 на разных атомах углерода взяты вместе совместно с атомами, к которым они присоединены, с образованием от 3- до 6-членного конденсированного кольца. В отдельных примерах этого второго случая каждый X2 представляет собой CHR8CHR8, где каждый R8 независимо выбран из группы, состоящей из Н и C1-С3 алкила, и, необязательно, 2 R8 на разных атомах углерода взяты вместе совместно с атомами, к которым они присоединены, с образованием от 3- до 6-членного конденсированного кольца. В третьем случае этого аспекта каждый X2 представляет собой CH2C(R8)2, где каждый R8 независимо выбран из группы, состоящей из Н, C1-С3 алкила, C1-С3 алкила, замещенного ОН, C1-С3 алкила, замещенного ОС1-С3 алкилом, и С3-С6 циклоалкила, и, необязательно, 2 R8 на одном атоме углерода взяты вместе совместно с атомами, к которым они присоединены, с образованием от 3- до 6-членного спироцикла. В отдельных примерах этого третьего случая каждый X2 представляет собой CH2C(R8)2, где каждый R8 независимо выбран из группы, состоящей из Н и C1-С3 алкила, и, необязательно, 2 R8 на одном атоме углерода взяты вместе совместно с атомами, к которым они присоединены, с образованием от 3- до 6-членного спироцикла. В этом аспекте все другие группы имеют значения, указанные в общей формуле (II) второго варианта осуществления или в первом-шестом аспектах, описанных выше.In the seventh aspect of the second embodiment, each X 2 is independently selected from (C(R 8 ) 2 ) (1-3) , wherein each R 8 is independently selected from the group consisting of H, halogen, C 1 -C 6 alkyl, CN, OR 6 , N(R 6 ) 2 , C 1 -C 6 haloalkyl, C 3 -C 6 cycloalkyl, C 1 -C 6 alkyl substituted with OR 6 , and C 1 -C 6 alkyl substituted with N(R 6 ) 2 ; optionally, the 2 R 8 on different carbon atoms can be taken together with the atoms to which they are attached to form a 3- to 6-membered fused ring; and, optionally, the 2 R 8 on one carbon atom can be taken together with the atom to which they are attached to form a 3- to 6-membered spirocycle. In the first case of this aspect, each X 2 represents CH 2 CHR 8 where R 8 is selected from the group consisting of H, C 1 -C 3 alkyl, C 1 -C 3 alkyl substituted by OH, C 1 -C 3 alkyl, substituted OS 1 -C 3 alkyl, and C 3 -C 6 cycloalkyl. In certain examples of this first case, each X 2 is CH 2 CHR 8 , where R 8 is selected from the group consisting of H, CH 3 , CH 2 OH, CH 2 CH 3 , CH 2 CH 2 CH 3 , CH(CH 3 ) 2 , CH 2 OCH 3 , and cyclopropyl. In the second case of this aspect, each X 2 is CHR 8 CHR 8 wherein each R 8 is independently selected from the group consisting of H, C 1 -C 3 alkyl, C 1 -C 3 alkyl substituted with OH, C 1 -C 3 alkyl substituted with OC 1 -C 3 alkyl, and C 3 -C 6 cycloalkyl, and optionally 2 R 8 on different carbon atoms are taken together with the atoms to which they are attached to form a 3- to 6-membered fused rings. In certain examples of this second case, each X 2 is CHR 8 CHR 8 , wherein each R 8 is independently selected from the group consisting of H and C 1 -C 3 alkyl, and, optionally, 2 R 8 on different carbon atoms are taken together together with the atoms to which they are attached to form a 3- to 6-membered fused ring. In a third embodiment of this aspect, each X 2 is CH 2 C(R 8 ) 2 , wherein each R 8 is independently selected from the group consisting of H, C 1 -C 3 alkyl, C 1 -C 3 alkyl, substituted OH, C 1 -C 3 alkyl substituted with OC 1 -C 3 alkyl, and C 3 -C 6 cycloalkyl, and optionally 2 R 8 on one carbon atom are taken together with the atoms to which they are attached to form 3- to 6-membered spirocycle. In certain examples of this third case, each X 2 is CH 2 C(R 8 ) 2 , where each R 8 is independently selected from the group consisting of H and C 1 -C 3 alkyl, and optionally 2 R 8 on one atom carbons are taken together with the atoms to which they are attached to form a 3- to 6-membered spirocycle. In this aspect, all other groups have the meanings specified in the general formula (II) of the second embodiment or in the first to sixth aspects described above.
В восьмом аспекте второго варианта осуществления каждый X3 независимо выбран из группы, состоящей из COOR6, C(O)SR6, C(S)OR6, SO2R6, C(O)N(R9)2, и CN. В примерах этого аспекта каждый X3 независимо выбран из группы, состоящей из COOR6, SO2R6, C(O)N(R9)2, и CN. В конкретных примерах этого аспекта каждый X3 независимо выбран из группы, состоящей из COOR6, C(O)N(R9)2, и CN. В даже более конкретных случаях этого аспекта каждый X3 независимо выбран из группы, состоящей из СООН, СООСН3, CONH2, и CN. В этом аспекте все другие группы имеют значения, указанные в общей формуле (II) второго варианта осуществления или в первом-седьмом аспектах, описанных выше.In the eighth aspect of the second embodiment, each X 3 is independently selected from the group consisting of COOR 6 , C(O)SR 6 , C(S)OR 6 , SO 2 R 6 , C(O)N(R 9 ) 2 , and CN. In examples of this aspect, each X 3 is independently selected from the group consisting of COOR 6 . SO 2 R 6 , C(O)N(R 9 ) 2 , and CN. In specific examples of this aspect, each X 3 is independently selected from the group consisting of COOR 6 , C(O)N(R 9 ) 2 , and CN. In even more specific cases of this aspect, each X 3 is independently selected from the group consisting of COOH, COOCH 3 , CONH 2 , and CN. In this aspect, all other groups have the meanings specified in the general formula (II) of the second embodiment or in the first to seventh aspects described above.
В девятом аспекте второго варианта осуществления каждый R9 независимо выбран из группы, состоящей из Н, COOR6, и SO2R6. В примерах этого аспекта каждый R9 независимо представляет собой Н. В этом аспекте все другие группы имеют значения, указанные в общей формуле (II) второго варианта осуществления или в первом-восьмом аспектах, описанных выше.In the ninth aspect of the second embodiment, each R 9 is independently selected from the group consisting of H, COOR 6 , and SO 2 R 6 . In the examples of this aspect, each R 9 independently represents H. In this aspect, all other groups have the meanings specified in the general formula (II) of the second embodiment or in the first to eighth aspects described above.
Десятый аспект второго варианта осуществления относится к фармацевтической композиции, где указанная фармацевтическая композиция содержит (а) соединение согласно вышеуказанной общей формуле (II) второго варианта осуществления или первому-девятому аспектам, описанным выше, или его фармацевтически приемлемую соль; и (b) фармацевтически приемлемый носитель.The tenth aspect of the second embodiment relates to a pharmaceutical composition, wherein said pharmaceutical composition contains (a) a compound according to the above general formula (II) of the second embodiment or the first to ninth aspects described above, or a pharmaceutically acceptable salt thereof; and (b) a pharmaceutically acceptable carrier.
Одиннадцатый аспект второго варианта осуществления относится к способам индукции иммунного ответа у пациента, нуждающегося в терапии, включающим введение этому пациенту терапевтически эффективного количества соединения согласно вышеуказанной общей формуле (II) второго варианта осуществления или первому-девятому аспектам, описанным выше, или его фармацевтически приемлемой соли.An eleventh aspect of the second embodiment relates to methods of inducing an immune response in a patient in need of therapy, comprising administering to the patient a therapeutically effective amount of a compound according to the above general formula (II) of the second embodiment or the first to ninth aspects described above, or a pharmaceutically acceptable salt thereof .
Двенадцатый аспект второго варианта осуществления относится к способам индукции иммунного ответа у пациента, нуждающегося в терапии, включающим введение этому пациенту терапевтически эффективного количества композиции согласно десятому аспекту, описанному выше.A twelfth aspect of the second embodiment relates to methods of inducing an immune response in a patient in need of therapy, comprising administering to that patient a therapeutically effective amount of a composition according to the tenth aspect described above.
Тринадцатый аспект второго варианта осуществления относится к способам индукции STING-зависимой продукции интерферона I типа у пациента, нуждающегося в терапии, включающим введение этому пациенту терапевтически эффективного количества соединения согласно вышеуказанной общей формуле (II) второго варианта осуществления или первому-девятому аспектам, описанным выше, или его фармацевтически приемлемой соли.A thirteenth aspect of the second embodiment relates to methods for inducing STING-dependent production of type I interferon in a patient in need of therapy, comprising administering to the patient a therapeutically effective amount of a compound according to the above general formula (II) of the second embodiment or the first to ninth aspects described above, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
Четырнадцатый аспект второго варианта осуществления относится к способам индукции STING-зависимой продукции интерферона I типа у пациента, нуждающегося в терапии, включающим введение этому пациенту терапевтически эффективного количества композиции согласно десятому аспекту, описанному выше.A fourteenth aspect of the second embodiment relates to methods of inducing STING-dependent type I interferon production in a patient in need of therapy, comprising administering to the patient a therapeutically effective amount of a composition according to the tenth aspect described above.
Пятнадцатый аспект второго варианта осуществления относится к способам индукции STING-зависимой продукции цитокинов у пациента, нуждающегося в терапии, включающим введение этому пациенту терапевтически эффективного количества соединения согласно вышеуказанной общей формуле (II) второго варианта осуществления или первому-девятому аспектам, описанным выше, или его фармацевтически приемлемой соли.A fifteenth aspect of the second embodiment relates to methods for inducing STING-dependent cytokine production in a patient in need of therapy, comprising administering to the patient a therapeutically effective amount of a compound according to the above general formula (II) of the second embodiment or the first to ninth aspects described above, or pharmaceutically acceptable salt.
Шестнадцатый аспект второго варианта осуществления относится к способам индукции STING-зависимой продукции цитокинов у пациента, нуждающегося в терапии, включающим введение этому пациенту терапевтически эффективного количества композиции согласно десятому аспекту, описанному выше.A sixteenth aspect of the second embodiment relates to methods of inducing STING-dependent cytokine production in a patient in need of therapy, comprising administering to the patient a therapeutically effective amount of a composition according to the tenth aspect described above.
Семнадцатый аспект второго варианта осуществления относится к способам лечения нарушения пролиферации клеток у пациента, нуждающегося в терапии, включающим введение этому пациенту терапевтически эффективного количества соединения общей формулы (II) или его фармацевтически приемлемой соли. В случаях этого семнадцатого аспекта второго варианта осуществления нарушение пролиферации клеток представляет собой рак.A seventeenth aspect of the second embodiment relates to methods of treating a cell proliferation disorder in a patient in need of therapy, comprising administering to the patient a therapeutically effective amount of a compound of general formula (II) or a pharmaceutically acceptable salt thereof. In cases of this seventeenth aspect of the second embodiment, the cell proliferation disorder is cancer.
Восемнадцатый аспект второго варианта осуществления относится к способам лечения нарушения пролиферации клеток у пациента, нуждающегося в терапии, при этом указанный способ включает введение пациенту терапевтически эффективного количества композиции в соответствии с одиннадцатым аспектом, описанным выше. В случаях этого восемнадцатого аспекта второго варианта осуществления нарушение пролиферации клеток представляет собой рак.An eighteenth aspect of the second embodiment relates to methods of treating a cell proliferation disorder in a patient in need of therapy, the method comprising administering to the patient a therapeutically effective amount of a composition in accordance with the eleventh aspect described above. In cases of this eighteenth aspect of the second embodiment, the cell proliferation disorder is cancer.
В каждом аспекте второго варианта осуществления, описанного в настоящем документе, переменные R1, R2, R3, R4, R6, R8, R9, А, X1, X2, и X3 общей формулы (II) второго варианта осуществления и его различных аспектов и случаев, каждый независимо выбран из каждого, при условии, что, по меньшей мере, один из R1, R2, R3, R4, R6, R8, и R9 не представляет собой Н.In each aspect of the second embodiment described herein, the variables R1 , R2 , R3 , R4 , R6 , R8 , R9 , A, X1 , X2 , and X3 of general formula (II) of the second embodiment and its various aspects and instances, each independently selected from each, with the proviso that at least one of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 6 , R 8 , and R 9 does not represent by myself N.
Третий вариант осуществления относится к соединениям общей формулы (III):The third embodiment relates to compounds of general formula (III):
или их фармацевтически приемлемой соли, где каждый A-R1 независимо выбран из группы, состоящей из C-R1 и N; каждый R1 независимо выбран из группы, состоящей из Н, галогена, OR6, N(R6)2, C1-C6 алкила, C1-С6 галоалкила, C1-С6 алкила, замещенного OR6, C1-С6 алкила, замещенного N(R6)2, COOR6, и C(O)N(R6)2; каждый R2 независимо выбран из группы, состоящей из Н, галогена, CN, OR6, N(R6)2, COOR6, C(O)N(R6)2, SO2R6, C1-C6 алкила, C1-С6 галоалкила, C1-C6 алкила, замещенного OR6, С2-С6 алкенила, С2-С6 галоалкенила, С2-С6 алкенила, замещенного OR6, С2-С6 алкинила, С2-С6 галоалкинила, С2-С6 алкинила, замещенного OR6, С3-С6 циклоалкила, и от 3- до 6-членного гетероциклического кольца, включая 1-2 кольцевых члена, выбранных из группы, состоящей из О, S и N(R6); R3 и R4 независимо выбраны из группы, состоящей из O-(C1-C4 алкилен или галоалкилен), С1-С5 алкилена или галоалкилена, и N(R6)-(C1-C4 алкилен или галоалкилен); необязательно, R3 может быть взят совместно с соседним C-R1 и атомом, к которому они присоединены, с образованием конденсированного кольца G, которое выбрано из фенила или 5- или 6-членного гетероциклического кольца, включая 1-2 кольцевых члена, выбранных из группы, состоящей из О, S, N и N(R6), где связь с R3 от указанного кольца G проходит от атома на указанном кольце G с открытой валентностью для замещения, и где указанные фенил или гетероциклическое кольцо необязательно замещены одним или более членами группы, состоящей из галогена, С1-С3 алкила, и С1-С3 галоалкила; необязательно, R4 может быть взят совместно с соседним C-R1 и атомом, к которому они присоединены, с образованием конденсированного кольца Е, которое выбрано из фенила или 5- или 6-членного гетероциклического кольца, включая 1-2 кольцевых члена, выбранных из группы, состоящей из О, S, N и N(R6), где связь с R4 от указанного кольца Е проходит от атома на указанном кольце Е с открытой валентностью для замещения, и где указанные фенил или гетероциклическое кольцо необязательно замещены одним или более членами группы, состоящей из галогена, С1-С3 алкила, и С1-С3 галоалкила; каждый R6 независимо выбран из группы, состоящей из Н, C1-C6 алкила, и C1-C6 галоалкила; каждый X1 независимо выбран из группы, состоящей из С=O, -CH2-, -CHF-, и -CF2-; каждый X2 независимо выбран из (C(R8)2)(1-3), где каждый R8 независимо выбран из группы, состоящей из Н, галогена, C1-C6 алкила, CN, OR6, N(R6)2, C1-C6 галоалкила, С3-С6 циклоалкила, C1-C6 алкила, замещенного OR6, и C1-C6 алкила, замещенного N(R6)2; необязательно, 2 R8 на разных атомах углерода могут быть взяты вместе совместно с атомами, к которым они присоединены, с образованием от 3- до 6-членного конденсированного кольца; и, необязательно, 2 R8 на одном атоме углерода могут быть взяты вместе совместно с атомом, к которому они присоединены, с образованием от 3- до 6-членного спироцикла; каждый X3 независимо выбран из группы, состоящей из COOR6, C(O)SR6, C(S)OR6, SO2R6, C(O)N(R9)2, и CN; и каждый R9 независимо выбран из группы, состоящей из Н, COOR6, и SO2R6.or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein each AR 1 is independently selected from the group consisting of CR 1 and N; each R 1 is independently selected from the group consisting of H, halogen, OR 6 , N(R 6 ) 2 , C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 haloalkyl, C 1 -C 6 alkyl substituted with OR 6 , C 1 -C 6 alkyl substituted with N(R 6 ) 2 , COOR 6 , and C(O)N(R 6 ) 2 ; each R 2 is independently selected from the group consisting of H, halogen, CN, OR 6 , N(R 6 ) 2 , COOR 6 , C(O)N(R 6 ) 2 , SO 2 R 6 , C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 haloalkyl, C 1 -C 6 alkyl substituted with OR 6 , C 2 -C 6 alkenyl, C 2 -C 6 haloalkenyl, C 2 -C 6 alkenyl substituted with OR 6 , C 2 -C 6 alkynyl, C 2 -C 6 haloalkynyl, C 2 -C 6 alkynyl substituted with OR 6 , C 3 -C 6 cycloalkyl, and a 3- to 6-membered heterocyclic ring, including 1-2 ring members selected from the group consisting from O, S and N(R 6 ); R 3 and R 4 are independently selected from the group consisting of O-(C 1 -C 4 alkylene or haloalkylene), C 1 -C 5 alkylene or haloalkylene, and N(R 6 )-(C 1 -C 4 alkylene or haloalkylene ); Optionally, R 3 can be taken together with an adjacent CR 1 and the atom to which they are attached to form a fused ring G, which is selected from phenyl or a 5- or 6-membered heterocyclic ring, including 1-2 ring members selected from the group consisting of O, S, N and N(R 6 ), wherein the bond to R 3 from said G ring is from an atom on said G ring with open valence for substitution, and wherein said phenyl or heterocyclic ring is optionally substituted by one or more members a group consisting of halogen, C 1 -C 3 alkyl, and C 1 -C 3 haloalkyl; Optionally, R 4 can be taken together with an adjacent CR 1 and the atom to which they are attached to form a fused ring E, which is selected from phenyl or a 5- or 6-membered heterocyclic ring, including 1-2 ring members selected from the group consisting of O, S, N and N(R 6 ), wherein the bond to R 4 from said ring E is from an atom on said ring E with open valence for substitution, and wherein said phenyl or heterocyclic ring is optionally substituted by one or more members a group consisting of halogen, C 1 -C 3 alkyl, and C 1 -C 3 haloalkyl; each R 6 is independently selected from the group consisting of H, C 1 -C 6 alkyl, and C 1 -C 6 haloalkyl; each X 1 is independently selected from the group consisting of C=O, -CH 2 -, -CHF-, and -CF 2 -; each X 2 is independently selected from (C(R 8 ) 2 ) (1-3) wherein each R 8 is independently selected from the group consisting of H, halogen, C 1 -C 6 alkyl, CN, OR 6 , N(R 6 ) 2 , C 1 -C 6 haloalkyl, C 3 -C 6 cycloalkyl, C 1 -C 6 alkyl substituted with OR 6 and C 1 -C 6 alkyl substituted with N(R 6 ) 2 ; optionally, the 2 R 8 on different carbon atoms can be taken together with the atoms to which they are attached to form a 3- to 6-membered fused ring; and, optionally, the 2 R 8 on one carbon atom can be taken together with the atom to which they are attached to form a 3- to 6-membered spirocycle; each X 3 is independently selected from the group consisting of COOR 6 , C(O)SR 6 , C(S)OR 6 , SO 2 R 6 , C(O)N(R 9 ) 2 , and CN; and each R 9 is independently selected from the group consisting of H, COOR 6 , and SO 2 R 6 .
В первом аспекте третьего варианта осуществления каждый A-R1 независимо выбран из группы, состоящей из C-R1 и N. В конкретных примерах этого аспекта каждый независимо выбран из группы, состоящей из и выбран из группы, состоящей из и В более конкретных случаях этого аспекта каждый независимо выбран из группы, состоящей из и и каждый выбран из группы, состоящей из В этом аспекте все остальные группы соответствуют вышеуказанной общей формуле (III) третьего варианта осуществления.In the first aspect of the third embodiment, each AR 1 is independently selected from the group consisting of CR 1 and N. In specific examples of this aspect, each independently selected from a group consisting of And selected from the group consisting of And In more specific cases of this aspect, each independently selected from a group consisting of And and everyone selected from the group consisting of In this aspect, all other groups correspond to the above general formula (III) of the third embodiment.
Во втором аспекте третьего варианта осуществления каждый R1 независимо выбран из группы, состоящей из Н, галогена, OR6, N(R6)2, C1-C6 алкила, C1-C6 галоалкила, C1-C6 алкила, замещенного OR6, C1-C6 алкила, замещенного N(R6)2, COOR6, и C(O)N(R6)2. В примерах этого аспекта каждый R1 независимо выбран из группы, состоящей из Н, галогена, C1-С3 алкила, и C1-С3 галоалкила. В конкретных примерах этого аспекта каждый R1 независимо выбран из группы, состоящей из Н и галогена. В более конкретных случаях этого аспекта каждый R1 независимо выбран из группы, состоящей из Н и F. В этом аспекте все остальные группы соответствуют вышеуказанной общей формуле (III) третьего варианта осуществления или первому аспекту выше.In the second aspect of the third embodiment, each R 1 is independently selected from the group consisting of H, halogen, OR 6 , N(R 6 ) 2 , C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 haloalkyl, C 1 -C 6 alkyl , substituted OR 6 , C 1 -C 6 alkyl, substituted N(R 6 ) 2 , COOR 6 , and C(O)N(R 6 ) 2 . In examples of this aspect, each R 1 is independently selected from the group consisting of H, halogen, C 1 -C 3 alkyl, and C 1 -C 3 haloalkyl. In specific examples of this aspect, each R 1 is independently selected from the group consisting of H and halogen. In more specific cases of this aspect, each R 1 is independently selected from the group consisting of H and F. In this aspect, all other groups correspond to the above general formula (III) of the third embodiment or the first aspect above.
В третьем аспекте третьего варианта осуществления каждый R2 независимо выбран из группы, состоящей из Н, галогена, CN, OR6, N(R6)2, COOR6, C(O)N(R6)2, SO2R6, C1-C6 алкила, C1-С6 галоалкила, C1-C6 алкила, замещенного OR6, С2-С6 алкенила, С2-С6 галоалкенила, С2-С6 алкенила, замещенного OR6, С2-С6 алкинила, С2-С6 галоалкинила, С2-С6 алкинила, замещенного OR6, С3-С6 циклоалкила, и от 3- до 6-членного гетероциклического кольца, включая 1-2 кольцевых члена, выбранных из группы, состоящей из О, S и N(R6). В примерах этого аспекта каждый R2 независимо выбран из группы, состоящей из Н, галогена, C1-С3 алкила, С1-С3 галоалкила, ОС1-С3 алкила, С2-С3 алкенила, и N(R6)2. В конкретных примерах этого аспекта каждый R2 независимо выбран из группы, состоящей из Н, Br, Cl, СН3, СН2СН3, СН=СН2, ОСН3, OCFH2, OCF2H, OCF3, и N(R6)2. В более конкретных случаях этого аспекта каждый R2 независимо выбран из группы, состоящей из Н, СН3, ОСН3, и OCF2H. В этом аспекте все остальные группы являются такими, как указано в общей формуле (III) третьего варианта осуществления или в первом или втором аспектах, описанных выше.In a third aspect of the third embodiment, each R 2 is independently selected from the group consisting of H, halogen, CN, OR 6 , N(R 6 ) 2 , COOR 6 , C(O)N(R 6 ) 2 , SO 2 R 6 , C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 haloalkyl, C 1 -C 6 alkyl substituted with OR 6 , C 2 -C 6 alkenyl, C 2 -C 6 haloalkenyl, C 2 -C 6 alkenyl substituted with OR 6 , C 2 -C 6 alkynyl, C 2 -C 6 haloalkynyl, C 2 -C 6 alkynyl substituted with OR 6 , C 3 -C 6 cycloalkyl, and 3- to 6-membered heterocyclic ring, including 1-2 ring members , selected from the group consisting of O, S and N(R 6 ). In examples of this aspect, each R 2 is independently selected from the group consisting of H, halogen, C 1 -C 3 alkyl, C 1 -C 3 haloalkyl, OC 1 -C 3 alkyl, C 2 -C 3 alkenyl, and N(R 6 ) 2 . In specific examples of this aspect, each R 2 is independently selected from the group consisting of H, Br, Cl, CH 3 , CH 2 CH 3 , CH=CH 2 , OCH 3 , OCFH 2 , OCF 2 H, OCF 3 , and N( R 6 ) 2 . In more specific cases of this aspect, each R 2 is independently selected from the group consisting of H, CH 3 , OCH 3 , and OCF 2 H. In this aspect, all other groups are as specified in the general formula (III) of the third embodiment or in the first or second aspects described above.
В четвертом аспекте третьего варианта осуществления R3 и R4 независимо выбраны из группы, состоящей из O-(C1-C4 алкилен или галоалкилен), С1-С5 алкилена или галоалкилена, и N(R6)-(C1-C4 алкилен или галоалкилен); необязательно, R3 может быть взят совместно с соседним C-R1 и атомом, к которому они присоединены, с образованием конденсированного кольца G, которое выбрано из фенила или 5- или 6-членного гетероциклического кольца, включая 1-2 кольцевых члена, выбранных из группы, состоящей из О, S, N и N(R6), где связь с R3 от указанного кольца G проходит от атома на указанном кольце G с открытой валентностью для замещения, и где указанные фенил или гетероциклическое кольцо необязательно замещены одним или более членами группы, состоящей из галогена, C1-С3 алкила, и C1-С3 галоалкила; необязательно, R4 может быть взят совместно с соседним C-R1 и атомом, к которому они присоединены, с образованием конденсированного кольца Е, которое выбрано из фенила или 5- или 6-членного гетероциклического кольца, включая 1-2 кольцевых члена, выбранных из группы, состоящей из О, S, N и N(R6), где связь с R4 от указанного кольца Е проходит от атома на указанном кольце Е с открытой валентностью для замещения, и где указанные фенил или гетероциклическое кольцо необязательно замещены одним или более членами группы, состоящей из галогена, C1-С3 алкила, и C1-С3 галоалкила. В примерах этого четвертого аспекта R3-R4 выбран из группы, состоящей из -(CH2)2-8-, -O(CH2)1-7-, -O(CH2)1-6O-, -NH(CH2)1-7-, и -NH(CH2)1-6O-. В отдельных случаях этого четвертого аспекта R3-R4 выбран из группы, состоящей из -(СН2)2-, -(СН2)3-, -(СН2)4-, -O(СН2)2-, -O(СН2)3-, -O(СН2)4-, -O(СН2)2O-, -O(СН2)3О-, -ОСН2СН(СН3)CH2O-, -O(CH2)4O-, -O(CH2)5O-, -NH(CH2)2-, -NH(CH2)3-, и -NH(CH2)3O-. В конкретных случаях этого четвертого аспекта R3 может быть взят совместно с соседним C-R1 и атомом, к которому они присоединены, с образованием конденсированного кольца G, которое выбрано из фенила или 5- или 6-членного гетероциклического кольца, включая 1-2 кольцевых члена, выбранных из группы, состоящей из О, S, N и N(R6), где связь с R4 от указанного кольца G проходит от атома на указанном кольце Е с открытой валентностью для замещения, и где указанные фенил или гетероциклическое кольцо необязательно замещены одним или более членами группы, состоящей из галогена, С1-С3 алкила, и С1-С3 галоалкила. В этом случае структура общей формулы (III) представляет собой формулу (IIIa):In the fourth aspect of the third embodiment, R 3 and R 4 are independently selected from the group consisting of O-(C 1 -C 4 alkylene or haloalkylene), C 1 -C 5 alkylene or haloalkylene, and N(R 6 )-(C 1 - C 4 alkylene or haloalkylene); Optionally, R 3 can be taken together with an adjacent CR 1 and the atom to which they are attached to form a fused ring G, which is selected from phenyl or a 5- or 6-membered heterocyclic ring, including 1-2 ring members selected from the group consisting of O, S, N and N(R 6 ), wherein the bond to R 3 from said G ring is from an atom on said G ring with open valence for substitution, and wherein said phenyl or heterocyclic ring is optionally substituted by one or more members a group consisting of halogen, C 1 -C 3 alkyl, and C 1 -C 3 haloalkyl; Optionally, R 4 can be taken together with an adjacent CR 1 and the atom to which they are attached to form a fused ring E, which is selected from phenyl or a 5- or 6-membered heterocyclic ring, including 1-2 ring members selected from the group consisting of O, S, N and N(R 6 ), wherein the bond to R 4 from said ring E is from an atom on said ring E with open valence for substitution, and wherein said phenyl or heterocyclic ring is optionally substituted by one or more members a group consisting of halogen, C 1 -C 3 alkyl, and C 1 -C 3 haloalkyl. In examples of this fourth aspect, R 3 -R 4 is selected from the group consisting of -(CH 2 ) 2-8 -, -O(CH 2 ) 1-7 -, -O(CH 2 ) 1-6 O-, - NH(CH 2 ) 1-7 -, and -NH(CH 2 ) 1-6 O-. In certain cases of this fourth aspect, R 3 -R 4 is selected from the group consisting of -(CH 2 ) 2 -, -(CH 2 ) 3 -, -(CH 2 ) 4 -, -O(CH 2 ) 2 -, -O(CH 2 ) 3 -, -O(CH 2 ) 4 -, -O(CH 2 ) 2 O-, -O(CH 2 ) 3 O-, -OSH 2 CH(CH 3 )CH 2 O- , -O(CH 2 ) 4 O-, -O(CH 2 ) 5 O-, -NH(CH 2 ) 2 -, -NH(CH 2 ) 3 -, and -NH(CH 2 ) 3 O-. In particular cases of this fourth aspect, R 3 can be taken together with an adjacent CR 1 and the atom to which they are attached to form a fused ring G that is selected from phenyl or a 5- or 6-membered heterocyclic ring, including 1-2 ring members selected from the group consisting of O, S, N and N(R 6 ), wherein the bond to R 4 from said ring G is from an atom on said ring E with open valence for substitution, and wherein said phenyl or heterocyclic ring is optionally substituted one or more members of the group consisting of halogen, C 1 -C 3 alkyl, and C 1 -C 3 haloalkyl. In this case, the structure of the general formula (III) is formula (IIIa):
где все группы имеют значения, указанные в общей формуле (III). В дополнительных конкретных случаях этого четвертого аспекта R4 может быть взят совместно с соседним С-R1 и атомом, к которому они присоединены, с образованием конденсированного кольца Е, которое выбрано из фенила или 5- или 6-членного гетероциклического кольца, включая 1-2 кольцевых члена, выбранных из группы, состоящей из О, S, N и N(R6), где связь с R3 от указанного кольца Е проходит от атома на указанном кольце Е с открытой валентностью для замещения, и где указанные фенил или гетероциклическое кольцо необязательно замещены одним или более членами группы, состоящей из галогена, C1-С3 алкила, и C1-С3 галоалкила. В этом случае структура общей формулы (III) представляет собой формулу (IIIb):where all groups have the meanings indicated in the general formula (III). In additional specific cases of this fourth aspect, R 4 can be taken together with the adjacent C-R 1 and the atom to which they are attached to form a fused ring E that is selected from phenyl or a 5- or 6-membered heterocyclic ring, including 1- 2 ring members selected from the group consisting of O, S, N and N(R 6 ), wherein the bond to R 3 from said ring E is from an atom on said ring E with open valency for substitution, and wherein said phenyl or heterocyclic the ring is optionally substituted by one or more members of the group consisting of halogen, C 1 -C 3 alkyl, and C 1 -C 3 haloalkyl. In this case, the structure of the general formula (III) is formula (IIIb):
где все группы имеют значения, указанные в общей формуле (III). В этом аспекте все остальные группы являются такими, как указано в общей формуле (III) первого варианта осуществления или в первом-третьем аспектах, описанных выше.where all groups have the meanings indicated in the general formula (III). In this aspect, all other groups are as specified in the general formula (III) of the first embodiment or in the first to third aspects described above.
В пятом аспекте третьего варианта осуществления каждый R6 независимо выбран из группы, состоящей из Н, C1-С6 алкила, и C1-C6 галоалкила. В примерах этого аспекта каждый R6 независимо выбран из группы, состоящей из Н, C1-С3 алкила, и C1-С3 галоалкила. В конкретных примерах этого аспекта каждый R6 независимо выбран из группы, состоящей из Н, СН3, и CHF2. В этом аспекте все остальные группы являются такими, как указано в общей формуле (III) третьего варианта осуществления или в первом-четвертом аспектах, описанных выше.In the fifth aspect of the third embodiment, each R 6 is independently selected from the group consisting of H, C 1 -C 6 alkyl, and C 1 -C 6 haloalkyl. In examples of this aspect, each R 6 is independently selected from the group consisting of H, C 1 -C 3 alkyl, and C 1 -C 3 haloalkyl. In specific examples of this aspect, each R 6 is independently selected from the group consisting of H, CH 3 , and CHF 2 . In this aspect, all other groups are as specified in the general formula (III) of the third embodiment or in the first to fourth aspects described above.
В шестом аспекте третьего варианта осуществления каждый X1 независимо выбран из группы, состоящей из С=O, -CH2-, -CHF-, и -CF2-. В примерах этого аспекта X1 выбран из группы, состоящей из С=O и -СН2-. В конкретных примерах этого аспекта X1 представляет собой С=O. В этом варианте осуществления все остальные группы являются такими, как указано в общей формуле (III) третьего варианта осуществления или в первом-пятом аспектах, описанных выше.In the sixth aspect of the third embodiment, each X 1 is independently selected from the group consisting of C=O, -CH 2 -, -CHF-, and -CF 2 -. In examples of this aspect, X 1 is selected from the group consisting of C=O and -CH 2 -. In specific examples of this aspect, X 1 is C=O. In this embodiment, all other groups are as specified in the general formula (III) of the third embodiment or in the first to fifth aspects described above.
В седьмом аспекте третьего варианта осуществления каждый X2 независимо выбран из (C(R8)2)(1-3), где каждый R8 независимо выбран из группы, состоящей из Н, галогена, C1-C6 алкила, CN, OR6, N(R6)2, C1-С6 галоалкила, С3-С6 циклоалкила, C1-C6 алкила, замещенного OR6, и C1-С6 алкила, замещенного N(R6)2; необязательно, 2 R8 на разных атомах углерода могут быть взяты вместе совместно с атомами, к которым они присоединены, с образованием от 3- до 6-членного конденсированного кольца; и, необязательно, 2 R8 на одном атоме углерода могут быть взяты вместе совместно с атомом, к которому они присоединены, с образованием от 3- до 6-членного спироцикла. В первом случае этого аспекта каждый X2 представляет собой CH2CHR8, где R8 выбран из группы, состоящей из Н, C1-С3 алкила, C1-С3 алкила, замещенного ОН, C1-С3 алкила, замещенного ОС1-С3 алкилом, и С3-С6 циклоалкила. В отдельных примерах этого первого случая каждый X2 представляет собой CH2CHR8, где R8 выбран из группы, состоящей из Н, СН3, СН2ОН, СН2СН3, СН2СН2СН3, СН(СН3)2, СН2ОСН3, и циклопропила. Во втором случае этого аспекта каждый X2 представляет собой CHR8CHR8, где каждый R8 независимо выбран из группы, состоящей из Н, C1-С3 алкила, C1-С3 алкила, замещенного ОН, C1-С3 алкила, замещенного ОС1-С3 алкилом, и С3-С6 циклоалкила, и, необязательно, 2 R8 на разных атомах углерода взяты вместе совместно с атомами, к которым они присоединены, с образованием от 3- до 6-членного конденсированного кольца. В отдельных примерах этого второго случая каждый X2 представляет собой CHR8CHR8, где каждый R8 независимо выбран из группы, состоящей из Н и C1-С3 алкила, и, необязательно, 2 R8 на разных атомах углерода взяты вместе совместно с атомами, к которым они присоединены, с образованием от 3- до 6-членного конденсированного кольца. В третьем случае этого аспекта каждый X2 представляет собой CH2C(R8)2, где каждый R8 независимо выбран из группы, состоящей из Н, C1-С3 алкила, C1-С3 алкила, замещенного ОН, C1-С3 алкила, замещенного ОС1-С3 алкилом, и С3-С6 циклоалкила, и, необязательно, 2 R8 на одном атоме углерода взяты вместе совместно с атомами, к которым они присоединены, с образованием от 3- до 6-членного спироцикла. В отдельных примерах этого третьего случая каждый X2 представляет собой CH2C(R8)2, где каждый R8 независимо выбран из группы, состоящей из Н и C1-С3 алкила, и, необязательно, 2 R8 на одном атоме углерода взяты вместе совместно с атомами, к которым они присоединены, с образованием от 3- до 6-членного спироцикла. В этом аспекте все остальные группы являются такими, как указано в общей формуле (III) третьего варианта осуществления или в первом-шестом аспектах, описанных выше.In the seventh aspect of the third embodiment, each X 2 is independently selected from (C(R 8 ) 2 ) (1-3) , wherein each R 8 is independently selected from the group consisting of H, halogen, C 1 -C 6 alkyl, CN, OR 6 , N(R 6 ) 2 , C 1 -C 6 haloalkyl, C 3 -C 6 cycloalkyl, C 1 -C 6 alkyl substituted with OR 6 , and C 1 -C 6 alkyl substituted with N(R 6 ) 2 ; optionally, the 2 R 8 on different carbon atoms can be taken together with the atoms to which they are attached to form a 3- to 6-membered fused ring; and, optionally, the 2 R 8 on one carbon atom can be taken together with the atom to which they are attached to form a 3- to 6-membered spirocycle. In the first case of this aspect, each X 2 represents CH 2 CHR 8 where R 8 is selected from the group consisting of H, C 1 -C 3 alkyl, C 1 -C 3 alkyl substituted by OH, C 1 -C 3 alkyl, substituted OS 1 -C 3 alkyl, and C 3 -C 6 cycloalkyl. In certain examples of this first case, each X 2 is CH 2 CHR 8 , where R 8 is selected from the group consisting of H, CH 3 , CH 2 OH, CH 2 CH 3 , CH 2 CH 2 CH 3 , CH(CH 3 ) 2 , CH 2 OCH 3 , and cyclopropyl. In the second case of this aspect, each X 2 is CHR 8 CHR 8 wherein each R 8 is independently selected from the group consisting of H, C 1 -C 3 alkyl, C 1 -C 3 alkyl substituted with OH, C 1 -C 3 alkyl substituted with OC 1 -C 3 alkyl, and C 3 -C 6 cycloalkyl, and optionally 2 R 8 on different carbon atoms are taken together with the atoms to which they are attached to form a 3- to 6-membered fused rings. In certain examples of this second case, each X 2 is CHR 8 CHR 8 , wherein each R 8 is independently selected from the group consisting of H and C 1 -C 3 alkyl, and, optionally, 2 R 8 on different carbon atoms are taken together together with the atoms to which they are attached to form a 3- to 6-membered fused ring. In a third embodiment of this aspect, each X 2 is CH 2 C(R 8 ) 2 , wherein each R 8 is independently selected from the group consisting of H, C 1 -C 3 alkyl, C 1 -C 3 alkyl, substituted OH, C 1 -C 3 alkyl substituted with OC 1 -C 3 alkyl, and C 3 -C 6 cycloalkyl, and optionally 2 R 8 on one carbon atom are taken together with the atoms to which they are attached to form 3- to 6-membered spirocycle. In certain examples of this third case, each X 2 is CH 2 C(R 8 ) 2 , where each R 8 is independently selected from the group consisting of H and C 1 -C 3 alkyl, and optionally 2 R 8 on one atom carbons are taken together with the atoms to which they are attached to form a 3- to 6-membered spirocycle. In this aspect, all other groups are as specified in the general formula (III) of the third embodiment or in the first to sixth aspects described above.
В восьмом аспекте третьего варианта осуществления каждый X3 независимо выбран из группы, состоящей из COOR6, C(O)SR6, C(S)OR6, SO2R6, C(O)N(R9)2, и CN. В примерах этого аспекта каждый X3 независимо выбран из группы, состоящей из COOR6, SO2R6, C(O)N(R9)2, и CN. В конкретных примерах этого аспекта каждый X3 независимо выбран из группы, состоящей из COOR6, C(O)N(R9)2, и CN. В даже более конкретных случаях этого аспекта каждый X3 независимо выбран из группы, состоящей из СООН, СООСН3, CONH2, и CN. В этом аспекте все остальные группы являются такими, как указано в общей формуле (III) третьего варианта осуществления или в первом-седьмом аспектах, описанных выше.In the eighth aspect of the third embodiment, each X 3 is independently selected from the group consisting of COOR 6 , C(O)SR 6 , C(S)OR 6 , SO 2 R 6 , C(O)N(R 9 ) 2 , and CN. In examples of this aspect, each X 3 is independently selected from the group consisting of COOR 6 . SO 2 R 6 , C(O)N(R 9 ) 2 , and CN. In specific examples of this aspect, each X 3 is independently selected from the group consisting of COOR 6 , C(O)N(R 9 ) 2 , and CN. In even more specific cases of this aspect, each X 3 is independently selected from the group consisting of COOH, COOCH 3 , CONH 2 , and CN. In this aspect, all other groups are as specified in the general formula (III) of the third embodiment or in the first to seventh aspects described above.
В девятом аспекте третьего варианта осуществления каждый R9 независимо выбран из группы, состоящей из Н, COOR6, и SO2R6. В примерах этого аспекта каждый R9 независимо представляет собой Н. В этом аспекте все остальные группы являются такими, как указано в общей формуле (III) третьего варианта осуществления или в первом-шестом аспектах, описанных выше.In the ninth aspect of the third embodiment, each R 9 is independently selected from the group consisting of H, COOR 6 , and SO 2 R 6 . In the examples of this aspect, each R 9 independently represents H. In this aspect, all other groups are as specified in the general formula (III) of the third embodiment or in the first to sixth aspects described above.
Десятый аспект третьего варианта осуществления относится к фармацевтической композиции, где указанная фармацевтическая композиция содержит (а) соединение согласно общей формуле (III) третьего варианта осуществления или первому-девятому аспектам, описанным выше, или его фармацевтически приемлемую соль; и (b) фармацевтически приемлемый носитель.The tenth aspect of the third embodiment relates to a pharmaceutical composition, wherein the pharmaceutical composition contains (a) a compound according to the general formula (III) of the third embodiment or the first to ninth aspects described above, or a pharmaceutically acceptable salt thereof; and (b) a pharmaceutically acceptable carrier.
Одиннадцатый аспект третьего варианта осуществления относится к способам индукции иммунного ответа у пациента, нуждающегося в терапии, включающим введение этому пациенту терапевтически эффективного количества соединения согласно общей формуле (III) третьего варианта осуществления или первому-девятому аспектам, описанным выше, или его фармацевтически приемлемой соли.An eleventh aspect of the third embodiment relates to methods of inducing an immune response in a patient in need of therapy, comprising administering to the patient a therapeutically effective amount of a compound according to general formula (III) of the third embodiment or the first to ninth aspects described above, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
Двенадцатый аспект третьего варианта осуществления относится к способам индукции иммунного ответа у пациента, нуждающегося в терапии, включающим введение этому пациенту терапевтически эффективного количества композиции согласно десятому аспекту, описанному выше.A twelfth aspect of the third embodiment relates to methods of inducing an immune response in a patient in need of therapy, comprising administering to that patient a therapeutically effective amount of a composition according to the tenth aspect described above.
Тринадцатый аспект третьего варианта относится к способам индукции STING-зависимой продукции интерферона I типа у пациента, нуждающегося в терапии, включающим введение этому пациенту терапевтически эффективного количества соединения согласно вышеуказанной общей формуле (III) третьего варианта осуществления или первому-девятому аспектам, описанным выше, или его фармацевтически приемлемой соли.A thirteenth aspect of the third embodiment relates to methods for inducing STING-dependent type I interferon production in a patient in need of therapy, comprising administering to the patient a therapeutically effective amount of a compound according to the above general formula (III) of the third embodiment or the first to ninth aspects described above, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
Четырнадцатый аспект третьего варианта осуществления относится к способам индукции STING-зависимой продукции интерферона I типа у пациента, нуждающегося в терапии, включающим введение этому пациенту терапевтически эффективного количества композиции согласно десятому аспекту, описанному выше.A fourteenth aspect of the third embodiment relates to methods of inducing STING-dependent type I interferon production in a patient in need of therapy, comprising administering to the patient a therapeutically effective amount of a composition according to the tenth aspect described above.
Пятнадцатый аспект третьего варианта осуществления относится к способам индукции STING-зависимой продукции цитокинов у пациента, нуждающегося в терапии, включающим введение этому пациенту терапевтически эффективного количества соединения согласно вышеуказанной общей формуле (III) третьего варианта осуществления или первому-девятому аспектам, описанным выше, или его фармацевтически приемлемой соли.A fifteenth aspect of the third embodiment relates to methods for inducing STING-dependent cytokine production in a patient in need of therapy, comprising administering to the patient a therapeutically effective amount of a compound according to the above general formula (III) of the third embodiment or the first to ninth aspects described above, or pharmaceutically acceptable salt.
Шестнадцатый аспект третьего варианта осуществления относится к способам индукции STING-зависимой продукции цитокинов у пациента, нуждающегося в терапии, включающим введение этому пациенту терапевтически эффективного количества композиции согласно десятому аспекту, описанному выше.A sixteenth aspect of the third embodiment relates to methods of inducing STING-dependent cytokine production in a patient in need of therapy, comprising administering to the patient a therapeutically effective amount of a composition according to the tenth aspect described above.
Семнадцатый аспект третьего варианта осуществления относится к способам лечения нарушения пролиферации клеток у пациента, нуждающегося в терапии, включающим введение этому пациенту терапевтически эффективного количества соединения общей формулы (III) или его фармацевтически приемлемой соли. В случаях этого семнадцатого аспекта третьего варианта осуществления нарушение пролиферации клеток представляет собой рак.A seventeenth aspect of the third embodiment relates to methods of treating a cell proliferation disorder in a patient in need of therapy, comprising administering to the patient a therapeutically effective amount of a compound of general formula (III) or a pharmaceutically acceptable salt thereof. In cases of this seventeenth aspect of the third embodiment, the cell proliferation disorder is cancer.
Восемнадцатый аспект третьего варианта осуществления относится к способам лечения нарушения пролиферации клеток у пациента, нуждающегося в терапии, при этом указанный способ включает введение пациенту терапевтически эффективного количества композиции в соответствии с одиннадцатым аспектом, описанным выше. В случаях этого восемнадцатого аспекта третьего варианта осуществления нарушение пролиферации клеток представляет собой рак.An eighteenth aspect of the third embodiment relates to methods of treating a cell proliferation disorder in a patient in need of therapy, the method comprising administering to the patient a therapeutically effective amount of a composition in accordance with the eleventh aspect described above. In cases of this eighteenth aspect of the third embodiment, the cell proliferation disorder is cancer.
В каждом аспекте третьего варианта осуществления, описанного в настоящем документе, переменные R1, R2, R3, R4, R6, R8, R9, А, X1, X2, и X3 общей формулы (III) третьего варианта осуществления и его различных аспектов и случаев, каждый независимо выбран из каждого, при условии, что, по меньшей мере, один из R1, R2, R3, R4, R6, R8, и R9 не представляет собой Н.In each aspect of the third embodiment described herein, the variables R1 , R2 , R3 , R4 , R6 , R8 , R9, A, X1 , X2 , and X3 of the general formula (III) of the third embodiment and its various aspects and instances, each independently selected from each, with the proviso that at least one of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 6 , R 8 , and R 9 is not N.
Четвертый вариант осуществления относится к соединениям общей формулы (IV):The fourth embodiment relates to compounds of general formula (IV):
или их фармацевтически приемлемой соли, где каждый A-R1 независимо выбран из группы, состоящей из C-R1 и N; каждый R1 независимо выбран из группы, состоящей из Н, галогена, OR6, N(R6)2, C1-C6 алкила, C1-С6 галоалкила, C1-C6 алкила, замещенного OR6, C1-C6 алкила, замещенного N(R6)2, COOR6, и C(O)N(R6)2; каждый R2 независимо выбран из группы, состоящей из Н, галогена, CN, OR6, N(R6)2, COOR6, C(O)N(R6)2, SO2R6, C1-C6 алкила, C1-С6 галоалкила, C1-C6 алкила, замещенного OR6, С2-С6 алкенила, С2-С6 галоалкенила, С2-С6 алкенила, замещенного OR6, С2-С6 алкинила, С2-С6 галоалкинила, С2-С6 алкинила, замещенного OR6, С3-С6 циклоалкила, и от 3- до 6-членного гетероциклического кольца, включая 1-2 кольцевых члена, выбранных из группы, состоящей из О, S и N(R6); R3 и R4 независимо выбраны из группы, состоящей из O-(C1-C4 алкилен или галоалкилен), С1-С5 алкилена или галоалкилена, и N(R6)-(C1-C4 алкилен или галоалкилен); каждый R6 независимо выбран из группы, состоящей из Н, C1-C6 алкила, и C1-C6 галоалкила; каждый X1 независимо выбран из группы, состоящей из С=O, -СН2-, -CHF-, и -CF2-; каждый X2 независимо выбран из (C(R8)2)(1-3), где каждый R8 независимо выбран из группы, состоящей из Н, галогена, C1-С6 алкила, CN, OR6, N(R6)2, C1-C6 галоалкила, С3-С6 циклоалкила, C1-C6 алкила, замещенного OR6, и C1-C6 алкила, замещенного N(R6)2; необязательно, 2 R8 на разных атомах углерода могут быть взяты вместе совместно с атомами, к которым они присоединены, с образованием от 3- до 6-членного конденсированного кольца; и, необязательно, 2 R8 на одном атоме углерода могут быть взяты вместе, совместно с атомом, к которому они присоединены, с образованием от 3- до 6-членного спироцикла; каждый X3 независимо выбран из группы, состоящей из COOR6, C(O)SR6, C(S)OR6, SO2R6, C(O)N(R9)2, и CN; и каждый R9 независимо выбран из группы, состоящей из Н, COOR6, и SO2R6.or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein each AR 1 is independently selected from the group consisting of CR 1 and N; each R 1 is independently selected from the group consisting of H, halogen, OR 6 , N(R 6 ) 2 , C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 haloalkyl, C 1 -C 6 alkyl substituted OR 6 , C 1 -C 6 alkyl substituted with N(R 6 ) 2 , COOR 6 , and C(O)N(R 6 ) 2 ; each R 2 is independently selected from the group consisting of H, halogen, CN, OR 6 , N(R 6 ) 2 , COOR 6 , C(O)N(R 6 ) 2 , SO 2 R 6 , C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 haloalkyl, C 1 -C 6 alkyl substituted with OR 6 , C 2 -C 6 alkenyl, C 2 -C 6 haloalkenyl, C 2 -C 6 alkenyl substituted with OR 6 , C 2 -C 6 alkynyl, C 2 -C 6 haloalkynyl, C 2 -C 6 alkynyl substituted with OR 6 , C 3 -C 6 cycloalkyl, and a 3- to 6-membered heterocyclic ring, including 1-2 ring members selected from the group consisting from O, S and N(R 6 ); R 3 and R 4 are independently selected from the group consisting of O-(C 1 -C 4 alkylene or haloalkylene), C 1 -C 5 alkylene or haloalkylene, and N(R 6 )-(C 1 -C 4 alkylene or haloalkylene ); each R 6 is independently selected from the group consisting of H, C 1 -C 6 alkyl, and C 1 -C 6 haloalkyl; each X 1 is independently selected from the group consisting of C=O, -CH 2 -, -CHF-, and -CF 2 -; each X 2 is independently selected from (C(R 8 ) 2 ) (1-3) wherein each R 8 is independently selected from the group consisting of H, halogen, C 1 -C 6 alkyl, CN, OR 6 , N(R 6 ) 2 , C 1 -C 6 haloalkyl, C 3 -C 6 cycloalkyl, C 1 -C 6 alkyl substituted with OR 6 and C 1 -C 6 alkyl substituted with N(R 6 ) 2 ; optionally, the 2 R 8 on different carbon atoms can be taken together with the atoms to which they are attached to form a 3- to 6-membered fused ring; and, optionally, the 2 R 8 on one carbon atom can be taken together, together with the atom to which they are attached, to form a 3- to 6-membered spirocycle; each X 3 is independently selected from the group consisting of COOR 6 , C(O)SR 6 , C(S)OR 6 , SO 2 R 6 , C(O)N(R 9 ) 2 , and CN; and each R 9 is independently selected from the group consisting of H, COOR 6 , and SO 2 R 6 .
В первом аспекте четвертого варианта осуществления каждый A-R1 независимо выбран из группы, состоящей из C-R1 и N. В конкретных примерах этого аспекта каждый независимо выбран из группы, состоящей из и выбран из группы, состоящей из и В более конкретных случаях этого аспекта каждый независимо выбран из группы, состоящей из и выбран из группы, состоящей из В этом аспекте все остальные группы являются такими, как указано в общей формуле (IV) четвертого варианта осуществления выше.In the first aspect of the fourth embodiment, each AR 1 is independently selected from the group consisting of CR 1 and N. In specific examples of this aspect, each independently selected from a group consisting of And selected from the group consisting of And In more specific cases of this aspect, each independently selected from a group consisting of And selected from the group consisting of In this aspect, all other groups are as specified in the general formula (IV) of the fourth embodiment above.
Во втором аспекте четвертого варианта осуществления каждый R1 независимо выбран из группы, состоящей из Н, галогена, OR6, N(R6)2, C1-C6 алкила, C1-C6 галоалкила, C1-C6 алкила, замещенного OR6, C1-С6 алкила, замещенного N(R6)2, COOR6, и C(O)N(R6)2. В примерах этого аспекта каждый R1 независимо выбран из группы, состоящей из Н, галогена, C1-С3 алкила, и C1-С3 галоалкила. В конкретных примерах этого аспекта каждый R1 независимо выбран из группы, состоящей из Н и галогена. В более конкретных случаях этого аспекта каждый R1 независимо выбран из группы, состоящей из Н и F. В этом аспекте все остальные группы являются такими, как указано в вышеприведенной общей формуле (IV) четвертого варианта осуществления или в первом аспекте выше.In the second aspect of the fourth embodiment, each R 1 is independently selected from the group consisting of H, halogen, OR 6 , N(R 6 ) 2 , C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 haloalkyl, C 1 -C 6 alkyl , substituted OR 6 , C 1 -C 6 alkyl, substituted N(R 6 ) 2 , COOR 6 , and C(O)N(R 6 ) 2 . In examples of this aspect, each R 1 is independently selected from the group consisting of H, halogen, C 1 -C 3 alkyl, and C 1 -C 3 haloalkyl. In specific examples of this aspect, each R 1 is independently selected from the group consisting of H and halogen. In more specific cases of this aspect, each R 1 is independently selected from the group consisting of H and F. In this aspect, all other groups are as specified in the above general formula (IV) of the fourth embodiment or in the first aspect above.
В третьем аспекте четвертого варианта осуществления каждый R2 независимо выбран из группы, состоящей из Н, галогена, CN, OR6, N(R6)2, COOR6, C(O)N(R6)2, SO2R6, C1-C6 алкила, C1-С6 галоалкила, C1-C6 алкила, замещенного OR6, С2-С6 алкенила, С2-С6 галоалкенила, С2-С6 алкенила, замещенного OR6, С2-С6 алкинила, С2-С6 галоалкинила, С2-С6 алкинила, замещенного OR6, С3-С6 циклоалкила, и от 3- до 6-членного гетероциклического кольца, включая 1-2 кольцевых члена, выбранных из группы, состоящей из О, S и N(R6). В примерах этого аспекта каждый R2 независимо выбран из группы, состоящей из Н, галогена, C1-С3 алкила, C1-С3 галоалкила, ОС1-С3 алкила, С2-С3 алкенила, и N(R6)2. В конкретных примерах этого аспекта каждый R2 независимо выбран из группы, состоящей из Н, Br, Cl, СН3, СН2СН3, СН=СН2, ОСН3, OCFH2, OCF2H, OCF3, и N(R6)2. В более конкретных случаях этого аспекта каждый R2 независимо выбран из группы, состоящей из Н, СН3, ОСН3, и OCF2H. В этом аспекте все остальные группы являются такими, как указано в общей формуле (IV) четвертого варианта осуществления или в первом или втором аспектах, описанных выше.In the third aspect of the fourth embodiment, each R 2 is independently selected from the group consisting of H, halogen, CN, OR 6 , N(R 6 ) 2 , COOR 6 , C(O)N(R 6 ) 2 , SO 2 R 6 , C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 haloalkyl, C 1 -C 6 alkyl substituted with OR 6 , C 2 -C 6 alkenyl, C 2 -C 6 haloalkenyl, C 2 -C 6 alkenyl substituted with OR 6 , C 2 -C 6 alkynyl, C 2 -C 6 haloalkynyl, C 2 -C 6 alkynyl substituted with OR 6 , C 3 -C 6 cycloalkyl, and 3- to 6-membered heterocyclic ring, including 1-2 ring members , selected from the group consisting of O, S and N(R 6 ). In examples of this aspect, each R 2 is independently selected from the group consisting of H, halogen, C 1 -C 3 alkyl, C 1 -C 3 haloalkyl, OC 1 -C 3 alkyl, C 2 -C 3 alkenyl, and N(R 6 ) 2 . In specific examples of this aspect, each R 2 is independently selected from the group consisting of H, Br, Cl, CH 3 , CH 2 CH 3 , CH=CH 2 , OCH 3 , OCFH 2 , OCF 2 H, OCF 3 , and N( R 6 ) 2 . In more specific cases of this aspect, each R 2 is independently selected from the group consisting of H, CH 3 , OCH 3 , and OCF 2 H. In this aspect, all other groups are as specified in the general formula (IV) of the fourth embodiment or in the first or second aspects described above.
В четвертом аспекте четвертого варианта осуществления R3 и R4 независимо выбраны из группы, состоящей из O-(C1-C4 алкилен или галоалкилен), С1-С5 алкилена или галоалкилена, и N(R6)-(C1-C4 алкилен или галоалкилен). В примерах этого четвертого аспекта R3-R4 выбран из группы, состоящей из -(CH2)2-8-, -O(CH2)1-7-, -O(CH2)1-6O-, -NH(CH2)1-7-, и -NH(CH2)1-6O-. В отдельных случаях этого четвертого аспекта R3-R4 выбран из группы, состоящей из -(СН2)2-, -(СН2)3-, -(СН2)4-, -O(СН2)2-, -O(СН2)3-, -O(СН2)4-, -O(СН2)2О-, -O(СН2)3О-, -ОСН2СН(СН3)СН2О-, -O(CH2)4O-, -O(CH2)5O-, -NH(CH2)2-, -NH(CH2)3-, и -NH(CH2)3O-. В этом аспекте все остальные группы являются такими, как указано в общей формуле (IV) четвертого варианта осуществления или в первом-третьем аспектах, описанных выше.In a fourth aspect of the fourth embodiment, R 3 and R 4 are independently selected from the group consisting of O-(C 1 -C 4 alkylene or haloalkylene), C 1 -C 5 alkylene or haloalkylene, and N(R 6 )-(C 1 -C 4 alkylene or haloalkylene). In examples of this fourth aspect, R 3 -R 4 is selected from the group consisting of -(CH 2 ) 2-8 -, -O(CH 2 ) 1-7 -, -O(CH 2 ) 1-6 O-, - NH(CH 2 ) 1-7 -, and -NH(CH 2 ) 1-6 O-. In certain cases of this fourth aspect, R 3 -R 4 is selected from the group consisting of -(CH 2 ) 2 -, -(CH 2 ) 3 -, -(CH 2 ) 4 -, -O(CH 2 ) 2 -, -O(CH 2 ) 3 -, -O(CH 2 ) 4 -, -O(CH 2 ) 2 O-, -O(CH 2 ) 3 O-, -OCH 2 CH(CH 3 )CH 2 O- , -O(CH 2 ) 4 O-, -O(CH 2 ) 5 O-, -NH(CH 2 ) 2 -, -NH(CH 2 ) 3 -, and -NH(CH 2 ) 3 O-. In this aspect, all other groups are as specified in the general formula (IV) of the fourth embodiment or in the first to third aspects described above.
В пятом аспекте четвертого варианта осуществления каждый R6 независимо выбран из группы, состоящей из Н, C1-С6 алкила, и C1-C6 галоалкила. В примерах этого аспекта каждый R6 независимо выбран из группы, состоящей из Н, C1-С3 алкила, и C1-С3 галоалкила. В конкретных примерах этого аспекта каждый R6 независимо выбран из группы, состоящей из Н, СН3, и CHF2. В этом аспекте все остальные группы являются такими, как указано в общей формуле (IV) четвертого варианта осуществления или в первом-четвертом аспектах, описанных выше.In the fifth aspect of the fourth embodiment, each R 6 is independently selected from the group consisting of H, C 1 -C 6 alkyl, and C 1 -C 6 haloalkyl. In examples of this aspect, each R 6 is independently selected from the group consisting of H, C 1 -C 3 alkyl, and C 1 -C 3 haloalkyl. In specific examples of this aspect, each R 6 is independently selected from the group consisting of H, CH 3 , and CHF 2 . In this aspect, all other groups are as specified in the general formula (IV) of the fourth embodiment or in the first to fourth aspects described above.
В шестом аспекте четвертого варианта осуществления каждый X1 независимо выбран из группы, состоящей из С=O, -CH2-, -CHF-, и -CF2-. В примерах этого аспекта X1 выбран из группы, состоящей из С=O и -СН2-. В конкретных примерах этого аспекта X1 представляет собой С=O. В этом варианте осуществления все остальные группы являются такими, как указано в общей формуле (IV) четвертого варианта осуществления или в первом-пятом аспектах, описанных выше.In the sixth aspect of the fourth embodiment, each X 1 is independently selected from the group consisting of C=O, -CH 2 -, -CHF-, and -CF 2 -. In examples of this aspect, X 1 is selected from the group consisting of C=O and -CH 2 -. In specific examples of this aspect, X 1 is C=O. In this embodiment, all other groups are as specified in the general formula (IV) of the fourth embodiment or in the first to fifth aspects described above.
В седьмом аспекте четвертого варианта осуществления каждый X2 независимо выбран из (C(R8)2)(1-3), где каждый R8 независимо выбран из группы, состоящей из Н, галогена, C1-C6 алкила, CN, OR6, N(R6)2, C1-С6 галоалкила, С3-С6 циклоалкила, C1-C6 алкила, замещенного OR6, и C1-С6 алкила, замещенного N(R6)2; необязательно, 2 R8 на разных атомах углерода могут быть взяты вместе совместно с атомами, к которым они присоединены, с образованием от 3- до 6-членного конденсированного кольца; и, необязательно, 2 R8 на одном атоме углерода могут быть взяты вместе совместно с атомом, к которому они присоединены, с образованием от 3- до 6-членного спироцикла. В первом случае этого аспекта каждый X2 представляет собой CH2CHR8, где R8 выбран из группы, состоящей из Н, C1-С3 алкила, C1-С3 алкила, замещенного ОН, C1-С3 алкила, замещенного ОС1-С3 алкилом, и С3-С6 циклоалкила. В отдельных примерах этого первого случая каждый X2 представляет собой CH2CHR8, где R8 выбран из группы, состоящей из Н, СН3, СН2ОН, СН2СН3, СН2СН2СН3, СН(СН3)2, СН2ОСН3, и циклопропила. Во втором случае этого аспекта каждый X2 представляет собой CHR8CHR8, где каждый R8 независимо выбран из группы, состоящей из Н, С1-С3 алкила, С1-С3 алкила, замещенного ОН, С1-С3 алкила, замещенного OC1-С3 алкилом, и С3-С6 циклоалкила, и, необязательно, 2 R8 на разных атомах углерода взяты вместе совместно с атомами, к которым они присоединены, с образованием от 3- до 6-членного конденсированного кольца. В отдельных примерах этого второго случая каждый X2 представляет собой CHR8CHR8, где каждый R8 независимо выбран из группы, состоящей из Н и C1-С3 алкила, и, необязательно, 2 R8 на разных атомах углерода взяты вместе совместно с атомами, к которым они присоединены, с образованием от 3- до 6-членного конденсированного кольца. В третьем случае этого аспекта каждый X2 представляет собой CH2C(R8)2, где каждый R8 независимо выбран из группы, состоящей из Н, C1-С3 алкила, C1-С3 алкила, замещенного ОН, C1-С3 алкила, замещенного ОС1-С3 алкилом, и С3-С6 циклоалкила, и, необязательно, 2 R8 на одном атоме углерода взяты вместе совместно с атомами, к которым они присоединены, с образованием от 3- до 6-членного спироцикла. В отдельных примерах этого третьего случая каждый X2 представляет собой CH2C(R8)2, где каждый R8 независимо выбран из группы, состоящей из Н и C1-С3 алкила, и, необязательно, 2 R8 на одном атоме углерода взяты вместе совместно с атомами, к которым они присоединены, с образованием от 3- до 6-членного спироцикла. В этом аспекте все остальные группы являются такими, как указано в общей формуле (IV) четвертого варианта осуществления или в первом-шестом аспектах, описанных выше.In the seventh aspect of the fourth embodiment, each X 2 is independently selected from (C(R 8 ) 2 ) (1-3) , wherein each R 8 is independently selected from the group consisting of H, halogen, C 1 -C 6 alkyl, CN, OR 6 , N(R 6 ) 2 , C 1 -C 6 haloalkyl, C 3 -C 6 cycloalkyl, C 1 -C 6 alkyl substituted with OR 6 , and C 1 -C 6 alkyl substituted with N(R 6 ) 2 ; optionally, the 2 R 8 on different carbon atoms can be taken together with the atoms to which they are attached to form a 3- to 6-membered fused ring; and, optionally, the 2 R 8 on one carbon atom can be taken together with the atom to which they are attached to form a 3- to 6-membered spirocycle. In the first case of this aspect, each X 2 represents CH 2 CHR 8 where R 8 is selected from the group consisting of H, C 1 -C 3 alkyl, C 1 -C 3 alkyl substituted by OH, C 1 -C 3 alkyl, substituted OS 1 -C 3 alkyl, and C 3 -C 6 cycloalkyl. In certain examples of this first case, each X 2 is CH 2 CHR 8 , where R 8 is selected from the group consisting of H, CH 3 , CH 2 OH, CH 2 CH 3 , CH 2 CH 2 CH 3 , CH(CH 3 ) 2 , CH 2 OCH 3 , and cyclopropyl. In the second case of this aspect, each X 2 is CHR 8 CHR 8 wherein each R 8 is independently selected from the group consisting of H, C 1 -C 3 alkyl, C 1 -C 3 alkyl substituted with OH, C 1 -C 3 alkyl substituted with OC 1 -C 3 alkyl, and C 3 -C 6 cycloalkyl, and optionally 2 R 8 on different carbon atoms are taken together with the atoms to which they are attached to form a 3- to 6-membered fused rings. In certain examples of this second case, each X 2 is CHR 8 CHR 8 , wherein each R 8 is independently selected from the group consisting of H and C 1 -C 3 alkyl, and, optionally, 2 R 8 on different carbon atoms are taken together together with the atoms to which they are attached to form a 3- to 6-membered fused ring. In a third embodiment of this aspect, each X 2 is CH 2 C(R 8 ) 2 , wherein each R 8 is independently selected from the group consisting of H, C 1 -C 3 alkyl, C 1 -C 3 alkyl, substituted OH, C 1 -C 3 alkyl substituted with OC 1 -C 3 alkyl, and C 3 -C 6 cycloalkyl, and optionally 2 R 8 on one carbon atom are taken together with the atoms to which they are attached to form 3- to 6-membered spirocycle. In certain examples of this third case, each X 2 is CH 2 C(R 8 ) 2 , where each R 8 is independently selected from the group consisting of H and C 1 -C 3 alkyl, and optionally 2 R 8 on one atom carbons are taken together with the atoms to which they are attached to form a 3- to 6-membered spirocycle. In this aspect, all other groups are as specified in the general formula (IV) of the fourth embodiment or in the first to sixth aspects described above.
В восьмом аспекте четвертого варианта осуществления каждый X3 независимо выбран из группы, состоящей из COOR6, C(O)SR6, C(S)OR6, SO2R6, C(O)N(R9)2, и CN. В примерах этого аспекта каждый X3 независимо выбран из группы, состоящей из COOR6, SO2R6, C(O)N(R9)2, и CN. В конкретных примерах этого аспекта каждый X3 независимо выбран из группы, состоящей из COOR6, C(O)N(R9)2, и CN. В даже более конкретных случаях этого аспекта каждый X3 независимо выбран из группы, состоящей из СООН, СООСН3, CONH2, и CN. В этом аспекте все остальные группы являются такими, как указано в общей формуле (IV) четвертого варианта осуществления или в первом-седьмом аспектах, описанных выше.In the eighth aspect of the fourth embodiment, each X 3 is independently selected from the group consisting of COOR 6 , C(O)SR 6 , C(S)OR 6 , SO 2 R 6 , C(O)N(R 9 ) 2 , and CN. In examples of this aspect, each X 3 is independently selected from the group consisting of COOR 6 . SO 2 R 6 , C(O)N(R 9 ) 2 , and CN. In specific examples of this aspect, each X 3 is independently selected from the group consisting of COOR 6 , C(O)N(R 9 ) 2 , and CN. In even more specific cases of this aspect, each X3 is independently selected from the group consisting of COOH, COOCH 3 , CONH 2 , and CN. In this aspect, all other groups are as specified in the general formula (IV) of the fourth embodiment or in the first to seventh aspects described above.
В девятом аспекте четвертого варианта осуществления каждый R9 независимо выбран из группы, состоящей из Н, COOR6, и SO2R6. В примерах этого аспекта каждый R9 независимо представляет собой Н. В этом аспекте все остальные группы являются такими, как указано в общей формуле (IV) четвертого варианта осуществления или в первом-восьмом аспектах, описанных выше.In the ninth aspect of the fourth embodiment, each R 9 is independently selected from the group consisting of H, COOR 6 , and SO 2 R 6 . In the examples of this aspect, each R 9 independently represents H. In this aspect, all other groups are as specified in the general formula (IV) of the fourth embodiment or in the first to eighth aspects described above.
Десятый аспект четвертого варианта осуществления относится к фармацевтической композиции, где указанная фармацевтическая композиция содержит (а) соединение согласно общей формуле (IV) четвертого варианта осуществления или первому-девятому аспектам, описанным выше, или его фармацевтически приемлемую соль; и (b) фармацевтически приемлемый носитель.The tenth aspect of the fourth embodiment relates to a pharmaceutical composition, wherein the pharmaceutical composition contains (a) a compound according to the general formula (IV) of the fourth embodiment or the first to ninth aspects described above, or a pharmaceutically acceptable salt thereof; and (b) a pharmaceutically acceptable carrier.
Одиннадцатый аспект четвертого варианта осуществления относится к способам индукции иммунного ответа у пациента, нуждающегося в терапии, включающим введение этому пациенту терапевтически эффективного количества соединения согласно общей формуле (IV) четвертого варианта осуществления или первому-девятому аспектам, описанным выше, или его фармацевтически приемлемой соли.An eleventh aspect of the fourth embodiment relates to methods of inducing an immune response in a patient in need of therapy, comprising administering to the patient a therapeutically effective amount of a compound according to general formula (IV) of the fourth embodiment or the first to ninth aspects described above, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
Двенадцатый аспект четвертого варианта осуществления относится к способам индукции иммунного ответа у пациента, нуждающегося в терапии, включающим введение этому пациенту терапевтически эффективного количества композиции согласно десятому аспекту, описанному выше.A twelfth aspect of the fourth embodiment relates to methods of inducing an immune response in a patient in need of therapy, comprising administering to that patient a therapeutically effective amount of a composition according to the tenth aspect described above.
Тринадцатый аспект четвертого варианта осуществления относится к способам индукции STING-зависимой продукции интерферона I типа у пациента, нуждающегося в терапии, включающим введение этому пациенту терапевтически эффективного количества соединения согласно вышеуказанной общей формуле (IV) четвертого варианта осуществления или первому-девятому аспектам, описанным выше, или его фармацевтически приемлемой соли.A thirteenth aspect of the fourth embodiment relates to methods for inducing STING-dependent type I interferon production in a patient in need of therapy, comprising administering to the patient a therapeutically effective amount of a compound according to the above general formula (IV) of the fourth embodiment or the first to ninth aspects described above, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
Четырнадцатый аспект четвертого варианта осуществления относится к способам индукции STING-зависимой продукции интерферона I типа у пациента, нуждающегося в терапии, включающим введение этому пациенту терапевтически эффективного количества композиции согласно десятому аспекту, описанному выше.A fourteenth aspect of the fourth embodiment relates to methods of inducing STING-dependent type I interferon production in a patient in need of therapy, comprising administering to the patient a therapeutically effective amount of a composition according to the tenth aspect described above.
Пятнадцатый аспект четвертого варианта осуществления относится к способам индукции STING-зависимой продукции цитокинов у пациента, нуждающегося в терапии, включающим введение этому пациенту терапевтически эффективного количества соединения согласно вышеуказанной общей формуле (IV) четвертого варианта осуществления или первому-девятому аспектам, описанным выше, или его фармацевтически приемлемой соли.A fifteenth aspect of the fourth embodiment relates to methods for inducing STING-dependent cytokine production in a patient in need of therapy, comprising administering to the patient a therapeutically effective amount of a compound according to the above general formula (IV) of the fourth embodiment or the first to ninth aspects described above, or pharmaceutically acceptable salt.
Шестнадцатый аспект четвертого варианта осуществления относится к способам индукции STING-зависимой продукции цитокинов у пациента, нуждающегося в терапии, включающим введение этому пациенту терапевтически эффективного количества композиции согласно десятому аспекту, описанному выше.A sixteenth aspect of the fourth embodiment relates to methods of inducing STING-dependent cytokine production in a patient in need of therapy, comprising administering to the patient a therapeutically effective amount of a composition according to the tenth aspect described above.
Семнадцатый аспект четвертого варианта осуществления относится к способам лечения нарушения пролиферации клеток у пациента, нуждающегося в терапии, включающим введение этому пациенту терапевтически эффективного количества соединения общей формулы (IV) или его фармацевтически приемлемой соли. В случаях этого семнадцатого аспекта четвертого варианта осуществления нарушение пролиферации клеток представляет собой рак.A seventeenth aspect of the fourth embodiment relates to methods of treating a cell proliferation disorder in a patient in need of therapy, comprising administering to the patient a therapeutically effective amount of a compound of general formula (IV) or a pharmaceutically acceptable salt thereof. In cases of this seventeenth aspect of the fourth embodiment, the cell proliferation disorder is cancer.
Восемнадцатый аспект четвертого варианта осуществления относится к способам лечения нарушения пролиферации клеток у пациента, нуждающегося в терапии, при этом указанный способ включает введение пациенту терапевтически эффективного количества композиции в соответствии с одиннадцатым аспектом, описанным выше. В случаях этого восемнадцатого аспекта четвертого варианта осуществления нарушение пролиферации клеток представляет собой рак.An eighteenth aspect of the fourth embodiment relates to methods of treating a cell proliferation disorder in a patient in need of therapy, the method comprising administering to the patient a therapeutically effective amount of a composition in accordance with the eleventh aspect described above. In cases of this eighteenth aspect of the fourth embodiment, the cell proliferation disorder is cancer.
В каждом аспекте четвертого варианта осуществления, описанного в настоящем документе, переменные R1, R2, R3, R4, R6, R8, R9, А, X1, X2, и X3 общей формулы (IV) четвертого варианта осуществления и его различных аспектов и случаев каждый независимо выбран из каждого, при условии, что, по меньшей мере, один из R1 , R2 , R3 , R4, R6, R8, и R9 не представляет собой Н.In each aspect of the fourth embodiment described herein, the variables R1 , R2 , R3 , R4 , R6 , R8 , R9 , A, X1 , X2 , and X3 of the general formula (IV) of the fourth embodiment and its various aspects and instances are each independently selected from each, with the proviso that at least one of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 6 , R 8 , and R 9 is not N.
Пятый вариант осуществления относится к соединениям общей формулы (V):The fifth embodiment relates to compounds of general formula (V):
или их фармацевтически приемлемой соли, где каждый A-R1 независимо выбран из группы, состоящей из C-R1 и N; каждый R1 независимо выбран из группы, состоящей из Н, галогена, OR6, N(R6)2, C1-C6 алкила, C1-C6 галоалкила, C1-C6 алкила, замещенного OR6, C1-C6 алкила, замещенного N(R6)2, COOR6, и C(O)N(R6)2; R3 и R4 независимо выбраны из группы, состоящей из O-(C1-C4 алкилен или галоалкилен), С1-С5 алкилена или галоалкилена, и N(R6)-(C1-C4 алкилен или галоалкилен); каждый X1 независимо выбран из группы, состоящей из С=O, -CH2-, -CHF-, и -CF2-; каждый X2 независимо выбран из (C(R8)2)(1-3), где каждый R8 независимо выбран из группы, состоящей из Н, галогена, C1-C6 алкила, CN, OR6, N(R6)2, C1-C6 галоалкила, С3-С6 циклоалкила, C1-C6 алкила, замещенного OR6, и C1-C6 алкила, замещенного N(R6)2; необязательно, 2 R8 на разных атомах углерода могут быть взяты вместе совместно с атомами, к которым они присоединены, с образованием от 3- до 6-членного конденсированного кольца; и, необязательно, 2 R8 на одном атоме углерода могут быть взяты вместе совместно с атомом, к которому они присоединены, с образованием от 3- до 6-членного спироцикла; каждый X3 независимо выбран из группы, состоящей из COOR6, C(O)SR6, C(S)OR6, S02R6, C(O)N(R9)2, и CN; и каждый R9 независимо выбран из группы, состоящей из Н, COOR, и SO2R6.or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein each AR 1 is independently selected from the group consisting of CR 1 and N; each R 1 is independently selected from the group consisting of H, halogen, OR 6 , N(R 6 ) 2 , C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 haloalkyl, C 1 -C 6 alkyl substituted with OR 6 , C 1 -C 6 alkyl substituted with N(R 6 ) 2 , COOR 6 , and C(O)N(R 6 ) 2 ; R 3 and R 4 are independently selected from the group consisting of O-(C 1 -C 4 alkylene or haloalkylene), C 1 -C 5 alkylene or haloalkylene, and N(R 6 )-(C 1 -C 4 alkylene or haloalkylene ); each X 1 is independently selected from the group consisting of C=O, -CH 2 -, -CHF-, and -CF 2 -; each X 2 is independently selected from (C(R 8 ) 2 ) (1-3) wherein each R 8 is independently selected from the group consisting of H, halogen, C 1 -C 6 alkyl, CN, OR 6 , N(R 6 ) 2 , C 1 -C 6 haloalkyl, C 3 -C 6 cycloalkyl, C 1 -C 6 alkyl substituted with OR 6 and C 1 -C 6 alkyl substituted with N(R 6 ) 2 ; optionally, the 2 R 8 on different carbon atoms can be taken together with the atoms to which they are attached to form a 3- to 6-membered fused ring; and, optionally, the 2 R 8 on one carbon atom can be taken together with the atom to which they are attached to form a 3- to 6-membered spirocycle; each X 3 is independently selected from the group consisting of COOR 6 , C(O)SR 6 , C(S)OR 6 , S02R 6 , C(O)N(R 9 ) 2 , and CN; and each R 9 is independently selected from the group consisting of H, COOR, and SO 2 R 6 .
В первом аспекте пятого варианта осуществления каждый A-R1 независимо выбран из группы, состоящей из C-R1 и N. В конкретных примерах этого аспекта каждый независимо выбран из группы, состоящей из В более конкретных случаях этого аспекта каждый независимо выбран из группы, состоящей из В этом аспекте все остальные группы являются такими, как указано в общей формуле (V) пятого варианта осуществления выше.In the first aspect of the fifth embodiment, each AR 1 is independently selected from the group consisting of CR 1 and N. In specific examples of this aspect, each independently selected from a group consisting of In more specific cases of this aspect, each independently selected from a group consisting of In this aspect, all other groups are as specified in the general formula (V) of the fifth embodiment above.
Во втором аспекте пятого варианта осуществления каждый R1 независимо выбран из группы, состоящей из Н, галогена, OR6, N(R6)2, C1-C6 алкила, C1-C6 галоалкила, C1-C6 алкила, замещенного OR6, C1-C6 алкила, замещенного N(R6)2, COOR6, и C(O)N(R6)2. В примерах этого аспекта каждый R1 независимо выбран из группы, состоящей из Н, галогена, C1-С3 алкила, и C1-С3 галоалкила. В конкретных примерах этого аспекта каждый R1 независимо выбран из группы, состоящей из Н и галогена. В более конкретных случаях этого аспекта каждый R1 независимо выбран из группы, состоящей из Н и F. В этом аспекте все остальные группы являются такими, как указано в вышеприведенной общей формуле (V) пятого варианта осуществления или в первом аспекте выше.In the second aspect of the fifth embodiment, each R 1 is independently selected from the group consisting of H, halogen, OR 6 , N(R 6 ) 2 , C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 haloalkyl, C 1 -C 6 alkyl , substituted OR 6 , C 1 -C 6 alkyl, substituted N(R 6 ) 2 , COOR 6 , and C(O)N(R 6 ) 2 . In examples of this aspect, each R 1 is independently selected from the group consisting of H, halogen, C 1 -C 3 alkyl, and C 1 -C 3 haloalkyl. In specific examples of this aspect, each R 1 is independently selected from the group consisting of H and halogen. In more specific cases of this aspect, each R 1 is independently selected from the group consisting of H and F. In this aspect, all other groups are as specified in the above general formula (V) of the fifth embodiment or in the first aspect above.
В третьем аспекте пятого варианта осуществления R3 и R4 независимо выбраны из группы, состоящей из O-(C1-C4 алкилен или галоалкилен), С1-С5 алкилена или галоалкилена, и N(R6)-(C1-C4 алкилен или галоалкилен). В примерах этого четвертого аспекта R3-R4 выбран из группы, состоящей из -(CH2)2-8-, -O(СН2)1-7-, -O(СН2)1-6 О-, -NH(CH2)1-7-, и -NH(CH2)1-6O-. В отдельных случаях этого четвертого аспекта R3-R4 выбран из группы, состоящей из -(СН2)2-, -(СН2)3-, -(СН2)4-, -O(СН2)2-, -O(СН2)3-, -O(СН2)4-, -O(СН2)2O-, -O(СН2)3О-, -ОСН2СН(СН3)CH2O-, -O(CH2)4O-, -O(CH2)5O-, -NH(CH2)2-, -NH(CH2)3-, и -NH(CH2)3O-. В этом аспекте все остальные группы являются такими, как указано в общей формуле (V) пятого варианта осуществления или в первом и втором аспектах, описанных выше.In the third aspect of the fifth embodiment, R 3 and R 4 are independently selected from the group consisting of O-(C 1 -C 4 alkylene or haloalkylene), C 1 -C 5 alkylene or haloalkylene, and N(R 6 )-(C 1 -C 4 alkylene or haloalkylene). In examples of this fourth aspect, R 3 -R 4 is selected from the group consisting of -(CH 2 ) 2-8 -, -O(CH 2 ) 1-7 -, -O(CH 2 ) 1-6 O-, - NH(CH 2 ) 1-7 -, and -NH(CH 2 ) 1-6 O-. In certain cases of this fourth aspect, R 3 -R 4 is selected from the group consisting of -(CH 2 ) 2 -, -(CH 2 ) 3 -, -(CH 2 ) 4 -, -O(CH 2 ) 2 -, -O(CH 2 ) 3 -, -O(CH 2 ) 4 -, -O(CH 2 ) 2 O-, -O(CH 2 ) 3 O-, -OSH 2 CH(CH 3 )CH 2 O- , -O(CH 2 ) 4 O-, -O(CH 2 )5O-, -NH(CH 2 ) 2 -, -NH(CH 2 ) 3 -, and -NH(CH 2 ) 3 O-. In this aspect, all other groups are as specified in the general formula (V) of the fifth embodiment or in the first and second aspects described above.
В четвертом аспекте пятого варианта осуществления каждый R6 независимо выбран из группы, состоящей из Н, C1-C6 алкила, и C1-C6 галоалкила. В примерах этого аспекта каждый R6 независимо выбран из группы, состоящей из Н, C1-С3 алкила, и C1-С3 галоалкила. В конкретных примерах этого аспекта каждый R6 независимо выбран из группы, состоящей из Н, СН3, и CHF2. В этом аспекте все остальные группы являются такими, как указано в общей формуле (V) пятого варианта осуществления или в первом-третьем аспектах, описанных выше.In the fourth aspect of the fifth embodiment, each R 6 is independently selected from the group consisting of H, C 1 -C 6 alkyl, and C 1 -C 6 haloalkyl. In examples of this aspect, each R 6 is independently selected from the group consisting of H, C 1 -C 3 alkyl, and C 1 -C 3 haloalkyl. In specific examples of this aspect, each R 6 is independently selected from the group consisting of H, CH 3 , and CHF 2 . In this aspect, all other groups are as specified in the general formula (V) of the fifth embodiment or in the first to third aspects described above.
В пятом аспекте пятого варианта осуществления каждый X1 независимо выбран из группы, состоящей из С=O, -СН2-, -CHF-, и -CF2-. В примерах этого аспекта X1 выбран из группы, состоящей из С=O и -СН2-. В конкретных примерах этого аспекта X1 представляет собой С=O. В этом варианте осуществления все остальные группы являются такими, как указано в общей формуле (V) пятого варианта осуществления или в первом-четвертом аспектах, описанных выше.In a fifth aspect of the fifth embodiment, each X 1 is independently selected from the group consisting of C=O, -CH 2 -, -CHF-, and -CF 2 -. In examples of this aspect, X 1 is selected from the group consisting of C=O and -CH 2 -. In specific examples of this aspect, X 1 is C=O. In this embodiment, all other groups are as specified in the general formula (V) of the fifth embodiment or in the first to fourth aspects described above.
В шестом аспекте пятого варианта осуществления каждый X2 независимо выбран из (C(R8)2)(1-3), где каждый R8 независимо выбран из группы, состоящей из Н, галогена, C1-C6 алкила, CN, OR6, N(R6)2, C1-C6 галоалкила, С3-С6 циклоалкила, C1-С6 алкила, замещенного OR6, и C1-C6 алкила, замещенного N(R6)2; необязательно, 2 R8 на разных атомах углерода могут быть взяты вместе совместно с атомами, к которым они присоединены, с образованием от 3- до 6-членного конденсированного кольца; и, необязательно, 2 R8 на одном атоме углерода могут быть взяты вместе совместно с атомом, к которому они присоединены, с образованием от 3- до 6-членного спироцикла. В первом случае этого аспекта каждый X2 представляет собой CH2CHR8, где R8 выбран из группы, состоящей из Н, С1-С3 алкила, C1-С3 алкила, замещенного ОН, С1-С3 алкила, замещенного ОС1-С3 алкилом, и С3-С6 циклоалкила. В отдельных примерах этого первого случая каждый X2 представляет собой CH2CHR8, где R8 выбран из группы, состоящей из Н, СН3, СН2ОН, СН2СН3, СН2СН2СН3, СН(СН3)2, СН2ОСН3, и циклопропила. Во втором случае этого аспекта каждый X2 представляет собой CHR8CHR8, где каждый R8 независимо выбран из группы, состоящей из Н, C1-С3 алкила, C1-С3 алкила, замещенного ОН, C1-С3 алкила, замещенного ОС1-С3 алкилом, и С3-С6 циклоалкила, и, необязательно, 2 R8 на разных атомах углерода взяты вместе совместно с атомами, к которым они присоединены, с образованием от 3- до 6-членного конденсированного кольца. В отдельных примерах этого второго случая каждый X2 представляет собой CHR8CHR8, где каждый R8 независимо выбран из группы, состоящей из Н и C1-С3 алкила, и, необязательно, 2 R8 на разных атомах углерода взяты вместе совместно с атомами, к которым они присоединены, с образованием от 3- до 6-членного конденсированного кольца. В третьем случае этого аспекта каждый X2 представляет собой CH2C(R8)2, где каждый R8 независимо выбран из группы, состоящей из Н, C1-С3 алкила, C1-С3 алкила, замещенного ОН, C1-С3 алкила, замещенного ОС1-С3 алкилом, и С3-С6 циклоалкила, и, необязательно, 2 R8 на одном атоме углерода взяты вместе совместно с атомами, к которым они присоединены, с образованием от 3- до 6-членного спироцикла. В отдельных примерах этого третьего случая каждый X2 представляет собой CH2C(R8)2, где каждый R8 независимо выбран из группы, состоящей из Н и C1-С3 алкила, и, необязательно, 2 R8 на одном атоме углерода взяты вместе совместно с атомами, к которым они присоединены, с образованием от 3- до 6-членного спироцикла. В этом аспекте все остальные группы являются такими, как указано в общей формуле (V) пятого варианта осуществления или в первом-пятом аспектах, описанных выше.In the sixth aspect of the fifth embodiment, each X 2 is independently selected from (C(R 8 ) 2 ) (1-3) , wherein each R 8 is independently selected from the group consisting of H, halogen, C 1 -C 6 alkyl, CN, OR 6 , N(R 6 ) 2 , C 1 -C 6 haloalkyl, C 3 -C 6 cycloalkyl, C 1 -C 6 alkyl substituted with OR 6 , and C 1 -C 6 alkyl substituted with N(R 6 ) 2 ; optionally, the 2 R 8 on different carbon atoms can be taken together with the atoms to which they are attached to form a 3- to 6-membered fused ring; and, optionally, the 2 R 8 on one carbon atom can be taken together with the atom to which they are attached to form a 3- to 6-membered spirocycle. In the first case of this aspect, each X 2 represents CH 2 CHR 8 where R 8 is selected from the group consisting of H, C 1 -C 3 alkyl, C 1 -C 3 alkyl substituted with OH, C 1 -C 3 alkyl, substituted OS 1 -C 3 alkyl, and C 3 -C 6 cycloalkyl. In certain examples of this first case, each X 2 is CH 2 CHR 8 , where R 8 is selected from the group consisting of H, CH 3 , CH 2 OH, CH 2 CH 3 , CH 2 CH 2 CH 3 , CH(CH 3 ) 2 , CH 2 OCH 3 , and cyclopropyl. In the second case of this aspect, each X 2 is CHR 8 CHR 8 wherein each R 8 is independently selected from the group consisting of H, C 1 -C 3 alkyl, C 1 -C 3 alkyl substituted with OH, C 1 -C 3 alkyl substituted with OC 1 -C 3 alkyl, and C 3 -C 6 cycloalkyl, and optionally 2 R 8 on different carbon atoms are taken together with the atoms to which they are attached to form a 3- to 6-membered fused rings. In certain examples of this second case, each X 2 is CHR 8 CHR 8 , wherein each R 8 is independently selected from the group consisting of H and C 1 -C 3 alkyl, and, optionally, 2 R 8 on different carbon atoms are taken together together with the atoms to which they are attached to form a 3- to 6-membered fused ring. In a third embodiment of this aspect, each X 2 is CH 2 C(R 8 ) 2 , wherein each R 8 is independently selected from the group consisting of H, C 1 -C 3 alkyl, C 1 -C 3 alkyl, substituted OH, C 1 -C 3 alkyl substituted with OC 1 -C 3 alkyl, and C 3 -C 6 cycloalkyl, and optionally 2 R 8 on one carbon atom are taken together with the atoms to which they are attached to form 3- to 6-membered spirocycle. In certain examples of this third case, each X 2 is CH 2 C(R 8 ) 2 , where each R 8 is independently selected from the group consisting of H and C 1 -C 3 alkyl, and optionally 2 R 8 on one atom carbons are taken together with the atoms to which they are attached to form a 3- to 6-membered spirocycle. In this aspect, all other groups are as specified in the general formula (V) of the fifth embodiment or in the first to fifth aspects described above.
В седьмом аспекте пятого варианта осуществления каждый X3 независимо выбран из группы, состоящей из COOR6, C(O)SR6, C(S)OR6, , SO2R6, C(O)N(R9)2, и CN. В примерах этого аспекта каждый X3 независимо выбран из группы, состоящей из COOR6, SO2R6, C(O)N(R9)2, и CN. В конкретных примерах этого аспекта каждый X3 независимо выбран из группы, состоящей из COOR6, C(O)N(R9)2, и CN. В даже более конкретных случаях этого аспекта каждый X3 независимо выбран из группы, состоящей из СООН, СООСН3, CONH2, и CN. В этом аспекте все остальные группы являются такими, как указано в общей формуле (V) пятого варианта осуществления или в первом-шестом аспектах, описанных выше.In the seventh aspect of the fifth embodiment, each X 3 is independently selected from the group consisting of COOR 6 , C(O)SR 6 , C(S)OR 6 , , SO 2 R 6 , C(O)N(R 9 ) 2 , and CN. In examples of this aspect, each X 3 is independently selected from the group consisting of COOR 6 . SO 2 R 6 , C(O)N(R 9 ) 2 , and CN. In specific examples of this aspect, each X 3 is independently selected from the group consisting of COOR 6 , C(O)N(R 9 ) 2 , and CN. In even more specific cases of this aspect, each X 3 is independently selected from the group consisting of COOH, COOCH 3 , CONH 2 , and CN. In this aspect, all other groups are as specified in the general formula (V) of the fifth embodiment or in the first to sixth aspects described above.
В восьмом аспекте пятого варианта осуществления каждый R9 независимо выбран из группы, состоящей из Н, COOR6, и SO2R6. В примерах этого аспекта каждый R9 независимо представляет собой Н. В этом аспекте все остальные группы являются такими, как указано в общей формуле (V) пятого варианта осуществления или в первом-седьмом аспектах, описанных выше.In the eighth aspect of the fifth embodiment, each R 9 is independently selected from the group consisting of H, COOR 6 , and SO 2 R 6 . In the examples of this aspect, each R 9 independently represents H. In this aspect, all other groups are as specified in the general formula (V) of the fifth embodiment or in the first to seventh aspects described above.
Девятый аспект пятого варианта осуществления относится к фармацевтической композиции, где указанная фармацевтическая композиция содержит (а) соединение согласно общей формуле (V) пятого варианта осуществления или с первого по восьмой аспектам, описанным выше, или его фармацевтически приемлемую соль; и (b) фармацевтически приемлемый носитель.The ninth aspect of the fifth embodiment relates to a pharmaceutical composition, wherein said pharmaceutical composition contains (a) a compound according to general formula (V) of the fifth embodiment or the first to eighth aspects described above, or a pharmaceutically acceptable salt thereof; and (b) a pharmaceutically acceptable carrier.
Десятый аспект пятого варианта осуществления относится к способам индукции иммунного ответа у пациента, нуждающегося в терапии, включающим введение этому пациенту терапевтически эффективного количества соединения согласно общей формуле (V) пятого варианта осуществления или с первого по восьмой аспектам, описанным выше, или его фармацевтически приемлемой соли.A tenth aspect of the fifth embodiment relates to methods of inducing an immune response in a patient in need of therapy, comprising administering to the patient a therapeutically effective amount of a compound according to general formula (V) of the fifth embodiment or the first to eighth aspects described above, or a pharmaceutically acceptable salt thereof .
Одиннадцатый аспект пятого варианта осуществления относится к способам индукции иммунного ответа у пациента, нуждающегося в терапии, включающим введение этому пациенту терапевтически эффективного количества композиции согласно девятому аспекту, описанному выше.An eleventh aspect of the fifth embodiment relates to methods of inducing an immune response in a patient in need of therapy, comprising administering to that patient a therapeutically effective amount of a composition according to the ninth aspect described above.
Двенадцатый аспект пятого варианта осуществления относится к способам индукции STING-зависимой продукции интерферона I типа у пациента, нуждающегося в терапии, включающим введение этому пациенту терапевтически эффективного количества соединения согласно вышеприведенной общей формуле (V) пятого варианта осуществления или с первого по восьмой аспектам, описанным выше, или его фармацевтически приемлемой соли.A twelfth aspect of the fifth embodiment relates to methods for inducing STING-dependent production of type I interferon in a patient in need of therapy, comprising administering to the patient a therapeutically effective amount of a compound according to the above general formula (V) of the fifth embodiment or the first to eighth aspects described above , or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
Тринадцатый аспект пятого варианта осуществления относится к способам индукции STING-зависимой продукции интерферона I типа у пациента, нуждающегося в терапии, включающим введение этому пациенту терапевтически эффективного количества композиции согласно девятому аспекту, описанному выше.A thirteenth aspect of the fifth embodiment relates to methods of inducing STING-dependent type I interferon production in a patient in need of therapy, comprising administering to the patient a therapeutically effective amount of a composition according to the ninth aspect described above.
Четырнадцатый аспект пятого варианта осуществления относится к способам индукции STING-зависимой продукции цитокинов у пациента, нуждающегося в терапии, включающим введение этому пациенту терапевтически эффективного количества соединения согласно вышеприведенной общей формуле (V) пятого варианта осуществления или с первого по восьмой аспектам, описанным выше, или его фармацевтически приемлемой соли.A fourteenth aspect of the fifth embodiment relates to methods for inducing STING-dependent cytokine production in a patient in need of therapy, comprising administering to the patient a therapeutically effective amount of a compound according to the above general formula (V) of the fifth embodiment or the first to eighth aspects described above, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
Пятнадцатый аспект пятого варианта осуществления относится к способам индукции STING-зависимой продукции цитокинов у пациента, нуждающегося в терапии, включающим введение этому пациенту терапевтически эффективного количества композиции согласно девятому аспекту, описанному выше.A fifteenth aspect of the fifth embodiment relates to methods of inducing STING-dependent cytokine production in a patient in need of therapy, comprising administering to the patient a therapeutically effective amount of a composition according to the ninth aspect described above.
Шестнадцатый аспект пятого варианта осуществления относится к способам лечения нарушения пролиферации клеток у пациента, нуждающегося в терапии, включающим введение этому пациенту терапевтически эффективного количества соединения согласно вышеприведенной общей формуле (V) пятого варианта осуществления или с первого по восьмой аспектам, описанным выше, или его фармацевтически приемлемой соли. В случаях этого шестнадцатого аспекта пятого варианта осуществления нарушение пролиферации клеток представляет собой рак.A sixteenth aspect of the fifth embodiment relates to methods for treating a cell proliferation disorder in a patient in need of therapy, comprising administering to the patient a therapeutically effective amount of a compound according to the above general formula (V) of the fifth embodiment or the first to eighth aspects described above, or pharmaceutically thereof acceptable salt. In cases of this sixteenth aspect of the fifth embodiment, the cell proliferation disorder is cancer.
Семнадцатый аспект пятого варианта осуществления относится к способам лечения нарушения пролиферации клеток у пациента, нуждающегося в терапии, где указанный способ включает введение этому пациенту терапевтически эффективного количества композиции в соответствии с девятым аспектом, описанным выше. В случаях этого семнадцатого аспекта пятого варианта осуществления нарушение пролиферации клеток представляет собой рак.A seventeenth aspect of the fifth embodiment relates to methods of treating a cell proliferation disorder in a patient in need of therapy, wherein the method comprises administering to the patient a therapeutically effective amount of a composition in accordance with the ninth aspect described above. In cases of this seventeenth aspect of the fifth embodiment, the cell proliferation disorder is cancer.
В каждом аспекте пятого варианта осуществления, описанного в настоящем документе, переменные R1 , R2 , R3 , R4, R6, R8, R9, А, X1, X2 и X3 общей формулы (V) пятого варианта осуществления и их различных аспектов и случаев, каждый независимо выбран из каждого, при условии, что, по меньшей мере, один из R1 , R2 , R3 , R4, R6, R8, и R9 не представляет собой Н.In each aspect of the fifth embodiment described herein, the variables R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 6 , R 8 , R 9 , A, X 1 , X 2 and X 3 of the general formula (V) of the fifth embodiment and various aspects and instances thereof, each independently selected from each, with the proviso that at least one of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 6 , R 8 , and R 9 is not N.
Шестой вариант осуществления относится к соединениям общей формулы (VI):The sixth embodiment relates to compounds of general formula (VI):
или их фармацевтически приемлемой соли, где каждый A-R1 независимо выбран из группы, состоящей из C-R1 и N; каждый R1 независимо выбран из группы, состоящей из Н, галогена, OR6, N(R6)2, C1-C6 алкила, C1-C6 галоалкила, C1-C6 алкила, замещенного OR6, C1-C6 алкила, замещенного N(R6)2, COOR6, и C(O)N(R6)2; R3 и R4 независимо выбраны из группы, состоящей из O-(C1-C4 алкилен или галоалкилен), С1-С5 алкилена или галоалкилена, и N(R6)-(C1-C4 алкилен или галоалкилен); каждый R6 независимо выбран из группы, состоящей из Н, C1-C6 алкила, и C1-C6 галоалкила; каждый X1 независимо выбран из группы, состоящей из С=O, -СН2-, -CHF-, и -CF2-; каждый X2 независимо выбран из (C(R8)2)(1-3), где каждый R8 независимо выбран из группы, состоящей из Н, галогена, C1-C6 алкила, CN, OR6, N(R6)2, C1-C6 галоалкила, С3-С6 циклоалкила, C1-C6 алкила, замещенного OR6, и C1-C6 алкила, замещенного N(R6)2; необязательно, 2 R8 на разных атомах углерода могут быть взяты вместе совместно с атомами, к которым они присоединены, с образованием от 3- до 6-членного конденсированного кольца; и, необязательно, 2 R8 на одном атоме углерода могут быть взяты вместе совместно с атомом, к которому они присоединены, с образованием от 3- до 6-членного спироцикла; каждый X3 независимо выбран из группы, состоящей из COOR6, C(O)SR6, C(S)OR6, SO2R6, C(O)N(R9)2, и CN; и каждый R9 независимо выбран из группы, состоящей из Н, COOR6, и SO2R6.or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein each AR 1 is independently selected from the group consisting of CR 1 and N; each R 1 is independently selected from the group consisting of H, halogen, OR 6 , N(R 6 ) 2 , C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 haloalkyl, C 1 -C 6 alkyl substituted OR 6 , C 1 -C 6 alkyl substituted with N(R 6 ) 2 , COOR 6 , and C(O)N(R 6 ) 2 ; R 3 and R 4 are independently selected from the group consisting of O-(C 1 -C 4 alkylene or haloalkylene), C 1 -C 5 alkylene or haloalkylene, and N(R 6 )-(C 1 -C 4 alkylene or haloalkylene ); each R 6 is independently selected from the group consisting of H, C 1 -C 6 alkyl, and C 1 -C 6 haloalkyl; each X 1 is independently selected from the group consisting of C=O, -CH 2 -, -CHF-, and -CF 2 -; each X 2 is independently selected from (C(R 8 ) 2 ) (1-3) wherein each R 8 is independently selected from the group consisting of H, halogen, C 1 -C 6 alkyl, CN, OR 6 , N(R 6 ) 2 , C 1 -C 6 haloalkyl, C 3 -C 6 cycloalkyl, C 1 -C 6 alkyl substituted with OR 6 and C 1 -C 6 alkyl substituted with N(R 6 ) 2 ; optionally, the 2 R 8 on different carbon atoms can be taken together with the atoms to which they are attached to form a 3- to 6-membered fused ring; and, optionally, the 2 R 8 on one carbon atom can be taken together with the atom to which they are attached to form a 3- to 6-membered spirocycle; each X 3 is independently selected from the group consisting of COOR 6 , C(O)SR 6 , C(S)OR 6 , SO 2 R 6 , C(O)N(R 9 ) 2 , and CN; and each R 9 is independently selected from the group consisting of H, COOR 6 , and SO 2 R 6 .
В первом аспекте шестого варианта осуществления каждый A-R1 независимо выбран из группы, состоящей из C-R1 и N. В конкретных примерах этого аспекта каждый независимо выбран из группы, состоящей из В более конкретных случаях этого аспекта каждый независимо выбран из группы, состоящей из и В этом аспекте все остальные группы являются такими, как указано в общей формуле (VI) шестого варианта осуществления выше.In the first aspect of the sixth embodiment, each AR 1 is independently selected from the group consisting of CR 1 and N. In specific examples of this aspect, each independently selected from a group consisting of In more specific cases of this aspect, each independently selected from a group consisting of And In this aspect, all other groups are as specified in the general formula (VI) of the sixth embodiment above.
Во втором аспекте шестого варианта осуществления каждый R1 независимо выбран из группы, состоящей из Н, галогена, OR6, N(R6)2, C1-C6 алкила, C1-C6 галоалкила, C1-C6 алкила, замещенного OR6, C1-C6 алкила, замещенного N(R6)2, COOR6, и C(O)N(R6)2. В примерах этого аспекта каждый R1 независимо выбран из группы, состоящей из Н, галогена, С1-С3 алкила, и С1-С3 галоалкила. В конкретных примерах этого аспекта каждый R1 независимо выбран из группы, состоящей из Н и галогена. В более конкретных случаях этого аспекта каждый R1 независимо выбран из группы, состоящей из Н и F. В этом аспекте все остальные группы являются такими, как указано в приведенной выше общей формуле (VI) шестого варианта осуществления или в первом аспекте выше.In the second aspect of the sixth embodiment, each R 1 is independently selected from the group consisting of H, halogen, OR 6 , N(R 6 ) 2 , C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 haloalkyl, C 1 -C 6 alkyl , substituted OR 6 , C 1 -C 6 alkyl, substituted N(R 6 ) 2 , COOR 6 , and C(O)N(R 6 ) 2 . In examples of this aspect, each R 1 is independently selected from the group consisting of H, halogen, C 1 -C 3 alkyl, and C 1 -C 3 haloalkyl. In specific examples of this aspect, each R 1 is independently selected from the group consisting of H and halogen. In more specific cases of this aspect, each R 1 is independently selected from the group consisting of H and F. In this aspect, all other groups are as specified in the above general formula (VI) of the sixth embodiment or in the first aspect above.
В третьем аспекте шестого варианта осуществления R3 и R4 независимо выбраны из группы, состоящей из O-(C1-C4 алкилен или галоалкилен), С1-С5 алкилена или галоалкилена, и N(R6)-(C1-C4 алкилен или галоалкилен). В примерах этого четвертого аспекта R3-R4 выбран из группы, состоящей из -(СР2)2-8-, -O(СН2)1-7-, -O(СН2)1-6О-, -NH(CH2)1-7-, и -NH(CH2)1-6O-. В отдельных случаях этого четвертого аспекта R3-R4 выбран из группы, состоящей из -(СН2)2-, -(СН2)3-, -(СН2)4-, -O(СН2)2-, -O(СН2)3-, -O(СН2)4-, -O(СН2)2O-, -O(СН2)3О-, -ОСН2СН(СН3)CH2O-, -O(CH2)4O-, -O(CH2)5O-, -NH(CH2)2-, -NH(CH2)3-, и -NH(CH2)3O-. В этом аспекте все остальные группы являются такими, как указано в общей формуле (VI) шестого варианта осуществления или в первом и втором аспектах, описанных выше.In the third aspect of the sixth embodiment, R 3 and R 4 are independently selected from the group consisting of O-(C 1 -C 4 alkylene or haloalkylene), C 1 -C 5 alkylene or haloalkylene, and N(R 6 )-(C 1 -C 4 alkylene or haloalkylene). In examples of this fourth aspect, R 3 -R 4 is selected from the group consisting of -(CP 2 ) 2-8- , -O(CH 2 ) 1-7 -, -O(CH 2 ) 1-6 O-, - NH(CH 2 ) 1-7 -, and -NH(CH 2 ) 1-6 O-. In certain cases of this fourth aspect, R 3 -R 4 is selected from the group consisting of -(CH 2 ) 2 -, -(CH 2 ) 3 -, -(CH 2 ) 4 -, -O(CH 2 ) 2 -, -O(CH 2 ) 3 -, -O(CH 2 ) 4 -, -O(CH 2 ) 2 O-, -O(CH 2 ) 3 O-, -OSH 2 CH(CH 3 )CH 2 O- , -O(CH 2 ) 4 O-, -O(CH 2 )5O-, -NH(CH 2 ) 2 -, -NH(CH 2 ) 3 -, and -NH(CH 2 ) 3 O-. In this aspect, all other groups are as specified in the general formula (VI) of the sixth embodiment or in the first and second aspects described above.
В четвертом аспекте шестого варианта осуществления каждый R6 независимо выбран из группы, состоящей из Н, C1-C6 алкила, и C1-C6 галоалкила. В примерах этого аспекта каждый R6 независимо выбран из группы, состоящей из Н, C1-С3 алкила, и С1-С3 галоалкила. В конкретных примерах этого аспекта каждый R6 независимо выбран из группы, состоящей из Н, СН3, и CHF2. В этом аспекте все остальные группы являются такими, как указано в общей формуле (VI) шестого варианта осуществления или в первом-третьем аспектах, описанных выше.In the fourth aspect of the sixth embodiment, each R 6 is independently selected from the group consisting of H, C 1 -C 6 alkyl, and C 1 -C 6 haloalkyl. In examples of this aspect, each R 6 is independently selected from the group consisting of H, C 1 -C 3 alkyl, and C 1 -C 3 haloalkyl. In specific examples of this aspect, each R 6 is independently selected from the group consisting of H, CH 3 , and CHF 2 . In this aspect, all other groups are as specified in the general formula (VI) of the sixth embodiment or in the first to third aspects described above.
В пятом аспекте шестого варианта осуществления каждый X1 независимо выбран из группы, состоящей из С=O, -СН2-, -CHF-, и -CF2-. В примерах этого аспекта X1 выбран из группы, состоящей из С=O и -СН2-. В конкретных примерах этого аспекта X1 представляет собой С=O. В этом варианте осуществления все остальные группы являются такими, как указано в общей формуле (VI) шестого варианта осуществления или в первом-четвертом аспектах, описанных выше.In the fifth aspect of the sixth embodiment, each X 1 is independently selected from the group consisting of C=O, -CH 2 -, -CHF-, and -CF 2 -. In examples of this aspect, X 1 is selected from the group consisting of C=O and -CH 2 -. In specific examples of this aspect, X 1 is C=O. In this embodiment, all other groups are as specified in the general formula (VI) of the sixth embodiment or in the first to fourth aspects described above.
В шестом аспекте шестого варианта осуществления каждый X2 независимо выбран из (C(R8)2)(1-3), где каждый R8 независимо выбран из группы, состоящей из Н, галогена, C1-C6 алкила, CN, OR6, N(R6)2, C1-C6 галоалкила, С3-С6 циклоалкила, C1-C6 алкила, замещенного OR6, и C1-C6 алкила, замещенного N(R6)2; необязательно, 2 R8 на разных атомах углерода могут быть взяты вместе совместно с атомами, к которым они присоединены, с образованием от 3- до 6-членного конденсированного кольца; и, необязательно, 2 R8 на одном атоме углерода могут быть взяты вместе совместно с атомом, к которому они присоединены, с образованием от 3- до 6-членного спироцикла. В первом случае этого аспекта каждый X2 представляет собой CH2CHR8, где R8 выбран из группы, состоящей из Н, С1-С3 алкила, С1-С3 алкила, замещенного ОН, С1-С3 алкила, замещенного ОС1-С3 алкилом, и С3-С6 циклоалкила. В отдельных примерах этого первого случая каждый X2 представляет собой CH2CHR8, где R8 выбран из группы, состоящей из Н, СН3, СН2ОН, СН2СН3, СН2СН2СН3, СН(СН3)2, СН2ОСН3, и циклопропила. Во втором случае этого аспекта каждый X2 представляет собой CHR8CHR8, где каждый R8 независимо выбран из группы, состоящей из Н, C1-С3 алкила, О-С3 алкила, замещенного ОН, C1-С3 алкила, замещенного ОС1-С3 алкилом, и С3-С6 циклоалкила, и, необязательно, 2 R8 на разных атомах углерода взяты вместе совместно с атомами, к которым они присоединены, с образованием от 3- до 6-членного конденсированного кольца. В отдельных примерах этого второго случая каждый X2 представляет собой CHR8CHR8, где каждый R8 независимо выбран из группы, состоящей из Н и С1-С3 алкила, и, необязательно, 2 R8 на разных атомах углерода взяты вместе совместно с атомами, к которым они присоединены, с образованием от 3- до 6-членного конденсированного кольца. В третьем случае этого аспекта каждый X2 представляет собой CH2C(R8)2, где каждый R8 независимо выбран из группы, состоящей из Н, С1-С3 алкила, С1-С3 алкила, замещенного ОН, С1-С3 алкила, замещенного ОС1-С3 алкилом, и С3-С6 циклоалкила, и, необязательно, 2 R8 на одном атоме углерода взяты вместе совместно с атомами, к которым они присоединены, с образованием от 3- до 6-членного спироцикла. В отдельных примерах этого третьего случая каждый X2 представляет собой CH2C(R8)2, где каждый R8 независимо выбран из группы, состоящей из Н и С1-С3 алкила, и, необязательно, 2 R8 на одном атоме углерода взяты вместе совместно с атомами, к которым они присоединены, с образованием от 3- до 6-членного спироцикла. В этом аспекте все остальные группы являются такими, как указано в общей формуле (VI) шестого варианта осуществления или в первом-пятом аспектах, описанных выше.In the sixth aspect of the sixth embodiment, each X 2 is independently selected from (C(R 8 ) 2 ) (1-3) , wherein each R 8 is independently selected from the group consisting of H, halogen, C 1 -C 6 alkyl, CN, OR 6 , N(R 6 ) 2 , C 1 -C 6 haloalkyl, C 3 -C 6 cycloalkyl, C 1 -C 6 alkyl substituted with OR 6 , and C 1 -C 6 alkyl substituted with N(R 6 ) 2 ; optionally, the 2 R 8 on different carbon atoms can be taken together with the atoms to which they are attached to form a 3- to 6-membered fused ring; and, optionally, the 2 R 8 on one carbon atom can be taken together with the atom to which they are attached to form a 3- to 6-membered spirocycle. In the first case of this aspect, each X 2 represents CH 2 CHR 8 where R 8 is selected from the group consisting of H, C 1 -C 3 alkyl, C 1 -C 3 alkyl substituted with OH, C 1 -C 3 alkyl, substituted OS 1 -C 3 alkyl, and C 3 -C 6 cycloalkyl. In certain examples of this first case, each X 2 is CH 2 CHR 8 , where R 8 is selected from the group consisting of H, CH 3 , CH 2 OH, CH 2 CH 3 , CH 2 CH 2 CH 3 , CH(CH 3 ) 2 , CH 2 OCH 3 , and cyclopropyl. In the second case of this aspect, each X 2 is CHR 8 CHR 8 wherein each R 8 is independently selected from the group consisting of H, C 1 -C 3 alkyl, O-C 3 alkyl, OH substituted, C 1 -C 3 alkyl , substituted with OC 1 -C 3 alkyl, and C 3 -C 6 cycloalkyl, and optionally 2 R 8 on different carbon atoms are taken together with the atoms to which they are attached to form a 3- to 6-membered fused ring . In certain examples of this second case, each X 2 is CHR 8 CHR 8 , wherein each R 8 is independently selected from the group consisting of H and C 1 -C 3 alkyl, and, optionally, 2 R 8 on different carbon atoms are taken together together with the atoms to which they are attached to form a 3- to 6-membered fused ring. In a third embodiment of this aspect, each X 2 is CH 2 C(R 8 ) 2 , wherein each R 8 is independently selected from the group consisting of H, C 1 -C 3 alkyl, C 1 -C 3 alkyl, substituted OH, C 1 -C 3 alkyl substituted with OC 1 -C 3 alkyl, and C 3 -C 6 cycloalkyl, and optionally 2 R 8 on one carbon atom are taken together with the atoms to which they are attached to form 3- to 6-membered spirocycle. In certain examples of this third case, each X 2 is CH 2 C(R 8 ) 2 , where each R 8 is independently selected from the group consisting of H and C 1 -C 3 alkyl, and optionally 2 R 8 on one atom carbons are taken together with the atoms to which they are attached to form a 3- to 6-membered spirocycle. In this aspect, all other groups are as specified in the general formula (VI) of the sixth embodiment or in the first to fifth aspects described above.
В седьмом аспекте шестого варианта осуществления каждый X3 независимо выбран из группы, состоящей из COOR6, C(O)SR6, C(S)OR6, , SO2R6, C(O)N(R9)2, и CN. В примерах этого аспекта каждый X3 независимо выбран из группы, состоящей из COOR6, SO2R6, C(O)N(R9)2, и CN. В конкретных примерах этого аспекта каждый X3 независимо выбран из группы, состоящей из COOR6, C(O)N(R9)2, и CN. В даже более конкретных случаях этого аспекта каждый X3 независимо выбран из группы, состоящей из СООН, СООСН3, CONH2, и CN. В этом аспекте все остальные группы являются такими, как указано в общей формуле (VI) шестого варианта осуществления или в первом-шестом аспектах, описанных выше.In the seventh aspect of the sixth embodiment, each X 3 is independently selected from the group consisting of COOR 6 , C(O)SR 6 , C(S)OR 6 , , SO 2 R 6 , C(O)N(R 9 ) 2 , and CN. In examples of this aspect, each X 3 is independently selected from the group consisting of COOR 6 . SO 2 R 6 , C(O)N(R 9 ) 2 , and CN. In specific examples of this aspect, each X 3 is independently selected from the group consisting of COOR 6 , C(O)N(R 9 ) 2 , and CN. In even more specific cases of this aspect, each X 3 is independently selected from the group consisting of COOH, COOCH 3 , CONH 2 , and CN. In this aspect, all other groups are as specified in the general formula (VI) of the sixth embodiment or in the first to sixth aspects described above.
В восьмом аспекте шестого варианта осуществления каждый R9 независимо выбран из группы, состоящей из Н, COOR6, и SO2R6. В примерах этого аспекта каждый R9 независимо представляет собой Н. В этом аспекте все остальные группы являются такими, как указано в общей формуле (V) пятого варианта осуществления или в первом-седьмом аспектах, описанных выше.In the eighth aspect of the sixth embodiment, each R 9 is independently selected from the group consisting of H, COOR 6 , and SO 2 R 6 . In the examples of this aspect, each R 9 independently represents H. In this aspect, all other groups are as specified in the general formula (V) of the fifth embodiment or in the first to seventh aspects described above.
Девятый аспект шестого варианта осуществления относится к фармацевтической композиции, где указанная фармацевтическая композиция содержит (а) соединение согласно общей формуле (VI) шестого варианта осуществления или с первого по восьмой аспектам, описанным выше, или его фармацевтически приемлемую соль; и (b) фармацевтически приемлемый носитель.The ninth aspect of the sixth embodiment relates to a pharmaceutical composition, wherein said pharmaceutical composition contains (a) a compound according to the general formula (VI) of the sixth embodiment or the first to eighth aspects described above, or a pharmaceutically acceptable salt thereof; and (b) a pharmaceutically acceptable carrier.
Десятый аспект шестого варианта осуществления относится к способам индукции иммунного ответа у пациента, нуждающегося в терапии, включающим введение этому пациенту терапевтически эффективного количества соединения согласно общей формуле (VI) шестого варианта осуществления или с первого по восьмой аспектам, описанным выше, или его фармацевтически приемлемой соли.A tenth aspect of the sixth embodiment relates to methods of inducing an immune response in a patient in need of therapy, comprising administering to the patient a therapeutically effective amount of a compound according to general formula (VI) of the sixth embodiment or the first to eighth aspects described above, or a pharmaceutically acceptable salt thereof .
Одиннадцатый аспект шестого варианта осуществления относится к способам индукции иммунного ответа у пациента, нуждающегося в терапии, включающим введение этому пациенту терапевтически эффективного количества композиции согласно девятому аспекту, описанному выше.An eleventh aspect of the sixth embodiment relates to methods of inducing an immune response in a patient in need of therapy, comprising administering to that patient a therapeutically effective amount of a composition according to the ninth aspect described above.
Двенадцатый аспект шестого варианта осуществления относится к способам индукции STING-зависимой продукции интерферона I типа у пациента, нуждающегося в терапии, включающим введение этому пациенту терапевтически эффективного количества соединения согласно приведенной выше общей формуле (VI) шестого варианта осуществления или с первого по восьмой аспектам, описанным выше или его фармацевтически приемлемой соли.A twelfth aspect of the sixth embodiment relates to methods for inducing STING-dependent production of type I interferon in a patient in need of therapy, comprising administering to the patient a therapeutically effective amount of a compound according to the above general formula (VI) of the sixth embodiment or the first to eighth aspects described above or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
Тринадцатый аспект шестого варианта осуществления относится к способам индукции STING-зависимой продукции интерферона I типа у пациента, нуждающегося в терапии, включающим введение этому пациенту терапевтически эффективного количества композиции согласно девятому аспекту, описанному выше.A thirteenth aspect of the sixth embodiment relates to methods of inducing STING-dependent type I interferon production in a patient in need of therapy, comprising administering to the patient a therapeutically effective amount of a composition according to the ninth aspect described above.
Четырнадцатый аспект шестого варианта осуществления относится к способам индукции STING-зависимой продукции цитокинов у пациента, нуждающегося в терапии, включающим введение этому пациенту терапевтически эффективного количества соединения согласно приведенной выше общей формуле (VI) шестого варианта осуществления или с первого по восьмой аспектам, описанным выше, или его фармацевтически приемлемой соли.A fourteenth aspect of the sixth embodiment relates to methods for inducing STING-dependent cytokine production in a patient in need of therapy, comprising administering to the patient a therapeutically effective amount of a compound according to the above general formula (VI) of the sixth embodiment or the first to eighth aspects described above, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
Пятнадцатый аспект шестого варианта осуществления относится к способам индукции STING-зависимой продукции цитокинов у пациента, нуждающегося в терапии, включающим введение этому пациенту терапевтически эффективного количества композиции согласно девятому аспекту, описанному выше.A fifteenth aspect of the sixth embodiment relates to methods of inducing STING-dependent cytokine production in a patient in need of therapy, comprising administering to the patient a therapeutically effective amount of a composition according to the ninth aspect described above.
Шестнадцатый аспект шестого варианта осуществления относится к способам лечения нарушения пролиферации клеток у пациента, нуждающегося в терапии, включающим введение этому пациенту терапевтически эффективного количества соединения согласно приведенной выше общей формуле (VI) шестого варианта осуществления или с первого по восьмой аспектам, описанным выше, или его фармацевтически приемлемой соли. В случаях этого шестнадцатого аспекта шестого варианта осуществления нарушение пролиферации клеток представляет собой рак.A sixteenth aspect of the sixth embodiment relates to methods for treating a cell proliferation disorder in a patient in need of therapy, comprising administering to the patient a therapeutically effective amount of a compound according to the above general formula (VI) of the sixth embodiment or the first to eighth aspects described above, or pharmaceutically acceptable salt. In cases of this sixteenth aspect of the sixth embodiment, the cell proliferation disorder is cancer.
Семнадцатый аспект шестого варианта осуществления относится к способам лечения нарушения пролиферации клеток у пациента, нуждающегося в терапии, где указанный способ включает введение пациенту терапевтически эффективного количества композиции в соответствии с девятым аспектом, описанным выше. В случаях этого семнадцатого аспекта шестого варианта осуществления нарушение пролиферации клеток представляет собой рак.A seventeenth aspect of the sixth embodiment relates to methods of treating a cell proliferation disorder in a patient in need of therapy, wherein the method comprises administering to the patient a therapeutically effective amount of the composition in accordance with the ninth aspect described above. In cases of this seventeenth aspect of the sixth embodiment, the cell proliferation disorder is cancer.
В каждом аспекте шестого варианта осуществления, описанного в настоящем документе, переменные R1 , R2 , R3 , R4, R6, R8, R9, А, X1, X2, и X3 общей формулы (VI) шестого варианта осуществления и его различных аспектов и случаев, каждый независимо выбран из каждого, при условии, что, по меньшей мере, один из R1 , R2 , R3 , R4, R6, R8, и R9 не представляет собой Н.In each aspect of the sixth embodiment described herein, the variables R1 , R2 , R3 , R4 , R6 , R8 , R9 , A, X1 , X2 , and X3 of the general formula (VI) of the sixth embodiment and its various aspects and instances, each independently selected from each, with the proviso that at least one of R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 6 , R 8 , and R 9 does not represent by myself N.
Седьмой вариант осуществления относится к соединению, выбранному из группы, состоящей изThe seventh embodiment relates to a compound selected from the group consisting of
и его фармацевтически приемлемые соли. Конкретные аспекты этого седьмого варианта осуществления относятся к соединению, выбранному из группы, состоящей из and pharmaceutically acceptable salts thereof. Specific aspects of this seventh embodiment relate to a compound selected from the group consisting of
его фармацевтически приемлемым солям.its pharmaceutically acceptable salts.
Первый аспект седьмого варианта осуществления относится к способам индукции иммунного ответа у пациента, нуждающегося в терапии, включающим введение этому пациенту терапевтически эффективного количества соединения согласно приведенному выше седьмому варианту осуществления или его фармацевтически приемлемой соли. Второй аспект седьмого варианта осуществления относится к способам индукции иммунного ответа у пациента, нуждающегося в терапии, включающим введение этому пациенту терапевтически эффективного количества композиции, содержащей соединение согласно приведенному выше седьмому варианту осуществления или его фармацевтически приемлемую соль.A first aspect of the seventh embodiment relates to methods of inducing an immune response in a patient in need of therapy, comprising administering to the patient a therapeutically effective amount of a compound of the above seventh embodiment or a pharmaceutically acceptable salt thereof. A second aspect of the seventh embodiment relates to methods of inducing an immune response in a patient in need of therapy, comprising administering to the patient a therapeutically effective amount of a composition comprising a compound of the above seventh embodiment or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
Третий аспект седьмого варианта осуществления относится к способам индукции STING-зависимой продукции интерферона I типа у пациента, нуждающегося в терапии, включающим введение этому пациенту терапевтически эффективного количества соединения согласно приведенному выше седьмому варианту осуществления или его фармацевтически приемлемой соли.A third aspect of the seventh embodiment relates to methods for inducing STING-dependent type I interferon production in a patient in need of therapy, comprising administering to the patient a therapeutically effective amount of a compound of the above seventh embodiment or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
Четвертый аспект седьмого варианта осуществления относится к способам индукции STING-зависимой продукции интерферона I типа у пациента, нуждающегося в терапии, включающим введение этому пациенту терапевтически эффективного количества композиции, содержащей соединение согласно приведенному выше седьмому варианту осуществления или его фармацевтически приемлемую соль.A fourth aspect of the seventh embodiment relates to methods for inducing STING-dependent type I interferon production in a patient in need of therapy, comprising administering to the patient a therapeutically effective amount of a composition comprising a compound of the above seventh embodiment or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
Пятый аспект седьмого варианта осуществления относится к способам индукции STING-зависимой продукции цитокинов у пациента, нуждающегося в терапии, включающим введение этому пациенту терапевтически эффективного количества соединения согласно приведенному выше седьмому варианту осуществления или его фармацевтически приемлемой соли.A fifth aspect of the seventh embodiment relates to methods for inducing STING-dependent cytokine production in a patient in need of therapy, comprising administering to the patient a therapeutically effective amount of a compound of the above seventh embodiment or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
Шестой аспект седьмого варианта осуществления относится к способам индукции STING-зависимой продукции цитокинов у пациента, нуждающегося в терапии, включающим введение этому пациенту терапевтически эффективного количества композиции, содержащей соединение согласно приведенному выше седьмому варианту осуществления или его фармацевтически приемлемую соль.A sixth aspect of the seventh embodiment relates to methods of inducing STING-dependent cytokine production in a patient in need of therapy, comprising administering to the patient a therapeutically effective amount of a composition comprising a compound of the above seventh embodiment or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
Седьмой аспект седьмого варианта осуществления относится к способам лечения нарушения пролиферации клеток у пациента, нуждающегося в терапии, включающим введение этому пациенту терапевтически эффективного количества соединения согласно приведенному выше седьмому варианту осуществления или его фармацевтически приемлемой соли. В случаях седьмого аспекта седьмого варианта осуществления нарушение пролиферации клеток представляет собой рак.A seventh aspect of the seventh embodiment relates to methods of treating a cell proliferation disorder in a patient in need of therapy, comprising administering to the patient a therapeutically effective amount of a compound according to the above seventh embodiment or a pharmaceutically acceptable salt thereof. In cases of the seventh aspect of the seventh embodiment, the cell proliferation disorder is cancer.
Восьмой аспект седьмого варианта осуществления относится к способам лечения нарушения пролиферации клеток у пациента, нуждающегося в терапии, где указанный способ включает введение этому пациенту терапевтически эффективного количества композиции, содержащей соединение согласно седьмому варианту осуществления, приведенному выше. В случаях этого восьмого аспекта седьмого варианта осуществления нарушение пролиферации клеток представляет собой рак.An eighth aspect of the seventh embodiment relates to methods of treating a cell proliferation disorder in a patient in need of therapy, wherein the method comprises administering to the patient a therapeutically effective amount of a composition comprising a compound according to the seventh embodiment above. In cases of this eighth aspect of the seventh embodiment, the cell proliferation disorder is cancer.
Восьмой вариант осуществления относится к соединению, выбранному из иллюстративных образцов, изображенных в Примерах с 1 по 190, показанных ниже.The eighth embodiment relates to a compound selected from the illustrative samples shown in Examples 1 to 190 shown below.
Первый аспект восьмого варианта осуществления относится к способам индукции иммунного ответа у пациента, нуждающегося в терапии, включающим введение этому пациенту терапевтически эффективного количества соединения согласно приведенному выше восьмому варианту осуществления или его фармацевтически приемлемой соли.The first aspect of the eighth embodiment relates to methods of inducing an immune response in a patient in need of therapy, comprising administering to the patient a therapeutically effective amount of a compound of the above eighth embodiment or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
Второй аспект восьмого варианта осуществления относится к способам индукции иммунного ответа у пациента, нуждающегося в терапии, включающим введение этому пациенту терапевтически эффективного количества композиции, содержащей соединение согласно приведенному выше восьмому варианту осуществления или его фармацевтически приемлемую соль.A second aspect of the eighth embodiment relates to methods of inducing an immune response in a patient in need of therapy, comprising administering to the patient a therapeutically effective amount of a composition comprising a compound of the above eighth embodiment or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
Третий аспект восьмого варианта осуществления относится к способам индукции STING-зависимой продукции интерферона I типа у пациента, нуждающегося в терапии, включающим введение этому пациенту терапевтически эффективного количества соединения согласно приведенному выше восьмому варианту осуществления или его фармацевтически приемлемой соли.A third aspect of the eighth embodiment relates to methods for inducing STING-dependent type I interferon production in a patient in need of therapy, comprising administering to the patient a therapeutically effective amount of a compound of the above eighth embodiment or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
Четвертый аспект восьмого варианта осуществления относится к способам индукции STING-зависимой продукции интерферона I типа у пациента, нуждающегося в терапии, включающим введение этому пациенту терапевтически эффективного количества композиции, содержащей соединение согласно приведенному выше восьмому варианту осуществления или его фармацевтически приемлемую соль.A fourth aspect of the eighth embodiment relates to methods for inducing STING-dependent type I interferon production in a patient in need of therapy, comprising administering to the patient a therapeutically effective amount of a composition comprising a compound of the above eighth embodiment or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
Пятый аспект восьмого варианта осуществления относится к способам индукции STING-зависимой продукции цитокинов у пациента, нуждающегося в терапии, включающим введение этому пациенту терапевтически эффективного количества соединения согласно приведенному выше восьмому варианту осуществления или его фармацевтически приемлемой соли.A fifth aspect of the eighth embodiment relates to methods of inducing STING-dependent cytokine production in a patient in need of therapy, comprising administering to the patient a therapeutically effective amount of a compound of the above eighth embodiment or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
Шестой аспект восьмого варианта осуществления относится к способам индукции STING-зависимой продукции цитокинов у пациента, нуждающегося в терапии, включающим введение этому пациенту терапевтически эффективного количества композиции, содержащей соединение согласно приведенному выше восьмому варианту осуществления или его фармацевтически приемлемую соль.A sixth aspect of the eighth embodiment relates to methods for inducing STING-dependent cytokine production in a patient in need of therapy, comprising administering to the patient a therapeutically effective amount of a composition comprising a compound of the above eighth embodiment or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
Седьмой аспект восьмого варианта осуществления относится к способам лечения нарушения пролиферации клеток у пациента, нуждающегося в терапии, включающим введение этому пациенту терапевтически эффективного количества соединения согласно приведенному выше восьмому варианту осуществления или его фармацевтически приемлемой соли. В случаях этого седьмого аспекта восьмого варианта осуществления нарушение пролиферации клеток представляет собой рак.A seventh aspect of the eighth embodiment relates to methods of treating a cell proliferation disorder in a patient in need of therapy, comprising administering to the patient a therapeutically effective amount of a compound of the above eighth embodiment or a pharmaceutically acceptable salt thereof. In cases of this seventh aspect of the eighth embodiment, the cell proliferation disorder is cancer.
Восьмой аспект восьмого варианта осуществления относится к способам лечения нарушения пролиферации клеток у пациента, нуждающегося в терапии, где указанный способ включает введение этому пациенту терапевтически эффективного количества композиции, содержащей соединение согласно приведенному выше восьмому варианту осуществления. В случаях этого восьмого аспекта восьмого варианта осуществления нарушение пролиферации клеток представляет собой рак.An eighth aspect of the eighth embodiment relates to methods of treating a cell proliferation disorder in a patient in need of therapy, wherein the method comprises administering to the patient a therapeutically effective amount of a composition comprising a compound according to the above eighth embodiment. In cases of this eighth aspect of the eighth embodiment, the cell proliferation disorder is cancer.
Другие варианты осуществления настоящего раскрытия включают следующее:Other embodiments of the present disclosure include the following:
(a) Фармацевтическую композицию, содержащую эффективное количество соединения общей формулы (I), соединения общей формулы (II), соединения общей формулы (III), соединения общей формулы (IV), соединения общей формулы (V), соединения общей формулы (VI) или их фармацевтически приемлемой соли и фармацевтически приемлемый носитель.(a) A pharmaceutical composition containing an effective amount of a compound of general formula (I), a compound of general formula (II), a compound of general formula (III), a compound of general formula (IV), a compound of general formula (V), a compound of general formula (VI) or a pharmaceutically acceptable salt thereof and a pharmaceutically acceptable carrier.
(b) Фармацевтическую композицию по (а), дополнительно содержащую активный агент, выбранный из группы, состоящей из соединений-агонистов STING, противовирусных соединений, антигенов, адъювантов, антагонистов путей CTLA-4 и PD-1 и других иммуномодулирующих агентов, липидов, липосом, пептидов, противораковых и химиотерапевтических агентов.(b) The pharmaceutical composition of (a), further containing an active agent selected from the group consisting of STING agonist compounds, antiviral compounds, antigens, adjuvants, CTLA-4 and PD-1 pathway antagonists and other immunomodulatory agents, lipids, liposomes , peptides, anticancer and chemotherapeutic agents.
(c) Фармацевтическую комбинацию, которая представляет собой (i) соединение общей формулы (I), соединение общей формулы (II), соединение общей формулы (III), соединение общей формулы (IV), соединение общей формулы (V), соединение общей формулы (VI), или их фармацевтически приемлемую соль, и (ii) активный агент, выбранный из группы, состоящей из соединений-агонистов STING, противовирусных соединений, антигенов, адъювантов, антагонистов путей CTLA-4 и PD-1 и других иммуномодулирующих агентов, липидов, липосом, пептидов, противораковых и химиотерапевтических агентов; где соединение общей формулы (I), соединение общей формулы (II), соединение общей формулы (III), соединение общей (формулы IV), соединение общей (формулы V), соединение общей формулы (VI) или их фармацевтически приемлемая соль и активный агент каждый применяется в количестве, которое делает комбинацию эффективной для индукции иммунного ответа у пациента.(c) A pharmaceutical combination which is (i) a compound of general formula (I), a compound of general formula (II), a compound of general formula (III), a compound of general formula (IV), a compound of general formula (V), a compound of general formula (VI), or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and (ii) an active agent selected from the group consisting of STING agonist compounds, antiviral compounds, antigens, adjuvants, CTLA-4 and PD-1 pathway antagonists and other immunomodulatory agents, lipids , liposomes, peptides, anticancer and chemotherapeutic agents; where a compound of general formula (I), a compound of general formula (II), a compound of general formula (III), a compound of general formula (IV), a compound of general formula (V), a compound of general formula (VI) or a pharmaceutically acceptable salt and active agent thereof each is used in an amount that makes the combination effective in inducing an immune response in the patient.
(d) Способ индукции иммунного ответа у пациента, который включает введение пациенту, нуждающемуся в терапии, терапевтически эффективного количества соединения общей формулы (I), соединения общей формулы (II), соединения общей формулы (III), соединения общей формулы (IV), соединения общей формулы (V), соединения общей формулы (VI) или их фармацевтически приемлемой соли.(d) A method of inducing an immune response in a patient, which includes administering to a patient in need of therapy a therapeutically effective amount of a compound of general formula (I), a compound of general formula (II), a compound of general formula (III), a compound of general formula (IV), compounds of general formula (V), compounds of general formula (VI) or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
(e) Способ индукции иммунного ответа у пациента, который включает введение пациенту, нуждающемуся в терапии, терапевтически эффективного количества композиции по (а), композиции по (b) или комбинации по (с).(e) A method of inducing an immune response in a patient, which includes administering to a patient in need of therapy a therapeutically effective amount of a composition of (a), a composition of (b), or a combination of (c).
(f) Способ индукции STING-зависимой продукции интерферона I типа у пациента, который включает введение пациенту, нуждающемуся в терапии, терапевтически эффективного количества соединения общей формулы (I), соединения общей формулы (II), соединения общей формулы (III), соединения общей формулы (IV), соединения общей формулы (V), соединения общей формулы (VI) или их фармацевтически приемлемой соли. Способ индукции STING-зависимой продукции интерферона I типа у пациента, который включает введение пациенту, нуждающемуся в терапии, терапевтически эффективного количества композиции по (а), композиции по (Ъ) или комбинации по (с).(f) A method of inducing STING-dependent production of type I interferon in a patient, which includes administering to a patient in need of therapy a therapeutically effective amount of a compound of general formula (I), a compound of general formula (II), a compound of general formula (III), a compound of general formula (IV), a compound of general formula (V), a compound of general formula (VI) or a pharmaceutically acceptable salt thereof. A method of inducing STING-dependent production of type I interferon in a patient, which includes administering to a patient in need of therapy a therapeutically effective amount of a composition according to (a), a composition according to (b), or a combination according to (c).
(h) Способ индукции STING-зависимой продукции цитокинов у пациента, который включает введение пациенту, нуждающемуся в терапии, терапевтически эффективного количества соединения общей формулы (I), соединения общей формулы (II), соединения общей формулы (III), соединения общей формулы (IV), соединения общей формулы (V), соединения общей формулы (VI) или их фармацевтически приемлемой соли.(h) A method of inducing STING-dependent cytokine production in a patient, which includes administering to a patient in need of therapy a therapeutically effective amount of a compound of general formula (I), a compound of general formula (II), a compound of general formula (III), a compound of general formula ( IV), a compound of general formula (V), a compound of general formula (VI) or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
(i) Способ индукции STING-зависимой продукции цитокинов у пациента, который включает введение пациенту, нуждающемуся в терапии, терапевтически эффективного количества композиции по (а), композиции по (b) или комбинации по (с).(i) A method of inducing STING-dependent cytokine production in a patient, which comprises administering to a patient in need of therapy a therapeutically effective amount of a composition of (a), a composition of (b), or a combination of (c).
(j) Способ лечения нарушения пролиферации клеток у пациента, нуждающегося в терапии, где указанный способ включает введение пациенту терапевтически эффективного количества соединения общей формулы (I), соединения общей формулы (II), соединения общей формулы (III), соединения общей формулы (IV), соединения общей формулы (V), соединения общей формулы (VI) или их фармацевтически приемлемой соли, (k) Способ по (j), где нарушение пролиферации клеток представляет собой рак. (1) Способ лечения нарушения пролиферации клеток у пациента, нуждающегося в терапии, где указанный способ включает введение пациенту терапевтически эффективного количества композиции по (а), композиции по (b) или комбинации по (с), (m) Способ по (1), где нарушение пролиферации клеток представляет собой рак. Настоящее раскрытие также включает соединение по настоящему изобретению для применения (i) в, (ii) в качестве лекарственного средства для, или (iii) при приготовлении лекарственного средства для: (а) индукции иммунного ответа у пациента, или (b) индукции STING-зависимой продукции цитокинов у пациента. В этих применениях соединения по настоящему изобретению необязательно могут применяться в комбинации с одним или более активными агентами, выбранными из соединений-агонистов STING, противовирусных соединений, антигенов, адъювантов, антагонистов путей CTLA-4 и PD-1 и других иммуномодулирующих агентов, липидов, липосом, пептидов, противораковых агентов и химиотерапевтических агентов.(j) A method of treating a cell proliferation disorder in a patient in need of therapy, wherein the method comprises administering to the patient a therapeutically effective amount of a compound of general formula (I), a compound of general formula (II), a compound of general formula (III), a compound of general formula (IV) ), a compound of general formula (V), a compound of general formula (VI) or a pharmaceutically acceptable salt thereof, (k) The method according to (j), wherein the disorder of cell proliferation is cancer. (1) A method of treating a cell proliferation disorder in a patient in need of therapy, wherein said method comprises administering to the patient a therapeutically effective amount of a composition of (a), a composition of (b), or a combination of (c), (m) Method of (1) wherein the disorder of cell proliferation represents cancer. The present disclosure also includes a compound of the present invention for use (i) in, (ii) as a medicament for, or (iii) in the preparation of a medicament for: (a) inducing an immune response in a patient, or (b) inducing STING- dependent production of cytokines in the patient. In these applications, the compounds of the present invention may optionally be used in combination with one or more active agents selected from STING agonist compounds, antiviral compounds, antigens, adjuvants, CTLA-4 and PD-1 pathway antagonists and other immunomodulatory agents, lipids, liposomes , peptides, anticancer agents and chemotherapeutic agents.
Дополнительные варианты осуществления настоящего изобретения включают фармацевтические композиции, комбинации и способы, изложенные выше в пунктах (а) -(т) и применения, изложенные в предыдущем абзаце, где соединение по настоящему изобретению, применяемое в них, представляет собой соединение по одному из вариантов осуществления, аспектов, случаев, примеров или отличительных признаков соединений, описанных выше. Во всех этих вариантах осуществления соединение необязательно может применяться в форме фармацевтически приемлемой соли, если это необходимо. В вариантах осуществления соединения, представленных выше, следует понимать, что каждый вариант осуществления может быть объединен с одним или более другими вариантами осуществления в той степени, в которой такая комбинация обеспечивает стабильное соединение и согласуется с описанием вариантов осуществления. Кроме того, следует понимать, что варианты осуществления композиций и способов, представленные как (а) - (m) выше, подразумеваются как включающие все варианты осуществления соединений, включая такие варианты осуществления, которые являются результатом комбинаций вариантов осуществления.Additional embodiments of the present invention include the pharmaceutical compositions, combinations and methods set forth in paragraphs (a)-(t) above and the applications set forth in the previous paragraph, wherein the compound of the present invention used therein is a compound of one of the embodiments , aspects, cases, examples or features of the compounds described above. In all of these embodiments, the compound may optionally be used in the form of a pharmaceutically acceptable salt, if desired. In the connection embodiments presented above, it should be understood that each embodiment may be combined with one or more other embodiments to the extent that such combination provides a stable connection and is consistent with the description of the embodiments. In addition, it should be understood that the embodiments of the compositions and methods presented as (a) - (m) above are intended to include all embodiments of the compounds, including those embodiments that result from combinations of embodiments.
Термин «субъект» (альтернативно, «пациент») в контексте настоящего описания относится к млекопитающему, которое являлось объектом лечения, наблюдения или эксперимента. Млекопитающее может быть самцом или самкой. Млекопитающее может быть одним или в нескольких экземплярах, выбранным из группы, состоящей из людей, крупного рогатого скота (например, коров), представителей подотряда свинообразных (например, свиней), мелких жвачных (например, овец), парнокопытных (например, коз), представителей семейства лошадиных (например, лошадей), представителей семейства псовых (например, домашних собак), представителей семейства кошачьих (например, домашних кошек), зайцеобразных (кроликов), грызунов (например, крыс или мышей), семейства енотовых (например, енотов). В конкретных вариантах осуществления субъектом является человек. В контексте данного документа термин «иммунный ответ» относится к любому одному или более из следующего: специфический иммунный ответ, неспецифический иммунный ответ, как специфический, так и неспецифический иммунный ответ, врожденный иммунный ответ, первичный иммунный ответ, адаптивный иммунитет, вторичный иммунный ответ, иммунологическая память, активация иммунных клеток, пролиферация иммунных клеток, дифференцировка иммунных клеток и экспрессия цитокинов. В некоторых вариантах осуществления соединение общей формулы (I), соединение общей формулы (II), соединение общей формулы (III), соединение общей формулы (IV), соединение общей формулы (V), соединение общей формулы (VI) или фармацевтически приемлемая соль вышеперечисленных соединений вводится в сочетании с одним или более дополнительными терапевтическими агентами, включая противовирусные соединения, вакцины, предназначенные для стимуляции иммунного ответа на один или более из заранее определенных антигенов, адъюванты, антагонисты путей CTLA-4 и PD-1 и другие иммуномодулирующие агенты, липиды, липосомы, пептиды, противораковые агенты, химиотерапевтические агенты и так далее. В некоторых вариантах осуществления соединение общей формулы (I), соединение общей формулы (II), соединение общей формулы (III), соединение общей формулы (IV), соединение общей формулы (V), соединение общей формулы (VI) или фармацевтически приемлемая соль вышеперечисленных соединений вводится в сочетании с одной или более дополнительными композициями, включая противовирусные соединения, вакцины, предназначенные для стимуляции иммунного ответа на один или более заранее определенных антигенов, адъюванты, антагонисты путей CTLA-4 и PD-1 и другие иммуномодулирующие агенты, липиды, липосомы, пептиды, противораковые агенты, химиотерапевтические агенты и так далее.The term "subject" (alternatively, "patient") as used herein refers to a mammal that has been the subject of treatment, observation or experiment. The mammal can be male or female. The mammal may be one or more selected from the group consisting of humans, bovines (e.g., cows), pigs (e.g., pigs), small ruminants (e.g., sheep), artiodactyls (e.g., goats), Equidae (e.g. horses), Canidae (e.g. domestic dogs), Felidae (e.g. domestic cats), Lagomorpha (rabbits), Rodents (e.g. rats or mice), Raccoonidae (e.g. raccoons) . In specific embodiments, the subject is a human. As used herein, the term "immune response" refers to any one or more of the following: a specific immune response, a nonspecific immune response, both a specific and nonspecific immune response, an innate immune response, a primary immune response, adaptive immunity, a secondary immune response, immunological memory, immune cell activation, immune cell proliferation, immune cell differentiation and cytokine expression. In some embodiments, a compound of general formula (I), a compound of general formula (II), a compound of general formula (III), a compound of general formula (IV), a compound of general formula (V), a compound of general formula (VI), or a pharmaceutically acceptable salt of the above compounds are administered in combination with one or more additional therapeutic agents, including antiviral compounds, vaccines designed to stimulate an immune response to one or more predetermined antigens, adjuvants, CTLA-4 and PD-1 pathway antagonists and other immunomodulatory agents, lipids, liposomes, peptides, anti-cancer agents, chemotherapeutic agents and so on. In some embodiments, a compound of general formula (I), a compound of general formula (II), a compound of general formula (III), a compound of general formula (IV), a compound of general formula (V), a compound of general formula (VI), or a pharmaceutically acceptable salt of the above compounds are administered in combination with one or more additional compositions, including antiviral compounds, vaccines intended to stimulate an immune response to one or more predetermined antigens, adjuvants, CTLA-4 and PD-1 pathway antagonists and other immunomodulatory agents, lipids, liposomes, peptides, anti-cancer agents, chemotherapeutic agents and so on.
СоединенияConnections
В контексте данного документа термин «алкил» относится к насыщенному алифатическому углеводородному радикалу с одновалентной прямой или разветвленной цепью, содержащему число атомов углерода в указанном диапазоне. Так, например, "C1-6 алкил" (или "C1-C6 алкил") относится к любому из изомеров гексилалкила и пентилалкила, а также к н-, изо-, втор- и трет-бутилу, н- и изопропилу, этилу и метилу. В качестве другого примера, «C1-4 алкил» относится к н-, изо-, втор- и трет-бутилу, н- и изопропилу, этилу и метилу.As used herein, the term "alkyl" refers to a saturated aliphatic hydrocarbon radical with a monovalent straight or branched chain containing a number of carbon atoms in the specified range. Thus, for example, "C 1-6 alkyl" (or "C 1 -C 6 alkyl") refers to any of the hexylalkyl and pentylalkyl isomers, as well as n-, iso-, sec- and tert-butyl, n- and isopropyl, ethyl and methyl. As another example, "C 1-4 alkyl" refers to n-, iso-, sec- and tert-butyl, n- and isopropyl, ethyl and methyl.
В контексте данного документа термин «алкилен» относится к насыщенному алифатическому углеводородному радикалу с двухвалентной прямой цепью, содержащему число атомов углерода в указанном диапазоне.As used herein, the term "alkylene" refers to a saturated aliphatic hydrocarbon radical with a divalent straight chain containing the number of carbon atoms in the specified range.
В контексте данного документа термин «алкенил» относится к одновалентному ненасыщенному алифатическому углеводородному радикалу с прямой или разветвленной цепью, содержащему число атомов углерода в указанном диапазоне и включающему одну или более двойных связей.As used herein, the term “alkenyl” refers to a straight or branched monovalent unsaturated aliphatic hydrocarbon radical containing a number of carbon atoms in the range indicated and containing one or more double bonds.
В контексте данного документа термин «алкенилен» относится к двухвалентному ненасыщенному алифатическому углеводородному радикалу с прямой цепью, содержащему число атомов углерода в указанном диапазоне и включающему одну или более двойных связей.As used herein, the term “alkenylene” refers to a divalent, unsaturated, straight-chain aliphatic hydrocarbon radical containing a number of carbon atoms in the specified range and including one or more double bonds.
В контексте данного документа термин «алкинил» относится к одновалентному ненасыщенному алифатическому углеводородному радикалу с прямой или разветвленной цепью, содержащему число атомов углерода в указанном диапазоне и включающему одну или более тройных связей.As used herein, the term “alkynyl” refers to a straight or branched monovalent unsaturated aliphatic hydrocarbon radical containing a number of carbon atoms in the range indicated and including one or more triple bonds.
В контексте данного документа термин «алкинилен» относится к двухвалентному ненасыщенному алифатическому углеводородному радикалу с прямой цепью, содержащему число атомов углерода в указанном диапазоне и включающему одну или более тройных связей.As used herein, the term “alkynylene” refers to a straight chain divalent unsaturated aliphatic hydrocarbon radical containing a number of carbon atoms in the specified range and including one or more triple bonds.
В контексте данного документа термин «галоген» (или «гало») обозначает фтор, хлор, бром и йод (альтернативно, фтор, хлор, бром, и йод или F, О, Br и I).As used herein, the term “halogen” (or “halo”) refers to fluorine, chlorine, bromine, and iodine (alternatively, fluorine, chlorine, bromine, and iodine, or F, O, Br, and I).
В контексте данного документа термин «галоалкил» относится к алкильной группе, как определено выше, в которой один или более атомов водорода заменены галогеном. Таким образом, например, "C1-6 галоалкил" (или "C1-С6 галоалкил") относится к линейной или разветвленной от C1 до С6 алкильной группе, как определено выше, с одним или более галогеновыми заместителями. Термин «фторалкил» имеет аналогичное значение, за исключением того, что галогеновые заместители ограничиваются фтором. Подходящие фторалкилы включают ряд (CH2)0-4CF3 (то есть, трифторметил, 2,2,2-трифторэтил, 3,3,3-трифтор-н-пропил и т.д.).As used herein, the term “haloalkyl” refers to an alkyl group, as defined above, in which one or more hydrogen atoms are replaced by a halogen. Thus, for example, “C 1-6 haloalkyl” (or “C 1 -C 6 haloalkyl”) refers to a linear or branched C 1 to C 6 alkyl group, as defined above, with one or more halogen substituents. The term "fluoroalkyl" has a similar meaning, except that the halogen substituents are limited to fluorine. Suitable fluoroalkyls include the (CH 2 ) 0-4 CF 3 series (ie, trifluoromethyl, 2,2,2-trifluoroethyl, 3,3,3-trifluoro-n-propyl, etc.).
В контексте данного документа термин «галоалкилен» относится к алкиленовой группе, как определено выше, в которой один или более атомов водорода заменены галогеном, как в галоалкильной группе, определенной выше.As used herein, the term “haloalkylene” refers to an alkylene group, as defined above, in which one or more hydrogen atoms are replaced by a halogen, as in a haloalkyl group, as defined above.
В контексте данного документа термин «галоалкенил» относится к алкенильной группе, как определено выше, в которой один или более атомов водорода заменены галогеном.As used herein, the term “haloalkenyl” refers to an alkenyl group, as defined above, in which one or more hydrogen atoms are replaced by halogen.
В контексте данного документа термин «галоалкенилен» относится к алкениленовой группе, как определено выше, в которой один или более атомов водорода заменены галогеном.As used herein, the term “haloalkenylene” refers to an alkenylene group, as defined above, in which one or more hydrogen atoms have been replaced by a halogen.
В контексте данного документа термин «галоалкинил» относится к алкинильной группе, как определено выше, в которой один или более атомов водорода заменены галогеном.As used herein, the term “haloalkynyl” refers to an alkynyl group, as defined above, in which one or more hydrogen atoms are replaced by a halogen.
В контексте данного документа термин «галоалкинилен» относится к алкиниленовой группе, как определено выше, в которой один или более атомов водорода заменены галогеном.As used herein, the term “haloalkynylene” refers to an alkynylene group, as defined above, in which one or more hydrogen atoms are replaced by halogen.
В контексте данного документа термин «алкокси» сам по себе или в комбинации включает алкильную группу, соединенную с атомом, соединяющим кислород. Термин «алкокси» также включает группы алкилового эфира, где термин «алкил» определен выше, и термин «эфир» обозначает две алкильные группы с атомом кислорода между ними. Примеры подходящих алкоксигрупп включают метокси, этокси, н-пропокси, изопропокси, н-бутокси, втор-бутокси, трет-бутокси, метоксиметан (также называемый «диметиловый эфир») и метоксиэтан (также называемый «этил метиловый эфир»).As used herein, the term “alkoxy,” alone or in combination, includes an alkyl group attached to an oxygen connecting atom. The term "alkoxy" also includes alkyl ether groups, where the term "alkyl" is defined above and the term "ether" refers to two alkyl groups with an oxygen atom in between. Examples of suitable alkoxy groups include methoxy, ethoxy, n-propoxy, isopropoxy, n-butoxy, sec-butoxy, t-butoxy, methoxymethane (also called "dimethyl ether") and methoxyethane (also called "ethyl methyl ether").
В контексте данного документа термин «циклоалкил» относится к насыщенному углеводороду, содержащему одно кольцо с определенным числом атомов углерода. Примеры циклоалкила включают циклопропил, циклобутил, циклопентил и циклогексил. В контексте данного документа термин «гетероцикл», «гетероциклил» или «гетероциклический» представляет собой стабильный от 3- до 6-членный моноциклический фрагмент, который является либо насыщенным, либо ненасыщенным, и который состоит из атомов углерода и от одного до двух гетероатомов, выбранных из группы, состоящей из N, О и S. Гетероциклическое кольцо может быть присоединено к любому гетероатому или атому углерода, что приводит к образованию стабильной структуры. Термин включает гетероарильные фрагменты. Примеры таких гетероциклических элементов включают, но не ограничиваются ими, азепинил, бензимидазолил, бензизоксазолил, бензофуразанил, бензопиранил, бензотиопиранил, бензофурил, бензотиазолил, бензотиенил, бензоксазолил, хроманил, циннолинил, дигидробензофурил, дигидробензотиенил, дигидробензотиопиранил, дигидробензотиопиранил сульфон, 1,3-диоксоланил, фурил, имидазолидинил, имидазолинил, имидазолил, индолинил, индолил, изохроманил, изоиндолинил, изохинолинил, изотиазолидинил, изотиазолил, изотиазолидинил, морфолинил, нафтиридинил, оксадиазолил, 2-оксоазепинил, оксазолил, 2-оксопиперазинил, 2-оксопиперидинил, 2-оксопирролидинил, пиперидил, пиперазинил, пиридил, пиразинил, пиразолидинил, пиразолил, пиридазинил, пиримидинил, пирролидинил, пирролил, хиназолинил, хинолинил, хинохалинил, тетрагидрофурил, тетрагидроизохинолинил, тетрагидрохинолинил, тиаморфолинил, тиаморфолинил сульфоксид, тиазолил, тиазолинил, тиенофурил, тиенотиенил, триазолил и тиенил. В контексте данного документа термин «конденсированное кольцо» относится к циклической группе, образованной заместителями на отдельных атомах в прямом или разветвленном алкане, или к циклической группе, образованной заместителями на отдельных атомах в другом кольце.As used herein, the term “cycloalkyl” refers to a saturated hydrocarbon containing one ring with a specific number of carbon atoms. Examples of cycloalkyl include cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl and cyclohexyl. As used herein, the term "heterocycle", "heterocyclyl" or "heterocyclic" is a stable 3- to 6-membered monocyclic moiety that is either saturated or unsaturated, and which consists of carbon atoms and one to two heteroatoms, selected from the group consisting of N, O and S. The heterocyclic ring can be attached to any heteroatom or carbon atom, resulting in the formation of a stable structure. The term includes heteroaryl moieties. Examples of such heterocyclic elements include, but are not limited to, azepinyl, benzimidazolyl, benzisoxazolyl, benzofurazanyl, benzopyranyl, benzothiopyranyl, benzofuryl, benzothiazolyl, benzothienyl, benzoxazolyl, chromanyl, cinnolinyl, dihydrobenzofuryl, dihydrobenzothienyl, dihydrobenzothiopyranyl, dihydrobenzothiopyranyl sulfone, 1,3-dioxolanyl, furyl, imidazolidinyl, imidazolinyl, imidazolyl, indolinyl, indolyl, isochromanil, isoindolinyl, isoquinolinyl, isothiazolidinyl, isothiazolyl, isothiazolidinyl, morpholinyl, naphthyridinyl, oxadiazolyl, 2-oxoazepinyl, oxazolyl, 2-oxopiperazinyl, 2-oxopiperi dinyl, 2-oxopyrrolidinyl, piperidyl, piperazinyl, pyridyl, pyrazinyl, pyrazolidinyl, pyrazolyl, pyridazinyl, pyrimidinyl, pyrrolidinyl, pyrrolyl, quinazolinyl, quinolinyl, quinohalinyl, tetrahydrofuryl, tetrahydroisoquinolinyl, tetrahydroquinolinyl, thiamorpholinyl, thiamorpholinyl sulfoxide, thiazolyl, thiazol inyl, thienofuryl, thienothienyl, triazolyl and thienyl. As used herein, the term “fused ring” refers to a cyclic group formed by substituents on individual atoms on a straight or branched alkane, or a cyclic group formed by substituents on individual atoms on another ring.
В контексте данного документа термин «спироцикл» или «спироциклическое кольцо» относится к боковой циклической группе, образованной заместителями на отдельном атоме.As used herein, the term "spirocycle" or "spirocyclic ring" refers to a pendant cyclic group formed by substituents on a single atom.
Если прямо не указано иное, все диапазоны, указанные в данном документе, являются охватывающими; то есть, диапазон включает значения для верхнего и нижнего пределов диапазона, а также все значения между ними. В качестве примера, температурные диапазоны, процентное содержание, диапазоны эквивалентов и тому подобное, описанные здесь, включают верхний и нижний пределы диапазона и любое значение в промежутке между ними. Представленные здесь числовые значения и применение термина «около» могут включать вариации ±1%, ±2%, ±3%, ±4%, ±5%, ±10%, ±15% и ±20% и их числовые эквиваленты.Unless otherwise expressly stated, all ranges stated herein are inclusive; that is, the range includes the values for the upper and lower limits of the range, as well as all values in between. By way of example, temperature ranges, percentages, equivalent ranges, and the like described herein include the upper and lower limits of the range and any value in between. The numerical values presented herein and the use of the term “about” may include variations of ±1%, ±2%, ±3%, ±4%, ±5%, ±10%, ±15% and ±20% and their numerical equivalents.
В контексте данного документа термин «один или более» элементов включает один элемент, выбранный из перечня, а также сочетание двух или более элементов, выбранных из перечня.As used herein, the term “one or more” elements includes one element selected from a list, as well as a combination of two or more elements selected from a list.
В соединениях общей формулы (I), соединениях общей формулы (II), соединениях общей формулы (III), соединениях общей (формулы IV), соединениях общей (формулы V), соединениях общей формулы (VI) и фармацевтически приемлемых солях вышеперечисленных соединений, атомы могут иметь свое природное изотопное содержание, или один или более атомов могут быть искусственно обогащены конкретным изотопом, имеющим тот же атомный номер, но атомную массу или массовое число, отличное от атомной массы или массового числа атома, преимущественно присутствующего в природе. Подразумевается, что настоящее описание включает все подходящие изотопные варианты соединений общей формулы (I), соединений общей формулы (II), соединений общей формулы (III), соединений общей формулы (IV), соединений общей формулы (V), соединений общей формулы (VI) и фармацевтически приемлемых солей вышеперечисленных соединений. Например, различные изотопные формы водорода (Н) включают протай (1Н), дейтерий (2Н) и тритий (3Н). Протий представляет собой преобладающий изотоп водорода, встречающийся в природе. Обогащение дейтерием может давать определенные терапевтические преимущества, такие как увеличение периода полувыведения in vivo или снижение требований к дозировке, или может обеспечить соединение, применяемое в качестве стандарта для определения характеристик биологических образцов. Изотопнообогащенные соединения общей формулы (I), соединения общей формулы (II), соединения общей формулы (III), соединения общей формулы (IV), соединения общей формулы (V), соединения общей формулы (VI) и фармацевтически приемлемые соли вышеперечисленных соединений могут быть получены без лишнего экспериментального исследования с помощью обычных методик, хорошо известных специалистам в данной области, или способами, аналогичными тем, которые описаны в Схемах и Примерах в данном документе, с применением подходящих реагентов и/или промежуточных соединений, обогащенных изотопами.In compounds of general formula (I), compounds of general formula (II), compounds of general formula (III), compounds of general formula (IV), compounds of general formula (V), compounds of general formula (VI) and pharmaceutically acceptable salts of the above compounds, the atoms may have their natural isotopic content, or one or more atoms may be artificially enriched with a particular isotope having the same atomic number, but an atomic mass or mass number different from the atomic mass or mass number of the atom predominantly present in nature. The present specification is intended to include all suitable isotopic variants of compounds of general formula (I), compounds of general formula (II), compounds of general formula (III), compounds of general formula (IV), compounds of general formula (V), compounds of general formula (VI ) and pharmaceutically acceptable salts of the above compounds. For example, the different isotopic forms of hydrogen (H) include protium ( 1H ), deuterium ( 2H ), and tritium ( 3H ). Protium is the predominant isotope of hydrogen found in nature. Deuterium enrichment may provide certain therapeutic benefits, such as increased in vivo half-life or reduced dosage requirements, or may provide a compound used as a standard for characterizing biological samples. Isotopically enriched compounds of general formula (I), compounds of general formula (II), compounds of general formula (III), compounds of general formula (IV), compounds of general formula (V), compounds of general formula (VI) and pharmaceutically acceptable salts of the above compounds can be obtained without undue experimental study using conventional techniques well known to those skilled in the art, or by methods similar to those described in the Schemes and Examples herein, using suitable reagents and/or isotope-enriched intermediates.
В конкретных вариантах осуществления соединений общей формулы (I), соединений общей формулы (II), соединений общей формулы (III), соединений общей формулы (IV), соединений общей формулы (V), соединений общей формулы (VI) и фармацевтически приемлемых солей вышеперечисленных соединений, соединения изотопно обогащены дейтерием. В аспектах этих вариантов осуществления один или более из R1, R2, R3, R6, R8 и R9 может включать дейтерий.In specific embodiments, compounds of general formula (I), compounds of general formula (II), compounds of general formula (III), compounds of general formula (IV), compounds of general formula (V), compounds of general formula (VI), and pharmaceutically acceptable salts of the above compounds, compounds are isotopically enriched in deuterium. In aspects of these embodiments, one or more of R 1 , R 2 , R 3 , R 6 , R 8 and R 9 may include deuterium.
Как показано в общих структурных формулах и структурах конкретных соединений, представленных в настоящем документе, прямая линия в хиральном центре включает как (R), так и (S) стереоизомеры и их смеси. Кроме того, если не указано иное (например, 100% очищенное соединение), ссылка на конкретную стереохимию в положении обеспечивает соединение, имеющее указанную стереохимию, но не исключает присутствие стереоизомеров, имеющих различную стереохимию в указанном положении. Перечисление или описание конкретного соединения в формуле изобретения (то есть, видового пункта) без обозначения конкретной стереоконфигурации или с таким обозначением менее чем для всех хиральных центров предназначено для охвата таких необозначенных хиральных центров, рацемата, рацемических смесей, каждого индивидуального энантиомера, смеси диастереоизомеров и каждого индивидуального диастереомера соединения, где такие формы возможны благодаря наличию одного или более асимметричных центров. Разделение смеси стереоизомеров может проводиться на промежуточной стадии во время синтеза соединения общей формулы (I), соединения общей формулы (II), соединения общей формулы (III), соединения общей формулы (IV), соединения общей формулы (V), соединения общей формулы (VI) или фармацевтически приемлемой соли вышеперечисленных соединений, или это может быть осуществлено с конечным рацемическим продуктом. Абсолютная стереохимия может быть определена с помощью рентгеновской кристаллографии кристаллических продуктов или кристаллических промежуточных соединений, которые при необходимости дериватизируют с помощью реагента, содержащего стереогенный центр известной конфигурации. В качестве альтернативы, абсолютная стереохимия может быть определена с помощью спектрального анализа вибрационного кругового дихроизма (VCD). Настоящее изобретение включает все такие изомеры, а также соли, сольваты (включая гидраты) и сольватированные соли таких рацематов, энантиомеров, диастереомеров, таутомеров и их смеси.As shown in the general structural formulas and structures of specific compounds presented herein, the straight line at the chiral center includes both (R) and (S) stereoisomers and mixtures thereof. In addition, unless otherwise indicated (eg, 100% purified compound), reference to a specific stereochemistry at a position provides a compound having the specified stereochemistry, but does not exclude the presence of stereoisomers having different stereochemistry at the specified position. The listing or description of a specific compound in a claim (i.e., a specific claim) without designation of a particular stereoconfiguration or with such designation for less than all chiral centers is intended to cover such undesignated chiral centers, racemate, racemic mixtures, each individual enantiomer, mixture of diastereoisomers, and each individual diastereomer of a compound, where such forms are possible due to the presence of one or more asymmetric centers. The separation of a mixture of stereoisomers can be carried out at an intermediate stage during the synthesis of a compound of general formula (I), a compound of general formula (II), a compound of general formula (III), a compound of general formula (IV), a compound of general formula (V), a compound of general formula ( VI) or a pharmaceutically acceptable salt of the above compounds, or this can be carried out with the final racemic product. Absolute stereochemistry can be determined by X-ray crystallography of crystalline products or crystalline intermediates, which are optionally derivatized with a reagent containing a stereogenic center of known configuration. Alternatively, absolute stereochemistry can be determined using vibrational circular dichroism (VCD) spectral analysis. The present invention includes all such isomers, as well as salts, solvates (including hydrates) and solvated salts of such racemates, enantiomers, diastereomers, tautomers and mixtures thereof.
Изобретение включает все возможные энантиомеры и диастереомеры и смеси двух или более стереоизомеров, например, смеси энантиомеров и/или диастереомеров, во всех соотношениях. Таким образом, энантиомеры являются объектом изобретения в энантиомерно чистой форме, как левовращающие, так и правовращающие антиподы, в форме рацематов и в виде смесей двух энантиомеров во всех соотношениях. В случае цис/транс-изомерии изобретение включает как цис-форму, так и транс-форму, а также смеси этих форм во всех соотношениях. При желании получение отдельных стереоизомеров можно проводить путем разделения смеси общепринятыми методами, например, с помощью хроматографии или кристаллизации, с применением стереохимически однородных исходных материалов для синтеза или путем стереоселективного синтеза. Необязательно, дериватизацию можно проводить до разделения стереоизомеров. Разделение смеси стереоизомеров можно проводить на промежуточной стадии во время синтеза соединения общей формулы (I), соединения общей формулы (II), соединения общей формулы (III), соединения общей формулы (IV), соединения общей формулы (V), соединения общей формулы (VI) или фармацевтически приемлемой соли вышеперечисленных соединений, или это можно сделать с конечным рацемическим продуктом. Абсолютная стереохимия может быть определена с помощью рентгеновской кристаллографии кристаллических продуктов или кристаллических промежуточных соединений, которые при необходимости дериватизируют с помощью реагента, содержащего стереогенный центр известной конфигурации. Если не указан конкретный изомер, соль, сольват (включая гидраты) или сольватированная соль такого рацемата, энантиомера или диастереомера, настоящее изобретение включает все такие изомеры, а также соли, сольваты (включая гидраты) и сольватированные соли таких рацематов, энантиомеров, диастереомеров и их смеси.The invention includes all possible enantiomers and diastereomers and mixtures of two or more stereoisomers, for example, mixtures of enantiomers and/or diastereomers, in all proportions. Thus, enantiomers are the subject of the invention in enantiomerically pure form, both levorotatory and dextrorotatory antipodes, in the form of racemates and in the form of mixtures of two enantiomers in all proportions. In the case of cis/trans isomerism, the invention includes both the cis form and the trans form, as well as mixtures of these forms in all proportions. If desired, the preparation of individual stereoisomers can be carried out by separating the mixture by conventional methods, for example, by chromatography or crystallization, using stereochemically homogeneous starting materials for the synthesis, or by stereoselective synthesis. Optionally, derivatization can be carried out prior to separation of the stereoisomers. The separation of a mixture of stereoisomers can be carried out at an intermediate stage during the synthesis of a compound of general formula (I), a compound of general formula (II), a compound of general formula (III), a compound of general formula (IV), a compound of general formula (V), a compound of general formula ( VI) or a pharmaceutically acceptable salt of the above compounds, or this can be done with the final racemic product. Absolute stereochemistry can be determined by X-ray crystallography of crystalline products or crystalline intermediates, which are optionally derivatized with a reagent containing a stereogenic center of known configuration. Unless a specific isomer, salt, solvate (including hydrates) or solvated salt of such racemate, enantiomer or diastereomer is specified, the present invention includes all such isomers, as well as salts, solvates (including hydrates) and solvated salts of such racemates, enantiomers, diastereomers and their mixtures.
Термин «соединение» относится к соединению и, в некоторых вариантах осуществления, к любому его гидрату или сольвату, если они стабильны. Гидрат представляет собой соединение, образующее комплекс с водой, и сольват представляет собой соединение, которое образует комплекс с растворителем, которым может быть органический растворитель или неорганический растворитель.The term “compound” refers to the compound and, in some embodiments, any hydrate or solvate thereof, if stable. A hydrate is a compound that forms a complex with water, and a solvate is a compound that forms a complex with a solvent, which may be an organic solvent or an inorganic solvent.
«Стабильное» соединение представляет собой соединение, которое может быть получено и выделено, и структура и свойства которого остаются или могут оставаться практически неизменными в течение периода времени, достаточного для применения соединения для целей, описанных в данном документе (например, терапевтическое введение пациенту). Соединения по настоящему изобретению ограничены стабильными соединениями, охватываемыми общей формулой (I), общей формулой (II), общей формулой (III), общей формулой (IV), общей формулой (V), общей формулой (VI) или их фармацевтически приемлемыми солями.A “stable” compound is a compound that can be prepared and isolated and whose structure and properties remain or can remain substantially unchanged for a period of time sufficient to permit use of the compound for the purposes described herein (eg, therapeutic administration to a patient). The compounds of the present invention are limited to the stable compounds covered by the general formula (I), the general formula (II), the general formula (III), the general formula (IV), the general formula (V), the general formula (VI) or pharmaceutically acceptable salts thereof.
СолиSalts
Как указано выше, соединения по настоящему изобретению могут применяться в форме фармацевтически приемлемых солей. Специалисты в данной области определят те случаи, в которых соединения по изобретению могут образовывать соли. Примеры таких соединений описаны здесь со ссылкой на возможные соли. Данная ссылка предназначена только для иллюстрации. Фармацевтически приемлемые соли могут применяться с соединениями для лечения пациентов. Однако нефармацевтические соли могут быть полезны при получении промежуточных соединений.As stated above, the compounds of the present invention can be used in the form of pharmaceutically acceptable salts. Those skilled in the art will recognize those instances in which the compounds of the invention may form salts. Examples of such compounds are described herein with reference to possible salts. This link is for illustration purposes only. Pharmaceutically acceptable salts may be used with the compounds to treat patients. However, non-pharmaceutical salts may be useful in the preparation of intermediates.
Термин «фармацевтически приемлемая соль» относится к соли (включая внутреннюю соль, такую как цвиттерион), которая обладает эффективностью, аналогичной исходному соединению, и которая не является биологически или иным образом нежелательной (например, не является ни токсичной, ни иным образом вредной для ее реципиента). Таким образом, вариант осуществления изобретения относится к фармацевтически приемлемым солям соединений по изобретению. Термин «соль(и)» в контексте данного документа означает любое из следующего: кислотные соли, образованные с неорганическими и/или органическими кислотами, а также основные соли, образованные с неорганическими и/или органическими основаниями. Соли соединений по изобретению могут быть образованы способами, известными специалистам в данной области, например, путем взаимодействия соединения по изобретению с некоторым количеством кислоты или основания, таким как эквивалентное количество, в такой среде, в которой соль осаждается, или в водной среде с последующей лиофилизацией.The term "pharmaceutically acceptable salt" refers to a salt (including an internal salt such as a zwitterion) that has similar potency to the parent compound and that is not biologically or otherwise undesirable (e.g., is neither toxic nor otherwise harmful to its recipient). Thus, an embodiment of the invention provides pharmaceutically acceptable salts of the compounds of the invention. The term “salt(s)” as used herein means any of the following: acid salts formed with inorganic and/or organic acids, as well as basic salts formed with inorganic and/or organic bases. Salts of the compounds of the invention can be formed by methods known to those skilled in the art, for example, by reacting a compound of the invention with an amount of acid or base, such as an equivalent amount, in a medium in which the salt precipitates, or in an aqueous medium, followed by lyophilization .
Примеры солей присоединения кислоты включают ацетаты, аскорбаты, бензоаты, бензолсульфонаты, бисульфаты, бораты, бутираты, цитраты, камфораты, камфорсульфонаты, фумараты, гидрохлориды, гидробромиды, гидроиодиды, лактаты, малеаты, метансульфонаты («мезилаты»), нафталинсульфонаты, нитраты, оксалаты, фосфаты, пропионаты, салицилаты, сукцинаты, сульфаты, тартараты, тиоцианаты, толуолсульфонаты («тозилаты») и тому подобное. Подходящие соли включают соли присоединения кислоты, которые, например, могут быть образованы путем смешивания раствора соединения с раствором фармацевтически приемлемой кислоты, такой как соляная кислота, серная кислота, уксусная кислота, трифторуксусная кислота или бензойная кислота. Кроме того, кислоты, которые обычно считаются подходящими для образования фармацевтически полезных солей из основных фармацевтических соединений, рассматриваются, например, в P. Stahl et al, Camille G. (eds.), Handbook of Pharmaceutical Salts. Properties, Selection and Use. (2002) Zurich: Wiley-VCH; S. Berge et al, Journal of Pharmaceutical Sciences (1977) 66(1) 1-19; P. Gould, International J. of Pharmaceutics (1986) 33 201-217; Anderson et al, The Practice of Medicinal Chemistry (1996), Academic Press, New York; и в The Orange Book (Food & Drug Administration, Washington, D.C. на их веб-сайте). Эти раскрытия включены в настоящий документ посредством ссылки.Examples of acid addition salts include acetates, ascorbates, benzoates, benzenesulfonates, bisulfates, borates, butyrates, citrates, camphorates, camphorsulfonates, fumarates, hydrochlorides, hydrobromides, hydroiodides, lactates, maleates, methanesulfonates (“mesylates”), naphthalene sulfonates, nitrates, oxalates, phosphates, propionates, salicylates, succinates, sulfates, tartarates, thiocyanates, toluene sulfonates (“tosylates”) and the like. Suitable salts include acid addition salts, which, for example, can be formed by mixing a solution of the compound with a solution of a pharmaceutically acceptable acid such as hydrochloric acid, sulfuric acid, acetic acid, trifluoroacetic acid or benzoic acid. In addition, acids that are generally considered suitable for the formation of pharmaceutically useful salts from basic pharmaceutical compounds are discussed, for example, in P. Stahl et al, Camille G. (eds.), Handbook of Pharmaceutical Salts. Properties, Selection and Use. (2002) Zurich: Wiley-VCH; S. Berge et al, Journal of Pharmaceutical Sciences (1977) 66(1) 1-19; P. Gould, International J. of Pharmaceutics (1986) 33 201-217; Anderson et al, The Practice of Medicinal Chemistry (1996), Academic Press, New York; and in The Orange Book (Food & Drug Administration, Washington, D.C. on their website). These disclosures are incorporated herein by reference.
Примеры основных солей включают соли аммония, соли щелочных металлов, такие как соли натрия, лития и калия, соли щелочноземельных металлов, такие как соли кальция и магния, соли с органическими основаниями (например, органическими аминами), такими как дициклогексиламин, трет-бутиламин, холин, и соли с аминокислотами, такими как аргинин, лизин и тому подобное. Основные азотсодержащие группы могут быть кватернизованы такими агентами, как низшие алкилгалогениды (например, метил, этил, бутилхлориды, бромиды и йодиды), диалкилсульфаты (например, диметил, диэтил и дибутилсульфаты), галогениды с длинной цепью (например, децил, лаурил и стеарилхлориды, бромиды и иодиды), аралкилгалогениды (например, бензил и фенэтилбромиды) и другие. Соединения, содержащие кислотный фрагмент, могут быть смешаны с подходящими фармацевтически приемлемыми солями, чтобы получить, например, соли щелочных металлов (например, соли натрия или калия), соли щелочноземельных металлов (например, соли кальция или магния) и соли, образованные с подходящими органическими лигандами, такие как соли четвертичного аммония. Также, в случае присутствия кислотной (-СООН) или спиртовой группы, могут применяться фармацевтически приемлемые сложные эфиры для изменения характеристик растворимости или гидролиза соединения.Examples of basic salts include ammonium salts, alkali metal salts such as sodium, lithium and potassium salts, alkaline earth metal salts such as calcium and magnesium salts, salts with organic bases (for example, organic amines) such as dicyclohexylamine, tert-butylamine, choline, and salts with amino acids such as arginine, lysine and the like. Basic nitrogen-containing groups can be quaternized with agents such as lower alkyl halides (for example, methyl, ethyl, butyl chlorides, bromides and iodides), dialkyl sulfates (for example, dimethyl, diethyl and dibutyl sulfates), long chain halides (for example, decyl, lauryl and stearyl chlorides, bromides and iodides), aralkyl halides (for example, benzyl and phenethyl bromides) and others. Compounds containing an acid moiety can be mixed with suitable pharmaceutically acceptable salts to form, for example, alkali metal salts (eg sodium or potassium salts), alkaline earth metal salts (eg calcium or magnesium salts) and salts formed with suitable organic ligands such as quaternary ammonium salts. Also, in the case of the presence of an acid (-COOH) or alcohol group, pharmaceutically acceptable esters can be used to modify the solubility or hydrolysis characteristics of the compound.
Подразумевается, что все такие кислые соли и основные соли являются фармацевтически приемлемыми солями в пределах объема изобретения, и все кислые и основные соли считаются эквивалентными свободным формам соответствующих соединений для целей изобретения.All such acid salts and basic salts are intended to be pharmaceutically acceptable salts within the scope of the invention, and all acid and basic salts are considered equivalent to the free forms of the corresponding compounds for purposes of the invention.
Кроме того, когда соединение по изобретению содержит как основную группу, такую как, но не ограничиваясь ими, алифатический первичный, вторичный, третичный или циклический амин, ароматический или гетероариламин, пиридин или имидазол, так и кислотную группу, такую как, но не ограничиваясь ими, тетразол или карбоновая кислота, могут образовываться цвиттерионы («внутренние соли»), включенные в термины «соль(и)», применяемые в данном документе. Понятно, что определенные соединения по изобретению могут существовать в цвиттерионной форме, обладая как анионными, так и катионными центрами в одном и том же соединении и суммарным нейтральным зарядом. Такие цвиттерионы включены в изобретение.Furthermore, when a compound of the invention contains both a basic group, such as, but not limited to, an aliphatic primary, secondary, tertiary or cyclic amine, aromatic or heteroarylamine, pyridine or imidazole, and an acidic group, such as, but not limited to , tetrazole or carboxylic acid, zwitterions (“internal salts”) may be formed, included in the terms “salt(s)” as used herein. It is understood that certain compounds of the invention may exist in zwitterionic form, having both anionic and cationic centers in the same compound and an overall neutral charge. Such zwitterions are included in the invention.
Способы получения соединенийMethods for obtaining compounds
Несколько способов получения соединений общей формулы (I), соединений общей формулы (II), соединений общей формулы (III), соединений общей формулы (IV), соединений общей формулы (V), соединений общей формулы (VI) и фармацевтически приемлемых солей вышеперечисленных соединений описаны в следующих Схемах и Примерах. Исходные материалы и промежуточные соединения приобретаются из коммерческих источников, получают известными способами или проиллюстрированы другими способами. В некоторых случаях порядок проведения стадий реакционных схем может быть изменен для облегчения реакции или во избежание нежелательных продуктов реакции.Several methods for preparing compounds of general formula (I), compounds of general formula (II), compounds of general formula (III), compounds of general formula (IV), compounds of general formula (V), compounds of general formula (VI) and pharmaceutically acceptable salts of the above compounds are described in the following Diagrams and Examples. Starting materials and intermediates are obtained from commercial sources, prepared by known methods, or illustrated by other methods. In some cases, the order of steps in reaction schemes may be changed to facilitate a reaction or to avoid unwanted reaction products.
В следующих Способах и Схемах LG представляет собой уходящую группу, которая может быть галогенидной или трифлатной группой. Переменные, включенные в Способы и Схемы, имеют указанные значения; примерные катализаторы определены в сокращениях (ниже).In the following Methods and Schemes, LG represents a leaving group, which may be a halide or triflate group. Variables included in Methods and Schemes have the values specified; exemplary catalysts are defined in abbreviations (below).
Способ 1Method 1
Димеры бензотиофена 1D и 1Е и их фармацевтически приемлемые соли могут быть получены несколькими способами. Один из способов показан на Схеме 1. Последовательность начинается с аллил-бензотиофена 1А. Путем кросс-метатезиса с катализатором Граббса 2G (второго поколения) получают олефиновые димеры 1В и 1С. Гидрированием и затем гидролизом получают димеры 1D и 1Е с разной длиной связки.Benzothiophene dimers 1D and 1E and their pharmaceutically acceptable salts can be prepared by several methods. One method is shown in Scheme 1. The sequence begins with allyl benzothiophene 1A. By cross-metathesis with Grubbs' catalyst 2G (second generation), olefin dimers 1B and 1C are obtained. By hydrogenation and then hydrolysis, dimers 1D and 1E with different link lengths are obtained.
Способ 2Method 2
Другой способ получения димеров бензотиофена и их фармацевтических солей подробно показан на Схеме 2. Последовательность начинается с соответствующим образом замещенного арилгалогенида 2А. Путем перекрестного сочетания с первичным спиртом, содержащим бензотиофен (2В), с применением RockPhos Pd G3 (третьего поколения) с последующим гидролизом, получают димер 2С.Another method for preparing benzothiophene dimers and their pharmaceutical salts is shown in detail in Scheme 2. The sequence begins with the appropriately substituted aryl halide 2A. Cross-coupling with a benzothiophene-containing primary alcohol (2B) using RockPhos Pd G3 (third generation) followed by hydrolysis produces dimer 2C.
Способ 3Method 3
Другой способ получения димеров бензотиофена и их фармацевтически приемлемых солей подробно показан на Схеме 3. Путем перекрестного сочетания алкилбромида бензотиофена 3А и арилбромида 3В получают димер нитрильного эфира 3С. С помощью гидролиза водным гидроксидом натрия образуется димер 3D.Another method for preparing benzothiophene dimers and their pharmaceutically acceptable salts is detailed in Scheme 3. By cross-coupling benzothiophene alkyl bromide 3A and aryl bromide 3B, nitrile ether dimer 3C is prepared. Hydrolysis with aqueous sodium hydroxide produces a 3D dimer.
Способ 4Method 4
Другой способ получения димеров бензотифена и их фармацевтически приемлемых солей подробно показан на Схеме 4. Путем алкильной реакции Сузуки между арилбромидом 4А и алкилборонатным эфиром 4В в присутствии палладиевого катализатора с последующим гидролизом сложного эфира получают димер 4С.Another method for the preparation of benzotifene dimers and their pharmaceutically acceptable salts is detailed in Scheme 4. By the Suzuki alkyl reaction between aryl bromide 4A and alkyl boronate ester 4B in the presence of a palladium catalyst, followed by hydrolysis of the ester, dimer 4C is obtained.
Способ 5Method 5
Другой способ получения димеров бензотиофена и их фармацевтически приемлемых солей подробно показан на Схеме 5. Путем перекрестного сочетания алкилбромида бензотиофена 5А и арилбромида 5В получают димер 5С. С помощью гидролиза получают димер 5D. Аналогичным образом арилгалогенид 5Е может быть связан с алкилбромидом 5F с образованием промежуточного соединения 5G. С помощью гидролиза получают кислоту 5Н.Another method for preparing benzothiophene dimers and their pharmaceutically acceptable salts is detailed in Scheme 5. By cross-coupling benzothiophene alkyl bromide 5A and aryl bromide 5B, dimer 5C is prepared. Dimer 5D is obtained by hydrolysis. Similarly, aryl halide 5E can be coupled with alkyl bromide 5F to form intermediate 5G. By hydrolysis, 5H acid is obtained.
Способ 6Method 6
Другой способ получения димеров бензотиофена и их фармацевтически приемлемых солей подробно показан на Схеме 6. Последовательность начинается с алкилгалогенида 6А. Путем замещения галогенида соответствующим образом замещенным фенолом 6В в основных условиях с последующим гидролизом получают димер 6С. Аналогично, алкилхлорид 6D может быть замещен фенолом 6Е в основных условиях с получением 6F после превращения в двухосновную кислоту. Фенол 6G также может применяться для замещения алкилхлорида 6D с получением целевого 6Н после превращения в двухосновную кислоту. Наконец, алкилбромид 61 может быть замещен фенолом 6J с получением 6K после превращения в двухосновную кислоту.Another method for preparing benzothiophene dimers and their pharmaceutically acceptable salts is shown in detail in Scheme 6. The sequence begins with alkyl halide 6A. By replacing the halide with an appropriately substituted phenol 6B under basic conditions followed by hydrolysis, dimer 6C is obtained. Likewise, alkyl chloride 6D can be replaced by phenol 6E under basic conditions to give 6F after conversion to a diacid. Phenol 6G can also be used to replace alkyl chloride 6D to give the target 6H after conversion to a diacid. Finally, alkyl bromide 61 can be replaced by phenol 6J to give 6K after conversion to a diacid.
Способ 7Method 7
Другой способ получения димеров бензотиофена и их фармацевтически приемлемых солей подробно показан на Схеме 7. Последовательность начинается с реакции Мицунобу между первичным спиртом 7А и фенолом 7В с получением 7С после гидролиза сложного диэфира. Альтернативно, фенол 7D может вступать в реакцию со спиртом 7Е в условиях реакции Мицунобу. Последующим омылением получают двухосновную кислоту 7F. Фенол 7G также может применяться в реакции Мицунобу с 7Н с получением 7I после превращения сложного диэфира в двухосновную кислоту.Another method for preparing benzothiophene dimers and their pharmaceutically acceptable salts is detailed in Scheme 7. The sequence begins with the Mitsunobu reaction between primary alcohol 7A and phenol 7B to produce 7C after hydrolysis of the diester. Alternatively, phenol 7D can react with alcohol 7E under Mitsunobu reaction conditions. Subsequent saponification produces dibasic acid 7F. Phenol 7G can also be used in the Mitsunobu reaction with 7H to produce 7I after converting the diester to a diacid.
Аналогичным образом бис-фенол бензотиофен 7J и соответствующим образом замещенный диол (7K) могут быть подвергнуты условиям реакции Мицунобу с получением смеси 7L и 7М. С помощью гидролиза получают смесь двухосновных кислот 7N и 7O.Similarly, the bis-phenol benzothiophene 7J and the appropriately substituted diol (7K) can be subjected to Mitsunobu reaction conditions to give a mixture of 7L and 7M. By hydrolysis, a mixture of dibasic acids 7N and 7O is obtained.
Способ 8Method 8
Другой способ получения димеров бензотиофена и их фармацевтически приемлемых солей подробно показан на Схеме 8. Последовательность начинается с соответствующим образом замещенного арилбромида 8А. Путем реакции с алкиламином 8В в присутствии палладиевого катализатора получают сложный диэфир димера алкиламина 8С. С помощью гидролиза получают целевую двухосновную кислоту 8D.Another method for preparing benzothiophene dimers and their pharmaceutically acceptable salts is shown in detail in Scheme 8. The sequence begins with the appropriately substituted aryl bromide 8A. By reaction with alkylamine 8B in the presence of a palladium catalyst, the diester of alkylamine dimer 8C is obtained. The target diacid 8D is obtained by hydrolysis.
Способ 9Method 9
Другой способ получения димеров бензотиофена и их фармацевтически приемлемых солей подробно показан на Схеме 9. Последовательность начинается с восстановительного аминирования между альдегидом 9А и аминоазабензотифеном 9В в присутствии триацетоксиборгидрида натрия. Путем добавления TFA к неочищенной смеси получают целевую двухосновную кислоту 9С.Another method for preparing benzothiophene dimers and their pharmaceutically acceptable salts is detailed in Scheme 9. The sequence begins with a reductive amination between aldehyde 9A and aminoazabenzothiphene 9B in the presence of sodium triacetoxyborohydride. By adding TFA to the crude mixture, the desired 9C diacid is obtained.
Способ 10Method 10
Другой способ получения димеров бензотиофена и их фармацевтически приемлемых солей подробно показан на Схеме 10. Последовательность начинается с бисалкилирования алкилдигалогенида соответствующим образом замещенным фенольным бензотиофеном 10А с получением сложного диэфира димера 10В. С помощью гидролиза получают целевую двухосновную кислоту 10С. Аналогично, дигалогенид может быть бисалкилирован 10D с получением двухосновной кислоты 10Е после превращения сложного диэфира в двухосновную кислоту.Another method for preparing benzothiophene dimers and their pharmaceutically acceptable salts is detailed in Scheme 10. The sequence begins with the bisalkylation of an alkyl dihalide with an appropriately substituted phenolic benzothiophene 10A to produce the dimer diester 10B. By hydrolysis, the target dibasic acid 10C is obtained. Likewise, the dihalide can be bisalkylated 10D to give the diacid 10E after converting the diester to the diacid.
Способ 11Method 11
Другой способ получения димеров бензотиофена и их фармацевтически приемлемых солей подробно показан на Схеме 11. Последовательность начинается с алкилирования анилина 11В алкилбромидом 11А с получением 11С. Путем гидролиза сложного диэфира получают 11D.Another method for preparing benzothiophene dimers and their pharmaceutically acceptable salts is detailed in Scheme 11. The sequence begins with the alkylation of aniline 11B with alkyl bromide 11A to give 11C. By hydrolysis of the diester, 11D is obtained.
Способ 12Method 12
Другой способ получения димеров бензотиофена и их фармацевтически приемлемых солей подробно показан на Схеме 12. Последовательность начинается с алкилирования фенола 12В алкилбромидом 12А с получением 12С. Путем селективного гидролиза, опосредованного основанием, получают монокислоту 12D. Сочетанием 12D либо с сульфонамидом, либо с сульфамидом получают 12Е. С помощью кислотного гидролиза получают 12F.Another method for preparing benzothiophene dimers and their pharmaceutically acceptable salts is detailed in Scheme 12. The sequence begins with the alkylation of phenol 12B with alkyl bromide 12A to give 12C. By selective base-mediated hydrolysis, monoacid 12D is obtained. Combining 12D with either a sulfonamide or sulfonamide produces 12E. Acid hydrolysis produces 12F.
Способ 13Method 13
Другой способ получения димеров бензотиофена и их фармацевтически приемлемых солей подробно показан на Схеме 13. Последовательность начинается с алкилирования фенола 13В алкилбромидом 13А с получением 13С. Путем гидролиза сложного диэфира с последующим опосредованным кислотой снятием защиты у фенола, защищенного метоксиметилацеталем (MOM), получают 13D.Another method for preparing benzothiophene dimers and their pharmaceutically acceptable salts is detailed in Scheme 13. The sequence begins with the alkylation of phenol 13B with alkyl bromide 13A to give 13C. By hydrolysis of the diester followed by acid-mediated deprotection of a methoxymethyl acetal (MOM)-protected phenol, 13D is obtained.
Способы примененияMethods of application
Описанные в настоящем документе соединения, имеющие терапевтическое применение, такие как соединения общей формулы (I), соединения общей формулы (II), соединения общей формулы (III), соединения общей формулы (IV), соединения общей формулы (V), соединения общей формулы (VI), соединения Примеров с 1 по 190 и фармацевтически приемлемые соли вышеперечисленных соединений могут быть введены пациенту с целью индукции иммунного ответа, индукции STING-зависимой продукции цитокинов и/или индукции противоопухолевой активности. Термин «введение» и его варианты (например, «введение» соединения) означает предоставление соединения пациенту, нуждающемуся в лечении. Когда соединение предоставляется в комбинации с одним или более дополнительными активными агентами (например, противовирусными агентами, полезными для лечения инфекции HCV или противоопухолевыми агентами для лечения онкологических заболеваний), «введение» и его варианты каждый понимаются как включающие одновременное и последовательное предоставление соединения или соли и других агентов.Compounds described herein having therapeutic use, such as compounds of general formula (I), compounds of general formula (II), compounds of general formula (III), compounds of general formula (IV), compounds of general formula (V), compounds of general formula (VI), the compounds of Examples 1 to 190 and pharmaceutically acceptable salts of the above compounds can be administered to a patient for the purpose of inducing an immune response, inducing STING-dependent cytokine production and/or inducing antitumor activity. The term "administration" and its variations (eg, "administering" a compound) means providing a compound to a patient in need of treatment. When a compound is provided in combination with one or more additional active agents (eg, antiviral agents useful for treating HCV infection or antineoplastic agents for treating cancer), "administration" and variations thereof are each understood to include the simultaneous and sequential provision of the compound or salt and other agents.
Описанные здесь соединения могут быть агонистами STING. Эти соединения являются потенциально полезными для лечения заболеваний или нарушений, включая, но не ограничиваясь ими, нарушения пролиферации клеток. Нарушения клеточной пролиферации включают, но не ограничиваются ими, онкологические заболевания, доброкачественный папилломатоз, гестационные трофобластические заболевания и доброкачественные неопластические заболевания, такие как папиллома кожи (кондиломы) и папиллома половых органов.The compounds described herein may be STING agonists. These compounds are potentially useful for the treatment of diseases or disorders, including, but not limited to, cell proliferation disorders. Disorders of cell proliferation include, but are not limited to, cancer, benign papillomatosis, gestational trophoblastic diseases, and benign neoplastic diseases such as cutaneous papilloma (condylomas) and genital papilloma.
В конкретных вариантах осуществления заболевание или нарушение, которое необходимо лечить, представляет собой нарушение пролиферации клеток. В некоторых вариантах осуществления нарушение пролиферации клеток представляет собой рак. В отдельных вариантах осуществления рак выбран из онкологических заболеваний головного мозга и спинного мозга, онкологических заболеваний головы и шеи, лейкемии и онкологических заболеваний крови, онкологических заболеваний кожи, онкологических заболеваний репродуктивной системы, онкологических заболеваний желудочно-кишечной системы, онкологических заболеваний печени и желчных протоков, онкологических заболеваний почек и мочевого пузыря, онкологических заболеваний костей, онкологических заболеваний легких, злокачественной мезотелиомы, сарком, лимфом, аденокарцином, онкологических заболеваний щитовидной железы, опухолей сердца, герминогенных опухолей, злокачественных нейроэндокринных (карциноидных) опухолей, срединных онкологических заболеваний и онкологических заболеваний без выявленного первичного очага (то есть, онкологических заболеваний, при которых обнаружен метастазирующий рак, но первичная локализация рака неизвестна). В конкретных вариантах осуществления рак присутствует у взрослого пациента; в дополнительных вариантах осуществления рак присутствует у пациента детского возраста. В конкретных вариантах осуществления рак связан со СПИДом.In specific embodiments, the disease or disorder to be treated is a cell proliferation disorder. In some embodiments, the cell proliferation disorder is cancer. In certain embodiments, the cancer is selected from brain and spinal cord cancers, head and neck cancers, leukemia and blood cancers, skin cancers, reproductive system cancers, gastrointestinal cancers, liver and bile duct cancers, oncological diseases of the kidneys and bladder, oncological diseases of the bones, oncological diseases of the lungs, malignant mesothelioma, sarcomas, lymphomas, adenocarcinomas, oncological diseases of the thyroid gland, heart tumors, germ cell tumors, malignant neuroendocrine (carcinoid) tumors, midline oncological diseases and oncological diseases without identified primary site (that is, cancers in which metastatic cancer is detected, but the primary location of the cancer is unknown). In specific embodiments, the cancer is present in an adult patient; in additional embodiments, the cancer is present in the pediatric patient. In specific embodiments, cancer is associated with AIDS.
В конкретных вариантах осуществления рак выбран из онкологических заболеваний головного мозга и спинного мозга. В конкретных вариантах осуществления рак выбран из группы, состоящей из анапластических астроцитом, глиобластом, астроцитом и эстезионейробластом (также известных как ольфакторные нейробластомы). В конкретных вариантах осуществления рак головного мозга выбран из группы, состоящей из астроцитарной опухоли (например, пилоцитарной астроцитомы, субэпендимальной гигантоклеточной астроцитомы, диффузной астроцитомы, плеоморфной ксантоастроцитомы, анапластической астроцитомы, астроцитомы, гигантоклеточной глиобластомы, глиобластомы, вторичной глиобластомы, первичной глиобластомы взрослых и первичной глиобластомы детского возраста), олигодендроглиальной опухоли (например, олигодендроглиомы и анапластической олигодендроглиомы), олигоастроцитарной опухоли (например, олигоастроцитомы и анапластической олигоастроцитомы), эпендимомы (например, миксопапиллярной эпендимомы и анапластической эпендимомы); медуллобластомы, примитивной нейроэктодермальной опухоли, шванномы, менингиомы, атипичной менингиомы, анапластической менингиомы, аденомы гипофиза, глиомы ствола головного мозга, астроцитомы мозжечка, церебральной астроцитомы/злокачественной глиомы, глиомы зрительного пути и гипоталамической глиомы, и первичной лимфомы центральной нервной системы. В конкретных случаях этих вариантов осуществления рак головного мозга выбран из группы, состоящей из глиомы, мультиформной глиобластомы, параганглиомы и супратенториальных примитивных нейроэктодермальных опухолей (sPNET).In specific embodiments, the cancer is selected from cancers of the brain and spinal cord. In specific embodiments, the cancer is selected from the group consisting of anaplastic astrocytomas, glioblastomas, astrocytomas, and aesthesioneuroblastomas (also known as olfactory neuroblastomas). In specific embodiments, the brain cancer is selected from the group consisting of an astrocytic tumor (e.g., pilocytic astrocytoma, subependymal giant cell astrocytoma, diffuse astrocytoma, pleomorphic xanthoastrocytoma, anaplastic astrocytoma, astrocytoma, giant cell glioblastoma, glioblastoma, secondary glioblastoma, primary glioblastoma s of adults and primary glioblastoma childhood), oligodendroglial tumor (eg, oligodendroglioma and anaplastic oligodendroglioma), oligoastrocytic tumor (eg, oligoastrocytoma and anaplastic oligoastrocytoma), ependymoma (eg, myxopapillary ependymoma and anaplastic ependymoma); medulloblastoma, primitive neuroectodermal tumor, schwannoma, meningioma, atypical meningioma, anaplastic meningioma, pituitary adenoma, brainstem glioma, cerebellar astrocytoma, cerebral astrocytoma/malignant glioma, optic pathway glioma and hypothalamic glioma, and primary lymphomas of the central nervous system. In specific cases of these embodiments, the brain cancer is selected from the group consisting of glioma, glioblastoma multiforme, paraganglioma, and supratentorial primitive neuroectodermal tumors (sPNETs).
В конкретных вариантах осуществления рак выбран из онкологических заболеваний головы и шеи, включая онкологические заболевания носоглотки, полости носа и околоносовых пазух, онкологические заболевания гипофарингеальной области, онкологические заболевания ротовой полости (например, плоскоклеточные карциномы, лимфомы и саркомы), онкологические заболевания губ, онкологические заболевания ротоглотки, опухоли слюнных желез, онкологические заболевания гортани (например, плоскоклеточные карциномы гортани, рабдомиосаркомы) и онкологические заболевания глаза или онкологические заболевания глазной области. В конкретных вариантах осуществления онкологическое заболевание глаза выбрано из группы, состоящей из внутриглазной меланомы и ретинобластомы.In specific embodiments, the cancer is selected from head and neck cancers, including nasopharyngeal, nasal and sinus cancers, hypopharyngeal cancers, oral cancers (e.g., squamous cell carcinomas, lymphomas, and sarcomas), lip cancers, and oral cancers. oropharynx, salivary gland tumors, laryngeal cancers (eg squamous cell carcinomas of the larynx, rhabdomyosarcomas) and ocular cancers or cancers of the ocular region. In specific embodiments, the ocular cancer is selected from the group consisting of intraocular melanoma and retinoblastoma.
В конкретных вариантах осуществления рак выбран из лейкемии и онкологических заболеваний крови. В конкретных вариантах осуществления рак выбран из группы, состоящей из миелопролиферативных новообразований, миелодиспластических синдромов, миелодиспластических/миелопролиферативных новообразований, острого миелоидного лейкоза (AML), миелодиспластического синдрома (MDS), хронического миелоидного лейкоза (CML), миелопролиферативного новообразования (MPN), пост-MPN АМЛ, пост-MDS АМЛ, del(5q)-ассоциированного MDS или AML высокого риска, хронического миелоидного лейкоза в бластной фазе, ангиоиммунобластной лимфомы, острого лимфобластного лейкоза, гистиоцитоза из клеток Лангерганса, волосатоклеточного лейкоза и новообразований плазматических клеток, включая плазмоцитомы множественные миеломы. Упомянутые здесь лейкозы могут быть острыми или хроническими.In specific embodiments, the cancer is selected from leukemia and blood cancers. In specific embodiments, the cancer is selected from the group consisting of myeloproliferative neoplasms, myelodysplastic syndromes, myelodysplastic/myeloproliferative neoplasms, acute myeloid leukemia (AML), myelodysplastic syndrome (MDS), chronic myeloid leukemia (CML), myeloproliferative neoplasm (MPN), post- MPN AML, post-MDS AML, Del (5Q) -sed by MDS or AML high risk, chronic myeloidal leukemia in the blast phase, angiimmunoblastic lymphoma, acute lymphoblastic leukemia, histiocytosis of langerganes, hairy leukemia and neoplasms of plasma cell We are multiple myelomas . The leukemias mentioned here can be acute or chronic.
В конкретных вариантах осуществления рак выбран из онкологических заболеваний кожи. В отдельных вариантах осуществления рак кожи выбран из группы, состоящей из меланомы, плоскоклеточного рака и базальноклеточного рака.In specific embodiments, the cancer is selected from skin cancers. In certain embodiments, the skin cancer is selected from the group consisting of melanoma, squamous cell carcinoma, and basal cell carcinoma.
В конкретных вариантах осуществления рак выбран из онкологических заболеваний репродуктивной системы. В отдельных вариантах осуществления рак выбран из группы, состоящей из онкологических заболеваний груди, онкологических заболеваний шейки матки, онкологических заболеваний влагалища, онкологических заболеваний яичников, онкологических заболеваний простаты, онкологических заболеваний полового члена и онкологических заболеваний яичек. В конкретных случаях этих вариантов осуществления рак представляет собой рак груди, выбранный из группы, состоящей из протоковых карцином и филлоидных цистосарком. В конкретных случаях этих вариантов осуществления рак груди может представлять собой рак груди у мужчин или рак груди у женщин. В конкретных случаях этих вариантов осуществления рак представляет собой рак шейки матки, выбранный из группы, состоящей из плоскоклеточных карцином и аденокарцином. В конкретных случаях этих вариантов осуществления рак представляет собой рак яичника, выбранный из группы, состоящей из эпителиальных онкологических заболеваний.In specific embodiments, the cancer is selected from cancers of the reproductive system. In certain embodiments, the cancer is selected from the group consisting of breast cancer, cervical cancer, vaginal cancer, ovarian cancer, prostate cancer, penile cancer, and testicular cancer. In specific cases of these embodiments, the cancer is a breast cancer selected from the group consisting of ductal carcinomas and phyllodes cystosarcomas. In specific cases of these embodiments, the breast cancer may be male breast cancer or female breast cancer. In specific cases of these embodiments, the cancer is cervical cancer selected from the group consisting of squamous cell carcinomas and adenocarcinomas. In specific cases of these embodiments, the cancer is an ovarian cancer selected from the group consisting of epithelial cancers.
В конкретных вариантах осуществления рак выбран из онкологических заболеваний желудочно-кишечной системы. В отдельных вариантах осуществления рак выбран из группы, состоящей из онкологических заболеваний пищевода, онкологических заболеваний желудочно-кишечного тракта (также известных как рак желудка), карциноидных опухолей желудочно-кишечного тракта, онкологических заболеваний поджелудочной железы, онкологических заболеваний желчного пузыря, онкологических заболеваний прямой кишки и рака анального канала. В случаях этих вариантов осуществления рак выбран из группы, состоящей из плоскоклеточных карцином пищевода, аденокарцином пищевода, аденокарцином желудка, карциноидных опухолей желудочно-кишечного тракта, стромальных опухолей желудочно-кишечного тракта, лимфом желудка, лимфом желудочно-кишечного тракта, солидных псевдопапиллярных опухолей поджелудочной железы, панкреатобластомы, инсулином, карцином поджелудочной железы, включая ацинарно-клеточные карциномы и протоковые аденокарциномы, аденокарциномы желчного пузыря, колоректальные аденокарциномы и плоскоклеточные карциномы анального канала.In specific embodiments, the cancer is selected from gastrointestinal cancers. In certain embodiments, the cancer is selected from the group consisting of esophageal cancers, gastrointestinal cancers (also known as stomach cancer), gastrointestinal carcinoid tumors, pancreatic cancers, gallbladder cancers, rectal cancers and anal cancer. In these embodiments, the cancer is selected from the group consisting of squamous cell carcinomas of the esophagus, adenocarcinomas of the esophagus, adenocarcinomas of the stomach, carcinoid tumors of the gastrointestinal tract, stromal tumors of the gastrointestinal tract, lymphomas of the stomach, lymphomas of the gastrointestinal tract, solid pseudopapillary tumors of the pancreas , pancreatoblastomas, insulinomas, pancreatic carcinomas, including acinar cell carcinomas and ductal adenocarcinomas, gallbladder adenocarcinomas, colorectal adenocarcinomas and squamous cell carcinomas of the anal canal.
В конкретных вариантах осуществления рак выбран из онкологических заболеваний печени и желчных протоков. В конкретных вариантах осуществления рак представляет собой рак печени (также известный как гепатоцеллюлярная карцинома). В конкретных вариантах осуществления рак представляет собой рак желчного протока (также известный как холангиокарцинома); в случаях этих вариантов осуществления рак желчного протока выбран из группы, состоящей из внутрипеченочной холангиокарциномы и внепеченочной холангиокарциномы.In specific embodiments, the cancer is selected from liver and bile duct cancers. In specific embodiments, the cancer is liver cancer (also known as hepatocellular carcinoma). In specific embodiments, the cancer is bile duct cancer (also known as cholangiocarcinoma); in the cases of these embodiments, the bile duct cancer is selected from the group consisting of intrahepatic cholangiocarcinoma and extrahepatic cholangiocarcinoma.
В конкретных вариантах осуществления рак выбран из рака почки и мочевого пузыря. В конкретных вариантах осуществления рак представляет собой рак почки, выбранный из группы, состоящей из почечно-клеточного рака, опухолей Вильмса и переходно-клеточных онкологических заболеваний. В конкретных вариантах осуществления рак представляет собой рак мочевого пузыря, выбранный из группы, состоящей из уротелиальной карциномы (переходно-клеточной карциномы), плоскоклеточных карцином и аденокарцином. В конкретных вариантах осуществления рак выбран из онкологических заболеваний костей. В конкретных вариантах осуществления рак кости выбран из группы, состоящей из остеосаркомы, злокачественной фиброзной гистиоцитомы кости, саркомы Юинга, хордомы (рак кости, возникающий из остатков спинной струны вблизи позвоночника). В конкретных вариантах осуществления рак выбран из онкологических заболеваний легких. В конкретных вариантах осуществления рак легкого выбран из группы, состоящей из немелкоклеточного рака легкого, мелкоклеточного рака легкого, бронхиальных опухолей и плевропульмональных бластом.In specific embodiments, the cancer is selected from kidney and bladder cancer. In specific embodiments, the cancer is a kidney cancer selected from the group consisting of renal cell carcinoma, Wilms tumors, and transitional cell cancers. In specific embodiments, the cancer is a bladder cancer selected from the group consisting of urothelial carcinoma (transitional cell carcinoma), squamous cell carcinomas, and adenocarcinomas. In specific embodiments, the cancer is selected from bone cancers. In specific embodiments, the bone cancer is selected from the group consisting of osteosarcoma, malignant fibrous histiocytoma of bone, Ewing's sarcoma, chordoma (bone cancer arising from remnants of the dorsal chorda near the spine). In specific embodiments, the cancer is selected from lung cancers. In specific embodiments, the lung cancer is selected from the group consisting of non-small cell lung cancer, small cell lung cancer, bronchial tumors, and pleuropulmonary blastomas.
В конкретных вариантах осуществления рак выбран из злокачественной мезотелиомы. В конкретных вариантах осуществления рак выбран из группы, состоящей из эпителиальной мезотелиомы и саркоматоидных карцином.In specific embodiments, the cancer is selected from malignant mesothelioma. In specific embodiments, the cancer is selected from the group consisting of epithelial mesothelioma and sarcomatoid carcinomas.
В конкретных вариантах осуществления рак выбран из сарком. В отдельных вариантах осуществления саркома выбрана из группы, состоящей из центральной хондросаркомы, центральной и периостальной хондромы, фибросаркомы, светлоклеточной саркомы сухожильных влагалищ и саркомы Капоши.In specific embodiments, the cancer is selected from sarcomas. In certain embodiments, the sarcoma is selected from the group consisting of central chondrosarcoma, central and periosteal chondroma, fibrosarcoma, clear cell tendon sheath sarcoma, and Kaposi's sarcoma.
В конкретных вариантах осуществления рак выбран из лимфом. В отдельных вариантах осуществления рак выбран из группы, состоящей из лимфомы Ходжкина (например, клеток Рида-Штернберга), неходжкинской лимфомы (например, диффузной В-клеточной крупноклеточной лимфомы, фолликулярной лимфомы, грибовидного микоза, синдрома Сезари, первичной лимфомы центральной нервной системы), Т-клеточных лимфом кожи, первичных лимфом центральной нервной системы.In specific embodiments, the cancer is selected from lymphomas. In certain embodiments, the cancer is selected from the group consisting of Hodgkin lymphoma (e.g., Reed-Sternberg cell), non-Hodgkin lymphoma (e.g., diffuse large B-cell lymphoma, follicular lymphoma, mycosis fungoides, Sezary syndrome, primary central nervous system lymphoma), T-cell lymphomas of the skin, primary lymphomas of the central nervous system.
В конкретных вариантах осуществления рак выбран из железистых онкологических заболеваний. В отдельных вариантах осуществления рак выбран из группы, состоящей из адренокортикального рака (также известного как адренокортикальная карцинома или карцинома коры надпочечников), феохромоцитом, параганглиом, опухолей гипофиза, тимомы и карцином тимуса.In specific embodiments, the cancer is selected from glandular cancers. In certain embodiments, the cancer is selected from the group consisting of adrenocortical carcinoma (also known as adrenocortical carcinoma or adrenocortical carcinoma), pheochromocytomas, paragangliomas, pituitary tumors, thymoma, and thymic carcinomas.
В конкретных вариантах осуществления рак выбран из онкологических заболеваний щитовидной железы. В отдельных вариантах осуществления рак щитовидной железы выбран из группы, состоящей из медуллярных карцином щитовидной железы, папиллярных карцином щитовидной железы и фолликулярных карцином щитовидной железы. В отдельных вариантах осуществления рак выбран из группы, состоящей из злокачественных экстракраниальных эмбрионально-клеточных опухолей и злокачественных экстрагонадных эмбрионально-клеточных опухолей. В конкретных случаях этих вариантов осуществления злокачественные экстрагонадные эмбрионально-клеточные опухоли выбраны из группы, состоящей из несемином и семином. В конкретных вариантах осуществления рак выбран из опухолей сердца. В отдельных вариантах осуществления опухоль сердца выбрана из группы, состоящей из злокачественной тератомы, лимфомы, рабдомиосакромы, ангиосаркомы, хондросаркомы, фибросаркомы у детей и синовиальной саркомы.In specific embodiments, the cancer is selected from thyroid cancers. In certain embodiments, the thyroid cancer is selected from the group consisting of medullary thyroid carcinomas, papillary thyroid carcinomas, and follicular thyroid carcinomas. In certain embodiments, the cancer is selected from the group consisting of malignant extracranial germinal cell tumors and malignant extragonadal germinal cell tumors. In specific cases of these embodiments, the malignant extragonadal germinal cell tumors are selected from the group consisting of nonseminomas and seminomas. In specific embodiments, the cancer is selected from cardiac tumors. In certain embodiments, the cardiac tumor is selected from the group consisting of malignant teratoma, lymphoma, rhabdomyosacrum, angiosarcoma, chondrosarcoma, pediatric fibrosarcoma, and synovial sarcoma.
В конкретных вариантах осуществления нарушение пролиферации клеток выбрано из доброкачественного папилломатоза, доброкачественных неопластических заболеваний и гестационных трофобластических заболеваний. В отдельных вариантах осуществления доброкачественное неопластическое заболевание выбрано из папилломы кожи (кондилом) и папилломы половых органов. В отдельных вариантах осуществления гестационное трофобластическое заболевание выбрано из группы, состоящей из пузырного заноса и гестационной трофобластической неоплазии (например, инвазивного пузырного заноса, хориокарцином, трофобластических опухолей в плацентарной области и эпителиоидных трофобластических опухолей).In specific embodiments, the cell proliferation disorder is selected from benign papillomatosis, benign neoplastic diseases, and gestational trophoblastic diseases. In certain embodiments, the benign neoplastic disease is selected from skin papilloma (condylomas) and genital papilloma. In certain embodiments, the gestational trophoblastic disease is selected from the group consisting of hydatidiform mole and gestational trophoblastic neoplasia (eg, invasive mole, choriocarcinomas, placental trophoblastic tumors, and epithelioid trophoblastic tumors).
В контексте данного документа термины «терапия» и «лечение» относятся ко всем процессам, в которых может иметь место замедление, прерывание, остановка, контроль или остановка прогрессирования заболевания или расстройства, описанного здесь. Эти термины не обязательно указывают на полное устранение всех симптомов заболевания или расстройства.As used herein, the terms “therapy” and “treatment” refer to all processes in which slowing, interrupting, arresting, controlling or halting the progression of a disease or disorder described herein may occur. These terms do not necessarily indicate complete elimination of all symptoms of a disease or disorder.
Термины «назначение» и/или «введение» соединения следует понимать как включающие предоставление пациенту соединения, описанного в данном документе, или его фармацевтически приемлемой соли и композиций из вышеперечисленных. Количество соединения, вводимого пациенту, является количеством, достаточным для индукции иммунного ответа и/или для индукции STING-зависимой продукции интерферона I типа у пациента. В одном варианте осуществления количество соединения может быть «эффективным количеством» или «терапевтически эффективным количеством», таким образом, чтобы рассматриваемое соединение вводилось в количестве, которое вызовет, соответственно, биологическую или медицинскую (то есть, предназначенную для лечения) ответную реакцию ткани, системы, животного или человека, которую добивается получить исследователь, ветеринар, врач или другой клиницист. Эффективное количество не обязательно включает критерии токсичности и безопасности, связанные с введением соединения.The terms “administration” and/or “administration” of a compound should be understood to include providing to a patient a compound described herein, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and compositions thereof. The amount of compound administered to a patient is an amount sufficient to induce an immune response and/or to induce STING-dependent type I interferon production in the patient. In one embodiment, the amount of the compound may be a "effective amount" or a "therapeutically effective amount", such that the compound in question is administered in an amount that will produce, respectively, a biological or medical (i.e., intended to treat) response of the tissue, system , animal or human being sought by a researcher, veterinarian, physician or other clinician. The effective amount does not necessarily include toxicity and safety criteria associated with administration of the compound.
Эффективное количество соединения будет варьироваться в зависимости от конкретного выбранного соединения (например, с учетом активности, эффективности и/или периода полувыведения соединения); выбранного способа введения; состояния, которое подлежит лечению; тяжести состояния, которое подлежит лечению; возраста, роста, веса и физического состояния пациента, проходящего лечение; истории болезни пациента, проходящего лечение; продолжительности лечения; характера сопутствующей терапии; целевого терапевтического эффекта и подобных факторов, и могут быть определены по стандартным методикам специалистом в данной области.The effective amount of a compound will vary depending on the particular compound selected (eg, taking into account the potency, potency and/or half-life of the compound); chosen method of administration; condition to be treated; the severity of the condition to be treated; the age, height, weight and physical condition of the patient undergoing treatment; medical history of the patient undergoing treatment; duration of treatment; the nature of concomitant therapy; target therapeutic effect and similar factors, and can be determined using standard techniques by one skilled in the art.
Описанные в настоящем документе соединения могут быть введены любым подходящим путем, включая пероральное и парентеральное введение. Парентеральное введение обычно осуществляется путем инъекции или инфузии и включает внутривенную, внутримышечную и подкожную инъекцию или инфузию.The compounds described herein can be administered by any suitable route, including oral and parenteral administration. Parenteral administration is usually by injection or infusion and includes intravenous, intramuscular and subcutaneous injection or infusion.
Соединения, раскрытые в данном документе, могут быть введены однократно или в соответствии со схемой введения, при которой несколько доз вводят с различными интервалами времени в течение заданного периода времени. Например, дозы могут быть введены один, два, три или четыре раза в день. Дозы могут быть введены до достижения желаемого терапевтического эффекта или неограниченно долго для поддержания желаемого терапевтического эффекта. Подходящие режимы дозирования для соединения, описанного здесь, зависят от фармакокинетических свойств этого соединения, таких как абсорбция, распределение и период полувыведения, которые могут быть определены квалифицированным специалистом. Кроме того, подходящие режимы дозирования, включая продолжительность таких режимов, для соединения, описанного в настоящем документе, зависят от заболевания или состояния, подлежащего лечению, тяжести заболевания или состояния, возраста и физического состояния пациента, проходящего лечение, медицинской истории пациента, проходящего лечение, характера сопутствующей терапии, желаемого терапевтического эффекта и подобных факторов в пределах компетенции и профессиональных знаний квалифицированного специалиста. Таким квалифицированным специалистам также будет понятно, что подходящие режимы дозирования могут потребовать корректировки, учитывая индивидуальную ответную реакцию пациента на режим дозирования или с течением времени, когда индивидуальные потребности пациента изменяются. Типичные суточные дозировки могут варьироваться в зависимости от конкретного выбранного пути введения.The compounds disclosed herein may be administered once or according to an administration schedule in which multiple doses are administered at varying intervals over a predetermined period of time. For example, doses may be administered once, twice, three or four times daily. Doses may be administered until the desired therapeutic effect is achieved or indefinitely to maintain the desired therapeutic effect. Suitable dosage regimens for a compound described herein depend on the pharmacokinetic properties of the compound, such as absorption, distribution, and half-life, which can be determined by one skilled in the art. In addition, suitable dosage regimens, including the duration of such regimens, for a compound described herein will depend on the disease or condition being treated, the severity of the disease or condition, the age and physical condition of the patient being treated, the medical history of the patient being treated, the nature of concomitant therapy, the desired therapeutic effect and similar factors within the competence and professional knowledge of a qualified specialist. Such skilled practitioners will also appreciate that suitable dosage regimens may require adjustment based on the patient's individual response to the dosage regimen or over time as the patient's individual needs change. Typical daily dosages may vary depending on the specific route of administration chosen.
Один вариант осуществления настоящего раскрытия относится к способу лечения нарушения пролиферации клеток, включающему введение терапевтически эффективного количества соединения общей формулы (I), соединения общей формулы (II), соединения общей формулы (III), соединения общей формулы (IV), соединения общей формулы (V), соединения общей формулы (VI) и фармацевтически приемлемых солей вышеперечисленных соединений пациенту, нуждающемуся в таком лечении. В вариантах осуществления изобретения заболевание или нарушение, которое необходимо лечить, представляет собой нарушение пролиферации клеток. В аспектах этих вариантов осуществления нарушение пролиферации клеток представляет собой рак. В дополнительных аспектах этих вариантов осуществления рак выбран из онкологических заболеваний головного мозга и спинного мозга, онкологических заболеваний головы и шеи, лейкемии и онкологических заболеваний крови, онкологических заболеваний кожи, онкологических заболеваний репродуктивной системы, онкологических заболеваний желудочно-кишечной системы, онкологических заболеваний печени и желчных протоков, онкологических заболеваний почек и мочевого пузыря, онкологических заболеваний костей, онкологических заболеваний легких, злокачественной мезотелиомы, сарком, лимфом, железистых онкологических заболеваний, онкологических заболеваний щитовидной железы, опухолей сердца, эмбрионально-клеточных опухолей, злокачественных нейроэндокринных (карциноидных) опухолей, онкологических заболеваний срединного тракта и онкологических заболеваний с неизвестной первичной локализацией.One embodiment of the present disclosure relates to a method of treating a cell proliferation disorder, comprising administering a therapeutically effective amount of a compound of general formula (I), a compound of general formula (II), a compound of general formula (III), a compound of general formula (IV), a compound of general formula ( V), compounds of general formula (VI) and pharmaceutically acceptable salts of the above compounds to a patient in need of such treatment. In embodiments of the invention, the disease or disorder to be treated is a cell proliferation disorder. In aspects of these embodiments, the disorder of cell proliferation is cancer. In additional aspects of these embodiments, the cancer is selected from brain and spinal cancers, head and neck cancers, leukemia and blood cancers, skin cancers, reproductive system cancers, gastrointestinal cancers, liver and biliary cancers ducts, kidney and bladder cancers, bone cancers, lung cancers, malignant mesothelioma, sarcomas, lymphomas, glandular cancers, thyroid cancers, heart tumors, embryonal cell tumors, malignant neuroendocrine (carcinoid) tumors, cancers middle tract and oncological diseases with unknown primary localization.
В одном варианте осуществления в настоящем документе раскрыто применение соединения общей формулы (I), соединения общей формулы (II), соединения общей формулы (III), соединения общей формулы (IV), соединения общей формулы (V), соединения общей формулы (VI) или фармацевтически приемлемой соли вышеперечисленных соединений в терапии. Соединение может быть полезным в способе индукции иммунного ответа и/или индукции STING-зависимой продукции интерферона типа I у пациента, такого как млекопитающее, нуждающегося в таком ингибировании, включающем введение эффективного количества соединения пациенту. В одном варианте осуществления в настоящем документе раскрыта фармацевтическая композиция, содержащая, по меньшей мере, одно соединение общей формулы (I), по меньшей мере, одно соединение общей формулы (II), по меньшей мере, одно соединение общей формулы (III), по меньшей мере, одно соединение общей формулы (IV), по меньшей мере, одно соединение общей формулы (V), по меньшей мере, одно соединение общей формулы (VI) или, по меньшей мере, одну фармацевтически приемлемую соль вышеперечисленных соединений, для применения в предполагаемом лечении с целью индукции иммунного ответа и/или индукции STING-зависимой продукции интерферона I типа.In one embodiment, the present document discloses the use of a compound of general formula (I), a compound of general formula (II), a compound of general formula (III), a compound of general formula (IV), a compound of general formula (V), a compound of general formula (VI). or a pharmaceutically acceptable salt of the above compounds in therapy. The compound may be useful in a method of inducing an immune response and/or inducing STING-dependent type I interferon production in a patient, such as a mammal, in need of such inhibition, comprising administering an effective amount of the compound to the patient. In one embodiment, disclosed herein is a pharmaceutical composition comprising at least one compound of general formula (I), at least one compound of general formula (II), at least one compound of general formula (III), according to at least one compound of general formula (IV), at least one compound of general formula (V), at least one compound of general formula (VI) or at least one pharmaceutically acceptable salt of the above compounds, for use in intended treatment to induce an immune response and/or induce STING-dependent production of type I interferon.
Один из вариантов осуществления, раскрытый в данном документе, представляет собой применение соединения общей формулы (I), соединения общей формулы (II), соединения общей формулы (III), соединения общей формулы (IV), соединения общей формулы (V), соединения общей формулы (VI) или фармацевтически приемлемой соли вышеперечисленных соединений при изготовлении лекарственного средства для индукции иммунного ответа и/или для индукции STING-зависимой продукции интерферона типа I. В вариантах осуществления изобретения заболевание или нарушение, подлежащее лечению, представляет собой нарушение пролиферации клеток. В аспектах этих вариантов осуществления нарушение пролиферации клеток представляет собой рак. В дополнительных аспектах этих вариантов осуществления рак выбран из онкологических заболеваний головного мозга и спинного мозга, онкологических заболеваний головы и шеи, лейкемии и онкологических заболеваний крови, онкологических заболеваний кожи, онкологических заболеваний репродуктивной системы, онкологических заболеваний желудочно-кишечной системы, онкологических заболеваний печени и желчных протоков, онкологических заболеваний почек и мочевого пузыря, онкологических заболеваний костей, онкологических заболеваний легких, злокачественной мезотелиомы, сарком, лимфом, железистых онкологических заболеваний, онкологических заболеваний щитовидной железы, опухолей сердца, эмбрионально-клеточных опухолей, злокачественных нейроэндокринных (карциноидных) опухолей, онкологических заболеваний срединного тракта и онкологических заболеваний с неизвестной первичной локализацией.One embodiment disclosed herein is the use of a compound of general formula (I), a compound of general formula (II), a compound of general formula (III), a compound of general formula (IV), a compound of general formula (V), a compound of general formula (VI) or a pharmaceutically acceptable salt of the above compounds in the manufacture of a medicament for inducing an immune response and/or for inducing STING-dependent production of type I interferon. In embodiments of the invention, the disease or disorder to be treated is a cell proliferation disorder. In aspects of these embodiments, the disorder of cell proliferation is cancer. In additional aspects of these embodiments, the cancer is selected from brain and spinal cancers, head and neck cancers, leukemia and blood cancers, skin cancers, reproductive system cancers, gastrointestinal cancers, liver and biliary cancers ducts, kidney and bladder cancers, bone cancers, lung cancers, malignant mesothelioma, sarcomas, lymphomas, glandular cancers, thyroid cancers, heart tumors, embryonal cell tumors, malignant neuroendocrine (carcinoid) tumors, cancers middle tract and oncological diseases with unknown primary localization.
КомпозицииCompositions
Термин «композиция» в контексте данного документа предназначен для охвата лекарственной формы, содержащей указанное соединение в указанном количестве, а также любой лекарственной формы, которая является прямым или косвенным результатом комбинации указанного соединения в указанном количестве. Такой термин предназначен для охвата лекарственной формы, содержащей соединение общей формулы (I), соединение общей формулы (II), соединение общей формулы (III), соединение общей формулы (IV), соединение общей формулы (V), соединение общей формулы (VI) или фармацевтически приемлемую соль вышеперечисленных соединений и один или более фармацевтически приемлемых носителей или вспомогательных веществ. Соответственно, композиции по настоящему раскрытию охватывают любую композицию, полученную путем смешивания соединения по настоящему раскрытию и одного или более фармацевтически приемлемых носителей или вспомогательных веществ. Под термином «фармацевтически приемлемый» подразумевается, что носители или вспомогательные вещества совместимы с описанным здесь соединением и с другими ингредиентами композиции.The term "composition" as used herein is intended to cover a dosage form containing a specified compound in a specified amount, as well as any dosage form that is the direct or indirect result of the combination of a specified compound in a specified amount. Such term is intended to cover a dosage form containing a compound of general formula (I), a compound of general formula (II), a compound of general formula (III), a compound of general formula (IV), a compound of general formula (V), a compound of general formula (VI) or a pharmaceutically acceptable salt of the above compounds and one or more pharmaceutically acceptable carriers or excipients. Accordingly, the compositions of the present disclosure include any composition prepared by mixing a compound of the present disclosure and one or more pharmaceutically acceptable carriers or excipients. By “pharmaceutically acceptable” is meant that the carriers or excipients are compatible with the compound described herein and with the other ingredients of the composition.
С целью индукции иммунного ответа и/или индукции STING-зависимой продукции интерферона типа I соединения общей формулы (I), соединения общей формулы (II), соединения общей формулы (III), соединения общей формулы (IV), соединения общей формулы (V), соединения общей формулы (VI) или фармацевтически приемлемые соли вышеперечисленных соединений могут быть введены с помощью средств, обеспечивающих контакт активного агента с местом действия агента. Соединения могут быть введены обычными способами, доступными для применения в сочетании с фармацевтическими препаратами, либо в виде отдельных терапевтических агентов, либо в комбинации терапевтических агентов. Соединения могут быть введены отдельно, но обычно вводятся с фармацевтическим носителем, выбранным на основе выбранного пути введения и стандартной фармацевтической практики.For the purpose of inducing an immune response and/or inducing STING-dependent production of type I interferon, compounds of general formula (I), compounds of general formula (II), compounds of general formula (III), compounds of general formula (IV), compounds of general formula (V) , compounds of general formula (VI) or pharmaceutically acceptable salts of the above compounds can be administered by means of contacting the active agent with the site of action of the agent. The compounds can be administered by conventional routes available for use in combination with pharmaceuticals, either as individual therapeutic agents or in combinations of therapeutic agents. The compounds may be administered separately, but are typically administered with a pharmaceutical carrier selected based on the chosen route of administration and standard pharmaceutical practice.
В одном варианте осуществления в настоящем документе раскрыта композиция, содержащая соединение общей формулы (I), соединение общей формулы (II), соединение общей формулы (III), соединение общей формулы (IV), соединение общей формулы (V), соединение общей формулы (VI) или фармацевтически приемлемую соль вышеперечисленных соединений и один или более фармацевтически приемлемых носителей или вспомогательных веществ. Композиция может быть приготовлена и упакована в нерасфасованной форме, в которой терапевтически эффективное количество соединения по настоящему изобретению может быть извлечено и затем введено пациенту, например, с порошками или сиропами. Альтернативно, композиция может быть приготовлена и упакована в единичную лекарственную форму, в которой каждая физически дискретная единица содержит терапевтически эффективное количество соединения общей формулы (I), соединения общей формулы (II), соединения общей формулы (III), соединения общей формулы (IV), соединения общей формулы (V), соединения общей формулы (VI) или фармацевтически приемлемую соль вышеперечисленных соединений. Раскрытые здесь соединения и фармацевтически приемлемый носитель или вспомогательное вещество (вспомогательные вещества) как правило будут входить в состав дозированной формы, адаптированной для введения пациенту желаемым путем введения. Например, лекарственные формы включают формы, адаптированные для (1) перорального введения, такие как таблетки, капсулы, каплеты, пилюли, пастилки, порошки, сиропы, эликсиры, суспензии, растворы, эмульсии, саше и облатки; и (2) парентерального введения, такого как стерильные растворы, суспензии и порошки для восстановления. Подходящие фармацевтически приемлемые носители или вспомогательные вещества будут варьироваться в зависимости от выбранной конкретной лекарственной формы. Кроме того, подходящие фармацевтически приемлемые носители или вспомогательные вещества могут быть выбраны для конкретной функции, которую они могут выполнять в композиции. Например, некоторые фармацевтически приемлемые носители или вспомогательные вещества могут быть выбраны из-за их способности облегчать производство однородных лекарственных форм. Некоторые фармацевтически приемлемые носители или вспомогательные вещества могут быть выбраны из-за их способности облегчать производство стабильных лекарственных форм. Некоторые фармацевтически приемлемые носители или вспомогательные вещества могут быть выбраны из-за их способности облегчать перенос или транспортировку соединения, раскрытого в данном документе, после введения пациенту, из одного органа или части тела в другой орган или другую часть тела. Некоторые фармацевтически приемлемые носители или вспомогательные вещества могут быть выбраны из-за их способности улучшать соблюдение пациентом режима лечения.In one embodiment, disclosed herein is a composition comprising a compound of general formula (I), a compound of general formula (II), a compound of general formula (III), a compound of general formula (IV), a compound of general formula (V), a compound of general formula ( VI) or a pharmaceutically acceptable salt of the above compounds and one or more pharmaceutically acceptable carriers or excipients. The composition can be prepared and packaged in bulk form in which a therapeutically effective amount of a compound of the present invention can be extracted and then administered to a patient, for example, in powders or syrups. Alternatively, the composition may be prepared and packaged in a unit dosage form, in which each physically discrete unit contains a therapeutically effective amount of a compound of general formula (I), a compound of general formula (II), a compound of general formula (III), a compound of general formula (IV) , compounds of general formula (V), compounds of general formula (VI) or a pharmaceutically acceptable salt of the above compounds. The compounds disclosed herein and the pharmaceutically acceptable carrier or excipient(s) will typically be formulated in a dosage form adapted for administration to a patient by the desired route of administration. For example, dosage forms include those adapted for (1) oral administration, such as tablets, capsules, caplets, pills, lozenges, powders, syrups, elixirs, suspensions, solutions, emulsions, sachets and wafers; and (2) parenteral administration, such as sterile solutions, suspensions and powders for reconstitution. Suitable pharmaceutically acceptable carriers or excipients will vary depending on the particular dosage form selected. In addition, suitable pharmaceutically acceptable carriers or excipients may be selected for the particular function they may perform in the composition. For example, certain pharmaceutically acceptable carriers or excipients may be selected for their ability to facilitate the manufacture of uniform dosage forms. Certain pharmaceutically acceptable carriers or excipients may be selected for their ability to facilitate the manufacture of stable dosage forms. Certain pharmaceutically acceptable carriers or excipients may be selected for their ability to facilitate the transfer or transport of a compound disclosed herein, after administration to a patient, from one organ or body part to another organ or other body part. Certain pharmaceutically acceptable carriers or excipients may be selected for their ability to improve patient compliance with a treatment regimen.
Подходящие фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества включают следующие типы вспомогательных веществ: разбавители, смазки, связывающие вещества, разрыхлители, наполнители, скользящие вещества, гранулирующие агенты, покрывающие агенты, смачивающие агенты, растворители, сорастворители, суспендирующие агенты, эмульгаторы, подсластители, ароматизаторы, агенты, маскирующие запахи, красители, агенты, предотвращающие слеживание, гумектанты, хелатирующие агенты, пластификаторы, агенты, увеличивающие вязкость, антиоксиданты, консерванты, стабилизаторы, поверхностно-активные вещества и буферные агенты.Suitable pharmaceutically acceptable excipients include the following types of excipients: diluents, lubricants, binders, disintegrants, fillers, glidants, granulating agents, coating agents, wetting agents, solvents, cosolvents, suspending agents, emulsifiers, sweeteners, flavoring agents, masking agents odors, dyes, anti-caking agents, humectants, chelating agents, plasticizers, viscosity increasing agents, antioxidants, preservatives, stabilizers, surfactants and buffering agents.
Квалифицированный специалист обладает знаниями и профессиональными навыками в данной области, чтобы выбрать подходящие фармацевтически приемлемые носители и вспомогательные вещества в подходящих количествах для применения в композициях по настоящему раскрытию. Кроме того, специалистам в данной области доступен ряд ресурсов, в которых описаны фармацевтически приемлемые носители и вспомогательные вещества, и они могут быть полезны при выборе подходящих фармацевтически приемлемых носителей и вспомогательных веществ. Примеры включают Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Company), The Handbook of Pharmaceutical Additives (Gower Publishing Limited) и The Handbook of Pharmaceutical Excipients (the American Pharmaceutical Association and the Pharmaceutical Press).A person skilled in the art will have the knowledge and skill in the art to select suitable pharmaceutically acceptable carriers and excipients in suitable amounts for use in the compositions of the present disclosure. In addition, a number of resources are available to those skilled in the art that describe pharmaceutically acceptable carriers and excipients and may be helpful in selecting appropriate pharmaceutically acceptable carriers and excipients. Examples include Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Company), The Handbook of Pharmaceutical Additives (Gower Publishing Limited), and The Handbook of Pharmaceutical Excipients (the American Pharmaceutical Association and the Pharmaceutical Press).
Композиции по раскрытию получают с применением методик и способов, известных специалистам в данной области. Некоторые способы, обычно используемые в данной области техники, описаны в Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Company).The compositions of the disclosure are prepared using techniques and methods known to those skilled in the art. Some methods commonly used in the art are described in Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Company).
В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к твердой пероральной лекарственной форме, такой как таблетка или капсула, содержащей терапевтически эффективное количество соединения общей формулы (I), соединения общей формулы (II), соединения общей формулы (III), соединения общей формулы (IV), соединения общей формулы (V), соединения общей формулы (VI) или фармацевтически приемлемой соли вышеперечисленных соединений и разбавитель или наполнитель. Подходящие разбавители и наполнители включают лактозу, сахарозу, декстрозу, маннит, сорбит, крахмал (например, кукурузный крахмал, картофельный крахмал и предварительно желатинизированный крахмал), целлюлозу и ее производные (например, микрокристаллическую целлюлозу), сульфат кальция и двухосновный фосфат кальция. Твердая пероральная лекарственная форма может дополнительно содержать связывающее вещество. Подходящие связывающие вещества включают крахмал (например, кукурузный крахмал, картофельный крахмал и предварительно желатинизированный крахмал), желатин, камедь, альгинат натрия, альгиновую кислоту, трагакант, гуаровую камедь, повидон и целлюлозу и ее производные (например, микрокристаллическую целлюлозу). Твердая пероральная лекарственная форма может дополнительно содержать разрыхлитель. Подходящие разрыхлители включают кросповидон, натрийгликолят крахмала, кроскармелозу, альгиновую кислоту и натрий карбоксиметилцеллюлозу. Твердая пероральная лекарственная форма может дополнительно содержать смазывающее вещество. Подходящие смазывающие вещества включают стеариновую кислоту, стеарат магния, стеарат кальция и тальк.In one embodiment, the present invention relates to a solid oral dosage form, such as a tablet or capsule, containing a therapeutically effective amount of a compound of general formula (I), a compound of general formula (II), a compound of general formula (III), a compound of general formula (IV) , a compound of general formula (V), a compound of general formula (VI) or a pharmaceutically acceptable salt of the above compounds and a diluent or excipient. Suitable diluents and excipients include lactose, sucrose, dextrose, mannitol, sorbitol, starch (eg, corn starch, potato starch and pregelatinized starch), cellulose and its derivatives (eg, microcrystalline cellulose), calcium sulfate and dibasic calcium phosphate. The solid oral dosage form may further contain a binder. Suitable binders include starch (eg, corn starch, potato starch, and pregelatinized starch), gelatin, gum, sodium alginate, alginic acid, tragacanth, guar gum, povidone, and cellulose and its derivatives (eg, microcrystalline cellulose). The solid oral dosage form may further contain a disintegrant. Suitable disintegrants include crospovidone, sodium starch glycolate, croscarmellose, alginic acid and sodium carboxymethylcellulose. The solid oral dosage form may further contain a lubricant. Suitable lubricants include stearic acid, magnesium stearate, calcium stearate and talc.
Где это целесообразно, лекарственные формы для перорального введения могут быть микрокапсулированы. Композиция также может быть приготовлена для продления или задержки высвобождения, например, путем покрытия или заключения вещества в виде частиц в полимеры, воск или тому подобное.Where appropriate, oral dosage forms may be microencapsulated. The composition may also be formulated to prolong or delay release, for example by coating or enclosing the particulate material in polymers, waxes or the like.
Соединения, раскрытые в данном документе, также могут быть связаны с растворимыми полимерами в качестве нацеливаемых носителей лекарственных средств. Такие полимеры могут включать поливинилпирролидон, пирансополимер, полигидроксипропилметакриламидфенол, полигидроксиэтиласпартамидфенол или полиэтиленоксидполилизин, замещенный остатками пальмитоила. Кроме того, соединения по настоящему описанию могут быть соединены с классом биоразлагаемых полимеров, полезных для достижения контролируемого высвобождения лекарственного средства, например, полимолочной кислотой, полиэпсилонкапролактоном, полигидроксимасляной кислотой, сложными полиортоэфирами, полиацеталями, полидигидропиранами, полицианакрилатами и поперечно-сшитыми или амфипатическими блок-сополимерами гидрогелей.The compounds disclosed herein may also be associated with soluble polymers as targeted drug carriers. Such polymers may include polyvinylpyrrolidone, pyran copolymer, polyhydroxypropyl methacrylamide phenol, polyhydroxyethyl aspartamide phenol, or polyethylene oxide polylysine substituted with palmitoyl residues. In addition, the compounds herein may be combined with a class of biodegradable polymers useful for achieving controlled drug release, such as polylactic acid, polyepsilon caprolactone, polyhydroxybutyric acid, polyorthoesters, polyacetals, polydihydropyrans, polycyanoacrylates, and cross-linked or amphipathic block copolymers hydrogels.
В одном варианте осуществления изобретение относится к жидкой пероральной лекарственной форме. Жидкости для перорального применения, такие как растворы, сиропы и эликсиры, могут быть приготовлены в форме единичной дозы таким образом, что данное количество содержит заранее определенное количество соединения или его фармацевтически приемлемой соли, раскрытых в настоящем документе. Сиропы могут быть приготовлены путем растворения соединения по настоящему изобретению в подходящим образом ароматизированном водном растворе; тогда как эликсиры готовят при помощи нетоксичного спиртового носителя. Суспензии могут быть составлены путем диспергирования соединения по настоящему изобретению в нетоксичном носителе. Также могут быть добавлены солюбилизаторы и эмульгаторы, такие как этоксилированные изостеариловые спирты и полиоксиэтиленсорбитоловые эфиры, консерванты, вкусовые добавки, такие как масло перечной мяты или другие натуральные подсластители, или сахарин или другие искусственные подсластители и тому подобное.In one embodiment, the invention relates to a liquid oral dosage form. Oral liquids, such as solutions, syrups and elixirs, can be formulated in unit dosage form such that the amount contains a predetermined amount of a compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof disclosed herein. Syrups can be prepared by dissolving a compound of the present invention in a suitably flavored aqueous solution; whereas elixirs are prepared using a non-toxic alcohol carrier. Suspensions can be formulated by dispersing a compound of the present invention in a non-toxic vehicle. Solubilizers and emulsifiers such as ethoxylated isostearyl alcohols and polyoxyethylene sorbitol ethers, preservatives, flavoring agents such as peppermint oil or other natural sweeteners, or saccharin or other artificial sweeteners and the like may also be added.
В одном варианте осуществления изобретение относится к композициям для парентерального введения. Композиции, адаптированные для парентерального введения, включают водные и неводные стерильные растворы для инъекций, которые могут содержать антиоксиданты, буферы, бактериостаты и растворенные вещества, которые делают композицию изотонической с кровью предполагаемого реципиента; и водные и неводные стерильные суспензии, которые могут включать суспендирующие агенты и загустители. Композиции могут быть представлены в однодозовых или многодозовых контейнерах, например, запаянных ампулах и флаконах, и могут храниться в сублимированном (лиофилизированном) состоянии, требующем только добавления стерильного жидкого носителя, например, воды для инъекций, непосредственно перед применением. Экстемпоральные растворы для инъекций и суспензии могут быть приготовлены из стерильных порошков, гранул и таблеток.In one embodiment, the invention relates to compositions for parenteral administration. Compositions adapted for parenteral administration include aqueous and non-aqueous sterile injectable solutions that may contain antioxidants, buffers, bacteriostats and solutes that render the composition isotonic with the blood of the intended recipient; and aqueous and non-aqueous sterile suspensions, which may include suspending agents and thickening agents. The compositions may be presented in single-dose or multi-dose containers, such as sealed ampoules and vials, and may be stored in a freeze-dried (lyophilized) state, requiring only the addition of a sterile liquid carrier, such as water for injection, immediately prior to use. Extemporaneous injection solutions and suspensions can be prepared from sterile powders, granules and tablets.
КомбинацииCombinations
Соединения общей формулы (I), соединения общей формулы (II), соединения общей формулы (III), соединения общей формулы (IV), соединения общей формулы (V), соединения общей формулы (VI) и/или фармацевтически приемлемые соли вышеперечисленных соединений могут быть введены в комбинации с одним или более дополнительными активными агентами. В вариантах осуществления изобретения одно или более соединений общей формулы (I), соединений общей формулы (II), соединений общей формулы (III), соединений общей формулы (IV), соединений общей формулы (V), соединений общей формулы (VI) или одна или более фармацевтически приемлемых солей вышеперечисленных соединений, и один или более дополнительных активных агентов могут быть введены совместно. Дополнительный активный агент (агенты) может быть введен в виде разовой лекарственной формы с соединением общей формулы (I), соединением общей формулы (II), соединением общей формулы (III), соединением общей формулы (IV), соединением общей формулы (V), соединением общей формулы (VI) или фармацевтически приемлемой солью вышеперечисленных соединений, или дополнительный активный агент (агенты) может быть введен в отдельной лекарственной форме (формах) из дозированной формы, содержащей соединение общей формулы (I), соединение общей формулы (II), соединение общей формулы (III), соединение общей формулы (IV), соединение общей формулы (V), соединение формулы формулы (VI) или фармацевтически приемлемую соль вышеперечисленных соединений.Compounds of general formula (I), compounds of general formula (II), compounds of general formula (III), compounds of general formula (IV), compounds of general formula (V), compounds of general formula (VI) and/or pharmaceutically acceptable salts of the above compounds may be administered in combination with one or more additional active agents. In embodiments of the invention, one or more compounds of general formula (I), compounds of general formula (II), compounds of general formula (III), compounds of general formula (IV), compounds of general formula (V), compounds of general formula (VI), or one or more pharmaceutically acceptable salts of the above compounds, and one or more additional active agents may be co-administered. The additional active agent(s) may be administered in unit dosage form with a compound of general formula (I), a compound of general formula (II), a compound of general formula (III), a compound of general formula (IV), a compound of general formula (V), a compound of general formula (VI) or a pharmaceutically acceptable salt of the above compounds, or the additional active agent(s) may be administered in a separate dosage form(s) from a dosage form containing a compound of general formula (I), a compound of general formula (II), a compound general formula (III), a compound of general formula (IV), a compound of general formula (V), a compound of formula (VI) or a pharmaceutically acceptable salt of the above compounds.
Дополнительный активный агент (агенты) может быть предоставлен в виде фармацевтически приемлемой соли, где это необходимо.Additional active agent(s) may be provided in the form of a pharmaceutically acceptable salt, where necessary.
Дополнительный активный агент (агенты) может представлять собой один или более агентов, выбранных из группы, состоящей из соединений-агонистов STING, противовирусных соединений, антигенов, адъювантов, противораковых агентов, антагонистов пути CTLA-4, LAG-3 и PD-1, липидов, липосом, пептидов, цитотоксических агентов, химиотерапевтических агентов, иммуномодулирующих клеточные линии, ингибиторов контрольных точек, ингибиторов рецептора фактора роста эндотелия сосудов (VEGF), ингибиторов топоизомеразы II, агентов алкилирования, противоопухолевых антибиотиков, антиметаболитов, ретиноидов и иммуномодулирующих агентов, включая, но не ограничиваясь ими, противораковые вакцины. Следует понимать, что такой дополнительный активный агент (агенты) может быть предоставлен в виде фармацевтически приемлемой соли. Следует понимать, что описания указанных выше дополнительных активных агентов могут частично совпадать. Также будет понятно, что комбинации для лечения подлежат оптимизации, и понятно, что лучшая комбинация для применения соединений общей формулы (I), соединений общей формулы (II), соединений общей формулы (III), соединений общей формулы (IV), соединений общей формулы (V), соединений общей формулы (VI) или фармацевтически приемлемых солей вышеперечисленных соединений и одного или более дополнительных активных агентов будет определяться на основе индивидуальных потребностей пациента.The additional active agent(s) may be one or more agents selected from the group consisting of STING agonist compounds, antiviral compounds, antigens, adjuvants, anticancer agents, CTLA-4, LAG-3 and PD-1 pathway antagonists, lipids , liposomes, peptides, cytotoxic agents, chemotherapeutic agents, immunomodulatory cell lines, checkpoint inhibitors, vascular endothelial growth factor (VEGF) receptor inhibitors, topoisomerase II inhibitors, alkylation agents, antitumor antibiotics, antimetabolites, retinoids and immunomodulatory agents including but not limited to limited to them, cancer vaccines. It should be understood that such additional active agent(s) may be provided in the form of a pharmaceutically acceptable salt. It should be understood that the descriptions of the above additional active agents may overlap. It will also be understood that combinations for treatment are subject to optimization, and it will be understood that the best combination for the use of compounds of general formula (I), compounds of general formula (II), compounds of general formula (III), compounds of general formula (IV), compounds of general formula (V), compounds of general formula (VI) or pharmaceutically acceptable salts of the above compounds and one or more additional active agents will be determined based on the individual needs of the patient.
Соединение, раскрытое в данном документе, может применяться в комбинации с одним или более другими активными агентами, включая, но не ограничиваясь ими, другие противораковые агенты, которые применяются для профилактики, лечения, контроля, уменьшения интенсивности или снижения риска конкретного заболевания или состояния (например, нарушений пролиферации клеток). В одном варианте осуществления соединение, раскрытое в данном документе, комбинируется с одним или более другими противораковыми агентами для применения в профилактике, лечении, контроле, уменьшении интенсивности или снижении риска конкретного заболевания или состояния, для которого раскрытые в данном документе соединения являются полезными. Такие другие активные агенты могут быть введены способом и в обычно применяемом для них количестве, одновременно или последовательно с соединением по настоящему изобретению.A compound disclosed herein may be used in combination with one or more other active agents, including, but not limited to, other anticancer agents that are used to prevent, treat, control, ameliorate, or reduce the risk of a particular disease or condition (eg , cell proliferation disorders). In one embodiment, a compound disclosed herein is combined with one or more other anticancer agents for use in the prevention, treatment, control, amelioration, or risk reduction of a particular disease or condition for which the compounds disclosed herein are beneficial. Such other active agents may be administered in the manner and in the amounts customary for them, simultaneously or sequentially with the compound of the present invention.
Когда соединение, раскрытое в данном документе, применяется одновременно с одним или более другими активными агентами, предполагается композиция, содержащая такие другие активные агенты в дополнение к соединению, раскрытому в данном документе. Соответственно, композиции по настоящему раскрытию включают те, которые также содержат один или более другие активные ингредиенты в дополнение к соединению, раскрытому в данном документе. Соединение, описанное в данном документе, может быть введено либо одновременно, либо до или после одного или более другого активного агента (агентов). Соединение, раскрытое в данном документе, может быть введено отдельно, одним и тем же или другим путем введения или вместе в той же фармацевтической композиции, что и другой агент (агенты).When a compound disclosed herein is used concomitantly with one or more other active agents, a composition is contemplated containing such other active agents in addition to the compound disclosed herein. Accordingly, the compositions of the present disclosure include those that also contain one or more other active ingredients in addition to the compound disclosed herein. The compound described herein may be administered either simultaneously or before or after one or more other active agent(s). The compound disclosed herein may be administered separately, by the same or a different route of administration, or together in the same pharmaceutical composition as other agent(s).
Препараты, представленные в виде комбинаций, могут включать композицию, содержащую соединение общей формулы (I), соединение общей формулы (II), соединение общей формулы (III), соединение общей формулы (IV), соединение общей формулы (V), соединение общей формулы (VI) или фармацевтически приемлемую соль вышеперечисленных соединений, и один или более другой активный агент (агенты) вместе в одной фармацевтической композиции, или могут включать композицию, содержащую соединение общей формулы (I), соединение общей формулы (II), соединение общей формулы (III), соединение общей формулы (IV), соединение общей формулы (V), соединение общей формулы (VI) или фармацевтически приемлемую соль вышеперечисленных соединений, и композицию, содержащую один или более другой активный агент (агенты) в отдельной форме, например, в форме набора или в любой форме, предназначенной для раздельного введения либо одновременно, либо по отдельным схемам дозирования.Preparations presented in the form of combinations may include a composition containing a compound of general formula (I), a compound of general formula (II), a compound of general formula (III), a compound of general formula (IV), a compound of general formula (V), a compound of general formula (VI) or a pharmaceutically acceptable salt of the above compounds, and one or more other active agent(s) together in one pharmaceutical composition, or may include a composition containing a compound of general formula (I), a compound of general formula (II), a compound of general formula ( III), a compound of general formula (IV), a compound of general formula (V), a compound of general formula (VI) or a pharmaceutically acceptable salt of the above compounds, and a composition containing one or more other active agent(s) in a separate form, e.g. kit form or in any form intended for separate administration, either simultaneously or in separate dosage regimens.
Массовое соотношение соединения общей формулы (I), соединения общей формулы (II), соединения общей формулы (III), соединения общей формулы (IV), соединения общей формулы (V), соединения общей формулы (VI) или фармацевтически приемлемой соли вышеперечисленных соединений со вторым активным агентом может варьироваться и будет зависеть от терапевтически эффективной дозы каждого агента. Обычно будет применяться терапевтически эффективная доза каждого. Комбинации соединения, раскрытого в данном документе, и других активных агентов, как правило, также будут находиться в пределах вышеуказанного диапазона, но в каждом случае следует применять терапевтически эффективную дозу каждого активного агента. В таких комбинациях соединение, раскрытое здесь, и другие активные агенты могут быть введены отдельно или совместно. Кроме того, введение одного элемента может происходить до, одновременно или после введения другого агента (агентов).Mass ratio of a compound of general formula (I), a compound of general formula (II), a compound of general formula (III), a compound of general formula (IV), a compound of general formula (V), a compound of general formula (VI) or a pharmaceutically acceptable salt of the above compounds with the second active agent may vary and will depend on the therapeutically effective dose of each agent. Typically a therapeutically effective dose of each will be used. Combinations of a compound disclosed herein and other active agents will generally also be within the above range, but a therapeutically effective dose of each active agent should be used in each case. In such combinations, the compound disclosed herein and other active agents may be administered separately or together. In addition, the administration of one element may occur before, simultaneously with, or after the administration of the other agent(s).
В одном варианте осуществления это раскрытие относится к композиции, содержащей соединение общей формулы (I), соединение общей формулы (II), соединение общей формулы (III), соединение общей формулы (IV), соединение общей формулы (V), соединение общей формулы (VI) или фармацевтически приемлемую соль вышеперечисленных соединений, и, по меньшей мере, один другой активный агент, в виде комбинированного препарата для одновременного, раздельного или последовательного применения в терапии. В одном варианте осуществления терапия представляет собой лечение нарушения пролиферации клеток, такого как рак.In one embodiment, this disclosure relates to a composition containing a compound of general formula (I), a compound of general formula (II), a compound of general formula (III), a compound of general formula (IV), a compound of general formula (V), a compound of general formula ( VI) or a pharmaceutically acceptable salt of the above compounds, and at least one other active agent, in the form of a combination preparation for simultaneous, separate or sequential use in therapy. In one embodiment, the therapy is a treatment for a cell proliferation disorder such as cancer.
В одном варианте осуществления раскрытие обеспечивает набор, содержащий две или более отдельных фармацевтических композиций, по меньшей мере, одна из которых содержит соединение общей формулы (I), соединение общей формулы (II), соединение общей формулы (III), соединение общей формулы (IV), соединение общей формулы (V), соединение общей формулы (VI) или фармацевтически приемлемую соль вышеперечисленных соединений. В одном варианте осуществления набор содержит средства для раздельного хранения указанных композиций, такие как контейнер, разделенный флакон или разделенный пакет из фольги. Примером такого набора является блистерная упаковка, которая обычно применяется для упаковки таблеток, капсул и тому подобного.In one embodiment, the disclosure provides a kit containing two or more separate pharmaceutical compositions, at least one of which contains a compound of general formula (I), a compound of general formula (II), a compound of general formula (III), a compound of general formula (IV ), a compound of general formula (V), a compound of general formula (VI) or a pharmaceutically acceptable salt of the above compounds. In one embodiment, the kit contains means for separately storing said compositions, such as a container, a divided bottle, or a divided foil pouch. An example of such a set is a blister pack, which is usually used for packaging tablets, capsules and the like.
Набор по настоящему раскрытию может применяться для введения различных лекарственных форм, например, пероральных и парентеральных, для введения отдельных композиций с различными интервалами дозирования или для титрования отдельных композиций относительно друг друга. Чтобы облегчить соблюдение требований, набор по раскрытию обычно включает инструкции по введению.The kit of the present disclosure can be used to administer different dosage forms, for example, oral and parenteral, to administer individual compositions at different dosing intervals, or to titrate individual compositions against each other. To facilitate compliance, the disclosure kit typically includes instructions for administration.
В настоящем документе раскрыто применение соединения общей формулы (I), соединения общей формулы (II), соединения общей формулы (III), соединения общей формулы (IV), соединения общей формулы (V), соединения общей формулы (VI) или фармацевтически приемлемой соли вышеперечисленных соединений для лечения нарушения пролиферации клеток, где лекарственное средство готовят для введения с другим активным агентом. В раскрытии также предлагается применение другого активного агента для лечения нарушения пролиферации клеток, где лекарственное средство вводят с соединением общей формулы (I), соединением общей формулы (II), соединением общей формулы (III), соединением общей формулы (IV), соединением общей формулы (V), соединением общей формулы (VI) или фармацевтически приемлемой солью вышеперечисленных соединений. В раскрытии также предусмотрено применение соединения общей формулы (I), соединения общей формулы (II), соединения общей формулы (III), соединения общей формулы (IV), соединения общей формулы (V), соединения общей формулы (VI) или фармацевтически приемлемой соли вышеперечисленных соединений для лечения нарушения пролиферации клеток, где пациента ранее (например, в течение 24 часов) лечили другим активным агентом. В раскрытии также предлагается применение другого активного агента для лечения нарушения пролиферации клеток, где пациента ранее (например, в течение 24 ч) лечили соединением общей формулы (I), соединением общей формулы (II), соединением общей формулы (III), соединением общей формулы (IV), соединением общей формулы (V), соединением общей формулы (VI) или фармацевтически приемлемой солью вышеперечисленных соединений. Второй агент может быть введен через неделю, несколько недель, месяц или несколько месяцев после введения соединения, описанного в настоящем дкументе.Disclosed herein is the use of a compound of general formula (I), a compound of general formula (II), a compound of general formula (III), a compound of general formula (IV), a compound of general formula (V), a compound of general formula (VI) or a pharmaceutically acceptable salt the above compounds for the treatment of a cell proliferation disorder, wherein the drug is formulated for administration with another active agent. The disclosure also proposes the use of another active agent for the treatment of a cell proliferation disorder, wherein the drug is administered with a compound of general formula (I), a compound of general formula (II), a compound of general formula (III), a compound of general formula (IV), a compound of general formula (V), a compound of general formula (VI) or a pharmaceutically acceptable salt of the above compounds. The disclosure also provides for the use of a compound of general formula (I), a compound of general formula (II), a compound of general formula (III), a compound of general formula (IV), a compound of general formula (V), a compound of general formula (VI) or a pharmaceutically acceptable salt of the above compounds for the treatment of a cell proliferation disorder where the patient has previously (eg, within 24 hours) been treated with another active agent. The disclosure also provides the use of another active agent for the treatment of a cell proliferation disorder wherein the patient has previously (eg, within 24 hours) been treated with a compound of general formula (I), a compound of general formula (II), a compound of general formula (III), a compound of general formula (IV), a compound of general formula (V), a compound of general formula (VI) or a pharmaceutically acceptable salt of the above compounds. The second agent may be administered a week, several weeks, a month, or several months after administration of the compound described herein.
Соединения-агонисты STING, которые могут применяться в комбинации с соединениями общей формулы (I), соединениями общей формулы (II), соединениями общей формулы (III), соединениями общей формулы (IV), соединениями общей формулы (V), соединениями общей формулы (VI) или фармацевтически приемлемыми солями вышеперечисленных соединений, раскрытые в настоящем документе, включают, но не ограничиваются ими, циклические динуклеотидные соединения, такие как раскрытые, например, в публикациях Международных заявок на патент по РСТ №№WO2014093936, WO2014189805, WO2014189806, WO2015185565, WO2016120305, WO2016096174, WO2016096577, WO2017027645, WO2017027646, WO2017075477, WO2017093933 и WO2018009466.STING agonist compounds which can be used in combination with compounds of general formula (I), compounds of general formula (II), compounds of general formula (III), compounds of general formula (IV), compounds of general formula (V), compounds of general formula ( VI) or pharmaceutically acceptable salts of the above compounds disclosed herein include, but are not limited to, cyclic dinucleotide compounds such as those disclosed, for example, in International PCT Patent Application Publications Nos. , WO2016096174, WO2016096577, WO2017027645, WO2017027646, WO2017075477, WO2017093933 and WO2018009466.
Противовирусные соединения, которые могут применяться в комбинации с соединениями общей формулы (I), соединениями общей формулы (II), соединениями общей формулы (III), соединениями общей формулы (IV), соединениями общей формулы (V), соединениями общей формулы (VI) или фармацевтически приемлемыми солями вышеперечисленных соединений, раскрытых в настоящем документе, включают ингибиторы вируса гепатита В (HBV), ингибиторы протеазы вируса гепатита С (HCV), ингибиторы полимеразы HCV, ингибиторы NS4A HCV, ингибиторы NS5A HCV, ингибиторы NS5b HCV и ингибиторы вируса иммунодефицита человека (ВИЧ). Такие противовирусные соединения могут быть предоставлены в виде фармацевтически приемлемой соли, где это целесообразно.Antiviral compounds that can be used in combination with compounds of general formula (I), compounds of general formula (II), compounds of general formula (III), compounds of general formula (IV), compounds of general formula (V), compounds of general formula (VI) or pharmaceutically acceptable salts of the above compounds disclosed herein include hepatitis B virus (HBV) inhibitors, hepatitis C virus (HCV) protease inhibitors, HCV polymerase inhibitors, HCV NS4A inhibitors, HCV NS5A inhibitors, HCV NS5b inhibitors and human immunodeficiency virus inhibitors (HIV). Such antiviral compounds may be provided in the form of a pharmaceutically acceptable salt, where appropriate.
Антигены и адъюванты, которые могут применяться в комбинации с соединениями общей формулы (I), соединениями общей формулы (II), соединениями общей формулы (III), соединениями общей формулы (IV), соединениями общей формулы (V), соединениями общей формулы (VI) или фармацевтически приемлемыми солями вышеперечисленных соединений, включают ко стимулирующую молекулу В7, интерлейкин-2, интерферон-γ GM-CSF, антагонисты CTLA-4, лиганд ОХ-40/0Х-40, лиганд CD40/CD40, сарграмостим, левамизол, вирус осповакцины, бациллы Кальметта-Герена (BCG), липосомы, квасцы, полный или неполный адъювант Фрейнда, детоксифицированные эндотоксины, минеральные масла, поверхностно-активные вещества, такие как липолецитин, плюроновые полиолы, полианионы, пептиды и масляные или углеводородные эмульсии. Адъюванты, такие как гидроксид алюминия или фосфат алюминия, могут быть добавлены для увеличения способности вакцины вызывать, усиливать или продлевать иммунный ответ. Дополнительные соединения, такие как цитокины, хемокины и последовательности бактериальных нуклеиновых кислот, такие как CpG, агонист толл-подобного рецептора (TLR) 9, а также дополнительные агонисты для TLR 2, TLR 4, TLR 5, TLR 7, TLR 8, TLR 9, включая липопротеин, LPS, монофосфориллипид А, липотейхоевую кислоту, имиквимод, резиквимод и, кроме того, агонисты гена I, индуцируемого ретиноевой кислотой (RIG-I), такие как поли 1:С, применяемые отдельно или в комбинации с описанными композициями, также являются потенциальными адъюванты. Такие антигены и адъюванты могут быть предоставлены в виде фармацевтически приемлемой соли, где это целесообразно.Antigens and adjuvants that can be used in combination with compounds of general formula (I), compounds of general formula (II), compounds of general formula (III), compounds of general formula (IV), compounds of general formula (V), compounds of general formula (VI ) or pharmaceutically acceptable salts of the above compounds include co-stimulatory molecule B7, interleukin-2, interferon-γ GM-CSF, CTLA-4 antagonists, OX-40/0X-40 ligand, CD40/CD40 ligand, sargramostim, levamisole, vaccinia virus , Bacillus Calmette-Guerin (BCG), liposomes, alum, complete or incomplete Freund's adjuvant, detoxified endotoxins, mineral oils, surfactants such as lipolecithin, pluronic polyols, polyanions, peptides and oil or hydrocarbon emulsions. Adjuvants such as aluminum hydroxide or aluminum phosphate may be added to increase the vaccine's ability to elicit, enhance, or prolong an immune response. Additional compounds such as cytokines, chemokines and bacterial nucleic acid sequences such as CpG, toll-like receptor (TLR) 9 agonist, as well as additional agonists for TLR 2, TLR 4, TLR 5, TLR 7, TLR 8, TLR 9 including lipoprotein, LPS, monophosphoryl lipid A, lipoteichoic acid, imiquimod, resiquimod and, in addition, retinoic acid-inducible gene I (RIG-I) agonists such as poly 1:C, used alone or in combination with the described compositions, also are potential adjuvants. Such antigens and adjuvants may be provided in the form of a pharmaceutically acceptable salt, where appropriate.
Пути CLTA-4 и PD-1 являются важными негативными регуляторами иммунного ответа. Активированные Т-клетки активируют CTLA-4, который связывается с антиген-презентирующими клетками и ингибирует стимуляцию Т-клеток, экспрессию гена IL-2 и пролиферацию Т-клеток; эти противоопухолевые эффекты наблюдались на мышиных моделях карциномы толстой кишки, метастатического рака простаты и метастатической меланомы. PD-1 связывается с активными Т-клетками и подавляет активацию Т-клеток. Антагонисты PD-1 также продемонстрировали противоопухолевые эффекты. Антагонисты пути CTLA-4 и PD-1, которые могут применяться в комбинации с соединениями общей формулы (I), соединениями общей формулы (II), соединениями общей формулы (III), соединениями общей формулы (IV), соединениями общей формулы (V), соединениями общей формулы (VI) или фармацевтически приемлемыми солями вышеперечисленных соединений, раскрытые в настоящем документе, включают ипилимумаб, тремелимумаб, ниволумаб, пембролизумаб, СТ-011, АМР-224 и MDX-1106.The CLTA-4 and PD-1 pathways are important negative regulators of the immune response. Activated T cells activate CTLA-4, which binds to antigen-presenting cells and inhibits T cell stimulation, IL-2 gene expression, and T cell proliferation; these antitumor effects were observed in mouse models of colon carcinoma, metastatic prostate cancer, and metastatic melanoma. PD-1 binds to active T cells and suppresses T cell activation. PD-1 antagonists have also demonstrated antitumor effects. CTLA-4 and PD-1 pathway antagonists, which can be used in combination with compounds of general formula (I), compounds of general formula (II), compounds of general formula (III), compounds of general formula (IV), compounds of general formula (V) , compounds of general formula (VI) or pharmaceutically acceptable salts of the above compounds disclosed herein include ipilimumab, tremelimumab, nivolumab, pembrolizumab, CT-011, AMP-224 and MDX-1106.
«Антагонист PD-1» или «антагонист пути PD-1» означает любое химическое соединение или биологическую молекулу, которое блокирует связывание PD-L1, экспрессируемого на раковой клетке, с PD-1, экспрессируемым на иммунной клетке (Т-клетке, В-клетке или NKT-клетке) и предпочтительно также блокирует связывание PD-L2, экспрессируемого на раковой клетке, с иммунной клеткой, экспрессирующей PD-1. Альтернативные названия или синонимы PD-1 и его лигандов включают: PDCD1, PD1, CD279 и SLEB2 для PD-1; PDCD1L1, PDL1, В7Н1, В7-4, CD274 и В7-Н для PD-L1; и PDCD1L2, PDL2, B7-DC, Btdc и CD273 для PD-L2. В любом из способов лечения, лекарственных средств и применений по настоящему раскрытию, в которых лечат пациента-человека, антагонист PD-1 блокирует связывание человеческого PD-L1 с человеческим PD-1 и предпочтительно блокирует связывание и человеческих PD- L1, и PD-L2 к человеческому PD-1. Аминокислотные последовательности PD-1 человека можно найти в NCBI Locus No. NP_005009. Аминокислотные последовательности PD-L1 и PD-L2 человека можно найти в NCBI Locus No. NP_054862 и NP_079515, соответственно.“PD-1 antagonist” or “PD-1 pathway antagonist” means any chemical compound or biological molecule that blocks the binding of PD-L1 expressed on a cancer cell to PD-1 expressed on an immune cell (T cell, B cell). cell or NKT cell) and preferably also blocks the binding of PD-L2 expressed on the cancer cell to the immune cell expressing PD-1. Alternative names or synonyms for PD-1 and its ligands include: PDCD1, PD1, CD279, and SLEB2 for PD-1; PDCD1L1, PDL1, B7H1, B7-4, CD274 and B7-H for PD-L1; and PDCD1L2, PDL2, B7-DC, Btdc and CD273 for PD-L2. In any of the treatments, medicinal products and uses of the present disclosure in which a human patient is treated, the PD-1 antagonist blocks the binding of human PD-L1 to human PD-1 and preferably blocks the binding of both human PD-L1 and PD-L2 to human PD-1. The amino acid sequences of human PD-1 can be found in NCBI Locus No. NP_005009. The amino acid sequences of human PD-L1 and PD-L2 can be found in NCBI Locus No. NP_054862 and NP_079515, respectively.
Антагонисты PD-1, применимые в любом способе лечения, лекарственных средствах и применениях по настоящему раскрытию, включают моноклональное антитело (mAb) или его антигенсвязывающий фрагмент, которое специфически связывается с PD-1 или PD-L1, и предпочтительно специфически связывается с человеческим PD-1 или человеческим PD-L1. mAb может быть человеческим антителом, гуманизированным антителом или химерным антителом и может включать человеческую константную область. В некоторых вариантах осуществления человеческая константная область выбрана из группы, состоящей из константных областей IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4, и в предпочтительных вариантах осуществления человеческая константная область представляет собой константную область IgG1 или IgG4. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент выбран из группы, состоящей из фрагментов Fab, Fab'-SH, F(ab')2, scFv и Fv.PD-1 antagonists useful in any of the treatments, medicinal products and applications of the present disclosure include a monoclonal antibody (mAb) or antigen-binding fragment thereof that specifically binds to PD-1 or PD-L1, and preferably specifically binds to human PD-1. 1 or human PD-L1. The mAb may be a human antibody, a humanized antibody, or a chimeric antibody and may include a human constant region. In some embodiments, the human constant region is selected from the group consisting of IgG1, IgG2, IgG3, and IgG4 constant regions, and in preferred embodiments, the human constant region is an IgG1 or IgG4 constant region. In some embodiments, the antigen binding fragment is selected from the group consisting of Fab, Fab'-SH, F(ab') 2 , scFv and Fv fragments.
Примеры mAb, которые связываются с человеческим PD-1, и применяемых в способе лечения, лекарственных средствах и применениях по настоящему раскрытию, описаны в патентах США №№US7488802, US7521051, US8008449, US8354509 и US8168757, публикациях международных патентных заявок по РСТ WO 2004/004771, WO 2004/072286 и WO 2004/056875 и публикации заявки на патент США №US2011/0271358.Examples of mAbs that bind to human PD-1 and are used in the treatment method, medicinal products and applications of the present disclosure are described in US Patent Nos. US7488802, US7521051, US8008449, US8354509 and US8168757, PCT International Patent Application Publication WO 2004/ 004771, WO 2004/072286 and WO 2004/056875 and US Patent Application Publication No. US2011/0271358.
Примеры mAb, которые связываются с человеческим PD-L1, и применяемых в способе лечения, лекарственных средствах и применениях по настоящему раскрытию, описаны в международных патентных заявках по РСТ №№WO2013/019906 и WO2010/077634 А1 и в патенте США №US8383796. Специфические моноклональные антитела против PD-L1 человека, применяемые в качестве антагониста PD-1 в способе лечения, лекарственных средствах и применениях, описанных в настоящем изобретении, включают MPDL3280A, BMS-936559, MEDI4736, MSB0010718C и антитело, которое содержит вариабельные области тяжелой цепи и легкой цепи SEQ ID NO:24 и SEQ ID NO:21, соответственно, из WO2013/019906.Examples of mAbs that bind to human PD-L1 and are used in the treatment, medicinal products and applications of the present disclosure are described in PCT International Patent Applications Nos. WO2013/019906 and WO2010/077634 A1 and US Patent No. US8383796. Specific anti-human PD-L1 monoclonal antibodies useful as a PD-1 antagonist in the method of treatment, medicinal products and applications described in the present invention include MPDL3280A, BMS-936559, MEDI4736, MSB0010718C and an antibody that contains heavy chain variable regions and light chain SEQ ID NO:24 and SEQ ID NO:21, respectively, from WO2013/019906.
Другие антагонисты PD-1, применимые в любом способе лечения, лекарственных средствах и применениях по настоящему раскрытию, включают иммунную адгезию, которая специфически связывает с PD-1 или PD-L1, и предпочтительно специфически связывает с PD-1 или PD-L1 человека, например, слитый белок, содержащий внеклеточную или связывающую PD-1 часть PD-L1 или PD-L2, слитую с константной областью, такой как область Fc молекулы иммуноглобулина. Примеры молекул иммунной адгезии, которые специфически связываются с PD-1, описаны в публикациях международных патентных заявок по РСТ WO2010/027827 и WO2011/066342. Специфические слитые белки, применяемые в качестве антагониста PD-1 в способе лечения, лекарственных средствах и применениях по настоящему раскрытию, включают АМР-224 (также известный как В7-DCIg), который представляет собой слитый белок PD-L2-FC и связывается с PD-1 человека. Раскрытие дополнительно относится к способу лечения рака у пациента-человека, включающему введение пациенту соединения, раскрытого в данном документе (то есть, соединения общей формулы (I), соединения общей формулы (II), соединения общей формулы (III), соединения общей формулы (IV), соединения общей формулы (V), соединения общей формулы (VI) или фармацевтически приемлемой соли вышеперечисленных соединений) и антагониста PD-1. Соединение по изобретению и антагонист PD-1 могут быть введены одновременно или последовательно.Other PD-1 antagonists useful in any of the treatments, formulations and applications of the present disclosure include immune adhesion that specifically binds to PD-1 or PD-L1, and preferably specifically binds to human PD-1 or PD-L1, for example, a fusion protein comprising an extracellular or PD-1 binding portion of PD-L1 or PD-L2 fused to a constant region, such as the Fc region of an immunoglobulin molecule. Examples of immune adhesion molecules that specifically bind to PD-1 are described in international PCT patent application publications WO2010/027827 and WO2011/066342. Specific fusion proteins useful as a PD-1 antagonist in the treatment method, medicaments and applications of the present disclosure include AMP-224 (also known as B7-DCIg), which is a PD-L2-FC fusion protein and binds to PD -1 person. The disclosure further relates to a method of treating cancer in a human patient, comprising administering to the patient a compound disclosed herein (i.e., a compound of general formula (I), a compound of general formula (II), a compound of general formula (III), a compound of general formula ( IV), a compound of general formula (V), a compound of general formula (VI) or a pharmaceutically acceptable salt of the above compounds) and a PD-1 antagonist. The compound of the invention and the PD-1 antagonist can be administered simultaneously or sequentially.
В конкретных вариантах осуществления антагонист PD-1 представляет собой антитело против PD-1 или его антигенсвязывающий фрагмент. В альтернативных вариантах осуществления антагонист PD-1 представляет собой антитело против PD-L1 или его антигенсвязывающий фрагмент.В некоторых вариантах осуществления антагонист PD-1 представляет собой пембролизумаб (KEYTRUDA™, Merck & Co., Inc., Kenilworth, NJ, USA), ниволумаб (OPDIVO™, Bristol-Myers Squibb Company, Princeton, NJ, USA), цемиплимаб (LIBTAYO™, Regeneron Pharmaceuticals, Inc., Tarrytown, NY, USA), атезолизумаб (TECENTRIQ™, Genentech, San Francisco, CA, USA), дурвалумаб (IMFINZI™, AstraZeneca Pharmaceuticals LP, Wilmington, DE) или авелумаб (BAVENCIO™, Merck KGaA, Darmstadt, Germany).In specific embodiments, the PD-1 antagonist is an anti-PD-1 antibody or an antigen-binding fragment thereof. In alternative embodiments, the PD-1 antagonist is an anti-PD-L1 antibody or an antigen-binding fragment thereof. In some embodiments, the PD-1 antagonist is pembrolizumab (KEYTRUDA™, Merck & Co., Inc., Kenilworth, NJ, USA), nivolumab (OPDIVO™, Bristol-Myers Squibb Company, Princeton, NJ, USA), cemiplimab (LIBTAYO™, Regeneron Pharmaceuticals, Inc., Tarrytown, NY, USA), atezolizumab (TECENTRIQ™, Genentech, San Francisco, CA, USA) , durvalumab (IMFINZI™, AstraZeneca Pharmaceuticals LP, Wilmington, DE) or avelumab (BAVENCIO™, Merck KGaA, Darmstadt, Germany).
В некоторых вариантах осуществления антагонист PD-1 представляет собой пембролизумаб. В конкретных подвариантах осуществления способ включает введение пациенту 200 мг пембролизумаба примерно каждые три недели. В других подвариантах осуществления способ включает введение пациенту 400 мг пембролизумаба примерно каждые шесть недель.In some embodiments, the PD-1 antagonist is pembrolizumab. In specific sub-embodiments, the method comprises administering 200 mg of pembrolizumab to a patient approximately every three weeks. In other sub-embodiments, the method includes administering 400 mg of pembrolizumab to a patient approximately every six weeks.
В дополнительных подвариантах осуществления способ включает введение пациенту 2 мг/кг пембролизумаба примерно каждые три недели. В конкретных подвариантах осуществления пациент является педиатрическим пациентом.In additional sub-embodiments, the method includes administering 2 mg/kg of pembrolizumab to the patient approximately every three weeks. In specific sub-embodiments, the patient is a pediatric patient.
В некоторых вариантах осуществления антагонист PD-1 представляет собой ниволумаб. В конкретных подвариантах осуществления способ включает введение пациенту 240 мг ниволумаба примерно каждые две недели. В других подвариантах осуществления способ включает введение пациенту 480 мг ниволумаба примерно каждые четыре недели. В некоторых вариантах осуществления антагонист PD-1 представляет собой цемиплимаб. В конкретных вариантах осуществления способ включает введение пациенту 350 мг цемиплимаба примерно каждые 3 недели.In some embodiments, the PD-1 antagonist is nivolumab. In specific sub-embodiments, the method comprises administering 240 mg of nivolumab to a patient approximately every two weeks. In other sub-embodiments, the method includes administering 480 mg of nivolumab to a patient approximately every four weeks. In some embodiments, the PD-1 antagonist is cemiplimab. In specific embodiments, the method includes administering 350 mg of cemiplimab to a patient approximately every 3 weeks.
В некоторых вариантах осуществления антагонист PD-1 представляет собой атезолизумаб. В конкретных подвариантах осуществления способ включает введение пациенту 1200 мг атезолизумаба примерно каждые три недели.In some embodiments, the PD-1 antagonist is atezolizumab. In specific sub-embodiments, the method comprises administering 1200 mg of atezolizumab to a patient approximately every three weeks.
В некоторых вариантах осуществления антагонист PD-1 представляет собой дурвалумаб. В конкретных подвариантах осуществления способ включает введение пациенту 10 мг/кг дурвалумаба примерно каждые две недели.In some embodiments, the PD-1 antagonist is durvalumab. In specific sub-embodiments, the method includes administering 10 mg/kg of durvalumab to a patient approximately every two weeks.
В некоторых вариантах осуществления антагонист PD-1 представляет собой авелумаб. В конкретных подвариантах осуществления способ включает введение пациенту 800 мг авелумаба примерно каждые две недели.In some embodiments, the PD-1 antagonist is avelumab. In specific sub-embodiments, the method includes administering 800 mg of avelumab to a patient approximately every two weeks.
Примеры цитотоксических агентов, которые могут применяться в комбинации с соединениями общей формулы (I), соединениями общей формулы (II), соединениями общей формулы (III), соединениями общей формулы (IV), соединениями общей формулы (V), соединениями общей формулы (VI) или фармацевтически приемлемыми солями вышеперечисленных соединений, включают, но не ограничиваются ими, триоксид мышьяка (продается под торговым названием TRISENOX®), аспарагиназу (также известную как L-аспарагиназа и L-аспарагиназа Erwinia, продаваемая под торговыми названиями ELSPAR® и KIDROLASE®).Examples of cytotoxic agents that can be used in combination with compounds of general formula (I), compounds of general formula (II), compounds of general formula (III), compounds of general formula (IV), compounds of general formula (V), compounds of general formula (VI ) or pharmaceutically acceptable salts of the above compounds include, but are not limited to, arsenic trioxide (sold under the trade name TRISENOX® ), asparaginase (also known as L-asparaginase and Erwinia L-asparaginase, sold under the trade names ELSPAR® and KIDROLASE® ) .
Химиотерапевтические агенты, которые могут применяться в комбинации с соединениями общей формулы (I), соединениями общей формулы (II), соединениями общей формулы (III), соединениями общей формулы (IV), соединениями общей формулы (V), соединениями общей формулы (VI) или фармацевтически приемлемыми солями вышеперечисленных соединений, раскрытыми в настоящем документе, включают абиратерона ацетат, алтретамин, ангидровинбластин, ауристатин, бексаротен, бикалутамид, BMS 184476, 2,3,4,5,6-пентафтор-N-(3-фтор-4-метоксифенил) бензолсульфонамид, блеомицин, N,N-диметил-L-валил-L-валил-N-метил-L-валил-L-пролил-1-L-пролин-трет-бутиламид, кахектин, цемадотин, хлорамбуцил, циклофосфамид, 3',4'-дидегидро-4'-дезокси-8'-норвинкалейкобластин, доцетаксел, доксетаксел, циклофосфамид, карбоплатин, кармустин, цисплатин, криптофицин, цитарабин, дакарбазин (DTIC), дактиномицин, даунорубицин, децитабин, доластатин, доксорубицин (адриамицин), этопозид, 5-фторурацил, финастерид, флутамид, гидроксимочевину и таксаны, ифосфамид, лиарозол, лонидамин, ломустин (CCNU), MDV3100, мехлорэтамин (мустарген), мелфалан, мивобулин изетионат, ризоксин, сертенеф, стрептозоцин, митомицин, метотрексат, таксаны, нилутамид, ниволумаб, онапристон, паклитаксел, пембролизумаб, преднимустин, прокарбазин, RPR109881, эстрамустина фосфат, тамоксифен, тазонермин, таксол, третиноин, винбластин, винкристин, виндезина сульфат и винфлунин. Такие химиотерапевтические агенты могут быть предоставлены в виде фармацевтически приемлемой соли, где это целесообразно.Chemotherapeutic agents which can be used in combination with compounds of general formula (I), compounds of general formula (II), compounds of general formula (III), compounds of general formula (IV), compounds of general formula (V), compounds of general formula (VI) or pharmaceutically acceptable salts of the above compounds disclosed herein include abiraterone acetate, altretamine, anhydrovine blastine, auristatin, bexarotene, bicalutamide, BMS 184476, 2,3,4,5,6-pentafluoro-N-(3-fluoro-4- methoxyphenyl) benzenesulfonamide, bleomycin, N,N-dimethyl-L-valyl-L-valyl-N-methyl-L-valyl-L-prolyl-1-L-proline-tert-butylamide, cachectin, cemadotin, chlorambucil, cyclophosphamide, 3',4'-didehydro-4'-deoxy-8'-norvincaleucoblastine, docetaxel, doxetaxel, cyclophosphamide, carboplatin, carmustine, cisplatin, cryptophycin, cytarabine, dacarbazine (DTIC), dactinomycin, daunorubicin, decitabine, dolastatin, doxorubicin (Adriamycin ), etoposide, 5-fluorouracil, finasteride, flutamide, hydroxyurea and taxanes, ifosfamide, liarozole, lonidamine, lomustine (CCNU), MDV3100, mechlorethamine (mustargen), melphalan, mivobulin isethionate, rhizoxin, sertenef, streptozocin, mitomycin, methotrexate, so dignities , nilutamide, nivolumab, onapristone, paclitaxel, pembrolizumab, prednimustine, procarbazine, RPR109881, estramustine phosphate, tamoxifen, tazonermine, taxol, tretinoin, vinblastine, vincristine, vindesine sulfate and vinflunine. Such chemotherapeutic agents may be provided in the form of a pharmaceutically acceptable salt, where appropriate.
Примеры ингибиторов рецепторов фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) включают, но не ограничиваются ими, бевацизумаб (продается под торговым названием AVASTIN), акситиниб (описан в международной патентной публикации согласно РСТ №WO01/002369), бриваниб аланинат ((S)-((R)-1-(4-(4-фтор-2-метил-1Н-индол-5-илокси)-5-метилпирро[2,1-f][1,2,4]триазин-6-илокси)пропан-2-ил)2-аминопропаноат, также известный как BMS-582664), мотесаниб (N-(2,3-дигидро-3,3-диметил-1Н-индол-6-ил)-2-[(4-пиридинилметил)амино]-3-пиридинкарбоксамид, описанный в публикации международной патентной заявки согласно РСТ №WO02/068470), пасиреотид (также известный как SO 230, и описанный в публикации международного патента согласно РСТ №WO02/010192) и сорафениб (продается под торговым названием NEXAVAR). Такие ингибиторы могут быть предоставлены в виде фармацевтически приемлемой соли, где это целесообразно.Examples of vascular endothelial growth factor (VEGF) receptor inhibitors include, but are not limited to, bevacizumab (sold under the trade name AVASTIN), axitinib (described in PCT International Patent Publication No. WO01/002369), brivanib alaninate ((S)-(( R)-1-(4-(4-fluoro-2-methyl-1H-indol-5-yloxy)-5-methylpyrro[2,1-f][1,2,4]triazin-6-yloxy)propane -2-yl)2-aminopropanoate, also known as BMS-582664), motesanib (N-(2,3-dihydro-3,3-dimethyl-1H-indol-6-yl)-2-[(4-pyridinylmethyl )amino]-3-pyridinecarboxamide, described in PCT International Patent Application Publication No. WO02/068470), pasireotide (also known as SO 230, and described in PCT International Patent Application Publication No. WO02/010192) and sorafenib (sold under the trade name NEXAVAR). Such inhibitors may be provided in the form of a pharmaceutically acceptable salt, where appropriate.
Примеры ингибиторов топоизомеразы II включают, но не ограничиваются ими, этопозид (также известный как VP-16 и этопозид фосфат, продаваемый под торговыми названиями TOPOSAR, VEPESID и ETOPOPHOS) и тенипозид (также известный как VM-26, продаваемый под торговыми названиями VUMON). Такие ингибиторы могут быть предоставлены в виде фармацевтически приемлемой соли, где это целесообразно.Examples of topoisomerase II inhibitors include, but are not limited to, etoposide (also known as VP-16 and etoposide phosphate, sold under the trade names TOPOSAR, VEPESID and ETOPOPHOS) and teniposide (also known as VM-26, sold under the trade names VUMON). Such inhibitors may be provided in the form of a pharmaceutically acceptable salt, where appropriate.
Примеры алкилирующих агентов включают, но не ограничиваются ими, 5-азацитидин (продается под торговым названием VIDAZA), децитабин (продается под торговым названием DECOGEN), темозоломид (продается под торговыми названиями TEMCAD, TEMODAR и TEMODAL), дактиномицин (также известный как актиномицин-D и продаваемый под торговым названием COSMEGEN), мелфалан (также известный как L-РАМ, L-сарколизин и фенилаланиновая горчица, продаваемый под торговым названием ALKERAN), алтретамин (также известный как гексаметилмеламин (НММ), продается под торговым названием TEKCALEN®), кармустин (продается под торговым названием BCNU), бендамустин (продается под торговой маркой TREANDA), бусульфан (продается под торговыми названиями BUSULFEX® и MYLERAN®), карбоплатин (продается под торговым названием PARAPLATIN®), ломустин (также известный как CCNU, продается под торговым названием CeeNU®), цисплатин (также известный как CDDP, продается под торговыми названиями PLATINOL® и PLATINOL®-AQ), хлорамбуцил (продается под торговым названием LEUKERAN®), циклофосфамид (продается под торговыми названиями CYTOKCAN® и NEOSAR®), дакарбазин (также известный как DTIC, DIC и имидазолкарбоксамид, продается под торговым названием DTIC-Dome®), ифосфамид (продается под торговым названием IFEX®), прокарбазин (продается под торговым названием MATULANE®), мехлорэтамин (также известный как мустарген, мустин и гидрохлорид мехлорэтамина, продается под торговым названием MUSTARGEN®), стрептозоцин (продается под торговым названием ZANOSAR®), тиотепа (также известный как тиофосфоамид, TESPA и TSPA, и продается под торговым названием THIOPLEX®. Такие алкилирующие агенты могут быть предоставлены в виде фармацевтически приемлемой соли, где это целесообразно.Examples of alkylating agents include, but are not limited to, 5-azacytidine (sold under the trade name VIDAZA), decitabine (sold under the trade name DECOGEN), temozolomide (sold under the trade names TEMCAD, TEMODAR and TEMODAL), dactinomycin (also known as actinomycin- D and sold under the trade name COSMEGEN), melphalan (also known as L-PAM, L-sarcolysine and phenylalanine mustard, sold under the trade name ALKERAN), altretamine (also known as hexamethylmelamine (HMM), sold under the trade name TEKCALEN®), carmustine (sold under the trade name BCNU), bendamustine (sold under the trade name TREANDA), busulfan (sold under the trade names BUSULFEX® and MYLERAN®), carboplatin (sold under the trade name PARAPLATIN®), lomustine (also known as CCNU, sold under trade name CeeNU®), cisplatin (also known as CDDP, sold under the trade names PLATINOL® and PLATINOL®-AQ), chlorambucil (sold under the trade name LEUKERAN®), cyclophosphamide (sold under the trade names CYTOKCAN® and NEOSAR®), dacarbazine (also known as DTIC, DIC and imidazolecarboxamide, sold under the trade name DTIC-Dome®), ifosfamide (sold under the trade name IFEX®), procarbazine (sold under the trade name MATULANE®), mechlorethamine (also known as mustargen, mustine and hydrochloride mechlorethamine, sold under the trade name MUSTARGEN®), streptozocin (sold under the trade name ZANOSAR®), thiotepa (also known as thiophosphoamide, TESPA and TSPA, and sold under the trade name THIOPLEX®. Such alkylating agents may be provided in the form of a pharmaceutically acceptable salt, where appropriate.
Примеры противоопухолевых антибиотиков включают, но не ограничиваются ими, доксорубицин (продается под торговыми названиями ADRIAMYCIN® и RUBEX®), блеомицин (продается под торговым названием LENOKCANE®), даунорубицин (также известный как гидрохлорид даунорубицина, дауномицин и гидрохлорид рубидомицина, продается под торговым названием CERUBIDLNE®), липосомальный даунорубицин (липосома даунорубицина цитрата, продается под торговым названием DAUNOXOME®), митоксантрон (также известный как DHAD, продается под торговым названием NOVANTRONE®), эпирубицин (продается под торговым названием ELLENCE™), идарубицин (продается под торговыми названиями IDAMYCIN®, IDAMYCIN PFS®) и митомицин С (продается под торговым названием MUTAMYCIN®). Такие противоопухолевые антибиотики могут быть предоставлены в виде фармацевтически приемлемой соли, где это целесообразно.Examples of antitumor antibiotics include, but are not limited to, doxorubicin (sold under the trade names ADRIAMYCIN® and RUBEX®), bleomycin (sold under the trade name LENOKCANE®), daunorubicin (also known as daunorubicin hydrochloride, daunomycin and rubidomycin hydrochloride, sold under the trade name CERUBIDLNE®), liposomal daunorubicin (daunorubicin citrate liposome, sold under the trade name DAUNOXOME®), mitoxantrone (also known as DHAD, sold under the trade name NOVANTRONE®), epirubicin (sold under the trade name ELLENCE™), idarubicin (sold under the trade name IDAMYCIN®, IDAMYCIN PFS®) and mitomycin C (sold under the trade name MUTAMYCIN®). Such antitumor antibiotics may be provided in the form of a pharmaceutically acceptable salt, where appropriate.
Примеры антиметаболитов включают, но не ограничиваются ими, кларибин (2-хлордезоксиаденозин, продаваемый под торговым названием LEUSTATIN®), 5-фторурацил (продаваемый под торговым названием ADRUCIL®), 6-тиогуанин (продаваемый под торговым названием PURINETHOL®), пеметрексед (продается под торговым названием ALIMTA®), цитарабин (также известный как арабинозилцитозин (Ага-С), продаваемый под торговым названием CYTOSAR-U®), липосомальный цитарабин (также известный как липосомальный Ага-С, продаваемый под торговым названием DEPOCYT™), децитабин (продается под торговым названием DACOGEN®), гидроксимочевина (продается под торговыми названиями HYDREA®, DROXIA™ и MYLOCEL™), флударабин (продается под торговым названием FLUDARA®), флоксуридин (продается под торговым названием FUDR®), кладрибин (также известный как 2-хлордезоксиаденозин (2-CdA), продается под торговым названием LEUSTATIN™), метотрексат (также известный как аметоптерин, метотрексат натрия (МТХ), продается под торговыми названиями RHEUMATREX® и TREXALL™) и пентостатин (продается под торговым названием NIPENT®). Такие антиметаболиты могут быть предоставлены в виде фармацевтически приемлемой соли, где это целесообразно.Examples of antimetabolites include, but are not limited to, claribine (2-chlorodeoxyadenosine, sold under the trade name LEUSTATIN®), 5-fluorouracil (sold under the trade name ADRUCIL®), 6-thioguanine (sold under the trade name PURINETHOL®), pemetrexed (sold under the trade name PURINETHOL®), pemetrexed (sold under the trade name PURINETHOL®), under the trade name ALIMTA®), cytarabine (also known as arabinosylcytosine (Aga-C), sold under the trade name CYTOSAR-U®), liposomal cytarabine (also known as liposomal Aga-C, sold under the trade name DEPOCYT™), decitabine ( sold under the trade name DACOGEN®), hydroxyurea (sold under the trade names HYDREA®, DROXIA™ and MYLOCEL™), fludarabine (sold under the trade name FLUDARA®), floxuridine (sold under the trade name FUDR®), cladribine (also known as 2 -chlorodeoxyadenosine (2-CdA), sold under the trade name LEUSTATIN™), methotrexate (also known as amethopterin, methotrexate sodium (MTX), sold under the trade names RHEUMATREX® and TREXALL™), and pentostatin (sold under the trade name NIPENT®). Such antimetabolites may be provided in the form of a pharmaceutically acceptable salt, where appropriate.
Примеры ретиноидов включают, но не ограничиваются ими, алитретиноин (продается под торговым названием PANRETIN®), третиноин (полностью транс-ретиноевая кислота, также известная как ATRA, продаваемая под торговым названием VESANOID®), изотретиноин (13-с/8-ретиноевая кислота, продаваемая под торговыми названиями ACCUTANE®, AMNESTEEM®, CLARAVIS®, CLARUS®, DECUTAN®, IZOTAH®, IZOTECH®, ORATANE®, IZOTRET® и SOTRET®) и бексаротен (продается под торговым названием TARGRETIN®). Такие соединения могут быть предоставлены в виде фармацевтически приемлемой соли, где это целесообразно.Examples of retinoids include, but are not limited to, alitretinoin (sold under the trade name PANRETIN®), tretinoin (all-trans retinoic acid, also known as ATRA, sold under the trade name VESANOID®), isotretinoin (13-c/8-retinoic acid , sold under the trade names ACCUTANE®, AMNESTEEM®, CLARAVIS®, CLARUS®, DECUTAN®, IZOTAH®, IZOTECH®, ORATANE®, IZOTRET® and SOTRET®) and bexarotene (sold under the trade name TARGRETIN®). Such compounds may be provided in the form of a pharmaceutically acceptable salt, where appropriate.
Активность: биохимический конкурентный анализ STING [3H]cGAMPActivity: biochemical competition assay STING [3H]cGAMP
Отдельные соединения, описанные в приведенных здесь Примерах, определены как агонисты STING путем (i) связывания с белком STING, о чем свидетельствует снижение связывания меченного тритием лиганда cGAMP с белком STING, по меньшей мере, на 20% при 20 мкМ (концентрация тестируемого соединения) в STING биохимическом конкурентном анализе [3H]cGAMP и/или (ii) демонстрации продукции интерферона с 6% или большей индукцией секреции IFN-β при 30 мкМ в клеточном анализе ТНР1 (где индукция, вызванная cGAMP при 30 мкМ, была установлена как 100%).The individual compounds described in the Examples herein are determined to be STING agonists by (i) binding to the STING protein, as evidenced by a reduction in the binding of tritium-labeled cGAMP ligand to the STING protein by at least 20% at 20 μM (test compound concentration) in the STING biochemical [ 3 H]cGAMP competition assay and/or (ii) demonstration of interferon production with 6% or greater induction of IFN-β secretion at 30 μM in the THP1 cell assay (where the induction caused by cGAMP at 30 μM was set to 100 %).
Способность соединений связывать STING количественно оценивалась по способности конкурировать с меченным тритием лигандом cGAMP за мембрану рецептора STING человека с применением радиоактивного анализа вещества по степени его связывания с мембранным фильтром. В анализе связывания используют рецептор STING, полученный из клеточных мембран Hi-Five, сверхэкспрессирующий полноразмерный STING HAQ, полученный в лаборатории, и меченный тритием лиганд cGAMP, также очищенный в лаборатории.The ability of compounds to bind STING was quantified by the ability to compete with tritium-labeled cGAMP ligand for the human STING receptor membrane using a radioactive assay for the extent of its binding to the membrane filter. The binding assay uses the STING receptor, derived from Hi-Five cell membranes, overexpressing full-length STING HAQ, produced in the laboratory, and a tritium-labeled cGAMP ligand, also purified in the laboratory.
В нижеследующей экспериментальной части подробно описано получение конкретных примеров по настоящему раскрытию. Соединения примеров представлены в их нейтральных формах в способах и таблицах ниже. В некоторых случаях соединения выделяли в виде солей в зависимости от способа, применяемого для их окончательной очистки, и/или собственных молекулярных свойств. Примеры приведены только для иллюстративных целей и никоим образом не предназначены для ограничения объема настоящего раскрытия.The following experimental portion describes in detail the preparation of specific examples of the present disclosure. Example compounds are presented in their neutral forms in the methods and tables below. In some cases, compounds were isolated as salts depending on the method used for their final purification and/or their own molecular properties. The examples are provided for illustrative purposes only and are in no way intended to limit the scope of this disclosure.
ПРИМЕРЫEXAMPLES
Получение 1: 3-(трет-бутокси)-3-оксопропаноат магнияPreparation 1: Magnesium 3-(tert-butoxy)-3-oxopropanoate
Этанолат магния (3.57 г, 31.2 ммоль) добавляли к смеси 3-(трет-бутокси)-3-оксопропановой кислоты (10.0 г, 62.4 ммоль) в THF (100 мл) при 20°С. Реакционную смесь перемешивали при 20°С в течение 18 ч в атмосфере Ar. Реакционную смесь затем концентрировали под пониженным давлением. Остаток высушивали под пониженным давлением с получением 3-(трет-бутокси)-3-оксопропаноата магния. 1Н ЯМР (499 МГц, DMSO-d6) δ 2.96 (s, 4Н), 1.39 (s, 18Н).Magnesium ethanolate (3.57 g, 31.2 mmol) was added to a mixture of 3-(tert-butoxy)-3-oxopropanoic acid (10.0 g, 62.4 mmol) in THF (100 ml) at 20°C. The reaction mixture was stirred at 20°C for 18 hours in an Ar atmosphere. The reaction mixture was then concentrated under reduced pressure. The residue was dried under reduced pressure to obtain magnesium 3-(tert-butoxy)-3-oxopropanoate. 1 H NMR (499 MHz, DMSO-d 6 ) δ 2.96 (s, 4H), 1.39 (s, 18H).
Получение 2: трет-Бутил 3-(2,3-диметокситиено[2,3-b]пиразин-6-ил)-3-оксопропаноатPreparation 2: tert-Butyl 3-(2,3-dimethoxythieno[2,3-b]pyrazin-6-yl)-3-oxopropanoate
Стадия 1: 3-бром-5,6-диметоксипиразин-2-карбальдегидStep 1: 3-bromo-5,6-dimethoxypyrazine-2-carbaldehyde
К раствору 2,2,6,6-тетраметилпиперидина (5.12 мл, 30.1 ммоль) в THF (40 мл) при -78°С добавляли по каплям раствор n-BuLi (2.5 М в гексанах, 11.5 мл, 28.8 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 10 мин при -78°С, затем нагревали до 0°С и перемешивали в течение 20 мин. Реакционную смесь затем снова охлаждали до -78°С и добавляли раствор 5-бром-2,3-диметоксипиразина (3.00 г, 13.7 ммоль) в THF (10 мл) на протяжении 5 мин. Реакционную смесь перемешивали при -78°С в течение 1 ч, и затем реакцию останавливали DMF (1.06 мл, 13.7 ммоль). Реакционную смесь нагревали до 0°С и перемешивали в течение дополнительных 20 мин. АсОН (3.0 мл) добавляли при 0°С, и реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали на протяжении ночи. Смесь разбавляли EtOAc (300 мл) и затем промывали Н2О (2×150 мл) и насыщенным водным NaCl. Органический слой отделяли, высушивали над Na2SO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (элюируя EtOAc в гексанах) с получением 3-бром-5,6-диметоксипиразин-2-карбальдегида. ЖХ-МС (C7H8BrN2O3) (ES, m/z): 247, 249 [М+Н]+. 1Н ЯМР (500 МГц, CDCl3) δ 10.19 (s, 1H), 4.17 (s, 3Н), 4.14 (s, 3Н).To a solution of 2,2,6,6-tetramethylpiperidine (5.12 ml, 30.1 mmol) in THF (40 ml) at -78°C a solution of n-BuLi (2.5 M in hexanes, 11.5 ml, 28.8 mmol) was added dropwise. The reaction mixture was stirred for 10 minutes at -78°C, then heated to 0°C and stirred for 20 minutes. The reaction mixture was then cooled again to -78°C and a solution of 5-bromo-2,3-dimethoxypyrazine (3.00 g, 13.7 mmol) in THF (10 ml) was added over 5 minutes. The reaction mixture was stirred at -78°C for 1 hour, and then the reaction was stopped with DMF (1.06 ml, 13.7 mmol). The reaction mixture was heated to 0°C and stirred for an additional 20 minutes. AcOH (3.0 ml) was added at 0°C and the reaction mixture was warmed to room temperature and stirred overnight. The mixture was diluted with EtOAc (300 ml) and then washed with H 2 O (2×150 ml) and saturated aqueous NaCl. The organic layer was separated, dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (eluting with EtOAc in hexanes) to give 3-bromo-5,6-dimethoxypyrazine-2-carbaldehyde. LC-MS (C 7 H 8 BrN 2 O 3 ) (ES, m/z): 247, 249 [M+H] + . 1H NMR (500 MHz, CDCl 3 ) δ 10.19 (s, 1H), 4.17 (s, 3H), 4.14 (s, 3H).
Стадия 2: трет-бутил 2,3-диметокситиепо[2,3-b]пиразин-6-карбоксилатStep 2: tert-butyl 2,3-dimethoxythiepo[2,3-b]pyrazine-6-carboxylate
трет-Бутил 2-сульфанилацетат (424 мкл, 2.92 ммоль) и DMF (2.9 мл) добавляли к 3-бром-5,6-диметоксипиразин-2-карбальдегиду (650 мг, 2.63 ммоль) при комнатной температуре. Затем к реакционной смеси добавляли порциями К2СО3 (1090 мг, 7.89 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь нагревали до 80°С и перемешивали на протяжении ночи. Реакционную смесь затем охлаждали до комнатной температуры, разбавляли Et2O и останавливали H2O. Реакционную смесь экстрагировали Et2O, и объединенные органические вещества промывали насыщенным водным NaCl, высушивали над Na2SO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (элюируя EtOAc в гексанах) с получением трет-бутил 2,3-диметокситиено[2,3-b]пиразин-6-карбоксилата. ЖХ-МС (C13H17N2O4S) (ES, m/z): 297 [М+Н]+. 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 7.89 (s, 1Н), 4.02 (s, 3Н), 3.99 (s, 3Н), 1.55 (s, 9H).tert-Butyl 2-sulfanylacetate (424 μL, 2.92 mmol) and DMF (2.9 mL) were added to 3-bromo-5,6-dimethoxypyrazine-2-carbaldehyde (650 mg, 2.63 mmol) at room temperature. Then K2CO3 (1090 mg, 7.89 mmol) was added to the reaction mixture in portions at room temperature . The reaction mixture was heated to 80°C and stirred overnight. The reaction mixture was then cooled to room temperature, diluted with Et 2 O and stopped with H 2 O. The reaction mixture was extracted with Et 2 O and the combined organics were washed with saturated aqueous NaCl, dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (eluting with EtOAc in hexanes) to give tert-butyl 2,3-dimethoxythieno[2,3-b]pyrazine-6-carboxylate. LC-MS (C 13 H 17 N 2 O 4 S) (ES, m/z): 297 [M+H] + . 1H NMR (500 MHz, DMSO- d6 ) δ 7.89 (s, 1H), 4.02 (s, 3H), 3.99 (s, 3H), 1.55 (s, 9H).
Стадия 3: 2,3-диметокситиено[2,3-b]пиразин-6-карбоноеая кислотаStep 3: 2,3-dimethoxythieno[2,3-b]pyrazine-6-carboxylic acid
К перемешанному раствору трет-бутил 2,3-диметокситиено[2,3-b]пиразин-6-карбоксилата (400 мг, 1.35 ммоль) в DCM (6.0 мл) добавляли HCl (4.0 М в диоксане, 1.7 мл, 6.8 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали на протяжении ночи при комнатной температуре, и затем разбавляли путем добавления по каплям гексаном (50 мл) и перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь фильтровали, и собранные вещества промывали гексаном (2x10 мл) и высушивали под пониженным давлением с получением 2,3-диметокситиено[2,3-b]пиразин-6-карбоновой кислоты. ЖХ-МС (C9H9N2O4S) (ES, m/z): 241 [М+Н]+. 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 12.71 (br s, 1Н), 7.90 (s, 1H), 4.03 (s, 3H), 3.99 (s, 3H).HCl (4.0 M in dioxane, 1.7 mL, 6.8 mmol) was added to a stirred solution of tert-butyl 2,3-dimethoxythieno[2,3-b]pyrazine-6-carboxylate (400 mg, 1.35 mmol) in DCM (6.0 mL). at room temperature. The reaction mixture was stirred overnight at room temperature and then diluted by dropwise addition of hexane (50 ml) and stirred for 1 hour at room temperature. The reaction mixture was filtered and the collected substances were washed with hexane (2x10 ml) and dried under reduced pressure to obtain 2,3-dimethoxythieno[2,3-b]pyrazine-6-carboxylic acid. LC-MS (C 9 H 9 N 2 O 4 S) (ES, m/z): 241 [M+H] + . 1H NMR (500 MHz, DMSO- d6 ) δ 12.71 (br s, 1H), 7.90 (s, 1H), 4.03 (s, 3H), 3.99 (s, 3H).
Стадия 4: трет-бутил 3-(2,3-диметокситиено[2,3-b]пиразин-6-ил)-3-оксопропаноатStep 4: tert-butyl 3-(2,3-dimethoxythieno[2,3-b]pyrazin-6-yl)-3-oxopropanoate
Смесь 2,3-диметокситиено[2,3-b]пиразин-6-карбоновой кислоты (80 мг, 0.33 ммоль) и CDI (324 мг, 2.00 ммоль) в THF (5.5 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. К смеси добавляли бис(3-трет-бутокси-3-оксопропаноат) магния (628 мг, 1.83 ммоль) и полученную в результате смесь перемешивали на протяжении ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (элюируя (25% EtOH в EtOAc) в гексанах) с получением трет-бутил 3-(2,3-диметокситиено[2,3-b]пиразин-6-ил)-3-оксопропаноата. ЖХ-МС (C15H19N2O5S) (ES, m/z): 339 [М+Н]+. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8.32 (s, 1H), 4.13 (s, 2Н), 4.04 (s, 3Н), 4.00 (s, 3Н), 1.41 (s, 9Н).A mixture of 2,3-dimethoxythieno[2,3-b]pyrazine-6-carboxylic acid (80 mg, 0.33 mmol) and CDI (324 mg, 2.00 mmol) in THF (5.5 ml) was stirred at room temperature for 3 h. Magnesium bis(3-tert-butoxy-3-oxopropanoate) (628 mg, 1.83 mmol) was added to the mixture, and the resulting mixture was stirred overnight at room temperature. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (eluting with (25% EtOH in EtOAc) in hexanes) to give tert-butyl 3-(2,3-dimethoxythieno[2,3-b]pyrazin-6-yl)-3-oxopropanoate. LC-MS (C 15 H 19 N 2 O 5 S) (ES, m/z): 339 [M+H] + . 1 H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.32 (s, 1H), 4.13 (s, 2H), 4.04 (s, 3H), 4.00 (s, 3H), 1.41 (s, 9H).
Получение 3: 5,6-диметокситиено[3,2-b]пиридин-2-карбоновая кислотаPreparation 3: 5,6-dimethoxythieno[3,2-b]pyridine-2-carboxylic acid
Стадия 1: трет-бутил 5,6-диметокситиено[3,2-b]пиридин-2-карбоксилатStep 1: tert-butyl 5,6-dimethoxythieno[3,2-b]pyridine-2-carboxylate
К2СО3 (1180 мг, 8.56 ммоль) добавляли к смеси 3-хлор-5,6-диметоксипиколинальдегида (575 мг, 2.86 ммоль) и трет-бутил 2-сульфанилацетата (0.456 мл, 3.14 ммоль) в DMF (8.3 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали и нагревали до 60°С в течение 3 дней. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, и затем разбавляли Et2O и Н2О. Органический слой отделяли, промывали насыщенным водным NaCl, высушивали над Na2SO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (элюируя EtOAc в гексанах) с получением трет-бутил 5,6-диметокситиено[3,2-b]пиридин-2-карбоксилата. 1Н ЯМР (499 МГц, DMSO-d6) δ 7.95 (s, 1H), 7.84 (s, 1H), 3.93 (s, 3Н), 3.87 (s, 3Н), 1.54 (s, 9H). 2 CO 3 (1180 mg, 8.56 mmol) was added to a mixture of 3-chloro-5,6-dimethoxypicolinaldehyde (575 mg, 2.86 mmol) and tert-butyl 2-sulfanylacetate (0.456 ml, 3.14 mmol) in DMF (8.3 ml) at room temperature. The reaction mixture was stirred and heated to 60°C for 3 days. The reaction mixture was cooled to room temperature, and then diluted with Et 2 O and H 2 O. The organic layer was separated, washed with saturated aqueous NaCl, dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (eluting with EtOAc in hexanes) to give tert-butyl 5,6-dimethoxythieno[3,2-b]pyridine-2-carboxylate. 1H NMR (499 MHz, DMSO- d6 ) δ 7.95 (s, 1H), 7.84 (s, 1H), 3.93 (s, 3H), 3.87 (s, 3H), 1.54 (s, 9H).
Стадия 2: 5,6-диметокситиепо[3,2-b]пиридип-2-карбоповая кислотаStep 2: 5,6-dimethoxythiepo[3,2-b]pyridip-2-carbopic acid
HCl (4.0 M в H2O, 2.1 мл, 8.4 ммоль) добавляли к раствору трет-бутил 5,6-диметокситиено[3,2-b]пиридин-2-карбоксилата (493 мг, 1.67 ммоль) в DCM (7.4 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали на протяжении ночи при комнатной температуре, и затем разбавляли путем добавления по каплям гексана (50 мл). Смесь перемешивали в течение 1 ч и затем фильтровали. Собранные вещества промывали гексаном (2x10 мл) и затем высушивали под пониженным давлением с получением 5,6-диметокситиено[3,2-b]пиридин-2-карбоновой кислоты. ЖХ-МС (C10H10NO4S) (ES, m/z): 240 [М+Н]+. 1H ЯМР (499 МГц, DMSO-d6) δ 7.97 (s, 1Н), 7.85 (s, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.88 (s, 3H).HCl (4.0 M in H2O , 2.1 mL, 8.4 mmol) was added to a solution of tert-butyl 5,6-dimethoxythieno[3,2-b]pyridine-2-carboxylate (493 mg, 1.67 mmol) in DCM (7.4 mL ) at room temperature. The reaction mixture was stirred overnight at room temperature, and then diluted by adding hexane (50 ml) dropwise. The mixture was stirred for 1 hour and then filtered. The collected substances were washed with hexane (2x10 ml) and then dried under reduced pressure to obtain 5,6-dimethoxythieno[3,2-b]pyridine-2-carboxylic acid. LC-MS (C 10 H 10 NO 4 S) (ES, m/z): 240 [M+H] + . 1 H NMR (499 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.97 (s, 1H), 7.85 (s, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.88 (s, 3H).
Получение 4: трет-Бутил 3-(5,6-диметокситиено[3,2-b]пиридин-2-ил)-3-оксопропаноатPreparation 4: tert-Butyl 3-(5,6-dimethoxythieno[3,2-b]pyridin-2-yl)-3-oxopropanoate
CDI (508 мг, 3.13 ммоль) добавляли к смеси 5,6-диметокситиено[3,2-b]пиридин-2-карбоновой кислоты (500 мг, 2.09 ммоль) в THF (5 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Реакционную смесь добавляли в отдельную колбу, содержащую 3-(трет-бутокси)-3-оксопропаноат магния (1220 мг, 3.55 ммоль). Реакционную смесь разбавляли дополнительным THF (4 мл) и перемешивали на протяжении ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь затем нагревали до 50°С в течение 1 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и разбавляли H2O (20 мл). Добавляли дигидрат трехосновного цитрата натрия (2 г) и EtOAc (50 мл). Органический слой отделяли, и водный слой экстрагировали EtOAc. Органические слои объединяли, промывали насыщенным водным NaCl, высушивали над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (элюируя EtOAc в гексанах) с получением трет-бутил 3-(5,6-диметокситиено[3,2-b]пиридин-2-ил)-3-оксопропаноата. ЖХ-МС (C16H20NO5S) (ES, m/z): 338 [М+Н]+. 1H ЯМР (500 МГц, CDCl3) δ 7.97 (s, 1H), 7.44 (s, 1H), 4.13 (s, 3Н), 3.99 (s, 3H), 3.92 (s, 2Н), 1.48 (s, 9Н).CDI (508 mg, 3.13 mmol) was added to a mixture of 5,6-dimethoxythieno[3,2-b]pyridine-2-carboxylic acid (500 mg, 2.09 mmol) in THF (5 ml). The reaction mixture was stirred at room temperature for 3 hours. The reaction mixture was added to a separate flask containing magnesium 3-(tert-butoxy)-3-oxopropanoate (1220 mg, 3.55 mmol). The reaction mixture was diluted with additional THF (4 ml) and stirred overnight at room temperature. The reaction mixture was then heated to 50°C for 1 hour. The reaction mixture was cooled to room temperature and diluted with H 2 O (20 ml). Tribasic sodium citrate dihydrate (2 g) and EtOAc (50 ml) were added. The organic layer was separated and the aqueous layer was extracted with EtOAc. The organic layers were combined, washed with saturated aqueous NaCl, dried over anhydrous Na 2 SO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (eluting with EtOAc in hexanes) to give tert-butyl 3-(5,6-dimethoxythieno[3,2-b]pyridin-2-yl)-3-oxopropanoate. LC-MS (C 16 H 20 NO 5 S) (ES, m/z): 338 [M+H] + . 1H NMR (500 MHz, CDCl 3 ) δ 7.97 (s, 1H), 7.44 (s, 1H), 4.13 (s, 3H), 3.99 (s, 3H), 3.92 (s, 2H), 1.48 (s, 9H).
Получение 5: C-Phos Pd G4Receipt 5: C-Phos Pd G4
Смесь димера (2'-метиламино-1,1'-бифенил-2-ил)метансульфоната палладия (II) (439 мг, 0.573 ммоль) и 2'-(дициклогексилфосфино)-N2,N2,N6,N6-тетраметил-[1,1'-бифенил]-2,6-диамина (500 мг, 1.15 ммоль) в DCM (6 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Раствор затем разбавляли Et2O (30 мл). Раствор фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток затем суспендировали в пентанах и снова концентрировали под пониженным давлением с получением C-Phos Pd G4. См. Bruno, N. С; Niljianskul, N.; Buchwald, S. L. J. Org. Chem. 2014, 79, 4161.A mixture of palladium (II) (2'-methylamino-1,1'-biphenyl-2-yl)methanesulfonate dimer (439 mg, 0.573 mmol) and 2'-(dicyclohexylphosphino)-N 2 ,N 2 ,N6,N6-tetramethyl -[1,1'-biphenyl]-2,6-diamine (500 mg, 1.15 mmol) in DCM (6 ml) was stirred at room temperature for 2 hours. The solution was then diluted with Et 2 O (30 ml). The solution was filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was then suspended in pentanes and concentrated again under reduced pressure to give C-Phos Pd G4. See Bruno, N. S; Niljianskul, N.; Buchwald, SLJ Org. Chem. 2014, 79, 4161.
Промежуточное соединение 1: метил (S)-4-(5-хлол-6-метокситиено[3,2-b]пиримидин-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатIntermediate 1: Methyl (S)-4-(5-chlorol-6-methoxythieno[3,2-b]pyrimidin-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
Стадия 1: 5-хлор-6-метокситиено[3,2-b]пиридин-2-карбонилхлоридStep 1: 5-chloro-6-methoxythieno[3,2-b]pyridine-2-carbonyl chloride
POCl3 (1.17 мл, 12.5 ммоль) добавляли по каплям к перемешанной смеси 5,6-диметокситиено[3,2-b]пиридин-2-карбоновой кислоты (1.00 г, 4.1 ммоль) в DMF (10.45 мл) при 0°С в атмосфере N2. Через 10 мин реакционную смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры. Реакционную смесь затем нагревали до 100°С и перемешивали в течение 45 мин. Реакционную смесь добавляли в ледяную воду (100 мл) и перемешивали. Смесь фильтровали, и собранные вещества промывали водой (2x30 мл) и гексаном (50 мл). Собранные вещества разбавляли Et2O (50 мл) и фильтровали. Собранные вещества растворяли в CH2Cl2 (60 мл) и смесь высушивали над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением с получением 5-хлор-6-метокситиено[3,2-b]пиридин-2-карбонилхлорида. 1Н ЯМР (500 МГц, CDCl3) δ 8.32 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 4.06 (s, 3H).POCl 3 (1.17 ml, 12.5 mmol) was added dropwise to a stirred mixture of 5,6-dimethoxythieno[3,2-b]pyridine-2-carboxylic acid (1.00 g, 4.1 mmol) in DMF (10.45 ml) at 0°C in an N 2 atmosphere. After 10 min, the reaction mixture was allowed to warm to room temperature. The reaction mixture was then heated to 100°C and stirred for 45 minutes. The reaction mixture was added to ice water (100 ml) and stirred. The mixture was filtered and the collected substances were washed with water (2x30 ml) and hexane (50 ml). The collected substances were diluted with Et 2 O (50 ml) and filtered. The collected substances were dissolved in CH 2 Cl 2 (60 ml) and the mixture was dried over anhydrous Na 2 SO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure to obtain 5-chloro-6-methoxythieno[3,2-b]pyridine-2-carbonyl chloride. 1H NMR (500 MHz, CDCl 3 ) δ 8.32 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 4.06 (s, 3H).
Стадия 2: метил (S)-4-(5-хлор-6-метокситиено[3,2-b]пиридин-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатStep 2: Methyl (S)-4-(5-chloro-6-methoxythieno[3,2-b]pyridin-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
CuI (0.073 г, 0.38 ммоль) помещали под вакуум и нагревали в течение 1 мин тепловым феном. Колбу оставляли охлаждаться до комнатной температуры и затем открывали в атмосфере N2. Еще дважды колбу откачивали и затем снова заполняли N2. В колбе поддерживали положительное давление N2 с помощью резиновой септы и присоединенного входного клапана для N2. THF (2 мл) добавляли в колбу, и реакционную смесь охлаждали на бане с ледяной водой. Раствор (R)-(3-метокси-2-метил-3-оксопропил) цинка (II) бромида в THF (0.50 М, 1.68 мл, 0.84 ммоль) добавляли по каплям к реакционной смеси в течение 5 мин. Реакционную смесь перемешивали в течение 105 мин при 0°С. Смесь 5-хлор-6-метокситиено[3,2-b]пиридин-2-карбонилхлорида (0.200 г, 0.763 ммоль) в NMP (3 мл) затем добавляли по каплям в течение 5 мин. Реакционную смесь затем перемешивали в течение 3 ч при 0°С. Реакционную смесь затем добавляли к перемешанной смеси изопропилацетата (50 мл) и цитрата натрия (20% масс/об. в воде, 50 мл). После перемешивания в течение 20 мин слои разделяли, и водный слой экстрагировали изопропилацетатом (30 мл). Органические слои объединяли, промывали насыщенным водным NaCl (2x50 мл), высушивали над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (элюируя EtOAc в гексанах) с получением (S)-метил 4-(5-хлор-6-метокситиено[3,2-b]пиридин-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C14H15CINO4S) (ES, m/z): 328 [М+Н]+. 1Н ЯМР (500 МГц, CDCl3) δ 7.99 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 4.03 (s, 3H), 3.72 (s, 3H), 3.51 (dd, J=17.2, 7.9 Гц, 1Н), 3.21-3.12 (m, 1H), 3.06 (dd, J=17.2, 5.2 Гц, 1H), 1.32 (d, J=7.1 Гц, 3H).CuI (0.073 g, 0.38 mmol) was placed under vacuum and heated for 1 min with a heat gun. The flask was left to cool to room temperature and then opened under N 2 atmosphere. The flask was evacuated twice more and then filled with N 2 again. The flask was maintained under positive N 2 pressure using a rubber septum and an attached N 2 inlet valve. THF (2 ml) was added to the flask and the reaction mixture was cooled in an ice water bath. A solution of (R)-(3-methoxy-2-methyl-3-oxopropyl) zinc(II) bromide in THF (0.50 M, 1.68 mL, 0.84 mmol) was added dropwise to the reaction mixture over 5 min. The reaction mixture was stirred for 105 min at 0°C. A mixture of 5-chloro-6-methoxythieno[3,2-b]pyridine-2-carbonyl chloride (0.200 g, 0.763 mmol) in NMP (3 ml) was then added dropwise over 5 min. The reaction mixture was then stirred for 3 hours at 0°C. The reaction mixture was then added to a stirred mixture of isopropyl acetate (50 ml) and sodium citrate (20% w/v in water, 50 ml). After stirring for 20 minutes, the layers were separated and the aqueous layer was extracted with isopropyl acetate (30 ml). The organic layers were combined, washed with saturated aqueous NaCl (2x50 ml), dried over anhydrous Na 2 SO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (eluting with EtOAc in hexanes) to give (S)-methyl 4-(5-chloro-6-methoxythieno[3,2-b]pyridin-2-yl)-2-methyl-4- oxobutanoate. LC-MS (C 14 H 15 CINO 4 S) (ES, m/z): 328 [M+H] + . 1H NMR (500 MHz, CDCl 3 ) δ 7.99 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 4.03 (s, 3H), 3.72 (s, 3H), 3.51 (dd, J=17.2, 7.9 Hz, 1H), 3.21-3.12 (m, 1H), 3.06 (dd, J=17.2, 5.2 Hz, 1H), 1.32 (d, J=7.1 Hz, 3H).
Промежуточное соединение 2: трет-бутил 4-(5-(3-гидуоксипуопил)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноатIntermediate 2: tert-butyl 4-(5-(3-hydroxypuopyl)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate
Стадия 1: трет-бутил 4-(5-(3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)пропил)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноатStep 1: tert-butyl 4-(5-(3-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)propyl)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate
трет-Бутил 4-(5-бром-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноат (1.75 г, 4.38 ммоль; 81% чистоты) и C-Phos Pd G3 (0.177 г, 0.219 ммоль) добавляли в 40 мл виалу с винтовой крышкой с септой. Виалу три раза откачивали и снова заполняли N2. В виалу добавляли THF (15.7 мл) в атмосфере N2 с перемешиванием. При перемешивании полученной суспензии при комнатной температуре добавляли (3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)пропил)цинк (II) бромид (0.50 М в THF, 17.5 мл, 8.75 ммоль) по каплям с перемешиванием. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Реакционную смесь затем разделяли между EtOAc (75 мл) и 10% водным цитратом натрия (75 мл) и перемешивали энергично в течение 5 мин. Слои разделяли, и водный слой экстрагировали EtOAc (20 мл). Органические слои объединяли, промывали насыщенным водным NaCl (50 мл), высушивали над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0→40% градиент EtOAc в гексанах) с получением трет-бутил 4-(5-(3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)пропил)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C26H40NaO5SSi) (ES, m/z): 515 [M+Na]+. 1Н ЯМР (500 МГц, CDCl3) δ 7.89 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.24 (s, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.67 (t, J=6.3 Гц, 2Н), 3.28 (t, J=6.8 Гц, 2Н), 2.76 (t, J=7.2 Гц, 2Н), 2.72 (t, J=7.2 Гц, 2Н), 1.85 (р, J=6.5 Гц, 2Н), 1.46 (s, 9Н), 0.94 (s, 9Н), 0.08 (s, 6Н).tert-Butyl 4-(5-bromo-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate (1.75 g, 4.38 mmol; 81% purity) and C-Phos Pd G3 (0.177 g, 0.219 mmol) was added to a 40 ml vial with a screw cap and a septum. The vial was pumped out three times and filled again with N 2 . THF (15.7 ml) was added to the vial under N 2 atmosphere with stirring. While stirring the resulting suspension at room temperature, (3-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)propyl)zinc(II) bromide (0.50 M in THF, 17.5 mL, 8.75 mmol) was added dropwise with stirring. The mixture was stirred at room temperature for 18 hours. The reaction mixture was then partitioned between EtOAc (75 ml) and 10% aqueous sodium citrate (75 ml) and stirred vigorously for 5 minutes. The layers were separated and the aqueous layer was extracted with EtOAc (20 ml). The organic layers were combined, washed with saturated aqueous NaCl (50 ml), dried over anhydrous Na 2 SO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (0→40% gradient EtOAc in hexanes) to give tert-butyl 4-(5-(3-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)propyl)-6-methoxybenzo[b]thiophene-2 -yl)-4-oxobutanoate. LC-MS (C 26 H 40 NaO 5 SSi) (ES, m/z): 515 [M+Na] + . 1H NMR (500 MHz, CDCl 3 ) δ 7.89 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.24 (s, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.67 (t, J=6.3 Hz, 2H) , 3.28 (t, J=6.8 Hz, 2H), 2.76 (t, J=7.2 Hz, 2H), 2.72 (t, J=7.2 Hz, 2H), 1.85 (p, J=6.5 Hz, 2H), 1.46 (s, 9H), 0.94 (s, 9H), 0.08 (s, 6H).
Стадия 2: трет-бутил 4-(5-(3-гидуоксипуопил)-6-метоксибеизо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутапоатStep 2: tert-butyl 4-(5-(3-hydroxypuopyl)-6-methoxybeiso[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutapoate
К смеси трет-бутил 4-(5-(3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)пропил)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата (1.45 г, 2.94 ммоль) в МеОН (5.0 мл) добавляли воду (5.0 мл) и НОАс (5.0 мл). Полученную в результате суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Реакционную смесь разделяли между EtOAc и водным NaCl. Слои разделяли, и водный слой экстрагировали EtOAc. Органические слои объединяли, дважды промывали насыщенным водным NaCl, высушивали над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением с получением сырого остатка. Полученный в результате остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0→100% градиент EtOAc в гексанах) с получением трет-бутил 4-(5-(3-гидроксипропил)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C20H26NaO5S) (ES, m/z): 401 [M+Na]+. 1Н ЯМР (500 МГц, CDCl3) δ 7.89 (s, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.26 (s, 1H), 3.94 (s, 3H), 3.68 (t, J=5.5 Гц, 2Н), 3.28 (t, J=6.6 Гц, 2Н), 2.82 (t, J=7.3 Гц, 2Н), 2.72 (t, J=6.6 Гц, 2Н), 1.96-1.83 (m, 2Н), 1.46 (s, 9Н).To a mixture of tert-butyl 4-(5-(3-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)propyl)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate (1.45 g, 2.94 mmol) in MeOH ( 5.0 ml) water (5.0 ml) and HOAc (5.0 ml) were added. The resulting suspension was stirred at room temperature for 18 hours. The reaction mixture was partitioned between EtOAc and aqueous NaCl. The layers were separated and the aqueous layer was extracted with EtOAc. The organic layers were combined, washed twice with saturated aqueous NaCl, dried over anhydrous Na 2 SO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure to obtain a crude residue. The resulting residue was purified by silica gel chromatography (0→100% EtOAc gradient in hexanes) to give tert-butyl 4-(5-(3-hydroxypropyl)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4 -oxobutanoate. LC-MS (C 20 H 26 NaO 5 S) (ES, m/z): 401 [M+Na] + . 1H NMR (500 MHz, CDCl 3 ) δ 7.89 (s, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.26 (s, 1H), 3.94 (s, 3H), 3.68 (t, J=5.5 Hz, 2H) , 3.28 (t, J=6.6 Hz, 2H), 2.82 (t, J=7.3 Hz, 2H), 2.72 (t, J=6.6 Hz, 2H), 1.96-1.83 (m, 2H), 1.46 (s, 9H).
Промежуточное соединение 3: трет-бутил 4-(5-(3-6ромпропил)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноатIntermediate 3: tert-butyl 4-(5-(3-6rompropyl)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate
Трифенилфосфин (0.24 г, 0.91 ммоль) добавляли к смеси трет-бутил 4-(5-(3-гидроксипропил)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата (0.22 г, 0.57 ммоль) в THF (2.8 мл). Полученную в результате смесь охлаждали до 0°С, и добавляли NBS (0.15 г, 0.85 ммоль) одной порцией. После перемешивания в течение 30 мин при 0°С, реакцию разбавляли насыщенным водным AlCl3 и EtOAc. Органический слой отделяли, высушивали над Na2SO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Полученное в результате вещество затем очищали с помощью хроматографии на силикагеле с получением трет-бутил 4-(5-(3-бромпропил)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C16H18BrO4S) (ES, m/z): 385, 387 [М-С4Н8]+. 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8.27 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.60-3.49 (m, 2Н), 3.30-3.21 (m, 2Н), 2.88-2.75 (m, 2Н), 2.67-2.56 (m, 2Н), 2.18-2.06 (m, 2Н), 1.38 (s, 9Н).Triphenylphosphine (0.24 g, 0.91 mmol) was added to a mixture of tert-butyl 4-(5-(3-hydroxypropyl)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate (0.22 g, 0.57 mmol) in THF (2.8 ml). The resulting mixture was cooled to 0°C and NBS (0.15 g, 0.85 mmol) was added in one portion. After stirring for 30 min at 0°C, the reaction was diluted with saturated aqueous AlCl 3 and EtOAc. The organic layer was separated, dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The resulting material was then purified by silica gel chromatography to give tert-butyl 4-(5-(3-bromopropyl)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate. LC-MS (C 16 H 18 BrO 4 S) (ES, m/z): 385, 387 [M-C 4 H 8 ] + . 1H NMR (500 MHz, DMSO- d6 ) δ 8.27 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.60-3.49 (m, 2H), 3.30-3.21 (m, 2H), 2.88-2.75 (m, 2H), 2.67-2.56 (m, 2H), 2.18-2.06 (m, 2H), 1.38 (s, 9H).
Промежуточное соединение 4: 4-(5-бром-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаннитрилIntermediate 4: 4-(5-bromo-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanenitrile
Стадия 1: метил 5-бром-6-метоксибепзо[b]тиофен-2-карбоксилатStep 1: Methyl 5-bromo-6-methoxybepzo[b]thiophene-2-carboxylate
Концентрированную H2SO4 (3.0 мл, 56 ммоль) добавляли к суспензии 5-бром-6-метоксибензо[b]тиофен-2-карбоновой кислоты (5.0 г, 17 ммоль) в МеОН (60 мл). Реакционную смесь нагревали до 70°С в течение 4.5 дней. Смесь затем охлаждали до комнатной температуры и разбавляли водой. К смеси добавляли 30% IPA в CHCl3. Органический слой отделяли, высушивали над Na2SO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением с получением метил 5-бром-6-метоксибензо[b]тиофен-2-карбоксилата. 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8.30 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.83 (s, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.88 (s, 3H).Concentrated H 2 SO 4 (3.0 ml, 56 mmol) was added to a suspension of 5-bromo-6-methoxybenzo[b]thiophene-2-carboxylic acid (5.0 g, 17 mmol) in MeOH (60 ml). The reaction mixture was heated to 70°C for 4.5 days. The mixture was then cooled to room temperature and diluted with water. 30% IPA in CHCl 3 was added to the mixture. The organic layer was separated, dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure to give methyl 5-bromo-6-methoxybenzo[b]thiophene-2-carboxylate. 1 H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.30 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.83 (s, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.88 (s, 3H).
Стадия 2: (5-бром-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)метанолStep 2: (5-bromo-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)methanol
LAH (1.0 М в THF, 2.8 мл, 2.8 ммоль) медленно добавляли к смеси метил 5-бром-6-метоксибензо[b]тиофен-2-карбоксилата (0.78 г, 2.3 ммоль) в THF (9.0 мл) при 0°С. Через 40 мин реакционную смесь разбавляли насыщенным водным AlCl3. EtOAc добавляли, и органический слой отделяли, высушивали над Na2SO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Полученное в результате вещество очищали с помощью хроматографии на силикагеле с получением (5-бром-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)метанола. ЖХ-МС (C10H8BrOS) (ES, m/z): 255, 257 [М-ОН]+. 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8.01 (s, 1H), 7.69 (s, 1Н), 7.14 (s, 1H), 5.69-5.59 (m, 1H), 4.73-4.64 (m, 2H), 3.89 (s, 3H).LAH (1.0 M in THF, 2.8 mL, 2.8 mmol) was slowly added to a mixture of methyl 5-bromo-6-methoxybenzo[b]thiophene-2-carboxylate (0.78 g, 2.3 mmol) in THF (9.0 mL) at 0°C . After 40 minutes, the reaction mixture was diluted with saturated aqueous AlCl 3 . EtOAc was added and the organic layer was separated, dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The resulting material was purified by silica gel chromatography to give (5-bromo-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)methanol. LC-MS (C 10 H 8 BrOS) (ES, m/z): 255, 257 [M-OH] + . 1H NMR (500 MHz, DMSO- d6 ) δ 8.01 (s, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.14 (s, 1H), 5.69-5.59 (m, 1H), 4.73-4.64 (m, 2H ), 3.89 (s, 3H).
Стадия 3: 5-буом-6-метоксибензо[b]тиофен-2-каубалъдегидStep 3: 5-buom-6-methoxybenzo[b]thiophene-2-caubaldehyde
Диоксид марганца (6.3 г, 73 ммоль) добавляли к смеси (5-бром-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)метанола (4.0 г, 15 ммоль) в DCM (97 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч, затем фильтровали через слой целита. Фильтрат концентрировали под пониженным давлением. Полученное в результате вещество растирали в МеОН, и смесь пропускали через стеклянную фритту с получением 5-бром-6-метоксибензо[b]тиофен-2-карбальдегида. ЖХ-МС (C10H8BrO2S) (ES, m/z): 271, 273 [М+Н]+. 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 10.07 (s, 1Н), 8.40 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.87 (s, 1H), 3.97 (s, 3H).Manganese dioxide (6.3 g, 73 mmol) was added to a mixture of (5-bromo-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)methanol (4.0 g, 15 mmol) in DCM (97 ml). The reaction mixture was stirred at room temperature for 20 hours, then filtered through a pad of celite. The filtrate was concentrated under reduced pressure. The resulting material was triturated in MeOH and the mixture was passed through a glass frit to give 5-bromo-6-methoxybenzo[b]thiophene-2-carbaldehyde. LC-MS (C 10 H 8 BrO 2 S) (ES, m/z): 271, 273 [M+H] + . 1H NMR (500 MHz, DMSO- d6 ) δ 10.07 (s, 1H), 8.40 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.87 (s, 1H), 3.97 (s, 3H).
Стадия 4: 4-(5-буом-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаннитуилStep 4: 4-(5-buom-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutannituyl
ACN (0.15 мл, 2.2 ммоль) добавляли к суспензии 5-бром-6-метоксибензо[b]тиофен-2-карбальдегида (0.30 г, 1.1 ммоль), 2-мезитил-2,5,6,7-тетрагидро-пирроло[2,1-с][1,2,4]триазол-4-ийхлорида (0.029 г, 0.11 ммоль) и К3РО4 (0.24 г, 1.1 ммоль) в толуоле (2.2 мл). Реакционную смесь помещали в атмосферу Ar и перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Реакционную смесь затем концентрировали под пониженным давлением, и полученный в результате остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле с получением 4-(5-бром-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаннитрила. ЖХ-МС (C13H11BrNO2S) (ES, m/z): 324, 326 [М+Н]+. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8.33-8.22 (m, 2Н), 7.84 (s, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.59-3.44 (m, 2Н), 2.88-2.73 (m, 2Н).ACN (0.15 ml, 2.2 mmol) was added to a suspension of 5-bromo-6-methoxybenzo[b]thiophene-2-carbaldehyde (0.30 g, 1.1 mmol), 2-mesityl-2,5,6,7-tetrahydro-pyrrolo[ 2,1-c][1,2,4]triazol-4-ium chloride (0.029 g, 0.11 mmol) and K 3 PO 4 (0.24 g, 1.1 mmol) in toluene (2.2 ml). The reaction mixture was placed under an Ar atmosphere and stirred at room temperature for 18 hours. The reaction mixture was then concentrated under reduced pressure and the resulting residue was purified by silica gel chromatography to give 4-(5-bromo-6-methoxybenzo[b] thiophen-2-yl)-4-oxobutanenitrile. LC-MS (C 13 H 11 BrNO 2 S) (ES, m/z): 324, 326 [M+H] + . 1 H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.33-8.22 (m, 2H), 7.84 (s, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.59-3.44 (m, 2H), 2.88-2.73 (m , 2H).
Промежуточное соединение 5: этил 4-(5-бром-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноатIntermediate 5: Ethyl 4-(5-bromo-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate
Стадия 1: 5-бром-2-фтор-4-метоксибензальдегидStep 1: 5-bromo-2-fluoro-4-methoxybenzaldehyde
2-Фтор-4-метоксибензальдегид (9.0 г, 58 ммоль) медленно добавляли (порциями) к раствору Br2 (6.0 мл, 120 ммоль) в МеОН (40 мл) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 2 ч. К реакционной смеси медленно добавляли раствор NaHSO3 (24.3 г, 234 ммоль) в Н2О (300 мл) при 0°С. Полученную в результате суспензию затем перемешивали в течение 30 мин при 0°С. Реакционную смесь фильтровали, и фильтрат промывали дополнительным объемом Н2О (3x25 мл). Фильтрат затем высушивали под пониженным давлением с получением 5-бром-2-фтор-4-метоксибензальдегида. Продукт применяли без очистки. 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6): δ 10.02 (s, 1H), 7.98 (d, J=7.5 Гц, 1H), 7.26 (d, J=13.0 Гц, 1H), 3.97 (s, 3H).2-Fluoro-4-methoxybenzaldehyde (9.0 g, 58 mmol) was slowly added (portionwise) to a solution of Br 2 (6.0 ml, 120 mmol) in MeOH (40 ml) at 0°C. The reaction mixture was stirred at 0°C for 2 hours. A solution of NaHSO 3 (24.3 g, 234 mmol) in H 2 O (300 ml) was slowly added to the reaction mixture at 0°C. The resulting suspension was then stirred for 30 minutes at 0°C. The reaction mixture was filtered and the filtrate was washed with additional volume of H 2 O (3x25 ml). The filtrate was then dried under reduced pressure to obtain 5-bromo-2-fluoro-4-methoxybenzaldehyde. The product was used without purification. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ): δ 10.02 (s, 1H), 7.98 (d, J=7.5 Hz, 1H), 7.26 (d, J=13.0 Hz, 1H), 3.97 (s, 3H ).
Стадия 2: трет-бутил 5-буом-6-метоксибензо[b]тиофен-2-каубоксилатStep 2: tert-butyl 5-buom-6-methoxybenzo[b]thiophene-2-cauboxylate
К2СО3 (19.0 г, 137 ммоль) медленно добавляли (порциями) к раствору 5-бром-2-фтор-4-метоксибензальдегида (10.7 г, 45.8 ммоль) и трет-бутил 2-меркаптоацетата (6.65 мл, 45.8 ммоль) в DMF (50 мл) при 20°С в атмосфере Ar. Реакционную смесь перемешивали и нагревали до 100°С в течение 16 ч. Реакционную смесь затем охлаждали до комнатной температуры и разбавляли Et2O (1000 мл). Смесь затем промывали H2O (500 мл, затем 2x250 мл) и объединенные водные слои экстрагировали Et2O (2x200 мл). Органические слои затем объединяли и промывали насыщенным водным NaCl (50 мл). Органический слой отделяли, высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением с получением трет-бутил 5-бром-6-метоксибензо[b]тиофен-2-карбоксилата. Продукт применяли без очистки. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6): δ 8.26 (s, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 3.92 (s, 3H), 1.55 (s,9H).To 2 CO 3 (19.0 g, 137 mmol) was slowly added (in portions) to a solution of 5-bromo-2-fluoro-4-methoxybenzaldehyde (10.7 g, 45.8 mmol) and tert-butyl 2-mercaptoacetate (6.65 ml, 45.8 mmol) in DMF (50 ml) at 20°C in an Ar atmosphere. The reaction mixture was stirred and heated to 100°C for 16 hours. The reaction mixture was then cooled to room temperature and diluted with Et 2 O (1000 ml). The mixture was then washed with H 2 O (500 ml, then 2x250 ml) and the combined aqueous layers were extracted with Et 2 O (2x200 ml). The organic layers were then combined and washed with saturated aqueous NaCl (50 ml). The organic layer was separated, dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure to give tert-butyl 5-bromo-6-methoxybenzo[b]thiophene-2-carboxylate. The product was used without purification. 1H NMR (500 MHz, DMSO- d6 ): δ 8.26 (s, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 3.92 (s, 3H), 1.55 (s, 9H).
Стадия 3: 5-бром-6-метоксибепзо[b]тиофеп-2-карбоповая кислотаStep 3: 5-bromo-6-methoxybepzo[b]thiophep-2-carbopic acid
HCl (56 мл, 4.0 М в 1,4-диоксане, 230 ммоль) добавляли к раствору трет-бутил 5-бром-6-метоксибензо[6]тиофен-2-карбоксилата (15.5 г, 45.0 ммоль) в DCM (200 мл) при 20°С. Реакционную смесь перемешивали при 20°С в течение 3 дней. Реакционную смесь затем разбавляли путем добавления по каплям гексана (500 мл). Полученную после добавления суспензию перемешивали в течение дополнительных 2 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь фильтровали, и собранное вещество промывали гексаном (2x50 мл) и высушивали под пониженным давлением с получением 5-бром-6-метоксибензо[b]тиофен-2-карбоновой кислоты, которую применяли без очистки. 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6): δ 13.42 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.80 (s, 1Н), 3.93 (s, 3H).HCl (56 mL, 4.0 M in 1,4-dioxane, 230 mmol) was added to a solution of tert-butyl 5-bromo-6-methoxybenzo[6]thiophene-2-carboxylate (15.5 g, 45.0 mmol) in DCM (200 mL ) at 20°C. The reaction mixture was stirred at 20°C for 3 days. The reaction mixture was then diluted by adding hexane (500 ml) dropwise. The resulting suspension was stirred for an additional 2 hours at room temperature. The reaction mixture was filtered and the collected material was washed with hexane (2x50 ml) and dried under reduced pressure to give 5-bromo-6-methoxybenzo[b]thiophene-2-carboxylic acid, which was used without purification. 1H NMR (500 MHz, DMSO- d6 ): δ 13.42 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.80 (s, 1H), 3.93 (s, 3H).
Стадия 4: 5-буом-6-метоксибензо[b]тиофен-2-каубонилхлоуидStep 4: 5-buom-6-methoxybenzo[b]thiophene-2-caubonyl chloride
DMF (0.049 мл, 0.63 ммоль) медленно добавляли (по каплям) к раствору 5-бром-6-метоксибензо[b]тиофен-2-карбоновой кислоты (6.0 г, 21 ммоль) и (COCl)2 (5.5 мл, 63 ммоль) в THF (100 мл) при 0°С в атмосфере Ar. Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 2 ч и затем оставляли нагреваться до комнатной температуры. Реакционную смесь перемешивали в течение 18 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь затем концентрировали под пониженным давлением с получением 5-бром-6-метоксибензо[b]тиофен-2-карбонилхлорида. Продукт применяли без очистки.DMF (0.049 ml, 0.63 mmol) was slowly added (dropwise) to a solution of 5-bromo-6-methoxybenzo[b]thiophene-2-carboxylic acid (6.0 g, 21 mmol) and (COCl) 2 (5.5 ml, 63 mmol ) in THF (100 ml) at 0°C in an Ar atmosphere. The reaction mixture was stirred at 0°C for 2 hours and then allowed to warm to room temperature. The reaction mixture was stirred for 18 hours at room temperature. The reaction mixture was then concentrated under reduced pressure to obtain 5-bromo-6-methoxybenzo[b]thiophene-2-carbonyl chloride. The product was used without purification.
Стадия 5: этил 4-(5-бром-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноатStep 5: Ethyl 4-(5-bromo-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate
Раствор (3-этокси-3-оксопропил)цинка (II) бромида (13.8 мл, 0.50 М в THF, 6.9 ммоль) добавляли в высушенную в печи колбу, содержащую ((тиофен-2-карбонил)окси)медь (1.31 г, 6.87 ммоль) в атмосфере Ar при 0°С. Реакционную смесь перемешивали в течение 20 мин при 0°С в атмосфере Ar. Дегазированный Ar раствор 5-бром-6-метоксибензо[b]тиофен-2-карбонил хлорид а (1.52 г, 4.98 ммоль) в THF (25.0 мл) затем добавляли через канюлю к реакционной смеси при 0°С; полученную в результате суспензию оставляли нагреваться до комнатной температуры и перемешивали в течение 3 ч. Реакционную смесь охлаждали до 0°С и останавливали насыщенным водным NH4Cl (50 мл). Смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры и перемешивали в течение 10 мин. Смесь фильтровали, и фильтрат разбавляли EtOAc (500 мл) и насыщенным водным NaCl (50 мл). Органический слой отделяли, промывали насыщенным водным NaCl (25 мл), высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (EtOAc в DCM) с получением этил 4-(5-бром-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C15H16BrO4S) (ES, m/z): 371, 373 [М+Н]+. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6): δ 8.27 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.81 (s, 1H), 4.07-4.02 (m, 2Н), 3.94 (s, 3H), 3.35-3.25 (m, 2Н), 2.68-2.64 (m, 2Н), 1.20-1.14 (m, 3H).A solution of (3-ethoxy-3-oxopropyl)zinc(II) bromide (13.8 mL, 0.50 M in THF, 6.9 mmol) was added to an oven-dried flask containing ((thiophene-2-carbonyl)oxy)copper (1.31 g, 6.87 mmol) in an Ar atmosphere at 0°C. The reaction mixture was stirred for 20 min at 0°C in an Ar atmosphere. An Ar-degassed solution of 5-bromo-6-methoxybenzo[b]thiophene-2-carbonyl chloride a (1.52 g, 4.98 mmol) in THF (25.0 ml) was then added via cannula to the reaction mixture at 0°C; the resulting suspension was allowed to warm to room temperature and stirred for 3 hours. The reaction mixture was cooled to 0°C and quenched with saturated aqueous NH 4 Cl (50 ml). The mixture was allowed to warm to room temperature and stirred for 10 minutes. The mixture was filtered and the filtrate was diluted with EtOAc (500 ml) and saturated aqueous NaCl (50 ml). The organic layer was separated, washed with saturated aqueous NaCl (25 ml), dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel column chromatography (EtOAc in DCM) to give ethyl 4-(5-bromo-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate. LC-MS (C 15 H 16 BrO 4 S) (ES, m/z): 371, 373 [M+H] + . 1H NMR (500 MHz, DMSO- d6 ): δ 8.27 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.81 (s, 1H), 4.07-4.02 (m, 2H), 3.94 (s, 3H) , 3.35-3.25 (m, 2H), 2.68-2.64 (m, 2H), 1.20-1.14 (m, 3H).
Промежуточное соединение 6: трет-бутил 4-(5-бром-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноатIntermediate 6: tert-butyl 4-(5-bromo-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate
Промежуточное соединение 6 может быть получено в соответствии со способами, аналогичными описанным выше для Промежуточного соединения 5, с применением соответствующих исходных материалов, описанных как приготовленные или полученных из коммерчески доступных источников.Intermediate 6 can be prepared in accordance with methods similar to those described above for Intermediate 5, using appropriate starting materials described as prepared or obtained from commercially available sources.
Промежуточное соединение 7: этил 4-(6-метокси-5-(3-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)пропил)бензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноатIntermediate 7: Ethyl 4-(6-methoxy-5-(3-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)propyl)benzo[b]thiophene-2- yl)-4-oxobutanoate
Стадия 1: этил 4-(5-аллил-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноатStep 1: Ethyl 4-(5-allyl-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate
В виалу, содержащую этил 4-(5-бром-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноат (5.0 г, 13 ммоль), Pd(Ph3P)4 (1.6 г, 1.3 ммоль) и диоксан (15 мл), добавляли аллилтри-н-бутилолово (5.4 мл, 18 ммоль). Реакцию нагревали до 90°С в течение 18 ч. После охлаждения до комнатной температуры смесь разбавляли DCM, фильтровали через целит и добавляли в колбу, содержащую водный KF (0.5 М, 200 мл). Смесь перемешивали, и органический слой затем отделяли, высушивали над Na2SO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Полученный в результате остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (0→30% градиент EtOAc в гексанах) с получением этил 4-(5-аллил-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C18H21O4S) (ES, m/z): 333 [М+Н]+. 1Н ЯМР (600 МГц, DMSO-d6) δ 8.23 (s, 1Н), 7.69 (s, 1Н), 7.58 (s, 1Н), 5.96 (dq, J=15.9, 6.6 Гц, 1Н), 5.04 (d,J=4.5 Гц, 1H), 5.02 (s, 1H), 4.01 (q, J=7.0 Гц, 2Н), 3.85 (s, 3H), 3.37 (d, J=6.3 Гц, 2Н), 3.27 (dd, J=11.0, 4.3 Гц, 2Н), 2.62 (t, J=6.1 Гц, 2Н), 1.13 (t, J=7.1 Гц, 3H).In a vial containing ethyl 4-(5-bromo-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate (5.0 g, 13 mmol), Pd(Ph 3 P) 4 (1.6 g, 1.3 mmol) and dioxane (15 ml), allyltri-n-butyltin (5.4 ml, 18 mmol) was added. The reaction was heated to 90°C for 18 hours. After cooling to room temperature, the mixture was diluted with DCM, filtered through celite and added to a flask containing aqueous KF (0.5 M, 200 ml). The mixture was stirred and the organic layer was then separated, dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The resulting residue was purified by silica gel column chromatography (0→30% EtOAc gradient in hexanes) to give ethyl 4-(5-allyl-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate. LC-MS (C 18 H 21 O 4 S) (ES, m/z): 333 [M+H] + . 1H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.23 (s, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.58 (s, 1H), 5.96 (dq, J=15.9, 6.6 Hz, 1H), 5.04 ( d,J=4.5 Hz, 1H), 5.02 (s, 1H), 4.01 (q, J=7.0 Hz, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.37 (d, J=6.3 Hz, 2H), 3.27 ( dd, J=11.0, 4.3 Hz, 2H), 2.62 (t, J=6.1 Hz, 2H), 1.13 (t, J=7.1 Hz, 3H).
Стадия 2: этил 4-(6-метокси-5-(3-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолап-2-ил)пропил)бензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноатStep 2: Ethyl 4-(6-methoxy-5-(3-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolap-2-yl)propyl)benzo[b]thiophen-2-yl )-4-oxobutanoate
К смеси 1,4-бис(дифенилфосфино)бутана (0.45 г, 1.1 ммоль), димера хлор(1,5-циклооктадиен)иридия (i) (0.35 г, 0.53 ммоль), этил 4-(5-аллил-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата (3.5 г, 11 ммоль) и THF (20 мл) добавляли пинаколборан (1.0 М в THF, 15.8 мл, 15.8 ммоль). Реакцию перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Растворитель затем удаляли под пониженным давлением, и остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (0→20% градиент EtOAc в гексанах) с получением этил 4-(6-метокси-5-(3-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)пропил)бензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата. 1Н ЯМР (600 МГц, DMSO-d6) δ 8.21 (s, 1H), 7.66 (s, 1Н), 7.53 (s, 1H), 4.02 (q, J=7.0 Гц, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.27 (t, J=6.2 Гц, 2H), 2.62 (t, J=6.1 Гц, 2H), 2.58 (t, J=7.4 Гц, 2H), 1.58 (p, J=7.4 Гц, 2H), 1.16-1.11 (m, 15H), 0.67(t, J=7.6 Гц, 2H).To a mixture of 1,4-bis(diphenylphosphino)butane (0.45 g, 1.1 mmol), chloro(1,5-cyclooctadiene)iridium (i) dimer (0.35 g, 0.53 mmol), ethyl 4-(5-allyl-6- methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate (3.5 g, 11 mmol) and THF (20 ml) were added pinacolborane (1.0 M in THF, 15.8 ml, 15.8 mmol). The reaction was stirred at room temperature for 4 hours. The solvent was then removed under reduced pressure and the residue was purified by silica gel column chromatography (0→20% gradient EtOAc in hexanes) to give ethyl 4-(6-methoxy-5-(3 -(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)propyl)benzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate. 1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.21 (s, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.53 (s, 1H), 4.02 (q, J=7.0 Hz, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.27 (t, J=6.2 Hz, 2H), 2.62 (t, J=6.1 Hz, 2H), 2.58 (t, J=7.4 Hz, 2H), 1.58 (p, J=7.4 Hz, 2H) , 1.16-1.11 (m, 15H), 0.67(t, J=7.6 Hz, 2H).
Промежуточное соединение 8: трет-Бутил 4-(6-(3-бромпропил)-5-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноатIntermediate 8: tert-Butyl 4-(6-(3-bromopropyl)-5-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate
Стадия 1: метил 6-бром-5-метоксибензо[b]тиофен-2-карбоксилатStep 1: Methyl 6-bromo-5-methoxybenzo[b]thiophene-2-carboxylate
К перемешанному раствору 4-бром-2-фтор-5-метоксибензальдегида (5.00 г, 21.5 ммоль) в DMF (100 мл) добавляли метил 2-меркаптоацетат (2.51 г, 23.6 ммоль) и K2CO3 (8.90 г, 64.4 ммоль). Реакционную смесь 3 раза дегазировали N2. Полученную в результате смесь затем перемешивали при комнатной температуре в течение 15 ч. К реакционной смеси добавляли EtOAc (500 мл) и Н2О (1200 мл). Органический слой отделяли и промывали насыщенным водным NaCl (2×200 мл), высушивали над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (EtOAc в РЕ) с получением метил 6-бром-5-метоксибензо[b]тиофен-2-карбоксилата. ЖХ-МС (C11H10BrO3S) (ES, m/z): 301, 303 [М+Н]+. 1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ=8.01 (s, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.26 (s, 1H), 3.96 (s, 3Н), 3.94 (s, 3Н).To a stirred solution of 4-bromo-2-fluoro-5-methoxybenzaldehyde (5.00 g, 21.5 mmol) in DMF (100 ml) was added methyl 2-mercaptoacetate (2.51 g, 23.6 mmol) and K 2 CO 3 (8.90 g, 64.4 mmol ). The reaction mixture was degassed with N 2 3 times. The resulting mixture was then stirred at room temperature for 15 hours. EtOAc (500 ml) and H 2 O (1200 ml) were added to the reaction mixture. The organic layer was separated and washed with saturated aqueous NaCl (2×200 ml), dried over anhydrous Na 2 SO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel column chromatography (EtOAc in PE) to give methyl 6-bromo-5-methoxybenzo[b]thiophene-2-carboxylate. LC-MS (C 11 H 10 BrO 3 S) (ES, m/z): 301, 303 [M+H] + . 1H NMR (400 MHz, CDCl 3 ): δ=8.01 (s, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.26 (s, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.94 (s, 3H).
Стадия 2: 6-бром-5-метоксибензо[b]тиофен-2-каубоноеая кислотаStep 2: 6-bromo-5-methoxybenzo[b]thiophene-2-caubonic acid
К суспензии метил 6-бром-5-метоксибензо[b]тиофен-2-карбоксилата (1.45 г, 4.81 ммоль) в МеОН (20 мл), THF (20 мл) и H2O (20 мл) добавляли NaOH (1.93 г, 48.1 ммоль). Полученную в результате суспензию нагревали до 50°С в течение 0.5 ч. Реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением для удаления растворителя. К остатку добавляли Н2О (200 мл) и добавляли лимонную кислоту, чтобы довести раствор до рН=6. Полученную водную суспензию экстрагировали EtOAc (3×50 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным водным NaCl (100 мл), высушивали над Na2SO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением с получением 6-бром-5-метоксибензо[b]тиофен-2-карбоновой кислоты, которую применяли без дополнительной очистки. 1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6): δ=13.52 (br s, 1Н), 8.35 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.65 (s, 1H), 3.90 (s, 3H).NaOH (1.93 g) was added to a suspension of methyl 6-bromo-5-methoxybenzo[b]thiophene-2-carboxylate (1.45 g, 4.81 mmol) in MeOH (20 ml), THF (20 ml) and H 2 O (20 ml). , 48.1 mmol). The resulting suspension was heated to 50°C for 0.5 h. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure to remove the solvent. H 2 O (200 ml) was added to the residue and citric acid was added to adjust the solution to pH=6. The resulting aqueous suspension was extracted with EtOAc (3×50 ml). The combined organic layers were washed with saturated aqueous NaCl (100 ml), dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure to give 6-bromo-5-methoxybenzo[b]thiophene-2-carboxylic acid, which was used without further purification. 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ=13.52 (br s, 1H), 8.35 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.65 (s, 1H), 3.90 (s, 3H) .
Стадия 3: 6-бром-5-метоксибензо[b]тиофен-2-каубонилхлоуидStep 3: 6-bromo-5-methoxybenzo[b]thiophene-2-caubonyl chloride
К перемешанному раствору 6-бром-5-метоксибензо[b]тиофен-2-карбоновой кислоты (800 мг, 2.79 ммоль) в безводном THF (6 мл) добавляли (COCl)2 (1.06 г, 8.36 ммоль) по каплям при 0°С. Смесь затем нагревали при 75°С в течение 15 ч и затем охлаждали до комнатной температуры. Растворитель удаляли под пониженным давлением с получением неочищенного 6-бром-5-метоксибензо[b]тиофен-2-карбонилхлорида, который применяли без дополнительной очистки.To a stirred solution of 6-bromo-5-methoxybenzo[b]thiophene-2-carboxylic acid (800 mg, 2.79 mmol) in anhydrous THF (6 ml) was added (COCl) 2 (1.06 g, 8.36 mmol) dropwise at 0° WITH. The mixture was then heated at 75°C for 15 hours and then cooled to room temperature. The solvent was removed under reduced pressure to obtain crude 6-bromo-5-methoxybenzo[b]thiophene-2-carbonyl chloride, which was used without further purification.
Стадия 4: трет-бутил 4-(6-бром-5-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноатStep 4: tert-butyl 4-(6-bromo-5-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate
В круглодонную колбу добавляли CuI (0.24 г, 2.4 ммоль). Колбу откачивали и затем заполняли N2. Процедуру повторяли три раза. Добавляли THF (4.0 мл) и смесь охлаждали до 0°С. Смесь (3-(трет-бутокси)-3-оксопропил)цинка (II) бромида (0.50 М в THF, 9.6 мл, 4.8 ммоль) добавляли по каплям при 0°С в течение 10 мин. Полученную в результате смесь оставляли перемешиваться в течение 30 мин. Добавляли 6-бром-5-метоксибензо[b]тиофен-2-карбонилхлорид (0.73 г, 2.4 ммоль). Смесь удаляли из ледяной бани и оставляли нагреваться до комнатной температуры. Смесь перемешивали в течение 2 ч. Смесь затем охлаждали до 0°С, и добавляли концентрированный NH4OH (4.5 мл). К полученной в результате суспензии добавляли воду (240 мл) и МеОН (60 мл). Смесь перемешивали в течение 5 мин и обрабатывали ультразвуком на бане с соникатором. Смесь затем разбавляли EtOAc, и органический слой отделяли, высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток сырого вещества очищали с помощью хроматографии на силикагеле с получением трет-бутил 4-(6-бром-5-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C17H19BrO4S) (ES, m/z): 421, 423 [M+Na]+.CuI (0.24 g, 2.4 mmol) was added to the round-bottom flask. The flask was evacuated and then filled with N 2 . The procedure was repeated three times. THF (4.0 ml) was added and the mixture was cooled to 0°C. A mixture of (3-(tert-butoxy)-3-oxopropyl)zinc(II) bromide (0.50 M in THF, 9.6 mL, 4.8 mmol) was added dropwise at 0°C over 10 min. The resulting mixture was left to stir for 30 minutes. 6-bromo-5-methoxybenzo[b]thiophene-2-carbonyl chloride (0.73 g, 2.4 mmol) was added. The mixture was removed from the ice bath and allowed to warm to room temperature. The mixture was stirred for 2 hours. The mixture was then cooled to 0°C and concentrated NH 4 OH (4.5 ml) was added. Water (240 ml) and MeOH (60 ml) were added to the resulting suspension. The mixture was stirred for 5 min and treated with ultrasound in a sonicator bath. The mixture was then diluted with EtOAc and the organic layer was separated, dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The residue of the crude material was purified by silica gel chromatography to give tert-butyl 4-(6-bromo-5-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate. LC-MS (C 17 H 19 BrO 4 S) (ES, m/z): 421, 423 [M+Na] + .
Стадия 5: трет-бутил 4-(6-(3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)пропил)-5-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноатStep 5: tert-butyl 4-(6-(3-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)propyl)-5-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate
В колбу, содержащую трет-бутил 4-(6-бром-5-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноат (0.16 г, 0.40 ммоль) и THF (2.0 мл), добавляли [(2-дициклогексилфосфино-2',6'-бис(N,N-диметиламино)-1,1'-бифенил)-2-(2'-амино-1,1'-бифенил)]палладий (II) метан сульфонат (C-Phos Pd G3, 16 мг, 0.020 ммоль). Колбу 3 раза откачивали и снова заполняли N2. Добавляли (3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)пропил)цинк (II) бромид (0.50 М в THF, 2.4 мл, 1.2 ммоль) и смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 2.5 ч. Затем реакцию останавливали смесью EtOAc и 10% водного цитрата натрия. Органический слой отделяли, промывали насыщенным водным NaCl, высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Сырой остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле с получением трет-бутил 4-(6-(3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)пропил)-5-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C26H41O5SSi-C4H8) (ES, m/z): 437 [М-С4Н8]+.[(2-dicyclohexylphosphino) -2',6'-bis(N,N-dimethylamino)-1,1'-biphenyl)-2-(2'-amino-1,1'-biphenyl)]palladium (II) methane sulfonate (C-Phos Pd G3, 16 mg, 0.020 mmol). The flask was pumped out 3 times and filled with N 2 again. (3-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)propyl)zinc(II) bromide (0.50 M in THF, 2.4 mL, 1.2 mmol) was added and the mixture was left stirring at room temperature for 2.5 h. The reaction was then quenched with a mixture of EtOAc and 10 % aqueous sodium citrate. The organic layer was separated, washed with saturated aqueous NaCl, dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The crude residue was purified by silica gel chromatography to give tert-butyl 4-(6-(3-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)propyl)-5-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate. LC-MS (C 26 H 41 O 5 SSi-C 4 H 8 ) (ES, m/z): 437 [M-C 4 H 8 ] + .
Стадия 6: трет-бутил 4-(б-(3-гидроксипропил)-5-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутапоатStep 6: tert-butyl 4-(b-(3-hydroxypropyl)-5-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutapoate
В колбу, содержащую трет-бутил 4-(6-(3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)пропил)-5-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноат (0.11 г, 0.23 ммоль), добавляли МеОН (1.5 мл), воду (1.5 мл) и НО Ас (1.5 мл). Смесь оставляли перемешиваться в течение 4 ч. Смесь разбавляли EtOAc и затем промывали водой (3×50 мл). Органический слой высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Сырой остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с получением трет-бутил 4-(6-(3-гидроксипропил)-5-метокси-бензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C20H27O5S-C4H8) (ES, m/z): 323 [М-С4Н8]+.Into a flask containing tert-butyl 4-(6-(3-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)propyl)-5-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate (0.11 g, 0.23 mmol), MeOH (1.5 ml), water (1.5 ml) and HO Ac (1.5 ml) were added. The mixture was left stirring for 4 hours. The mixture was diluted with EtOAc and then washed with water (3×50 ml). The organic layer was dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The crude residue was purified by silica gel column chromatography to give tert-butyl 4-(6-(3-hydroxypropyl)-5-methoxy-benzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate. LC-MS (C 20 H 27 O 5 SC 4 H 8 ) (ES, m/z): 323 [M-C 4 H 8 ] + .
Стадия 7: трет-бутил 4-(6-(3-бромпуопш)-5-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутапоатStep 7: tert-butyl 4-(6-(3-bromophen)-5-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutapoate
К смеси трет-бутил 4-(6-(3-гидроксипропил)-5-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата (74 мг, 0.20 ммоль) и трифенилфосфина (82 мг, 0.31 ммоль) в THF (1.0 мл) при 0°С добавляли NBS (52 мг, 0.29 ммоль). Через 15 мин при 0°С смесь останавливали насыщенным водным NH4Cl и разбавляли EtOAc. Органический слой отделяли, высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Сырой остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с получением трет-бутил 4-(6-(3-бромпропил)-5-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C20H26BrO4S-C4H8) (ES, m/z): 385, 387 [М-С4Н8].To a mixture of tert-butyl 4-(6-(3-hydroxypropyl)-5-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate (74 mg, 0.20 mmol) and triphenylphosphine (82 mg, 0.31 mmol) in THF (1.0 ml) at 0°C, NBS (52 mg, 0.29 mmol) was added. After 15 min at 0°C the mixture was stopped with saturated aqueous NH 4 Cl and diluted with EtOAc. The organic layer was separated, dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The crude residue was purified by silica gel column chromatography to give tert-butyl 4-(6-(3-bromopropyl)-5-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate. LC-MS (C 20 H 26 BrO 4 SC 4 H 8 ) (ES, m/z): 385, 387 [M-C 4 H 8 ].
Промежуточное соединение 9: Метил 4-(4-бром-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноатIntermediate 9: Methyl 4-(4-bromo-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate
Стадия 1: 2-бром-6-фтор-4-метоксибензальдегидStep 1: 2-bromo-6-fluoro-4-methoxybenzaldehyde
К смеси 1-бром-3-фтор-5-метоксибензола (7.5 г, 37 ммоль) в THF (120 мл) при -78°С добавляли LDA (2.0 М в THF, 22 мл, 44 ммоль) и смесь оставляли перемешиваться в течение 30 мин при -78°С. Через 30 мин добавляли DMF (3.4 мл, 44 ммоль) по каплям, и смесь затем оставляли перемешиваться в течение 30 мин. Затем реакцию останавливали водой, нагревали до комнатной температуры и затем добавляли EtOAc. Слои разделяли, и водный слой экстрагировали EtOAc еще два раза. Объединенные органические слои высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток сырого вещества очищали с помощью хроматографии на силикагеле с получением 2-бром-6-фтор-4-метоксибензальдегида. ЖХ-МС (C8H7BrFO2) (ES, m/z): 233, 235 [М+Н]+.To a mixture of 1-bromo-3-fluoro-5-methoxybenzene (7.5 g, 37 mmol) in THF (120 ml) at -78°C was added LDA (2.0 M in THF, 22 ml, 44 mmol) and the mixture was left to stir in for 30 minutes at -78°C. After 30 minutes, DMF (3.4 ml, 44 mmol) was added dropwise and the mixture was then left to stir for 30 minutes. The reaction was then quenched with water, warmed to room temperature and then EtOAc was added. The layers were separated and the aqueous layer was extracted with EtOAc two more times. The combined organic layers were dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The residue of the crude material was purified by silica gel chromatography to give 2-bromo-6-fluoro-4-methoxybenzaldehyde. LC-MS (C 8 H 7 BrFO 2 ) (ES, m/z): 233, 235 [M+H] + .
Стадия 2: метил 4-бром-6-метоксибензо[b]тиофен-2-карбоксилатStep 2: Methyl 4-bromo-6-methoxybenzo[b]thiophene-2-carboxylate
К смеси 2-бром-6-фтор-4-метоксибензальдегида (2.5 г, 11 ммоль) в DMSO (54 мл) добавляли TEA (3.0 мл, 21 ммоль). Через 10 мин добавляли метил тиогликолят (3.1 мл, 32 ммоль) и смесь оставляли перемешиваться в течение 30 мин при комнатной температуре. Через 30 мин смесь нагревали до 60°С в течение 1 ч. После охлаждения до комнатной температуры смесь разбавляли насыщенным водным NaHCO3 и EtOAc. Органический слой отделяли, высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток сырого вещества очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0→15% градиент EtOAc в гексанах) с получением метил 4-бром-6-метоксибензо[b]тиофен-2-карбоксилата. ЖХ-МС (C11H10BrO3S) (ES, m/z): 301, 303 [М+Н]+. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 7.93 (s, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.44-7.37 (m, 1Н), 3.89 (s, 3Н), 3.87 (s, 3Н).To a mixture of 2-bromo-6-fluoro-4-methoxybenzaldehyde (2.5 g, 11 mmol) in DMSO (54 ml) was added TEA (3.0 ml, 21 mmol). After 10 min, methyl thioglycolate (3.1 ml, 32 mmol) was added and the mixture was left to stir for 30 min at room temperature. After 30 minutes, the mixture was heated to 60°C for 1 hour. After cooling to room temperature, the mixture was diluted with saturated aqueous NaHCO 3 and EtOAc. The organic layer was separated, dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The residue of the crude material was purified by silica gel chromatography (0→15% gradient EtOAc in hexanes) to give methyl 4-bromo-6-methoxybenzo[b]thiophene-2-carboxylate. LC-MS (C 11 H 10 BrO 3 S) (ES, m/z): 301, 303 [M+H] + . 1 H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.93 (s, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.44-7.37 (m, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.87 (s, 3H).
Стадия 3: 4-бром-6-метоксибензо[b]тиофеп-2-карбоновая кислотаStep 3: 4-bromo-6-methoxybenzo[b]thiophep-2-carboxylic acid
К смеси метил 4-бром-6-метоксибензо[b]тиофен-2-карбоксилата (1.7 г, 5.5 ммоль) в THF (14 мл), МеОН (7.0 мл) и воде (7.0 мл) добавляли LiOH (0.66 г, 28 ммоль) и смесь нагревали до 40°С в течение 2 ч. Через 2 ч смесь оставляли охлаждаться до комнатной температуры. Смесь останавливали водной HCl (2.0 М в воде, 14 мл, 28 ммоль). Смесь фильтровали, и остаток промывали EtOAc. Остаток затем высушивали под вакуумом и применяли без дополнительной очистки. ЖХ-МС (C10H8BrO3S) (ES, m/z): 287, 289 [М+Н]+. 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 13.57 (s, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.38 (d, J=1.1 Гц, 1H), 3.86 (s, 3Н).LiOH (0.66 g, 28 mmol) and the mixture was heated to 40°C for 2 hours. After 2 hours, the mixture was allowed to cool to room temperature. The mixture was quenched with aqueous HCl (2.0 M in water, 14 mL, 28 mmol). The mixture was filtered and the residue was washed with EtOAc. The residue was then dried under vacuum and used without further purification. LC-MS (C 10 H 8 BrO 3 S) (ES, m/z): 287, 289 [M+H] + . 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 13.57 (s, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.38 (d, J=1.1 Hz, 1H), 3.86 (s, 3H).
Промежуточное соединение 10: Этил 4-(5-(3-бромпропил)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноатIntermediate 10: Ethyl 4-(5-(3-bromopropyl)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate
Стадия 1: этил 4-(6-метокси-5-(3-((тетрагидро-2Н-пирап-2-ил)окси)пропил)бензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноатStep 1: Ethyl 4-(6-methoxy-5-(3-((tetrahydro-2H-pyrap-2-yl)oxy)propyl)benzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate
К смеси этил 4-(5-бром-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата (13 г, 35 ммоль) и C-Phos Pd G4 (1.4 г, 1.7 ммоль) добавляли однократно (3-((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)пропил)цинк (II) бромид (0.50 М в THF, 100 мл, 50 ммоль). Реакцию нагревали до 40°С в течение 2 ч. Смесь затем оставляли охлаждаться до комнатной температуры и фильтровали через целит. Фильтрат концентрировали под пониженным давлением. Полученный в результате остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (0→30% градиент EtOAc в гексанах) с получением этил 4-(6-метокси-5-(3-((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)пропил)бензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C23H31O6S) (ES, m/z): 435 [М+Н]+. 1Н ЯМР (600 МГц, DMSO-d6) δ 8.21 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 4.50 (s, 1H), 4.02 (q, J=7.0 Гц, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.70 (t, J=8.1 Гц, 1H), 3.65-3.58 (m, 1H), 3.40-3.34 (m, 1H), 3.33-3.29 (m, 3H), 2.73-2.59 (m, 4H), 1.79 (p, J=6.7 Гц, 2H), 1.69 (d, J=8.7 Гц, 1H), 1.58 (t, J=7.9 Гц, 1H), 1.48-1.34 (m, 4H), 1.14 (t, J=7.1 Гц, 3H).To a mixture of ethyl 4-(5-bromo-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate (13 g, 35 mmol) and C-Phos Pd G4 (1.4 g, 1.7 mmol) was added once (3 -((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)propyl)zinc (II) bromide (0.50 M in THF, 100 ml, 50 mmol). The reaction was heated to 40°C for 2 hours. The mixture was then allowed to cool to room temperature and filtered through celite. The filtrate was concentrated under reduced pressure. The resulting residue was purified by silica gel column chromatography (0→30% EtOAc gradient in hexanes) to give ethyl 4-(6-methoxy-5-(3-((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy) propyl)benzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate. LC-MS (C 23 H 31 O 6 S) (ES, m/z): 435 [M+H] + . 1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.21 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 4.50 (s, 1H), 4.02 (q, J=7.0 Hz, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.70 (t, J=8.1 Hz, 1H), 3.65-3.58 (m, 1H), 3.40-3.34 (m, 1H), 3.33-3.29 (m, 3H), 2.73 -2.59 (m, 4H), 1.79 (p, J=6.7 Hz, 2H), 1.69 (d, J=8.7 Hz, 1H), 1.58 (t, J=7.9 Hz, 1H), 1.48-1.34 (m, 4H), 1.14 (t, J=7.1 Hz, 3H).
Стадия 2: этил 4-(5-(3-бромпропил)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноатStep 2: Ethyl 4-(5-(3-bromopropyl)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate
К смеси 4-(6-метокси-5-(3-((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)пропил)бензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата (6.2 г, 14 ммоль) и DCM (100 мл) при 0°С добавляли трифенилфосфин дибромид (9.03 г, 21.4 ммоль) порциями. Смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры и затем перемешивали в течение 1 ч. Затем реакцию останавливали водой и разбавляли DCM. Органический слой отделяли, высушивали над Na2SO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Полученный в результате остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (0→30% градиент EtOAc в гексанах) с получением этил 4-(5-(3-бромпропил)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C18H22BrO4S) (ES, m/z): 413, 415 [М+Н]+. 1H ЯМР (600 МГц, DMSO-d6) δ 8.23 (s, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.58 (s, 1H), 4.02 (q, J=7.0 Гц, 2H), 3.86 (s, 3Н), 3.50 (t, J=6.5 Гц, 2H), 3.27 (d, J=6.4 Гц, 2H), 2.75 (t, J=7.3 Гц, 2H), 2.63 (t, J=6.2 Гц, 2H), 2.07 (p, J=6.7 Гц, 2H), 1.14 (t, J=7.1 Гц, 3Н).To a mixture of 4-(6-methoxy-5-(3-((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)propyl)benzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate (6.2 g, 14 mmol ) and DCM (100 ml) at 0°C, triphenylphosphine dibromide (9.03 g, 21.4 mmol) was added in portions. The mixture was allowed to warm to room temperature and then stirred for 1 hour. The reaction was then quenched with water and diluted with DCM. The organic layer was separated, dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The resulting residue was purified by silica gel column chromatography (0→30% EtOAc gradient in hexanes) to give ethyl 4-(5-(3-bromopropyl)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4- oxobutanoate. LC-MS (C 18 H 22 BrO 4 S) (ES, m/z): 413, 415 [M+H] + . 1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.23 (s, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.58 (s, 1H), 4.02 (q, J=7.0 Hz, 2H), 3.86 (s, 3H), 3.50 (t, J=6.5 Hz, 2H), 3.27 (d, J=6.4 Hz, 2H), 2.75 (t, J=7.3 Hz, 2H), 2.63 (t, J=6.2 Hz, 2H) , 2.07 (p, J=6.7 Hz, 2H), 1.14 (t, J=7.1 Hz, 3H).
Промежуточное соединение 11: Этил 4-(4-фтор-5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноатIntermediate 11: Ethyl 4-(4-fluoro-5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate
Стадия 1: метил 4-фтор-5,6-диметоксибензо[b]тиофен-2-карбоксилатStep 1: Methyl 4-fluoro-5,6-dimethoxybenzo[b]thiophene-2-carboxylate
1-Хлорметил-4-фтор-1,4-диазониабицикло[2.2.2]октан бис(тетрафторборат) (Selectfluor™, 77 мг, 0.22 ммоль) добавляли к смеси метил 5,6-диметоксибензо[b]тиофен-2-карбоксилата (50 мг, 0.20 ммоль) в ACN (1 мл) при комнатной температуре. Полученную в результате смесь перемешивали при 45°С в течение 15 ч. Смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли насыщенным водным NaHCO3 (10 мл) и экстрагировали EtOAc (3×10 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным водным NaCl (10 мл), высушивали над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью препаративной TLC (SiO2, EtOAc в РЕ) с получением метил 4-фтор-5,6-диметоксибензо[b]тиофен-2-карбоксилата. ЖХ-МС (C12H12FO4S) (ES, m/z): 293 [М+Н]+. 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ 8.05 (s, 1H), 7.08 (s, 1H), 3.99 (s, 3Н), 3.97 (s, 3Н), 3.94 (s, 3Н).1-Chloromethyl-4-fluoro-1,4-diazoniabicyclo[2.2.2]octane bis(tetrafluoroborate) (Selectfluor™, 77 mg, 0.22 mmol) was added to the methyl 5,6-dimethoxybenzo[b]thiophene-2-carboxylate mixture (50 mg, 0.20 mmol) in ACN (1 ml) at room temperature. The resulting mixture was stirred at 45°C for 15 hours. The mixture was cooled to room temperature, diluted with saturated aqueous NaHCO 3 (10 ml) and extracted with EtOAc (3×10 ml). The combined organic layers were washed with saturated aqueous NaCl (10 ml), dried over anhydrous Na 2 SO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by preparative TLC (SiO 2 , EtOAc in PE) to give methyl 4-fluoro-5,6-dimethoxybenzo[b]thiophene-2-carboxylate. LC-MS (C 12 H 12 FO 4 S) (ES, m/z): 293 [M+H] + . 1H NMR (400 MHz, CDCl 3 ): δ 8.05 (s, 1H), 7.08 (s, 1H), 3.99 (s, 3H), 3.97 (s, 3H), 3.94 (s, 3H).
Стадия 2: 4-фтор-5,6-диметоксибензо[b]тиофен-2-карбоновая кислотаStep 2: 4-fluoro-5,6-dimethoxybenzo[b]thiophene-2-carboxylic acid
LiOH⋅Н2О (71.4 мг, 1.70 ммоль) добавляли порциями к смеси метил 4-фтор-5,6-диметоксибензо[b]тиофен-2-карбоксилата (46 мг, 0.170 ммоль) в THF (3 мл), МеОН (1 мл) и Н2О (1 мл) при комнатной температуре. Затем смесь перемешивали в течение 15 ч. Смесь доводили до рН = 5 с помощью 1 н. HCl и экстрагировали EtOAc (3×10 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным водным NaCl (10 мл), высушивали над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (ACN/H2O с 0.1% TFA) с получением 4-фтор-5,6-диметоксибензо[b]тиофен-2-карбоновой кислоты. ЖХ-МС (C11H9FO4S) (ES, m/z): 257 [М+Н]+. 1H ЯМР (400 МГц, CDCl3): δ 8.12 (s, 1Н), 7.09 (s, 1Н), 3.99 (s, 3Н), 3.97 (s, 3Н).LiOH⋅H 2 O (71.4 mg, 1.70 mmol) was added in portions to a mixture of methyl 4-fluoro-5,6-dimethoxybenzo[b]thiophene-2-carboxylate (46 mg, 0.170 mmol) in THF (3 ml), MeOH ( 1 ml) and H 2 O (1 ml) at room temperature. The mixture was then stirred for 15 hours. The mixture was adjusted to pH = 5 with 1 N. HCl and extracted with EtOAc (3×10 ml). The combined organic layers were washed with saturated aqueous NaCl (10 ml), dried over anhydrous Na 2 SO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by preparative HPLC (ACN/H 2 O with 0.1% TFA) to give 4-fluoro-5,6-dimethoxybenzo[b]thiophene-2-carboxylic acid. LC-MS (C 11 H 9 FO 4 S) (ES, m/z): 257 [M+H] + . 1 H NMR (400 MHz, CDCl 3 ): δ 8.12 (s, 1H), 7.09 (s, 1H), 3.99 (s, 3H), 3.97 (s, 3H).
Стадия 3: 4-фтор-5,6-диметоксибензо[b]тиофен-2-карбонилхлоридStep 3: 4-fluoro-5,6-dimethoxybenzo[b]thiophene-2-carbonyl chloride
К перемешанному раствору 4-фтор-5,6-диметоксибензо[b]тиофен-2-карбоновой кислоты (153 мг, 0.60 ммоль) в безводном THF (5 мл) добавляли (COCl)2 (0.21 мл, 2.40 ммоль) по каплям при 0°С. Смесь перемешивали при 0°С в течение 1 ч и затем при комнатной температуре в течение 1 ч. Растворитель удаляли под пониженным давлением с получением 4-фтор-5,6-диметоксибензо[b]тиофен-2-карбонилхлорида, который применяли без дополнительной очистки.To a stirred solution of 4-fluoro-5,6-dimethoxybenzo[b]thiophene-2-carboxylic acid (153 mg, 0.60 mmol) in anhydrous THF (5 ml) was added (COCl) 2 (0.21 ml, 2.40 mmol) dropwise at 0°C. The mixture was stirred at 0°C for 1 hour and then at room temperature for 1 hour. The solvent was removed under reduced pressure to give 4-fluoro-5,6-dimethoxybenzo[b]thiophene-2-carbonyl chloride, which was used without further purification .
Стадия 4: этил 4-(4-фтор-5,6-диметоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноатStep 4: Ethyl 4-(4-fluoro-5,6-dimethoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate
Суспензию тиофен-2-карбоксилата меди (I) (125 мг, 0.65 ммоль) продували N2 в течение 5 мин и затем охлаждали до 0°С. Раствор (3-этокси-3-оксопропил)цинка (II) бромида (17.7 мл, 0.5 М в THF, 8.83 ммоль) добавляли в атмосфере N2 при 0°С, и реакционную смесь перемешивали в течение 20 мин при 0°С.Затем добавляли продутый N2 раствор 4-фтор-5,6-диметоксибензо[6]тиофен-2-карбонилхлорида (130 мг, 0.47 ммоль) в THF (3 мл) при 0°С. Полученную в результате суспензию оставляли нагреваться до комнатной температуры и перемешивали в течение 8 ч. Смесь выливали в насыщенный водный NH4Cl (20 мл) с перемешиванием. Смесь экстрагировали EtOAc (2×20 мл). Объединенные органические слои промывали Н2О и насыщенным водным NaCl, высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (EtOAc в гексанах) с получением этил 4-(4-фтор-5,6-диметоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C16H18FO5S) (ES, m/z): 341 [М+Н]+. 1Н ЯМР (500 МГц, CDCl3) δ 8.02 (d, J=0.7 Гц, 1H), 7.10 (t, J=1.0 Гц, 1H), 4.19 (q, J=7.2 Гц, 2Н), 4.05-3.97 (m, 6Н), 3.36 (t, J=6.7 Гц, 2Н), 2.81 (t, J=6.7 Гц, 2Н), 1.29 (t, J=7.2 Гц, 3Н).A suspension of copper(I) thiophene-2-carboxylate (125 mg, 0.65 mmol) was purged with N 2 for 5 min and then cooled to 0°C. A solution of (3-ethoxy-3-oxopropyl)zinc(II) bromide (17.7 ml, 0.5 M in THF, 8.83 mmol) was added under N 2 at 0°C, and the reaction mixture was stirred for 20 min at 0°C. A N 2 -purged solution of 4-fluoro-5,6-dimethoxybenzo[6]thiophene-2-carbonyl chloride (130 mg, 0.47 mmol) in THF (3 mL) was then added at 0°C. The resulting suspension was allowed to warm to room temperature and stirred for 8 hours. The mixture was poured into saturated aqueous NH 4 Cl (20 ml) with stirring. The mixture was extracted with EtOAc (2×20 ml). The combined organic layers were washed with H 2 O and saturated aqueous NaCl, dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel column chromatography (EtOAc in hexanes) to give ethyl 4-(4-fluoro-5,6-dimethoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate. LC-MS (C 16 H 18 FO 5 S) (ES, m/z): 341 [M+H] + . 1H NMR (500 MHz, CDCl 3 ) δ 8.02 (d, J=0.7 Hz, 1H), 7.10 (t, J=1.0 Hz, 1H), 4.19 (q, J=7.2 Hz, 2H), 4.05-3.97 (m, 6H), 3.36 (t, J=6.7 Hz, 2H), 2.81 (t, J=6.7 Hz, 2H), 1.29 (t, J=7.2 Hz, 3H).
Стадия 5: этил 4-(4-фтор-5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноатStep 5: Ethyl 4-(4-fluoro-5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate
К смеси этил 4-(4-фтор-5,6-диметоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата (3.6 г, 11 ммоль) и DCM (50 мл) добавляли AlCl3 (5.64 г, 42.3 ммоль). Реакционную смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 18 ч. К реакционному сосуду затем присоединяли капельную воронку, и к смеси медленно добавляли воду (50 мл) с энергичным перемешиванием с последующим добавлением водной HCl (1 н., 50 мл). Смесь затем разбавляли 20% IPA/DCM. Органический слой отделяли, высушивали над Na2SO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Полученный в результате остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (100% DCM) с получением этил 4-(4-фтор-5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C15H16FO5S) (ES, m/z): 327 [М+Н]+. 1H ЯМР (600 МГц, DMSO-d6) δ 9.53 (s, 1Н), 8.25 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 4.06 (q, J=7.1 Гц, 2H), 3.92 (s, 3Н), 3.39-3.34 (m, 2Н), 2.68-2.63 (m, 2Н), 1.18 (t, J=7.1 Гц, 3Н).AlCl 3 (5.64 g, 42.3 mmol) was added to a mixture of ethyl 4-(4-fluoro-5,6-dimethoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate (3.6 g, 11 mmol) and DCM (50 ml) ). The reaction mixture was left stirring at room temperature for 18 hours. A dropping funnel was then attached to the reaction vessel and water (50 mL) was slowly added to the mixture with vigorous stirring followed by the addition of aqueous HCl (1 N, 50 mL). The mixture was then diluted with 20% IPA/DCM. The organic layer was separated, dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The resulting residue was purified by silica gel column chromatography (100% DCM) to give ethyl 4-(4-fluoro-5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate. LC-MS (C 15 H 16 FO 5 S) (ES, m/z): 327 [M+H] + . 1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.53 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 4.06 (q, J=7.1 Hz, 2H), 3.92 (s, 3H), 3.39-3.34 (m, 2H), 2.68-2.63 (m, 2H), 1.18 (t, J=7.1 Hz, 3H).
Промежуточное соединение 12: (S)-метил 4-(5-(3-гидроксипропил)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатIntermediate 12: (S)-methyl 4-(5-(3-hydroxypropyl)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
Стадия 1: (2S)-метил-4-(6-метокси-5-(3-((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)пропил)бензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатStep 1: (2S)-methyl-4-(6-methoxy-5-(3-((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)propyl)benzo[b]thiophen-2-yl)-2- methyl 4-oxobutanoate
К смеси (S)-метил-4-(5-бром-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата (7.0 г, 19 ммоль) и C-Phos Pd G4 (0.76 г, 0.94 ммоль) добавляли (3-((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)пропил)цинк (II) бромид (0.50 М в THF, 100 мл, 50 ммоль). Смесь нагревали до 40°С в течение 2 ч. Смесь затем оставляли охлаждаться до комнатной температуры и фильтровали через целит. Фильтрат концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (0→30% градиент EtOAc в гексанах) с получением этил (2S)-метил-4-(6-метокси-5-(3-((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)пропил)бензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C23H31O6S) (ES, m/z): 435 [М+Н]+. 1Н ЯМР (600 МГц, DMSO-d6) δ 8.21 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 4.50 (s, 1H), 3.85 (s, 3Н), 3.70 (dd, J=13.2, 5.3 Гц, 1H), 3.64-3.58 (m, 1H), 3.56 (s, 3H), 3.42-3.35 (m, 2H), 3.35-3.29 (m, 1H), 3.15 (dd, J=17.4, 4.9 Гц, 1H), 2.94 (dt, J=12.9, 7.1 Гц, 1H), 2.67 (hept, J=7.6, 7.1 Гц, 2H), 1.79 (p, J=6.7 Гц, 2H), 1.69 (d, J=8.7 Гц, 1H), 1.58 (t, J=7.9 Гц, 1H), 1.48-1.35 (m, 4H), 1.18-1.11 (m, 3H).To a mixture of (S)-methyl-4-(5-bromo-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate (7.0 g, 19 mmol) and C-Phos Pd G4 (0.76 g, 0.94 mmol) (3-((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)propyl)zinc (II) bromide (0.50 M in THF, 100 ml, 50 mmol) was added. The mixture was heated to 40°C for 2 hours. The mixture was then allowed to cool to room temperature and filtered through celite. The filtrate was concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel column chromatography (0→30% EtOAc gradient in hexanes) to give ethyl (2S)-methyl-4-(6-methoxy-5-(3-((tetrahydro-2H-pyran-2-yl )oxy)propyl)benzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate. LC-MS (C 23 H 31 O 6 S) (ES, m/z): 435 [M+H] + . 1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.21 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 4.50 (s, 1H), 3.85 (s, 3H), 3.70 ( dd, J=13.2, 5.3 Hz, 1H), 3.64-3.58 (m, 1H), 3.56 (s, 3H), 3.42-3.35 (m, 2H), 3.35-3.29 (m, 1H), 3.15 (dd, J=17.4, 4.9 Hz, 1H), 2.94 (dt, J=12.9, 7.1 Hz, 1H), 2.67 (hept, J=7.6, 7.1 Hz, 2H), 1.79 (p, J=6.7 Hz, 2H), 1.69 (d, J=8.7 Hz, 1H), 1.58 (t, J=7.9 Hz, 1H), 1.48-1.35 (m, 4H), 1.18-1.11 (m, 3H).
Стадия 2: (S)-метил 4-(5-(3-гидроксипропил)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатStep 2: (S)-methyl 4-(5-(3-hydroxypropyl)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
К смеси (2S)-метил-4-(6-метокси-5-(3-((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)пропил)бензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата (2.62 г, 6.03 ммоль) и МеОН (50 мл) добавляли pTsOH (1.72 г, 9.04 ммоль). Смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 1 ч. Затем реакцию останавливали водой и разбавляли DCM. Органический слой отделяли и затем промывали водным насыщенным NaHCO3. Органический слой затем высушивали над Na2SO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением с получением (S)-метил 4-(5-(3-гидроксипропил)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2метил-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C18H23O5S) (ES, m/z): 351 [М+Н]+. 1H ЯМР (600 МГц, DMSO-d6) δ 8.21 (s, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.54 (s, 1H), 4.44 (t, J=5.0 Гц, 1H), 3.85 (s, 3H), 3.56 (s, 3H), 3.42-3.35 (m, 3H), 3.15 (dd, J=17.4, 4.9 Гц, 1H), 2.93 (h, J=7.0 Гц, 1H), 2.64 (t, J=7.6 Гц, 2H), 1.68 (p, J=6.6 Гц, 2H), 1.15 (d, J=7.1 Гц, 3Н).To a mixture of (2S)-methyl-4-(6-methoxy-5-(3-((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)propyl)benzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl -4-oxobutanoate (2.62 g, 6.03 mmol) and MeOH (50 ml) were added pTsOH (1.72 g, 9.04 mmol). The mixture was left stirring at room temperature for 1 hour. The reaction was then quenched with water and diluted with DCM. The organic layer was separated and then washed with aqueous saturated NaHCO 3 . The organic layer was then dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure to give (S)-methyl 4-(5-(3-hydroxypropyl)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2methyl-4 -oxobutanoate. LC-MS (C 18 H 23 O 5 S) (ES, m/z): 351 [M+H] + . 1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.21 (s, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.54 (s, 1H), 4.44 (t, J=5.0 Hz, 1H), 3.85 (s, 3H), 3.56 (s, 3H), 3.42-3.35 (m, 3H), 3.15 (dd, J=17.4, 4.9 Hz, 1H), 2.93 (h, J=7.0 Hz, 1H), 2.64 (t, J =7.6 Hz, 2H), 1.68 (p, J=6.6 Hz, 2H), 1.15 (d, J=7.1 Hz, 3H).
Промежуточное соединение 13: Метил 4-(5-(3-бромпропил)-6-метилбензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноатIntermediate 13: Methyl 4-(5-(3-bromopropyl)-6-methylbenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate
Стадия 1: метил 5-бром-6-метилбензо[b]тиофен-2-карбоксилатStep 1: Methyl 5-bromo-6-methylbenzo[b]thiophene-2-carboxylate
К смеси 5-бром-2-фтор-4-метилбензальдегида (5.0 г, 23 ммоль) в DMSO (120 мл) добавляли TEA (6.4 мл, 46 ммоль). Через 10 мин добавляли метил тиогликолят (6.7 мл, 69 ммоль) и смесь затем нагревали до 60°С в течение 18 ч. Через 18 ч смесь охлаждали до комнатной температуры и разбавляли EtOAc и водой. Органический слой отделяли, высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Смесь разбавляли DCM. Смесь фильтровали, и остаток высушивали под вакуумом. К маточному раствору добавляли силикагель (50 г) и смесь концентрировали. Смесь затем очищали с помощью хроматографии на силикагеле с получением метил 5-бром-6-метилбензо[b]тиофен-2-карбоксилата. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8.31 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 3.89 (s, 3Н), 2.48 (s, 3Н).To a mixture of 5-bromo-2-fluoro-4-methylbenzaldehyde (5.0 g, 23 mmol) in DMSO (120 ml) was added TEA (6.4 ml, 46 mmol). After 10 minutes, methyl thioglycolate (6.7 ml, 69 mmol) was added and the mixture was then heated to 60°C for 18 hours. After 18 hours, the mixture was cooled to room temperature and diluted with EtOAc and water. The organic layer was separated, dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The mixture was diluted with DCM. The mixture was filtered and the residue was dried under vacuum. Silica gel (50 g) was added to the mother liquor and the mixture was concentrated. The mixture was then purified by silica gel chromatography to give methyl 5-bromo-6-methylbenzo[b]thiophene-2-carboxylate. 1 H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.31 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 3.89 (s, 3H), 2.48 (s, 3H).
Стадия 2: 5-бром-6-метилбензо[b]тиофен-2-каубоноеая кислотаStep 2: 5-bromo-6-methylbenzo[b]thiophene-2-caubonic acid
К смеси метил 5-бром-6-метилбензо[b]тиофен-2-карбоксилата (2.76 г, 9.68 ммоль) в THF (24 мл), воде (12 мл) и МеОН (12 мл) добавляли LiOH (1.16 г, 48.4 ммоль) и смесь перемешивали в течение 30 мин при комнатной температуре. Смесь затем подкисляли почти до нейтрального рН с помощью HCl (1.0 М в воде, 48 мл, 48 ммоль). Смесь затем разбавляли EtOAc и водой. Органический слой отделяли, высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали с получением 5-бром-6-метилбензо[b]тиофен-2-карбоновой кислоты. Продукт применяли без очистки. ЖХ-МС (C10H8BrO2S) (ES, m/z): 271, 273 [М+Н]+. 1Н ЯМР (499 МГц, DMSO-d6) δ 13.56 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 8.04 (s, 1H), 2.47 (s, 3Н).To a mixture of methyl 5-bromo-6-methylbenzo[b]thiophene-2-carboxylate (2.76 g, 9.68 mmol) in THF (24 ml), water (12 ml) and MeOH (12 ml) was added LiOH (1.16 g, 48.4 mmol) and the mixture was stirred for 30 min at room temperature. The mixture was then acidified to near neutral pH with HCl (1.0 M in water, 48 mL, 48 mmol). The mixture was then diluted with EtOAc and water. The organic layer was separated, dried over MgSO 4 , filtered and concentrated to give 5-bromo-6-methylbenzo[b]thiophene-2-carboxylic acid. The product was used without purification. LC-MS (C 10 H 8 BrO 2 S) (ES, m/z): 271, 273 [M+H] + . 1H NMR (499 MHz, DMSO- d6 ) δ 13.56 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 8.04 (s, 1H), 2.47 (s, 3H).
Стадия 3: 5-бром-6-метилбензо[b]тиофенStep 3: 5-bromo-6-methylbenzo[b]thiophene
К 5-бром-6-метилбензо[b]тиофен-2-карбоновой кислоте (5.7 г, 21 ммоль) добавляли DMA (100 мл). Смесь затем разделяли поровну в 5 виал. DBU (1.6 мл) добавляли к каждой виале, и каждую виалу затем облучали в микроволновой печи до 200°С в течение 2 ч. После завершения пять виал объединяли и затем разбавляли EtOAc и насыщенным водным NaHCO3. Органический слой отделяли, высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле с получением 5-бром-6-метилбензо[b]тиофена. 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8.15 (s, 1H), 8.00 (s, 1Н), 7.75 (d, J=5A Гц, 1Н), 7.39 (d, J=5.3 Гц, 1Н), 2.45 (s, 3Н).DMA (100 ml) was added to 5-bromo-6-methylbenzo[b]thiophene-2-carboxylic acid (5.7 g, 21 mmol). The mixture was then divided equally into 5 vials. DBU (1.6 ml) was added to each vial, and each vial was then irradiated in a microwave oven at 200°C for 2 hours. Once complete, the five vials were combined and then diluted with EtOAc and saturated aqueous NaHCO 3 . The organic layer was separated, dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography to give 5-bromo-6-methylbenzo[b]thiophene. 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.15 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.75 (d, J=5A Hz, 1H), 7.39 (d, J=5.3 Hz, 1H) , 2.45 (s, 3H).
Стадия 4: 4-(5-бром-6-метилбензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутановая кислотаStep 4: 4-(5-bromo-6-methylbenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoic acid
К смеси 5-бром-6-метилбензо[b]тиофена (2.0 г, 8.8 ммоль) в DCM (88 мл) при 0°С добавляли сукциновый ангидрид (1.1 г, 11 ммоль) и затем AlCl3 (2.3 г, 18 ммоль). Смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 18 ч. Смесь затем разбавляли EtOAc и HCl (1.0 н. в воде). Органический слой отделяли, высушивали над MgSO4 и фильтровали. К фильтрату добавляли силикагель (10 г) и смесь концентрировали под пониженным давлением. Смесь помещали под вакуум в течение 18 ч и затем очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0→50% градиент EtOAc в гексанах) с получением 4-(5-бром-6-метилбензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутановой кислоты. ЖХ-МС (C13H12BrO3S) (ES, m/z): 327, 329 [М+Н]+.To a mixture of 5-bromo-6-methylbenzo[b]thiophene (2.0 g, 8.8 mmol) in DCM (88 ml) at 0°C was added succinic anhydride (1.1 g, 11 mmol) and then AlCl 3 (2.3 g, 18 mmol ). The mixture was warmed to room temperature and stirred for 18 hours. The mixture was then diluted with EtOAc and HCl (1.0 N in water). The organic layer was separated, dried over MgSO 4 and filtered. Silica gel (10 g) was added to the filtrate, and the mixture was concentrated under reduced pressure. The mixture was placed under vacuum for 18 hours and then purified by silica gel chromatography (0→50% gradient EtOAc in hexanes) to give 4-(5-bromo-6-methylbenzo[b]thiophen-2-yl)-4- oxobutanoic acid. LC-MS (C 13 H 12 BrO 3 S) (ES, m/z): 327, 329 [M+H] + .
Стадия 5: метил 4-(5-бром-6-метилбензо[b]тиофеп-2-ил)-4-оксобутаноатStep 5: Methyl 4-(5-bromo-6-methylbenzo[b]thiophep-2-yl)-4-oxobutanoate
К смеси 4-(5-бром-6-метилбензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутановой кислоты (0.99 г, 3.0 ммоль) в DMF (20 мл) добавляли K2CO3 (1.0 г, 7.6 ммоль). Через 10 мин добавляли CH3I (0.95 мл, 15 ммоль) и смесь оставляли перемешиваться до завершения реакции по данным ЖХ-МС. Смесь затем разбавляли EtOAc и водой. Органический слой отделяли, высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Полученный в результате остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле с получением метил 4-(5-бром-6-метилбензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C14H14BrO3S) (ES, m/z): 341, 343 [М+Н]+. 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8.32 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.07 (s, 1H), 3.61 (s, 3Н), 3.37 (t, J=6.3 Гц, 2Н), 2.70 (t, J=6.3 Гц, 2Н), 2.48 (s, 3Н).To a mixture of 4-(5-bromo-6-methylbenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoic acid (0.99 g, 3.0 mmol) in DMF (20 ml) was added K 2 CO 3 (1.0 g, 7.6 mmol ). After 10 min, CH 3 I (0.95 ml, 15 mmol) was added and the mixture was left to stir until the reaction was complete according to LC-MS. The mixture was then diluted with EtOAc and water. The organic layer was separated, dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The resulting residue was purified by silica gel chromatography to give methyl 4-(5-bromo-6-methylbenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate. LC-MS (C 14 H 14 BrO 3 S) (ES, m/z): 341, 343 [M+H] + . 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.32 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.07 (s, 1H), 3.61 (s, 3H), 3.37 (t, J=6.3 Hz, 2H), 2.70 (t, J=6.3 Hz, 2H), 2.48 (s, 3H).
Стадия 6: метил 4-(5-(3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)пропил)-6-метилбензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноатStep 6: Methyl 4-(5-(3-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)propyl)-6-methylbenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate
В колбу, содержащую метил 4-(5-бром-6-метилбензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноат (0.40 г, 1.2 ммоль) и THF (5.9 мл), добавляли C-Phos Pd G3 (47 мг, 0.059 ммоль) и смесь три раза откачивали и снова заполняли N2. Добавляли (3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)пропил)цинк (II) бромид (0.50 М в THF, 7.0 мл, 3.5 ммоль) и смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 2.5 ч. Затем реакцию останавливали смесью EtOAc и 10% водного цитрата натрия. Органический слой отделяли, промывали насыщенным водным NaCl, высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле с получением метил 4-(5-(3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)пропил)-6-метилбензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C23H35O4SSi) (ES, m/z): 435 [М+Н]+.C-Phos Pd G3 (47 mg, 0.059 mmol) and the mixture was evacuated three times and filled with N 2 again. (3-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)propyl)zinc(II) bromide (0.50 M in THF, 7.0 mL, 3.5 mmol) was added and the mixture was left stirring at room temperature for 2.5 h. The reaction was then quenched with a mixture of EtOAc and 10 % aqueous sodium citrate. The organic layer was separated, washed with saturated aqueous NaCl, dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography to give methyl 4-(5-(3-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)propyl)-6-methylbenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate. LC-MS (C 23 H 35 O 4 SSi) (ES, m/z): 435 [M+H] + .
Стадия 7: метил 4-(5-(3-гидроксипропил)-6-метилбензо[b]тиофеп-2-ил)-4-оксобутапоатStep 7: Methyl 4-(5-(3-hydroxypropyl)-6-methylbenzo[b]thiophep-2-yl)-4-oxobutapoate
К смеси метил 4-(5-(3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)пропил)-6-метил-бензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата (0.23 г, 0.54 ммоль) в THF (2.7 мл) добавляли TBAF (1.0 М в THF, 1.0 мл, 1.0 ммоль). Через 1.5 ч смесь разбавляли EtOAc и насыщенным водным NH4Cl. Органический слой отделяли, высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0→70% градиент EtOAc в гексанах) с получением метил 4-(5-(3-гидроксипропил)-6-метилбензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C17H21O4S) (ES, m/z): 321 [М+Н]+. 1Н ЯМР (499 МГц, DMSO-d6) δ 8.30 (s, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 4.55 (t, J=5.1 Гц, 1H), 3.61 (s, 3H), 3.51-3.46 (m, 2H), 3.38-3.34 (m, 2H), 2.77-2.66 (m, 4H), 2.41 (s, 3H), 1.79-1.67 (m, 2H).To a mixture of methyl 4-(5-(3-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)propyl)-6-methyl-benzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate (0.23 g, 0.54 mmol) in THF ( 2.7 mL) TBAF (1.0 M in THF, 1.0 mL, 1.0 mmol) was added. After 1.5 h, the mixture was diluted with EtOAc and saturated aqueous NH 4 Cl. The organic layer was separated, dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (0→70% EtOAc gradient in hexanes) to give methyl 4-(5-(3-hydroxypropyl)-6-methylbenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate. LC-MS (C 17 H 21 O 4 S) (ES, m/z): 321 [M+H] + . 1 H NMR (499 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.30 (s, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 4.55 (t, J=5.1 Hz, 1H), 3.61 (s, 3H), 3.51-3.46 (m, 2H), 3.38-3.34 (m, 2H), 2.77-2.66 (m, 4H), 2.41 (s, 3H), 1.79-1.67 (m, 2H).
Стадия 8: метил 4-(5-(3-бромпропил)-6-метилбензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноатStep 8: Methyl 4-(5-(3-bromopropyl)-6-methylbenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate
К перемешанной смеси метил 4-(5-(3-гидроксипропил)-6-метилбензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата (97 мг, 0.30 ммоль) и Ph3P (130 мг, 0.48 ммоль) в THF (1.5 мл) при 0°С добавляли NBS (81 мг, 0.45 ммоль) одной порцией. Через 30 мин реакцию останавливали насыщенным водным NH4Cl и EtOAc. Органический слой отделяли, высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0→25% градиент EtOAc в гексанах) с получением метил 4-(5-(3-бромпропил)-6-метилбензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C17H20BrO3S) (ES, m/z): 383, 385 [М+Н]+.To a stirred mixture of methyl 4-(5-(3-hydroxypropyl)-6-methylbenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate (97 mg, 0.30 mmol) and Ph 3 P (130 mg, 0.48 mmol) in THF (1.5 ml) at 0°C, NBS (81 mg, 0.45 mmol) was added in one portion. After 30 min the reaction was stopped with saturated aqueous NH 4 Cl and EtOAc. The organic layer was separated, dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (0→25% EtOAc gradient in hexanes) to give methyl 4-(5-(3-bromopropyl)-6-methylbenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate. LC-MS (C 17 H 20 BrO 3 S) (ES, m/z): 383, 385 [M+H] + .
Промежуточное соединение 14: трет-бутил 4-(5-(3-гидроксипропил)-6-метокситиено[3,2-b]пиридин-2-ил)-4-оксобутаноатIntermediate 14: tert-butyl 4-(5-(3-hydroxypropyl)-6-methoxythieno[3,2-b]pyridin-2-yl)-4-oxobutanoate
Стадия 1: трет-бутил 4-(5-хлор-6-метокситиено[3,2-b]пиридин-2-ил)-4-оксобутаноатStep 1: tert-butyl 4-(5-chloro-6-methoxythieno[3,2-b]pyridin-2-yl)-4-oxobutanoate
CuCl (0.721 г, 7.29 ммоль) добавляли в 250 мл круглодонную колбу с мешалкой. Колбу три раза откачивали и затем продували N2. В колбу добавляли THF (14.6 мл) и затем перемешивали и охлаждали до 0°С на бане с ледяной водой. Затем добавляли (3-(трет-бутокси)-3-оксопропил)цинк (II) (0.50 М THF, 30 мл, 15 ммоль) по каплям в течение 10 мин, перемешивая при 0°С. Полученную в результате смесь перемешивали при 0°С в течение 35 мин. Добавляли 5-хлор-6-метокси тиено[3,2-b]пиридин-2-карбонилхлорид (1.91 г, 7.29 ммоль) с последующим добавлением NMP (14.6 мл). Полученную в результате смесь перемешивали в течение 7 ч при 0°С. К реакционной смеси добавляли концентрированный NH4OH (4 мл) с быстрым перемешиванием при 0°С.К этой суспензии добавляли воду : МеОН (4:1 140 мл) вместе с ~20 г дигидрата трехосновного цитрата натрия. Смесь перемешивали в течение 20 мин. Полученную в результате суспензию фильтровали, и осадок на фильтре промывали водой. Осадок затем суспендировали в гексане и дважды фильтровали. Осадок вакуумировали с продуванием N2 в течение 72 ч с получением трет-бутил 4-(5-хлор-6-метокситиено[3,2-b]пиридин-2-ил)-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C16H19ClNO4S) (ES, m/z): 356 [М+Н]+. 1Н ЯМР (500 МГц, CDCl3) δ 8.03 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 4.03 (s, 3Н), 3.30 (t, J=6.5 Гц, 2Н), 2.87-2.59 (m, 2Н), 1.46 (s, 9Н).CuCl (0.721 g, 7.29 mmol) was added to a 250 mL round bottom flask with a stirrer. The flask was evacuated three times and then purged with N 2 . THF (14.6 ml) was added to the flask and then stirred and cooled to 0°C in an ice water bath. Then (3-(tert-butoxy)-3-oxopropyl)zinc(II) (0.50 M THF, 30 ml, 15 mmol) was added dropwise over 10 min, stirring at 0°C. The resulting mixture was stirred at 0°C for 35 minutes. 5-chloro-6-methoxy thieno[3,2-b]pyridine-2-carbonyl chloride (1.91 g, 7.29 mmol) was added followed by NMP (14.6 ml). The resulting mixture was stirred for 7 hours at 0°C. Concentrated NH 4 OH (4 ml) was added to the reaction mixture with rapid stirring at 0°C. To this suspension was added water:MeOH (4:1 140 ml) along with ~20 g of tribasic sodium citrate dihydrate. The mixture was stirred for 20 minutes. The resulting suspension was filtered and the filter cake was washed with water. The precipitate was then suspended in hexane and filtered twice. The residue was evacuated and purged with N 2 for 72 hours to give tert-butyl 4-(5-chloro-6-methoxythieno[3,2-b]pyridin-2-yl)-4-oxobutanoate. LC-MS (C 16 H 19 ClNO 4 S) (ES, m/z): 356 [M+H] + . 1H NMR (500 MHz, CDCl 3 ) δ 8.03 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 4.03 (s, 3H), 3.30 (t, J=6.5 Hz, 2H), 2.87-2.59 (m, 2H), 1.46 (s, 9H).
Стадия 2: трет-бутил 4-(5-(3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)пропил)-6-метокситиено[3,2-b]пиридин-2-ил)-4-оксобутаноатStep 2: tert-butyl 4-(5-(3-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)propyl)-6-methoxythieno[3,2-b]pyridin-2-yl)-4-oxobutanoate
трет-Бутил 4-(5-хлор-6-метокситиено[3,2-b]пиридин-2-ил)-4-оксобутаноат (1.00 г, 2.81 ммоль) и CPhos Pd G3 (0.113 г, 0.141 ммоль) добавляли в 40 мл виалу с винтовой крышкой с септой. Виалу три раза откачивали и снова заполняли N2. В виалу добавляли THF (10.0 мл) в атмосфере N2 с перемешиванием. При перемешивании полученной суспензии при комнатной температуре добавляли по каплям (3-трет-бутилдиметилсилил)окси)пропил)цинк (II) бромид (0.50 М в THF, 11.2 мл, 5.60 ммоль). Полученную в результате смесь перемешивали в течение 3 ч при комнатной температуре. Смесь разделяли между EtOAc (75 мл) и 10% водным цитратом натрия (75 мл) и энергично перемешивали в течение 5 мин. Слои разделяли, и водный слой экстрагировали EtOAc (20 мл). Органические слои объединяли, промывали насыщенным водным NaCl (50 мл), высушивали над безводным Na2SO4, концентрировали под пониженным давлением с получением сырого остатка. Полученный в результате остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0→40% градиент EtOAc в гексанах) с получением трет-бутил 4-(5-(3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)пропил)-6-метокситиено[3,2-b]пиридин-2-ил)-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C25H40NO5SSi) (ES, m/z): 494 [М+Н]+. 1Н ЯМР (500 МГц, CDCl3) δ 8.08 (s, 1Н), 7.48 (s, 1H), 3.94 (s, 3Н), 3.75 (t, J=6.5 Гц, 2Н), 3.30 (t, J=6.6 Гц, 2Н), 3.02-2.95 (m. 2Н), 2.73 (t, J=6.6 Гц, 2Н), 2.03-1.96 (т, 2Н), 1.46 (s, 9Н), 0.92 (s, 9Н), 0.07 (s, 6Н).tert-Butyl 4-(5-chloro-6-methoxythieno[3,2-b]pyridin-2-yl)-4-oxobutanoate (1.00 g, 2.81 mmol) and CPhos Pd G3 (0.113 g, 0.141 mmol) were added to 40 ml vial with screw cap and septum. The vial was pumped out three times and filled again with N 2 . THF (10.0 ml) was added to the vial under N 2 atmosphere with stirring. While stirring the resulting suspension at room temperature, (3-tert-butyldimethylsilyl)oxy)propyl)zinc (II) bromide (0.50 M in THF, 11.2 ml, 5.60 mmol) was added dropwise. The resulting mixture was stirred for 3 hours at room temperature. The mixture was partitioned between EtOAc (75 ml) and 10% aqueous sodium citrate (75 ml) and stirred vigorously for 5 min. The layers were separated and the aqueous layer was extracted with EtOAc (20 ml). The organic layers were combined, washed with saturated aqueous NaCl (50 ml), dried over anhydrous Na 2 SO 4 , concentrated under reduced pressure to obtain a crude residue. The resulting residue was purified by silica gel chromatography (0→40% gradient EtOAc in hexanes) to give tert-butyl 4-(5-(3-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)propyl)-6-methoxythieno[3. 2-b]pyridin-2-yl)-4-oxobutanoate. LC-MS (C 25 H 40 NO 5 SSi) (ES, m/z): 494 [M+H] + . 1H NMR (500 MHz, CDCl 3 ) δ 8.08 (s, 1H), 7.48 (s, 1H), 3.94 (s, 3H), 3.75 (t, J=6.5 Hz, 2H), 3.30 (t, J= 6.6 Hz, 2H), 3.02-2.95 (m. 2H), 2.73 (t, J=6.6 Hz, 2H), 2.03-1.96 (t, 2H), 1.46 (s, 9H), 0.92 (s, 9H), 0.07 (s, 6H).
Стадия 3: трет-бутил 4-(5-(3-гидуоксипуопил)-6-метокситиено[3,2-b]пиридин-2-ил)-4-оксобутаноатStep 3: tert-butyl 4-(5-(3-hydroxypuopyl)-6-methoxythieno[3,2-b]pyridin-2-yl)-4-oxobutanoate
К смеси трет-бутил 4-(5-(3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)пропил)-6-метокситиено[3,2-b]пиридин-2-ил)-4-оксобутаноата (0.735 г, 1.49 ммоль) в МеОН (3.0 мл) добавляли воду (3.0 мл) и затем НОАс (3.0 мл). Полученную в результате смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Смесь затем разделяли между EtOAc (50 мл), водой (25 мл) и насыщенным водным NaCl (25 мл). Слои разделяли, и водный слой экстрагировали EtOAc (50 мл). Органические слои объединяли, промывали насыщенным водным NaCl (50 мл), высушивали над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Полученный в результате остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0→100% градиент EtOAc в гексане, затем изократическое элюирование при 100% EtOAc) с получением трет-бутил 4-(5-(3-гидроксипропил)-6-метокситиено[3,2-b]пиридин-2-ил)-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C19H26NO5S) (ES, m/z): 380 [М+Н]+. 1Н ЯМР (500 МГц, CDCl3) δ 8.06 (s, 1Н), 7.51 (s, 1Н), 3.95 (s, 3Н), 3.73 (t, J=5.8 Гц, 2Н), 3.28 (t, J=6.6 Гц, 2Н), 3.10 (t, J=6.9 Гц, 2Н), 2.72 (t, J=6.6 Гц, 2Н), 2.06 (р, J=6.5 Гц, 2Н), 1.45 (s, 9Н).To a mixture of tert-butyl 4-(5-(3-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)propyl)-6-methoxythieno[3,2-b]pyridin-2-yl)-4-oxobutanoate (0.735 g, 1.49 mmol ) water (3.0 ml) and then HOAc (3.0 ml) were added to MeOH (3.0 ml). The resulting mixture was stirred at room temperature for 18 hours. The mixture was then partitioned between EtOAc (50 ml), water (25 ml) and saturated aqueous NaCl (25 ml). The layers were separated and the aqueous layer was extracted with EtOAc (50 ml). The organic layers were combined, washed with saturated aqueous NaCl (50 ml), dried over anhydrous Na 2 SO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The resulting residue was purified by silica gel chromatography (0→100% EtOAc gradient in hexanes, then isocratic elution with 100% EtOAc) to give tert-butyl 4-(5-(3-hydroxypropyl)-6-methoxythieno[3, 2-b]pyridin-2-yl)-4-oxobutanoate. LC-MS (C 19 H 26 NO 5 S) (ES, m/z): 380 [M+H] + . 1H NMR (500 MHz, CDCl 3 ) δ 8.06 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.73 (t, J=5.8 Hz, 2H), 3.28 (t, J= 6.6 Hz, 2H), 3.10 (t, J=6.9 Hz, 2H), 2.72 (t, J=6.6 Hz, 2H), 2.06 (p, J=6.5 Hz, 2H), 1.45 (s, 9H).
Промежуточное соединение 15: трет-Бутил 4-(5-бром-6-метоксибензо[b]тиазол-2-ил)-4-оксобутаноатIntermediate 15: tert-Butyl 4-(5-bromo-6-methoxybenzo[b]thiazol-2-yl)-4-oxobutanoate
Стадия 1: метил 2-((3-6ром-4-метоксифенил)амино)-2-оксоацетатStep 1: Methyl 2-((3-6rom-4-methoxyphenyl)amino)-2-oxoacetate
В 5 л 4-хгорлую круглодонную колбу, которую продували и в которой поддерживали инертную атмосферу N2, помещали смесь 3-бром-4-метоксианилина (232 г, 1.15 моль) в DCM (3.0 л), DIPEA (171 г, 1.32 моль) и метил 2-хлор-2-оксоацетата (148 г, 1.21 моль). Полученную в результате смесь перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре. Реакцию затем останавливали добавлением смеси воды/льда (2 л). Полученную в результате смесь экстрагировали DCM (3×1 л). Органические слои объединяли и концентрировали под пониженным давлением с получением метил 2-((3-бром-4-метоксифенил)амино)-2-оксоацетата, который применяли без очистки или определения характеристик.A mixture of 3-bromo-4-methoxyaniline (232 g, 1.15 mol) in DCM (3.0 L), DIPEA (171 g, 1.32 mol) was placed in a 5 L 4-neck round bottom flask, which was purged and maintained under an inert atmosphere of N 2 ) and methyl 2-chloro-2-oxoacetate (148 g, 1.21 mol). The resulting mixture was stirred for 1 hour at room temperature. The reaction was then stopped by adding a water/ice mixture (2 L). The resulting mixture was extracted with DCM (3×1 L). The organic layers were combined and concentrated under reduced pressure to give methyl 2-((3-bromo-4-methoxyphenyl)amino)-2-oxoacetate, which was used without purification or characterization.
Стадия 2: О-метил 2-((3-бром-4-метоксифенил)амино)-2-оксоэтантиоатStep 2: O-methyl 2-((3-bromo-4-methoxyphenyl)amino)-2-oxoethanethanioate
В 3 л 4-хгорлую круглодонную колбу, которую продували и в которой поддерживали инертную атмосферу N2, помещали смесь метил 2-((3-бром-4-метоксифенил)амино)-2-оксоацетата (111 г, 386 ммоль) в толуоле (1.5 л) и реагента Лавессона (86.4 г, 214 ммоль). Полученную в результате смесь нагревали до 85°С в течение 16 ч. Реакционную смесь затем охлаждали до комнатной температуры. Полученные в результате вещества удаляли путем фильтрования и промывали DCM (3×500 мл). Фильтрат концентрировали под пониженным давлением, и остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (EtOAc/РЕ (1:20)) с получением О-метил 2-((3-бром-4-метоксифенил)амино)-2-оксоэтантиоата, который применяли без определения характеристик.A mixture of methyl 2-((3-bromo-4-methoxyphenyl)amino)-2-oxoacetate (111 g, 386 mmol) in toluene was placed in a 3 L 4-neck round bottom flask, which was purged and maintained under an inert atmosphere of N 2 (1.5 L) and Lawesson's reagent (86.4 g, 214 mmol). The resulting mixture was heated to 85°C for 16 hours. The reaction mixture was then cooled to room temperature. The resulting substances were removed by filtration and washed with DCM (3×500 ml). The filtrate was concentrated under reduced pressure and the residue was purified by silica gel chromatography (EtOAc/PE (1:20)) to give O-methyl 2-((3-bromo-4-methoxyphenyl)amino)-2-oxoethanethanioate, which was used without defining characteristics.
Стадия 3: 5-бром-6-метоксибензо[d]тиазол-2-карбоновая кислота, калиевая соль и 7-бром-6-метоксибензо[d]тиазол-2-карбоновая кислота, калиевая соль (смесь изомеров 2:1)Step 3: 5-bromo-6-methoxybenzo[d]thiazole-2-carboxylic acid, potassium salt and 7-bromo-6-methoxybenzo[d]thiazole-2-carboxylic acid, potassium salt (mixture of isomers 2:1)
В 2 л 4-хгорлую круглодонную колбу, которую продували и в которой поддерживали инертную атмосферу N2, помещали метил О-метил 2-((3-бром-4-метоксифенил)амино)-2-оксоэтантиоат (84.5 г, 278 ммоль). В реакционную смесь добавляли смесь KOH (50 г, 90 ммоль) в Н2О (500 мл) в течение 10 мин. Затем к реакционной смеси добавляли смесь гидрата ферроцианида калия (III) (242 г, 735 ммоль) в Н2О (2 л) в течение 10 мин. рН полученной в результате смеси доводили до 2 с помощью водной HCl (2.0 М). Затем добавляли воду (500 мл). Полученную в результате смесь оставляли перемешиваться в течение 1 ч при комнатной температуре. Полученное в результате вещество затем собирали путем фильтрования и промывали DCM (1 л). Остаток суспендировали в водном KOH (2.0 М, 500 мл, 1 моль) в течение 0.5 ч. Полученное в результате вещество затем собирали путем фильтрования и промывали Н2О (2×500 мл) с получением 2:1 смеси 5-бром-6-метоксибензо[d]тиазол-2-карбоновой кислоты, калиевой соли и 7-бром-6-метоксибензо[d]тиазол-2-карбоновой кислоты, калиевой соли. Характеристики для 5-бром-6-метоксибензо[d]тиазол-2-карбоновой кислоты, калиевой соли (главный изомер): 1Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d6, ppm) δ 8.13 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 3.80 (s, 3Н). Характеристики для 7-бром-6-метоксибензо[d]тиазол-2-карбоновой кислоты, калиевой соли (минорный изомер): 1Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d6, ррь) 7.90 (d, J=8.9 Гц, 1H), 7.26 (d, J=8.9 Гц, 1H), 3.91 (s, 3Н).Methyl O-methyl 2-((3-bromo-4-methoxyphenyl)amino)-2-oxoethanethanioate (84.5 g, 278 mmol) was placed in a 2 L 4-neck round bottom flask, which was purged and maintained under an inert atmosphere of N2 . . A mixture of KOH (50 g, 90 mmol) in H 2 O (500 ml) was added to the reaction mixture over 10 minutes. A mixture of potassium ferrocyanide hydrate (242 g, 735 mmol) in H 2 O (2 L) was then added to the reaction mixture over 10 minutes. The pH of the resulting mixture was adjusted to 2 with aqueous HCl (2.0 M). Then water (500 ml) was added. The resulting mixture was left to stir for 1 hour at room temperature. The resulting material was then collected by filtration and washed with DCM (1 L). The residue was suspended in aqueous KOH (2.0 M, 500 ml, 1 mol) for 0.5 h. The resulting material was then collected by filtration and washed with H 2 O (2 x 500 ml) to give a 2:1 mixture of 5-bromo-6 -methoxybenzo[d]thiazole-2-carboxylic acid, potassium salt and 7-bromo-6-methoxybenzo[d]thiazole-2-carboxylic acid, potassium salt. Characteristics for 5-bromo-6-methoxybenzo[d]thiazole-2-carboxylic acid, potassium salt (main isomer): 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6 , ppm) δ 8.13 (s, 1H), 7.70 ( s, 1H), 3.80 (s, 3H). Characteristics for 7-bromo-6-methoxybenzo[d]thiazole-2-carboxylic acid, potassium salt (minor isomer): 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 , ppb) 7.90 (d, J=8.9 Hz, 1H ), 7.26 (d, J=8.9 Hz, 1H), 3.91 (s, 3H).
Стадия 4: 5-бром-6-метоксибензо[d]тиазол-2-карбоновая кислота и 7-бром-6-метоксибензо[d]тиазол-2-карбоновая кислота (смесь изомеров 2:1)Step 4: 5-bromo-6-methoxybenzo[d]thiazole-2-carboxylic acid and 7-bromo-6-methoxybenzo[d]thiazole-2-carboxylic acid (2:1 mixture of isomers)
В 1 л колбу добавляли 5-бром-6-метоксибензо[d]тиазол-2-карбоновую кислоту, калиевую соль и 7-бром-6-метоксибензо[d]тиазол-2-карбоновую кислоту, калиевую соль (смесь изомеров 2:1) (22.4 г, 49.4 ммоль), воду (300 мл), ACN (180 мл), МеОН (120 мл) и TFA (11.4 мл, 148 ммоль). Смесь энергично перемешивали в течение 15 мин при комнатной температуре. Полученное в результате вещество собирали путем фильтрования и промывали водой (2×20 мл), МеОН (2×5 мл) и Et2O (2×10 мл) с получением смеси 2:1 5-бром-6-метоксибензо[d]тиазол-2-карбоновой кислоты и 7-бром-6-метоксибензо[d]тиазол-2-карбоновой кислоты. Характеристики для 5-бром-6-метоксибензо[d]тиазол-2-карбоновой кислоты (главный изомер): 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8.45 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 3.96 (s, 3Н). Характеристики для 7-бром-6-метоксибензо[d]тиазол-2-карбоновой кислоты (минорный изомер): 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8.21 (d, J=9.0 Гц, 1H), 7.51 (d, J=9.0 Гц, 1H), 4.00 (s, 3Н).5-bromo-6-methoxybenzo[d]thiazole-2-carboxylic acid, potassium salt and 7-bromo-6-methoxybenzo[d]thiazole-2-carboxylic acid, potassium salt (mixture of isomers 2:1) were added to a 1 L flask ) (22.4 g, 49.4 mmol), water (300 ml), ACN (180 ml), MeOH (120 ml) and TFA (11.4 ml, 148 mmol). The mixture was stirred vigorously for 15 minutes at room temperature. The resulting material was collected by filtration and washed with water (2×20 ml), MeOH (2×5 ml) and Et 2 O (2×10 ml) to obtain a 2:1 mixture of 5-bromo-6-methoxybenzo[d] thiazole-2-carboxylic acid and 7-bromo-6-methoxybenzo[d]thiazole-2-carboxylic acid. Characteristics for 5-bromo-6-methoxybenzo[d]thiazole-2-carboxylic acid (main isomer): 1H NMR (500 MHz, DMSO- d6 ) δ 8.45 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 3.96 (s, 3H). Characteristics for 7-bromo-6-methoxybenzo[d]thiazole-2-carboxylic acid (minor isomer): 1 H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.21 (d, J=9.0 Hz, 1H), 7.51 ( d, J=9.0 Hz, 1H), 4.00 (s, 3H).
Стадия 5: метил 5-бром-6-метоксибензо[d]тиазол-2-каубоксилатStep 5: Methyl 5-bromo-6-methoxybenzo[d]thiazole-2-cauboxylate
В 250 мл колбу добавляли 5-бром-6-метоксибензо[d]тиазол-2-карбоновую кислоту и 7-бром-6-метоксибензо[d]тиазол-2-карбоновую кислоту (смесь изомеров 2:1) (17.2 г, 41.8 ммоль) и МеОН (150 мл). Смесь энергично перемешивали и охлаждали до 0°С. К перемешиваемой смеси добавляли SOCl2 (6.1 мл, 84 ммоль) по каплям в течение 10 мин. Смесь затем нагревали до кипения с обратным холодильником в течение 18 ч. После охлаждения до комнатной температуры полученное в результате вещество собирали путем фильтрования и промывали МеОН (2×20 мл). Вещество очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0→30% градиент EtOAc в DCM) с получением метил 5-бром-6-метоксибензо[d]тиазол-2-карбоксилата в виде единственного изомера. ЖХ-МС (C10H9BrNO3S) (ES, m/z): 302, 304 (М+Н)+. 1Н ЯМР (500 МГц, CDCl3) δ 8.42 (s, 1Н), 7.40 (s, 1H), 4.09 (s, 3Н), 4.02 (s, 3Н).5-bromo-6-methoxybenzo[d]thiazole-2-carboxylic acid and 7-bromo-6-methoxybenzo[d]thiazole-2-carboxylic acid (2:1 mixture of isomers) (17.2 g, 41.8 mmol) and MeOH (150 ml). The mixture was vigorously stirred and cooled to 0°C. SOCl 2 (6.1 ml, 84 mmol) was added dropwise to the stirred mixture over 10 minutes. The mixture was then heated to reflux for 18 hours. After cooling to room temperature, the resulting material was collected by filtration and washed with MeOH (2×20 ml). The material was purified by silica gel chromatography (0→30% EtOAc gradient in DCM) to give methyl 5-bromo-6-methoxybenzo[d]thiazole-2-carboxylate as the single isomer. LC-MS (C 10 H 9 BrNO 3 S) (ES, m/z): 302, 304 (M+H) + . 1H NMR (500 MHz, CDCl 3 ) δ 8.42 (s, 1H), 7.40 (s, 1H), 4.09 (s, 3H), 4.02 (s, 3H).
Стадия б: 5-бром-6-метоксибензо[d]тиазол-2-каубоновая кислотаStep b: 5-bromo-6-methoxybenzo[d]thiazole-2-caubonic acid
В 500 мл круглодонную колбу добавляли метил 5-бром-6-метоксибензо[d]тиазол-2-карбоксилат (7.3 г, 24 ммоль) и МеОН (150 мл). К энергично перемешиваемой смеси добавляли водный NaOH (2.0 М, 37 мл, 74 ммоль). Смесь нагревали до кипения с обратным холодильником в течение 30 мин. После охлаждения до комнатной температуры добавляли по каплям водный HCl (2.0 М, 37 мл, 74 ммоль). Смесь энергично перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Полученное в результате вещество собирали путем фильтрования и промывали водой (2×50 мл) и МеОН (2×20 мл) с получением 5-бром-6-метоксибензо[d]тиазол-2-карбоновой кислоты. ЖХ-МС (C9H7BrNO3S) (ES, m/z): 288, 290 (М+Н). 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8.45 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 3.96 (s, 3Н).Methyl 5-bromo-6-methoxybenzo[d]thiazole-2-carboxylate (7.3 g, 24 mmol) and MeOH (150 ml) were added to a 500 ml round bottom flask. Aqueous NaOH (2.0 M, 37 mL, 74 mmol) was added to the vigorously stirred mixture. The mixture was heated to reflux for 30 minutes. After cooling to room temperature, aqueous HCl (2.0 M, 37 mL, 74 mmol) was added dropwise. The mixture was stirred vigorously at room temperature for 18 hours. The resulting material was collected by filtration and washed with water (2 x 50 ml) and MeOH (2 x 20 ml) to give 5-bromo-6-methoxybenzo[d]thiazol-2 -carboxylic acid. LC-MS (C 9 H 7 BrNO 3 S) (ES, m/z): 288, 290 (M+H). 1 H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.45 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 3.96 (s, 3H).
Стадия 7: 5-бром-6-метоксибензо[d]тиазол-2-карбонилхлоридStep 7: 5-bromo-6-methoxybenzo[d]thiazole-2-carbonyl chloride
В 100 мл круглодонную колбу добавляли 5-бром-6-метоксибензо[с1]тиазол-2-карбоновую кислоту (1.46 г, 5.07 ммоль), DCM (25 мл) и DMF (0.080 мл, 1.0 ммоль). К смеси добавляли (СОС1)г (5.32 мл, 10.6 ммоль) по каплям в течение 1 мин, и смесь энергично перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин. Смесь затем фильтровали через целит. Фильтрат концентрировали под пониженным давлением с получением 5-бром-6-метоксибензо[d]тиазол-2-карбонилхлорида, который применяли без дополнительной очистки или определения характеристик.5-Bromo-6-methoxybenzo[c1]thiazole-2-carboxylic acid (1.46 g, 5.07 mmol), DCM (25 mL) and DMF (0.080 mL, 1.0 mmol) were added to a 100 mL round bottom flask. (COC1)g (5.32 mL, 10.6 mmol) was added dropwise to the mixture over 1 min, and the mixture was stirred vigorously at room temperature for 15 min. The mixture was then filtered through celite. The filtrate was concentrated under reduced pressure to give 5-bromo-6-methoxybenzo[d]thiazole-2-carbonyl chloride, which was used without further purification or characterization.
Стадия 8: трет-бутил 4-(5-бром-6-метоксибензо[с1]тиазол-2-ил)-4-оксобутаноатStep 8: tert-butyl 4-(5-bromo-6-methoxybenzo[c1]thiazol-2-yl)-4-oxobutanoate
В 250 мл круглодонную колбу добавляли CuCl (0.45 г, 4.6 ммоль). Колбу три раза откачивали и заполняли N2. Добавляли THF (10 мл) и смесь перемешивали и охлаждали до 0°С. К смеси добавляли (3-(трет-бутокси)-3-оксопропил)цинк (II) бромид (0.50 М в THF, 18 мл, 9.0 ммоль). Через 10 мин добавляли по каплям смесь 5-бром-6-метокси-бензо[d]тиазол-2-карбонилхлорида (1.4 г, 4.6 ммоль) в NMP (30 мл) в течение 5 мин. Через 5 мин смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры и затем перемешивали в течение 1 ч. К смеси добавляли воду (30 мл) и концентрированный водный NH4OH (15 мл). Смесь экстрагировали EtOAc (125 мл) и органический слой промывали водой (2×75 мл). Органический слой высушивали над Na2SO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0→75% градиент EtOAc в гексанах) с получением трет-бутил 4-(5-бром-6-метоксибензо[d]тиазол-2-ил)-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C16H18BrNO4S + Na) (ES, m/z): 422, 424 [M+Na]+. 1H ЯМР (500 МГц, CDCl3) δ 8.38 (s, 1H), 7.40 (s, 1H), 4.02 (s, 3H), 3.51 (t, J=6.6 Гц, 2H), 2.75 (t, J=6.6 Гц, 2H), 1.46 (s, 9H).CuCl (0.45 g, 4.6 mmol) was added to a 250 mL round bottom flask. The flask was evacuated three times and filled with N 2 . THF (10 ml) was added and the mixture was stirred and cooled to 0°C. (3-(tert-butoxy)-3-oxopropyl)zinc(II) bromide (0.50 M in THF, 18 mL, 9.0 mmol) was added to the mixture. After 10 min, a mixture of 5-bromo-6-methoxy-benzo[d]thiazole-2-carbonyl chloride (1.4 g, 4.6 mmol) in NMP (30 ml) was added dropwise over 5 min. After 5 minutes, the mixture was allowed to warm to room temperature and then stirred for 1 hour. Water (30 ml) and concentrated aqueous NH 4 OH (15 ml) were added to the mixture. The mixture was extracted with EtOAc (125 ml) and the organic layer was washed with water (2×75 ml). The organic layer was dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (0→75% EtOAc gradient in hexanes) to give tert-butyl 4-(5-bromo-6-methoxybenzo[d]thiazol-2-yl)-4-oxobutanoate. LC-MS (C 16 H 18 BrNO 4 S + Na) (ES, m/z): 422, 424 [M+Na] + . 1 H NMR (500 MHz, CDCl 3 ) δ 8.38 (s, 1H), 7.40 (s, 1H), 4.02 (s, 3H), 3.51 (t, J=6.6 Hz, 2H), 2.75 (t, J= 6.6 Hz, 2H), 1.46 (s, 9H).
Промежуточное соединение 16: трет-бутил 4-(5-(3-6ромпропил)-6-метоксибензо[d]тиазол-2-ил)-4-оксобутаноатIntermediate 16: tert-butyl 4-(5-(3-6rompropyl)-6-methoxybenzo[d]thiazol-2-yl)-4-oxobutanoate
Стадия 1: трет-бутил 4-(5-(3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)пропил)-6-метоксибензо[d]тиазол-2-ил)-4-оксо6утаиоатStep 1: tert-butyl 4-(5-(3-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)propyl)-6-methoxybenzo[d]thiazol-2-yl)-4-oxo6utaioate
В 4 мл виалу добавляли трет-бутил 4-(5-бром-6-метоксибензо[d]тиазол-2-ил)-4-оксобутаноат (233 мг, 0.581 ммоль) и C-Phos Pd G3 (14 мг, 0.018 ммоль). Виалу три раза откачивали и заполняли N2. В виалу добавляли THF (0.60 мл) с последующим добавлением (3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)пропил)цинка(II) бромида (0.50 М в THF, 2.90 мл, 1.45 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 мин. К смеси добавляли дополнительный (3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-пропил)цинк (II) бромид (0.50 М в THF, 1.4 мл, 0.73 ммоль). Через 30 мин смесь разбавляли EtOAc (30 мл) и промывали 10% водным трехосновным цитратом натрия (30 мл). Органический слой отделяли, высушивали над Na2SO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Полученный в результате остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0→40% градиент EtOAc в гексанах) с получением трет-бутил 4-(5-(3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)пропил)-6-метоксибензо[d]тиазол-2-ил)-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C25H40NO5SSi) (ES, m/z): 494 [М+Н]+. 1H ЯМР (500 МГц, CDCl3) δ 7.93 (s, 1Н), 7.31 (s, 1H), 3.94 (s, 3Н), 3.70 (t, J=6.3 Гц, 2Н), 3.53 (t, J=6.6 Гц, 2Н), 2.86-2.78 (m, 2Н), 2.74 (t, J=6.6 Гц, 2Н), 1.94-1.84 (т, 2Н), 1.45 (s, 9Н), 0.93 (s, 9Н).Tert-butyl 4-(5-bromo-6-methoxybenzo[d]thiazol-2-yl)-4-oxobutanoate (233 mg, 0.581 mmol) and C-Phos Pd G3 (14 mg, 0.018 mmol) were added to a 4 ml vial ). The vial was evacuated three times and filled with N2 . THF (0.60 mL) was added to the vial, followed by the addition of (3-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)propyl)zinc(II) bromide (0.50 M in THF, 2.90 mL, 1.45 mmol). The mixture was stirred at room temperature for 20 minutes. Additional (3-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)-propyl)zinc(II) bromide (0.50 M in THF, 1.4 mL, 0.73 mmol) was added to the mixture. After 30 min, the mixture was diluted with EtOAc (30 ml) and washed with 10% aqueous tribasic sodium citrate (30 ml). The organic layer was separated, dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The resulting residue was purified by silica gel chromatography (0→40% gradient EtOAc in hexanes) to give tert-butyl 4-(5-(3-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)propyl)-6-methoxybenzo[d] thiazol-2-yl)-4-oxobutanoate. LC-MS (C 25 H 40 NO 5 SSi) (ES, m/z): 494 [M+H] + . 1 H NMR (500 MHz, CDCl 3 ) δ 7.93 (s, 1H), 7.31 (s, 1H), 3.94 (s, 3H), 3.70 (t, J=6.3 Hz, 2H), 3.53 (t, J= 6.6 Hz, 2H), 2.86-2.78 (m, 2H), 2.74 (t, J=6.6 Hz, 2H), 1.94-1.84 (t, 2H), 1.45 (s, 9H), 0.93 (s, 9H).
Стадия 2: трет-бутил 4-(5-(3-гидроксипропил)-6-метоксибензо[d]тиазол-2-ил)-4-оксобутапоатStep 2: tert-butyl 4-(5-(3-hydroxypropyl)-6-methoxybenzo[d]thiazol-2-yl)-4-oxobutapoate
В 100 мл колбу добавляли трет-бутил 4-(5-(3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)пропил)-6-метоксибензо[d]тиазол-2-ил)-4-оксобутаноат (229 мг, 0.464 ммоль), МеОН (5.0 мл), воду (5.0 мл) и АсОН (5.0 мл). Смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 4 ч. Смесь затем разбавляли EtOAc (50 мл) и промывали водой (3×50 мл). Органический слой отделяли, высушивали над Na2SO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением с получением трет-бутил 4-(5-(3-гидроксипропил)-6-метоксибензо[d]тиазол-2-ил)-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C19H26NO5S) (ES, m/z): 380 [М+Н]+. 1H ЯМР (500 МГц, CDCl3) δ 7.95 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 3.96 (s, 3Н), 3.70 (t, J=6.3 Гц, 2Н), 3.52 (t, J=6.1 Гц, 2Н), 2.87 (t, J=7.5 Гц, 2Н), 2.75 (t, J=6.6 Гц, 2Н), 2.00-1.90 (m, 2Н), 1.46 (s, 9Н).Tert-butyl 4-(5-(3-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)propyl)-6-methoxybenzo[d]thiazol-2-yl)-4-oxobutanoate (229 mg, 0.464 mmol) was added to a 100 ml flask. , MeOH (5.0 ml), water (5.0 ml) and AcOH (5.0 ml). The mixture was left stirring at room temperature for 4 hours. The mixture was then diluted with EtOAc (50 ml) and washed with water (3×50 ml). The organic layer was separated, dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure to give tert-butyl 4-(5-(3-hydroxypropyl)-6-methoxybenzo[d]thiazol-2-yl)-4-oxobutanoate. LC-MS (C 19 H 26 NO 5 S) (ES, m/z): 380 [M+H] + . 1 H NMR (500 MHz, CDCl 3 ) δ 7.95 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.70 (t, J=6.3 Hz, 2H), 3.52 (t, J= 6.1 Hz, 2H), 2.87 (t, J=7.5 Hz, 2H), 2.75 (t, J=6.6 Hz, 2H), 2.00-1.90 (m, 2H), 1.46 (s, 9H).
Стадия 3: трет-бутил 4-(5-(3-бромпропил)-6-метоксибензо[d]тиазол-2-ил)-4-оксобутаноатStep 3: tert-butyl 4-(5-(3-bromopropyl)-6-methoxybenzo[d]thiazol-2-yl)-4-oxobutanoate
В 4 мл виалу добавляли CBr4 (72 мг, 0.22 ммоль), трифенилфосфин (62 мг, 0.24 ммоль) и трет-бутил 4-(5-(3-гидроксипропил)-6-метоксибензо[d]тиазол-2-ил)-4-оксобутаноат (69 мг, 0.18 ммоль). Виалу охлаждали до 0°С, и добавляли DCM (1.0 мл). Смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры в течение 90 мин. Смесь затем сразу очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0→30% градиент EtOAc в гексанах) с получением трет-бутил 4-(5-(3-бромпропил)-6-метоксибензо[d]тиазол-2-ил)-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C19H25BrNO4S) (ES, m/z): 442, 444 [М+Н]+. 1Н ЯМР (499 МГц, CDCl3) δ 7.96 (s, 1H), 7.33 (s, 1H), 3.52 (t, J=6.6 Гц, 2Н), 3.95 (s, 3Н), 3.45 (t, J=6.6 Гц, 2Н), 2.93 (t, J=7.2 Гц, 2Н), 2.75 (t, J=6.6 Гц, 2Н), 2.30-2.19 (m, 2Н), 1.46 (s, 9Н).CBr 4 (72 mg, 0.22 mmol), triphenylphosphine (62 mg, 0.24 mmol) and tert-butyl 4-(5-(3-hydroxypropyl)-6-methoxybenzo[d]thiazol-2-yl) were added to a 4 ml vial. -4-oxobutanoate (69 mg, 0.18 mmol). The vial was cooled to 0°C and DCM (1.0 ml) was added. The mixture was allowed to warm to room temperature for 90 minutes. The mixture was then immediately purified by silica gel chromatography (0→30% EtOAc gradient in hexanes) to give tert-butyl 4-(5-(3-bromopropyl)-6-methoxybenzo[d]thiazol-2-yl)-4- oxobutanoate. LC-MS (C 19 H 25 BrNO 4 S) (ES, m/z): 442, 444 [M+H] + . 1H NMR (499 MHz, CDCl 3 ) δ 7.96 (s, 1H), 7.33 (s, 1H), 3.52 (t, J=6.6 Hz, 2H), 3.95 (s, 3H), 3.45 (t, J= 6.6 Hz, 2H), 2.93 (t, J=7.2 Hz, 2H), 2.75 (t, J=6.6 Hz, 2H), 2.30-2.19 (m, 2H), 1.46 (s, 9H).
Промежуточное соединение 17: трет-бутил 4-(5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноатIntermediate 17: tert-butyl 4-(5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate
К смеси RockPhos Pd G3 (0.105 г, 0.125 ммоль), бензальдоксима (3.03 г, 25.0 ммоль), трет-бутил 4-(5-бром-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата (5.0 г, 13 ммоль) и Cs2CO3 (12.2 г, 37.6 ммоль) добавляли DMF (40 мл). Реакцию нагревали до 80°С в течение 18 ч. Реакционную смесь затем оставляли охлаждаться до комнатной температуры и выливали в колбу, содержащую водную HCl (0.5 М, 100 мл). Полученную в результате смесь экстрагировали DCM. Органический слой затем высушивали над Na2SO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Полученный в результате остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (0→50% градиент EtOAc в гексанах) с получением трет-бутил 4-(5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C17H20O5SNa) (ES, m/z): 359 [M+Na]+. 1H ЯМР (600 МГц, DMSO-d6) δ 9.35 (s, 1H), 8.12 (s, 1Н), 7.49 (s, 1H), 7.27 (s, 1H), 3.83 (s, 3H), 3.18 (t, J=6.2 Гц, 2H), 2.52 (t, J=6.2 Гц, 2H), 1.33 (s, 9H).To a mixture of RockPhos Pd G3 (0.105 g, 0.125 mmol), benzaldoxime (3.03 g, 25.0 mmol), tert-butyl 4-(5-bromo-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate (5.0 g, 13 mmol) and Cs 2 CO 3 (12.2 g, 37.6 mmol) DMF (40 ml) was added. The reaction was heated to 80°C for 18 hours. The reaction mixture was then allowed to cool to room temperature and poured into a flask containing aqueous HCl (0.5 M, 100 ml). The resulting mixture was extracted with DCM. The organic layer was then dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The resulting residue was purified by silica gel column chromatography (0→50% EtOAc gradient in hexanes) to give tert-butyl 4-(5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate. LC-MS (C 17 H 20 O 5 SNa) (ES, m/z): 359 [M+Na] + . 1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.35 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.49 (s, 1H), 7.27 (s, 1H), 3.83 (s, 3H), 3.18 ( t, J=6.2 Hz, 2H), 2.52 (t, J=6.2 Hz, 2H), 1.33 (s, 9H).
Промежуточное соединение 18: Этил 4-(5-(3-гидроксипропил)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноатIntermediate 18: Ethyl 4-(5-(3-hydroxypropyl)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate
К смеси этил 4-(6-метокси-5-(3-((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)пропил)бензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата (5.0 г, 12 ммоль) и EtOH (100 мл) добавляли pTsOH (4.4 г, 23 ммоль). Реакцию оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакцию затем останавливали водой и разбавляли DCM. Органический слой отделяли и промывали водным насыщенным NaHCO3. Органический слой высушивали над Na2SO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением с получением этил 4-(5-(3-гидроксипропил)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C18H23O5S) (ES, m/z): 351 [М+Н]+. 1Н ЯМР (600 МГц, DMSO-d6) δ 8.21 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 4.44 (t, J=5.0 Гц, 1H), 4.02 (q, J=7.0 Гц, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.40 (q, J=6.0 Гц, 2H), 3.27 (d, J=6.4 Гц, 2H), 2.63 (q, J=7.0, 5.9 Гц, 4H), 1.68 (p, J=6.6 Гц, 2H), 1.14 (t, J=7.1 Гц, 3Н).To a mixture of ethyl 4-(6-methoxy-5-(3-((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)propyl)benzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate (5.0 g, 12 mmol) and EtOH (100 ml) pTsOH (4.4 g, 23 mmol) was added. The reaction was left stirring at room temperature for 1 hour. The reaction was then stopped with water and diluted with DCM. The organic layer was separated and washed with aqueous saturated NaHCO 3 . The organic layer was dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure to give ethyl 4-(5-(3-hydroxypropyl)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate. LC-MS (C 18 H 23 O 5 S) (ES, m/z): 351 [M+H] + . 1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.21 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 4.44 (t, J=5.0 Hz, 1H), 4.02 (q, J=7.0 Hz, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.40 (q, J=6.0 Hz, 2H), 3.27 (d, J=6.4 Hz, 2H), 2.63 (q, J=7.0, 5.9 Hz, 4H), 1.68 (p, J=6.6 Hz, 2H), 1.14 (t, J=7.1 Hz, 3H).
Промежуточное соединение 19: метил (2S)-4-[5-(2-аминоэтил)-6-метокси-1-бензотиофен-2-ил]-2-метил-4-оксобутаноатIntermediate 19: Methyl (2S)-4-[5-(2-aminoethyl)-6-methoxy-1-benzothiophen-2-yl]-2-methyl-4-oxobutanoate
Стадия 1: метил (2S)-4-(5-{2-[(трет-бутоксикарбонил)амино]этил}-6-метокси-1-бензотиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатStep 1: Methyl (2S)-4-(5-{2-[(tert-butoxycarbonyl)amino]ethyl}-6-methoxy-1-benzothiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
К перемешиваемой смеси метил (2S)-4-(5-бром-6-метокси-1-бензотиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата (124 мг, 0.334 ммоль), трис(триметилсилил)силана (103 мкл, 0.334 ммоль) и безводного Na2CO3 (71 мг, 0.67 ммоль) в дегазированном DME (1.7 мл) в атмосфере N2, добавляли смесь Ir(2-(2,4-дифторфенил)-5-(трифторметил)пиридин)2 (4,4'-ди-трет-бутил-2,2'-бипиридин)PF6 (3.8 мг, 3.3 мкмоль) в дегазированном DME (1.2 мл). Добавляли суспензию комплекса никель (II) хлорид этиленгликоль диметиловый эфир (0.37 мг, 1.7 мкмоль) и 4,4'-ди-трет-бутил-2,2'-бипиридин (0.45 мг, 1.7 мкмоль) в дегазированном DME (445 мкл) и полученную в результате смесь перемешивали в атмосфере N2 в течение 15 мин при комнатной температуре. Добавляли трет-бутил N-(2-бромэтил)карбамат (150 мг, 0.67 ммоль) одной порцией в атмосфере N2, и реакционную смесь перемешивали и облучали двумя 34 W синими светодиодными лампами (на расстоянии 7 см с каждой стороны) в течение 18 ч при комнатной температуре. Смесь затем сразу очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (EtOAc в гексанах) с получением метил (2S)-4-(5-{2-[(трет-бутоксикарбонил)амино]этил}-6-метокси-1-бензотиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C22H30NO6S) (ES, m/z): 436 [М+Н]+. 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6): δ 8.25 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 6.86 (br, 1H), 3.88 (s, 3Н), 3.59 (s, 3Н), 3.43 (dd, J=17.5, 8.6 Гц, 1H), 3.19 (dd, J=17.5, 5.0 Гц, 1H), 3.15 (t, J=7.0 Гц, 2H), 3.01-2.93 (m, 1H), 2.77 (t, J=7.0 Гц, 2H), 1.34 (s, 9H), 1.19 (d, J=7.1 Гц, 3Н).To a stirred mixture of methyl (2S)-4-(5-bromo-6-methoxy-1-benzothiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate (124 mg, 0.334 mmol), tris(trimethylsilyl)silane (103 µl, 0.334 mmol) and anhydrous Na 2 CO 3 (71 mg, 0.67 mmol) in degassed DME (1.7 ml) under N 2 , a mixture of Ir(2-(2,4-difluorophenyl)-5-(trifluoromethyl)pyridine) was added )2 (4,4'-di-tert-butyl-2,2'-bipyridine)PF 6 (3.8 mg, 3.3 µmol) in degassed DME (1.2 ml). A suspension of nickel(II) chloride ethylene glycol dimethyl ether complex (0.37 mg, 1.7 µmol) and 4,4'-di-tert-butyl-2,2'-bipyridine (0.45 mg, 1.7 µmol) in degassed DME (445 µl) was added. and the resulting mixture was stirred under N 2 atmosphere for 15 minutes at room temperature. Tert-butyl N-(2-bromoethyl)carbamate (150 mg, 0.67 mmol) was added in one portion under N2 , and the reaction mixture was stirred and irradiated with two 34 W blue LED lamps (7 cm on each side) for 18 h at room temperature. The mixture was then immediately purified by silica gel flash column chromatography (EtOAc in hexanes) to give methyl (2S)-4-(5-{2-[(tert-butoxycarbonyl)amino]ethyl}-6-methoxy-1-benzothiophene -2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate. LC-MS (C 22 H 30 NO 6 S) (ES, m/z): 436 [M+H] + . 1H NMR (500 MHz, DMSO- d6 ): δ 8.25 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 6.86 (br, 1H), 3.88 (s, 3H), 3.59 (s, 3H), 3.43 (dd, J=17.5, 8.6 Hz, 1H), 3.19 (dd, J=17.5, 5.0 Hz, 1H), 3.15 (t, J=7.0 Hz, 2H), 3.01-2.93 ( m, 1H), 2.77 (t, J=7.0 Hz, 2H), 1.34 (s, 9H), 1.19 (d, J=7.1 Hz, 3H).
Стадия 2: метил (2S)-4-[5-(2-аминоэтил)-6-метокси-1-бензотиофен-2-ил]-2-метил-4-оксобутаноатStep 2: Methyl (2S)-4-[5-(2-aminoethyl)-6-methoxy-1-benzothiophen-2-yl]-2-methyl-4-oxobutanoate
К перемешиваемому раствору метил (2S)-4-(5-{2-[(трет-бутоксикарбонил)амино]этил}-6-метокси-1-бензотиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата (54 мг, 0.12 ммоль) в CH2Cl2 (2.8 мл) добавляли TFA (476 мкл, 6.18 ммоль) одной порцией при комнатной температуре, и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Смесь концентрировали, и остаток растворяли в CH3CN и воде и сушили в вакууме на протяжении ночи с получением метил (2S)-4-[5-(2-аминоэтил)-6-метокси-1-бензотиофен-2-ил]-2-метил-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C17H22NO4S) (ES, m/z): 336 [М+Н]+. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6): δ 8.29 (s, 1H), 7.80 (br, 2Н), 7.79 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 3.91 (s, 3H), 3.60 (s, 3H), 3.45-3.39 (m, 1H), 3.20 (dd, J=17.5, 5.0 Гц, 1H), 3.10-3.01 (m, 2H), 3.01-2.93 (m, 1H), 2.95 (t, 7=7.0 Гц, 2H), 1.20 (d, J=7.1 Гц, 3Н).To a stirred solution of methyl (2S)-4-(5-{2-[(tert-butoxycarbonyl)amino]ethyl}-6-methoxy-1-benzothiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate (54 mg , 0.12 mmol) in CH 2 Cl 2 (2.8 ml), TFA (476 µl, 6.18 mmol) was added in one portion at room temperature, and the reaction mixture was stirred at room temperature for 2 hours. The mixture was concentrated and the residue was dissolved in CH 3 CN and water and dried in vacuo overnight to obtain methyl (2S)-4-[5-(2-aminoethyl)-6-methoxy-1-benzothiophen-2-yl]-2-methyl-4-oxobutanoate. LC-MS (C 17 H 22 NO 4 S) (ES, m/z): 336 [M+H] + . 1H NMR (500 MHz, DMSO- d6 ): δ 8.29 (s, 1H), 7.80 (br, 2H), 7.79 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 3.91 (s, 3H), 3.60 (s, 3H), 3.45-3.39 (m, 1H), 3.20 (dd, J=17.5, 5.0 Hz, 1H), 3.10-3.01 (m, 2H), 3.01-2.93 (m, 1H), 2.95 (t , 7=7.0 Hz, 2H), 1.20 (d, J=7.1 Hz, 3H).
Промежуточное соединение 20: Этил 4-(5-(3-бромпропил)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноатIntermediate 20: Ethyl 4-(5-(3-bromopropyl)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate
К смеси этил 4-(4-фтор-5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата (0.065 г, 0.2 ммоль), Cs2CO3 (0.326 г, 1.00 ммоль) и ACN (2 мл) добавляли 1,3-дибромпропан (1.0 мл, 9.9 ммоль). Смесь нагревали до 65°С в течение 2 ч. После охлаждения до комнатной температуры смесь фильтровали, и отфильтрованное вещество промывали THF. Фильтрат разбавляли гексаном, и смесь затем концентрировали под пониженным давлением с получением этил 4-(6-метокси-5-(3-((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)пропил)бензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C18H21BrFO5S) (ES, m/z): 447, 449 [М+Н]+.To a mixture of ethyl 4-(4-fluoro-5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate (0.065 g, 0.2 mmol), Cs 2 CO 3 (0.326 g, 1.00 mmol) and ACN (2 mL), 1,3-dibromopropane (1.0 mL, 9.9 mmol) was added. The mixture was heated to 65°C for 2 hours. After cooling to room temperature, the mixture was filtered and the filtered material was washed with THF. The filtrate was diluted with hexane and the mixture was then concentrated under reduced pressure to give ethyl 4-(6-methoxy-5-(3-((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)propyl)benzo[b]thiophene-2- yl)-4-oxobutanoate. LC-MS (C 18 H 21 BrFO 5 S) (ES, m/z): 447, 449 [M+H] + .
Промежуточные соединения с 21 по 23 и с 62 по 86, как показано в Таблице 1 ниже, или могут быть получены в соответствии со способами, аналогичными описанным в Промежуточном соединении 20 выше, с применением соответствующих исходных материалов, описанных в способах получения, или получены из коммерческих источников.Intermediates 21 to 23 and 62 to 86, as shown in Table 1 below, or can be prepared in accordance with methods similar to those described in Intermediate 20 above, using the appropriate starting materials described in methods of preparation, or prepared from commercial sources.
Промежуточное соединение 24: (S)-метил 4-(4-фтор-5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатIntermediate 24: (S)-methyl 4-(4-fluoro-5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
Стадия 1: (S)-метил 4-(4-фтор-5,6-диметоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатStep 1: (S)-methyl 4-(4-fluoro-5,6-dimethoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
К смеси 4-фтор-5,6-диметоксибензо[b]тиофен-2-карбонилхлорида (4.3 г, 16 ммоль), C-Phos Pd G4 (0.26 г, 0.31 ммоль) и THF (25 мл) добавляли (R)-(3-метокси-2-метил-3-оксопропил)цинк (II) бромид (0.50 М в THF, 25.0 мл, 12.5 ммоль). Реакцию оставляли перемешиваться в течение 2 ч при комнатной температуре. Реакцию затем останавливали водным насыщенным NH4Cl и разбавляли DCM. Органический слой отделяли, высушивали над Na2SO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Полученный в результате остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (0→50% градиент EtOAc в гексанах) с получением (S)-метил 4-(4-фтор-5,6-диметоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C16H18FO5S) (ES, m/z): 341 [M+H]+. 1H ЯМР (600 МГц, DMSO-d6) δ 8.33 (s, 1H), 7.58 (s, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.86 (s, 3H), 3.60 (s, 3H), 3.50 (dd, J=17.7, 8.7 Гц, 1H), 3.25 (dd, J=17.7, 5.0 Гц, 1H), 3.00-2.92 (m, 1H), 1.20 (d, J=7.3 Гц, 3Н).(R)- (3-methoxy-2-methyl-3-oxopropyl)zinc(II) bromide (0.50 M in THF, 25.0 ml, 12.5 mmol). The reaction was left stirring for 2 hours at room temperature. The reaction was then quenched with aqueous saturated NH 4 Cl and diluted with DCM. The organic layer was separated, dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The resulting residue was purified by silica gel column chromatography (0→50% EtOAc gradient in hexanes) to give (S)-methyl 4-(4-fluoro-5,6-dimethoxybenzo[b]thiophen-2-yl)- 2-methyl-4-oxobutanoate. LC-MS (C 16 H 18 FO 5 S) (ES, m/z): 341 [M+H] + . 1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.33 (s, 1H), 7.58 (s, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.86 (s, 3H), 3.60 (s, 3H), 3.50 ( dd, J=17.7, 8.7 Hz, 1H), 3.25 (dd, J=17.7, 5.0 Hz, 1H), 3.00-2.92 (m, 1H), 1.20 (d, J=7.3 Hz, 3H).
Стадия 2: (S)-метил 4-(4-фтор-5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатStep 2: (S)-methyl 4-(4-fluoro-5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
К смеси (S)-метил 4-(4-фтор-5,6-диметоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата (4.0 г, 12 ммоль) и DCM (50 мл) добавляли AlCl3 (6.27 г, 47.0 ммоль). Реакционную смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 18 ч. Затем к смеси медленно добавляли воду (50 мл) с энергичным перемешиванием с последующим добавлением водной HCl (1 н., 50 мл). Смесь затем выливали в делительную воронку и добавляли 20% IPA/DCM. Органический слой отделяли, высушивали над Na2SO4, фильтровали, и фильтрат концентрировали под пониженным давлением. Полученный в результате остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (100% DCM) с получением (S)-метил 4-(4-фтор-5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C15H16FO5S) (ES, m/z): 327 [М+Н]+. 1H ЯМР (600 МГц, DMSO-d6) δ 9.53 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.60 (s, 3H), 3.48 (dd, J=17.7, 8.7 Гц, 1H), 3.24 (dd, J=17.7, 5.0 Гц, 1H), 3.01-2.89 (m, 1H), 1.19 (d, J=7.2 Гц, 3H).To a mixture of (S)-methyl 4-(4-fluoro-5,6-dimethoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate (4.0 g, 12 mmol) and DCM (50 ml) was added AlCl 3 (6.27 g, 47.0 mmol). The reaction mixture was left stirring at room temperature for 18 hours. Water (50 mL) was then slowly added to the mixture with vigorous stirring, followed by the addition of aqueous HCl (1 N, 50 mL). The mixture was then poured into a separatory funnel and 20% IPA/DCM was added. The organic layer was separated, dried over Na 2 SO 4 , filtered, and the filtrate was concentrated under reduced pressure. The resulting residue was purified by silica gel column chromatography (100% DCM) to give (S)-methyl 4-(4-fluoro-5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl -4-oxobutanoate. LC-MS (C 15 H 16 FO 5 S) (ES, m/z): 327 [M+H] + . 1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.53 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.60 (s, 3H), 3.48 ( dd, J=17.7, 8.7 Hz, 1H), 3.24 (dd, J=17.7, 5.0 Hz, 1H), 3.01-2.89 (m, 1H), 1.19 (d, J=7.2 Hz, 3H).
Промежуточное соединение 25: метил (R)-4-(5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатIntermediate 25: Methyl (R)-4-(5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
Стадия 1: 5,6-диметоксибензо[b]тиофен-2-каубонилхлоуидStep 1: 5,6-dimethoxybenzo[b]thiophene-2-caubonyl chloride
К перемешиваемому раствору 5,6-диметоксибензо[b]тиофен-2-карбоновой кислоты (5.0 г, 21 ммоль) в THF (200 мл) при 0°С в атмосфере Ar добавляли (COCl)2 (5.5 мл, 63 ммоль) с последующим добавлением DMF (0.1 мл, 1.3 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 1 ч, затем оставляли нагреваться до комнатной температуры и перемешивали на протяжении ночи. Реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением, и полученный в результате 5,6-диметоксибензо[b]тиофен-2-карбонилхлорид применяли без очистки. 1Н ЯМР (600 МГц, CH3CN-d3): δ 8.25 (s, 1Н), 7.46 (s, 1H), 7.45 (s, 1H), 3.92 (s, 3Н), 3.88 (s, 3Н).To a stirred solution of 5,6-dimethoxybenzo[b]thiophene-2-carboxylic acid (5.0 g, 21 mmol) in THF (200 ml) at 0°C in an Ar atmosphere was added (COCl) 2 (5.5 ml, 63 mmol) with followed by the addition of DMF (0.1 ml, 1.3 mmol). The reaction mixture was stirred at 0°C for 1 hour, then allowed to warm to room temperature and stirred overnight. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure, and the resulting 5,6-dimethoxybenzo[b]thiophene-2-carbonyl chloride was used without purification. 1H NMR (600 MHz, CH 3 CN-d 3 ): δ 8.25 (s, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.45 (s, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.88 (s, 3H) .
Стадия 2: метил (S)-4-(5,6-диметоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатStep 2: Methyl (S)-4-(5,6-dimethoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
В высушенную в печи продутую Ar круглодонную колбу, содержащую медь (I) тиофен-2-карбоксилат (797 мг, 4.2 ммоль), при 0°С добавляли по каплям (R)-(3-метокси-2-метил-3-оксопропил)цинк (II) бромид (7.8 мл, 0.5 М в THF, 3.9 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 20 мин. К реакционной смеси добавляли суспензию 5,6-диметоксибензо[b]тиофен-2-карбонилхлорида (777 мг, 3.0 ммоль) в THF (15 мл) по каплям. Реакционную смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры и перемешивали в течение 6 ч. Реакционную смесь разбавляли насыщенным водным раствором NH4Cl (15 мл) с последующим добавлением DCM (30 мл). Выпавшие в осадок вещества удаляли путем фильтрования перед экстракцией. Слои разделяли, и водный слой экстрагировали DCM (3×30 мл). Объединенные органические слои концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле ((25% EtOH в EtOAc) в гексанах) с получением метил (S)-4-(5,6-диметоксибензо[6]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C16H19O5S) (ES, m/z): 323 [М+Н]+. 1Н ЯМР (500 МГц, CDCl3): δ 7.89 (s, 1Н), 7.26 (s, 2Н), 4.00 (s, 3Н), 3.97 (s, 3Н), 3.72 (s, 3Н), 3.48 (dd, J=16.9, 7.6 Гц, 1H), 3.22-3.16 (m, 1H), 3.05 (dd, J=16.9, 6.0 Гц, 1H), 1.31 (d, J=7.2 Гц, 3Н).(R)-(3-methoxy-2-methyl-3-oxopropyl) was added dropwise to an oven-dried, Ar-purged round-bottom flask containing copper(I) thiophene-2-carboxylate (797 mg, 4.2 mmol) at 0°C. )zinc(II) bromide (7.8 ml, 0.5 M in THF, 3.9 mmol). The reaction mixture was stirred at 0°C for 20 minutes. A suspension of 5,6-dimethoxybenzo[b]thiophene-2-carbonyl chloride (777 mg, 3.0 mmol) in THF (15 mL) was added dropwise to the reaction mixture. The reaction mixture was allowed to warm to room temperature and stirred for 6 hours. The reaction mixture was diluted with saturated aqueous NH 4 Cl (15 ml) followed by the addition of DCM (30 ml). Precipitated substances were removed by filtration before extraction. The layers were separated and the aqueous layer was extracted with DCM (3×30 ml). The combined organic layers were concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel column chromatography ((25% EtOH in EtOAc) in hexanes) to give methyl (S)-4-(5,6-dimethoxybenzo[6]thiophen-2-yl)-2-methyl-4- oxobutanoate. LC-MS (C 16 H 19 O 5 S) (ES, m/z): 323 [M+H] + . 1H NMR (500 MHz, CDCl 3 ): δ 7.89 (s, 1H), 7.26 (s, 2H), 4.00 (s, 3H), 3.97 (s, 3H), 3.72 (s, 3H), 3.48 (dd , J=16.9, 7.6 Hz, 1H), 3.22-3.16 (m, 1H), 3.05 (dd, J=16.9, 6.0 Hz, 1H), 1.31 (d, J=7.2 Hz, 3H).
Стадия 3: метил (R)-4-(5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатStep 3: Methyl (R)-4-(5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
AlCl3 (1.0 г, 7.5 ммоль) добавляли к (R)-метил 4-(5,6-диметоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноату (1.0 г, 3.0 ммоль) в CH2Cl2 (40 мл) при 0°С. Реакционную смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры в течение 18 ч. Реакционную смесь затем охлаждали до 0°С, и добавляли МеОН (85 мл). Смесь оставляли перемешиваться при 0°С в течение 30 мин. Смесь затем оставляли нагреваться до комнатной температуры и концентрировали под пониженным давлением. Полученный в результате остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (градиент EtOAc в гексанах) с получением неочищенного метил (R)-4-(5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата. Смесь затем очищали с помощью хиральной SFC (колонка AD-H (21×250 мм), 30% МеОН с 0.25% DMEA в CO2) с получением метил (R)-4-(5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата, время удерживания 4.7 мин. ЖХ-МС (C15H17O5S) (ES, m/z): 309 [М+Н]+. 1Н ЯМР (DMSO-d6) δ: 9.41 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.31 (s, 1H), 3.87 (s, 3H), 3.60 (s, 3H), 3.40 (dd, J=17.4, 8.6 Гц, 1H), 3.17 (dd, J=17.5, 5.1 Гц, 1H), 3.02-2.91 (m, 1H), 1.19 (d, J=7.1 Гц, 3Н).AlCl 3 (1.0 g, 7.5 mmol) was added to (R)-methyl 4-(5,6-dimethoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate (1.0 g, 3.0 mmol) in CH 2 Cl 2 (40 ml) at 0°C. The reaction mixture was allowed to warm to room temperature over 18 hours. The reaction mixture was then cooled to 0°C and MeOH (85 ml) was added. The mixture was left stirring at 0°C for 30 minutes. The mixture was then allowed to warm to room temperature and concentrated under reduced pressure. The resulting residue was purified by silica gel column chromatography (EtOAc gradient in hexanes) to give crude methyl (R)-4-(5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4 -oxobutanoate. The mixture was then purified by chiral SFC (AD-H column (21 x 250 mm), 30% MeOH with 0.25% DMEA in CO 2 ) to give methyl (R)-4-(5-hydroxy-6-methoxybenzo[b] thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate, retention time 4.7 min. LC-MS (C 15 H 17 O 5 S) (ES, m/z): 309 [M+H] + . 1H NMR (DMSO- d6 ) δ: 9.41 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.31 (s, 1H), 3.87 (s, 3H), 3.60 (s, 3H), 3.40 (dd, J=17.4, 8.6 Hz, 1H), 3.17 (dd, J=17.5, 5.1 Hz, 1H), 3.02-2.91 (m, 1H), 1.19 (d, J=7.1 Hz, 3H ).
Промежуточные соединения 26-27, как показано в Таблице 2 ниже, или могут быть получены в соответствии со способами, аналогичными описанным в Промежуточном соединении 25 выше, с применением соответствующих исходных материалов, описанных в способах получения, или получены из коммерческих источников.Intermediates 26-27, as shown in Table 2 below, or can be prepared in accordance with methods similar to those described in Intermediate 25 above, using the appropriate starting materials described in the methods of preparation, or obtained from commercial sources.
Промежуточное соединение 28: метил (S)-4-(5-(2-хлорэтокси)-4-фтор-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатIntermediate 28: Methyl (S)-4-(5-(2-chloroethoxy)-4-fluoro-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
Стадия 1: метил (S)-4-(4-фтор-5,6-диметоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатStep 1: Methyl (S)-4-(4-fluoro-5,6-dimethoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
Колбу, содержащую CuCl (2.5 г, 25 ммоль), продували Ar и затем охлаждали до 0°С. Добавляли по каплям 3-метокси-(2R)-(+)-метил-3-оксопропилцинка бромид (0.50 М в THF, 50 мл, 25 ммоль). К перемешиваемой реакционной смеси добавляли по каплям смесь 4-фтор-5,6-диметоксибензо[b]тиофен-2-карбонилхлорида (5.0 г, 20 ммоль) в THF (25 мл) и NMP (25 мл). Реакционную смесь затем оставляли нагреваться до комнатной температуры в течение 18 ч. Затем реакцию останавливали насыщенным водным NH4Cl (100 мл) и экстрагировали EtOAc (3×100 мл). Объединенные органические вещества высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Полученный в результате остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силиагеле с нормальными фазами (EtOAc в гексанах) с получением (S)-метил 4-(4-фтор-5,6-диметоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C16H18FO5S) (ES, m/z): 341 [М+Н]+. 1Н ЯМР (CDCl3) δ: 7.99 (s, 1H), 7.09 (s, 1H), 4.00 (s, 3Н), 3.98 (s, 3Н), 3.73 (s, 3Н), 3.51 (dd, J=17.0, 7.9 Гц, 1Н), 3.24-3.12 (m, 1H), 3.06 (dd, J=17.0, 5.6 Гц, 1H), 1.32 (d, J=7.1 Гц, 3Н).The flask containing CuCl (2.5 g, 25 mmol) was purged with Ar and then cooled to 0°C. 3-methoxy-(2R)-(+)-methyl-3-oxopropylzinc bromide (0.50 M in THF, 50 ml, 25 mmol) was added dropwise. To the stirred reaction mixture was added dropwise a mixture of 4-fluoro-5,6-dimethoxybenzo[b]thiophene-2-carbonyl chloride (5.0 g, 20 mmol) in THF (25 ml) and NMP (25 ml). The reaction mixture was then allowed to warm to room temperature over 18 hours. The reaction was then quenched with saturated aqueous NH 4 Cl (100 ml) and extracted with EtOAc (3×100 ml). The combined organics were dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The resulting residue was purified by normal phase silica gel column chromatography (EtOAc in hexanes) to give (S)-methyl 4-(4-fluoro-5,6-dimethoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2- methyl 4-oxobutanoate. LC-MS (C 16 H 18 FO 5 S) (ES, m/z): 341 [M+H] + . 1H NMR ( CDCl3 ) δ: 7.99 (s, 1H), 7.09 (s, 1H), 4.00 (s, 3H), 3.98 (s, 3H), 3.73 (s, 3H), 3.51 (dd, J= 17.0, 7.9 Hz, 1H), 3.24-3.12 (m, 1H), 3.06 (dd, J=17.0, 5.6 Hz, 1H), 1.32 (d, J=7.1 Hz, 3H).
Стадия 2: (S)-метил 4-(4-фтор-5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатStep 2: (S)-methyl 4-(4-fluoro-5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
К смеси метил (S)-4-(4-фтор-5,6-диметоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата (1.0 г, 2.9 ммоль) и СН=CCl2 (40 мл) добавляли AlCl3 (1.0 г, 7.5 ммоль). Реакционную смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 18 ч. Реакционную смесь затем охлаждали до 0°С и разбавляли МеОН (40 мл). Смесь затем оставляли нагреваться до комнатной температуры и концентрировали под пониженным давлением. Полученный в результате остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (EtOAc в гексанах) с получением (S)-метил 4-(4-фтор-5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C15H16FO5S) (ES, m/z): 327 [М+Н]+. 1Н ЯМР (метанол-d4) δ: 8.11 (s, 1H), 7.29 (s, 1H), 3.98 (s, 3Н), 3.69 (s, 3Н), 3.50 (dd, J=17.5, 8.6 Гц, 1H), 3.23-3.16 (m, 1H), 3.11-3.02 (m, 1H), 1.28 (d, J=7.2 Гц, 3Н).To a mixture of methyl (S)-4-(4-fluoro-5,6-dimethoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate (1.0 g, 2.9 mmol) and CH=CCl 2 (40 ml) AlCl 3 (1.0 g, 7.5 mmol) was added. The reaction mixture was left stirring at room temperature for 18 hours. The reaction mixture was then cooled to 0°C and diluted with MeOH (40 ml). The mixture was then allowed to warm to room temperature and concentrated under reduced pressure. The resulting residue was purified by silica gel column chromatography (EtOAc in hexanes) to give (S)-methyl 4-(4-fluoro-5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl -4-oxobutanoate. LC-MS (C 15 H 16 FO 5 S) (ES, m/z): 327 [M+H] + . 1H NMR (methanol- d4 ) δ: 8.11 (s, 1H), 7.29 (s, 1H), 3.98 (s, 3H), 3.69 (s, 3H), 3.50 (dd, J=17.5, 8.6 Hz, 1H), 3.23-3.16 (m, 1H), 3.11-3.02 (m, 1H), 1.28 (d, J=7.2 Hz, 3H).
Стадия 3: метил (S)-4-(5-(2-хлорэтокси)-4-фтор-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатStep 3: Methyl (S)-4-(5-(2-chloroethoxy)-4-fluoro-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
K2CO3 (170 мг, 1.2 ммоль) добавляли к перемешиваемой смеси (S)-метил 4-(4-фтор-5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата (200 мг, 0.61 ммоль) и DMF (2.7 мл). К перемешиваемой реакционной смеси добавляли 1-бром-2-хлорпентан (50 мкл, 0.6 ммоль) и реакционную смесь затем нагревали до 80°С в течение 18 ч. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением. Полученный в результате остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (EtOAc в гексанах) с получением метил (S)-4-(5-(2-хлорэтокси)-4-фтор-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C17H19ClFO5S) (ES, m/z): 389 [М+Н]+.K 2 CO 3 (170 mg, 1.2 mmol) was added to the stirred mixture of (S)-methyl 4-(4-fluoro-5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4- oxobutanoate (200 mg, 0.61 mmol) and DMF (2.7 ml). 1-Bromo-2-chloropentane (50 μL, 0.6 mmol) was added to the stirred reaction mixture and the reaction mixture was then heated to 80°C for 18 hours. After cooling to room temperature, the reaction mixture was concentrated under reduced pressure. The resulting residue was purified by silica gel column chromatography (EtOAc in hexanes) to give methyl (S)-4-(5-(2-chloroethoxy)-4-fluoro-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl) -2-methyl-4-oxobutanoate. LC-MS (C 17 H 19 ClFO 5 S) (ES, m/z): 389 [M+H] + .
Промежуточные соединения с 29 по 31 и 87, как показано в Таблице 3 ниже, или могут быть получены в соответствии со способами, аналогичными описанным в Промежуточном соединении 28 выше, с применением соответствующих исходных материалов, описанных в способах получения, или получены из коммерческих источников.Intermediates 29 to 31 and 87, as shown in Table 3 below, or can be prepared in accordance with methods similar to those described in Intermediate 28 above, using the appropriate starting materials described in the preparation methods, or obtained from commercial sources.
Промежуточное соединение 32: трет-бутил 4-(5-(2-гидроксиэтил)-6-метокситиено[3,2-b]пиридин-2-ил)-4-оксобутаноат, соль уксусной кислотыIntermediate 32: tert-butyl 4-(5-(2-hydroxyethyl)-6-methoxythieno[3,2-b]pyridin-2-yl)-4-oxobutanoate, acetic acid salt
Стадия 1: трет-бутил 4-(6-метокси-5-(2-((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)этил)тиено[3,2-b]пиридин-2-ил)-4-оксобутаноатStep 1: tert-butyl 4-(6-methoxy-5-(2-((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)ethyl)thieno[3,2-b]pyridin-2-yl)-4 -oxobutanoate
В 4 мл виалу добавляли бис(ди-трет-бутил(4-диметиламинофенил)фосфин)дихлор-палладий (II) (5.0 мг, 7.0 мкмоль), Cs2CO3 (137 мг, 0.422 ммоль), трет-бутил 4-(5-хлор-6-метокситиено[3,2-b]пиридин-2-ил)-4-оксобутаноат (50.0 мг, 0.141 ммоль) и калий трифтор(2-((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)этил)борат (39.8 мг, 0.169 ммоль). В виалу добавляли толуол (0.50 мл) и воду (0.10 мл). Виалу дегазировали N2 в течение 5 мин. Смесь нагревали до 100°С в течение 18 ч. После охлаждения до комнатной температуры смесь фильтровали через целит, и целит промывали EtOAc. Фильтрат концентрировали под пониженным давлением, и полученный в результате остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0→75% градиент EtOAc в гексанах) с получением трет-бутил 4-(6-метокси-5-(2-((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)этил)тиено[3,2-b]пиридин-2-ил)-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C23H32NO6S) (ES, m/z): 450 [М+Н]+. 1Н ЯМР (500 МГц, CDCl3) δ 8.45 (s, 1Н), 7.80 (s, 1H), 4.71 (s, 1H), 4.26-4.15 (m, 1Н), 4.04 (s, 3Н), 3.78 (t, J=8.3 Гц, 1H), 3.65-3.42 (m, 4Н), 3.33 (t, J=6.3 Гц, 2Н), 2.73 (t, J=6.3 Гц, 2Н), 1.64-1.48 (m, 6Н), 1.46 (s, 9Н).Bis(di-tert-butyl(4-dimethylaminophenyl)phosphine)dichloro-palladium (II) (5.0 mg, 7.0 µmol), Cs 2 CO 3 (137 mg, 0.422 mmol), tert-butyl 4- (5-chloro-6-methoxythieno[3,2-b]pyridin-2-yl)-4-oxobutanoate (50.0 mg, 0.141 mmol) and potassium trifluoro(2-((tetrahydro-2H-pyran-2-yl) hydroxy)ethyl)borate (39.8 mg, 0.169 mmol). Toluene (0.50 ml) and water (0.10 ml) were added to the vial. The vial was degassed with N 2 for 5 min. The mixture was heated to 100°C for 18 hours. After cooling to room temperature, the mixture was filtered through celite and the celite was washed with EtOAc. The filtrate was concentrated under reduced pressure and the resulting residue was purified by silica gel chromatography (0→75% EtOAc gradient in hexanes) to give tert-butyl 4-(6-methoxy-5-(2-((tetrahydro-2H- pyran-2-yl)oxy)ethyl)thieno[3,2-b]pyridin-2-yl)-4-oxobutanoate. LC-MS (C 23 H 32 NO 6 S) (ES, m/z): 450 [M+H] + . 1H NMR (500 MHz, CDCl 3 ) δ 8.45 (s, 1H), 7.80 (s, 1H), 4.71 (s, 1H), 4.26-4.15 (m, 1H), 4.04 (s, 3H), 3.78 ( t, J=8.3 Hz, 1H), 3.65-3.42 (m, 4H), 3.33 (t, J=6.3 Hz, 2H), 2.73 (t, J=6.3 Hz, 2H), 1.64-1.48 (m, 6H ), 1.46 (s, 9H).
Стадия 2: трет-бутил 4-(5-(2-гидроксиэтил)-6-метокситиено[3,2-b]пиридин-2-ил)-4-оксобутаноат, соль уксусной кислотыStep 2: tert-butyl 4-(5-(2-hydroxyethyl)-6-methoxythieno[3,2-b]pyridin-2-yl)-4-oxobutanoate, acetic acid salt
В 4 мл виалу добавляли трет-бутил 4-(6-метокси-5-(2-((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)этил)-тиено[3,2-b]пиридин-2-ил)-4-оксобутаноат (28 мг, 0.062 ммоль), НОАс (0.50 мл), МеОН (0.50 мл) и воду (0.5 мл). Смесь нагревали до 50°С в течение 75 мин. После охлаждения до комнатной температуры смесь разбавляли EtOAc (30 мл) и промывали водой (2×30 мл). Органический слой высушивали над Na2SO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением с получением трет-бутил 4-(5-(2-гидроксиэтил)-6-метокситиено[3,2-b]пиридин-2-ил)-4-оксобутаноата, соли уксусной кислоты. ЖХ-МС (C18H24NO5S) (ES, m/z): 366 [М+Н]+. 1H ЯМР (500 МГц, CDCl3) δ 8.22 (s, 1Н), 7.68 (s, 1Н), 4.13 (t, J=5.4 Гц, 2Н), 4.01 (s, 3Н), 3.39-3.22 (m, 4Н), 2.74 (t, J=6.5 Гц, 2Н), 1.46 (s, 9Н).Tert-butyl 4-(6-methoxy-5-(2-((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)ethyl)-thieno[3,2-b]pyridin-2-yl was added to a 4 ml vial )-4-oxobutanoate (28 mg, 0.062 mmol), HOAc (0.50 ml), MeOH (0.50 ml) and water (0.5 ml). The mixture was heated to 50°C for 75 minutes. After cooling to room temperature, the mixture was diluted with EtOAc (30 ml) and washed with water (2×30 ml). The organic layer was dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure to give tert-butyl 4-(5-(2-hydroxyethyl)-6-methoxythieno[3,2-b]pyridin-2-yl)-4- oxobutanoate, acetic acid salt. LC-MS (C 18 H 24 NO 5 S) (ES, m/z): 366 [M+H] + . 1 H NMR (500 MHz, CDCl 3 ) δ 8.22 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 4.13 (t, J=5.4 Hz, 2H), 4.01 (s, 3H), 3.39-3.22 (m, 4H), 2.74 (t, J=6.5 Hz, 2H), 1.46 (s, 9H).
Промежуточное соединение 33: трет-бутил 4-(5-(3-гидроксипропил)бензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноатIntermediate 33: tert-butyl 4-(5-(3-hydroxypropyl)benzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate
Стадия 1: трет-бутил 4-(5-(3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)пропил)бензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноатStep 1: tert-butyl 4-(5-(3-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)propyl)benzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate
трет-Бутил 4-(5-бромбензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноат (0.207 г, 0.561 ммоль) и хлор(2-дициклогексилфосфино-2',4,'6'-триизопропил-1,1'-бифенил)[2-(2'-амино-1,1'-бифенил)]палладий (II) (0.022 г, 0.028 ммоль) помещали в 20 мл виалу с завинчивающейся крышкой с магнитной мешалкой. Виалу 3 раза откачивали и снова заполняли N2. Виалу закрывали впускным клапаном для N2 и затем добавляли THF (2.0 мл). Добавляли по каплям (3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)пропил)цинк (II) бромид (0.50 М в THF, 3.4 мл, 1.7 ммоль) с перемешиванием. После завершения добавления реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в атмосфере N2 в течение 1.5 ч. Реакционную смесь затем разделяли между EtOAc (50 мл) и 10% водным цитратом натрия (10 мл) и перемешивали в течение 30 мин. Слои затем разделяли, и органический слой промывали насыщенным водным NaCl, высушивали над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Полученный в результате остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0→55% градиент EtOAc в гексанах) с получением трет-бутил 4-(5-(3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)пропил)бензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C25H38NaO4SSi) (ES, m/z): 485 [M+Na]+. 1H ЯМР (500 МГц, CDCl3) δ 7.96 (s, 1H), 7.78 (d, Г=8.2 Гц, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.33 (d, J=8.2 Гц, 1H), 3.66 (t, J=5.8 Гц, 2Н), 3.31 (t, J=6.5 Гц, 2Н), 2.82 (t, J=7.5 Гц, 2Н), 2.73 (t, J=6.5 Гц, 2Н), 1.93-1.86 (m, 2Н), 1.47 (s, 9Н), 0.94 (s, 9Н), 0.08 (s, 6Н).tert-Butyl 4-(5-bromobenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate (0.207 g, 0.561 mmol) and chloro(2-dicyclohexylphosphino-2',4,'6'-triisopropyl-1,1 '-biphenyl)[2-(2'-amino-1,1'-biphenyl)]palladium (II) (0.022 g, 0.028 mmol) was placed in a 20 ml screw cap vial with a magnetic stirrer. The vial was pumped out 3 times and filled again with N2 . The vial was sealed with an N2 inlet valve and then THF (2.0 mL) was added. (3-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)propyl)zinc(II) bromide (0.50 M in THF, 3.4 mL, 1.7 mmol) was added dropwise with stirring. After addition was complete, the reaction mixture was stirred at room temperature under N 2 for 1.5 hours. The reaction mixture was then partitioned between EtOAc (50 ml) and 10% aqueous sodium citrate (10 ml) and stirred for 30 minutes. The layers were then separated and the organic layer was washed with saturated aqueous NaCl, dried over anhydrous MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The resulting residue was purified by silica gel chromatography (0→55% EtOAc gradient in hexanes) to give tert-butyl 4-(5-(3-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)propyl)benzo[b]thiophene-2 -yl)-4-oxobutanoate. LC-MS (C 25 H 38 NaO 4 SSi) (ES, m/z): 485 [M+Na] + . 1 H NMR (500 MHz, CDCl 3 ) δ 7.96 (s, 1H), 7.78 (d, Г=8.2 Hz, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.33 (d, J=8.2 Hz, 1H), 3.66 (t, J=5.8 Hz, 2H), 3.31 (t, J=6.5 Hz, 2H), 2.82 (t, J=7.5 Hz, 2H), 2.73 (t, J=6.5 Hz, 2H), 1.93-1.86 (m, 2H), 1.47 (s, 9H), 0.94 (s, 9H), 0.08 (s, 6H).
Стадия 2: трет-бутил 4-(5-(3-гидроксипропил)бензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноатStep 2: tert-butyl 4-(5-(3-hydroxypropyl)benzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate
TBAF (1.0 M в THF, 0.44 мл, 0.44 ммоль) добавляли к перемешиваемой смеси трет-бутил 4-(5-(3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)пропил)бензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата (102 мг, 0.220 ммоль) в THF (1.3 мл) при комнатной температуре в атмосфере N2. Полученную в результате смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4.5 ч. Реакционную смесь затем разделяли между Et2O и насыщенным водным NH4Cl и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Слои разделяли, и органический слой промывали насыщенным водным NaCl, высушивали над безводным MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением с получением сырого остатка. Полученный в результате остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0→60% градиент EtOAc в гексанах) с получением трет-бутил 4-(5-(3-гидроксипропил)бензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C19H24NaO4S) (ES, m/z): 371 [M+Na]+. 1Н ЯМР (500 МГц, CDCl3) δ 7.95 (s, 1H), 7.77 (d, J=8.3 Гц, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.33 (d, J=8.3 Гц, 1Н), 3.71 (t, J=6.3 Гц, 2H), 3.30 (t, J=6.7 Гц, 2H), 2.84 (t, J=7.7 Гц, 2H), 2.72 (t, J=6.7 Гц, 2H), 1.98-1.91 (m, 2H), 1.46 (s, 9H).TBAF (1.0 M in THF, 0.44 mL, 0.44 mmol) was added to the stirred mixture of tert-butyl 4-(5-(3-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)propyl)benzo[b]thiophen-2-yl)-4 -oxobutanoate (102 mg, 0.220 mmol) in THF (1.3 ml) at room temperature under N 2 atmosphere. The resulting mixture was stirred at room temperature for 4.5 hours. The reaction mixture was then partitioned between Et 2 O and saturated aqueous NH 4 Cl and stirred at room temperature for 1 hour. The layers were separated and the organic layer was washed with saturated aqueous NaCl, dried over anhydrous MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure to obtain a crude residue. The resulting residue was purified by silica gel chromatography (0→60% gradient EtOAc in hexanes) to give tert-butyl 4-(5-(3-hydroxypropyl)benzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate. LC-MS (C 19 H 24 NaO 4 S) (ES, m/z): 371 [M+Na] + . 1H NMR (500 MHz, CDCl 3 ) δ 7.95 (s, 1H), 7.77 (d, J=8.3 Hz, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.33 (d, J=8.3 Hz, 1H), 3.71 (t, J=6.3 Hz, 2H), 3.30 (t, J=6.7 Hz, 2H), 2.84 (t, J=7.7 Hz, 2H), 2.72 (t, J=6.7 Hz, 2H), 1.98-1.91 (m, 2H), 1.46 (s, 9H).
Промежуточное соединение 34: (S)-метил 4-(4-фтор-5-(3-гидроксипропокси)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатIntermediate 34: (S)-methyl 4-(4-fluoro-5-(3-hydroxypropoxy)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
К смеси (S)-метил 4-(4-фтор-5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата (0.065 г, 0.2 ммоль) и Cs2CO3 (0.33 г, 1.0 ммоль) в ACN (2.0 мл) добавляли (3-бромпропокси)(трет-бутил)диметилсилан (0.10 мл, 0.20 ммоль). Реакцию затем нагревали до 65°С в течение 2 ч. После охлаждения до комнатной температуры смесь затем фильтровали и промывали THF (5 мл). К полученному в результате фильтрату добавляли воду (2 мл) с последующим добавлением MP-TsOH (загрузка 4.38 ммоль/г, 1.00 г, 4.38 ммоль). Смесь затем нагревали до 60°С в течение 30 мин. После охлаждения до комнатной температуры смесь фильтровали и промывали THF. Фильтрат концентрировали под пониженным давлением с получением (S)-метил 4-(4-фтор-5-(3-гидроксипропокси)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата, который применяли без дополнительной очистки. ЖХ-МС (C18H22FO6S) (ES, m/z): 385 [М+Н]+.To a mixture of (S)-methyl 4-(4-fluoro-5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate (0.065 g, 0.2 mmol) and Cs 2 CO 3 (0.33 g, 1.0 mmol) to ACN (2.0 ml) was added (3-bromopropoxy)(tert-butyl)dimethylsilane (0.10 ml, 0.20 mmol). The reaction was then heated to 65°C for 2 hours. After cooling to room temperature, the mixture was then filtered and washed with THF (5 ml). Water (2 mL) was added to the resulting filtrate, followed by MP-TsOH (loading 4.38 mmol/g, 1.00 g, 4.38 mmol). The mixture was then heated to 60°C for 30 minutes. After cooling to room temperature, the mixture was filtered and washed with THF. The filtrate was concentrated under reduced pressure to give (S)-methyl 4-(4-fluoro-5-(3-hydroxypropoxy)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate, which was used without additional cleaning. LC-MS (C 18 H 22 FO 6 S) (ES, m/z): 385 [M+H] + .
Промежуточные соединения 35-36, как показано в Таблице 4 ниже, или могут быть получены в соответствии со способами, аналогичными описанным в Промежуточном соединении 34 выше, с применением соответствующих исходных материалов, описанных в способах получения, или получены из коммерческих источников.Intermediates 35-36, as shown in Table 4 below, or can be prepared in accordance with methods similar to those described in Intermediate 34 above, using the appropriate starting materials described in the preparation methods, or obtained from commercial sources.
Промежуточное соединение 37: метил (2S)-4-[5-(3-бромпропил)-6-метокси-1-бензотиофен-2-ил]-2-метил-4-оксобутаноатIntermediate 37: Methyl (2S)-4-[5-(3-bromopropyl)-6-methoxy-1-benzothiophen-2-yl]-2-methyl-4-oxobutanoate
К перемешиваемой смеси метил (2S)-4-[5-(3-гидроксипропил)-6-метокси-1-бензотиофен-2-ил]-2-метил-4-оксобутаноата (187 мг, 0.534 ммоль) и Ph3P (224 мг, 0.854 ммоль) в THF (2.7 мл) при 0°С добавляли NBS (142 мг, 0.800 ммоль) одной порцией в атмосфере N2. Реакционную смесь перемешивали в течение 20 мин при 0°С. Смесь сразу очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (EtOAc в гексанах) с получением метил (2S)-4-[5-(3-бромпропил)-6-метокси-1-бензотиофен-2-ил]-2-метил-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C18H22BrO4S) (ES, m/z): 413, 415 [М+Н]+. 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6): δ 8.27 (s, 1Н), 7.76 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.59 (s, 3H), 3.54 (t, J=6.8 Гц, 2H),3.43 (dd, J=17.5, 8.6 Гц, 1H), 3.19 (dd, J=17.5, 5.0 Гц, 1H), 3.02-2.92 (m, 1H), 2.79(t, J=7.0 Гц, 2H), 2.10 (pentet, J=6.9 Гц, 2H), 1.19 (d, J=7.1 Гц, 3H).To a stirred mixture of methyl (2S)-4-[5-(3-hydroxypropyl)-6-methoxy-1-benzothiophen-2-yl]-2-methyl-4-oxobutanoate (187 mg, 0.534 mmol) and Ph 3 P (224 mg, 0.854 mmol) in THF (2.7 ml) at 0°C was added NBS (142 mg, 0.800 mmol) in one portion under N 2 atmosphere. The reaction mixture was stirred for 20 min at 0°C. The mixture was immediately purified by silica gel flash column chromatography (EtOAc in hexanes) to give methyl (2S)-4-[5-(3-bromopropyl)-6-methoxy-1-benzothiophen-2-yl]-2-methyl -4-oxobutanoate. LC-MS (C 18 H 22 BrO 4 S) (ES, m/z): 413, 415 [M+H] + . 1H NMR (500 MHz, DMSO- d6 ): δ 8.27 (s, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.59 (s, 3H), 3.54 (t, J=6.8 Hz, 2H), 3.43 (dd, J=17.5, 8.6 Hz, 1H), 3.19 (dd, J=17.5, 5.0 Hz, 1H), 3.02-2.92 (m, 1H), 2.79( t, J=7.0 Hz, 2H), 2.10 (pentet, J=6.9 Hz, 2H), 1.19 (d, J=7.1 Hz, 3H).
Промежуточное соединение 38: трет-бутил 4-(5-(3-гидроксипропокси)-6-метокситиено[3,2-b]пиридин-2-ил)-4-оксобутаноатIntermediate 38: tert-butyl 4-(5-(3-hydroxypropoxy)-6-methoxythieno[3,2-b]pyridin-2-yl)-4-oxobutanoate
Стадия 1: трет-бутил 4-(5-(3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)пропокси)-6-метокситиено[3,2-b]пиридин-2-ил)-4-оксобутаноатStep 1: tert-butyl 4-(5-(3-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)propoxy)-6-methoxythieno[3,2-b]pyridin-2-yl)-4-oxobutanoate
трет-Бутил 4-(5-хлор-6-метокситиено[3,2-b]пиридин-2-ил)-4-оксобутаноат (265 мг, 0.745 ммоль), 3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)пропан-1-ол (156 мг, 0.819 ммоль), RockPhos Pd G3 (31 мг, 0.037 ммоль) и Cs2CO3 (364 мг, 1.12 ммоль) добавляли в 20 мл виалу с завинчивающейся крышкой с магнитной мешалкой. Виалу закрывали, и вставляли впускную иглу для N2. Через эту иглу виалу три раза откачивали и снова заполняли N2. В атмосфере N2 добавляли толуол (2.5 мл), впускную иглу для N2 удаляли, и герметично закрытую виалу нагревали до 110°С в течение 18 ч. Реакцию оставляли охлаждаться до комнатной температуры, и добавляли МеОН (3.0 мл), воду (3.0 мл) и НОАс (3.0 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 7 ч при комнатной температуре, затем разделяли между EtOAc и насыщенным водным NaCl. Слои разделяли, и водный слой экстрагировали EtOAc.Органические слои объединяли, промывали водным NaCl, высушивали над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением с получением сырого остатка. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0→100% 3:1 EtOAc : EtOH градиент в гексанах) с получением трет-бутил 4-(5-(3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)пропокси)-6-метокситиено[3,2-b]пиридин-2-ил)-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C25H40NO6SSi) (ES, m/z): 510 [М+Н]+. 1H ЯМР (500 МГц, CDCl3) δ 7.95 (s, 1H), 7.39 (s, 1H), 4.56 (t, J=6.5 Гц, 2H), 3.94 (s, 3Н), 3.83 (t, J=6.0 Гц, 2H), 3.26 (t, J=6.1 Гц, 2H), 2.70 (t, J=6.7 Гц, 2H), 2.12-2.05 (m, 2H), 1.44 (s, 9H), 0.89 (s, 9H), 0.07 (s, 6H).tert-Butyl 4-(5-chloro-6-methoxythieno[3,2-b]pyridin-2-yl)-4-oxobutanoate (265 mg, 0.745 mmol), 3-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)propane- 1-ol (156 mg, 0.819 mmol), RockPhos Pd G3 (31 mg, 0.037 mmol) and Cs 2 CO 3 (364 mg, 1.12 mmol) were added to a 20 ml screw cap vial with a magnetic stirrer. The vial was closed and the N 2 inlet needle was inserted. Through this needle, the vial was evacuated three times and filled again with N2 . Under N 2 atmosphere, toluene (2.5 ml) was added, the N 2 inlet needle was removed, and the sealed vial was heated to 110°C for 18 hours. The reaction was allowed to cool to room temperature, and MeOH (3.0 ml), water (3.0 ml) and HOAc (3.0 ml). The reaction mixture was stirred for 7 hours at room temperature, then partitioned between EtOAc and saturated aqueous NaCl. The layers were separated and the aqueous layer was extracted with EtOAc. The organic layers were combined, washed with aqueous NaCl, dried over anhydrous Na 2 SO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure to obtain a crude residue. The residue was purified by silica gel chromatography (0→100% 3:1 EtOAc:EtOH gradient in hexanes) to give tert-butyl 4-(5-(3-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)propoxy)-6-methoxythieno[ 3,2-b]pyridin-2-yl)-4-oxobutanoate. LC-MS (C 25 H 40 NO 6 SSi) (ES, m/z): 510 [M+H] + . 1 H NMR (500 MHz, CDCl 3 ) δ 7.95 (s, 1H), 7.39 (s, 1H), 4.56 (t, J=6.5 Hz, 2H), 3.94 (s, 3H), 3.83 (t, J= 6.0 Hz, 2H), 3.26 (t, J=6.1 Hz, 2H), 2.70 (t, J=6.7 Hz, 2H), 2.12-2.05 (m, 2H), 1.44 (s, 9H), 0.89 (s, 9H), 0.07 (s, 6H).
Стадия 2: трет-бутил 4-(5-(3-гидроксипропокси)-6-метокситиено[3,2-b]пиридин-2-ил)-4-оксобутаноатStep 2: tert-butyl 4-(5-(3-hydroxypropoxy)-6-methoxythieno[3,2-b]pyridin-2-yl)-4-oxobutanoate
В виалу, содержащую трет-бутил 4-(5-(3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)пропокси)-6-метокситиено[3,2-b]пиридин-2-ил)-4-оксобутаноат (83 мг, 0.16 ммоль), добавляли МеОН (1.0 мл), воду (1.0 мл) и затем НОАс (1.0 мл). Полученную в результате смесь перемешивали в течение 30 мин при комнатной температуре. Добавляли МеОН (1.0 мл) и продолжали перемешивание. Через 30 мин добавляли THF (1.0 мл) и смесь оставляли перемешиваться в течение 18 ч при комнатной температуре. Смесь разделяли между EtOAc (25 мл) и водным NaCl (25 мл) и перемешивали. Слои разделяли, и водный слой экстрагировали EtOAc.Органические слои объединяли, дважды промывали насыщенным водным NaCl, высушивали над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением с получением сырого остатка. Полученный в результате остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0→100% градиент EtOAc в гексанах, затем изократическое элюирование при 100% EtOAc) с получением трет-бутил 4-(5-(3-гидроксипропокси)-6-метокситиено[3,2-b]пиридин-2-ил)-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C19H26NO6S) (ES, m/z): 396 [М+Н]+. 1Н ЯМР (500 МГц, CDCl3) δ 7.93 (s, 1H), 7.44 (s, 1H), 4.69 (t, J=5.6 Гц, 2H), 3.97 (s, 3H), 3.80-3.76 (m, 2H), 3.31-3.20 (m, 2H), 2.71 (t, J=6.5 Гц, 2H), 2.14-2.07 (m, 2H), 1.46 (s, 9H).In a vial containing tert-butyl 4-(5-(3-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)propoxy)-6-methoxythieno[3,2-b]pyridin-2-yl)-4-oxobutanoate (83 mg, 0.16 mmol), MeOH (1.0 ml), water (1.0 ml) and then HOAc (1.0 ml) were added. The resulting mixture was stirred for 30 minutes at room temperature. MeOH (1.0 ml) was added and stirring continued. After 30 min, THF (1.0 ml) was added and the mixture was left to stir for 18 h at room temperature. The mixture was partitioned between EtOAc (25 ml) and aqueous NaCl (25 ml) and stirred. The layers were separated and the aqueous layer was extracted with EtOAc. The organic layers were combined, washed twice with saturated aqueous NaCl, dried over anhydrous Na 2 SO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure to obtain a crude residue. The resulting residue was purified by silica gel chromatography (0→100% EtOAc gradient in hexanes, then isocratic elution with 100% EtOAc) to give tert-butyl 4-(5-(3-hydroxypropoxy)-6-methoxythieno[3, 2-b]pyridin-2-yl)-4-oxobutanoate. LC-MS (C 19 H 26 NO 6 S) (ES, m/z): 396 [M+H] + . 1H NMR (500 MHz, CDCl 3 ) δ 7.93 (s, 1H), 7.44 (s, 1H), 4.69 (t, J=5.6 Hz, 2H), 3.97 (s, 3H), 3.80-3.76 (m, 2H), 3.31-3.20 (m, 2H), 2.71 (t, J=6.5 Hz, 2H), 2.14-2.07 (m, 2H), 1.46 (s, 9H).
Промежуточное соединение 39, как показано в Таблице 5 ниже, или может быть получено в соответствии со способами, аналогичными описанным в Промежуточном соединении 38 выше, с применением соответствующих исходных материалов, описанных в способах получения, или получено из коммерческих источников.Intermediate 39, as shown in Table 5 below, or can be prepared in accordance with methods similar to those described in Intermediate 38 above, using the appropriate starting materials described in the preparation methods, or obtained from commercial sources.
Промежуточное соединение 40: Метил 4-(6-гидроксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноатIntermediate 40: Methyl 4-(6-hydroxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate
Стадия 1: 6-(бензилокси)бензо[b]тиофенStep 1: 6-(benzyloxy)benzo[b]thiophene
K2CO3 (2.62 г, 19.0 ммоль) добавляли к смеси бензо[b]тиофен-6-ола (1.9 г, 13 ммоль) и бензилбромида (1.51 мл, 12.7 ммоль) в DMF (10.0 мл) при 20°С в атмосфере Ar. Реакционную смесь перемешивали и нагревали до 50°С в течение 18 ч. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь затем разбавляли EtOAc (500 мл) и водой (100 мл). Органический слой отделяли, промывали водой (50 мл) и затем насыщенным водным NaCl (50 мл), высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением с получением неочищенного остатка. Остаток сырого вещества очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0→100% градиент EtOAc в гексанах) с получением 6-(бензилокси)бензо[b]тиофена. ЖХ-МС (C15H13OS) (ES, m/z): 241 [М+Н]+. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 7.77 (d, J=8.6 Гц, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.54 (d, J=5.2 Гц, 1H), 7.49 (d, J=7.2 Гц, 2Н), 7.44-7.38 (m, 2H), 7.37-7.32 (m, 2Н), 7.08 (d, J=8.5 Гц, 1H), 5.17 (s, 2Н).K 2 CO 3 (2.62 g, 19.0 mmol) was added to a mixture of benzo[b]thiophen-6-ol (1.9 g, 13 mmol) and benzyl bromide (1.51 ml, 12.7 mmol) in DMF (10.0 ml) at 20°C in atmosphere Ar. The reaction mixture was stirred and heated to 50°C for 18 hours. After cooling to room temperature, the reaction mixture was then diluted with EtOAc (500 ml) and water (100 ml). The organic layer was separated, washed with water (50 ml) and then with saturated aqueous NaCl (50 ml), dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure to obtain a crude residue. The remaining crude material was purified by silica gel chromatography (0→100% EtOAc gradient in hexanes) to give 6-(benzyloxy)benzo[b]thiophene. LC-MS (C 15 H 13 OS) (ES, m/z): 241 [M+H] + . 1 H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.77 (d, J=8.6 Hz, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.54 (d, J=5.2 Hz, 1H), 7.49 (d, J= 7.2 Hz, 2H), 7.44-7.38 (m, 2H), 7.37-7.32 (m, 2H), 7.08 (d, J=8.5 Hz, 1H), 5.17 (s, 2H).
Стадия 2: 6-(бензилокси)бензо[b]тиофен-2-карбальдегидStep 2: 6-(benzyloxy)benzo[b]thiophene-2-carbaldehyde
LDA (2.0 М в THF, 7.3 мл, 15 ммоль) добавляли к смеси 6-(бензилокси)бензо[b]тиофена (2.92 г, 12.2 ммоль) в THF (10.0 мл) при -78°С в атмосфере Ar. Реакционную смесь перемешивали при -78°С в течение 20 мин. К реакционной смеси добавляли DMF (2.4 мл, 30 ммоль) при -78°С, и реакционную смесь затем оставляли медленно нагреваться до комнатной температуры. Реакционную смесь перемешивали в течение 15 мин при комнатной температуре. Реакционную смесь останавливали лимонной кислотой (1.0 М в воде, 24 мл, 24 ммоль) при 0°С и затем разбавляли EtOAc (200 мл). Суспензию перемешивали в течение 15 мин. Органический слой отделяли, высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением с получением неочищенного остатка. Сырой остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0→100% градиент EtOAc в гексанах) с получением 6-(бензилокси)бензо[b]тиофен-2-карбальдегида. ЖХ-МС (C16H13O2S) (ES, m/z): 269 [М+Н]+. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 10.05 (s, 1Н), 8.34 (s, 1H), 8.01 (d, J=8.8 Гц, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.50 (d, J=7.3 Гц, 2H), 7.42 (t, J=7.3 Гц, 2H), 7.40-7.33 (m, 1H), 7.20 (d, J=8.4 Гц, 1H), 5.23 (s, 2H).LDA (2.0 M in THF, 7.3 mL, 15 mmol) was added to a mixture of 6-(benzyloxy)benzo[b]thiophene (2.92 g, 12.2 mmol) in THF (10.0 mL) at -78°C under Ar. The reaction mixture was stirred at -78°C for 20 minutes. DMF (2.4 ml, 30 mmol) was added to the reaction mixture at -78°C, and the reaction mixture was then allowed to slowly warm to room temperature. The reaction mixture was stirred for 15 minutes at room temperature. The reaction mixture was quenched with citric acid (1.0 M in water, 24 ml, 24 mmol) at 0°C and then diluted with EtOAc (200 ml). The suspension was stirred for 15 minutes. The organic layer was separated, dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure to obtain a crude residue. The crude residue was purified by silica gel chromatography (0→100% EtOAc gradient in hexanes) to give 6-(benzyloxy)benzo[b]thiophene-2-carbaldehyde. LC-MS (C 16 H 13 O 2 S) (ES, m/z): 269 [M+H] + . 1 H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.05 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 8.01 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.50 (d, J=7.3 Hz, 2H), 7.42 (t, J=7.3 Hz, 2H), 7.40-7.33 (m, 1H), 7.20 (d, J=8.4 Hz, 1H), 5.23 (s, 2H).
Стадия 3: трет-бутил 4-(6-(бепзилокси)бензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноатStep 3: tert-butyl 4-(6-(bepzyloxy)benzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate
Смесь 6-(бензилокси)бензо[b]тиофен-2-карбальдегида (2.02 г, 7.53 ммоль), 2-мезитил-6,7-дигидро-5Н-пирроло[2,1-с][1,2,4]триазол-2-ий хлорида (0.099 г, 0.38 ммоль) и трехосновного фосфата калия (1.6 г, 7.5 ммоль) продували Ar в течение 5 мин при 20°С. Затем добавляли толуол (15 мл) и трет-бутилакрилат (2.2 мл, 15 ммоль) при 20°С. Реакционную смесь оставляли перемешиваться в течение 18 ч при 20°С. Реакционную смесь затем разбавляли EtOAc (200 мл) и фильтровали для удаления неорганических солей. Фильтрат концентрировали под пониженным давлением с получением неочищенного остатка. Остаток сырого вещества очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0→100% градиент EtOAc в гексанах) с получением трет-бутил 4-(6-(бензилокси)бензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C23H25O4S) (ES, m/z): 397 [М+Н]+. 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8.35 (s, 1H), 7.96 (d, J=7.0 Гц, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.56-7.39 (m, 2Н), 7.47-7.33 (m, 3Н), 7.25-7.15 (m, 1Н), 5.24 (s, 2H), 3.34-3.23 (m, 2H), 2.65-2.55 (m, 2H), 1.40 (s, 9H).Mixture of 6-(benzyloxy)benzo[b]thiophene-2-carbaldehyde (2.02 g, 7.53 mmol), 2-mesityl-6,7-dihydro-5H-pyrrolo[2,1-c][1,2,4] triazol-2-chloride (0.099 g, 0.38 mmol) and tribasic potassium phosphate (1.6 g, 7.5 mmol) were purged with Ar for 5 min at 20°C. Toluene (15 ml) and tert-butyl acrylate (2.2 ml, 15 mmol) were then added at 20°C. The reaction mixture was left stirring for 18 hours at 20°C. The reaction mixture was then diluted with EtOAc (200 ml) and filtered to remove inorganic salts. The filtrate was concentrated under reduced pressure to obtain a crude residue. The residue of the crude material was purified by silica gel chromatography (0→100% EtOAc gradient in hexanes) to give tert-butyl 4-(6-(benzyloxy)benzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate. LC-MS (C 23 H 25 O 4 S) (ES, m/z): 397 [M+H] + . 1 H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.35 (s, 1H), 7.96 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.56-7.39 (m, 2H), 7.47- 7.33 (m, 3H), 7.25-7.15 (m, 1H), 5.24 (s, 2H), 3.34-3.23 (m, 2H), 2.65-2.55 (m, 2H), 1.40 (s, 9H).
Стадия 4: 4-(6-гидуоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутановая кислотаStep 4: 4-(6-hydroxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoic acid
HCl (37% в воде, 19.6 мл, 238 ммоль) добавляли к смеси трет-бутил 4-(6-(бензилокси)бензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата (2.36 г, 5.96 ммоль) в диоксане (100 мл). Реакционную смесь нагревали до 90°С в течение 2 дней. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и разбавляли EtOAc (500 мл). Органический слой отделяли, промывали водой (3×100 мл) и затем насыщенным водным NaCl (50 мл), высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением с получением 4-(6-гидроксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутановой кислоты, которую применяли без дополнительной очистки. ЖХ-МС (C12H11O4S) (ES, m/z): 251 [М+Н]+.HCl (37% in water, 19.6 mL, 238 mmol) was added to a mixture of tert-butyl 4-(6-(benzyloxy)benzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate (2.36 g, 5.96 mmol) in dioxane (100 ml). The reaction mixture was heated to 90°C for 2 days. The reaction mixture was cooled to room temperature and diluted with EtOAc (500 ml). The organic layer was separated, washed with water (3×100 ml) and then with saturated aqueous NaCl (50 ml), dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure to give 4-(6-hydroxybenzo[b]thiophen-2-yl) -4-oxobutanoic acid, which was used without further purification. LC-MS (C 12 H 11 O 4 S) (ES, m/z): 251 [M+H] + .
Стадия 5: метил 4-(б-гидроксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноатStep 5: Methyl 4-(b-hydroxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate
TMS-диазометан (2.0 М в гексанах, 3.0 мл, 6.0 ммоль) добавляли к смеси 4-(6-гидроксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутановой кислоты (1.5 г, 6.0 ммоль) в DCM (25 мл) и МеОН (25 мл) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 15 мин (пока не прекратилось выделение газа). Добавляли НОАс (несколько капель), чтобы погасить весь оставшийся TMS-диазометан. Реакционную смесь затем концентрировали под пониженным давлением с получением неочищенного остатка. Остаток сырого вещества очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0→100% градиент EtOAc в гексанах) с получением метил 4-(6-гидроксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C13H13O4S) (ES, m/z): 265 [М+Н]+. 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 10.17 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.84 (d, J=8.7 Гц, 1H), 7.30 (s, 1H), 6.97 (d, J=8.2 Гц, 1H), 3.76-3.65 (m, 1H), 3.60 (s, 3Н), 3.54-3.44 (m, 1H), 2.72-2.67 (m, 2H).TMS-diazomethane (2.0 M in hexanes, 3.0 mL, 6.0 mmol) was added to a mixture of 4-(6-hydroxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoic acid (1.5 g, 6.0 mmol) in DCM (25 mL ) and MeOH (25 ml) at 0°C. The reaction mixture was stirred at 0°C for 15 minutes (until gas evolution stopped). HOAc was added (a few drops) to quench any remaining TMS-diazomethane. The reaction mixture was then concentrated under reduced pressure to obtain a crude residue. The residue of the crude material was purified by silica gel chromatography (0→100% EtOAc gradient in hexanes) to give methyl 4-(6-hydroxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate. LC-MS (C 13 H 13 O 4 S) (ES, m/z): 265 [M+H] + . 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.17 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.84 (d, J=8.7 Hz, 1H), 7.30 (s, 1H), 6.97 (d, J=8.2 Hz, 1H), 3.76-3.65 (m, 1H), 3.60 (s, 3H), 3.54-3.44 (m, 1H), 2.72-2.67 (m, 2H).
Промежуточное соединение 41, как показано в Таблице 6 ниже, или может быть получено в соответствии со способами, аналогичными описанным в Промежуточном соединении 40 выше, с применением соответствующих исходных материалов, описанных в способах получения, или получено из коммерческих источников.Intermediate 41, as shown in Table 6 below, or can be prepared in accordance with methods similar to those described in Intermediate 40 above, using the appropriate starting materials described in the methods of production, or obtained from commercial sources.
Промежуточное соединение 42: Метил (S)-4-(6-(3-хлорпропокси)-5-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатIntermediate 42: Methyl (S)-4-(6-(3-chloropropoxy)-5-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
Стадия 1: 6-(бензилокси)-5-метоксибензо[b]тиофен-2-карбоновая кислотаStep 1: 6-(benzyloxy)-5-methoxybenzo[b]thiophene-2-carboxylic acid
Смесь 4-(бензилокси)-2-бром-5-метоксибензальдегида (13 г, 41 ммоль), K2CO3 (11 г, 81 ммоль), 18-Crown-6 (2.1 г, 8.1 ммоль) и метил 2-меркаптоацетата (6.0 мл, 67 ммоль) в DMF (150 мл) нагревали до 90°С в атмосфере Ar в течение 14 ч. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь останавливали водой (400 мл), подкисляли с помощью 1 н. HCl до рН~5 и экстрагировали EtOAc (3×250 мл). Объединенные органические слои промывали 10% водным LiCl (3×50 мл), высушивали над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток разбавляли EtOAc/МеОН (50 мл/50 мл) и обрабатывали водным LiOH (2.0 М, 80 мл, 160 ммоль) при 20°С.Реакционную смесь нагревали до 60°С в течение 2 ч. После охлаждения до комнатной температуры смесь концентрировали под пониженным давлением. Остаток разбавляли водным NaOH (1.0 М, 50 мл, 50 ммоль), водой (300 мл) и EtOAc (300 мл). Слои разделяли, и водный слой промывали EtOAc (3×200 мл). Водный слой затем подкисляли 6 н. HCl до рН~5, и экстрагировали EtOAc (3×300 мл). Органические вещества объединяли, промывали насыщенным водным NaCl (50 мл), высушивали над безводным Na2SO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток растирали с 1:1 EtOAc/PE (3×30 мл) и 1:1 DCM/PE (3×30 мл) с получением 6-(бензилокси)-5-метоксибензо[b]тиофен-2-карбоновой кислоты. ЖХ-МС (C17H15O4S) (ES, m/z): 315 [М+Н]+. 1Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ 13.16 (br s, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.50-7.46 (m, 2H), 7.44-7.32 (m, 3H), 5.17 (s, 2H), 3.83 (s, 3H).A mixture of 4-(benzyloxy)-2-bromo-5-methoxybenzaldehyde (13 g, 41 mmol), K 2 CO 3 (11 g, 81 mmol), 18-Crown-6 (2.1 g, 8.1 mmol) and methyl 2- mercaptoacetate (6.0 ml, 67 mmol) in DMF (150 ml) was heated to 90°C in an Ar atmosphere for 14 hours. After cooling to room temperature, the reaction mixture was stopped with water (400 ml), acidified with 1 N. HCl to pH~5 and extracted with EtOAc (3×250 ml). The combined organic layers were washed with 10% aqueous LiCl (3×50 ml), dried over anhydrous Na 2 SO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was diluted with EtOAc/MeOH (50 ml/50 ml) and treated with aqueous LiOH (2.0 M, 80 ml, 160 mmol) at 20°C. The reaction mixture was heated to 60°C for 2 hours. After cooling to room temperature, the mixture was concentrated under reduced pressure. The residue was diluted with aqueous NaOH (1.0 M, 50 ml, 50 mmol), water (300 ml) and EtOAc (300 ml). The layers were separated and the aqueous layer was washed with EtOAc (3×200 ml). The aqueous layer was then acidified with 6N. HCl to pH~5, and extracted with EtOAc (3×300 ml). The organics were combined, washed with saturated aqueous NaCl (50 ml), dried over anhydrous Na 2 SO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was triturated with 1:1 EtOAc/PE (3×30 ml) and 1:1 DCM/PE (3×30 ml) to obtain 6-(benzyloxy)-5-methoxybenzo[b]thiophene-2-carboxylic acid. LC-MS (C 17 H 15 O 4 S) (ES, m/z): 315 [M+H] + . 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6 ) δ 13.16 (br s, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.50-7.46 (m, 2H) , 7.44-7.32 (m, 3H), 5.17 (s, 2H), 3.83 (s, 3H).
Стадия 2: 6-(бензилокси)-5-метоксибензо[b]тиофен-2-карбонилхлоридStep 2: 6-(benzyloxy)-5-methoxybenzo[b]thiophene-2-carbonyl chloride
DMF (0.023 мл, 0.29 ммоль) добавляли к смеси 6-(бензилокси)-5-метоксибензо[b]тиофен-2-карбоновой кислоты (3.05 г, 9.70 ммоль) и (COCl)2 (2.55 мл, 29.1 ммоль) в THF (50 мл) при 0°С в атмосфере Ar. Смесь перемешивали при 0°С в течение 30 мин и затем нагревали до комнатной температуры. Реакционную смесь затем перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением с получением 6-(бензилокси)-5-метоксибензо[b]тиофен-2-карбонилхлорида, который применяли без очистки.DMF (0.023 ml, 0.29 mmol) was added to a mixture of 6-(benzyloxy)-5-methoxybenzo[b]thiophene-2-carboxylic acid (3.05 g, 9.70 mmol) and (COCl) 2 (2.55 ml, 29.1 mmol) in THF (50 ml) at 0°C in an Ar atmosphere. The mixture was stirred at 0°C for 30 minutes and then warmed to room temperature. The reaction mixture was then stirred for 2 hours at room temperature. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure to give 6-(benzyloxy)-5-methoxybenzo[b]thiophene-2-carbonyl chloride, which was used without purification.
Стадия 3: метил (8)-4-(6-(бензилокси)-5-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатStep 3: Methyl (8)-4-(6-(benzyloxy)-5-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
Смесь (R)-(3-метокси-2-метил-3-оксопропил)цинка (II) бромида (0.50 М в THF, 25 мл, 13 ммоль) медленно добавляли в колбу, содержащую ((тиофен-2-карбонил)окси)медь (2.38 г, 12.5 ммоль) в атмосфере Ar при 0°С. Реакционную смесь перемешивали в течение 20 мин при 0°С в атмосфере Ar. Дегазированную Ar смесь 6-(бензилокси)-5-метоксибензо[b]тиофен-2-карбонилхлорида (3.2 г, 9.6 ммоль) в THF (50 мл) затем медленно добавляли к смеси через канюлю при 0°С. Смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры, и затем перемешивали в течение 16 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь охлаждали до 0°С и останавливали добавлением насыщенного водного NH4Cl (50 мл), воды (100 мл) и EtOAc (500 мл). Полученную в результате двухфазную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре. Смесь затем фильтровали через фритту Сбыте, и фильтрат разделяли с использованием делительной воронки. Органический слой отделяли, промывали насыщенным водным NaCl (50 мл), высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0→50% градиент EtOAc в гексанах) с получением целевого продукта, который повторно очищали с помощью хроматографии на силикагеле (элюируя 0-50% EtOAc в DCM) с получением (S)-метил 4-(6-(бензилокси)-5-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C22H23O5S) (ES, m/z): 399 [М+Н]+. 1Н ЯМР (499 МГц, DMSO-d6) δ 8.22 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.52-7.47 (m, 3Н), 7.42 (t, J=7.3 Гц, 2Н), 7.38-7.34 (m, 1H), 5.19 (s, 2Н), 3.85 (s, 3Н), 3.60 (s, 3Н), 3.42 (dd, J=17.5, 8.6 Гц, 1H), 3.19 (dd, J=17.4, 4.9 Гц, 1H), 3.04-2.91 (m, 1H), 1.20 (d, J=7.1 Гц, 3Н).A mixture of (R)-(3-methoxy-2-methyl-3-oxopropyl)zinc(II) bromide (0.50 M in THF, 25 ml, 13 mmol) was slowly added to the flask containing ((thiophene-2-carbonyl)oxy )copper (2.38 g, 12.5 mmol) in an Ar atmosphere at 0°C. The reaction mixture was stirred for 20 min at 0°C in an Ar atmosphere. An Ar-degassed mixture of 6-(benzyloxy)-5-methoxybenzo[b]thiophene-2-carbonyl chloride (3.2 g, 9.6 mmol) in THF (50 ml) was then slowly added to the mixture via cannula at 0°C. The mixture was allowed to warm to room temperature, and then stirred for 16 hours at room temperature. The reaction mixture was cooled to 0°C and quenched by adding saturated aqueous NH 4 Cl (50 ml), water (100 ml) and EtOAc (500 ml). The resulting two-phase mixture was warmed to room temperature and stirred for 1 hour at room temperature. The mixture was then filtered through a Sales frit and the filtrate was separated using a separatory funnel. The organic layer was separated, washed with saturated aqueous NaCl (50 ml), dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (0→50% gradient EtOAc in hexanes) to give the title product, which was purified again by silica gel chromatography (eluting with 0-50% EtOAc in DCM) to give (S)-methyl 4-( 6-(benzyloxy)-5-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate. LC-MS (C 22 H 23 O 5 S) (ES, m/z): 399 [M+H] + . 1 H NMR (499 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.22 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.52-7.47 (m, 3H), 7.42 (t, J=7.3 Hz, 2H), 7.38- 7.34 (m, 1H), 5.19 (s, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.60 (s, 3H), 3.42 (dd, J=17.5, 8.6 Hz, 1H), 3.19 (dd, J=17.4, 4.9 Hz, 1H), 3.04-2.91 (m, 1H), 1.20 (d, J=7.1 Hz, 3H).
Стадия 4: метил (3)-4-(6-гидрокси-5-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатStep 4: Methyl (3)-4-(6-hydroxy-5-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
Смесь (S)-метил 4-(6-(бензилокси)-5-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата (1.60 г, 4.02 ммоль) и Pd/C (1.07 г, 1.00 ммоль) дегазировали Ar. К смеси медленно добавляли EtOAc (50 мл), МеОН (50 мл) и HCl (37% в воде, 0.66 мл, 8.0 ммоль) в атмосфере потока Ar. Полученную реакционную смесь дегазировали в вакууме и снова заполняли Н2. Реакционную смесь перемешивали в атмосфере Н2 в течение 3 ч. Реакционную смесь фильтровали через целит, промывая EtOAc.Фильтрат концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (элюируя 0-100% EtOAc в гексанах) с получением (S)-метил 4-(6-гидрокси-5-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C15H17O5S) (ES, m/z): 309 [М+Н]+. 1H ЯМР (499 МГц, DMSO-d6) δ 9.93 (s, 1Н), 8.17 (s, 1Н), 7.44 (s, 1H), 7.30 (s, 1H), 3.85 (s, 3Н), 3.60 (s, 3Н), 3.44-3.38 (m, 1H), 3.16 (dd, J=17.3, 4.7 Гц, 1H), 3.01-2.92 (m, 1H), 1.19 (d, J=7.0 Гц, 3Н).A mixture of (S)-methyl 4-(6-(benzyloxy)-5-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate (1.60 g, 4.02 mmol) and Pd/C (1.07 g, 1.00 mmol) degassed Ar. EtOAc (50 mL), MeOH (50 mL), and HCl (37% in water, 0.66 mL, 8.0 mmol) were slowly added to the mixture under an Ar stream. The resulting reaction mixture was degassed in vacuo and refilled with H 2 . The reaction mixture was stirred under H 2 for 3 hours. The reaction mixture was filtered through celite, washing with EtOAc. The filtrate was concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (eluting with 0-100% EtOAc in hexanes) to give (S)-methyl 4-(6-hydroxy-5-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4- oxobutanoate. LC-MS (C 15 H 17 O 5 S) (ES, m/z): 309 [M+H] + . 1 H NMR (499 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.93 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.44 (s, 1H), 7.30 (s, 1H), 3.85 (s, 3H), 3.60 ( s, 3H), 3.44-3.38 (m, 1H), 3.16 (dd, J=17.3, 4.7 Hz, 1H), 3.01-2.92 (m, 1H), 1.19 (d, J=7.0 Hz, 3H).
Стадия 5: метил (S)-4-(6-(3-хлорпропокси)-5-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатStep 5: Methyl (S)-4-(6-(3-chloropropoxy)-5-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
Смесь (S)-метил 4-(6-гидрокси-5-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата (141 мг, 0.457 ммоль), 1-бром-3-хлорпропана (360 мг, 2.3 ммоль) и K2CO3 (379 мг, 2.74 ммоль) дегазировали Ar. К смеси добавляли ACN (4.0 мл) и реакционную смесь нагревали до 50°С в течение 18 ч. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь затем разбавляли DCM (25 мл) и фильтровали. Фильтрат концентрировали под пониженным давлением и затем очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0→100% градиент EtOAc в DCM) с получением (S)-метил 4-(6-(3-хлорпропокси)-5-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C18H22ClO5S) (ES, m/z): 385 [М+Н]+.Mixture of (S)-methyl 4-(6-hydroxy-5-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate (141 mg, 0.457 mmol), 1-bromo-3-chloropropane (360 mg, 2.3 mmol) and K 2 CO 3 (379 mg, 2.74 mmol) were degassed with Ar. ACN (4.0 ml) was added to the mixture and the reaction mixture was heated to 50°C for 18 hours. After cooling to room temperature, the reaction mixture was then diluted with DCM (25 ml) and filtered. The filtrate was concentrated under reduced pressure and then purified by silica gel chromatography (0→100% EtOAc gradient in DCM) to give (S)-methyl 4-(6-(3-chloropropoxy)-5-methoxybenzo[b]thiophene-2 -yl)-2-methyl-4-oxobutanoate. LC-MS (C 18 H 22 ClO 5 S) (ES, m/z): 385 [M+H] + .
Промежуточное соединение 43, как показано в Таблице 7 ниже, или может быть получено в соответствии со способами, аналогичными описанным в Промежуточном соединении 42 выше, с применением соответствующих исходных материалов, описанных в способах получения, или получено из коммерческих источников.Intermediate 43, as shown in Table 7 below, or can be prepared in accordance with methods similar to those described in Intermediate 42 above, using the appropriate starting materials described in the preparation methods, or obtained from commercial sources.
Промежуточное соединение 44: метил (2S)-4-[5-(2-гидроксиэтил)-6-метокси-1-бензотиофен-2-ил]-2-метил-4-оксобутаноатIntermediate 44: Methyl (2S)-4-[5-(2-hydroxyethyl)-6-methoxy-1-benzothiophen-2-yl]-2-methyl-4-oxobutanoate
К перемешиваемой смеси метил (2S)-4-(5-бром-6-метокси-1-бензотиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата (1.24 г, 3.34 ммоль), трис(триметилсилил)силана (1.0 мл, 3.3 ммоль) и безводного Na2CO3 (708 мг, 6.68 ммоль) в дегазированном DME (16.5 мл) в атмосфере N2 добавляли смесь Ir(2-(2,4-дифторфенил)-5-(трифторметил)пиридин)2 (4,4'-ди-трет-бутил-2,2'-бипиридин)PF6 (38 мг, 33 мкмоль) в дегазированном DME (12 мл). Добавляли суспензию комплекса никель (II) хлорид этиленгликоль диметиловый эфир (3.7 мг, 17 мкмоль) и 4,4'-ди-трет-бутил-2,2'-бипиридина (4.5 мг, 17 мкмоль) в дегазированном DME (4.5 мл) и полученную в результате смесь перемешивали в атмосфере N2 в течение 15 мин при комнатной температуре. 2-Бромэтанол (835 мг, 6.68 ммоль) добавляли одной порцией в атмосфере N2, и реакционную смесь перемешивали и облучали в фотореакторе с интенсивностью света 20% в течение 24 ч при комнатной температуре. Смесь затем фильтровали, и фильтрат концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (EtOAc в гексанах) с получением метил (2S)-4-[5-(2-гидроксиэтил)-6-метокси-1-бензотиофен-2-ил]-2-метил-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C17H21O5S) (ES, m/z): 337 [М+Н]+. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6): δ 8.26 (s, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.58 (s, 1H), 4.64 (t, J=5.2 Гц, 1H), 3.88 (s, 3H), 3.64-3.55 (m, 2H), 3.59 (s, 3H), 3.42 (dd, J=17.5, 8.6 Гц, 1H), 3.19 (dd, J=17.5, 5.0 Гц, 1H), 3.01-2.92 (m, 1H), 2.81 (t, J=6.9 Гц, 2H), 1.19 (d, J=7.1 Гц, 3Н).To a stirred mixture of methyl (2S)-4-(5-bromo-6-methoxy-1-benzothiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate (1.24 g, 3.34 mmol), tris(trimethylsilyl)silane (1.0 ml, 3.3 mmol) and anhydrous Na 2 CO 3 (708 mg, 6.68 mmol) in degassed DME (16.5 ml) in an atmosphere of N 2 was added a mixture of Ir(2-(2,4-difluorophenyl)-5-(trifluoromethyl)pyridine) 2 (4,4'-di-tert-butyl-2,2'-bipyridine)PF 6 (38 mg, 33 µmol) in degassed DME (12 ml). Add a suspension of nickel(II) ethylene glycol chloride dimethyl ether complex (3.7 mg, 17 µmol) and 4,4'-di-tert-butyl-2,2'-bipyridine (4.5 mg, 17 µmol) in degassed DME (4.5 ml) and the resulting mixture was stirred under N 2 atmosphere for 15 minutes at room temperature. 2-Bromoethanol (835 mg, 6.68 mmol) was added in one portion under N 2 atmosphere, and the reaction mixture was stirred and irradiated in a photoreactor with light intensity of 20% for 24 h at room temperature. The mixture was then filtered and the filtrate was concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel flash column chromatography (EtOAc in hexanes) to give methyl (2S)-4-[5-(2-hydroxyethyl)-6-methoxy-1-benzothiophen-2-yl]-2-methyl- 4-oxobutanoate. LC-MS (C 17 H 21 O 5 S) (ES, m/z): 337 [M+H] + . 1 H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.26 (s, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.58 (s, 1H), 4.64 (t, J=5.2 Hz, 1H), 3.88 (s , 3H), 3.64-3.55 (m, 2H), 3.59 (s, 3H), 3.42 (dd, J=17.5, 8.6 Hz, 1H), 3.19 (dd, J=17.5, 5.0 Hz, 1H), 3.01- 2.92 (m, 1H), 2.81 (t, J=6.9 Hz, 2H), 1.19 (d, J=7.1 Hz, 3H).
Промежуточное соединение 45: трет-бутил 4-(6-метокси-5-(3-оксопропил)бензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноатIntermediate 45: tert-butyl 4-(6-methoxy-5-(3-oxopropyl)benzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate
В 4 мл виалу добавляли трет-бутил 4-(5-(3-гидроксипропил)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноат (30 мг, 0.079 ммоль), периодинан Десса-Мартина (1,1,1-триацетокси-1,1-дигидро-1,2-бензодиоксол-3(1Н)-он; 50 мг, 0.1 ммоль) и DCM (1.0 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Смесь очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0→55% градиент EtOAc в гексанах) с получением трет-бутил 4-(6-метокси-5-(3-оксопропил)бензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C20H24O5SNa) (ES, m/z): 399 [M+Na]+. 1H ЯМР (500 МГц, CDCl3) δ 9.85 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.64 (s, 1H), 3.27 (t, J=6.8 Гц, 2H), 3.05 (t, J=7.4 Гц, 2H), 2.80 (t, J=7.2 Гц, 2H), 2.72 (t, J=6.7 Гц, 2H), 1.46 (s, 9H).Tert-butyl 4-(5-(3-hydroxypropyl)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate (30 mg, 0.079 mmol), Dess-Martin periodinane (1, 1,1-triacetoxy-1,1-dihydro-1,2-benzodioxol-3(1H)-one; 50 mg, 0.1 mmol) and DCM (1.0 ml). The mixture was stirred at room temperature for 1 hour. The mixture was purified by silica gel chromatography (0→55% EtOAc gradient in hexanes) to give tert-butyl 4-(6-methoxy-5-(3-oxopropyl)benzo[b] thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate. LC-MS (C 20 H 24 O 5 SNa) (ES, m/z): 399 [M+Na] + . 1 H NMR (500 MHz, CDCl 3 ) δ 9.85 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.64 (s, 1H), 3.27 (t, J=6.8 Hz, 2H), 3.05 (t, J= 7.4 Hz, 2H), 2.80 (t, J=7.2 Hz, 2H), 2.72 (t, J=6.7 Hz, 2H), 1.46 (s, 9H).
Промежуточное соединение 46: трет-бутил 4-(5-амино-6-метокситиено[3,2-b]пиридин-2-ил)-4-оксобутаноатIntermediate 46: tert-butyl 4-(5-amino-6-methoxythieno[3,2-b]pyridin-2-yl)-4-oxobutanoate
Стадия 1: трет-бутил 4-(5-((дифенилметилен)амино)-6-метокситиено[3,2-b]пиридин-2-ил)-4-оксобутаноатStep 1: tert-butyl 4-(5-((diphenylmethylene)amino)-6-methoxythieno[3,2-b]pyridin-2-yl)-4-oxobutanoate
В 4 мл виалу добавляли Cs2CO3 (252 мг, 0.773 ммоль), дифенилметанимин (129 мкл, 0.773 ммоль), трет-бутил 4-(5-хлор-6-метокситиено[3,2-b]пиридин-2-ил)-4-оксобутаноат (138 мг, 0.387 ммоль), Rac BINAP Pd G3 (19 мг, 0.019 ммоль) и толуол (2.0 мл). Смесь нагревали до 120°С в течение 3.5 ч. После охлаждения до комнатной температуры смесь сразу очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0→50% градиент EtOAc в гексанах) с получением трет-бутил 4-(5-((дифенилметилен)амино)-6-метокситиено[3,2-b]пиридин-2-ил)-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C29H29N2O4S) (ES, m/z): 501 [М+Н]+.Cs 2 CO 3 (252 mg, 0.773 mmol), diphenylmethanimine (129 μL, 0.773 mmol), tert-butyl 4-(5-chloro-6-methoxythieno[3,2-b]pyridine-2- yl)-4-oxobutanoate (138 mg, 0.387 mmol), Rac BINAP Pd G3 (19 mg, 0.019 mmol) and toluene (2.0 ml). The mixture was heated to 120°C for 3.5 hours. After cooling to room temperature, the mixture was immediately purified by silica gel chromatography (0→50% EtOAc gradient in hexanes) to give tert-butyl 4-(5-((diphenylmethylene)amino) -6-methoxythieno[3,2-b]pyridin-2-yl)-4-oxobutanoate. LC-MS (C 29 H 29 N 2 O 4 S) (ES, m/z): 501 [M+H] + .
Стадия 2: трет-бутил 4-(5-амино-6-метокситиено[3,2-b]пиридин-2-ил)-4-оксобутаноатStep 2: tert-butyl 4-(5-amino-6-methoxythieno[3,2-b]pyridin-2-yl)-4-oxobutanoate
В 20 мл виалу добавляли трет-бутил 4-(5-((дифенилметилен)амино)-6-метокситиено[3,2-b]пиридин-2-ил)-4-оксобутаноат (146 мг, 0.291 ммоль), АсОН (2.0 мл), МеОН (2.0 мл), воду (2.0 мл) и THF (6.0 мл). Смесь нагревали до 50°С в течение 1 ч. После охлаждения до комнатной температуры смесь затем оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 24 ч. Смесь затем разбавляли EtOAc (50 мл) и промывали водным насыщенным NaHCO3 (50 мл) и водой (50 мл). Органический слой высушивали над Na2SO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Полученный в результате остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0→50% градиент EtOAc в гексанах) с получением трет-бутил 4-(5-амино-6-метокситиено[3,2-b]пиридин-2-ил)-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C16H21N2O4S) (ES, m/z): 337 [М+Н]+. 1H ЯМР (500 МГц, CDCl3) δ 8.02 (s, 1H), 7.53 (s, 1H), 4.11 (s, 3Н), 3.24 (t, J=6.4 Гц, 2Н), 2.74-2.70 (m, 2Н), 1.46 (s, 9Н).Tert-butyl 4-(5-((diphenylmethylene)amino)-6-methoxythieno[3,2-b]pyridin-2-yl)-4-oxobutanoate (146 mg, 0.291 mmol), AcOH ( 2.0 ml), MeOH (2.0 ml), water (2.0 ml) and THF (6.0 ml). The mixture was heated to 50°C for 1 hour. After cooling to room temperature, the mixture was then left to stir at room temperature for 24 hours. The mixture was then diluted with EtOAc (50 ml) and washed with aqueous saturated NaHCO 3 (50 ml) and water (50 ml). The organic layer was dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The resulting residue was purified by silica gel chromatography (0→50% EtOAc gradient in hexanes) to give tert-butyl 4-(5-amino-6-methoxythieno[3,2-b]pyridin-2-yl)-4 -oxobutanoate. LC-MS (C 16 H 21 N 2 O 4 S) (ES, m/z): 337 [M+H] + . 1 H NMR (500 MHz, CDCl 3 ) δ 8.02 (s, 1H), 7.53 (s, 1H), 4.11 (s, 3H), 3.24 (t, J=6.4 Hz, 2H), 2.74-2.70 (m, 2H), 1.46 (s, 9H).
Промежуточное соединение 47: Метил (S)-4-(6-(3-гидроксипропокси)-5-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатIntermediate 47: Methyl (S)-4-(6-(3-hydroxypropoxy)-5-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
Смесь (S)-метил 4-(6-гидрокси-5-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата (25 мг, 0.081 ммоль), 3-хлорпропан-1-ола (10 мг, 0.1 ммоль) и K2CO3 (22 мг, 0.16 ммоль) дегазировали Ar. К смеси добавляли DMF (0.50 мл), и реакционную смесь облучали в микроволновом реакторе до 100°С в течение 1 ч. Реакционную смесь оставляли охлаждаться до комнатной температуры и затем разбавляли EtOAc (25 мл) и водой (5 мл). Органический слой отделяли, промывали дополнительным объемом воды (5 мл) и затем насыщенным водным NaCl (5 мл), высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением с получением неочищенного остатка. Остаток сырого вещества очищали с помощью хроматографии на силикагеле (элюируя 0-100% [5% МеОН в EtOAc] в DCM) с получением (S)-метил 4-(6-(3-гидроксипропокси)-5-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C18H23O6S) (ES, m/z): 367 [М+Н]+.A mixture of (S)-methyl 4-(6-hydroxy-5-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate (25 mg, 0.081 mmol), 3-chloropropan-1-ol (10 mg, 0.1 mmol) and K 2 CO 3 (22 mg, 0.16 mmol) were degassed with Ar. DMF (0.50 ml) was added to the mixture and the reaction mixture was irradiated in a microwave reactor to 100°C for 1 hour. The reaction mixture was allowed to cool to room temperature and then diluted with EtOAc (25 ml) and water (5 ml). The organic layer was separated, washed with additional water (5 ml) and then with saturated aqueous NaCl (5 ml), dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure to obtain a crude residue. The residue of the crude material was purified by silica gel chromatography (eluting with 0-100% [5% MeOH in EtOAc] in DCM) to give (S)-methyl 4-(6-(3-hydroxypropoxy)-5-methoxybenzo[b]thiophene -2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate. LC-MS (C 18 H 23 O 6 S) (ES, m/z): 367 [M+H] + .
Промежуточное соединение 48, как показано в Таблице 8 ниже, или может быть получено в соответствии со способами, аналогичными описанным в Промежуточном соединении 47 выше, с применением соответствующих исходных материалов, описанных в способах получения, или получено из коммерческих источников.Intermediate 48, as shown in Table 8 below, or can be prepared in accordance with methods similar to those described in Intermediate 47 above, using the appropriate starting materials described in the preparation methods, or obtained from commercial sources.
Промежуточное соединение 49: трет-бутил 4-(5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноатIntermediate 49: tert-butyl 4-(5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate
Стадия 1: трет-бутил 4-(6-метокси-5-(3-((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)пропокси)бензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноатStep 1: tert-butyl 4-(6-methoxy-5-(3-((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)propoxy)benzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate
К смеси трет-бутил 4-(5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата (3.0 г, 8.9 ммоль), K2CO3 (7.4 г, 54 ммоль) и ACN (20 мл) добавляли 2-(3-бромпропокси)тетрагидро-2Н-пиран (3.8 мл, 22 ммоль). Реакцию нагревали до 65°С в течение 4 ч. После охлаждения до комнатной температуры смесь фильтровали, промывали ACN, и затем растворитель удаляли под пониженным давлением. Полученный в результате остаток растворяли в DCM (10 мл) и медленно добавляли гексан (100 мл). Полученный в результате осадок отфильтровывали, промывали гексаном и высушивали на воздухе с получением трет-бутил 4-(6-метокси-5-(3-((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)пропокси)бензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C25H34O7SNa) (ES, m/z): 501 [M+Na]+. 1Н ЯМР (600 МГц, DMSO-d6) δ 8.16 (s, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.46 (s, 1H), 4.54 (s, 1H), 4.06 (t, J=6.2 Гц, 2H), 3.83 (s, 3H), 3.78 (dt, J=9.6, 6.4 Гц, 1H), 3.69 (dd, J=13.5, 5.5 Гц, 1H), 3.52-3.45 (m, 1H), 3.41-3.35 (m, 1H), 3.20 (t, J=6.2 Гц, 2H), 2.54 (t, J=6.2 Гц, 2H), 2.02-1.95 (m, 2H), 1.71-1.62 (m, 1H), 1.58 (t, J=7.8 Гц, 1H), 1.47-1.39 (m, 3H), 1.36-1.33 (m, 10H).To a mixture of tert-butyl 4-(5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate (3.0 g, 8.9 mmol), K 2 CO 3 (7.4 g, 54 mmol) and ACN ( 20 ml) 2-(3-bromopropoxy)tetrahydro-2H-pyran (3.8 ml, 22 mmol) was added. The reaction was heated to 65°C for 4 hours. After cooling to room temperature, the mixture was filtered, washed with ACN, and then the solvent was removed under reduced pressure. The resulting residue was dissolved in DCM (10 ml) and hexane (100 ml) was added slowly. The resulting precipitate was filtered off, washed with hexane and air dried to give tert-butyl 4-(6-methoxy-5-(3-((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)propoxy)benzo[b]thiophene -2-yl)-4-oxobutanoate. LC-MS (C 25 H 34 O 7 SNa) (ES, m/z): 501 [M+Na] + . 1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.16 (s, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.46 (s, 1H), 4.54 (s, 1H), 4.06 (t, J=6.2 Hz, 2H), 3.83 (s, 3H), 3.78 (dt, J=9.6, 6.4 Hz, 1H), 3.69 (dd, J=13.5, 5.5 Hz, 1H), 3.52-3.45 (m, 1H), 3.41-3.35 (m, 1H), 3.20 (t, J=6.2 Hz, 2H), 2.54 (t, J=6.2 Hz, 2H), 2.02-1.95 (m, 2H), 1.71-1.62 (m, 1H), 1.58 ( t, J=7.8 Hz, 1H), 1.47-1.39 (m, 3H), 1.36-1.33 (m, 10H).
Стадия 2: трет-бутил 4-(5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноатStep 2: tert-butyl 4-(5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate
К смеси трет-бутил 4-(6-метокси-5-(3-((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)пропокси)бензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата (3.78 г, 7.90 ммоль) и EtOH (50 мл) добавляли pTsOH (2.2 г, 12 ммоль), и смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 2 ч. Смесь затем разбавляли DCM и останавливали водным насыщенным ИаНСОз. Органический слой затем отделяли, высушивали над Na2SO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением с получением трет-бутил 4-(5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C20H26O6SNa) (ES, m/z): 417 [M+Na]+. 1H ЯМР (600 МГц, DMSO-d6) δ 8.15 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.44 (s, 1H), 4.53 (t, J=4.7 Гц, 1H), 4.05 (t, J=6.2 Гц, 2H), 3.83 (s, 3H), 3.55 (q, J=5.4 Гц, 2H), 3.20 (t, J=6.l Гц, 2H), 2.54 (t, J=6.1 Гц, 2H), 1.88 (p, J=5.8 Гц, 2H), 1.33 (s, 9H).To a mixture of tert-butyl 4-(6-methoxy-5-(3-((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)propoxy)benzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate (3.78 g , 7.90 mmol) and EtOH (50 ml), pTsOH (2.2 g, 12 mmol) was added and the mixture was left stirring at room temperature for 2 hours. The mixture was then diluted with DCM and stopped with aqueous saturated NaHCO3. The organic layer was then separated, dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure to give tert-butyl 4-(5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate. LC-MS (C 20 H 26 O 6 SNa) (ES, m/z): 417 [M+Na] + . 1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.15 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.44 (s, 1H), 4.53 (t, J=4.7 Hz, 1H), 4.05 (t, J=6.2 Hz, 2H), 3.83 (s, 3H), 3.55 (q, J=5.4 Hz, 2H), 3.20 (t, J=6.l Hz, 2H), 2.54 (t, J=6.1 Hz, 2H), 1.88 (p, J=5.8 Hz, 2H), 1.33 (s, 9H).
Промежуточное соединение 50, как показано в Таблице 9 ниже, или может быть получено в соответствии со способами, аналогичными описанным в Промежуточном соединении 49 выше, с применением соответствующих исходных материалов, описанных в способах получения, или получено из коммерческих источников.Intermediate 50, as shown in Table 9 below, or can be prepared in accordance with methods similar to those described in Intermediate 49 above, using the appropriate starting materials described in the methods of preparation, or obtained from commercial sources.
Промежуточное соединение 51: Метил 4-(5-гидроксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноатIntermediate 51: Methyl 4-(5-hydroxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate
Смесь трет-бутил 4-(5-(бензилокси)бензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата (1.43 г, 3.60 ммоль) и Pd/C (10% масс/масс, 1.5 г, 1.4 ммоль) дегазировали Ar. К смеси медленно добавляли МеОН (25 мл), EtOAc (25 мл) и HCl (37% в воде, 0.59 мл, 7.2 ммоль) в атмосфере потока Ar. Полученную реакционную смесь дегазировали с помощью вакуума и снова заполняли H2. Полученную в результате смесь перемешивали в атмосфере H2 в течение 24 ч. Реакционную смесь затем фильтровали через целит, и целит промывали EtOAc. Фильтрат концентрировали под пониженным давлением с получением неочищенного остатка. Остаток сырого вещества очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0→100% градиент EtOAc в гексанах) с получением метил 4-(5-гидроксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C13H13O4S) (ES, m/z): 265 [М+Н]+. 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 9.74 (s, 1Н), 8.28 (s, 1H), 7.85 (d, J=8.5 Гц, 1H), 7.36 (s, 1H), 7.07 (d, J=8.0 Гц, 1H), 3.63 (s, 3H), 2.75-2.67 (m, 2H); 2 алифатических протона закрыты пиком растворителя и не видны.Mixture of tert-butyl 4-(5-(benzyloxy)benzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate (1.43 g, 3.60 mmol) and Pd/C (10% w/w, 1.5 g, 1.4 mmol) degassed Ar. MeOH (25 mL), EtOAc (25 mL), and HCl (37% in water, 0.59 mL, 7.2 mmol) were slowly added to the mixture under an Ar stream. The resulting reaction mixture was degassed using vacuum and refilled with H 2 . The resulting mixture was stirred under H 2 for 24 hours. The reaction mixture was then filtered through celite and the celite was washed with EtOAc. The filtrate was concentrated under reduced pressure to obtain a crude residue. The residue of the crude material was purified by silica gel chromatography (0→100% EtOAc gradient in hexanes) to give methyl 4-(5-hydroxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate. LC-MS (C 13 H 13 O 4 S) (ES, m/z): 265 [M+H] + . 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.74 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 7.85 (d, J=8.5 Hz, 1H), 7.36 (s, 1H), 7.07 (d, J=8.0 Hz, 1H), 3.63 (s, 3H), 2.75-2.67 (m, 2H); The 2 aliphatic protons are covered by the solvent peak and are not visible.
Промежуточное соединение 52: метил (2S)-4-(5,6-дигидрокси-1-бензотиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатIntermediate 52: Methyl (2S)-4-(5,6-dihydroxy-1-benzothiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
Стадия 1: (2S)-4-(5,6-дигидрокси-1-бензотиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутановая кислотаStep 1: (2S)-4-(5,6-dihydroxy-1-benzothiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoic acid
К перемешанному раствору (2S)-4-(5,6-диметокси-1-бензотиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутановой кислоты (2.0 г, 6.5 ммоль) в DCM (65 мл) добавляли BBr3 (1 M в DCM, 19.5 мл, 19.5 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры в течение 2.5 ч. Смесь затем охлаждали до 0°С, обрабатывали водой и концентрировали под пониженным давлением. Остаток фильтровали, промывали водой и высушивали под высоким вакуумом с получением (2S)-4-(5,6-дигидрокси-1-бензотиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутановой кислоты, которую применяли без дополнительной очистки. ЖХ-МС (C13H13O5S) ES, m/z): 281 [М+Н]+. 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 12.18 (s, 1H), 9.78 (brs, 1H), 9.49 (brs, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.28 (s, 1H), 7.24 (s, 1H), 3.39-3.33 (m, 1H), 3.03 (dd, J=17.2, 5.2 Гц, 1H), 2.91-2.84 (m, 1H), 1.16 (d, J=7.1 Гц, 3Н).BBr 3 ( 1 M in DCM, 19.5 ml, 19.5 mmol) at 0°C. The reaction mixture was allowed to warm to room temperature over 2.5 hours. The mixture was then cooled to 0°C, treated with water and concentrated under reduced pressure. The residue was filtered, washed with water and dried under high vacuum to give (2S)-4-(5,6-dihydroxy-1-benzothiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoic acid, which was used without further purification. LC-MS (C 13 H 13 O 5 S) ES, m/z): 281 [M+H] + . 1 H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 12.18 (s, 1H), 9.78 (brs, 1H), 9.49 (brs, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.28 (s, 1H), 7.24 ( s, 1H), 3.39-3.33 (m, 1H), 3.03 (dd, J=17.2, 5.2 Hz, 1H), 2.91-2.84 (m, 1H), 1.16 (d, J=7.1 Hz, 3H).
Стадия 2: метил (2S)-4-(5,6-дигидрокси-1-бензотиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатStep 2: Methyl (2S)-4-(5,6-dihydroxy-1-benzothiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
К перемешанному раствору (2S)-4-(5,6-дигидрокси-1-бензотиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутановой кислоты (1.35 г, 4.82 ммоль) в DCM (24 мл) и МеОН (24 мл) добавляли TMS-диазометан (2 M в гексанах, 3.6 мл, 7.2 ммоль). Смесь оставляли перемешиваться в течение 30 мин, обрабатывали НОАс (0.28 мл, 4.8 ммоль) и концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0→10% градиент МеОН в DCM) с получением метил (2S)-4-(5,6-дигидрокси-1-бензотиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C14H15O5S) (ES, m/z): 295 [М+Н]+. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 9.85 (s, 1H), 9.45 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.28 (s, 1H), 7.25 (s, 1H), 3.59 (s, 3H), 3.41-3.34 (m, 1H), 3.17-3.11 (m, 1H), 2.98-2.91 (m, 1H), 1.17 (d, J=7.1 Гц, 3Н).To a stirred solution of (2S)-4-(5,6-dihydroxy-1-benzothiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoic acid (1.35 g, 4.82 mmol) in DCM (24 ml) and MeOH (24 ml) TMS-diazomethane (2 M in hexanes, 3.6 ml, 7.2 mmol) was added. The mixture was left stirring for 30 min, treated with HOAc (0.28 ml, 4.8 mmol) and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (0→10% MeOH gradient in DCM) to give methyl (2S)-4-(5,6-dihydroxy-1-benzothiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate. LC-MS (C 14 H 15 O 5 S) (ES, m/z): 295 [M+H] + . 1 H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.85 (s, 1H), 9.45 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.28 (s, 1H), 7.25 (s, 1H), 3.59 ( s, 3H), 3.41-3.34 (m, 1H), 3.17-3.11 (m, 1H), 2.98-2.91 (m, 1H), 1.17 (d, J=7.1 Hz, 3H).
Промежуточное соединение 53: Метил (2S)-4-(5,6-бис(3-гидроксипропокси)-1-бензотиофен-2-ил]-2-метил-4-оксобутаноатIntermediate 53: Methyl (2S)-4-(5,6-bis(3-hydroxypropoxy)-1-benzothiophen-2-yl]-2-methyl-4-oxobutanoate
Смесь метил (2S)-4-(5,6-дигидрокси-1-бензотиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата (230 мг, 0.78 ммоль), 3-хлор-1-пропанола (196 мкл, 2.34 ммоль) и K2CO3 (432 мг, 3.13 ммоль) в DMF (7.8 мл) облучали в микроволновом реакторе до 100°С в течение 1 ч. После охлаждения до комнатной температуры смесь разбавляли EtOAc и насыщенным водным NaCl. Органический слой отделяли, высушивали над Na2SO4, фильтровали и затем концентрировали под пониженным давлением. Полученный в результате остаток очищали с помощью флэш-хроматографии (0→10% градиент МеОН в DCM) с получением метил (2S)-4-[5,6-бис(3-гидроксипропокси)-1-бензотиофен-2-ил]-2-метил-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C20H27O7S) (ES, m/z): 411 [М+Н]+ A mixture of methyl (2S)-4-(5,6-dihydroxy-1-benzothiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate (230 mg, 0.78 mmol), 3-chloro-1-propanol (196 μl, 2.34 mmol) and K 2 CO 3 (432 mg, 3.13 mmol) in DMF (7.8 ml) were irradiated in a microwave reactor to 100°C for 1 hour. After cooling to room temperature, the mixture was diluted with EtOAc and saturated aqueous NaCl. The organic layer was separated, dried over Na 2 SO 4 , filtered and then concentrated under reduced pressure. The resulting residue was purified by flash chromatography (0→10% MeOH gradient in DCM) to give methyl (2S)-4-[5,6-bis(3-hydroxypropoxy)-1-benzothiophen-2-yl]- 2-methyl-4-oxobutanoate. LC-MS (C 20 H 27 O 7 S) (ES, m/z): 411 [M+H] +
Промежуточное соединение 54: метил (2S)-4-[6-(дифторметокси)-5-гидрокси-1-бензотиофен-2-ил]-2-метил-4-оксобутаноатIntermediate 54: Methyl (2S)-4-[6-(difluoromethoxy)-5-hydroxy-1-benzothiophen-2-yl]-2-methyl-4-oxobutanoate
К замороженной смеси метил (2S)-4-(5,6-дигидрокси-1-бензотиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата (177 мг, 0.601 ммоль) и KOH (1.0 М в воде, 120 мкл, 1.2 ммоль) в ACN (5.5 мл) и воде (0.55 мл) при -78°С добавляли диэтил(бромдифторметил)фосфонат(170 мкл, 0.96 ммоль). Охлаждающую баню удаляли, и реакционную смесь оставляли перемешиваться в течение 4 ч. Смесь разбавляли EtOAc и водой. Слои разделяли, и водный слой повторно экстрагировали EtOAc (х3). Объединенные органические вещества высушивали над Na2SO4, фильтровали и затем концентрировали под пониженным давлением. Полученную в результате смесь очищали с помощью флэш-хроматографии (0-50% EtOAc в DCM) с получением неочищенного метил (2S)-4-[6-(дифторметокси)-5-гидрокси-1-бензотиофен-2-ил]-2-метил-4-оксобутаноата. Целевые фракции очищали с помощью SFC (15% МеОН (+0.25% DMEA) в СО2) с получением метил (2S)-4-[6-(дифторметокси)-5-гидрокси-1-бензотиофен-2-ил]-2-метил-4-оксобутаноата, время удерживания 4.4 мин. ЖХ-МС (C15H15F2O5S) (ES, m/z): 345 [М+Н]+. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 10.25 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.18 (t, J=74.4 Гц, 1H), 3.59 (s, 3H), 3.44 (dd, J=17.6, 8.7 Гц, 1H), 3.20 (dd, J=17.6, 4.9 Гц, 1H), 3.01-2.94 (m, 1H), 1.19(d, J=7.1 Гц, 3Н).To a frozen mixture of methyl (2S)-4-(5,6-dihydroxy-1-benzothiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate (177 mg, 0.601 mmol) and KOH (1.0 M in water, 120 µl , 1.2 mmol) in ACN (5.5 ml) and water (0.55 ml) at -78°C, diethyl (bromodifluoromethyl)phosphonate (170 μl, 0.96 mmol) was added. The cooling bath was removed and the reaction mixture was left stirring for 4 hours. The mixture was diluted with EtOAc and water. The layers were separated and the aqueous layer was re-extracted with EtOAc (x3). The combined organics were dried over Na 2 SO 4 , filtered and then concentrated under reduced pressure. The resulting mixture was purified by flash chromatography (0-50% EtOAc in DCM) to give crude methyl (2S)-4-[6-(difluoromethoxy)-5-hydroxy-1-benzothiophen-2-yl]-2 -methyl-4-oxobutanoate. Target fractions were purified using SFC (15% MeOH (+0.25% DMEA) in CO 2 ) to give methyl (2S)-4-[6-(difluoromethoxy)-5-hydroxy-1-benzothiophen-2-yl]-2 -methyl-4-oxobutanoate, retention time 4.4 min. LC-MS (C 15 H 15 F 2 O 5 S) (ES, m/z): 345 [M+H] + . 1 H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.25 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.18 (t, J=74.4 Hz, 1H), 3.59 (s, 3H), 3.44 (dd, J=17.6, 8.7 Hz, 1H), 3.20 (dd, J=17.6, 4.9 Hz, 1H), 3.01-2.94 (m, 1H), 1.19(d , J=7.1 Hz, 3H).
Промежуточное соединение 55: Метил 4-(4-фтор-5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2,2-диметил-4-оксобутаноатIntermediate 55: Methyl 4-(4-fluoro-5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2,2-dimethyl-4-oxobutanoate
Стадия 1: 4-(4-фтор-5,6-диметоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2,2-диметил-4-оксобутановая кислотаStep 1: 4-(4-fluoro-5,6-dimethoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2,2-dimethyl-4-oxobutanoic acid
3,3-Диметилдигидрофуран-2,5-дион (4.6 г, 36 ммоль) добавляли к смеси 4-фтор-5,6-диметоксибензо[b]тиофена (3.8 г, 18 ммоль) и AlCh (3.1 г, 23 ммоль) в DCM (100 мл) при 0°С в атмосфере Ar. Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 2 ч и затем нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 16 ч. Реакцию затем останавливали медленным добавлением реакционной смеси к смеси воды (200 мл) и EtOAc (500 мл) при 0°С. Полученную в результате смесь перемешивали в течение 1 ч при 20°С и затем разбавляли HCl (2.0 М в воде, 36 мл, 72 ммоль). Органический слой отделяли, промывали насыщенным водным NaCl (50 мл), высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Смесь затем очищали с помощью хроматографии на силикагеле с получением 4-(4-фтор-5,6-диметоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2,2-диметил-4-оксобутановой кислоты. ЖХ-МС (C16H18FO5S) (ES, m/z): 341 [М+Н]+.3,3-Dimethyldihydrofuran-2,5-dione (4.6 g, 36 mmol) was added to a mixture of 4-fluoro-5,6-dimethoxybenzo[b]thiophene (3.8 g, 18 mmol) and AlCh (3.1 g, 23 mmol) in DCM (100 ml) at 0°C in an Ar atmosphere. The reaction mixture was stirred at 0°C for 2 hours and then warmed to room temperature and stirred for 16 hours. The reaction was then stopped by slowly adding the reaction mixture to a mixture of water (200 ml) and EtOAc (500 ml) at 0°C. The resulting mixture was stirred for 1 hour at 20°C and then diluted with HCl (2.0 M in water, 36 ml, 72 mmol). The organic layer was separated, washed with saturated aqueous NaCl (50 ml), dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The mixture was then purified by silica gel chromatography to give 4-(4-fluoro-5,6-dimethoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2,2-dimethyl-4-oxobutanoic acid. LC-MS (C 16 H 18 FO 5 S) (ES, m/z): 341 [M+H] + .
Стадия 2: метил 4-(4-фтор-5,6-диметоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2,2-диметил-4-оксобутаноатStep 2: Methyl 4-(4-fluoro-5,6-dimethoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2,2-dimethyl-4-oxobutanoate
К смеси 4-(4-фтор-5,6-диметоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2,2-диметил-4-оксобутановой кислоты (2.3 г, 6.8 ммоль) в DMF (45 мл) добавляли K2CO3 (2.3 г, 17 ммоль). Через 10 мин добавляли CH3I (2.1 мл, 34 ммоль), и смесь перемешивали в течение 18 ч при комнатной температуре. Смесь затем разбавляли водой и Et2O. Органический слой отделяли, высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Смесь затем очищали с помощью хроматографии на силикагеле с получением метил 4-(4-фтор-5,6-диметоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2,2-диметил-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C17H20FO5S) (ES, m/z): 355 [М+Н]+. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8.32 (s, 1H), 7.59 (s, 1Н), 3.92 (s, 3Н), 3.85 (s, 3Н), 3.57 (s, 3Н), 3.44 (s, 2H), 1.23 (s, 6H).To a mixture of 4-(4-fluoro-5,6-dimethoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2,2-dimethyl-4-oxobutanoic acid (2.3 g, 6.8 mmol) in DMF (45 ml) was added K 2 CO 3 (2.3 g, 17 mmol). After 10 minutes, CH 3 I (2.1 ml, 34 mmol) was added and the mixture was stirred for 18 hours at room temperature. The mixture was then diluted with water and Et 2 O. The organic layer was separated, dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The mixture was then purified by silica gel chromatography to give methyl 4-(4-fluoro-5,6-dimethoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2,2-dimethyl-4-oxobutanoate. LC-MS (C 17 H 20 FO 5 S) (ES, m/z): 355 [M+H] + . 1 H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.32 (s, 1H), 7.59 (s, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.85 (s, 3H), 3.57 (s, 3H), 3.44 ( s, 2H), 1.23 (s, 6H).
Стадия 3: метил 4-(4-фтор-5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2,2-диметил-4-оксобутаноатStep 3: Methyl 4-(4-fluoro-5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2,2-dimethyl-4-oxobutanoate
К смеси метил 4-(4-фтор-5,6-диметоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2,2-диметил-4-оксобутаноата (1.1 г, 3.1 ммоль) и DCM (20 мл) добавляли AlCl3 (1.7 г, 12 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Реакционную смесь выливали в колбу, содержащую лед и 1 н. HCl, и перемешивали в течение 5 мин. Затем добавляли EtOAc. Органический слой отделяли, высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Смесь затем очищали с помощью хроматографии на силикагеле с получением метил 4-(4-фтор-5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2,2-диметил-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C16H18FO5S) (ES, m/z): 341 [М+Н]+. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 9.55 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 3.91 (s, 3Н), 3.57 (s, 3Н), 3.43 (s, 2H), 1.23 (s, 6H).AlCl 3 was added to a mixture of methyl 4-(4-fluoro-5,6-dimethoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2,2-dimethyl-4-oxobutanoate (1.1 g, 3.1 mmol) and DCM (20 ml) (1.7 g, 12 mmol). The reaction mixture was stirred at room temperature for 18 hours. The reaction mixture was poured into a flask containing ice and 1 N. HCl, and stirred for 5 minutes. EtOAc was then added. The organic layer was separated, dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The mixture was then purified by silica gel chromatography to give methyl 4-(4-fluoro-5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2,2-dimethyl-4-oxobutanoate. LC-MS (C 16 H 18 FO 5 S) (ES, m/z): 341 [M+H] + . 1 H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.55 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 3.91 (s, 3H), 3.57 (s, 3H), 3.43 ( s, 2H), 1.23 (s, 6H).
Промежуточное соединение 56: трет-Бутил (1S,2R и 1R,2S)-2-(5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-карбонил)циклопропан-1-карбоксилатIntermediate 56: tert-Butyl (1S,2R and 1R,2S)-2-(5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophene-2-carbonyl)cyclopropane-1-carboxylate
Стадия 1: (1S,2R и 1R,2S)-2-(5-буом-6-метоксибензо[b]тиофен-2-карбонил)циклопропан-1-карбоновая кислотаStep 1: (1S,2R and 1R,2S)-2-(5-buom-6-methoxybenzo[b]thiophene-2-carbonyl)cyclopropane-1-carboxylic acid
3-Оксабицикло[3.1.0]гексан-2,4-дион (3.78 г, 33.7 ммоль) добавляли к смеси 5-бром-6-метоксибензо[b]тиофена (4.1 г, 17 ммоль) и AlCl3 (2.92 г, 21.9 ммоль) в DCM (100 мл) при 0°С в атмосфере Ar. Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 2 ч и затем оставляли нагреваться до комнатной температуры. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Реакцию затем останавливали медленным добавлением реакционной смеси к смеси воды (200 мл) и EtOAc (500 мл) при 0°С. Полученную в результате смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры и перемешивали в течение 1 ч. Смесь затем разбавляли HCl (2.0 М в воде, 34 мл, 68 ммоль). Органический слой отделяли, промывали насыщенным водным NaCl (50 мл), высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением с получением неочищенного остатка. Остаток сырого вещества очищали с помощью хроматографии на силикагеле (элюируя 0-100% [5% МеОН в EtOAc] в DCM) с получением (1S,2R и 1R,2S)-2-(5-бром-6-метоксибензо[b]тиофен-2-карбонил)циклопропанкарбоновой кислоты. ЖХ-МС (C14H12BrO4S) (ES, m/z): 355, 357 [М+Н]+.3-Oxabicyclo[3.1.0]hexane-2,4-dione (3.78 g, 33.7 mmol) was added to a mixture of 5-bromo-6-methoxybenzo[b]thiophene (4.1 g, 17 mmol) and AlCl 3 (2.92 g, 21.9 mmol) in DCM (100 ml) at 0°C in an Ar atmosphere. The reaction mixture was stirred at 0°C for 2 hours and then allowed to warm to room temperature. The reaction mixture was stirred at room temperature for 16 hours. The reaction was then stopped by slowly adding the reaction mixture to a mixture of water (200 ml) and EtOAc (500 ml) at 0°C. The resulting mixture was allowed to warm to room temperature and stirred for 1 hour. The mixture was then diluted with HCl (2.0 M in water, 34 mL, 68 mmol). The organic layer was separated, washed with saturated aqueous NaCl (50 ml), dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure to obtain a crude residue. The residue of the crude material was purified by silica gel chromatography (eluting with 0-100% [5% MeOH in EtOAc] in DCM) to give (1S,2R and 1R,2S)-2-(5-bromo-6-methoxybenzo[b] thiophene-2-carbonyl)cyclopropanecarboxylic acid. LC-MS (C 14 H 12 BrO 4 S) (ES, m/z): 355, 357 [M+H] + .
Стадия 2: трет-бутил (1S,2R и 1R,2S)-2-(5-бром-6-метоксибензо[b]тиофен-2-каубонил)циклопропан-1-карбоксилатStep 2: tert-butyl (1S,2R and 1R,2S)-2-(5-bromo-6-methoxybenzo[b]thiophene-2-caubonyl)cyclopropane-1-carboxylate
трет-Бутанол (25.8 мл, 270 ммоль) добавляли к смеси ВОС-ангидрида (6.3 мл, 27 ммоль), DMAP (0.33 г, 2.7 ммоль) и (1S,2R и 1R,2S)-2-(5-бром-6-метоксибензо[b]тиофен-2-карбонил)циклопропанкарбоновой кислоты (4.8 г, 14 ммоль) в DCE (30 мл) при комнатной температуре в атмосфере Ar. Реакционную смесь перемешивали и нагревали до 50°С в течение 2 ч. Реакционную смесь затем охлаждали до комнатной температуры и концентрировали под пониженным давлением с получением неочищенного остатка. Остаток сырого вещества очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0→100% градиент EtOAc в гексанах) с получением (1S,2R и 1R,2S)-трет-бутил 2-(5-бром-6-метоксибензо[b]тиофен-2-карбонил)циклопропанкарбоксилата. ЖХ-МС (C18H20BrO4S-С4Н8) (ES, m/z): 355, 357 [M+H-tBu]+. 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8.33 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.81 (s, 1H), 3.95 (s, 3Н), 3.10-3.03 (m, 1H), 2.32-2.25 (m, 1H), 1.57-1.52 (m, 1H), 1.32-1.28 (m, 1H), 1.14 (s, 9H).tert-Butanol (25.8 ml, 270 mmol) was added to a mixture of BOC anhydride (6.3 ml, 27 mmol), DMAP (0.33 g, 2.7 mmol) and (1S,2R and 1R,2S)-2-(5-bromo- 6-methoxybenzo[b]thiophene-2-carbonyl)cyclopropanecarboxylic acid (4.8 g, 14 mmol) in DCE (30 ml) at room temperature under Ar. The reaction mixture was stirred and heated to 50°C for 2 hours. The reaction mixture was then cooled to room temperature and concentrated under reduced pressure to obtain a crude residue. The residue of the crude material was purified by silica gel chromatography (0→100% EtOAc gradient in hexanes) to give (1S,2R and 1R,2S)-tert-butyl 2-(5-bromo-6-methoxybenzo[b]thiophene-2 -carbonyl)cyclopropanecarboxylate. LC-MS (C 18 H 20 BrO 4 S-C 4 H 8 ) (ES, m/z): 355, 357 [M+H-tBu] + . 1H NMR (500 MHz, DMSO- d6 ) δ 8.33 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.81 (s, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.10-3.03 (m, 1H), 2.32-2.25 (m, 1H), 1.57-1.52 (m, 1H), 1.32-1.28 (m, 1H), 1.14 (s, 9H).
Стадия 3: трет-бутил (1S,2R и 1R,2S)-2-(5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-карбопил)циклопропан-1-карбоксилатStep 3: tert-butyl (1S,2R and 1R,2S)-2-(5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophene-2-carbopyl)cyclopropane-1-carboxylate
Смесь (1S,2R и 1R,2S)-трет-бутил 2-(5-бром-6-метоксибензо[b]тиофен-2-карбонил)циклопропанкарбоксилата (1.64 г, 3.99 ммоль), RockPhos Pd G3 (0.100 г, 0.120 ммоль), Cs2CO3 (3.90 г, 12.0 ммоль) и (E)-бензальдегидоксима (0.725 г, 5.98 ммоль) дегазировали Ar в течение 5 мин. Добавляли DMF (10.0 мл) в атмосфере Ar, и смесь затем дегазировали Ar в течение 5 мин. Реакционную смесь перемешивали и нагревали до 80°С в течение 18 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и разбавляли водой (100 мл) и EtOAc (250 мл). Органический слой отделяли, промывали водой (50 мл) и затем насыщенным водным NaCl (50 мл). Органический слой отделяли, высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением с получением неочищенного остатка. Остаток сырого вещества очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0→75% градиент EtOAc в гексанах) с получением (1S,2R и 1R,2S)-трет-бутил 2-(5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-карбонил)циклопропанкарбоксилата. ЖХ-МС (C18H20O5SNa) (ES, m/z): 371 [M+Na]+.Mixture of (1S,2R and 1R,2S)-tert-butyl 2-(5-bromo-6-methoxybenzo[b]thiophene-2-carbonyl)cyclopropanecarboxylate (1.64 g, 3.99 mmol), RockPhos Pd G3 (0.100 g, 0.120 mmol), Cs 2 CO 3 (3.90 g, 12.0 mmol) and (E)-benzaldehydoxime (0.725 g, 5.98 mmol) were degassed with Ar for 5 min. DMF (10.0 mL) was added under Ar and the mixture was then degassed with Ar for 5 min. The reaction mixture was stirred and heated to 80°C for 18 hours. The reaction mixture was cooled to room temperature and diluted with water (100 ml) and EtOAc (250 ml). The organic layer was separated, washed with water (50 ml) and then with saturated aqueous NaCl (50 ml). The organic layer was separated, dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure to obtain a crude residue. The residue of the crude material was purified by silica gel chromatography (0→75% EtOAc gradient in hexanes) to give (1S,2R and 1R,2S)-tert-butyl 2-(5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophene-2 -carbonyl)cyclopropanecarboxylate. LC-MS (C 18 H 20 O 5 SNa) (ES, m/z): 371 [M+Na] + .
Промежуточное соединение 57: (S)-Метил-4-(5-амино-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатоксилатIntermediate 57: (S)-Methyl 4-(5-amino-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoateoxylate
Стадия 1: метил (S)-4-(5-((дифенилметилен)амино)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатStep 1: Methyl (S)-4-(5-((diphenylmethylene)amino)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
Смесь (S)-метил 4-(5-бром-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата (0.50 г, 1.4 ммоль), бензофенонимина (0.45 мл, 2.7 ммоль), Rac BINAP Pd G3 (0.067 г, 0.067 ммоль) и Cs2CO3 (0.878 г, 2.69 ммоль) дегазировали Ar в течение 5 мин. Добавляли толуол (10.0 мл) при 20°С в атмосфере Ar, и смесь затем дегазировали Ar в течение 5 мин. Реакционную смесь перемешивали и нагревали до 110°С в течение 18 ч в атмосфере Ar. Реакционную смесь затем охлаждали до комнатной температуры и разбавляли DCM (25 мл). Смесь фильтровали, и фильтрат концентрировали под пониженным давлением с получением метил (S)-4-(5-((дифенилметилен)амино)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата, которую применяли без очистки. ЖХ-МС (C28H26NO4S) (ES, m/z): 472 [М+Н]+.A mixture of (S)-methyl 4-(5-bromo-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate (0.50 g, 1.4 mmol), benzophenonymine (0.45 ml, 2.7 mmol), Rac BINAP Pd G3 (0.067 g, 0.067 mmol) and Cs 2 CO 3 (0.878 g, 2.69 mmol) were degassed with Ar for 5 min. Toluene (10.0 ml) was added at 20°C under Ar and the mixture was then degassed with Ar for 5 min. The reaction mixture was stirred and heated to 110°C for 18 hours in an Ar atmosphere. The reaction mixture was then cooled to room temperature and diluted with DCM (25 ml). The mixture was filtered and the filtrate was concentrated under reduced pressure to obtain methyl (S)-4-(5-((diphenylmethylene)amino)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate, which used without cleaning. LC-MS (C 28 H 26 NO 4 S) (ES, m/z): 472 [M+H] + .
Стадия 2: (S)-метил 4-(5-амино-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатStep 2: (S)-methyl 4-(5-amino-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
TFA (2.1 мл, 27 ммоль) добавляли к смеси (S)-метил 4-(5-((дифенилметилен)амино)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата (635 мг, 1.35 ммоль) в DCM (5.0 мл) при 20°С. Полученную в результате смесь перемешивали при 20°С в течение 30 мин. Реакционную смесь затем концентрировали под пониженным давлением с получением неочищенного остатка. Остаток сырого вещества очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0→100% градиент EtOAc в DCM) с получением (S)-метил 4-(5-амино-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C15H18NO4S) (ES, m/z): 308 [М+Н]+.TFA (2.1 ml, 27 mmol) was added to a mixture of (S)-methyl 4-(5-((diphenylmethylene)amino)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate (635 mg, 1.35 mmol) in DCM (5.0 ml) at 20°C. The resulting mixture was stirred at 20°C for 30 minutes. The reaction mixture was then concentrated under reduced pressure to obtain a crude residue. The residue of the crude material was purified by silica gel chromatography (0→100% EtOAc gradient in DCM) to give (S)-methyl 4-(5-amino-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl- 4-oxobutanoate. LC-MS (C 15 H 18 NO 4 S) (ES, m/z): 308 [M+H] + .
Промежуточное соединение 58: трет-Бутил 4-(6-гидроксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноатIntermediate 58: tert-Butyl 4-(6-hydroxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate
Смесь трет-бутил 4-(6-(бензилокси)бензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата (256 мг, 0.646 ммоль) и Pd/C (172 мг, 0.161 ммоль) дегазировали Ar. К смеси медленно добавляли EtOAc (5.0 мл), МеОН (5.0 мл) и HCl (37% в воде, 0.053 мл, 0.65 ммоль) в атмосфере Ar. Полученную выше реакционную смесь дегазировали с помощью вакуума и снова заполняли Н2. Полученную в результате смесь перемешивали в атмосфере Н2 в течение 24 ч. Реакционную смесь затем фильтровали через целит, промывая EtOAc. Фильтрат концентрировали под пониженным давлением с получением неочищенного остатка. Остаток сырого вещества очищали с помощью хроматографии на силикагеле (элюируя 0-100% EtOAc в гексанах) с получением трет-бутил 4-(6-гидроксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C16H19O4S-C4H8) (ES, m/z): 251 [M+H-tBu]+.A mixture of tert-butyl 4-(6-(benzyloxy)benzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate (256 mg, 0.646 mmol) and Pd/C (172 mg, 0.161 mmol) was degassed with Ar. EtOAc (5.0 mL), MeOH (5.0 mL), and HCl (37% in water, 0.053 mL, 0.65 mmol) were slowly added to the mixture under Ar atmosphere. The above reaction mixture was degassed using vacuum and refilled with H 2 . The resulting mixture was stirred under H 2 for 24 hours. The reaction mixture was then filtered through celite, washing with EtOAc. The filtrate was concentrated under reduced pressure to obtain a crude residue. The residue of the crude material was purified by silica gel chromatography (eluting with 0-100% EtOAc in hexanes) to give tert-butyl 4-(6-hydroxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate. LC-MS (C 16 H 19 O 4 SC 4 H 8 ) (ES, m/z): 251 [M+H-tBu] + .
Промежуточное соединение 59: трет-бутил 4-(5-бромбензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноатIntermediate 59: tert-butyl 4-(5-bromobenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate
Стадия 1: 5-бромбензо[b]тиофен-2-карбопилхлоридStep 1: 5-bromobenzo[b]thiophene-2-carbopyl chloride
(COCl)2 (0.30 мл, 3.4 ммоль) добавляли по каплям с перемешиванием к смеси 5-бромбензо[b]тиофен-2-карбоновой кислоты (0.750 г, 2.92 ммоль) в CH2Cl2 (15 мл) при 0°С в течение 3 мин. К реакционной смеси добавляли DMF (0.023 мл, 0.29 ммоль) с последующим добавлением дополнительного (COCl)2 (0.20 мл, 2.3 ммоль). Реакционную смесь затем перемешивали при 0°С в течение 1 ч. Реакционную колбу удаляли из бани с ледяной водой, и продолжали перемешивание при комнатной температуре в течение 1.5 ч. Реакционную смесь концентрировали с получением 5-бромбензо[b]тиофен-2-карбонилхлорида, который применяли без дополнительной очистки или определения характеристик.(COCl) 2 (0.30 ml, 3.4 mmol) was added dropwise with stirring to a mixture of 5-bromobenzo[b]thiophene-2-carboxylic acid (0.750 g, 2.92 mmol) in CH 2 Cl 2 (15 ml) at 0°C within 3 min. DMF (0.023 mL, 0.29 mmol) was added to the reaction mixture, followed by additional (COCl) 2 (0.20 mL, 2.3 mmol). The reaction mixture was then stirred at 0°C for 1 hour. The reaction flask was removed from the ice water bath, and stirring was continued at room temperature for 1.5 hours. The reaction mixture was concentrated to give 5-bromobenzo[b]thiophene-2-carbonyl chloride, which was used without further purification or characterization.
Стадия 2: трет-бутил 4-(5-бромбензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноатStep 2: tert-butyl 4-(5-bromobenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate
CuCl (0.269 г, 2.72 ммоль) добавляли в 100 мл круглодонную колбу с мешалкой. Колбу три раза откачивали и затем снова заполняли N2. THF (6.0 мл) добавляли в колбу, затем перемешивали и охлаждали до 0°С на бане с ледяной водой. Добавляли по каплям (3-(трет-бутокси)-3-оксопропил)цинк (II) бромид (0.50 М в THF, 11 мл, 5.5 ммоль) с перемешиванием при 0°С в течение 3 мин до смеси с CuCl. Полученную в результате смесь перемешивали при 0°С в течение 30 мин. Добавляли по каплям смесь 5-бромбензо[b]тиофен-2-карбонилхлорида (0.75 г, 2.7 ммоль) в NMP (24 мл) в течение 7 мин при 0°С с перемешиванием. Полученную в результате смесь перемешивали при 0°С в течение 2 ч. Реакционную смесь затем разделяли между изопропилацетатом (300 мл) и 10% водным цитратом натрия (300 мл). Полученную в результате смесь перемешивали в течение 20 мин. Слои разделяли, и водный слой экстрагировали изопропилацетатом (150 мл). Органические слои объединяли, промывали водным NaCl, затем насыщенным водным NaCl, высушивали над безводным MgSO4 и фильтровали, и фильтрат оставляли стоять на протяжении ночи. Фильтрат затем фильтровали и концентрировали с получением сырого остатка. Сырой остаток загружали на колонку с силикагелем и ацетоном. Колонку высушивали продуванием через нее находящегося под давлением N2. Высушенную колонку затем подвергали элюированию с градиентом 0→30% EtOAc с гексаном. Все содержащие продукт фракции собирали, концентрировали и очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0→25% градиент EtOAc в гексанах). Содержащие продукт фракции концентрировали и очищали с помощью ахиральной SFC (колонка Phenomenex Biphenyl, 21 мм × 250 мм, 90:10 CO2 : МеОН масс./0.25% DMEA, 70 мл/мин, давление на выходе 100 бар, концентрация загрузки 18.5 мг/мл в MeOH/MeCN, объем вводимой пробы 1.6 мл, детектирование при 215 нм) с получением трет-бутил 4-(5-бромбензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C16H17BrNaO3S) (ES, m/z): 391, 393 [M+Na]+. 1H ЯМР (500 МГц, CDCl3) δ 8.05 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.75 (d, J=8.6 Гц, 1H), 7.57 (d, J=8.6 Гц, 1H), 3.31 (t, J=6.6 Гц, 2H), 2.74 (t, J=6.6 Гц, 2H), 1.46 (s, 9H).CuCl (0.269 g, 2.72 mmol) was added to a 100 mL round bottom flask with a stirrer. The flask was evacuated three times and then filled again with N 2 . THF (6.0 ml) was added to the flask, then stirred and cooled to 0°C in an ice water bath. (3-(tert-Butoxy)-3-oxopropyl)zinc(II) bromide (0.50 M in THF, 11 mL, 5.5 mmol) was added dropwise with stirring at 0°C for 3 min until mixed with CuCl. The resulting mixture was stirred at 0°C for 30 minutes. A mixture of 5-bromobenzo[b]thiophene-2-carbonyl chloride (0.75 g, 2.7 mmol) in NMP (24 ml) was added dropwise over 7 min at 0°C with stirring. The resulting mixture was stirred at 0°C for 2 hours. The reaction mixture was then partitioned between isopropyl acetate (300 ml) and 10% aqueous sodium citrate (300 ml). The resulting mixture was stirred for 20 minutes. The layers were separated and the aqueous layer was extracted with isopropyl acetate (150 ml). The organic layers were combined, washed with aqueous NaCl, then saturated aqueous NaCl, dried over anhydrous MgSO 4 and filtered, and the filtrate was left to stand overnight. The filtrate was then filtered and concentrated to obtain a crude residue. The crude residue was loaded onto a column of silica gel and acetone. The column was dried by blowing pressurized N 2 through it. The dried column was then eluted with a gradient of 0→30% EtOAc with hexane. All product-containing fractions were collected, concentrated and purified by silica gel chromatography (0→25% EtOAc gradient in hexanes). Product-containing fractions were concentrated and purified using achiral SFC (Phenomenex Biphenyl column, 21 mm × 250 mm, 90:10 CO 2 : MeOH w/0.25% DMEA, 70 ml/min, outlet pressure 100 bar, loading concentration 18.5 mg /ml in MeOH/MeCN, injection volume 1.6 ml, detection at 215 nm) to obtain tert-butyl 4-(5-bromobenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate. LC-MS (C 16 H 17 BrNaO 3 S) (ES, m/z): 391, 393 [M+Na] + . 1 H NMR (500 MHz, CDCl 3 ) δ 8.05 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.75 (d, J=8.6 Hz, 1H), 7.57 (d, J=8.6 Hz, 1H), 3.31 (t, J=6.6 Hz, 2H), 2.74 (t, J=6.6 Hz, 2H), 1.46 (s, 9H).
Промежуточное соединение 60: трет-Бутил 4-(5-хлор-6-метокситиено[3,2-b]пиридин-2-ил)-4-оксобутаноатIntermediate 60: tert-Butyl 4-(5-chloro-6-methoxythieno[3,2-b]pyridin-2-yl)-4-oxobutanoate
Колбу, содержащую CuCl (0.76 г, 7.6 ммоль) откачивали и затем три раза продували N2. Добавляли THF (15 мл), и смесь охлаждали до 0°С. Добавляли по каплям (3-(трет-бутокси)-3-оксопропил)цинк (II) бромид (0.50 М в THF, 31 мл, 16 ммоль) в течение 10 мин. Через 30 мин добавляли 5-хлор-6-метокситиено[3,2-b]пиридин-2-карбонилхлорид (2.0 г, 7.6 ммоль) с последующим добавлением NMP (15 мл). Смесь затем оставляли нагреваться до комнатной температуры. Через 1 ч смесь охлаждали до 0°С и добавляли концентрированный водный NH4OH (4.5 мл). К этой смеси добавляли воду (240 мл) и МеОН (60 мл). Смесь перемешивали в течение 5 мин и обрабатывали ультразвуком на водяной бане с соникатором. Полученную в результате смесь фильтровали, и выпавшие в осадок вещества промывали водой и затем гексаном. Выпавшие в осадок вещества выделяли и высушивали под вакуумом. Осадок затем разделяли между EtOAc и 10% водным цитратом натрия. Слои разделяли, и водный слой промывали EtOAc. Объединенные органические слои высушивали над Na2SO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Во время концентрирования выпадал осадок, который собирали фильтрацией, промывали EtOAc и высушивали под вакуумом с получением трет-бутил 4-(5-хлор-6-метокситиено[3,2-b]пиридин-2-ил)-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C16H19ClNO4S) (ES, m/z): 356 [М+Н]+. 1Н ЯМР (500 МГц, CDCl3) δ 8.03 (s, 1H), 7.62 (s, 1Н), 4.04 (s, 3Н), 3.30 (t, J=6.4 Гц, 2Н), 2.74 (t, J=6.4 Гц, 2Н), 1.46 (s, 9Н).The flask containing CuCl (0.76 g, 7.6 mmol) was evacuated and then purged three times with N 2 . THF (15 ml) was added and the mixture was cooled to 0°C. (3-(tert-Butoxy)-3-oxopropyl)zinc(II) bromide (0.50 M in THF, 31 mL, 16 mmol) was added dropwise over 10 min. After 30 min, 5-chloro-6-methoxythieno[3,2-b]pyridine-2-carbonyl chloride (2.0 g, 7.6 mmol) was added followed by NMP (15 ml). The mixture was then left to warm to room temperature. After 1 hour, the mixture was cooled to 0°C and concentrated aqueous NH 4 OH (4.5 ml) was added. Water (240 ml) and MeOH (60 ml) were added to this mixture. The mixture was stirred for 5 min and treated with ultrasound in a water bath with a sonicator. The resulting mixture was filtered and the precipitated substances were washed with water and then with hexane. The precipitated substances were isolated and dried under vacuum. The precipitate was then partitioned between EtOAc and 10% aqueous sodium citrate. The layers were separated and the aqueous layer was washed with EtOAc. The combined organic layers were dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. During concentration, a precipitate formed which was collected by filtration, washed with EtOAc and dried under vacuum to give tert-butyl 4-(5-chloro-6-methoxythieno[3,2-b]pyridin-2-yl)-4-oxobutanoate. LC-MS (C 16 H 19 ClNO 4 S) (ES, m/z): 356 [M+H] + . 1H NMR (500 MHz, CDCl 3 ) δ 8.03 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 4.04 (s, 3H), 3.30 (t, J=6.4 Hz, 2H), 2.74 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 1.46 (s, 9H).
Промежуточное соединение 61: метил (S)-4-(2-(3-бромпропил)-4-метокситиено[2',3':5,6]бензо[1,2-d]оксазол-7-ил)-2-метил-4-оксобутаноатIntermediate 61: Methyl (S)-4-(2-(3-bromopropyl)-4-methoxythieno[2',3':5,6]benzo[1,2-d]oxazol-7-yl)-2 -methyl-4-oxobutanoate
Стадия 1: метил (S)-4-(5-гидрокси-6-метокси-4-нитробензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатStep 1: Methyl (S)-4-(5-hydroxy-6-methoxy-4-nitrobenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
В 20 мл виалу добавляли (S)-метил 4-(5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноат (100 мг, 0.21 ммоль) и EtOAc (3.0 мл). HNO3 (0.017 мл, 0.27 ммоль) добавляли, и смесь оставляли перемешиваться в течение 1 ч. Через 1 ч смесь концентрировали под пониженным давлением и затем растирали с Et2O (3.0 мл). Полученные в результате вещества собирали путем фильтрования с получением (S)-метил 4-(5-гидрокси-6-метокси-4-нитробензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата. 1Н ЯМР (500 МГц, CDCl3) δ 12.08 (s, 1H), 8.75 (s, 1H), 7.53 (s, 1H), 4.07 (s, 3Н), 3.74 (s, 3Н), 3.59 (dd, J=17.1, 7.9 Гц, 1H), 3.23-3.16 (m, 1H), 3.16-3.09 (m, 1H), 1.35 (d, J=7.1 Гц, 3Н).(S)-Methyl 4-(5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate (100 mg, 0.21 mmol) and EtOAc (3.0 ml) were added to a 20 ml vial. . HNO 3 (0.017 ml, 0.27 mmol) was added and the mixture was left stirring for 1 hour. After 1 hour, the mixture was concentrated under reduced pressure and then triturated with Et 2 O (3.0 ml). The resulting substances were collected by filtration to give (S)-methyl 4-(5-hydroxy-6-methoxy-4-nitrobenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate. 1H NMR (500 MHz, CDCl 3 ) δ 12.08 (s, 1H), 8.75 (s, 1H), 7.53 (s, 1H), 4.07 (s, 3H), 3.74 (s, 3H), 3.59 (dd, J=17.1, 7.9 Hz, 1H), 3.23-3.16 (m, 1H), 3.16-3.09 (m, 1H), 1.35 (d, J=7.1 Hz, 3H).
Стадия 2: метил (S)-4-(2-(3-бромпропил)-4-метокситиено[2',3':5,6]бензо[1,2-d]оксазол-7-ил)-2-метил-4-оксобутаноатStep 2: methyl (S)-4-(2-(3-bromopropyl)-4-methoxythieno[2',3':5,6]benzo[1,2-d]oxazol-7-yl)-2- methyl 4-oxobutanoate
В 4 мл виалу добавляли (S)-метил 4-(5-гидрокси-6-метокси-4-нитробензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноат (45 мг, 0.13 ммоль), Pd (0.040 г, 0.038 ммоль) и МеОН (0.60 мл). К смеси добавляли 4-бром-1,1,1-триметоксибутан (0.61 мл, 3.8 ммоль). Смесь перемешивали в атмосфере Н2 в течение 1 ч. Смесь затем фильтровали, и фильтрат концентрировали под пониженным давлением. Полученный в результате остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (0→70% градиент EtOAc в гексанах) с получением (S)-метил 4-(2-(3-бромпропил)-4-метокситиено[2',3':5,6]бензо[1,2-d]оксазол-7-ил)-2-метил-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C19H21BrNO5S) (ES, m/z): 454, 456 [М+Н]+. 1Н ЯМР (500 МГц, CDCl3) δ 8.36 (s, 1H), 7.25 (s, 1H), 4.11 (s, 3Н), 3.73 (s, 3Н), 3.62 (t, J=6.4 Гц, 2H), 3.55 (dd, J=16.7, 7.5 Гц, 1H), 3.24 (t, J=7.3 Гц, 2H), 3.18 (dd, J=13.5, 6.8 Гц, 1H), 3.12 (dd, J=16.7, 5.8 Гц, 1H), 2.53 (р, J=6.8 Гц, 2Н), 1.32 (d, J=7.0 Гц, 3Н).(S)-methyl 4-(5-hydroxy-6-methoxy-4-nitrobenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate (45 mg, 0.13 mmol), Pd was added to a 4 ml vial (0.040 g, 0.038 mmol) and MeOH (0.60 ml). 4-bromo-1,1,1-trimethoxybutane (0.61 ml, 3.8 mmol) was added to the mixture. The mixture was stirred under H 2 atmosphere for 1 hour. The mixture was then filtered and the filtrate was concentrated under reduced pressure. The resulting residue was purified by silica gel chromatography (0→70% EtOAc gradient in hexanes) to give (S)-methyl 4-(2-(3-bromopropyl)-4-methoxythieno[2',3':5. 6]benzo[1,2-d]oxazol-7-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate. LC-MS (C 19 H 21 BrNO 5 S) (ES, m/z): 454, 456 [M+H] + . 1H NMR (500 MHz, CDCl 3 ) δ 8.36 (s, 1H), 7.25 (s, 1H), 4.11 (s, 3H), 3.73 (s, 3H), 3.62 (t, J=6.4 Hz, 2H) , 3.55 (dd, J=16.7, 7.5 Hz, 1H), 3.24 (t, J=7.3 Hz, 2H), 3.18 (dd, J=13.5, 6.8 Hz, 1H), 3.12 (dd, J=16.7, 5.8 Hz, 1H), 2.53 (p, J=6.8 Hz, 2H), 1.32 (d, J=7.0 Hz, 3H).
Промежуточное соединение 88: Метил (S)-4-(5-бром-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метилбутаноатIntermediate 88: Methyl (S)-4-(5-bromo-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methylbutanoate
К охлажденному раствору метил (S)-4-(5-бром-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата (0.637 г, 1.72 ммоль) в ACN (15 мл) добавляли TMS-Cl (1.32 мл, 10.3 ммоль). Добавляли цианоборогидрид натрия (0.65 г, 10 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 2 ч. Реакционную смесь останавливали насыщенным водным NH4Cl и экстрагировали DCM. Органический слой отделяли, высушивали над Na2SO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (EtOAc/гексаны) с получением метил (S)-4-(бром-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метилбутаноата. 1Н ЯМР (600 МГц, DMSO-d6) δ 7.96 (s, 1H), 7.66 (s, 1Н), 7.04 (s, 1H), 3.88 (s, 3Н), 3.61 (s, 3Н), 2.87-2.83 (m, 2Н), 2.57-2.52 (m, 1Н), 2.00-1.94 (m, 1H), 1.82-1.73 (m, 1H), 1.14 (d, J=7.0 Гц, 3Н).TMS was added to a cooled solution of methyl (S)-4-(5-bromo-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate (0.637 g, 1.72 mmol) in ACN (15 mL). -Cl (1.32 ml, 10.3 mmol). Sodium cyanoborohydride (0.65 g, 10 mmol) was added and the reaction mixture was stirred at 0°C for 2 hours. The reaction mixture was quenched with saturated aqueous NH 4 Cl and extracted with DCM. The organic layer was separated, dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (EtOAc/hexanes) to give methyl (S)-4-(bromo-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methylbutanoate. 1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.96 (s, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.04 (s, 1H), 3.88 (s, 3H), 3.61 (s, 3H), 2.87- 2.83 (m, 2H), 2.57-2.52 (m, 1H), 2.00-1.94 (m, 1H), 1.82-1.73 (m, 1H), 1.14 (d, J=7.0 Hz, 3H).
Промежуточные соединения с 89 по 93, как показано в Таблице 10 ниже, или могут быть получены в соответствии со способами, аналогичными описанным в Промежуточном соединении 88 выше, с применением соответствующих исходных материалов, описанных в способах получения, или получены из коммерческих источников.Intermediates 89 to 93, as shown in Table 10 below, or can be prepared in accordance with methods similar to those described in Intermediate 88 above, using the appropriate starting materials described in the methods of preparation, or obtained from commercial sources.
Промежуточное соединение 94: Метил (2S)-4-(5-(3-гидрокси-2-метилпропокси)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатIntermediate 94: Methyl (2S)-4-(5-(3-hydroxy-2-methylpropoxy)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
Смесь 2-метилпропан-1,3-диола (146 мг, 1.62 ммоль), (S)-метил 4-(5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата (50 мг, 0.16 ммоль), (Е)-бис(4-хлорбензил)диазин-1,2-дикарбоксилата (60 мг, 0.16 ммоль) и трифенилфосфина (43 мг, 0.16 ммоль) в NMP (0.30 мл) дегазировали Ar и затем перемешивали и нагревали до 100°С в течение 3 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и сразу очищали с помощью ВЭЖХ с обратными фазами (ACN/вода с 0.1% TFA) с получением (2S)-метил 4-(5-(3-гидрокси-2-метилпропокси)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C19H25O6S) (ES, m/z): 381 [М+Н]+.Mixture of 2-methylpropane-1,3-diol (146 mg, 1.62 mmol), (S)-methyl 4-(5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate (50 mg, 0.16 mmol), (E)-bis(4-chlorobenzyl)diazine-1,2-dicarboxylate (60 mg, 0.16 mmol) and triphenylphosphine (43 mg, 0.16 mmol) in NMP (0.30 ml) were degassed with Ar and then stirred and heated to 100°C for 3 hours. The reaction mixture was cooled to room temperature and immediately purified by reverse phase HPLC (ACN/water with 0.1% TFA) to give (2S)-methyl 4-(5-( 3-hydroxy-2-methylpropoxy)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate. LC-MS (C 19 H 25 O 6 S) (ES, m/z): 381 [M+H] + .
Промежуточное соединение 95: 4-(5-(3-Бромпропил)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаннитрилIntermediate 95: 4-(5-(3-Bromopropyl)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanenitrile
Стадия 1: 4-(5-(3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)пропил)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаннитуилStep 1: 4-(5-(3-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)propyl)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutannituyl
4-(5-Бром-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаннитрил (161 мг, 0.496 ммоль) и CPhos Pd G3 (20 мг, 0.025 ммоль) добавляли к THF (2.5 мл). Реакционную смесь герметично закрывали, и вышеуказанную реакционную смесь откачивали и снова заполняли азотом (3х). К реакционной смеси добавляли 3-(трет-бутилдиметилсилокси)пропилцинк бромид (0.50 М в THF, 3.0 мл, 1.5 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 96 ч. Реакционную смесь разбавляли EtOAc и затем экстрагировали водным NaHCO3. Водный слой отделяли и экстрагировали EtOAc (3х). Органические слои объединяли, промывали рассолом, высушивали над Na2SO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением с получением 4-(5-(3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)пропил)-6-метокси-бензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаннитрила. ЖХ-МС (C22H32NO3SSi) (ES, m/z): 418 [М+Н]+.4-(5-Bromo-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanenitrile (161 mg, 0.496 mmol) and CPhos Pd G3 (20 mg, 0.025 mmol) were added to THF (2.5 ml). The reaction mixture was sealed and the above reaction mixture was evacuated and refilled with nitrogen (3x). 3-(tert-Butyldimethylsiloxy)propylzinc bromide (0.50 M in THF, 3.0 mL, 1.5 mmol) was added to the reaction mixture, and the reaction mixture was stirred at room temperature for 96 hours. The reaction mixture was diluted with EtOAc and then extracted with aqueous NaHCO 3 . The aqueous layer was separated and extracted with EtOAc (3x). The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure to give 4-(5-(3-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)propyl)-6-methoxy-benzo[b]thiophene -2-yl)-4-oxobutanenitrile. LC-MS (C 22 H 32 NO 3 SSi) (ES, m/z): 418 [M+H] + .
Стадия 2: 4-(5-(3-гидроксипропил)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаннитрилStep 2: 4-(5-(3-hydroxypropyl)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanenitrile
4-(5-(3-((трет-Бутилдиметилсилил)окси)пропил)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаннитрил (165 мг, 0.395 ммоль) суспендировали в смеси МеОН (2.0 мл), воды (2.0 мл) и НОАс (2.0 мл). Полученную в результате суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение 19 ч. Реакционную смесь разбавляли водным NaHCO3 и затем экстрагировали EtOAc (3х). Органические слои объединяли, промывали рассолом, высушивали над Na2SO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением с получением 4-(5-(3-гидроксипропил)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаннитрила. ЖХ-МС (C16H18NO3S) (ES, m/z): 304 [М+Н]+. 1Н ЯМР (499 МГц, DMSO-d6) δ 8.27 (s, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 4.50-4.47 (m, 1H), 3.90 (s, 3Н), 3.53-3.40 (m, 4Н), 2.79 (t, J=6.5 Гц, 2Н), 2.68 (t, J=7.4 Гц, 2Н), 1.79-1.66 (m, 2Н).4-(5-(3-((tert-Butyldimethylsilyl)oxy)propyl)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanenitrile (165 mg, 0.395 mmol) was suspended in MeOH (2.0 ml) , water (2.0 ml) and HOAc (2.0 ml). The resulting suspension was stirred at room temperature for 19 hours. The reaction mixture was diluted with aqueous NaHCO 3 and then extracted with EtOAc (3x). The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure to give 4-(5-(3-hydroxypropyl)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanenitrile. LC-MS (C 16 H 18 NO 3 S) (ES, m/z): 304 [M+H] + . 1 H NMR (499 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.27 (s, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 4.50-4.47 (m, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.53-3.40 (m, 4H), 2.79 (t, J=6.5 Hz, 2H), 2.68 (t, J=7.4 Hz, 2H), 1.79-1.66 (m, 2H).
Стадия 3: 4-(5-(3-буомпропил)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаннитуилStep 3: 4-(5-(3-buompropyl)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutannituyl
Трифенилфосфин (39 мг, 0.15 ммоль) добавляли к раствору 4-(5-(3-гидроксипропил)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаннитрила (45 мг, 0.15 ммоль) в THF (1.0 мл). Смесь охлаждали до 0°С, и затем добавляли NBS (26 мг, 0.15 ммоль). Через 1 ч к реакционной смеси добавляли дополнительные трифенилфосфин (23 мг, 0.089 ммоль) и NBS (13 мг, 0.074 ммоль). Смесь перемешивали в течение дополнительных 10 мин при 0°С.Реакционную смесь останавливали водным насыщенным NH4Cl и затем разбавляли EtOAc. Органический слой отделяли, промывали рассолом, высушивали над Na2SO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (EtOAc/гексан) с получением 4-(5-(3-бромпропил)-6-метокси-бензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаннитрила. ЖХ-МС (C16H17BrNO2SNa) (ES, m/z): 388, 390 [M+Na]+.Triphenylphosphine (39 mg, 0.15 mmol) was added to a solution of 4-(5-(3-hydroxypropyl)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanenitrile (45 mg, 0.15 mmol) in THF (1.0 ml ). The mixture was cooled to 0°C and then NBS (26 mg, 0.15 mmol) was added. After 1 h, additional triphenylphosphine (23 mg, 0.089 mmol) and NBS (13 mg, 0.074 mmol) were added to the reaction mixture. The mixture was stirred for an additional 10 minutes at 0° C. The reaction mixture was quenched with aqueous saturated NH 4 Cl and then diluted with EtOAc. The organic layer was separated, washed with brine, dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (EtOAc/hexane) to give 4-(5-(3-bromopropyl)-6-methoxy-benzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanenitrile. LC-MS (C 16 H 17 BrNO 2 SNa) (ES, m/z): 388, 390 [M+Na] + .
Промежуточное соединение 96: Метил (S)-4-(6-(3-хлорпропокси)-5-метокситиено[3,2-b]пиридин-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатIntermediate 96: Methyl (S)-4-(6-(3-chloropropoxy)-5-methoxythieno[3,2-b]pyridin-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
Стадия 1: 6-бромтиено[3,2-b]пиридинStep 1: 6-bromothieno[3,2-b]pyridine
АсОН (50 мл) добавляли к смеси 2-броммалональдегида (3.56 г, 23.6 ммоль) и трет-бутил тиофен-3-илкарбамата (4.70 г, 23.6 ммоль) при комнатной температуре в воздушной атмосфере. Реакционную смесь перемешивали и нагревали до 100°С в течение 24 ч. Реакционную смесь затем охлаждали до комнатной температуры и разбавляли EtOAc (300 мл). Добавляли насыщенный водный NaHCO3, пока не прекратилось выделение газа. Органический слой отделяли, промывали рассолом (50 мл), высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (элюируя EtOAc в гексанах) с получением 6-бромтиено[3,2-b]пиридина. ЖХ-МС (C7H5BrNS) (ES, m/z): 214, 216 [M+H]+. 1H ЯМР (499 МГц, DMSO-d6) δ 8.86 (s, 1H), 8.74 (s, 1H), 8.18 (d, J=5.4 Гц, 1H), 7.58 (d, J=5.4 Гц, 1H).AcOH (50 ml) was added to a mixture of 2-bromoaldehyde (3.56 g, 23.6 mmol) and tert-butyl thiophen-3-ylcarbamate (4.70 g, 23.6 mmol) at room temperature in an air atmosphere. The reaction mixture was stirred and heated to 100°C for 24 hours. The reaction mixture was then cooled to room temperature and diluted with EtOAc (300 ml). Saturated aqueous NaHCO 3 was added until gas evolution ceased. The organic layer was separated, washed with brine (50 ml), dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (eluting with EtOAc in hexanes) to give 6-bromothieno[3,2-b]pyridine. LC-MS (C 7 H 5 BrNS) (ES, m/z): 214, 216 [M+H] + . 1 H NMR (499 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.86 (s, 1H), 8.74 (s, 1H), 8.18 (d, J=5.4 Hz, 1H), 7.58 (d, J=5.4 Hz, 1H) .
Стадия 2: 6-бромтиено[3,2-b]пиридин 4-оксидStep 2: 6-bromothieno[3,2-b]pyridine 4-oxide
mCPBA (1.49 г, 6.63 ммоль) добавляли к смеси 6-бромтиено[3,2-b]пиридина (1.42 г, 6.63 ммоль) в DCM (50 мл) при 0°С в атмосфере Ar. Реакционную смесь затем оставляли нагреваться до комнатной температуры и перемешивали в течение дополнительных 24 ч. Реакционную смесь затем концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (элюируя [5% МеОН в EtOAc] в DCM) с получением 6-бромтиено[3,2-b]пиридин 4-оксида. ЖХ-МС (C7H5BrNOS) (ES, m/z): 230, 232 [М+Н]+.mCPBA (1.49 g, 6.63 mmol) was added to a mixture of 6-bromothieno[3,2-b]pyridine (1.42 g, 6.63 mmol) in DCM (50 ml) at 0°C under Ar atmosphere. The reaction mixture was then allowed to warm to room temperature and stirred for an additional 24 hours. The reaction mixture was then concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (eluting with [5% MeOH in EtOAc] in DCM) to give 6-bromothieno[3,2-b]pyridine 4-oxide. LC-MS (C 7 H 5 BrNOS) (ES, m/z): 230, 232 [M+H] + .
Стадия 3: 6-бромтиено[3,2-b]пиридин-5-илацетатStep 3: 6-bromothieno[3,2-b]pyridin-5-ylacetate
Уксусный ангидрид (20 мл, 210 ммоль) добавляли к 6-бромтиено[3,2-b]пиридин 4-оксиду (1.38 г, 6.00 ммоль) при комнатной температуре в атмосфере N2 (газообразный). Реакционную смесь затем нагревали до 140°С и перемешивали в течение 4 ч. Реакционную смесь затем охлаждали до комнатной температуры и разбавляли EtOAc (200 мл) и Н2О (200 мл). NaHCO3 медленно добавляли порциями к реакционной смеси, пока не прекратилось выделение газа. Органический слой отделяли, промывали рассолом (25 мл), высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (элюируя [5% МеОН в EtOAc] в DCM) с получением 6-бромтиено[3,2-b]пиридин-5-ил ацетата. ЖХ-МС (C9H7BrNO2S-С2Н2О) (ES, m/z): 230, 232 [М+Н-ацетат]+. 1Н ЯМР (499 МГц, DMSO-d6) δ 9.04 (s, 1H), 8.29 (d, J=5.2 Гц, 1H), 7.54 (d, J=5.4 Гц, 1H), 2.41 (s, 3Н).Acetic anhydride (20 mL, 210 mmol) was added to 6-bromothieno[3,2-b]pyridine 4-oxide (1.38 g, 6.00 mmol) at room temperature under N 2 (gaseous). The reaction mixture was then heated to 140°C and stirred for 4 hours. The reaction mixture was then cooled to room temperature and diluted with EtOAc (200 ml) and H 2 O (200 ml). NaHCO 3 was slowly added in portions to the reaction mixture until gas evolution ceased. The organic layer was separated, washed with brine (25 ml), dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (eluting with [5% MeOH in EtOAc] in DCM) to give 6-bromothieno[3,2-b]pyridin-5-yl acetate. LC-MS (C 9 H 7 BrNO 2 S-C 2 H 2 O) (ES, m/z): 230, 232 [M+H-acetate] + . 1H NMR (499 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.04 (s, 1H), 8.29 (d, J=5.2 Hz, 1H), 7.54 (d, J=5.4 Hz, 1H), 2.41 (s, 3H) .
Стадия 4: 6-бромтиено[3,2-b]пиридин-5-олStep 4: 6-bromothieno[3,2-b]pyridin-5-ol
NaOH (2.0 M в H2O, 4.0 мл, 8.0 ммоль) добавляли к раствору 6-бромтиено[3,2-b]пиридин-5-ил ацетата (431 мг, 1.58 ммоль) в МеОН (5.0 мл) при 20°С в атмосфере N2 (газообразный). Реакционную смесь затем перемешивали в течение 1 ч при 20°С. Реакцию останавливали HCl (1.0 М в H2O, 8.0 мл, 8.0 ммоль) и затем разбавляли добавлением Н2О (10 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин и затем фильтровали. Собранное вещество промывали дополнительным объемом H2O (10 мл) и затем высушивали под пониженным давлением с получением 6-бромтиено[3,2-b]пиридин-5-ола. ЖХ-МС (C7H5BrNOS) (ES, m/z): 230, 232 [М+Н]+. 1H ЯМР (499 МГц, DMSO-d6) δ 12.65 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 7.91 (d, J=5.3 Гц, 1H), 6.99 (d, J=5.1 Гц, 1H).NaOH (2.0 M in H 2 O, 4.0 ml, 8.0 mmol) was added to a solution of 6-bromothieno[3,2-b]pyridin-5-yl acetate (431 mg, 1.58 mmol) in MeOH (5.0 ml) at 20° C in atmosphere N 2 (gaseous). The reaction mixture was then stirred for 1 hour at 20°C. The reaction was quenched with HCl (1.0 M in H 2 O, 8.0 ml, 8.0 mmol) and then diluted by adding H 2 O (10 ml). The reaction mixture was stirred for 30 minutes and then filtered. The collected material was washed with additional H 2 O (10 ml) and then dried under reduced pressure to obtain 6-bromothieno[3,2-b]pyridin-5-ol. LC-MS (C 7 H 5 BrNOS) (ES, m/z): 230, 232 [M+H] + . 1 H NMR (499 MHz, DMSO-d 6 ) δ 12.65 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 7.91 (d, J=5.3 Hz, 1H), 6.99 (d, J=5.1 Hz, 1H) .
Стадия 5: 6-буом-5-хлортиено[3,2-b]пиридинStep 5: 6-buom-5-chlorothieno[3,2-b]pyridine
Оксихлорид фосфора (15.2 мл, 163 ммоль) добавляли к 6-бромтиено[3,2-b]пиридин-5-олу (375 мг, 1.63 ммоль) при 20°С в атмосфере N2 (газ). Реакционную смесь затем перемешивали и нагревали до 100°С в течение 2 дней. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, и реакцию останавливали путем добавления по каплям к раствору водного насыщенного раствора NaHCO3. Реакционную смесь разбавляли EtOAc (250 мл) и перемешивали. Органический слой отделяли, промывали рассолом (25 мл), высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением с получением 6-бром-5-хлортиено[3,2-b]пиридина, который применяли без очистки. ЖХ-МС (C7H4BrClNS) (ES, m/z): 248, 250 [М+Н]+.Phosphorus oxychloride (15.2 ml, 163 mmol) was added to 6-bromothieno[3,2-b]pyridin-5-ol (375 mg, 1.63 mmol) at 20°C under N 2 (gas). The reaction mixture was then stirred and heated to 100°C for 2 days. The reaction mixture was cooled to room temperature, and the reaction was stopped by adding aqueous saturated NaHCO 3 solution dropwise to the solution. The reaction mixture was diluted with EtOAc (250 ml) and stirred. The organic layer was separated, washed with brine (25 ml), dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure to give 6-bromo-5-chlorothieno[3,2-b]pyridine, which was used without purification. LC-MS (C 7 H 4 BrClNS) (ES, m/z): 248, 250 [M+H] + .
Стадия 6: 6-бром-5-метокситиено[3,2-b]пиридинStep 6: 6-bromo-5-methoxythieno[3,2-b]pyridine
NaOMe (25% в МеОН, 3.24 мл, 14 ммоль) добавляли к смеси 6-бром-5-хлортиено[3,2-b]пиридина (352 мг, 1.42 ммоль) в МеОН (10 мл) при 20°С в атмосфере N2 (газ). Реакционную смесь перемешивали и нагревали до 100°С в течение 1 ч в микроволновом реакторе. Реакционную смесь останавливали лимонной кислотой (1.0 М в H2O, 28 мл, 28 ммоль) и разбавляли EtOAc (250 мл). Органический слой отделяли, промывали рассолом (25 мл), высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (элюируя [5% МеОН в EtOAc] в DCM) с получением 6-бром-5-метокситиено[3,2-b]пиридина. ЖХ-МС (C8H7BrNOS) (ES, m/z): 244, 246 [M+H]+. 1H ЯМР (499 МГц, DMSO-d6) δ 8.78 (s, 1H), 8.09 (d, J=5.3 Гц, 1H), 7.44 (d, J=5.2 Гц, 1H), 3.99 (s, 3H).NaOMe (25% in MeOH, 3.24 mL, 14 mmol) was added to a mixture of 6-bromo-5-chlorothieno[3,2-b]pyridine (352 mg, 1.42 mmol) in MeOH (10 mL) at 20°C in an atmosphere N 2 (gas). The reaction mixture was stirred and heated to 100°C for 1 hour in a microwave reactor. The reaction mixture was quenched with citric acid (1.0 M in H 2 O, 28 ml, 28 mmol) and diluted with EtOAc (250 ml). The organic layer was separated, washed with brine (25 ml), dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (eluting with [5% MeOH in EtOAc] in DCM) to give 6-bromo-5-methoxythieno[3,2-b]pyridine. LC-MS (C 8 H 7 BrNOS) (ES, m/z): 244, 246 [M+H] + . 1 H NMR (499 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.78 (s, 1H), 8.09 (d, J=5.3 Hz, 1H), 7.44 (d, J=5.2 Hz, 1H), 3.99 (s, 3H) .
Стадия 7: 6-бром-5-метокситиено[3,2-b]пиридин-2-карбоновая кислотаStep 7: 6-bromo-5-methoxythieno[3,2-b]pyridine-2-carboxylic acid
LDA (2.0 M в THF, 12.3 мл, 24.6 ммоль) добавляли к раствору 6-бром-5-метокситиено[3,2-b]пиридина (5.0 г, 20 ммоль) в THF (100 мл) при -78°С. Смесь выдерживали в течение 15 минут, и затем реакцию останавливали путем добавления CO2(газ) при -78°С. Реакционную смесь затем нагревали до 0°С в течение 10 мин. Реакцию останавливали HCl (2.0 М в воде, 12.3 мл, 24.6 ммоль) при 0°С и затем разбавляли EtOAc (500 мл). Органический слой отделяли, промывали рассолом (50 мл), высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток суспендировали в DCM (90 мл) и перемешивали в течение 1 ч. Затем добавляли по каплям гексан (250 мл) через капельную воронку в течение ~4 ч при комнатной температуре. Полученную в результате суспензию перемешивали в течение дополнительных 16 ч при комнатной температуре. Суспензию затем фильтровали, и остаток промывали смесью 4:1 гексан/DCM (50 мл). Остаток высушивали под вакуумом с получением 6-бром-5-метокситиено[3,2-b]пиридин-2-карбоновой кислоты. ЖХ-МС (C9H7BrNO3S) (ES, m/z): 288, 290 [М+Н]+. 1ЯМР (499 МГц, DMSO-d6) δ 13.79 (s, 1H), 8.87 (s, 1H), 7.93 (s, 1H), 4.01 (s, 3Н).LDA (2.0 M in THF, 12.3 mL, 24.6 mmol) was added to a solution of 6-bromo-5-methoxythieno[3,2-b]pyridine (5.0 g, 20 mmol) in THF (100 mL) at -78°C. The mixture was kept for 15 minutes and then the reaction was stopped by adding CO 2 (gas) at -78°C. The reaction mixture was then heated to 0°C for 10 minutes. The reaction was quenched with HCl (2.0 M in water, 12.3 mL, 24.6 mmol) at 0°C and then diluted with EtOAc (500 mL). The organic layer was separated, washed with brine (50 ml), dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was suspended in DCM (90 mL) and stirred for 1 h. Hexane (250 mL) was then added dropwise through a dropping funnel over ~4 h at room temperature. The resulting suspension was stirred for an additional 16 hours at room temperature. The suspension was then filtered and the residue was washed with 4:1 hexane/DCM (50 ml). The residue was dried under vacuum to obtain 6-bromo-5-methoxythieno[3,2-b]pyridine-2-carboxylic acid. LC-MS (C 9 H 7 BrNO 3 S) (ES, m/z): 288, 290 [M+H] + . 1 NMR (499 MHz, DMSO-d 6 ) δ 13.79 (s, 1H), 8.87 (s, 1H), 7.93 (s, 1H), 4.01 (s, 3H).
Стадия 8: 6-бром-5-метокситиено[3,2-b]пиридин-2-карбопилхлоридStep 8: 6-bromo-5-methoxythieno[3,2-b]pyridine-2-carbopyl chloride
DMF (8 мкл, 0.1 ммоль) добавляли к раствору 6-бром-5-метокситиено[3,2-b]пиридин-2-карбоновой кислоты (1.05 г, 3.64 ммоль) и оксалилхлорида (0.64 мл, 7.3 ммоль) в THF (40 мл) при 0°С в атмосфере Ar. Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 1 ч. Реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением с получением 6-бром-5-метокситиено[3,2-b]пиридин-2-карбонилхлорида, который сразу применяли на следующей стадии.DMF (8 μL, 0.1 mmol) was added to a solution of 6-bromo-5-methoxythieno[3,2-b]pyridine-2-carboxylic acid (1.05 g, 3.64 mmol) and oxalyl chloride (0.64 mL, 7.3 mmol) in THF ( 40 ml) at 0°C in an Ar atmosphere. The reaction mixture was stirred at 0° C. for 1 hour. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure to obtain 6-bromo-5-methoxythieno[3,2-b]pyridine-2-carbonyl chloride, which was immediately used in the next step.
Стадия 9: метил (S)-4-(6-бром-5-метокситиено[3,2-b]пиридин-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатStep 9: Methyl (S)-4-(6-bromo-5-methoxythieno[3,2-b]pyridin-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
Раствор (R)-(3-метокси-2-метил-3-оксопропил)цинка (II) бромида (0.5 М в THF, 14.6 мл, 7.29 ммоль) медленно добавляли в высушенную в печи колбу, содержащую хлорид меди (I) (0.361 г, 3.64 ммоль) в атмосфере Ar при 0°С. Реакционную смесь перемешивали в течение 20 мин при 0°С в атмосфере Ar. Дегазированный Ar раствор 6-бром-5-метокситиено[3,2-b]пиридин-2-карбонилхлорида (1.12 г, 3.64 ммоль) в THF (10 мл) и NMP (5.0 мл) затем медленно добавляли через канюлю к реакционной смеси при 0°С; полученный в результате раствор нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение дополнительных 18 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь охлаждали до 0°С, и реакцию останавливали добавлением насыщенного водного раствора NH4Cl (50 мл) и EtOAc (100 мл). Полученную в результате двухфазную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение дополнительного 1 ч. Смесь затем фильтровали, и фильтрат разбавляли дополнительным EtOAc (250 мл) и рассолом (50 мл). Органический слой отделяли, промывали дополнительным рассолом (50 мл), высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (EtOAc/гексан) с получением (S)-метил 4-(6-бром-5-метокситиено[3,2-b]пиридин-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C14H15BrNO4S) (ES, m/z): 372, 374 [М+Н]+. 1H ЯМР (499 МГц, DMSO-d6) δ 8.87 (s, 1Н), 8.37 (s, 1H), 4.02 (s, 3H), 3.59 (s, 3H), 3.52 (dd, J=17.9, 8.7 Гц, 1H), 3.27 (dd, J=18.0, 4.5 Гц, 1H), 3.03-2.91 (m, 1H), 1.20 (d, J=7.1 Гц, 3H).A solution of (R)-(3-methoxy-2-methyl-3-oxopropyl)zinc(II) bromide (0.5 M in THF, 14.6 mL, 7.29 mmol) was slowly added to an oven-dried flask containing copper(I) chloride ( 0.361 g, 3.64 mmol) in an Ar atmosphere at 0°C. The reaction mixture was stirred for 20 min at 0°C in an Ar atmosphere. An Ar-degassed solution of 6-bromo-5-methoxythieno[3,2-b]pyridine-2-carbonyl chloride (1.12 g, 3.64 mmol) in THF (10 mL) and NMP (5.0 mL) was then slowly added via cannula to the reaction mixture at 0°C; the resulting solution was warmed to room temperature and stirred for an additional 18 hours at room temperature. The reaction mixture was cooled to 0°C and the reaction was stopped by adding a saturated aqueous solution of NH 4 Cl (50 ml) and EtOAc (100 ml). The resulting two-phase mixture was warmed to room temperature and stirred for an additional 1 hour. The mixture was then filtered and the filtrate was diluted with additional EtOAc (250 ml) and brine (50 ml). The organic layer was separated, washed with additional brine (50 ml), dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (EtOAc/hexane) to give (S)-methyl 4-(6-bromo-5-methoxythieno[3,2-b]pyridin-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate . LC-MS (C 14 H 15 BrNO 4 S) (ES, m/z): 372, 374 [M+H] + . 1 H NMR (499 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.87 (s, 1H), 8.37 (s, 1H), 4.02 (s, 3H), 3.59 (s, 3H), 3.52 (dd, J=17.9, 8.7 Hz, 1H), 3.27 (dd, J=18.0, 4.5 Hz, 1H), 3.03-2.91 (m, 1H), 1.20 (d, J=7.1 Hz, 3H).
Стадия 10: (S)-(5-метокси-2-(4-метокси-3-метил-4-оксобутаноил)тиено[3,2-b]пиридин-6-ил)6ороновая кислотаStep 10: (S)-(5-methoxy-2-(4-methoxy-3-methyl-4-oxobutanoyl)thieno[3,2-b]pyridin-6-yl)6oronic acid
Смесь (S)-метил 4-(6-бром-5-метокситиено[3,2-b]пиридин-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата (700 мг, 1.88 ммоль), 4,4,4',4',5,5,5',5'-октаметил-2,2'-би(1,3,2-диоксаборолан) (597 мг, 2.351 ммоль), Pd2(dba)3 (43 мг, 0.047 ммоль), трициклогексилфосфина (53 мг, 0.19 ммоль) и ацетата калия (высушивали в печи) (295 мг, 3.01 ммоль) дегазировали Ar в течение 5 мин. Добавляли диоксан (15 мл) при комнатной температуре, и полученную в результате смесь дегазировали Ar в течение 5 мин. Реакционную смесь затем нагревали до 80°С и перемешивали в течение 18 ч в атмосфере Ar. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и затем разбавляли EtOAc (20 мл). Суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение 10 мин и затем фильтровали через целит, промывая EtOAc (20 мл). Фильтрат концентрировали под пониженным давлением с получением (S)-(5-метокси-2-(4-метокси-3-метил-4-оксобутаноил)тиено[3,2-b]пиридин-6-ил)бороновой кислоты, которую применяли без очистки на следующей стадии. ЖХ-МС (C14H17BNO6S) (ES, m/z): 338 [М+Н]+.Mixture of (S)-methyl 4-(6-bromo-5-methoxythieno[3,2-b]pyridin-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate (700 mg, 1.88 mmol), 4,4,4 ',4',5,5,5',5'-octamethyl-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolane) (597 mg, 2.351 mmol), Pd 2 (dba) 3 (43 mg, 0.047 mmol), tricyclohexylphosphine (53 mg, 0.19 mmol) and potassium acetate (oven dried) (295 mg, 3.01 mmol) were degassed with Ar for 5 min. Dioxane (15 ml) was added at room temperature and the resulting mixture was degassed with Ar for 5 min. The reaction mixture was then heated to 80°C and stirred for 18 hours under Ar atmosphere. The reaction mixture was cooled to room temperature and then diluted with EtOAc (20 ml). The suspension was stirred at room temperature for 10 min and then filtered through celite, washing with EtOAc (20 ml). The filtrate was concentrated under reduced pressure to give (S)-(5-methoxy-2-(4-methoxy-3-methyl-4-oxobutanoyl)thieno[3,2-b]pyridin-6-yl)boronic acid, which was used without cleaning in the next stage. LC-MS (C 14 H 17 BNO 6 S) (ES, m/z): 338 [M+H] + .
Стадия 11: метил (S)-4-(6-гидуокси-5-метокситиено[3,2-b]пиридин-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатStep 11: Methyl (S)-4-(6-hydruoxy-5-methoxythieno[3,2-b]pyridin-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
Раствор OXONE® (; 0.2 М в воде, 14.10 мл, 2.82 ммоль) добавляли к смеси (S)-(5-метокси-2-(4-метокси-3-метил-4-оксобутаноил)тиено[3,2-b]пиридин-6-ил)бороновой кислоты (634 мг, 1.88 ммоль) в ацетоне (20 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Реакцию останавливали добавлением раствора бисульфата натрия (587 мг, 5.64 ммоль) в воде (5 мл) и затем перемешивали в течение 5 мин. Реакционную смесь разбавляли DCM (200 мл). Органический слой отделяли, и водный слой промывали дополнительным DCM (2×50 мл). Органические слои объединяли, высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (EtOAc/DCM) с получением (S)-метил 4-(6-гидрокси-5-метокситиено [3,2-b]пиридин-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C14H16NO5S) (ES, m/z): 310 [М+Н]+. 1H ЯМР (600 МГц, DMSO-d6) δ 10.46 (s, 1H), 8.23 (s, 1Н), 7.66 (s, 1H), 3.97 (s, 3Н), 3.60 (s, 3Н), 3.44 (dd, J=17.5, 8.6 Гц, 1H), 3.20 (dd, J=17.5, 5.0 Гц, 1Н), 3.00-2.92 (m, 1H), 1.19 (d, J=7.2 Гц, 3Н).OXONE® solution ( ; 0.2 M in water, 14.10 ml, 2.82 mmol) was added to the mixture of (S)-(5-methoxy-2-(4-methoxy-3-methyl-4-oxobutanoyl)thieno[3,2-b]pyridine-6- yl)boronic acid (634 mg, 1.88 mmol) in acetone (20 ml) at room temperature. The reaction mixture was stirred at room temperature for 30 minutes. The reaction was stopped by adding a solution of sodium bisulfate (587 mg, 5.64 mmol) in water (5 ml) and then stirred for 5 min. The reaction mixture was diluted with DCM (200 ml). The organic layer was separated and the aqueous layer was washed with additional DCM (2×50 ml). The organic layers were combined, dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (EtOAc/DCM) to give (S)-methyl 4-(6-hydroxy-5-methoxythieno[3,2-b]pyridin-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate . LC-MS (C 14 H 16 NO 5 S) (ES, m/z): 310 [M+H] + . 1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.46 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.66 (s, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.60 (s, 3H), 3.44 ( dd, J=17.5, 8.6 Hz, 1H), 3.20 (dd, J=17.5, 5.0 Hz, 1H), 3.00-2.92 (m, 1H), 1.19 (d, J=7.2 Hz, 3H).
Стадия 12: метил (S)-4-(6-(3-хлоупуопокси)-5-метокситиено[3,2-b]пиридин-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатStep 12: Methyl (S)-4-(6-(3-chloropoxy)-5-methoxythieno[3,2-b]pyridin-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
1-Бром-3-хлорпропан (244 мг, 1.55 ммоль) добавляли к смеси (S)-метил 4-(6-гидрокси-5-метокситиено[3,2-b]пиридин-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата (96 мг, 0.31 ммоль) и карбоната калия (257 мг, 1.86 ммоль) в DMF (1.0 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали и нагревали до 50°С в течение 4 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали, и затем сразу очищали с помощью хроматографии на силикагеле (EtOAc/DCM) с получением (S)-метил 4-(6-(3-хлорпропокси)-5-метокситиено[3,2-b]пиридин-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C17H21ClNO5S) (ES, m/z): 386 [М+Н]+.1-Bromo-3-chloropropane (244 mg, 1.55 mmol) was added to the mixture of (S)-methyl 4-(6-hydroxy-5-methoxythieno[3,2-b]pyridin-2-yl)-2-methyl- 4-oxobutanoate (96 mg, 0.31 mmol) and potassium carbonate (257 mg, 1.86 mmol) in DMF (1.0 ml) at room temperature. The reaction mixture was stirred and heated to 50°C for 4 hours. The reaction mixture was cooled to room temperature and filtered, and then immediately purified by silica gel chromatography (EtOAc/DCM) to give (S)-methyl 4-(6-( 3-chloropropoxy)-5-methoxythieno[3,2-b]pyridin-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate. LC-MS (C 17 H 21 ClNO 5 S) (ES, m/z): 386 [M+H] + .
Промежуточное соединение 97: Метил (S)-4-(5-(3-бромпропил)-4-фтор-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатIntermediate 97: Methyl (S)-4-(5-(3-bromopropyl)-4-fluoro-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
Стадия 1: метил (S)-4-(4-фтор-6-метокси-5-(((трифторметил)сульфонил)окси)бензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатStep 1: Methyl (S)-4-(4-fluoro-6-methoxy-5-(((trifluoromethyl)sulfonyl)oxy)benzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
Метил (S)-4-(4-фтор-5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноат (750 мг, 2.30 ммоль), DCM (10 мл), основание Хунига (2.0 мл, 11 ммоль) и трифторметансульфоновый ангидрид (1.0 М в DCM, 3.5 мл, 3.5 ммоль) объединяли. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 мин. Затем реакцию останавливали водой и разбавляли DCM. Органический слой отделяли, промывали насыщенным NaHCO3, высушивали над Na2SO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (EtOAc/гексан) с получением (S)-метил 4-(4-фтор-6-метокси-5-(((трифторметил)сульфонил)окси)бензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C16H15F4O7S2) (ES, m/z): 459 [М+Н]+. 1H ЯМР (600 МГц, DMSO-d6) δ 8.52 (s, 1H), 7.93 (s, 1H), 4.03 (s, 3Н), 3.61 (s, 3Н), 3.53 (dd, J=17.8, 8.7 Гц, 1H), 3.27 (dd, J=17.8, 5.0 Гц, 1H), 3.05-2.92 (m, 1H), 1.21 (d, J=7.2 Гц, 3Н).Methyl (S)-4-(4-fluoro-5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate (750 mg, 2.30 mmol), DCM (10 ml), Hunig's base (2.0 mL, 11 mmol) and trifluoromethanesulfonic anhydride (1.0 M in DCM, 3.5 mL, 3.5 mmol) were combined. The reaction mixture was stirred at room temperature for 20 minutes. The reaction was then stopped with water and diluted with DCM. The organic layer was separated, washed with saturated NaHCO 3 , dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (EtOAc/hexane) to give (S)-methyl 4-(4-fluoro-6-methoxy-5-(((trifluoromethyl)sulfonyl)oxy)benzo[b]thiophen-2-yl )-2-methyl-4-oxobutanoate. LC-MS (C 16 H 15 F 4 O 7 S 2 ) (ES, m/z): 459 [M+H] + . 1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.52 (s, 1H), 7.93 (s, 1H), 4.03 (s, 3H), 3.61 (s, 3H), 3.53 (dd, J=17.8, 8.7 Hz, 1H), 3.27 (dd, J=17.8, 5.0 Hz, 1H), 3.05-2.92 (m, 1H), 1.21 (d, J=7.2 Hz, 3H).
Стадия 2: метил (2S)-4-(4-фтор-6-метокси-5-(3-((тетрагидро-2Н-пирап-2-ил)окси)пропил)бензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатStep 2: methyl (2S)-4-(4-fluoro-6-methoxy-5-(3-((tetrahydro-2H-pyrap-2-yl)oxy)propyl)benzo[b]thiophen-2-yl) -2-methyl-4-oxobutanoate
(S)-Метил 4-(4-фтор-6-метокси-5-(((трифторметил)сульфонил)окси)бензо-[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноат (1.00 г, 2.18 ммоль), CPhos Pd G4 (0.088 г, 0.11 ммоль) и (3-((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)пропил)цинк (II) бромид (0.50 М в THF, 8.7 мл, 4.4 ммоль) объединяли в виале. Реакционную смесь нагревали при 40°С в течение 2 ч. Реакционную смесь фильтровали через целит и затем концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (EtOAc/гексан) с получением метил (28)-4-(4-фтор-6-метокси-5-(3-((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)пропил)бензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C23H30FO6S) (ES, m/z): 453 [М+Н]+. 1H ЯМР (600 МГц, DMSO-d6) δ 8.31 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 4.54 (t, J=3.4 Гц, 1H), 3.92 (s, 3Н), 3.75-3.70 (m, 1Н), 3.69-3.62 (m, 1H), 3.60 (s, 3Н), 3.49 (dd, J=17.7, 8.7 Гц, 1H), 3.44-3.39 (m, 1H), 3.38-3.28 (m, 1H), 3.25 (dd, J=17.6, 5.0 Гц, 1H), 3.02-2.92 (m, 1H), 2.80-2.70 (m, 2Н), 1.84-1.76 (m, 2Н), 1.76-1.67 (m, 1H), 1.63-1.57 (m, 1H), 1.50-1.40 (m, 4Н), 1.20-1.17 (m, 3Н).(S)-Methyl 4-(4-fluoro-6-methoxy-5-(((trifluoromethyl)sulfonyl)oxy)benzo-[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate (1.00 g, 2.18 mmol), CPhos Pd G4 (0.088 g, 0.11 mmol) and (3-((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)propyl)zinc (II) bromide (0.50 M in THF, 8.7 ml, 4.4 mmol ) were combined in a vial. The reaction mixture was heated at 40°C for 2 hours. The reaction mixture was filtered through celite and then concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (EtOAc/hexane) to give methyl (28)-4-(4-fluoro-6-methoxy-5-(3-((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)propyl )benzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate. LC-MS (C 23 H 30 FO 6 S) (ES, m/z): 453 [M+H] + . 1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.31 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 4.54 (t, J=3.4 Hz, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.75-3.70 ( m, 1H), 3.69-3.62 (m, 1H), 3.60 (s, 3H), 3.49 (dd, J=17.7, 8.7 Hz, 1H), 3.44-3.39 (m, 1H), 3.38-3.28 (m, 1H), 3.25 (dd, J=17.6, 5.0 Hz, 1H), 3.02-2.92 (m, 1H), 2.80-2.70 (m, 2H), 1.84-1.76 (m, 2H), 1.76-1.67 (m, 1H), 1.63-1.57 (m, 1H), 1.50-1.40 (m, 4H), 1.20-1.17 (m, 3H).
Стадия 3: метил (Б)-4-(5-(3-бромпропил)-4-фтор-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатStep 3: Methyl (B)-4-(5-(3-bromopropyl)-4-fluoro-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
Метил (28)-4-(4-фтор-6-метокси-5-(3-((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)пропил)бензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноат (350 мг, 0.773 ммоль) и DCM (5 мл) объединяли в виале. К реакционной смеси добавляли трифенилфосфин дибромид (653 мг, 1.55 ммоль) и перемешивали в течение 30 мин. Реакционную смесь останавливали водой. Органический слой отделяли, высушивали над Na2SO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (EtOAc/гексан) с получением метил (S)-4-(5-(3-бромпропил)-4-фтор-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C18H21BrFO4S) (ES, m/z): 431, 433 [М+Н]+.Methyl (28)-4-(4-fluoro-6-methoxy-5-(3-((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)propyl)benzo[b]thiophen-2-yl)-2- Methyl 4-oxobutanoate (350 mg, 0.773 mmol) and DCM (5 ml) were combined in a vial. Triphenylphosphine dibromide (653 mg, 1.55 mmol) was added to the reaction mixture and stirred for 30 min. The reaction mixture was stopped with water. The organic layer was separated, dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (EtOAc/hexane) to give methyl (S)-4-(5-(3-bromopropyl)-4-fluoro-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl -4-oxobutanoate. LC-MS (C 18 H 21 BrFO 4 S) (ES, m/z): 431, 433 [M+H] + .
Промежуточное соединение 98: Метил (S)-4-(4-фтор-5-(3-гидроксипропил)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатIntermediate 98: Methyl (S)-4-(4-fluoro-5-(3-hydroxypropyl)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
Метил (2S)-4-(4-фтор-6-метокси-5-(3-((тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)пропил)бензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноат (350 мг, 0.773 ммоль), МеОН (5 мл) и Mp-TsOH (1.00 г, 4.33 ммоль) объединяли в виале. Реакционную смесь встряхивали в течение 2 ч. Реакционную смесь затем фильтровали, промывали МеОН и концентрировали под пониженным давлением с получением метил (S)-4-(4-фтор-5-(3-гидроксипропил)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C18H22FO5S) (ES, m/z): 369 [М+Н]+. 1Н ЯМР (600 МГц, DMSO-d6) δ 8.31 (s, 1H), 7.51 (s, 1Н), 3.92 (s, 3Н), 3.60 (s, 3Н), 3.50 (dd, J=17.7, 8.7 Гц, 1H), 3.44 (t, J=6.5 Гц, 2H), 3.25 (dd, J=17.4, 4.7 Гц, 1H), 3.02-2.93 (m, 1H), 2.71 (t, J=7.4 Гц, 2H), 1.69-1.63 (m, 2H), 1.20 (d, J=7.0 Гц, 3Н).Methyl (2S)-4-(4-fluoro-6-methoxy-5-(3-((tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)propyl)benzo[b]thiophen-2-yl)-2- Methyl 4-oxobutanoate (350 mg, 0.773 mmol), MeOH (5 ml) and Mp-TsOH (1.00 g, 4.33 mmol) were combined in a vial. The reaction mixture was shaken for 2 hours. The reaction mixture was then filtered, washed with MeOH and concentrated under reduced pressure to give methyl (S)-4-(4-fluoro-5-(3-hydroxypropyl)-6-methoxybenzo[b]thiophene- 2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate. LC-MS (C 18 H 22 FO 5 S) (ES, m/z): 369 [M+H] + . 1H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.31 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.60 (s, 3H), 3.50 (dd, J=17.7, 8.7 Hz, 1H), 3.44 (t, J=6.5 Hz, 2H), 3.25 (dd, J=17.4, 4.7 Hz, 1H), 3.02-2.93 (m, 1H), 2.71 (t, J=7.4 Hz, 2H ), 1.69-1.63 (m, 2H), 1.20 (d, J=7.0 Hz, 3H).
Промежуточное_соединение 99: Метил 2-(4-фтор-5-гидуокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-карбонил)циклопропан-1-карбоксилатIntermediate 99: Methyl 2-(4-fluoro-5-hydruoxy-6-methoxybenzo[b]thiophene-2-carbonyl)cyclopropane-1-carboxylate
Стадия 1: 2-(4-фтор-5,6-диметоксибензо[b]тиофен-2-карбонил)циклопропан-1-карбоновая кислотаStep 1: 2-(4-fluoro-5,6-dimethoxybenzo[b]thiophene-2-carbonyl)cyclopropane-1-carboxylic acid
Хлорид алюминия (0.923 г, 6.92 ммоль) добавляли к смеси 4-фтор-5,6-диметоксибензо[b]тиофена (1.13 г, 5.32 ммоль) и 3-оксабицикло[3.1.0]гексан-2,4-диона (1.19 г, 10.7 ммоль) в DCM (20.0 мл) при 0°С. Реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и затем перемешивали в течение 18 ч. Реакционную смесь охлаждали до 0°С и останавливали водой (50 мл). Смесь затем разбавляли EtOAc (500 мл). Органический слой отделяли, промывали рассолом, высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением с получением 2-(4-фтор-5,6-диметоксибензо[b]тиофен-2-карбонил)циклопропан-1-карбоновой кислоты, которую применяли без очистки на следующей стадии. ЖХ-МС (C15H14FO5S) (ES, m/z): 325 [М+Н]+.Aluminum chloride (0.923 g, 6.92 mmol) was added to a mixture of 4-fluoro-5,6-dimethoxybenzo[b]thiophene (1.13 g, 5.32 mmol) and 3-oxabicyclo[3.1.0]hexane-2,4-dione (1.19 g, 10.7 mmol) in DCM (20.0 ml) at 0°C. The reaction mixture was warmed to room temperature and then stirred for 18 hours. The reaction mixture was cooled to 0°C and stopped with water (50 ml). The mixture was then diluted with EtOAc (500 ml). The organic layer was separated, washed with brine, dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure to give 2-(4-fluoro-5,6-dimethoxybenzo[b]thiophene-2-carbonyl)cyclopropane-1-carboxylic acid, which was used without cleaning in the next stage. LC-MS (C 15 H 14 FO 5 S) (ES, m/z): 325 [M+H] + .
Стадия 2: метил 2-(4-фтор-5,6-диметоксибензо[b]тиофен-2-карбонил)циклопропан-1-карбоксилатStep 2: Methyl 2-(4-fluoro-5,6-dimethoxybenzo[b]thiophene-2-carbonyl)cyclopropane-1-carboxylate
TMS-диазометан (2.0 M в диэтиловом эфире, 4.3 мл, 8.6 ммоль) добавляли по каплям к смеси 2-(4-фтор-5,6-диметоксибензо[b]тиофен-2-карбонил)циклопропанкарбоновой кислоты (1.40 г, 4.32 ммоль) в DCM (20 мл) и МеОН (20 мл) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 15 мин. Реакционную смесь останавливали НОАс. Реакционную смесь затем концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (EtOAc/DCM) с получением метил 2-(4-фтор-5,6-диметоксибензо[b]тиофен-2-карбонил)циклопропанкарбоксилата. ЖХ-МС (C16H16FO5S) (ES, m/z): 339 [М+Н]+. 1H ЯМР (499 МГц, DMSO-d6) δ 8.37 (s, 1Н), 7.59 (s, 1H), 3.93 (s, 3H), 3.87 (s, 3H), 3.48 (s, 3H), 3.31-3.25 (m, 1H), 2.47-2.41 (m, 1H), 1.62-1.58 (m, 1H), 1.44-1.40 (m, 1H).TMS-diazomethane (2.0 M in diethyl ether, 4.3 mL, 8.6 mmol) was added dropwise to a mixture of 2-(4-fluoro-5,6-dimethoxybenzo[b]thiophene-2-carbonyl)cyclopropanecarboxylic acid (1.40 g, 4.32 mmol ) in DCM (20 ml) and MeOH (20 ml) at 0°C. The reaction mixture was stirred at 0°C for 15 minutes. The reaction mixture was stopped with NOAc. The reaction mixture was then concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (EtOAc/DCM) to give methyl 2-(4-fluoro-5,6-dimethoxybenzo[b]thiophene-2-carbonyl)cyclopropanecarboxylate. LC-MS (C 16 H 16 FO 5 S) (ES, m/z): 339 [M+H] + . 1 H NMR (499 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.37 (s, 1H), 7.59 (s, 1H), 3.93 (s, 3H), 3.87 (s, 3H), 3.48 (s, 3H), 3.31- 3.25 (m, 1H), 2.47-2.41 (m, 1H), 1.62-1.58 (m, 1H), 1.44-1.40 (m, 1H).
Стадия 3: метил 2-(4-фтор-5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-карбонил)циклопропан-1-карбоксилатStep 3: Methyl 2-(4-fluoro-5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophene-2-carbonyl)cyclopropane-1-carboxylate
Хлорид алюминия (2.66 г, 20.0 ммоль) добавляли порциями к смеси метил 2-(4-фтор-5,6-диметоксибензо[b]тиофен-2-карбонил)циклопропанкарбоксилата (1.50 г, 4.43 ммоль) в DCM (40 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 6 ч в атмосфере Ar. Реакцию охлаждали до 0°С и затем медленно останавливали водой (50 мл). Реакционную смесь разбавляли дополнительным DCM (250 мл). Органический слой отделяли, промывали рассолом (25 мл), высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (EtOAc/DCM) с получением метил 2-(4-фтор-5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-карбонил)циклопропанкарбоксилата. ЖХ-МС (C15H14FO5S) (ES, m/z): 325 [М+Н]+. 1Н ЯМР (499 МГц, DMSO-d6) δ 9.55 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.48 (s, 1H), 3.92 (s, 3Н), 3.48 (s, 3Н), 3.30-3.23 (m, 1H), 2.45-2.39 (m, 1H), 1.61-1.57 (m, 1H), 1.43-1.38 (m, 1H).Aluminum chloride (2.66 g, 20.0 mmol) was added in portions to a mixture of methyl 2-(4-fluoro-5,6-dimethoxybenzo[b]thiophene-2-carbonyl)cyclopropanecarboxylate (1.50 g, 4.43 mmol) in DCM (40 ml) at room temperature. The reaction mixture was stirred at room temperature for 6 hours under an Ar atmosphere. The reaction was cooled to 0°C and then slowly stopped with water (50 ml). The reaction mixture was diluted with additional DCM (250 ml). The organic layer was separated, washed with brine (25 ml), dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (EtOAc/DCM) to give methyl 2-(4-fluoro-5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophene-2-carbonyl)cyclopropanecarboxylate. LC-MS (C 15 H 14 FO 5 S) (ES, m/z): 325 [M+H] + . 1 H NMR (499 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.55 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.48 (s, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.48 (s, 3H), 3.30- 3.23 (m, 1H), 2.45-2.39 (m, 1H), 1.61-1.57 (m, 1H), 1.43-1.38 (m, 1H).
Промежуточное соединение 100: Метил (R)-4-(5-(3-бромпропил)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатIntermediate 100: Methyl (R)-4-(5-(3-bromopropyl)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
Стадия 1: метил (R)-4-(5-бром-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатStep 1: Methyl (R)-4-(5-bromo-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
5-Бром-6-метоксибензо[b]тиофен-2-карбонилхлорид (3.00 г, 9.82 ммоль) и THF (98 мл) объединяли. Реакционную смесь затем дегазировали Ar в течение 10 мин. К реакционной смеси добавляли CPhos Pd G4 (0.081 г, 0.098 ммоль), и смесь охлаждали до 0°С. Затем к реакционной смеси добавляли (S)-(3-метокси-2-метил-3-оксопропил)цинк (II) бромид (0.50 М в THF, 21 мл, 11 ммоль) с помощью капельной воронки. Смесь перемешивали при 0°С в течение 1 ч. Реакционную смесь останавливали насыщенным водным NH4Cl и разбавляли EtOAc. Органический слой отделяли, высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (EtOAc/гексан) с получением метил (R)-4-(5-бром-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C15H16BrO4S) (ES, m/z): 371, 373 [М+Н]+. 1H ЯМР (499 МГц, DMSO-d6) δ 8.28-8.26 (m, 2Н), 7.82 (s, 1H), 3.95 (s, 3Н), 3.60 (s, 3Н), 3.44 (dd, J=17.6, 8.6 Гц, 1H), 3.21 (dd, J=17.6, 5.1 Гц, 1H), 3.03-2.93 (m, 1H), 1.20 (d, J=7.2 Гц, 3Н).5-Bromo-6-methoxybenzo[b]thiophene-2-carbonyl chloride (3.00 g, 9.82 mmol) and THF (98 ml) were combined. The reaction mixture was then degassed with Ar for 10 min. CPhos Pd G4 (0.081 g, 0.098 mmol) was added to the reaction mixture and the mixture was cooled to 0°C. (S)-(3-methoxy-2-methyl-3-oxopropyl)zinc(II) bromide (0.50 M in THF, 21 mL, 11 mmol) was then added to the reaction mixture using a dropping funnel. The mixture was stirred at 0°C for 1 hour. The reaction mixture was stopped with saturated aqueous NH 4 Cl and diluted with EtOAc. The organic layer was separated, dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (EtOAc/hexane) to give methyl (R)-4-(5-bromo-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate. LC-MS (C 15 H 16 BrO 4 S) (ES, m/z): 371, 373 [M+H] + . 1 H NMR (499 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.28-8.26 (m, 2H), 7.82 (s, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.60 (s, 3H), 3.44 (dd, J=17.6 , 8.6 Hz, 1H), 3.21 (dd, J=17.6, 5.1 Hz, 1H), 3.03-2.93 (m, 1H), 1.20 (d, J=7.2 Hz, 3H).
Стадия 2: метил (R)-4-(5-(3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)пропил)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатStep 2: Methyl (R)-4-(5-(3-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)propyl)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
CPhos Pd G3 (174 мг, 0.215 ммоль) и (3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)пропил)цинк (II) бромид (0.50 М в THF, 9.7 мл, 4.9 ммоль) добавляли к смеси (R)-метил 4-(5-бром-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата (1.00 г, 2.69 ммоль) в THF (13.5 мл). Реакционную смесь нагревали при 40°С в течение 3 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, останавливали водой и разбавляли EtOAc. Органический слой отделяли, высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (EtOAc/гексан) с получением метил (R)-4-(5-(3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)пропил)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C24H37O5SSi) (ES, m/z): 465 [М+Н]+.CPhos Pd G3 (174 mg, 0.215 mmol) and (3-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)propyl)zinc(II) bromide (0.50 M in THF, 9.7 ml, 4.9 mmol) were added to the mixture of (R)-methyl 4 -(5-bromo-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate (1.00 g, 2.69 mmol) in THF (13.5 ml). The reaction mixture was heated at 40°C for 3 hours. The reaction mixture was cooled to room temperature, stopped with water and diluted with EtOAc. The organic layer was separated, dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (EtOAc/hexane) to give methyl (R)-4-(5-(3-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)propyl)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl) -2-methyl-4-oxobutanoate. LC-MS (C 24 H 37 O 5 SSi) (ES, m/z): 465 [M+H] + .
Стадия 3: метил (R)-4-(5-(3-гидроксипропил)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатStep 3: Methyl (R)-4-(5-(3-hydroxypropyl)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
(R)-Метил 4-(5-(3-((трет-бутилдиметилсилил)окси)пропил)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноат (1.04 г, 2.24 ммоль) суспендировали в смеси МеОН (4 мл), воды (4 мл) и НОАс (4 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3.5 ч. Реакционную смесь разбавляли EtOAc и водой. Водный слой отделяли и экстрагировали дополнительным EtOAc (3х). Органические слои объединяли, промывали рассолом, высушивали над Na2SO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (EtOAc/гексан) с получением метил (R)-4-(5-(3-гидроксипропил)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C18H23O5S) (ES, m/z): 351 [М+Н]+.(R)-Methyl 4-(5-(3-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)propyl)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate (1.04 g, 2.24 mmol ) was suspended in a mixture of MeOH (4 ml), water (4 ml) and HOAc (4 ml). The reaction mixture was stirred at room temperature for 3.5 hours. The reaction mixture was diluted with EtOAc and water. The aqueous layer was separated and extracted with additional EtOAc (3x). The organic layers were combined, washed with brine, dried over Na 2 SO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (EtOAc/hexane) to give methyl (R)-4-(5-(3-hydroxypropyl)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate . LC-MS (C 18 H 23 O 5 S) (ES, m/z): 351 [M+H] + .
Стадия 4: метил (R)-4-(5-(3-бромпропил)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатStep 4: Methyl (R)-4-(5-(3-bromopropyl)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
NBS (518 мг, 2.91 ммоль) добавляли к смеси (R)-метил 4-(5-(3-гидроксипропил)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата (680 мг, 1.94 ммоль) и трифенилфосфина (814 мг, 3.10 ммоль) в THF (9.7 мл) при 0°С. Через 1.5 ч реакционную смесь останавливали насыщенным водным NH4Cl и затем разбавляли EtOAc. Органический слой отделяли, промывали рассолом, высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (EtOAc/гексан) с получением метил (R)-4-(5-(3-бромпропил)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C18H22BrO4S) (ES, m/z): 413, 415 [М+Н]+. 1Н ЯМР (499 МГц, DMSO-d6) δ 8.27 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 3.90 (s, 3Н), 3.60 (s, 3Н), 3.55 (t, J=6.6 Гц, 2Н), 3.43 (dd, J=17.5, 8.6 Гц, 1H), 3.20 (dd, J=17.5, 5.1 Гц, 1H), 3.04-2.94 (m, 1H), 2.83-2.77 (m, 2Н), 2.14-2.08 (m, 2Н), 1.20 (d, J=7.2 Гц, 3Н).NBS (518 mg, 2.91 mmol) was added to a mixture of (R)-methyl 4-(5-(3-hydroxypropyl)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate (680 mg , 1.94 mmol) and triphenylphosphine (814 mg, 3.10 mmol) in THF (9.7 ml) at 0°C. After 1.5 h, the reaction mixture was stopped with saturated aqueous NH 4 Cl and then diluted with EtOAc. The organic layer was separated, washed with brine, dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (EtOAc/hexane) to give methyl (R)-4-(5-(3-bromopropyl)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate . LC-MS (C 18 H 22 BrO 4 S) (ES, m/z): 413, 415 [M+H] + . 1 H NMR (499 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.27 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.60 (s, 3H), 3.55 ( t, J=6.6 Hz, 2H), 3.43 (dd, J=17.5, 8.6 Hz, 1H), 3.20 (dd, J=17.5, 5.1 Hz, 1H), 3.04-2.94 (m, 1H), 2.83-2.77 (m, 2H), 2.14-2.08 (m, 2H), 1.20 (d, J=7.2 Hz, 3H).
Промежуточные соединения 101, 102, 103 и 104: Метил (1R,2R или 1S,2S)-2-(4-фтор-6-гидрокси-5-метоксибензо[b]тиофен-2-карбонил)циклобутан-1-карбоксилат, метил (1R,2R или 1S,2S)-2-(4-фтор-6-гидрокси-5-метоксибензо[b]тиофен-2-карбонил)циклобутан-1-карбоксилат, метил (1R,2R или 1S,2S)-2-(4-фтор-5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-карбонил)циклобутан-1-карбоксилат, метил (1R,2R или 1S,2S)-2-(4-фтор-5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-карбонил)циклобутан-1-карбоксилатIntermediates 101, 102, 103 and 104: Methyl (1R,2R or 1S,2S)-2-(4-fluoro-6-hydroxy-5-methoxybenzo[b]thiophene-2-carbonyl)cyclobutane-1-carboxylate, methyl (1R,2R or 1S,2S)-2-(4-fluoro-6-hydroxy-5-methoxybenzo[b]thiophene-2-carbonyl)cyclobutane-1-carboxylate, methyl (1R,2R or 1S,2S) -2-(4-fluoro-5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophene-2-carbonyl)cyclobutane-1-carboxylate, methyl (1R,2R or 1S,2S)-2-(4-fluoro-5- Hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophene-2-carbonyl)cyclobutane-1-carboxylate
Стадия 1: (цис)-2-(4-фтор-5,6-диметоксибензо[b]тиофен-2-карбонил)циклобутан-1-карбоновая кислотаStep 1: (cis)-2-(4-fluoro-5,6-dimethoxybenzo[b]thiophene-2-carbonyl)cyclobutane-1-carboxylic acid
Хлорид алюминия (776 мг, 5.82 ммоль) добавляли к смеси 4-фтор-5,6-диметоксибензо[b]тиофена (950 мг, 4.48 ммоль) и 3-оксабицикло[3.2.0]гептан-2,4-диона (1130 мг, 8.95 ммоль) в DCM (20.0 мл) при 0°С. Реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и затем перемешивали в течение 18 ч. Реакционную смесь охлаждали до 0°С и затем останавливали путем добавления по каплям воды (50 мл). Смесь затем разбавляли дополнительным DCM (200 мл). Органический слой отделяли, промывали рассолом, высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением с получением (цис)-2-(4-фтор-5,6-диметоксибензо[b]тиофен-2-карбонил)циклобутан-1-карбоновой кислоты, которую применяли без очистки на следующей стадии. ЖХ-МС (C16H16FO5S) (ES, m/z): 339 [М+Н]+.Aluminum chloride (776 mg, 5.82 mmol) was added to a mixture of 4-fluoro-5,6-dimethoxybenzo[b]thiophene (950 mg, 4.48 mmol) and 3-oxabicyclo[3.2.0]heptane-2,4-dione (1130 mg, 8.95 mmol) in DCM (20.0 ml) at 0°C. The reaction mixture was warmed to room temperature and then stirred for 18 hours. The reaction mixture was cooled to 0°C and then stopped by adding dropwise water (50 ml). The mixture was then diluted with additional DCM (200 ml). The organic layer was separated, washed with brine, dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure to give (cis)-2-(4-fluoro-5,6-dimethoxybenzo[b]thiophene-2-carbonyl)cyclobutane-1-carboxylic acid acid, which was used without purification in the next step. LC-MS (C 16 H 16 FO 5 S) (ES, m/z): 339 [M+H] + .
Стадия 2: метил (цис)-2-(4-фтор-5,6-диметоксибензо[b]тиофен-2-карбонил)циклобутан-1-карбоксилатStep 2: Methyl (cis)-2-(4-fluoro-5,6-dimethoxybenzo[b]thiophene-2-carbonyl)cyclobutane-1-carboxylate
TMS-диазометан (2.0 M в диэтиловом эфире, 4.0 мл, 8.0 ммоль) добавляли по каплям к смеси (цис)-2-(4-фтор-5,6-диметоксибензо[b]тиофен-2-карбонил)циклобутанкарбоновой кислоты (1.35 г, 3.99 ммоль) в DCM (20 мл) и МеОН (20 мл) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 15 мин. Реакционную смесь останавливали НОАс. Реакционную смесь затем концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (EtOAc/DCM) с получением (цис)-метил 2-(4-фтор-5,6-диметоксибензо[b]тиофен-2-карбонил)циклобутанкарбоксилата. ЖХ-МС (C17H18FO5S) (ES, m/z): 353 [М+Н]+. 1H ЯМР (499 МГц, DMSO-d6) δ 8.15 (s, 1H), 7.58 (s, 1H), 4.59-4.50 (m, 1H), 3.93 (s, 3H), 3.86 (s, 3H), 3.68 (q, J=8.9, 8.5 Гц, 1H), 3.41 (s, 3H), 2.34-2.10 (m, 4H).TMS-diazomethane (2.0 M in diethyl ether, 4.0 mL, 8.0 mmol) was added dropwise to a mixture of (cis)-2-(4-fluoro-5,6-dimethoxybenzo[b]thiophene-2-carbonyl)cyclobutanecarboxylic acid (1.35 g, 3.99 mmol) in DCM (20 ml) and MeOH (20 ml) at 0°C. The reaction mixture was stirred at 0°C for 15 minutes. The reaction mixture was stopped with NOAc. The reaction mixture was then concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (EtOAc/DCM) to give (cis)-methyl 2-(4-fluoro-5,6-dimethoxybenzo[b]thiophene-2-carbonyl)cyclobutanecarboxylate. LC-MS (C 17 H 18 FO 5 S) (ES, m/z): 353 [M+H] + . 1 H NMR (499 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.15 (s, 1H), 7.58 (s, 1H), 4.59-4.50 (m, 1H), 3.93 (s, 3H), 3.86 (s, 3H), 3.68 (q, J=8.9, 8.5 Hz, 1H), 3.41 (s, 3H), 2.34-2.10 (m, 4H).
Стадия 3: (транс)-2-(4-фтор-5,6-диметоксибензо[b]тиофен-2-карбонил)циклобутан-1-карбоновая кислотаStep 3: (trans)-2-(4-fluoro-5,6-dimethoxybenzo[b]thiophene-2-carbonyl)cyclobutane-1-carboxylic acid
NaOH (5.0 M, 1.8 мл, 9.0 ммоль) добавляли к смеси (цис)-метил 2-(4-фтор-5,6-диметоксибензо[b]тиофен-2-карбонил)циклобутанкарбоксилата (650 мг, 1.85 ммоль) в МеОН (25 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Реакционную смесь останавливали TFA (0.85 мл, 11 ммоль) и затем разбавляли DCM (250 мл). Органический слой отделяли, промывали рассолом (50 мл), высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (MeOH/DCM) с получением (транс)-2-(4-фтор-5,6-диметоксибензо[b]тиофен-2-карбонил)циклобутанкарбоновой кислоты. ЖХ-МС (C16H16FO5S) (ES, m/z): 339 [М+Н]+.NaOH (5.0 M, 1.8 mL, 9.0 mmol) was added to a mixture of (cis)-methyl 2-(4-fluoro-5,6-dimethoxybenzo[b]thiophene-2-carbonyl)cyclobutanecarboxylate (650 mg, 1.85 mmol) in MeOH (25 ml) at room temperature. The reaction mixture was stirred at room temperature for 4 hours. The reaction mixture was quenched with TFA (0.85 ml, 11 mmol) and then diluted with DCM (250 ml). The organic layer was separated, washed with brine (50 ml), dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (MeOH/DCM) to give (trans)-2-(4-fluoro-5,6-dimethoxybenzo[b]thiophene-2-carbonyl)cyclobutanecarboxylic acid. LC-MS (C 16 H 16 FO 5 S) (ES, m/z): 339 [M+H] + .
Стадия 4: метил (транс)-2-(4-фтор-5,6-диметоксибензо[b]тиофен-2-карбонил)циклобутан-1-карбоксилатStep 4: Methyl (trans)-2-(4-fluoro-5,6-dimethoxybenzo[b]thiophene-2-carbonyl)cyclobutane-1-carboxylate
TMS-диазометан (2.0 М в диэтиловом эфире, 1.7 мл, 3.4 ммоль) добавляли по каплям к смеси (транс)-2-(4-фтор-5,6-диметоксибензо[b]тиофен-2-карбонил)циклобутанкарбоновой кислоты (570 мг, 1.69 ммоль) в DCM (20 мл) и МеОН (20 мл) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 15 мин. Реакционную смесь останавливали НОАс. Реакционную смесь затем концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (EtOAc/DCM) с получением (транс)-метил 2-(4-фтор-5,6-диметоксибензо[b]тиофен-2-карбонил)циклобутанкарбоксилата. ЖХ-МС (C17H18FO5S) (ES, m/z): 353 [М+Н]+. 1Н ЯМР (499 МГц, DMSO-d6) δ 8.22 (s, 1H), 7.60 (s, 1Н), 4.42 (q, J=9.0 Гц, 1H), 3.93 (s, 3Н), 3.86 (s, 3Н), 3.63 (s, 3Н), 3.58-3.48 (m, 1H), 2.38-2.30 (m, 1H), 2.26-2.18 (m, 1H), 2.17-2.10 (m, 2H).TMS-diazomethane (2.0 M in diethyl ether, 1.7 ml, 3.4 mmol) was added dropwise to a mixture of (trans)-2-(4-fluoro-5,6-dimethoxybenzo[b]thiophene-2-carbonyl)cyclobutanecarboxylic acid (570 mg, 1.69 mmol) in DCM (20 ml) and MeOH (20 ml) at 0°C. The reaction mixture was stirred at 0°C for 15 minutes. The reaction mixture was stopped with NOAc. The reaction mixture was then concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (EtOAc/DCM) to give (trans)-methyl 2-(4-fluoro-5,6-dimethoxybenzo[b]thiophene-2-carbonyl)cyclobutanecarboxylate. LC-MS (C 17 H 18 FO 5 S) (ES, m/z): 353 [M+H] + . 1H NMR (499 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.22 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 4.42 (q, J=9.0 Hz, 1H), 3.93 (s, 3H), 3.86 (s, 3H), 3.63 (s, 3H), 3.58-3.48 (m, 1H), 2.38-2.30 (m, 1H), 2.26-2.18 (m, 1H), 2.17-2.10 (m, 2H).
Стадия 5: метил (1R,2R или 1S,2S)-2-(4-фтор-6-гидрокси-5-метоксибензо[b]тиофен-2-карбонил)циклобутан-1-карбоксилат, метил (1R,2R или 1S,2S)-2-(4-фтор-6-гидрокси-5-метоксибензо[b]тиофен-2-карбонил)циклобутан-1-карбоксилат, метил (1R,2R или 1S,2S)-2-(4-фтор-5-гидрокси-6-метоксибензо[b] тиофен-2-карбонил)циклобутан-1-карбоксилат, метил (1R,2R или 1S,2S)-2-(4-фтор-5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-карбонил)циклобутан-1-карбоксилатStep 5: methyl (1R,2R or 1S,2S)-2-(4-fluoro-6-hydroxy-5-methoxybenzo[b]thiophene-2-carbonyl)cyclobutane-1-carboxylate, methyl (1R,2R or 1S ,2S)-2-(4-fluoro-6-hydroxy-5-methoxybenzo[b]thiophene-2-carbonyl)cyclobutane-1-carboxylate, methyl (1R,2R or 1S,2S)-2-(4-fluoro -5-hydroxy-6-methoxybenzo[b] thiophene-2-carbonyl)cyclobutane-1-carboxylate, methyl (1R,2R or 1S,2S)-2-(4-fluoro-5-hydroxy-6-methoxybenzo[b ]thiophene-2-carbonyl)cyclobutane-1-carboxylate
AlCl3 (1.10 г, 8.27 ммоль) добавляли к смеси (транс)-метил 2-(4-фтор-5,6-диметоксибензо[b]тиофен-2-карбонил)циклобутанкарбоксилата (530 мг, 1.50 ммоль) в DCM (40 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 6 ч в атмосфере Ar. Реакционную смесь охлаждали до 0°С и затем медленно останавливали водой (50 мл). Реакционную смесь затем разбавляли дополнительным DCM (250 мл). Органический слой отделяли, промывали рассолом (25 мл), высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (EtOAc/DCM) с получением смеси (+/- транс)-метил-2-(4-фтор-5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-карбонил)циклобутан-1-карбоксилата и (+/- транс)-метил-2-(4-фтор-6-гидрокси-5-метоксибензо[b]тиофен-2-карбонил)циклобутан-1-карбоксилата. Смесь рацемических региоизомеров очищали с помощью хиральной SFC (колонка ССА, 20% [МеОН с 0.25% DMEA] в СО2) с получением:AlCl 3 (1.10 g, 8.27 mmol) was added to a mixture of (trans)-methyl 2-(4-fluoro-5,6-dimethoxybenzo[b]thiophene-2-carbonyl)cyclobutanecarboxylate (530 mg, 1.50 mmol) in DCM (40 ml) at room temperature. The reaction mixture was stirred at room temperature for 6 hours under an Ar atmosphere. The reaction mixture was cooled to 0°C and then slowly quenched with water (50 ml). The reaction mixture was then diluted with additional DCM (250 ml). The organic layer was separated, washed with brine (25 ml), dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (EtOAc/DCM) to give a mixture of (+/- trans)-methyl-2-(4-fluoro-5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophene-2-carbonyl)cyclobutane-1 -carboxylate and (+/- trans)-methyl-2-(4-fluoro-6-hydroxy-5-methoxybenzo[b]thiophene-2-carbonyl)cyclobutane-1-carboxylate. The mixture of racemic regioisomers was purified by chiral SFC (CCA column, 20% [MeOH with 0.25% DMEA] in CO 2 ) to give:
Пик 1 (3.0 мин): метил (1R,2R или 1S,2S)-2-(4-фтор-6-гидрокси-5-метоксибензо[b]тиофен-2-карбонил)циклобутан-1-карбоксилат. ЖХ-МС (C16H16FO5S) (ES, m/z): 339 [М+Н]+. 1Н ЯМР (499 МГц, DMSO-d6) δ 10.58 (br s, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.24 (s, 1H), 4.45-4.34 (m, 1H), 3.86 (s, 3H), 3.62 (s, 3H), 3.56-3.47 (m, 1H), 2.36-2.24 (m, 1H), 2.25-2.16 (m, 1H), 2.16-2.07 (m, 2H). Пик 2 (3.5 мин): метил (1R,2R или 1S,2S)-2-(4-фтор-6-гидрокси-5-метоксибензо[b]тиофен-2-карбонил)циклобутан-1-карбоксилат. ЖХ-МС (C16H16FO5S) (ES, m/z): 339 [М+Н]+. Пик 3 (3.9 мин): метил (1R,2R или 1S,2S)-2-(4-фтор-5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-карбонил)циклобутан-1-карбоксилат. ЖХ-МС (C16H16FO5S) (ES, m/z): 339 [М+Н]+. 1H ЯМР (499 МГц, DMSO-d6) δ 9.55 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.48 (s, 1H), 4.45-4.38 (m, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.62 (s, 3H), 3.58-3.49 (m, 1H), 2.38-2.27 (m, 1H), 2.25-2.19 (m, 1H), 2.17-2.09 (m, 2H). Пик 4 (5.0 мин): метил (1R,2R или 1S,2S)-2-(4-фтор-5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-карбонил)циклобутан-1-карбоксилат. ЖХ-МС (C16H16FO5S) (ES, m/z): 339 [M+H]+. 1H ЯМР (499 МГц, DMSO-d6) δ 9.54 (s, 1H), 8.14 (s, 1Н), 7.48 (s, 1H), 4.44-4.38 (m, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.62 (s, 3H), 3.55-3.49 (m, 1H), 2.38-2.26 (m, 1H), 2.26-2.17 (m, 1H), 2.17-2.10 (m, 2H).Peak 1 (3.0 min): methyl (1R,2R or 1S,2S)-2-(4-fluoro-6-hydroxy-5-methoxybenzo[b]thiophene-2-carbonyl)cyclobutane-1-carboxylate. LC-MS (C 16 H 16 FO 5 S) (ES, m/z): 339 [M+H] + . 1H NMR (499 MHz, DMSO- d6 ) δ 10.58 (br s, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.24 (s, 1H), 4.45-4.34 (m, 1H), 3.86 (s, 3H) , 3.62 (s, 3H), 3.56-3.47 (m, 1H), 2.36-2.24 (m, 1H), 2.25-2.16 (m, 1H), 2.16-2.07 (m, 2H). Peak 2 (3.5 min): methyl (1R,2R or 1S,2S)-2-(4-fluoro-6-hydroxy-5-methoxybenzo[b]thiophene-2-carbonyl)cyclobutane-1-carboxylate. LC-MS (C 16 H 16 FO 5 S) (ES, m/z): 339 [M+H] + . Peak 3 (3.9 min): methyl (1R,2R or 1S,2S)-2-(4-fluoro-5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophene-2-carbonyl)cyclobutane-1-carboxylate. LC-MS (C 16 H 16 FO 5 S) (ES, m/z): 339 [M+H] + . 1 H NMR (499 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.55 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.48 (s, 1H), 4.45-4.38 (m, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.62 (s, 3H), 3.58-3.49 (m, 1H), 2.38-2.27 (m, 1H), 2.25-2.19 (m, 1H), 2.17-2.09 (m, 2H). Peak 4 (5.0 min): methyl (1R,2R or 1S,2S)-2-(4-fluoro-5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophene-2-carbonyl)cyclobutane-1-carboxylate. LC-MS (C 16 H 16 FO 5 S) (ES, m/z): 339 [M+H] + . 1 H NMR (499 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.54 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.48 (s, 1H), 4.44-4.38 (m, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.62 (s, 3H), 3.55-3.49 (m, 1H), 2.38-2.26 (m, 1H), 2.26-2.17 (m, 1H), 2.17-2.10 (m, 2H).
Промежуточное соединение 105: Метил (R)-4-(4-фтор-5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатIntermediate 105: Methyl (R)-4-(4-fluoro-5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
Стадия 1: метил (R)-4-(4-фтор-5,6-диметоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатStep 1: Methyl (R)-4-(4-fluoro-5,6-dimethoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
Смесь 4-фтор-5,6-диметоксибензо[b]тиофен-2-карбонилхлорида (1.00 г, 3.64 ммоль) и THF (36.4 мл) дегазировали Ar в течение 10 мин. CPhos Pd G4 (0.030 г, 0.036 ммоль) добавляли к смеси, и реакционную смесь охлаждали до 0°С. (S)-(3-метокси-2-метил-3-оксопропил)цинк (II) бромид (0.50 М в THF, 8.0 мл, 4.0 ммоль) затем добавляли к реакционной смеси через капельную воронку. Смесь перемешивали при 0°С в течение 1 ч. Реакционную смесь останавливали насыщенным водным NH4Cl и затем разбавляли EtOAc. Органический слой отделяли, высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (EtOAc/гексан) с получением метил (R)-4-(4-фтор-5,6-диметоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C16H18FO5S) (ES, m/z): 341 [М+Н]+.A mixture of 4-fluoro-5,6-dimethoxybenzo[b]thiophene-2-carbonyl chloride (1.00 g, 3.64 mmol) and THF (36.4 ml) was degassed with Ar for 10 min. CPhos Pd G4 (0.030 g, 0.036 mmol) was added to the mixture and the reaction mixture was cooled to 0°C. (S)-(3-methoxy-2-methyl-3-oxopropyl)zinc(II) bromide (0.50 M in THF, 8.0 mL, 4.0 mmol) was then added to the reaction mixture through a dropping funnel. The mixture was stirred at 0°C for 1 hour. The reaction mixture was quenched with saturated aqueous NH 4 Cl and then diluted with EtOAc. The organic layer was separated, dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (EtOAc/hexane) to give methyl (R)-4-(4-fluoro-5,6-dimethoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate. LC-MS (C 16 H 18 FO 5 S) (ES, m/z): 341 [M+H] + .
Стадия 2: метил (R)-4-(4-фтор-5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатStep 2: Methyl (R)-4-(4-fluoro-5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
AlCl3 (1.16 г, 8.72 ммоль) добавляли к смеси (R)-метил 4-(4-фтор-5,6-диметоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата (0.742 г, 2.18 ммоль) в DCM (22 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали в течение 18 ч. Реакционную смесь затем охлаждали до 0°С и останавливали добавлением воды (50 мл) и HCl (1.0 М в воде, 50 мл, 50 ммоль). Реакционную смесь затем разбавляли EtOAc. Органический слой отделяли, высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением с получением метил (R)-4-(4-фтор-5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата, который применяли без очистки. ЖХ-МС (C15H16FO5S) (ES, m/z): 327 [М+Н]+.AlCl 3 (1.16 g, 8.72 mmol) was added to a mixture of (R)-methyl 4-(4-fluoro-5,6-dimethoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate (0.742 g, 2.18 mmol) in DCM (22 ml) at room temperature. The reaction mixture was stirred for 18 hours. The reaction mixture was then cooled to 0°C and quenched by adding water (50 ml) and HCl (1.0 M in water, 50 ml, 50 mmol). The reaction mixture was then diluted with EtOAc. The organic layer was separated, dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure to give methyl (R)-4-(4-fluoro-5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl- 4-oxobutanoate, which was used without purification. LC-MS (C 15 H 16 FO 5 S) (ES, m/z): 327 [M+H] + .
Промежуточное соединение 106: Метил (S)-4-(4-хлор-5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатIntermediate 106: Methyl (S)-4-(4-chloro-5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
NCS (11 мг, 0.081 ммоль) добавляли к смеси (S)-метил 4-(5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата (25 мг, 0.081 ммоль) в DMF (0.25 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь затем нагревали до 40°С и перемешивали в течение 2 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и сразу очищали с помощью хроматографии на силикагеле (EtOAc/гексан) с получением (S)-метил 4-(4-хлор-5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C15H16ClO5S) (ES, m/z): 343 [М+Н]+. 1H ЯМР (499 МГц, DMSO-d6) δ 9.78 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.63 (s, 1H), 3.94 (s, 3H), 3.60 (s, 3H), 3.50 (dd, J=17.8, 8.7 Гц, 1H), 3.31-3.23 (m, 1H), 3.02-2.92 (m, 1H), 1.20 (d, J=7.2 Гц, 3Н).NCS (11 mg, 0.081 mmol) was added to a mixture of (S)-methyl 4-(5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate (25 mg, 0.081 mmol) in DMF (0.25 ml) at room temperature. The reaction mixture was then heated to 40°C and stirred for 2 hours. The reaction mixture was cooled to room temperature and immediately purified by silica gel chromatography (EtOAc/hexane) to give (S)-methyl 4-(4-chloro-5- Hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate. LC-MS (C 15 H 16 ClO 5 S) (ES, m/z): 343 [M+H] + . 1H NMR (499 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.78 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.63 (s, 1H), 3.94 (s, 3H), 3.60 (s, 3H), 3.50 (dd , J=17.8, 8.7 Hz, 1H), 3.31-3.23 (m, 1H), 3.02-2.92 (m, 1H), 1.20 (d, J=7.2 Hz, 3H).
Промежуточное соединение 107: Метил (S)-4-(4-бром-5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксо6утаноатIntermediate 107: Methyl (S)-4-(4-bromo-5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxo6utanoate
NBS (14 мг, 0.081 ммоль) добавляли к смеси (S)-метил 4-(5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата (25 мг, 0.081 ммоль) в DMF (0.25 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь затем нагревали до 40°С и перемешивали в течение 2 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и сразу очищали с помощью хроматографии на силикагеле (EtOAc/DCM) с получением (S)-метил 4-(4-бром-5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C15H16BrO5S) (ES, m/z): 387, 389 [М+Н]+. 1H ЯМР (499 МГц, DMSO-d6) δ 9.82 (s, 1H), 8.08 (s, 1Н), 7.66 (s, 1H), 3.94 (s, 3Н), 3.60 (s, 3Н), 3.50 (dd, J=17.8, 8.7 Гц, 1H), 3.31-3.24 (m, 1H), 3.03-2.92 (m, 1H), 1.21 (d, J=7.2 Гц, 3Н).NBS (14 mg, 0.081 mmol) was added to a mixture of (S)-methyl 4-(5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate (25 mg, 0.081 mmol) in DMF (0.25 ml) at room temperature. The reaction mixture was then heated to 40°C and stirred for 2 hours. The reaction mixture was cooled to room temperature and immediately purified by silica gel chromatography (EtOAc/DCM) to give (S)-methyl 4-(4-bromo-5- Hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate. LC-MS (C 15 H 16 BrO 5 S) (ES, m/z): 387, 389 [M+H] + . 1 H NMR (499 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.82 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.66 (s, 1H), 3.94 (s, 3H), 3.60 (s, 3H), 3.50 ( dd, J=17.8, 8.7 Hz, 1H), 3.31-3.24 (m, 1H), 3.03-2.92 (m, 1H), 1.21 (d, J=7.2 Hz, 3H).
Промежуточное соединение 108: Метил 4-(6-гидрокси-5-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноатIntermediate 108: Methyl 4-(6-hydroxy-5-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate
Стадия 1: метил 4-(5,6-диметоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноатStep 1: Methyl 4-(5,6-dimethoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate
TMS-диазометан (2.0 М в диэтиловом эфире, 5.5 мл, 11 ммоль) добавляли по каплям к смеси 4-(5,6-диметоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутановой кислоты (2.15 г, 7.30 ммоль) в DCM (50 мл) и МеОН (50 мл) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 1 ч. Реакционную смесь останавливали НОАс. Реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением с получением метил 4-(5,6-диметоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата, который применяли без очистки на следующей стадии. ЖХ-МС (C15H17O5S) (ES, m/z): 309 [М+Н]+. 1Н ЯМР (499 МГц, DMSO-d6) δ 8.22 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.49 (s, 1H), 3.87 (s, 3H), 3.84 (s, 3H), 3.61 (s, 3H), 3.35-3.30 (m, 2H), 2.71-2.66 (m, 2H).TMS-diazomethane (2.0 M in diethyl ether, 5.5 ml, 11 mmol) was added dropwise to a mixture of 4-(5,6-dimethoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoic acid (2.15 g, 7.30 mmol) in DCM (50 ml) and MeOH (50 ml) at 0°C. The reaction mixture was stirred at 0°C for 1 hour. The reaction mixture was stopped with HOAc. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure to give methyl 4-(5,6-dimethoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate, which was used without purification in the next step. LC-MS (C 15 H 17 O 5 S) (ES, m/z): 309 [M+H] + . 1 H NMR (499 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.22 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.49 (s, 1H), 3.87 (s, 3H), 3.84 (s, 3H), 3.61 ( s, 3H), 3.35-3.30 (m, 2H), 2.71-2.66 (m, 2H).
Стадия 2: метил 4-(6-гидрокси-5-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноат и метил 4-(5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноатStep 2: Methyl 4-(6-hydroxy-5-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate and methyl 4-(5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4 -oxobutanoate
AlCl3 (5.71 г, 42.8 ммоль) добавляли к смеси метил 4-(5,6-диметоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата (2.20 г, 7.13 ммоль) в DCM (250 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 ч. Реакционную смесь охлаждали до 0°С и останавливали водой (50 мл, добавляли по каплям с помощью капельной воронки). Реакционную смесь затем нагревали до комнатной температуры и разбавляли дополнительным DCM (250 мл). Органический слой отделяли, высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (EtOAc/DCM) с получением неразделенной смеси метил 4-(6-гидрокси-5-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата (77%) и метил 4-(5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата (23%). ЖХ-МС (C14H15O5S) (ES, m/z): 295 [М+Н]+.AlCl 3 (5.71 g, 42.8 mmol) was added to a mixture of methyl 4-(5,6-dimethoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate (2.20 g, 7.13 mmol) in DCM (250 ml) at room temperature . The reaction mixture was stirred at room temperature for 24 hours. The reaction mixture was cooled to 0°C and stopped with water (50 ml, added dropwise using a dropping funnel). The reaction mixture was then warmed to room temperature and diluted with additional DCM (250 ml). The organic layer was separated, dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (EtOAc/DCM) to give a single mixture of methyl 4-(6-hydroxy-5-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate (77%) and methyl 4-(5 -hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate (23%). LC-MS (C 14 H 15 O 5 S) (ES, m/z): 295 [M+H] + .
Стадия 3: метил 4-(5-(((бензилокси)карбонил)окси)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноат и метил 4-(6-(((бензилокси)карбонил)окси)-5-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноатStep 3: Methyl 4-(5-(((benzyloxy)carbonyl)oxy)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate and methyl 4-(6-(((benzyloxy)carbonyl)oxy )-5-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate
CBZ-C1 (1.06 мл, 7.42 ммоль) добавляли к смеси метил 4-(6-гидрокси-5-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата (77%) и метил 4-(5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата (23%) (1.82 г, 6.18 ммоль) и TEA (1.29 мл, 9.28 ммоль) в DCM (30 мл) при 0°С. Реакционную смесь затем нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение дополнительных 2 ч. Реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением, и остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (EtOAc/гексан) с получением:CBZ-C1 (1.06 mL, 7.42 mmol) was added to a mixture of methyl 4-(6-hydroxy-5-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate (77%) and methyl 4-(5-hydroxy- 6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate (23%) (1.82 g, 6.18 mmol) and TEA (1.29 ml, 9.28 mmol) in DCM (30 ml) at 0°C. The reaction mixture was then warmed to room temperature and stirred for an additional 2 hours. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure and the residue was purified by silica gel chromatography (EtOAc/hexane) to give:
Пик 1: метил 4-(5-(((бензилокси)карбонил)окси)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноат. ЖХ-МС (C22H21O7S) (ES, m/z): 429 [М+Н]+. 1Н ЯМР (499 МГц, DMSO-d6) δ 8.30 (s, 1Н), 7.89 (s, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.48-7.38 (m, 5H), 5.30 (s, 2H), 3.87 (s, 3H), 3.61 (s, 3H), 3.40-3.33 (m, 2H), 2.69 (t, J=6.4 Гц, 2H).Peak 1: methyl 4-(5-(((benzyloxy)carbonyl)oxy)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate. LC-MS (C 22 H 21 O 7 S) (ES, m/z): 429 [M+H] + . 1H NMR (499 MHz, DMSO- d6 ) δ 8.30 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.48-7.38 (m, 5H), 5.30 (s, 2H), 3.87 (s, 3H), 3.61 (s, 3H), 3.40-3.33 (m, 2H), 2.69 (t, J=6.4 Hz, 2H).
Пик 2: метил 4-(6-(((бензилокси)карбонил)окси)-5-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноат. ЖХ-МС (C22H21O7S) (ES, m/z): 429 [М+Н]+. 1Н ЯМР (499 МГц, DMSO-d6) δ 8.32 (s, 1Н), 8.01 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.47-7.37 (m, 5H), 5.31 (s, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.62 (s, 3H), 3.41-3.36 (m, 2H), 2.74-2.68 (m, 2H).Peak 2: methyl 4-(6-(((benzyloxy)carbonyl)oxy)-5-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate. LC-MS (C 22 H 21 O 7 S) (ES, m/z): 429 [M+H] + . 1H NMR (499 MHz, DMSO- d6 ) δ 8.32 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.47-7.37 (m, 5H), 5.31 (s, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.62 (s, 3H), 3.41-3.36 (m, 2H), 2.74-2.68 (m, 2H).
Стадия 4: метил 4-(6-гидрокси-5-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноатStep 4: Methyl 4-(6-hydroxy-5-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate
1-Метилпиперазин (1.4 мл, 13 ммоль) добавляли к смеси метил 4-(6-(((бензилокси)карбонил)окси)-5-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата (1.84 г, 4.29 ммоль) в DMF (5 мл) и МеОН (5 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь затем нагревали до 50°С и перемешивали в течение дополнительных 30 мин. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и частично концентрировали под пониженным давлением. Сырую смесь очищали с помощью хроматографии на силикагеле (EtOAc/DCM) с получением метил 4-(6-гидрокси-5-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C14H15O5S) (ES, m/z): 295 [М+Н]+. 1Н ЯМР (499 МГц, DMSO-d6) δ 9.88 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.32 (s, 1H), 3.86 (s, 3Н), 3.61 (s, 3Н), 3.33-3.29 (m, 2H), 2.71-2.66 (m, 2H).1-Methylpiperazine (1.4 ml, 13 mmol) was added to a mixture of methyl 4-(6-(((benzyloxy)carbonyl)oxy)-5-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate (1.84 g, 4.29 mmol) in DMF (5 ml) and MeOH (5 ml) at room temperature. The reaction mixture was then heated to 50°C and stirred for an additional 30 minutes. The reaction mixture was cooled to room temperature and partially concentrated under reduced pressure. The crude mixture was purified by silica gel chromatography (EtOAc/DCM) to give methyl 4-(6-hydroxy-5-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate. LC-MS (C 14 H 15 O 5 S) (ES, m/z): 295 [M+H] + . 1 H NMR (499 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.88 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.32 (s, 1H), 3.86 (s, 3H), 3.61 ( s, 3H), 3.33-3.29 (m, 2H), 2.71-2.66 (m, 2H).
Промежуточное соединение 109: трет-Бутил (S)-4-(5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатIntermediate 109: tert-Butyl (S)-4-(5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
Стадия 1: (S)-4-(5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутановая кислотаStep 1: (S)-4-(5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoic acid
К смеси (S)-метил 4-(5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата (3.00 г, 9.73 ммоль) в МеОН (97 мл) и THF (97 мл) добавляли NaOH (5.0 М в воде, 39 мл, 200 ммоль). Смесь нагревали до 50°С в течение 1.5 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и подкисляли до рН~3 с помощью HCl (2.0 М в воде, 100 мл, 200 ммоль). Смесь разбавляли EtOAc и водой. Органический слой отделяли, высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением с получением (S)-4-(5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутановой кислоты. ЖХ-МС (C14H15O5S) (ES, m/z): 295 [М+Н]+. 1H ЯМР (499 МГц, DMSO-d6) δ 12.18 (s, 1H), 9.39 (s, 1Н), 8.17 (s, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.32 (s, 1H), 3.88 (s, 3Н), 3.38 (dd, J=17.3, 8.5 Гц, 1H), 3.07 (dd, J=17.3, 5.3 Гц, 1H), 2.94-2.83 (m, 1H), 1.18 (d, J=7.2 Гц, 3Н).To a mixture of (S)-methyl 4-(5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate (3.00 g, 9.73 mmol) in MeOH (97 ml) and THF ( 97 ml) NaOH (5.0 M in water, 39 ml, 200 mmol) was added. The mixture was heated to 50°C for 1.5 h. The reaction mixture was cooled to room temperature and acidified to pH~3 with HCl (2.0 M in water, 100 ml, 200 mmol). The mixture was diluted with EtOAc and water. The organic layer was separated, dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure to give (S)-4-(5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoic acid. LC-MS (C 14 H 15 O 5 S) (ES, m/z): 295 [M+H] + . 1 H NMR (499 MHz, DMSO-d 6 ) δ 12.18 (s, 1H), 9.39 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.32 (s, 1H), 3.88 ( s, 3H), 3.38 (dd, J=17.3, 8.5 Hz, 1H), 3.07 (dd, J=17.3, 5.3 Hz, 1H), 2.94-2.83 (m, 1H), 1.18 (d, J=7.2 Hz , 3H).
Стадия 2: трет-бутил (3)-4-(5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатStep 2: tert-butyl (3)-4-(5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
2-трет-Бутил-1,3-диизопропилизомочевину (2.3 мл, 10 ммоль) добавляли к смеси (S)-4-(5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутановой кислоты (1.00 г, 3.40 ммоль) в DMF (6.8 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Смесь разбавляли EtOAc и водой. Органический слой отделяли, высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (EtOAc/гексан) с получением трет-бутил (S)-4-(5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C18H23O5S+Na) (ES, m/z): 373 [M+Na]+. 1H ЯМР (499 МГц, DMSO-d6) δ 9.40 (s, 1Н), 8.17 (s, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.31 (s, 1H), 3.88 (s, 3H), 3.36-3.30 (m, 1H), 3.05 (dd, J=17.1, 5.0 Гц, 1H), 2.90-2.79 (m, 1H), 1.35 (s, 9H), 1.16 (d, J=7.2 Гц, 3Н).2-tert-Butyl-1,3-diisopropylisourea (2.3 ml, 10 mmol) was added to the mixture of (S)-4-(5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4 -oxobutanoic acid (1.00 g, 3.40 mmol) in DMF (6.8 ml) at room temperature. The reaction mixture was stirred at room temperature for 2 hours. The mixture was diluted with EtOAc and water. The organic layer was separated, dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (EtOAc/hexane) to give tert-butyl (S)-4-(5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate. LC-MS (C 18 H 23 O 5 S+Na) (ES, m/z): 373 [M+Na] + . 1 H NMR (499 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.40 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.31 (s, 1H), 3.88 (s, 3H), 3.36- 3.30 (m, 1H), 3.05 (dd, J=17.1, 5.0 Hz, 1H), 2.90-2.79 (m, 1H), 1.35 (s, 9H), 1.16 (d, J=7.2 Hz, 3H).
Промежуточное соединение 110: Метил (S)-4-(4,7-дихлор-5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатIntermediate 110: Methyl (S)-4-(4,7-dichloro-5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
NCS (433 мг, 3.24 ммоль) добавляли к смеси (S)-метил 4-(5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата (500 мг, 1.62 ммоль) в DMF (4.0 мл) при 20°С. Реакционную смесь затем нагревали до 40°С и перемешивали в течение 2 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и разбавляли EtOAc (100 мл). Смесь промывали водой (3×25 мл) и рассолом (1×25 мл). Органический слой отделяли, высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (EtOAc/гексан) с последующей дополнительной очисткой с помощью хроматографии на силикагеле (EtOAc/DCM) с получением метил (S)-4-(4,7-дихлор-5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C15H15Cl2O5S) (ES, m/z): 377, 379 [М+Н]+.NCS (433 mg, 3.24 mmol) was added to a mixture of (S)-methyl 4-(5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate (500 mg, 1.62 mmol) in DMF (4.0 ml) at 20°C. The reaction mixture was then heated to 40°C and stirred for 2 hours. The reaction mixture was cooled to room temperature and diluted with EtOAc (100 ml). The mixture was washed with water (3×25 ml) and brine (1×25 ml). The organic layer was separated, dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (EtOAc/hexane) followed by further purification by silica gel chromatography (EtOAc/DCM) to give methyl (S)-4-(4,7-dichloro-5-hydroxy-6-methoxybenzo[ b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate. LC-MS (C 15 H 15 Cl 2 O 5 S) (ES, m/z): 377, 379 [M+H] + .
Промежуточное соединение 111: Метил (S)-4-(5-(3-бром-2,2-диметилпуопокси)-4-фтор-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатIntermediate 111: Methyl (S)-4-(5-(3-bromo-2,2-dimethylpuopoxy)-4-fluoro-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
1,3-Дибром-2,2-диметилпропан (176 мг, 0.766 ммоль) добавляли к смеси (S)-метил 4-(4-фтор-5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата (25 мг, 0.077 ммоль) и карбоната калия (42 мг, 0.31 ммоль) в DMF (0.5 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь затем перемешивали и нагревали до 100°С в течение 24 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли DCM (2 мл) и фильтровали. Фильтрат сразу очищали с помощью хроматографии на силикагеле (EtOAc/гексан) с получением метил (S)-4-(5-(3-бром-2,2-диметилпропокси)-4-фтор-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C20H25BrFO5S) (ES, m/z): 475, 477 [М+Н]+.1,3-Dibromo-2,2-dimethylpropane (176 mg, 0.766 mmol) was added to a mixture of (S)-methyl 4-(4-fluoro-5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)- 2-methyl-4-oxobutanoate (25 mg, 0.077 mmol) and potassium carbonate (42 mg, 0.31 mmol) in DMF (0.5 ml) at room temperature. The reaction mixture was then stirred and heated to 100°C for 24 hours. The reaction mixture was cooled to room temperature, diluted with DCM (2 ml) and filtered. The filtrate was immediately purified by silica gel chromatography (EtOAc/hexane) to give methyl (S)-4-(5-(3-bromo-2,2-dimethylpropoxy)-4-fluoro-6-methoxybenzo[b]thiophene-2 -yl)-2-methyl-4-oxobutanoate. LC-MS (C 20 H 25 BrFO 5 S) (ES, m/z): 475, 477 [M+H] + .
Промежуточное соединение 112: Метил (S)-4-(5-((1-(бромметил)циклопропил)метокси)-4-фтор-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатIntermediate 112: Methyl (S)-4-(5-((1-(bromomethyl)cyclopropyl)methoxy)-4-fluoro-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
1,1-Бис(бромметил)циклопропан (175 мг, 0.766 ммоль) добавляли к смеси (S)-метил 4-(4-фтор-5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата (25 мг, 0.077 ммоль) и карбоната калия (42 мг, 0.31 ммоль) в DMF (0.5 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь затем перемешивали и нагревали до 40°С в течение 4 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли DCM (2 мл) и фильтровали. Фильтрат сразу очищали с помощью хроматографии на силикагеле (EtOAc/гексан) с получением метил (S)-4-(5-((1-(бромметил)циклопропил)метокси)-4-фтор-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C20H23BrFO5S) (ES, m/z): 473, 475 [М+Н]+.1,1-Bis(bromomethyl)cyclopropane (175 mg, 0.766 mmol) was added to a mixture of (S)-methyl 4-(4-fluoro-5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2- methyl 4-oxobutanoate (25 mg, 0.077 mmol) and potassium carbonate (42 mg, 0.31 mmol) in DMF (0.5 ml) at room temperature. The reaction mixture was then stirred and heated to 40°C for 4 hours. The reaction mixture was cooled to room temperature, diluted with DCM (2 ml) and filtered. The filtrate was immediately purified by silica gel chromatography (EtOAc/hexane) to give methyl (S)-4-(5-((1-(bromomethyl)cyclopropyl)methoxy)-4-fluoro-6-methoxybenzo[b]thiophene-2 -yl)-2-methyl-4-oxobutanoate. LC-MS (C 20 H 23 BrFO 5 S) (ES, m/z): 473, 475 [M+H] + .
Промежуточное соединение 113: Метил (S)-4-(5-гидрокси-6-(метоксиметокси)бензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатIntermediate 113: Methyl (S)-4-(5-hydroxy-6-(methoxymethoxy)benzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
Стадия 1: метил (S)-4-(5-бром-6-гидроксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатStep 1: Methyl (S)-4-(5-bromo-6-hydroxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
AlCl3 (3.23 г, 24.2 ммоль) добавляли к смеси метил (S)-4-(5-бром-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата (1.50 г, 4.04 ммоль) в DCM (35 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали и нагревали до 35°С в течение 24 ч. Реакционную смесь охлаждали до 0°С и затем останавливали медленным добавлением воды (10 мл). Смесь затем нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение дополнительных 15 мин. Реакционную смесь разбавляли DCM (250 мл), и органический слой отделяли. Органический слой промывали рассолом (50 мл). Органический слой отделяли, высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (EtOAc/гексан) с получением метил (S)-4-(5-бром-6-гидроксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C14H14BrO4S) (ES, m/z): 357, 359 [М+Н]+.AlCl 3 (3.23 g, 24.2 mmol) was added to a mixture of methyl (S)-4-(5-bromo-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate (1.50 g, 4.04 mmol ) in DCM (35 ml) at room temperature. The reaction mixture was stirred and heated to 35°C for 24 hours. The reaction mixture was cooled to 0°C and then stopped by slowly adding water (10 ml). The mixture was then warmed to room temperature and stirred for an additional 15 minutes. The reaction mixture was diluted with DCM (250 ml) and the organic layer was separated. The organic layer was washed with brine (50 ml). The organic layer was separated, dried over MgSO4, filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (EtOAc/hexane) to give methyl (S)-4-(5-bromo-6-hydroxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate. LC-MS (C 14 H 14 BrO 4 S) (ES, m/z): 357, 359 [M+H] + .
Стадия 2: метил (S)-4-(5-бром-6-(метоксиметокси)бензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатStep 2: Methyl (S)-4-(5-bromo-6-(methoxymethoxy)benzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
МОМ-Cl (0.91 мл, 12 ммоль) добавляли к смеси метил (S)-4-(5-бром-6-гидроксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата (1.42 г, 3.98 ммоль) и основания Хунига (4.2 мл, 24 ммоль) в DCM (25 мл) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 1 ч и затем нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение дополнительных 24 ч. Реакционную смесь останавливали добавлением насыщенного водного NaHCO3 (10 мл) и затем разбавляли EtOAc (250 мл) и водой (50 мл). Органический слой отделяли, промывали рассолом (25 мл), высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (EtOAc/гексан) с получением метил (S)-4-(5-бром-6-(метоксиметокси)бензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C16H18BrO5S) (ES, m/z): 401, 403 [М+Н]+. 1Н ЯМР (499 МГц, DMSO-d6) δ 8.30 (s, 1Н), 8.28 (s, 1H), 7.87 (s, 1H), 5.41 (s, 2H), 3.60 (s, 3H), 3.48-3.42 (m, 1H), 3.45 (s, 3H), 3.22 (dd, J=17.6, 5.1 Гц, 1H), 3.04-2.93 (m, 1H), 1.20 (d, J=7.4 Гц, 3Н).MOM-Cl (0.91 ml, 12 mmol) was added to a mixture of methyl (S)-4-(5-bromo-6-hydroxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate (1.42 g, 3.98 mmol) and Hunig's base (4.2 ml, 24 mmol) in DCM (25 ml) at 0°C. The reaction mixture was stirred at 0°C for 1 hour and then warmed to room temperature and stirred for an additional 24 hours. The reaction mixture was stopped by adding saturated aqueous NaHCO 3 (10 ml) and then diluted with EtOAc (250 ml) and water (50 ml ). The organic layer was separated, washed with brine (25 ml), dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (EtOAc/hexane) to give methyl (S)-4-(5-bromo-6-(methoxymethoxy)benzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate. LC-MS (C 16 H 18 BrO 5 S) (ES, m/z): 401, 403 [M+H] + . 1H NMR (499 MHz, DMSO- d6 ) δ 8.30 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 7.87 (s, 1H), 5.41 (s, 2H), 3.60 (s, 3H), 3.48- 3.42 (m, 1H), 3.45 (s, 3H), 3.22 (dd, J=17.6, 5.1 Hz, 1H), 3.04-2.93 (m, 1H), 1.20 (d, J=7.4 Hz, 3H).
Стадия 3: метил (S)-4-(6-(метоксиметокси)-5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатStep 3: Methyl (S)-4-(6-(methoxymethoxy)-5-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)benzo[b]thiophene-2- yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
Смесь метил (S)-4-(5-бром-6-(метоксиметокси)бензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата (1.57 г, 3.91 ммоль), 4,4,4',4',5,5,5',5'-октаметил-2,2'-би(1,3,2-диоксаборолан) (1.19 г, 4.70 ммоль), Pd2(dba)3 (0.179 г, 0.196 ммоль), трициклогексилфосфина (0.219 г, 0.783 ммоль) и ацетата калия (0.614 г, 6.26 ммоль) дегазировали Ar в течение 5 мин. Диоксан (20 мл) добавляли при комнатной температуре, и полученную в результате смесь дегазировали Ar в течение 5 мин. Реакционную смесь затем нагревали до 90°С и перемешивали в течение 6 ч в атмосфере Ar. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и затем разбавляли EtOAc (50 мл). Суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение 10 мин, и затем фильтровали через целит, промывая EtOAc (50 мл). Фильтрат концентрировали под пониженным давлением с получением метил (S)-4-(6-(метоксиметокси)-5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата, который применяли без очистки на следующей стадии. ЖХ-МС (C22H30BO7S) (ES, m/z): 449 [М+Н]+.Mixture of methyl (S)-4-(5-bromo-6-(methoxymethoxy)benzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate (1.57 g, 3.91 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-octamethyl-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolane) (1.19 g, 4.70 mmol), Pd 2 (dba) 3 (0.179 g, 0.196 mmol), tricyclohexylphosphine (0.219 g, 0.783 mmol) and potassium acetate (0.614 g, 6.26 mmol) were degassed with Ar for 5 min. Dioxane (20 ml) was added at room temperature and the resulting mixture was degassed with Ar for 5 min. The reaction mixture was then heated to 90°C and stirred for 6 hours under Ar atmosphere. The reaction mixture was cooled to room temperature and then diluted with EtOAc (50 ml). The suspension was stirred at room temperature for 10 min, and then filtered through celite, washing with EtOAc (50 ml). The filtrate was concentrated under reduced pressure to give methyl (S)-4-(6-(methoxymethoxy)-5-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)benzo[b] thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate, which was used without purification in the next step. LC-MS (C 22 H 30 BO 7 S) (ES, m/z): 449 [M+H] + .
Стадия 4: метил (S)-4-(5-гидрокси-6-(метоксиметокси)бензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатStep 4: Methyl (S)-4-(5-hydroxy-6-(methoxymethoxy)benzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
Раствор OXONE® (0.20 М в воде, 21 мл, 4.3 ммоль) добавляли к раствору метил (S)-4-(6-(метоксиметокси)-5-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)бензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата (1.75 г, 3.90 ммоль) в ацетоне (50 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 60 мин. Реакционную смесь останавливали добавлением раствора бисульфита натрия (0.81 г, 7.8 ммоль) в воде (5 мл) и затем перемешивали в течение 5 мин. Реакционную смесь разбавляли EtOAc (250 мл). Органический слой отделяли, и водный слой промывали дополнительным объемом EtOAc (2×100 мл). Органические слои объединяли, промывали рассолом (25 мл), высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (EtOAc/гексан) с получением метил (S)-4-(5-гидрокси-6-(метоксиметокси)бензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата, загрязненного побочным продуктом пинакола. Выделенное вещество повторно очищали с помощью хроматографии на силикагеле (EtOAc/DCM) с получением метил (S)-4-(5-гидрокси-6-(метоксиметокси)-бензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C16H19O6S) (ES, m/z): 339 [М+Н]+. 1Н ЯМР (499 МГц, DMSO-d6) δ 9.52 (s, 1Н), 8.20 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.37 (s, 1H), 5.29 (s, 2H), 3.60 (s, 3H), 3.44 (s, 3H), 3.43-3.38 (m, 1H), 3.18 (dd, J=17.5, 5.1 Гц, 1H), 3.03-2.91 (m, 1H), 1.19 (d, J=7.2 Гц, 3Н).A solution of OXONE® (0.20 M in water, 21 ml, 4.3 mmol) was added to a solution of methyl (S)-4-(6-(methoxymethoxy)-5-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2 -dioxaborolan-2-yl)benzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate (1.75 g, 3.90 mmol) in acetone (50 ml) at room temperature. The reaction mixture was stirred at room temperature for 60 minutes. The reaction mixture was quenched by adding a solution of sodium bisulfite (0.81 g, 7.8 mmol) in water (5 ml) and then stirred for 5 min. The reaction mixture was diluted with EtOAc (250 ml). The organic layer was separated and the aqueous layer was washed with additional volume of EtOAc (2×100 ml). The organic layers were combined, washed with brine (25 ml), dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (EtOAc/hexane) to give methyl (S)-4-(5-hydroxy-6-(methoxymethoxy)benzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate, contaminated with pinacol by-product. The isolated material was purified again by silica gel chromatography (EtOAc/DCM) to give methyl (S)-4-(5-hydroxy-6-(methoxymethoxy)-benzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4 -oxobutanoate. LC-MS (C 16 H 19 O 6 S) (ES, m/z): 339 [M+H] + . 1H NMR (499 MHz, DMSO- d6 ) δ 9.52 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.37 (s, 1H), 5.29 (s, 2H), 3.60 ( s, 3H), 3.44 (s, 3H), 3.43-3.38 (m, 1H), 3.18 (dd, J=17.5, 5.1 Hz, 1H), 3.03-2.91 (m, 1H), 1.19 (d, J= 7.2 Hz, 3H).
Промежуточное соединение 114: Метил (S)-4-(4-хлор-5-гидрокси-6-(метоксиметокси)бензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатIntermediate 114: Methyl (S)-4-(4-chloro-5-hydroxy-6-(methoxymethoxy)benzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
NCS (99 мг, 0.74 ммоль) добавляли к смеси метил (S)-4-(5-гидрокси-6-(метоксиметокси)бензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата (250 мг, 0.74 ммоль) в DMF (2.0 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали и нагревали до 40°С в течение 2 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и затем сразу очищали с помощью хроматографии на силикагеле (EtOAc/гексан) с получением метил (S)-4-(4-хлор-5-гидрокси-6-(метоксиметокси)бензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C16H18ClO6S) (ES, m/z): 373 [M+H]+. 1H ЯМР (499 МГц, DMSO-d6) δ 9.83 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.67 (s, 1H), 5.35 (s, 2Н), 3.60 (s, 3Н), 3.51 (dd, J=17.8, 8.7 Гц, 1H), 3.46 (s, 3Н), 3.27 (dd, J=17.8, 5.0 Гц, 1H), 3.02-2.91 (m, 1H), 1.20 (d, J=7.2 Гц, 3Н).NCS (99 mg, 0.74 mmol) was added to a mixture of methyl (S)-4-(5-hydroxy-6-(methoxymethoxy)benzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate (250 mg, 0.74 mmol) in DMF (2.0 ml) at room temperature. The reaction mixture was stirred and heated to 40°C for 2 hours. The reaction mixture was cooled to room temperature and then immediately purified by silica gel chromatography (EtOAc/hexane) to give methyl (S)-4-(4-chloro-5- hydroxy-6-(methoxymethoxy)benzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate. LC-MS (C 16 H 18 ClO 6 S) (ES, m/z): 373 [M+H] + . 1 H NMR (499 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.83 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.67 (s, 1H), 5.35 (s, 2H), 3.60 (s, 3H), 3.51 ( dd, J=17.8, 8.7 Hz, 1H), 3.46 (s, 3H), 3.27 (dd, J=17.8, 5.0 Hz, 1H), 3.02-2.91 (m, 1H), 1.20 (d, J=7.2 Hz , 3H).
Промежуточное соединение 115: Метил (S)-4-(5-(3-бромпропокси)-4-фтор-6-(метоксиметокси)бензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатIntermediate 115: Methyl (S)-4-(5-(3-bromopropoxy)-4-fluoro-6-(methoxymethoxy)benzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
Стадия 1: (S)-4-(4-фтор-5,6-дигидроксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутановая кислотаStep 1: (S)-4-(4-fluoro-5,6-dihydroxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoic acid
Трибромид бора (1.0 M в DCM, 31 мл, 31 ммоль) добавляли к смеси метил (S)-4-(4-фтор-5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата (2.0 г, 6.1 ммоль) в DCM (100 мл) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали и нагревали до 30°С в течение 2 ч. Реакционную смесь охлаждали до 0°С, и реакцию затем останавливали путем добавления по каплям МеОН (10 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение дополнительных 15 мин. Реакционную смесь затем разбавляли водой (100 мл) и дополнительным DCM (500 мл). Органический слой отделяли, промывали рассолом (50 мл), высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением с получением (S)-4-(4-фтор-5,6-дигидроксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутановой кислоты, которую применяли без очистки на следующей стадии. ЖХ-МС (C13H12FO5S) (ES, m/z): 299 [М+Н]+.Boron tribromide (1.0 M in DCM, 31 mL, 31 mmol) was added to a mixture of methyl (S)-4-(4-fluoro-5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl- 4-oxobutanoate (2.0 g, 6.1 mmol) in DCM (100 ml) at 0°C. The reaction mixture was stirred and heated to 30°C for 2 hours. The reaction mixture was cooled to 0°C, and the reaction was then stopped by adding dropwise MeOH (10 ml). The reaction mixture was stirred for an additional 15 minutes. The reaction mixture was then diluted with water (100 ml) and additional DCM (500 ml). The organic layer was separated, washed with brine (50 ml), dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure to give (S)-4-(4-fluoro-5,6-dihydroxybenzo[b]thiophen-2-yl)- 2-methyl-4-oxobutanoic acid, which was used without purification in the next step. LC-MS (C 13 H 12 FO 5 S) (ES, m/z): 299 [M+H] + .
Стадия 2: метил (S)-4-(4-фтор-5,6-дигидроксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатStep 2: Methyl (S)-4-(4-fluoro-5,6-dihydroxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
TMS-диазометан (2.0 М в диэтиловом эфире, 3.1 мл, 6.2 ммоль) добавляли к смеси (S)-4-(4-фтор-5,6-дигидроксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутановой кислоты (1.83 г, 6.14 ммоль) в DCM (10 мл) и МеОН (10 мл) при 0°С. Реакционную смесь затем перемешивали при 0°С в течение 15 мин. Реакционную смесь останавливали НОАс и затем концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (EtOAc/гексан) с получением целевого продукта. Выделенное вещество очищали с помощью хроматографии на силикагеле ([25% EtOH в EtOAc]/гексан) с получением метил (S)-4-(4-фтор-5,6-дигидроксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C14H14FO5S) (ES, m/z): 313 [М+Н]+.TMS-diazomethane (2.0 M in diethyl ether, 3.1 ml, 6.2 mmol) was added to a mixture of (S)-4-(4-fluoro-5,6-dihydroxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4 -oxobutanoic acid (1.83 g, 6.14 mmol) in DCM (10 ml) and MeOH (10 ml) at 0°C. The reaction mixture was then stirred at 0°C for 15 minutes. The reaction mixture was quenched with HOAc and then concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (EtOAc/hexane) to give the expected product. The isolated material was purified by silica gel chromatography ([25% EtOH in EtOAc]/hexane) to give methyl (S)-4-(4-fluoro-5,6-dihydroxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2- methyl 4-oxobutanoate. LC-MS (C 14 H 14 FO 5 S) (ES, m/z): 313 [M+H] + .
Стадия 3: метил (S)-4-(4-фтор-5-гидрокси-6-(метоксиметокси)бензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноат и метил (S)-4-(4-фтор-6-гидрокси-5-(метоксиметокси)бензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатStep 3: Methyl (S)-4-(4-fluoro-5-hydroxy-6-(methoxymethoxy)benzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate and methyl (S)-4- (4-fluoro-6-hydroxy-5-(methoxymethoxy)benzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
MOM-Cl (0.12 мл, 1.6 ммоль) добавляли к смеси метил (S)-4-(4-фтор-5,6-дигидроксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата (460 мг, 1.47 ммоль) и основания Хунига (0.52 мл, 3.0 ммоль) в DCM (25 мл) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 1 ч и затем нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение дополнительных 24 ч. Реакционную смесь останавливали добавлением насыщенного водного NaHCO3 (10 мл) и затем разбавляли EtOAc (250 мл) и водой (50 мл). Органический слой отделяли, промывали рассолом (25 мл), высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (EtOAc/гексан) с получением неразделенной смеси метил (S)-4-(4-фтор-5-гидрокси-6-(метоксиметокси)бензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата и метил (S)-4-(4-фтор-6-гидрокси-5-(метоксиметокси)бензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата. Смесь применяли в следующей реакции без дополнительной очистки. ЖХ-МС (C18H18FO6S) (ES, m/z): 357 [М+Н]+.MOM-Cl (0.12 ml, 1.6 mmol) was added to a mixture of methyl (S)-4-(4-fluoro-5,6-dihydroxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate (460 mg , 1.47 mmol) and Hunig's base (0.52 ml, 3.0 mmol) in DCM (25 ml) at 0°C. The reaction mixture was stirred at 0°C for 1 hour and then warmed to room temperature and stirred for an additional 24 hours. The reaction mixture was stopped by adding saturated aqueous NaHCO 3 (10 ml) and then diluted with EtOAc (250 ml) and water (50 ml ). The organic layer was separated, washed with brine (25 ml), dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (EtOAc/hexane) to give a crude mixture of methyl (S)-4-(4-fluoro-5-hydroxy-6-(methoxymethoxy)benzo[b]thiophen-2-yl)-2- methyl 4-oxobutanoate and methyl (S)-4-(4-fluoro-6-hydroxy-5-(methoxymethoxy)benzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate. The mixture was used in the next reaction without further purification. LC-MS (C 18 H 18 FO 6 S) (ES, m/z): 357 [M+H] + .
Стадия 4: метил (S)-4-(6-(3-бромпропокси)-4-фтор-5-(метоксиметокси)бензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноат и метил (S)-4-(5-(3-бромпропокси)-4-фтор-6-(метоксиметокси)бензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатStep 4: Methyl (S)-4-(6-(3-bromopropoxy)-4-fluoro-5-(methoxymethoxy)benzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate and methyl (S )-4-(5-(3-bromopropoxy)-4-fluoro-6-(methoxymethoxy)benzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
1,3-Дибромпропан (0.58 мл, 5.6 ммоль) добавляли к смеси метил (S)-4-(4-фтор-5-гидрокси-6-(метоксиметокси)бензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата и метил (S)-4-(4-фтор-6-гидрокси-5-(метоксиметокси)бензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата (270 мг, 0.75 ммоль) и карбоната калия (260 мг, 1.9 ммоль) в DMF (2.0 мл) при комнатной температуре. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Реакционную смесь разбавляли EtOAc (250 мл) и водой (50 мл). Органический слой отделяли, промывали рассолом (50 мл), высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (EtOAc/гексаны) с получением смеси региоизомеров. Смесь региоизомеров очищали с помощьюВЭЖХ с обратными фазами (ACN/вода с 0.1% TFA) с получением:1,3-Dibromopropane (0.58 ml, 5.6 mmol) was added to the mixture of methyl (S)-4-(4-fluoro-5-hydroxy-6-(methoxymethoxy)benzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl -4-oxobutanoate and methyl (S)-4-(4-fluoro-6-hydroxy-5-(methoxymethoxy)benzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate (270 mg, 0.75 mmol ) and potassium carbonate (260 mg, 1.9 mmol) in DMF (2.0 ml) at room temperature. The mixture was stirred at room temperature for 18 hours. The reaction mixture was diluted with EtOAc (250 ml) and water (50 ml). The organic layer was separated, washed with brine (50 ml), dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (EtOAc/hexanes) to obtain a mixture of regioisomers. The regioisomer mixture was purified by reverse phase HPLC (ACN/water with 0.1% TFA) to give:
Пик, элюируемый первым, ВЭЖХ: метил (S)-4-(6-(3-бромпропокси)-4-фтор-5-(метоксиметокси)бензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноат. ЖХ-МС (C19H23BrFO6S) (ES, m/z): 477, 479 [М+Н]+.First eluting peak, HPLC: methyl (S)-4-(6-(3-bromopropoxy)-4-fluoro-5-(methoxymethoxy)benzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate . LC-MS (C 19 H 23 BrFO 6 S) (ES, m/z): 477, 479 [M+H] + .
Пик, элюируемый вторым, ВЭЖХ: метил (S)-4-(5-(3-бромпропокси)-4-фтор-6-(метоксиметокси)бензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноат. ЖХ-МС (C19H23BrFO6S) (ES, m/z): 477, 479 [М+Н]+.Peak eluted second, HPLC: methyl (S)-4-(5-(3-bromopropoxy)-4-fluoro-6-(methoxymethoxy)benzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate . LC-MS (C 19 H 23 BrFO 6 S) (ES, m/z): 477, 479 [M+H] + .
Промежуточное_соединение 116: Метил (S)-4-(5-гидрокси-6-(метиламино)бензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатIntermediate 116: Methyl (S)-4-(5-hydroxy-6-(methylamino)benzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
Стадия 1: метил (S)-4-(6-бром-5-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатStep 1: Methyl (S)-4-(6-bromo-5-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
6-Бром-5-метоксибензо[b]тиофен-2-карбонилхлорид (5.96 г, 19.5 ммоль) и CPhos Pd G4 (0.160 г, 0.195 ммоль) объединяли в колбе и дегазировали Ar в течение 5 мин. THF (75 мл) добавляли в атмосфере Ar, и смесь охлаждали до 0°С. Затем добавляли по каплям (R)-(3-метокси-2-метил-3-оксопропил)цинк (II) бромид (0.50 М в THF, 40 мл, 20 ммоль), и полученную в результате смесь перемешивали при 0°С в течение 2 ч и затем нагревали до комнатной температуры. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 дней. Реакционную смесь останавливали насыщенным водным NH4Cl (25 мл) и затем разбавляли EtOAc (500 мл). Органический слой отделяли, промывали рассолом (50 мл), высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (EtOAc/гексаны) с получением метил (S)-4-(6-бром-5-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C15H16BrO4S) (ES, m/z): 371, 373 [М+Н]+. 1Н ЯМР (499 МГц, DMSO-d6) δ 8.39 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 7.65 (s, 1Н), 3.94 (s, 3Н), 3.61 (s, 3Н), 3.52-3.43 (m, 1H), 3.28-3.18 (m, 1H), 3.05-2.95 (m, 1H), 1.23-1.18 (m, 3H).6-Bromo-5-methoxybenzo[b]thiophene-2-carbonyl chloride (5.96 g, 19.5 mmol) and CPhos Pd G4 (0.160 g, 0.195 mmol) were combined in a flask and degassed with Ar for 5 min. THF (75 ml) was added under Ar atmosphere and the mixture was cooled to 0°C. (R)-(3-methoxy-2-methyl-3-oxopropyl)zinc(II) bromide (0.50 M in THF, 40 ml, 20 mmol) was then added dropwise and the resulting mixture was stirred at 0°C in for 2 hours and then warmed to room temperature. The mixture was stirred at room temperature for 3 days. The reaction mixture was quenched with saturated aqueous NH 4 Cl (25 ml) and then diluted with EtOAc (500 ml). The organic layer was separated, washed with brine (50 ml), dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (EtOAc/hexanes) to give methyl (S)-4-(6-bromo-5-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate. LC-MS (C 15 H 16 BrO 4 S) (ES, m/z): 371, 373 [M+H]+. 1 H NMR (499 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.39 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 7.65 (s, 1H), 3.94 (s, 3H), 3.61 (s, 3H), 3.52- 3.43 (m, 1H), 3.28-3.18 (m, 1H), 3.05-2.95 (m, 1H), 1.23-1.18 (m, 3H).
Стадия 2: метил (S)-4-(6-бром-5-гидроксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатStep 2: Methyl (S)-4-(6-bromo-5-hydroxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
AlCl3 (366 мг, 2.75 ммоль) добавляли к смеси метил (S)-4-(6-бром-5-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата (170 мг, 0.458 ммоль) в DCM (35 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали и нагревали до 45°С в течение 3 дней. Реакционную смесь охлаждали до 0°С, и реакцию затем останавливали медленным добавлением воды (10 мл). Смесь затем нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение дополнительных 15 мин. Реакционную смесь разбавляли DCM (250 мл), и органический слой отделяли. Органический слой промывали рассолом (50 мл). Органический слой отделяли, высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (EtOAc/гексан) с получением метил (S)-4-(6-бром-5-гидроксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C14H14BrO4S) (ES, m/z): 357, 359 [М+Н]+.AlCl 3 (366 mg, 2.75 mmol) was added to a mixture of methyl (S)-4-(6-bromo-5-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate (170 mg, 0.458 mmol ) in DCM (35 ml) at room temperature. The reaction mixture was stirred and heated to 45°C for 3 days. The reaction mixture was cooled to 0°C, and the reaction was then stopped by slowly adding water (10 ml). The mixture was then warmed to room temperature and stirred for an additional 15 minutes. The reaction mixture was diluted with DCM (250 ml) and the organic layer was separated. The organic layer was washed with brine (50 ml). The organic layer was separated, dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (EtOAc/hexane) to give methyl (S)-4-(6-bromo-5-hydroxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate. LC-MS (C 14 H 14 BrO 4 S) (ES, m/z): 357, 359 [M+H] + .
Стадия 3: метил (3)-4-(6-бром-5-(метоксиметокси)бензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатStep 3: Methyl (3)-4-(6-bromo-5-(methoxymethoxy)benzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
Основание Хунига (0.44 мл, 2.5 ммоль) добавляли к смеси метил (S)-4-(6-бром-5-гидроксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата (150 мг, 0.42 ммоль) и МОМ-Cl (0.096 мл, 1.3 ммоль) в DCM (5.0 мл) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 1 ч. Реакционную смесь сразу очищали с помощью хроматографии на силикагеле (EtOAc/гексан) с получением метил (S)-4-(6-бром-5-(метоксиметокси)бензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C16H18BrO5S) (ES, m/z): 401, 403 [M+H]+. 1H ЯМР (499 МГц, DMSO-d6) δ 8.42 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 5.38 (s, 2H), 3.61 (s, 3H), 3.53-3.42 (m, 4H), 3.23 (dd, J=17.7, 3.0 Гц, 1H), 3.07-2.95 (m, 1H), 1.21 (d, J=5.0 Гц, 3Н).Hunig's base (0.44 ml, 2.5 mmol) was added to a mixture of methyl (S)-4-(6-bromo-5-hydroxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate (150 mg, 0.42 mmol ) and MOM-Cl (0.096 ml, 1.3 mmol) in DCM (5.0 ml) at 0°C. The reaction mixture was stirred at 0°C for 1 hour. The reaction mixture was immediately purified by chromatography on silica gel (EtOAc/hexane) to give methyl (S)-4-(6-bromo-5-(methoxymethoxy)benzo[b]thiophene -2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate. LC-MS (C 16 H 18 BrO 5 S) (ES, m/z): 401, 403 [M+H] + . 1 H NMR (499 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.42 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 5.38 (s, 2H), 3.61 (s, 3H), 3.53- 3.42 (m, 4H), 3.23 (dd, J=17.7, 3.0 Hz, 1H), 3.07-2.95 (m, 1H), 1.21 (d, J=5.0 Hz, 3H).
Стадия 4: метил (S)-4-(6-((трет-бутоксикарбонил)(метил)амино)-5-(метоксиметокси)бензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатStep 4: Methyl (S)-4-(6-((tert-butoxycarbonyl)(methyl)amino)-5-(methoxymethoxy)benzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
К дегазированной Ar смеси метил (S)-4-(6-бром-5-(метоксиметокси)бензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата (144 мг, 0.359 ммоль), трет-бутилметилкарбамата (71 мг, 0.54 ммоль), Pd2(dba)3 (16 мг, 0.018 ммоль), Xantphos (31 мг, 0.054 ммоль) и карбоната цезия (234 мг, 0.718 ммоль) добавляли диоксан (4.0 мл) при комнатной температуре, дегазируя Ar. Смесь перемешивали в течение 5 мин, дегазируя Ar, затем смесь нагревали до 90°С и перемешивали в атмосфере Ar в течение 18 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и разбавляли EtOAc (20 мл). Полученную в результате суспензию фильтровали через целит. Фильтрат концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (EtOAc/гексан) с получением указанного в заголовке соединения. ЖХ-МС (C22H30NO7S) (ES, m/z): 452 [М+Н]+.To a degassed Ar mixture of methyl (S)-4-(6-bromo-5-(methoxymethoxy)benzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate (144 mg, 0.359 mmol), tert-butylmethylcarbamate (71 mg, 0.54 mmol), Pd 2 (dba) 3 (16 mg, 0.018 mmol), Xantphos (31 mg, 0.054 mmol) and cesium carbonate (234 mg, 0.718 mmol) dioxane (4.0 ml) was added at room temperature, degassing Ar. The mixture was stirred for 5 minutes to degas the Ar, then the mixture was heated to 90°C and stirred under Ar for 18 hours. The reaction mixture was cooled to room temperature and diluted with EtOAc (20 ml). The resulting suspension was filtered through celite. The filtrate was concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (EtOAc/hexane) to give the title compound. LC-MS (C 22 H 30 NO 7 S) (ES, m/z): 452 [M+H] + .
Стадия 5: метил (S)-4-(5-гидрокси-6-(метиламино)бензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатStep 5: Methyl (S)-4-(5-hydroxy-6-(methylamino)benzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
TFA (1.0 мл, 13 ммоль) добавляли к смеси метил (S)-4-(6-((tpet-бутоксикарбонил)(метил)амино)-5-(метоксиметокси)бензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата (18 мг, 0.040 ммоль) в DCM (2.0 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь разбавляли EtOAc (10 мл), и реакцию медленно останавливали добавлением насыщенного водного раствора NaHCO3 (10 мл). Полученную в результате смесь перемешивали в течение 10 мин. Органический слой отделяли, промывали рассолом (5 мл), высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (EtOAc/гексан) с получением метил (S)-4-(5-гидрокси-6-(метиламино)бензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C15H18NO4S) (ES, m/z): 308 [М+Н]+.TFA (1.0 ml, 13 mmol) was added to the mixture of methyl (S)-4-(6-((tpet-butoxycarbonyl)(methyl)amino)-5-(methoxymethoxy)benzo[b]thiophen-2-yl)-2 -methyl-4-oxobutanoate (18 mg, 0.040 mmol) in DCM (2.0 ml) at room temperature. The reaction mixture was stirred at room temperature for 2 hours. The reaction mixture was diluted with EtOAc (10 ml) and the reaction was slowly quenched by adding saturated aqueous NaHCO 3 solution (10 ml). The resulting mixture was stirred for 10 minutes. The organic layer was separated, washed with brine (5 ml), dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (EtOAc/hexane) to give methyl (S)-4-(5-hydroxy-6-(methylamino)benzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate. LC-MS (C 15 H 18 NO 4 S) (ES, m/z): 308 [M+H] + .
Пример 1 (2S,2'S)-4,4'-[бутан-1,4-диилбис(6-метокси-1-бензотиен-5,2-диил)]бис(2-метил-4-оксобутановая кислота) иExample 1 (2S,2'S)-4,4'-[butane-1,4-diylbis(6-methoxy-1-benzothiene-5,2-diyl)]bis(2-methyl-4-oxobutanoic acid) and
Пример 2: (2S,2'S)-4,4'-[пропан-1,3-диилбис(6-метокси-1-бензотиен-5,2-диил)]бис(2-метил-4-оксобутановая кислота)Example 2: (2S,2'S)-4,4'-[propane-1,3-diylbis(6-methoxy-1-benzothiene-5,2-diyl)]bis(2-methyl-4-oxobutanoic acid)
Стадия 1: метил (2S)-4-[6-метокси-5-(проп-2-еп-1-ил)-1-бензотиофен-2-ил]-2-метил-4-оксобутаноатStep 1: Methyl (2S)-4-[6-methoxy-5-(prop-2-ep-1-yl)-1-benzothiophen-2-yl]-2-methyl-4-oxobutanoate
К перемешиваемой смеси метил (2S)-4-(5-бром-6-метокси-1-бензотиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата (120 мг, 0.32 ммоль), бис(дибензилиденацетон)палладия (7.1 мг, 12 мкмоль) и аллилтрибутилолова (120 мкл, 0.39 ммоль) в толуоле (0.49 мл) добавляли три-трет-бутилфосфин (1.0 М в толуоле, 26 мкл, 26 мкмоль) в атмосфере N2. Реакционную смесь нагревали до 65°С в течение 18 ч. После охлаждения до комнатной температуры смесь разбавляли Et2O, и затем добавляли CsF. Неочищенную смесь перемешивали в течение 5 мин при комнатной температуре. Смесь затем фильтровали, и фильтрат сразу очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (EtOAc в гексанах) с получением метил (2S)-4-[6-метокси-5-(проп-2-ен-1-ил)-1-бензотиофен-2-ил]-2-метил-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C18H21O4S) (ES, m/z): 333 [М+Н]+. 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6): δ 8.27 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 6.06-5.94 (m, 1H), 5.07 (d, J=12.5 Гц, 2Н), 3.89 (s, 3Н), 3.59 (s, 3Н), 3.46-3.38 (т, 3Н), 3.19 (dd, J=17.5, 5.0 Гц, 1H), 3.02-2.92 (m, 1H), 1.19 (d, J=7.1 Гц, 3Н).To a stirred mixture of methyl (2S)-4-(5-bromo-6-methoxy-1-benzothiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate (120 mg, 0.32 mmol), palladium bis(dibenzylideneacetone) (7.1 mg, 12 µmol) and allyltributyltin (120 µl, 0.39 mmol) in toluene (0.49 ml) tri-tert-butylphosphine (1.0 M in toluene, 26 µl, 26 µmol) was added under N 2 atmosphere. The reaction mixture was heated to 65°C for 18 hours. After cooling to room temperature, the mixture was diluted with Et 2 O, and then CsF was added. The crude mixture was stirred for 5 minutes at room temperature. The mixture was then filtered and the filtrate was immediately purified by silica gel column chromatography (EtOAc in hexanes) to give methyl (2S)-4-[6-methoxy-5-(prop-2-en-1-yl)-1-benzothiophene -2-yl]-2-methyl-4-oxobutanoate. LC-MS (C 18 H 21 O 4 S) (ES, m/z): 333 [M+H] + . 1 H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ): δ 8.27 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 6.06-5.94 (m, 1H), 5.07 (d, J= 12.5 Hz, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.59 (s, 3H), 3.46-3.38 (t, 3H), 3.19 (dd, J=17.5, 5.0 Hz, 1H), 3.02-2.92 (m, 1H ), 1.19 (d, J=7.1 Hz, 3H).
Стадия 2: диметил (2S,2'S)-4,4'-[бут-2-ен-1,4-диилбис(6-метокси-1-бензотиен-5,2-диил)]бис(2-метил-4-оксобутаноат) и диметил (2S,2'S)-4,4'-[проп-1'-ен-1,3-диилбис(6-метокси-1-бензотиеп-5,2-диил)]бис(2-метил-4-оксобутаноат)Step 2: dimethyl (2S,2'S)-4,4'-[but-2-ene-1,4-diylbis(6-methoxy-1-benzothiene-5,2-diyl)]bis(2-methyl-4 -oxobutanoate) and dimethyl (2S,2'S)-4,4'-[prop-1'-ene-1,3-diylbis(6-methoxy-1-benzothiep-5,2-diyl)]bis(2-methyl -4-oxobutanoate)
К смеси метил (2S)-4-[6-метокси-5-(проп-2-ен-1-ил)-1-бензотиофен-2-ил]-2-метил-4-оксобутаноата (44 мг, 0.13 ммоль) в CH2Cl2 (1.3 мл) добавляли катализатор Граббса 2G (11 мг, 0.013 ммоль) в CH2Cl2 (1.3 мл) одной порцией в атмосфере N2. Реакционную смесь нагревали до 65°С в течение 18 ч. После охлаждения до комнатной температуры смесь сразу очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (EtOAc в гексанах) с получением смеси диметил (2S,2'S)-4,4'-[бут-2-ен-1,4-диилбис(6-метокси-1-бензотиен-5,2-диил)]бис(2-метил-4-оксобутаноат) и диметил (28,2'8)-4,4'-[проп-1-ен-1,3-диилбис(6-метокси-1-бензотиен-5,2-диил)]бис(2-метил-4-оксобутаноат). Характеристики диметил (2S,2'S)-4,4'-[бут-2-ен-1,4-диилбис(6-метокси-1-бензотиен-5,2-диил)]бис(2-метил-4-оксобутаноат): ЖХ-МС (C34H37O8S2) (ES, m/z): 637 [М+Н]+. Характеристики диметил (2S,2'S)-4,4'-[проп-1-ен-1,3-диилбис(6-метокси-1-бензотиен-5,2-диил)]бис(2-метил-4-оксобутаноат): ЖХ-МС (C33H35O8S2) (ES, m/z): 623 [М+Н]+.To a mixture of methyl (2S)-4-[6-methoxy-5-(prop-2-en-1-yl)-1-benzothiophen-2-yl]-2-methyl-4-oxobutanoate (44 mg, 0.13 mmol ) in CH 2 Cl 2 (1.3 ml) Grubbs catalyst 2G (11 mg, 0.013 mmol) was added in CH 2 Cl 2 (1.3 ml) in one portion under an N 2 atmosphere. The reaction mixture was heated to 65°C for 18 hours. After cooling to room temperature, the mixture was immediately purified using silica gel column chromatography (EtOAc in hexanes) to give a mixture of dimethyl (2S,2'S)-4,4'-[but-2 -ene-1,4-diylbis(6-methoxy-1-benzothiene-5,2-diyl)]bis(2-methyl-4-oxobutanoate) and dimethyl (28,2'8)-4,4'-[ prop-1-ene-1,3-diylbis(6-methoxy-1-benzothiene-5,2-diyl)]bis(2-methyl-4-oxobutanoate). Characteristics of dimethyl (2S,2'S)-4,4'-[but-2-ene-1,4-diylbis(6-methoxy-1-benzothiene-5,2-diyl)]bis(2-methyl-4-oxobutanoate ): LC-MS (C 34 H 37 O 8 S 2 ) (ES, m/z): 637 [M+H] + . Characteristics of dimethyl (2S,2'S)-4,4'-[prop-1-ene-1,3-diylbis(6-methoxy-1-benzothiene-5,2-diyl)]bis(2-methyl-4-oxobutanoate ): LC-MS (C 33 H 35 O 8 S 2 ) (ES, m/z): 623 [M+H] + .
Стадия 3: диметил ('2S,2'S)-4,4'-[бутан-1,4-диилбис(6-метокси-1-бензотиен-5,2-диил)]бис(2-метил-4-оксобутаноат) и диметил (2S,2'S)-4,4'-[пропан-1,3-диилбис(6-метокси-1-бензотиен-5,2-диил)]бис(2-метил-4-оксобутаноат)Step 3: Dimethyl ('2S,2'S)-4,4'-[butane-1,4-diylbis(6-methoxy-1-benzothiene-5,2-diyl)]bis(2-methyl-4-oxobutanoate) and dimethyl (2S,2'S)-4,4'-[propane-1,3-diylbis(6-methoxy-1-benzothiene-5,2-diyl)]bis(2-methyl-4-oxobutanoate)
К смеси диметил (2S,2'S)-4,4'-[бут-2-ен-1,4-диилбис(6-метокси-1-бензотиен-5,2-диил)]бис(2-метил-4-оксобутаноат) и диметил (2S,2'S)-4,4'-[проп-1-ен-1,3-диилбис(6-метокси-1-бензотиен-5,2-диил)]бис(2-метил-4-оксобутаноат) (57.0 мг, смесь ~ 3/2 по данным 1H-ЯМР) в EtOAc (0.5 мл) в атмосфере N2 добавляли 10% Pd/C (6.0 мг, 5.4 мкмоль) одной порцией при комнатной температуре. Реакционную смесь дегазировали и снова заполняли H2 (три раза) и перемешивали в атмосфере H2 (баллонный) в течение 18 ч при комнатной температуре. Смесь затем концентрировали под пониженным давлением с получением неочищенной смеси диметил (2S,2'S)-4,4'-[бутан-1,4-диилбис(6-метокси-1-бензотиен-5,2-диил)]бис(2-метил-4-оксобутаноат) и диметил (2S,2'S)-4,4'-[пропан-1,3-диилбис(6-метокси-1-бензотиен-5,2-диил)]бис(2-метил-4-оксобутаноат). Смесь применяли без дополнительной очистки или определения характеристик.To a mixture of dimethyl (2S,2'S)-4,4'-[but-2-ene-1,4-diylbis(6-methoxy-1-benzothiene-5,2-diyl)]bis(2-methyl-4- oxobutanoate) and dimethyl (2S,2'S)-4,4'-[prop-1-ene-1,3-diylbis(6-methoxy-1-benzothiene-5,2-diyl)]bis(2-methyl-4 -oxobutanoate) (57.0 mg, mixture ~ 3/2 according to 1 H-NMR) in EtOAc (0.5 ml) under N 2 atmosphere was added 10% Pd/C (6.0 mg, 5.4 µmol) in one portion at room temperature. The reaction mixture was degassed and refilled with H 2 (three times) and stirred under H 2 (balloon) for 18 hours at room temperature. The mixture was then concentrated under reduced pressure to give a crude mixture of dimethyl (2S,2'S)-4,4'-[butane-1,4-diylbis(6-methoxy-1-benzothiene-5,2-diyl)]bis(2- methyl 4-oxobutanoate) and dimethyl (2S,2'S)-4,4'-[propane-1,3-diylbis(6-methoxy-1-benzothiene-5,2-diyl)]bis(2-methyl-4 -oxobutanoate). The mixture was used without further purification or characterization.
Стадия 4: (2S,2'S)-4,4'-[бутан-1,4-диилбис(6-метокси-1-бензотиен-5,2-диил))'бис(2-метил-4-оксобутановая кислота) и (2S,2'S)-4,4'-[пуопаи-1,3-диилбис(6-метокси-1-бензотиен-5,2-диил)]бис(2-метил-4-оксобутановая кислота) IStep 4: (2S,2'S)-4,4'-[butane-1,4-diylbis(6-methoxy-1-benzothiene-5,2-diyl))'bis(2-methyl-4-oxobutanoic acid) and (2S,2'S)-4,4'-[puopai-1,3-diylbis(6-methoxy-1-benzothiene-5,2-diyl)]bis(2-methyl-4-oxobutanoic acid) I
К смеси диметил (28,2'8)-4,4'-[бутан-1,4-диилбис(6-метокси-1-бензотиен-5,2-диил)]бис(2-метил-4-оксобутаноат) и диметил (2S,2'S)-4,4'-[пропан-1,3-диилбис(6-метокси-1-бензотиен-5,2-диил)]бис(2-метил-4-оксобутаноат) (57 мг) в THF (1.0 мл), МеОН (1.0 мл) и воде (0.20 мл) добавляли LiOH (26 мг, 1.1 ммоль) одной порцией при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч и затем реакцию останавливали водной HCl (2 н., 0.52 мл). Смесь разбавляли DMSO, и полученную в результате смесь фильтровали. Фильтрат очищали с помощью RP-HPLC [колонка С18, вода (0.1% TFA)-CH3CN] с получением (2S,2'S)-4,4'-[бутан-1,4-диилбис(6-метокси-1-бензотиен-5,2-диил)]бис(2-метил-4-оксобутановая кислота) и (2S,2'S)-4,4'-[пропан-1,3-диилбис(6-метокси-1-бензотиен-5,2-диил)]бис(2-метил-4-оксобутановая кислота).To a mixture of dimethyl (28,2'8)-4,4'-[butane-1,4-diylbis(6-methoxy-1-benzothiene-5,2-diyl)]bis(2-methyl-4-oxobutanoate) and dimethyl (2S,2'S)-4,4'-[propane-1,3-diylbis(6-methoxy-1-benzothiene-5,2-diyl)]bis(2-methyl-4-oxobutanoate) (57 mg ) in THF (1.0 ml), MeOH (1.0 ml) and water (0.20 ml), LiOH (26 mg, 1.1 mmol) was added in one portion at room temperature. The reaction mixture was stirred at room temperature for 1 h and then the reaction was quenched with aqueous HCl (2 N, 0.52 ml). The mixture was diluted with DMSO, and the resulting mixture was filtered. The filtrate was purified by RP-HPLC [C18 column, water (0.1% TFA)-CH3CN] to give (2S,2'S)-4,4'-[butane-1,4-diylbis(6-methoxy-1-benzothiene- 5,2-diyl)]bis(2-methyl-4-oxobutanoic acid) and (2S,2'S)-4,4'-[propane-1,3-diylbis(6-methoxy-1-benzothiene-5,2 -diyl)]bis(2-methyl-4-oxobutanoic acid).
Данные характеристики для (2S,2'S)-4,4'-[бутан-1,4-диилбис(6-метокси-1-бензотиен-5,2-диил)]бис(2-метил-4-оксобутановая кислота): ЖХ-МС (C32H34O8S2Na) (ES, m/z): 633 [M+Na]+. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-A): δ 12.20 (br, 2Н), 8.21 (s, 2Н), 7.72 (s, 2Н), 7.57 (s, 2Н), 3.87 (s, 6Н), 3.39 (dd, J=17.5, 8.6 Гц, 2Н), 3.07 (dd, J=17.5, 5.0 Гц, 2Н), 2.94-2.84 (m, 2Н), 2.69 (br, 4Н), 1.62 (br, 4Н), 1.18 (d, J=7.1 Гц, 6Н).Characteristics data for (2S,2'S)-4,4'-[butane-1,4-diylbis(6-methoxy-1-benzothiene-5,2-diyl)]bis(2-methyl-4-oxobutanoic acid): LC-MS (C 32 H 34 O 8 S 2 Na) (ES, m/z): 633 [M+Na] + . 1 H NMR (500 MHz, DMSO-A): δ 12.20 (br, 2H), 8.21 (s, 2H), 7.72 (s, 2H), 7.57 (s, 2H), 3.87 (s, 6H), 3.39 ( dd, J=17.5, 8.6 Hz, 2H), 3.07 (dd, J=17.5, 5.0 Hz, 2H), 2.94-2.84 (m, 2H), 2.69 (br, 4H), 1.62 (br, 4H), 1.18 (d, J=7.1 Hz, 6H).
Данные характеристики для (2S,2'S)-4,4'-[пропан-1,3-диилбис(6-метокси-1-бензотиен-5,2-диил)]бис(2-метил-4-оксобутановая кислота): ЖХ-МС (C31H32O8S2Na) (ES, m/z): 619 [M+Na]+. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-J6): δ 12.21 (br, 2H), 8.23 (s, 2H), 7.76 (s, 2H), 7.59 (s, 2H), 3.88 (s, 6H), 3.40 (dd, J=17.5, 8.6 Гц, 2H), 3.08 (dd, J=17.5, 5.0 Гц, 2H), 2.94-2.85 (m, 2H), 2.71 (t, J=7.1 Гц, 4H), 1.91 (pentet, J=7.1 Гц, 2H), 1.18 (d, J=7.1 Гц, 6H).Characteristics data for (2S,2'S)-4,4'-[propane-1,3-diylbis(6-methoxy-1-benzothiene-5,2-diyl)]bis(2-methyl-4-oxobutanoic acid): LC-MS (C 31 H 32 O 8 S 2 Na) (ES, m/z): 619 [M+Na] + . 1H NMR (500 MHz, DMSO-J6): δ 12.21 (br, 2H), 8.23 (s, 2H), 7.76 (s, 2H), 7.59 (s, 2H), 3.88 (s, 6H), 3.40 ( dd, J=17.5, 8.6 Hz, 2H), 3.08 (dd, J=17.5, 5.0 Hz, 2H), 2.94-2.85 (m, 2H), 2.71 (t, J=7.1 Hz, 4H), 1.91 (pentet , J=7.1 Hz, 2H), 1.18 (d, J=7.1 Hz, 6H).
Пример 3: (S)-4-(5-(3-(2-(3-карбоксипропаноил)-6-метоксибензо[b]тиофен-5-ил)пропокси)-6-метокситиено[3,2-b]пиридин-2-ил)-2-метил-4-оксобутановая кислотаExample 3: (S)-4-(5-(3-(2-(3-carboxypropanoyl)-6-methoxybenzo[b]thiophen-5-yl)propoxy)-6-methoxythieno[3,2-b]pyridine -2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoic acid
В виалу 1 драм с завинчивающейся крышкой с магнитной мешалкой загружали (S)-метил 4-(5-хлор-6-метокситиено[3,2-b]пиридин-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноат (60 мг, 0.18 ммоль), трет-бутил 4-(5-(3-гидроксипропил)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноат (76 мг, 0.20 ммоль), RockPhos Pd G3 (7.7 мг, 9.2 мкмоль) и CS2CO3 (89 мг, 0.28 ммоль) и закрывали крышкой с септой. Виалу 3 раза откачивали и снова заполняли N2. Добавляли толуол (0.61 мл), и суспензию перемешивали на вортексе, обрабатывали ультразвуком и затем нагревали до 110°С с перемешиванием в течение 2.25 ч. Реакцию затем оставляли охлаждаться до комнатной температуры. Добавляли TFA (0.60 мл, 7.8 ммоль), и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1.5 ч. Смесь затем концентрировали под пониженным давлением. К полученному в результате остатку добавляли THF (1.0 мл) и МеОН (0.50 мл). Добавляли водный NaOH (2.0 М, 0.50 мл, 1.0 ммоль), и полученную в результате смесь нагревали до 40°С в течение 5 ч. После охлаждения до комнатной температуры добавляли дополнительный водный NaOH (2.0 М, 0.50 мл, 1.0 ммоль), и смесь нагревали до 40°С в течение дополнительных 2.5 ч. Реакцию затем оставляли охлаждаться до комнатной температуры и концентрировали под пониженным давлением. Добавляли DMSO (1.0 мл), и полученную в результате смесь фильтровали через шприцевой фильтр. Фильтрат затем очищали с помощью RP-HPLC (С 18, градиент MeCN/вода, с NH4OH). Фракцию, содержащую продукт, концентрировали под пониженным давлением и затем дополнительно очищали с помощью RP-HPLC (С 18, градиент MeCN/вода, с TFA) с получением (S)-4-(5-(3-(2-(3-карбоксипропаноил)-6-метоксибензо[b]тиофен-5-ил)пропокси)-6-метокситиено[3,2-b]пиридин-2-ил)-2-метил-4-оксобутановой кислоты. ЖХ-МС (C29H30NO9S2) (ES, m/z): 600 [М+Н]+. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 12.18 (s, 2Н), 8.22 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 4.39 (t, J=6.3 Гц, 2H), 3.90 (s, 3H), 3.87 (s, 3H), 3.43 (dd, J=17.5, 8.6 Гц, 1H), 3.29-3.22 (m, 2H), 3.15-3.06 (m, 1H), 2.91-2.80 (m, 3H), 2.63-2.56 (m, 2H), 2.18-2.06 (m, 2H), 1.17 (d, J=7.2 Гц, 3Н).(S)-Methyl 4-(5-chloro-6-methoxythieno[3,2-b]pyridin-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate (60 mg) was loaded into a 1 dram screw cap vial with a magnetic stirrer , 0.18 mmol), tert-butyl 4-(5-(3-hydroxypropyl)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate (76 mg, 0.20 mmol), RockPhos Pd G3 (7.7 mg, 9.2 µmol) and CS 2 CO 3 (89 mg, 0.28 mmol) and closed with a lid with a septum. The vial was pumped out 3 times and filled again with N2 . Toluene (0.61 ml) was added and the suspension was vortexed, sonicated and then heated to 110°C with stirring for 2.25 hours. The reaction was then allowed to cool to room temperature. TFA (0.60 mL, 7.8 mmol) was added and the mixture was stirred at room temperature for 1.5 h. The mixture was then concentrated under reduced pressure. THF (1.0 ml) and MeOH (0.50 ml) were added to the resulting residue. Aqueous NaOH (2.0 M, 0.50 mL, 1.0 mmol) was added and the resulting mixture was heated to 40°C for 5 h. After cooling to room temperature, additional aqueous NaOH (2.0 M, 0.50 mL, 1.0 mmol) was added and the mixture was heated to 40°C for an additional 2.5 hours. The reaction was then allowed to cool to room temperature and concentrated under reduced pressure. DMSO (1.0 ml) was added and the resulting mixture was filtered through a syringe filter. The filtrate was then purified by RP-HPLC (C 18, MeCN/water gradient, with NH 4 OH). The product containing fraction was concentrated under reduced pressure and then further purified by RP-HPLC (C18, MeCN/water gradient, with TFA) to give (S)-4-(5-(3-(2-(3- carboxypropanoyl)-6-methoxybenzo[b]thiophen-5-yl)propoxy)-6-methoxythieno[3,2-b]pyridin-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoic acid. LC-MS (C 29 H 30 NO 9 S 2 ) (ES, m/z): 600 [M+H] + . 1 H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 12.18 (s, 2H), 8.22 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.60 ( s, 1H), 4.39 (t, J=6.3 Hz, 2H), 3.90 (s, 3H), 3.87 (s, 3H), 3.43 (dd, J=17.5, 8.6 Hz, 1H), 3.29-3.22 (m , 2H), 3.15-3.06 (m, 1H), 2.91-2.80 (m, 3H), 2.63-2.56 (m, 2H), 2.18-2.06 (m, 2H), 1.17 (d, J=7.2 Hz, 3H ).
Примеры с 4 по 23 и 81-83, как показано в Таблице 11 ниже, или могут быть получены в соответствии со способами, аналогичными описанным в Примере 3 выше, с применением подходящих исходных материалов, описанных выше в Способах получения или Промежуточных соединениях, или получены из коммерческих источников.Examples 4 to 23 and 81-83, as shown in Table 11 below, or can be prepared in accordance with methods similar to those described in Example 3 above, using suitable starting materials described above in Preparation Methods or Intermediates, or prepared from commercial sources.
Пример 24: 4-(5-(3-(2-(3-цианопропаноил)-6-метоксибензо[b]тиофен-5-ил)пропил)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутановая кислотаExample 24: 4-(5-(3-(2-(3-cyanopropanoyl)-6-methoxybenzo[b]thiophen-5-yl)propyl)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4- oxobutanoic acid
Стадия 1: трет-бутил 4-(5-(3-(2-(3-цианопропаноил)-6-метоксибензо[b]тиофен-5-ил)пропил)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутапоатStep 1: tert-butyl 4-(5-(3-(2-(3-cyanopropanoyl)-6-methoxybenzo[b]thiophen-5-yl)propyl)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl) -4-oxobutapoate
В виалу добавляли трет-бутил 4-(5-(3-бромпропил)-6-метоксибензо[Ь]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноат (45 мг, 0.10 ммоль), 4-(5-бром-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаннитрил (33 мг, 0.10 ммоль), NaI (7.6 мг, 0.051 ммоль), комплекс никель (II) бромид этиленгликоль диметиловый эфир (9.4 мг, 0.031 ммоль), Mn (22 мг, 0.41 ммоль) и 4,4'-диметокси-2,2-бипиридин (6.6 мг, 0.031 ммоль). В виалу добавляли DMPU (1.0 мл) с последующим добавлением 5% об./об. растворов DMPU Ру (82 мкл, 0.051 ммоль) и TMS-Cl (78 мкл, 0.031 ммоль). Виалу дегазировали Ar в течение 5 мин. Смесь нагревали до 90°С в течение 2 ч. Через 2 ч смесь оставляли охлаждаться до комнатной температуры и сразу очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (ACN/H2O с 0.1% TFA) с получением трет-бутил 4-(5-(3-(2-(3-цианопропаноил)-6-метоксибензо[b]тиофен-5-ил)пропил)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C33H35NO6S2Na) (ES, m/z): 628 [M+Na]+.Tert-butyl 4-(5-(3-bromopropyl)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate (45 mg, 0.10 mmol), 4-(5-bromo-6- methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanenitrile (33 mg, 0.10 mmol), NaI (7.6 mg, 0.051 mmol), nickel (II) complex ethylene glycol bromide dimethyl ether (9.4 mg, 0.031 mmol), Mn ( 22 mg, 0.41 mmol) and 4,4'-dimethoxy-2,2-bipyridine (6.6 mg, 0.031 mmol). DMPU (1.0 ml) was added to the vial followed by 5% v/v. solutions of DMPU Ru (82 µl, 0.051 mmol) and TMS-Cl (78 µl, 0.031 mmol). The vial was degassed with Ar for 5 min. The mixture was heated to 90°C for 2 hours. After 2 hours, the mixture was allowed to cool to room temperature and immediately purified using preparative HPLC (ACN/H 2 O with 0.1% TFA) to give tert-butyl 4-(5-(3 -(2-(3-cyanopropanoyl)-6-methoxybenzo[b]thiophen-5-yl)propyl)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate. LC-MS (C 33 H 35 NO 6 S 2 Na) (ES, m/z): 628 [M+Na] + .
Стадия 2: 4-(5-(3-(2-(3-цианопропапоил)-6-метоксибензо[b]тиофен-5-ил)пропил)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутановая кислотаStep 2: 4-(5-(3-(2-(3-cyanopropapoyl)-6-methoxybenzo[b]thiophen-5-yl)propyl)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4- oxobutanoic acid
К смеси трет-бутил 4-(5-(3-(2-(3-цианопропаноил)-6-метоксибензо[b]тиофен-5-ил)пропил)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата (8.5 мг, 0.014 ммоль), МеОН (500 мкл) и ACN (500 мкл) добавляли NaOH (5.0 М в воде, 0.56 мкл, 0.28 ммоль). Смесь нагревали до 40°С в течение 4 ч. После охлаждения до комнатной температуры смесь очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (ACN/H2O с 0.1% TFA) с получением 4-(5-(3-(2-(3-цианопропаноил)-6-метоксибензо[b]тиофен-5-ил)пропил)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутановой кислоты. ЖХ-МС (C29H28NO6S2) (ES, m/z): 550 [М+Н]+. 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 12.20 (s, 1H), 8.30-8.20 (m, 2Н), 7.82-7.75 (m, 2Н), 7.65-7.56 (m, 2Н), 3.89 (s, 6Н), 3.54-3.46 (m, 2Н), 2.82-2.76 (m, 2Н), 2.76-2.58 (m, 8Н), 1.99-1.86 (m, 2Н).To a mixture of tert-butyl 4-(5-(3-(2-(3-cyanopropanoyl)-6-methoxybenzo[b]thiophen-5-yl)propyl)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)- 4-oxobutanoate (8.5 mg, 0.014 mmol), MeOH (500 µl) and ACN (500 µl) were added with NaOH (5.0 M in water, 0.56 µl, 0.28 mmol). The mixture was heated to 40°C for 4 hours. After cooling to room temperature, the mixture was purified using preparative HPLC (ACN/H 2 O with 0.1% TFA) to obtain 4-(5-(3-(2-(3-cyanopropanoyl )-6-methoxybenzo[b]thiophen-5-yl)propyl)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoic acid. LC-MS (C 29 H 28 NO 6 S 2 ) (ES, m/z): 550 [M+H] + . 1H NMR (500 MHz, DMSO- d6 ) δ 12.20 (s, 1H), 8.30-8.20 (m, 2H), 7.82-7.75 (m, 2H), 7.65-7.56 (m, 2H), 3.89 (s , 6H), 3.54-3.46 (m, 2H), 2.82-2.76 (m, 2H), 2.76-2.58 (m, 8H), 1.99-1.86 (m, 2H).
Пример 25: 4,4-(5,5-(пропан-1,3-Диил)бис(6-метоксибензо[b]тиофен-5,2-диил))бис(4-оксобутановая кислота)Example 25: 4,4-(5,5-(propane-1,3-Diyl)bis(6-methoxybenzo[b]thiophene-5,2-diyl))bis(4-oxobutanoic acid)
К смеси этил 4-(6-метокси-5-(3-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)пропил)бензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата (69 мг, 0.15 ммоль), этил 4-(5-бром-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата (84 мг, 0.23 ммоль), PdCl2(dppf)-CH2Cl2 (25 мг, 0.030 ммоль) и CS2CO3 (195 мг, 0.600 ммоль) добавляли диоксан (0.80 мл) и воду (0.2 мл). Реакцию нагревали до 100°С в течение 18 ч. После охлаждения до комнатной температуры смесь затем фильтровали, и остаточные вещества промывали диоксаном. Фильтрат концентрировали под пониженным давлением. Полученный в результате остаток затем очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (ACN/H2O с 0.1% NH4OH) с получением 4,4-(5,5-(пропан-1,3-диил)бис(6-метоксибензо[b]тиофен-5,2-диил))бис(4-оксобутановая кислота). ЖХ-МС (C29H27O8S2) (ES, m/z): 566 [М-Н]-. 1H ЯМР (600 МГц, DMSO-d6) δ 8.11 (s, 2Н), 7.68 (s, 2Н), 7.50 (s, 2Н), 3.82 (s, 6Н), 3.16-3.09 (m, 4Н), 2.66 (t, J=6.6 Гц, 4Н), 2.40 (s, 4Н), 1.93-1.83 (m, 2Н).To a mixture of ethyl 4-(6-methoxy-5-(3-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)propyl)benzo[b]thiophen-2-yl) -4-oxobutanoate (69 mg, 0.15 mmol), ethyl 4-(5-bromo-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate (84 mg, 0.23 mmol), PdCl 2 (dppf)- CH 2 Cl 2 (25 mg, 0.030 mmol) and CS 2 CO 3 (195 mg, 0.600 mmol) dioxane (0.80 ml) and water (0.2 ml) were added. The reaction was heated to 100°C for 18 hours. After cooling to room temperature, the mixture was then filtered and the residuals were washed with dioxane. The filtrate was concentrated under reduced pressure. The resulting residue was then purified by preparative HPLC (ACN/H 2 O with 0.1% NH 4 OH) to give 4,4-(5,5-(propan-1,3-diyl)bis(6-methoxybenzo[b ]thiophene-5,2-diyl))bis(4-oxobutanoic acid). LC-MS (C 29 H 27 O 8 S 2 ) (ES, m/z): 566 [M-H] - . 1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.11 (s, 2H), 7.68 (s, 2H), 7.50 (s, 2H), 3.82 (s, 6H), 3.16-3.09 (m, 4H), 2.66 (t, J=6.6 Hz, 4H), 2.40 (s, 4H), 1.93-1.83 (m, 2H).
Пример 26: 4-(4-(3-(2-(3-карбоксипропаноил)-5-метоксибензо[b]тиофен-6-ил)пропил)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутановая кислотаExample 26: 4-(4-(3-(2-(3-carboxypropanoyl)-5-methoxybenzo[b]thiophen-6-yl)propyl)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4- oxobutanoic acid
Стадия 1: трет-бутил 4-(5-метокси-6-(3-(6-метокси-2-(4-метокси-4-оксобутаноил)бензо[b]тиофен-4-ил)пропил)бензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноатStep 1: tert-butyl 4-(5-methoxy-6-(3-(6-methoxy-2-(4-methoxy-4-oxobutanoyl)benzo[b]thiophen-4-yl)propyl)benzo[b] thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate
В виалу добавляли трет-бутил 4-(6-(3-бромпропил)-5-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноат (72 мг, 0.16 ммоль), метил 4-(4-бром-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноат (58 мг, 0.16 ммоль), NaI (12 мг, 0.082 ммоль), комплекс никель (II) бромид этиленгликоль диметиловый эфир (15 мг, 0.049 ммоль), Mn (36 мг, 0.65 ммоль) и 4,4-диметокси-2,2-бипиридин (11 мг, 0.049 ммоль). В виалу добавляли DMPU (1.6 мл) с последующим добавлением 5% об./об. растворов DMPU Ру (130 мкл, 0.082 ммоль) и TMS-Cl (130 мкл, 0.049 ммоль). Виалу дегазировали Ar в течение 5 мин. Смесь нагревали до 90°С в течение 1 ч. Через 1 ч смесь оставляли охлаждаться до комнатной температуры и затем разбавляли EtOAc и водой. Органический слой отделяли, высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Полученную в результате смесь применяли без дополнительной очистки или определения характеристик.Tert-butyl 4-(6-(3-bromopropyl)-5-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate (72 mg, 0.16 mmol), methyl 4-(4-bromo-6) was added to the vial -methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate (58 mg, 0.16 mmol), NaI (12 mg, 0.082 mmol), nickel (II) complex ethylene glycol bromide dimethyl ether (15 mg, 0.049 mmol), Mn (36 mg, 0.65 mmol) and 4,4-dimethoxy-2,2-bipyridine (11 mg, 0.049 mmol). DMPU (1.6 ml) was added to the vial followed by 5% v/v. solutions of DMPU Ru (130 μl, 0.082 mmol) and TMS-Cl (130 μl, 0.049 mmol). The vial was degassed with Ar for 5 min. The mixture was heated to 90°C for 1 hour. After 1 hour, the mixture was allowed to cool to room temperature and then diluted with EtOAc and water. The organic layer was separated, dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The resulting mixture was used without further purification or characterization.
Стадия 2: 4-(4-(3-(2-(3-карбоксипропаноил)-5-метоксибензо[b]тиофен-6-ил)пропил)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутановая кислотаStep 2: 4-(4-(3-(2-(3-carboxypropanoyl)-5-methoxybenzo[b]thiophen-6-yl)propyl)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4- oxobutanoic acid
К смеси трет-бутил 4-(5-метокси-6-(3-(6-метокси-2-(4-метокси-4-оксобутаноил)бензо[b]тиофен-4-ил)пропил)бензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата (100 мг, 0.16 ммоль) и МеОН (1.6 мл) добавляли NaOH (5 М в воде, 0.65 мл, 3.3 ммоль), и смесь нагревали до 50°С в течение 1 ч. После охлаждения до комнатной температуры смесь очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (ACN/H2O с 0.1% TFA) с получением 4-(4-(3-(2-(3-карбоксипропаноил)-5-метоксибензо[b]тиофен-6-ил)пропил)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутановой кислоты. ЖХ-МС (C29H29O8S2) (ES, m/z): 569 [М+Н]+. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 12.23 (s, 2Н), 8.27 (s, 1H), 8.25 (s, 1Н), 7.82 (s, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.44 (s, 1H), 6.93 (s, 1H), 3.89-3.79 (m, 6H), 3.34-3.19 (m, 4H), 3.03 (t, J=7.3 Гц, 2H), 2.82-2.74 (m, 2H), 2.66-2.55 (m, 4H), 2.06-1.96 (m, 2H).To a mixture of tert-butyl 4-(5-methoxy-6-(3-(6-methoxy-2-(4-methoxy-4-oxobutanoyl)benzo[b]thiophen-4-yl)propyl)benzo[b]thiophene -2-yl)-4-oxobutanoate (100 mg, 0.16 mmol) and MeOH (1.6 mL), NaOH (5 M in water, 0.65 mL, 3.3 mmol) was added and the mixture was heated to 50°C for 1 h. cooling to room temperature, the mixture was purified using preparative HPLC (ACN/H 2 O with 0.1% TFA) to obtain 4-(4-(3-(2-(3-carboxypropanoyl)-5-methoxybenzo[b]thiophene-6- yl)propyl)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoic acid. LC-MS (C 29 H 29 O 8 S 2 ) (ES, m/z): 569 [M+H] + . 1 H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 12.23 (s, 2H), 8.27 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.44 ( s, 1H), 6.93 (s, 1H), 3.89-3.79 (m, 6H), 3.34-3.19 (m, 4H), 3.03 (t, J=7.3 Hz, 2H), 2.82-2.74 (m, 2H) , 2.66-2.55 (m, 4H), 2.06-1.96 (m, 2H).
Примеры с 27 по 31, как показано в Таблице 12 ниже, или могут быть получены в соответствии со способами, аналогичными описанным в Примере 26 выше, с применением подходящих исходных материалов, описанных выше в Способах получения или Промежуточных соединениях, или получены из коммерческих источников.Examples 27 to 31, as shown in Table 12 below, or can be prepared in accordance with methods similar to those described in Example 26 above, using suitable starting materials described above in Preparation Methods or Intermediates, or obtained from commercial sources.
Пример 32: 4-(5-(3-((2-(3-карбоксипропаноил)-4-фтор-6-метоксибензо[b]тиофен-5-ил)окси)пропил)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутановая кислотаExample 32: 4-(5-(3-((2-(3-carboxypropanoyl)-4-fluoro-6-methoxybenzo[b]thiophen-5-yl)oxy)propyl)-6-methoxybenzo[b]thiophene- 2-yl)-4-oxobutanoic acid
К смеси этил 4-(5-(3-бромпропил)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата (83 мг, 0.20 ммоль), этил 4-(4-фтор-5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата (78 мг, 0.24 ммоль) и K2CO3 (28 мг, 0.20 ммоль) добавляли ACN (1 мл). Реакцию нагревали до 65°С в течение 18 ч. После охлаждения до комнатной температуры смесь разбавляли ACN (4 мл) и фильтровали. Фильтрат затем концентрировали под пониженным давлением. Затем добавляли THF (2.0 мл), МеОН (0.50 мл), воду (1.0 мл) и LiOH (48 мг, 2.0 ммоль), и смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 2 ч. Затем реакцию останавливали АсОН (0.40 мл), и смесь концентрировали под пониженным давлением. Полученный в результате остаток затем очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (ACN/H2O с 0.1% TFA) с получением 4-(5-(3-((2-(3-карбоксипропаноил)-4-фтор-6-метоксибензо[b]тиофен-5-ил)окси)пропил)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутановой кислоты. ЖХ-МС (C29H28FO9S2) (ES, m/z): 603 [М+Н]+. 1Н ЯМР (600 МГц, DMSO-d6) δ 8.28 (s, 1Н), 8.20 (s, 1H), 7.73 (d, J=13.7 Гц, 1H), 7.55 (d,.J=11.4 Гц, 2Н), 4.06-4.00 (m, 2Н), 3.90-3.81 (m, 6Н), 3.28 (t, J=6.1 Гц, 2Н), 3.23 (t, J=6.2 Гц, 2Н), 2.82 (s, 2Н), 2.58-2.56 (m, 4Н), 1.95-193 (m, 2Н).To a mixture of ethyl 4-(5-(3-bromopropyl)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate (83 mg, 0.20 mmol), ethyl 4-(4-fluoro-5-hydroxy- 6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate (78 mg, 0.24 mmol) and K 2 CO 3 (28 mg, 0.20 mmol) were added with ACN (1 ml). The reaction was heated to 65°C for 18 hours. After cooling to room temperature, the mixture was diluted with ACN (4 ml) and filtered. The filtrate was then concentrated under reduced pressure. THF (2.0 ml), MeOH (0.50 ml), water (1.0 ml) and LiOH (48 mg, 2.0 mmol) were then added and the mixture was left stirring at room temperature for 2 hours. The reaction was then quenched with AcOH (0.40 ml), and the mixture was concentrated under reduced pressure. The resulting residue was then purified by preparative HPLC (ACN/H 2 O with 0.1% TFA) to give 4-(5-(3-((2-(3-carboxypropanoyl)-4-fluoro-6-methoxybenzo[b ]thiophen-5-yl)oxy)propyl)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoic acid. LC-MS (C 29 H 28 FO 9 S 2 ) (ES, m/z): 603 [M+H] + . 1H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.28 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.73 (d, J=13.7 Hz, 1H), 7.55 (d,.J=11.4 Hz, 2H ), 4.06-4.00 (m, 2H), 3.90-3.81 (m, 6H), 3.28 (t, J=6.1 Hz, 2H), 3.23 (t, J=6.2 Hz, 2H), 2.82 (s, 2H) , 2.58-2.56 (m, 4H), 1.95-193 (m, 2H).
Примеры с 33 по 40 и с 84 по 157, как показано в Таблице 13 ниже, или могут быть получены в соответствии со способами, аналогичными описанным в Примере 32 выше, с применением подходящих исходных материалов, описанных выше в Способах получения или Промежуточных соединениях, или получены из коммерческих источников.Examples 33 to 40 and 84 to 157, as shown in Table 13 below, or can be prepared in accordance with methods similar to those described in Example 32 above, using suitable starting materials described above in Preparation Methods or Intermediates, or obtained from commercial sources.
Пример 41: (2S)-4-(5-[3-({2-[(3S)-3-карбоксибутаноил]-6-метокси-1-бензотиофен-5-ил}окси)пропил]-6-метокси-1-бензотиофен-2-ил}-2-метил-4-оксобутановая кислотаExample 41: (2S)-4-(5-[3-({2-[(3S)-3-carboxybutanoyl]-6-methoxy-1-benzothiophen-5-yl}oxy)propyl]-6-methoxy- 1-Benzothiophen-2-yl}-2-methyl-4-oxobutanoic acid
К смеси метил (2S)-4-(5-бром-6-метокси-1-бензотиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата (107 мг, 0.287 ммоль), RockPhos Pd G3 (11 мг, 0.013 ммоль) и Cs2CO3 (128 мг, 0.392 ммоль) в атмосфере N2 добавляли смесь метил (2S)-4-[5-(3-гидрокси-пропил)-6-метокси-1-бензотиофен-2-ил]-2-метил-4-оксобутаноата (92 мг, 0.26 ммоль) в толуоле (870 мкл). Реакционную смесь продували N2 в течение 5 мин и затем нагревали до 110°С в течение 2 ч. После охлаждения до комнатной температуры добавляли THF (1.0 мл), МеОН (1.0 мл) и воду (0.25 мл) с последующим добавлением LiOH⋅Н2О (157 мг, 3.75 ммоль) одной порцией при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч, затем реакцию останавливали водной HCl (2.0 н., 1.35 мл). Добавляли DMSO, и полученную в результате смесь фильтровали. Фильтрат очищали с помощью ВЭЖХ с обратными фазами [колонка С18, вода (0.1% TFA)-CH3CN] с получением (2S)-4-{5-[3-({2-[(3S)-3-карбоксибутаноил]-6-метокси-1-бензотиофен-5-ил}окси)пропил]-6-метокси-1-бензотиофен-2-ил}-2-метил-4-оксобутановой кислоты. ЖХ-МС (C31H32O9S2Na) (ES, m/z): 635 [M+Na]+. 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6): δ 12.19 (br, 2Н), 8.23 (s, 1H), 8.16 (s, 1Н), 7.77 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.44 (s, 1H), 4.05 (d, J=6.2 Гц, 2H), 3.88 (s, 3H), 3.88 (s, 3H), 3.06 (dt, J=17.5, 4.3 Гц, 2H), 2.94-2.80 (m, 4H), 2.10 (pentet, J=6.9 Гц, 2H), 1.17 (d, J=7.1 Гц, 6H).To a mixture of methyl (2S)-4-(5-bromo-6-methoxy-1-benzothiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate (107 mg, 0.287 mmol), RockPhos Pd G3 (11 mg, 0.013 mmol) and Cs 2 CO 3 (128 mg, 0.392 mmol) in an atmosphere of N 2 , a mixture of methyl (2S)-4-[5-(3-hydroxypropyl)-6-methoxy-1-benzothiophen-2-yl] was added -2-methyl-4-oxobutanoate (92 mg, 0.26 mmol) in toluene (870 µl). The reaction mixture was purged with N 2 for 5 min and then heated to 110°C for 2 h. After cooling to room temperature, THF (1.0 ml), MeOH (1.0 ml) and water (0.25 ml) were added, followed by the addition of LiOH⋅H 2 O (157 mg, 3.75 mmol) in one serving at room temperature. The reaction mixture was stirred at room temperature for 4 hours, then the reaction was stopped with aqueous HCl (2.0 N, 1.35 ml). DMSO was added and the resulting mixture was filtered. The filtrate was purified by reverse phase HPLC [C18 column, water (0.1% TFA)-CH 3 CN] to give (2S)-4-{5-[3-({2-[(3S)-3-carboxybutanoyl] -6-methoxy-1-benzothiophen-5-yl}oxy)propyl]-6-methoxy-1-benzothiophen-2-yl}-2-methyl-4-oxobutanoic acid. LC-MS (C 3 1H 3 2O 9 S 2 Na) (ES, m/z): 635 [M+Na] + . 1H NMR (500 MHz, DMSO- d6 ): δ 12.19 (br, 2H), 8.23 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.44 (s, 1H), 4.05 (d, J=6.2 Hz, 2H), 3.88 (s, 3H), 3.88 (s, 3H), 3.06 (dt, J=17.5, 4.3 Hz, 2H), 2.94-2.80 (m, 4H), 2.10 (pentet, J=6.9 Hz, 2H), 1.17 (d, J=7.1 Hz, 6H).
Примеры 42, 158 и 159, как показано в Таблице 14 ниже, или могут быть получены в соответствии со способами, аналогичными описанным в Примере 41 выше, с применением подходящих исходных материалов, описанных выше в Способах получения или Промежуточных соединениях, или получены из коммерческих источников.Examples 42, 158 and 159, as shown in Table 14 below, or can be prepared in accordance with methods similar to those described in Example 41 above using suitable starting materials described in Preparation Methods or Intermediates above, or obtained from commercial sources .
Пример 43: (S)-4-(5-(3-((2-(3-карбоксипропаноил)бензо[b]тиофен-6-ил)окси)пропокси)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутановая кислотаExample 43: (S)-4-(5-(3-((2-(3-carboxypropanoyl)benzo[b]thiophen-6-yl)oxy)propoxy)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl )-2-methyl-4-oxobutanoic acid
Стадия 1: метил (S)-4-(6-метокси-5-(3-((2-(4-метокси-4-оксобутаноил)бензо[b]тиофен-6-ил)окси)пропокси)бензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатStep 1: methyl (S)-4-(6-methoxy-5-(3-((2-(4-methoxy-4-oxobutanoyl)benzo[b]thiophen-6-yl)oxy)propoxy)benzo[b ]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
Смесь (S)-метил 4-(5-(3-гидроксипропокси)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата (16 мг, 0.044 ммоль), метил 4-(6-гидроксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата (14 мг, 0.052 ммоль), (Е)-диазин-1,2-диилбис(пиперидин-1-илметанон) (28 мг, 0.11 ммоль) и Ph3P (29 мг, 0.11 ммоль) в THF (1.0 мл) дегазировали Ar и затем перемешивали при 20°С в течение 18 ч. Реакционную смесь затем разбавляли DMSO (1.0 мл) и фильтровали. Смесь затем сразу очищали с помощью ВЭЖХ с обратными фазами (ACN в воде, 0.1% TFA, С-18 неподвижная фаза) с получением метил (S)-4-(6-метокси-5-(3-((2-(4-метокси-4-оксобутаноил)бензо[b]тиофен-6-ил)окси)пропокси)бензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C31H33O9S2) (ES, m/z): 613 [М+Н]+.A mixture of (S)-methyl 4-(5-(3-hydroxypropoxy)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate (16 mg, 0.044 mmol), methyl 4-(6 -hydroxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate (14 mg, 0.052 mmol), (E)-diazin-1,2-diylbis(piperidin-1-ylmethanone) (28 mg, 0.11 mmol) and Ph 3 P (29 mg, 0.11 mmol) in THF (1.0 ml) was degassed with Ar and then stirred at 20°C for 18 hours. The reaction mixture was then diluted with DMSO (1.0 ml) and filtered. The mixture was then immediately purified by reverse phase HPLC (ACN in water, 0.1% TFA, C-18 stationary phase) to give methyl (S)-4-(6-methoxy-5-(3-((2-(4 -methoxy-4-oxobutanoyl)benzo[b]thiophen-6-yl)oxy)propoxy)benzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate. LC-MS (C 31 H 33 O 9 S 2 ) (ES, m/z): 613 [M+H] + .
Стадия 2: (S)-4-(5-(3-((2-(3-карбоксипропапоил)бензо[b]тиофен-6-ил)окси)пропокси)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутановая кислотаStep 2: (S)-4-(5-(3-((2-(3-carboxypropapoyl)benzo[b]thiophen-6-yl)oxy)propoxy)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl )-2-methyl-4-oxobutanoic acid
NaOH (5.0 M в воде, 21 мкл, 0.11 ммоль) добавляли к смеси метил (S)-4-(6-метокси-5-(3-((2-(4-метокси-4-оксобутаноил)бензо[b]тиофен-6-ил)окси)пропокси)бензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата (6.3 мг, 10 мкмоль) в МеОН (1.0 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали и нагревали до 50°С в течение 2 ч. Неочищенную реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, останавливали TFA (16 мкл, 0.21 ммоль), разбавляли DMSO (1.0 мл) и затем фильтровали. Фильтрат затем сразу очищали с помощью ВЭЖХ с обратными фазами (ACN в воде, 0.1% TFA, С-18 неподвижная фаза) с получением (S)-4-(5-(3-((2-(3-карбоксипропаноил)бензо[b]тиофен-6-ил)окси)пропокси)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутановой кислоты. ЖХ-МС (C29H29O9S2) (ES, m/z): 585 [М+Н]+. 1Н ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 12.22 (s, 2Н), 8.33 (s, 1Н), 8.19 (s, 1H), 7.94 (d, J=7.8 Гц, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.15 (d, J=7.6 Гц, 1H), 4.34-4.18 (m, 4H), 3.89 (s, 3H), 3.44-3.25 (m, 3H), 3.13-3.05 (m, 1H), 2.95-2.87 (m, 1H), 2.66-2.60 (m, 2H), 2.34-2.27 (m, 2H), 1.25-1.14 (m, 3H).NaOH (5.0 M in water, 21 μL, 0.11 mmol) was added to the mixture of methyl (S)-4-(6-methoxy-5-(3-((2-(4-methoxy-4-oxobutanoyl)benzo[b] thiophen-6-yl)oxy)propoxy)benzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate (6.3 mg, 10 µmol) in MeOH (1.0 ml) at room temperature. The reaction mixture was stirred and heated to 50°C for 2 hours. The crude reaction mixture was cooled to room temperature, stopped with TFA (16 μl, 0.21 mmol), diluted with DMSO (1.0 ml) and then filtered. The filtrate was then immediately purified by reverse phase HPLC (ACN in water, 0.1% TFA, C-18 stationary phase) to give (S)-4-(5-(3-((2-(3-carboxypropanoyl)benzo[ b]thiophen-6-yl)oxy)propoxy)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoic acid. LC-MS (C 29 H 29 O 9 S 2 ) (ES, m/z): 585 [M+H] + . 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 12.22 (s, 2H), 8.33 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.94 (d, J=7.8 Hz, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.15 (d, J=7.6 Hz, 1H), 4.34-4.18 (m, 4H), 3.89 (s, 3H), 3.44-3.25 (m , 3H), 3.13-3.05 (m, 1H), 2.95-2.87 (m, 1H), 2.66-2.60 (m, 2H), 2.34-2.27 (m, 2H), 1.25-1.14 (m, 3H).
Примеры с 44 по 59 и 160, как показано в Таблице 15 ниже, или могут быть получены в соответствии со способами, аналогичными описанным в Примере 43 выше, с применением подходящих исходных материалов, описанных выше в Способах получения или Промежуточных соединениях, или получены из коммерческих источников.Examples 44 to 59 and 160, as shown in Table 15 below, or can be prepared in accordance with methods similar to those described in Example 43 above, using suitable starting materials described above in Preparation Methods or Intermediates, or obtained from commercial sources.
Пример 60: (2S)-4-{5-[2-({2-[(3S)-3-карбоксибутаноил]-6-метокси-1-бензотиофен-5-ил}амино)этил]-6-метокси-1-бензотиофен-2-ил}-2-метил-4-оксобутановая кислотаExample 60: (2S)-4-{5-[2-({2-[(3S)-3-carboxybutanoyl]-6-methoxy-1-benzothiophen-5-yl}amino)ethyl]-6-methoxy- 1-Benzothiophen-2-yl}-2-methyl-4-oxobutanoic acid
Стадия 1: метил (2S)-4-{6-метокси-5-[2-({6-метокси-2-[(3S)-4-метокси-3-метил-4-оксобутаноил]-1-бензотиофен-5-ил}амино)этил]-1-бензотиофен-2-ил}-2-метил-4-оксобутапоатStep 1: methyl (2S)-4-{6-methoxy-5-[2-({6-methoxy-2-[(3S)-4-methoxy-3-methyl-4-oxobutanoyl]-1-benzothiophene- 5-yl}amino)ethyl]-1-benzothiophen-2-yl}-2-methyl-4-oxobutapoate
К смеси метил (2S)-4-(5-бром-6-метокси-1-бензотиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата (54 мг, 0.14 ммоль), рацемического BINAP Pd G3 (12 мг, 0.012 ммоль) и Cs2CO3 (117 мг, 0.360 ммоль) в атмосфере N2 добавляли суспензию метил (2S)-4-[5-(2-аминоэтил)-6-метокси-1-бензотиофен-2-ил]-2-метил-4-оксобутаноата (54 мг, 0.120 ммоль) в толуоле (1.6 мл). Реакционную смесь продували N2 в течение 45 мин, затем нагревали до 110°С в течение 12 ч. После охлаждения до комнатной температуры смесь очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (EtOAc в гексанах) с получением метил (2S)-4-{6-метокси-5-[2-({6-метокси-2-[(3S)-4-метокси-3-метил-4-оксобутаноил]-1-бензотиофен-5-ил}амино)этил]-1-бензотиофен-2-ил}-2-метил-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C32H35NO8S2Na) (ES, m/z): 648 [M+Na]+.To a mixture of methyl (2S)-4-(5-bromo-6-methoxy-1-benzothiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate (54 mg, 0.14 mmol), racemic BINAP Pd G3 (12 mg, 0.012 mmol) and Cs 2 CO 3 (117 mg, 0.360 mmol) in an atmosphere of N 2 was added a suspension of methyl (2S)-4-[5-(2-aminoethyl)-6-methoxy-1-benzothiophen-2-yl]- 2-methyl-4-oxobutanoate (54 mg, 0.120 mmol) in toluene (1.6 ml). The reaction mixture was purged with N 2 for 45 min, then heated to 110°C for 12 h. After cooling to room temperature, the mixture was purified by silica gel column chromatography (EtOAc in hexanes) to give methyl (2S)-4-{6 -methoxy-5-[2-({6-methoxy-2-[(3S)-4-methoxy-3-methyl-4-oxobutanoyl]-1-benzothiophen-5-yl}amino)ethyl]-1-benzothiophene -2-yl}-2-methyl-4-oxobutanoate. LC-MS (C 32 H 35 NO 8 S 2 Na) (ES, m/z): 648 [M+Na] + .
Стадия 2: (2S)-4-{5-[2-({2-[(3S)-3-карбоксибутаноил]-6-метокси-1-бензотиофен-5-ил}амино)этил]-6-метокси-1-бензотиофен-2-ил}-2-метил-4-оксобутановая кислотаStep 2: (2S)-4-{5-[2-({2-[(3S)-3-carboxybutanoyl]-6-methoxy-1-benzothiophen-5-yl}amino)ethyl]-6-methoxy- 1-Benzothiophen-2-yl}-2-methyl-4-oxobutanoic acid
К смеси метил (2S)-4-{6-метокси-5-[2-({6-метокси-2-[(3S)-4-метокси-3-метил-4-оксобутаноил]-1-бензотиофен-5-ил}амино)этил]-1-бензотиофен-2-ил}-2-метил-4-оксобутаноата (20 мг, 0.03 ммоль) в THF (280 мкл), МеОН (280 мкл) и воде (70 мкл) добавляли LiOH⋅Н2О (13 мг, 0.32 ммоль) одной порцией при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч, затем реакцию останавливали водной HCl (2 н., 170 мкл). Смесь разбавляли DMSO, и полученную в результате смесь фильтровали. Фильтрат очищали с помощью ВЭЖХ с обратными фазами [колонка С18, вода (0.1% TFA)-CH3CN] с получением (2S)-4-{5-[2-({2-[(3S)-3-карбоксибутаноил]-6-метокси-1-бензотиофен-5-ил}амино)этил]-6-метокси-1-бензотиофен-2-ил}-2-метил-4-оксобутановой кислоты. ЖХ-МС (C30H32NO8S2) (ES, m/z): 598 [М+Н]+. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6): δ 12.12 (br, 2Н), 8.27 (s, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.44 (s, 1H), 7.07 (s, 1H), 3.98 (s, 3Н), 3.90 (s, 3Н), 3.41 (dd, J=17.5, 8.6 Гц, 2Н), 3.36 (t, J=6.5 Гц, 2Н), 3.14-2.96 (m, 4Н), 2.94-2.84 (m, 2Н), 1.18 (d, J=7.1 Гц, 6Н).To a mixture of methyl (2S)-4-{6-methoxy-5-[2-({6-methoxy-2-[(3S)-4-methoxy-3-methyl-4-oxobutanoyl]-1-benzothiophene-5 -yl}amino)ethyl]-1-benzothiophen-2-yl}-2-methyl-4-oxobutanoate (20 mg, 0.03 mmol) in THF (280 µl), MeOH (280 µl) and water (70 µl) was added LiOH⋅H 2 O (13 mg, 0.32 mmol) in one portion at room temperature. The reaction mixture was stirred at room temperature for 2 h, then the reaction was stopped with aqueous HCl (2 N, 170 μl). The mixture was diluted with DMSO, and the resulting mixture was filtered. The filtrate was purified by reverse phase HPLC [C18 column, water (0.1% TFA)-CH 3 CN] to give (2S)-4-{5-[2-({2-[(3S)-3-carboxybutanoyl] -6-methoxy-1-benzothiophen-5-yl}amino)ethyl]-6-methoxy-1-benzothiophen-2-yl}-2-methyl-4-oxobutanoic acid. LC-MS (C 30 H 32 NO 8 S 2 ) (ES, m/z): 598 [M+H] + . 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ 12.12 (br, 2H), 8.27 (s, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.44 ( s, 1H), 7.07 (s, 1H), 3.98 (s, 3H), 3.90 (s, 3H), 3.41 (dd, J=17.5, 8.6 Hz, 2H), 3.36 (t, J=6.5 Hz, 2H ), 3.14-2.96 (m, 4H), 2.94-2.84 (m, 2H), 1.18 (d, J=7.1 Hz, 6H).
Пример 61, как показано в Таблице 16 ниже, или может быть получен в соответствии со способами, аналогичными описанным в Примере 60 выше, с применением подходящих исходных материалов, описанных выше в Способах получения или Промежуточных соединениях, или получен из коммерческих источников.Example 61, as shown in Table 16 below, or can be prepared in accordance with methods similar to those described in Example 60 above, using suitable starting materials described in the Preparation Methods or Intermediates above, or obtained from commercial sources.
Пример 62: 4,4-((пропан-1,3-диилбис(окси))бис(4-фтор-6-метоксибензо[b]тиофен-5,2-диил))бис(4-оксобутановая кислота)Example 62: 4,4-((propane-1,3-diylbis(oxy))bis(4-fluoro-6-methoxybenzo[b]thiophene-5,2-diyl))bis(4-oxobutanoic acid)
К смеси этил 4-(4-фтор-5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата (0.024 г, 0.073 ммоль), этил 4-(5-(3-бромпропокси)-4-фтор-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноата (0.025 г, 0.056 ммоль) и CS2CO3 (0.091 г, 0.28 ммоль) добавляли ACN (1.0 мл). Реакционную смесь затем нагревали до 65°С в течение 1 ч. После охлаждения до комнатной температуры смесь разбавляли THF, фильтровали, и фильтрат концентрировали под пониженным давлением. К полученному в результате остатку добавляли THF (1.0 мл), МеОН (0.20 мл), воду (0.5 мл) и LiOH (0.013 г, 0.56 ммоль). Смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 2 ч. Затем реакцию останавливали АсОН, и смесь концентрировали под пониженным давлением. Полученный в результате остаток очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (ACN/H2O с 0.1% TFA) с получением 4,4-((пропан-1,3-диилбис(окси))бис(4-фтор-6-метоксибензо[b]тиофен-5,2-диил))бис(4-оксобутановая кислота). ЖХ-МС (C29H27F2O10S2) (ES, m/z): 637 [М+Н]+. 1Н ЯМР (600 МГц, DMSO-d6) δ 8.26 (s, 2Н), 7.55 (s, 2Н), 4.31-4.24 (m, 4Н), 3.99-3.80 (m, 6Н), 3.34-3.32 (m, 4Н), 2.60 (q, J=6.4 Гц, 4Н), 2.09 (dt, J=11.5, 5.8 Гц, 2Н).To a mixture of ethyl 4-(4-fluoro-5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate (0.024 g, 0.073 mmol), ethyl 4-(5-(3-bromopropoxy)- 4-fluoro-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate (0.025 g, 0.056 mmol) and CS 2 CO 3 (0.091 g, 0.28 mmol) was added to ACN (1.0 ml). The reaction mixture was then heated to 65°C for 1 hour. After cooling to room temperature, the mixture was diluted with THF, filtered, and the filtrate was concentrated under reduced pressure. THF (1.0 ml), MeOH (0.20 ml), water (0.5 ml) and LiOH (0.013 g, 0.56 mmol) were added to the resulting residue. The mixture was left stirring at room temperature for 2 hours. The reaction was then quenched with AcOH and the mixture was concentrated under reduced pressure. The resulting residue was purified by preparative HPLC (ACN/H 2 O with 0.1% TFA) to give 4,4-((propane-1,3-diylbis(oxy))bis(4-fluoro-6-methoxybenzo[b ]thiophene-5,2-diyl))bis(4-oxobutanoic acid). LC-MS (C 29 H 27 F 2 O 10 S 2 ) (ES, m/z): 637 [M+H] + . 1H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.26 (s, 2H), 7.55 (s, 2H), 4.31-4.24 (m, 4H), 3.99-3.80 (m, 6H), 3.34-3.32 (m , 4H), 2.60 (q, J=6.4 Hz, 4H), 2.09 (dt, J=11.5, 5.8 Hz, 2H).
Примеры с 63 по 65 и с 161 по 164, как показано в Таблице 17 ниже, или могут быть получены в соответствии со способами, аналогичными описанным в Примере 62 выше, с применением подходящих исходных материалов, описанных выше в Способах получения или Промежуточных соединениях, или получены из коммерческих источников.Examples 63 to 65 and 161 to 164, as shown in Table 17 below, or can be prepared in accordance with methods similar to those described in Example 62 above, using suitable starting materials described above in Preparation Methods or Intermediates, or obtained from commercial sources.
Пример 66: (R)-4-(5-(2-((2-((S)-3-карбоксибутаноил)-4-фтор-6-метоксибензо[b]тиофен-5-ил)окси)этокси)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутановая кислотаExample 66: (R)-4-(5-(2-((2-((S)-3-carboxybutanoyl)-4-fluoro-6-methoxybenzo[b]thiophen-5-yl)oxy)ethoxy)- 6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoic acid
(R)-метил 4-(5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноат (0.20 М в DMF, 500 мкл, 0.11 ммоль) добавляли к перемешиваемой суспензии метил (S)-4-(5-(2-хлорэтокси)-4-фтор-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата (0.20 М в DMF, 500 мкл, 0.11 ммоль) и K2CO3 (30 мг, 0.2 ммоль). Реакционную смесь нагревали до 100°С в течение 18 ч. После охлаждения до комнатной температуры добавляли DMSO (500 мкл), и реакционную смесь фильтровали. Добавляли воду (500 мкл) с последующим добавлением LiOH⋅H2O (30 мг, 0.7 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Смесь фильтровали, и вещество очищали с помощью колоночной хроматографии с обращенными фазами, колонка С-18 (ACN/вода + 0.1% TFA) с получением (R)-4-(5-(2-((2-((S)-3-карбоксибутаноил)-4-фтор-6-метоксибензо[b]тиофен-5-ил)окси)этокси)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутановой кислоты. ЖХ-МС (C30H29FO10S2Na) (ES, m/z): 655 [M+Na]+. 1H ЯМР (DMSO-d6) δ: 12.18 (s, 2H), 8.31 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.58 (s, 2H), 7.50 (s, 1H), 4.50-4.41 (m, 2H), 4.36-4.30 (m, 2H), 3.88 (s, 3H), 3.75 (s, 3H), 3.46 (dd, J=18, 9 Гц, 1H), 3.40 (dd, J=17, 9 Гц, 1H), 3.10 (ddd, J=22, 18, 5 Гц, 2H), 2.95-2.81 (m, 2H), 1.24-1.14 (m, 6H).(R)-methyl 4-(5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate (0.20 M in DMF, 500 μL, 0.11 mmol) was added to the stirred suspension of methyl ( S)-4-(5-(2-chloroethoxy)-4-fluoro-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate (0.20 M in DMF, 500 µl, 0.11 mmol) and K 2 CO 3 (30 mg, 0.2 mmol). The reaction mixture was heated to 100°C for 18 hours. After cooling to room temperature, DMSO (500 μl) was added and the reaction mixture was filtered. Water (500 µl) was added followed by LiOH⋅H 2 O (30 mg, 0.7 mmol) and the reaction mixture was stirred at room temperature for 18 hours. The mixture was filtered and the material was purified using reverse phase column chromatography, column C -18 (ACN/water + 0.1% TFA) to give (R)-4-(5-(2-((2-((S)-3-carboxybutanoyl)-4-fluoro-6-methoxybenzo[b]thiophene -5-yl)oxy)ethoxy)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoic acid. LC-MS (C 30 H 29 FO 10 S 2 Na) (ES, m/z): 655 [M+Na] + . 1 H NMR (DMSO-d 6 ) δ: 12.18 (s, 2H), 8.31 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.58 (s, 2H), 7.50 (s, 1H), 4.50-4.41 ( m, 2H), 4.36-4.30 (m, 2H), 3.88 (s, 3H), 3.75 (s, 3H), 3.46 (dd, J=18, 9 Hz, 1H), 3.40 (dd, J=17, 9 Hz, 1H), 3.10 (ddd, J=22, 18, 5 Hz, 2H), 2.95-2.81 (m, 2H), 1.24-1.14 (m, 6H).
Примеры с 67 по 74 и с 165 по 171, как показано в Таблице 18 ниже, или могут быть получены в соответствии со способами, аналогичными описанным в Примере 66 выше, с применением подходящих исходных материалов, описанных выше в Способах получения или Промежуточных соединениях, или получены из коммерческих источников.Examples 67 to 74 and 165 to 171, as shown in Table 18 below, or can be prepared in accordance with methods similar to those described in Example 66 above, using suitable starting materials described above in Preparation Methods or Intermediates, or obtained from commercial sources.
Пример 75: 4-(5-((3-(2-(3-карбоксипропаноил)-6-метоксибензо[b]тиофен-5-ил)пропил)амино)-6-метокситиено[3,2-b]пиридин-2-ил)-4-оксобутановая кислотаExample 75: 4-(5-((3-(2-(3-carboxypropanoyl)-6-methoxybenzo[b]thiophen-5-yl)propyl)amino)-6-methoxythieno[3,2-b]pyridin- 2-yl)-4-oxobutanoic acid
В 4 мл виалу добавляли трет-бутил 4-(6-метокси-5-(3-оксопропил)бензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноат (10 мг, 0.03 ммоль), mpem-бутил 4-(5-амино-6-метокситиено[3,2-b]пиридин-2-ил)-4-оксобутаноат (8.9 мг, 0.027 ммоль) и THF (0.50 мл). К суспензии добавляли АсОН (0.015 мл; 0.27 ммоль). Смесь нагревали до 55°С в течение 10 мин. После охлаждения до комнатной температуры добавляли триацетоксиборогидрид натрия (17 мг, 0.080 ммоль). Смесь затем нагревали до 55°С в течение 3 ч. После охлаждения до комнатной температуры добавляли TFA (1 мл), и смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 1 ч. Смесь затем концентрировали под пониженным давлением и затем разбавляли DMSO (1 мл). Смесь очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (ACN/H2O масс./0.1% TFA) с получением 4-(5-((3-(2-(3-карбоксипропаноил)-6-метоксибензо[b]тиофен-5-ил)пропил)амино)-6-метокситиено[3,2-b]пиридин-2-ил)-4-оксобутановой кислоты. ЖХ-МС (C28H29N2O8S2) (ES, m/z): 585 [M+H]+. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 12.18 (br, 2H), 8.22 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.59 (s, 1H), 6.55 (br s, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.88 (s, 3H), 3.48-3.43 (m, 2H), 3.27-3.24 (m, 4H), 2.73 (t, J=7.3 Гц, 2H), 2.61-2.56 (m, 4H), 1.98-1.91 (m, 2H).Tert-butyl 4-(6-methoxy-5-(3-oxopropyl)benzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate (10 mg, 0.03 mmol), mpem-butyl 4-( 5-amino-6-methoxythieno[3,2-b]pyridin-2-yl)-4-oxobutanoate (8.9 mg, 0.027 mmol) and THF (0.50 ml). AcOH (0.015 ml; 0.27 mmol) was added to the suspension. The mixture was heated to 55°C for 10 minutes. After cooling to room temperature, sodium triacetoxyborohydride (17 mg, 0.080 mmol) was added. The mixture was then heated to 55°C for 3 hours. After cooling to room temperature, TFA (1 ml) was added and the mixture was left to stir at room temperature for 1 hour. The mixture was then concentrated under reduced pressure and then diluted with DMSO (1 ml) . The mixture was purified by preparative HPLC (ACN/H 2 O wt/0.1% TFA) to give 4-(5-((3-(2-(3-carboxypropanoyl)-6-methoxybenzo[b]thiophen-5-yl )propyl)amino)-6-methoxythieno[3,2-b]pyridin-2-yl)-4-oxobutanoic acid. LC-MS (C 28 H 29 N 2 O 8 S 2 ) (ES, m/z): 585 [M+H] + . 1 H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 12.18 (br, 2H), 8.22 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.59 ( s, 1H), 6.55 (br s, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.88 (s, 3H), 3.48-3.43 (m, 2H), 3.27-3.24 (m, 4H), 2.73 (t, J =7.3 Hz, 2H), 2.61-2.56 (m, 4H), 1.98-1.91 (m, 2H).
Пример 76: (2S,2'S)-4,4'-((этан-1,2-диилбис(окси))бис(6-метоксибензо[b]тиофен-5,2-диил))бис(2-метил-4-оксобутановая кислота)Example 76: (2S,2'S)-4,4'-((ethane-1,2-diylbis(oxy))bis(6-methoxybenzo[b]thiophene-5,2-diyl))bis(2-methyl- 4-oxobutanoic acid)
Стадия 1: диметил 4,4'-((этан-1,2-диилбис(окси))бис(6-метоксибензо[b]тиофен-5,2-диил))(2S,2'S)-бис(2-метил-4-оксобутаноат)Step 1: dimethyl 4,4'-((ethane-1,2-diylbis(oxy))bis(6-methoxybenzo[b]thiophene-5,2-diyl))(2S,2'S)-bis(2-methyl -4-oxobutanoate)
Смесь метил (S)-4-(5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата (50 мг, 0.17 ммоль) и K2CO3 (47 мг, 0.34 ммоль) разбавляли DMF (750 мкл). Добавляли 1-бром-2-хлорпентан (18 мкл, 0.22 ммоль), и реакционную смесь нагревали до 100°С в течение 18 ч. Реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением и применяли без дополнительной очистки или определения характеристик.A mixture of methyl (S)-4-(5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate (50 mg, 0.17 mmol) and K 2 CO 3 (47 mg, 0.34 mmol) was diluted with DMF (750 μl). 1-Bromo-2-chloropentane (18 μL, 0.22 mmol) was added and the reaction mixture was heated to 100°C for 18 hours. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure and used without further purification or characterization.
Стадия 2: (2S,2'S)-4,4'-((этан-1,2-диилбис(окси))бис(6-метоксибензо[b]тиофен-5,2-диил))бис(2-метил-4-оксобутановая кислота)Step 2: (2S,2'S)-4,4'-((ethane-1,2-diylbis(oxy))bis(6-methoxybenzo[b]thiophene-5,2-diyl))bis(2-methyl- 4-oxobutanoic acid)
LiOH (16 мг, 0.67 ммоль) добавляли к перемешиваемому раствору диметил 4,4'-((этан-1,2-диилбис(окси))бис(6-метоксибензо[b]тиофен-5,2-диил))(2S,2'S)-бис(2-метил-4-оксобутаноат) (50 мг, 0.08 ммоль) в THF (340 мкл)/воде (80 мкл). Реакционную смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 4 ч. Реакционную смесь фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток растворяли в DMSO (4 мл) и фильтровали. Вещество очищали с помощью колоночной хроматографии с обращенными фазами, колонка С18 (ACN/вода с 0.1% TFA) с получением (2S,2'S)-4,4'-(5,5'-(этан-1,2-диилбис(окси))бис(6-метоксибензо[b]тиофен-5,2-диил))бис(2-метил-4-оксобутановая кислота). ЖХ-МС (C30H30O10S2Na) (ES, m/z): 637 [M+Na]+. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ: 12.21 (br s, 2H), 8.20 (s, 2H), 7.64 (s, 2H), 7.59 (s, 2H), 4.44 (s, 4H), 3.87 (s, 6H), 3.41 (dd, J=17, 9 Гц, 2H), 3.09 (dd, J=17, 5 Гц, 2H), 3.05-2.58 (m, 2H), 1.19 (d, J=7 Гц, 6Н).LiOH (16 mg, 0.67 mmol) was added to a stirred solution of dimethyl 4,4'-((ethane-1,2-diylbis(oxy))bis(6-methoxybenzo[b]thiophene-5,2-diyl))(2S ,2'S)-bis(2-methyl-4-oxobutanoate) (50 mg, 0.08 mmol) in THF (340 µl)/water (80 µl). The reaction mixture was left stirring at room temperature for 4 hours. The reaction mixture was filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was dissolved in DMSO (4 ml) and filtered. The material was purified by reverse phase column chromatography, C18 column (ACN/water with 0.1% TFA) to give (2S,2'S)-4,4'-(5,5'-(ethane-1,2-diylbis(oxy ))bis(6-methoxybenzo[b]thiophene-5,2-diyl))bis(2-methyl-4-oxobutanoic acid). LC-MS (C 30 H 30 O 10 S 2 Na) (ES, m/z): 637 [M+Na] + . 1 H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ: 12.21 (br s, 2H), 8.20 (s, 2H), 7.64 (s, 2H), 7.59 (s, 2H), 4.44 (s, 4H), 3.87 (s, 6H), 3.41 (dd, J=17, 9 Hz, 2H), 3.09 (dd, J=17, 5 Hz, 2H), 3.05-2.58 (m, 2H), 1.19 (d, J= 7 Hz, 6H).
Пример 77: (2S,2'S)-4,4'-(7,8,17,18-тетрагидро-6H,16H-бис[1]бензотиено[5,6-b:6',5'-i][1,4,8,11]тетраоксациклотетрадецин-2,12-диил)бис(2-метил-4-оксобутановая кислота) иExample 77: (2S,2'S)-4,4'-(7,8,17,18-tetrahydro-6H,16H-bis[1]benzothieno[5,6-b:6',5'-i][ 1,4,8,11]tetraoxacyclotetradecine-2,12-diyl)bis(2-methyl-4-oxobutanoic acid) and
Пример 78: (2S,2'S)-4,4'-(7,8,17,18-тетрагидро-6H,16H-бис[1]бензотиено[5,6-b:5',6'-i][1,4,8,11]тетраоксациклотетрадецин-2,12-диил)бис(2-метил-4-оксобутановая кислота)Example 78: (2S,2'S)-4,4'-(7,8,17,18-tetrahydro-6H,16H-bis[1]benzothieno[5,6-b:5',6'-i][ 1,4,8,11]tetraoxacyclotetradecine-2,12-diyl)bis(2-methyl-4-oxobutanoic acid)
Стадия 1: диметил (2S,2'S)-4,4'-(7,8,17,18-тетрагидро-6Н,16Н-бис[1]бензотиено[5,6-b:5',6'-i][1,4,8,11]тетраоксациклотетрадецин-2,12-диил)бис(2-метил-4-оксобутаноат) и диметил (2S,2'S)-4,4'-(7,8,17,18-тетрагидро-6Н,16Н-бис[1]бензотиено[5,6-b:6',5'-i][1,4,8,11] тетраоксациклотетрадецин-2,12-диил)бис(2-метил-4-оксобутаноат)Step 1: dimethyl (2S,2'S)-4,4'-(7,8,17,18-tetrahydro-6H,16H-bis[1]benzothieno[5,6-b:5',6'-i] [1,4,8,11]tetraoxacyclotetradecin-2,12-diyl)bis(2-methyl-4-oxobutanoate) and dimethyl (2S,2'S)-4,4'-(7,8,17,18-tetrahydro -6H,16H-bis[1]benzothieno[5,6-b:6',5'-i][1,4,8,11] tetraoxacyclotetradecin-2,12-diyl)bis(2-methyl-4- oxobutanoate)
Смесь метил (2S)-4-(5,6-дигидрокси-1-бензотиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата (60 мг, 0.20 ммоль), метил (2S)-4-[5,6-бис(3-гидроксипропокси)-1-бензотиофен-2-ил]-2-метил-4-оксобутаноата (120 мг, 0.20 ммоль), Ph3P (193 мг, 0.737 ммоль) и 1,1'-(азодикарбонил)дипиперидина (186 мг, 0.737 ммоль) в THF (2.0 мл) оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 18 ч. Смесь затем фильтровали и очищали с помощью ВЭЖХ с обратными фазами (градиент MeCN/вода с 0.1% TFA) с получением смеси 1:1 диметил (2S,2'S)-4,4'-(7,8,17,18-тетрагидро-6H,16H-бис[1]бензотиено[5,6-b:5',6'-i][1,4,8,11]тетраоксациклотетрадецин-2,12-диил)бис(2-метил-4-оксобутаноат) и диметил (2S,2'S)-4,4'-(7,8,17,18-тетрагидро-6H,16H-бис[1]бензотиено[5,6-b:6',5'-i][1,4,8,11]тетраоксациклотетрадецин-2,12-диил)бис(2-метил-4-оксобутаноат). ЖХ-МС (C34H36O10S2Na) (ES, m/z): 691 [M+Na]+.Mixture of methyl (2S)-4-(5,6-dihydroxy-1-benzothiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate (60 mg, 0.20 mmol), methyl (2S)-4-[5,6 -bis(3-hydroxypropoxy)-1-benzothiophen-2-yl]-2-methyl-4-oxobutanoate (120 mg, 0.20 mmol), Ph 3 P (193 mg, 0.737 mmol) and 1,1'-(azodicarbonyl )dipiperidine (186 mg, 0.737 mmol) in THF (2.0 ml) was left stirring at room temperature for 18 hours. The mixture was then filtered and purified by reverse phase HPLC (MeCN gradient/water with 0.1% TFA) to give mixture 1 :1 dimethyl (2S,2'S)-4,4'-(7,8,17,18-tetrahydro-6H,16H-bis[1]benzothieno[5,6-b:5',6'-i][ 1,4,8,11]tetraoxacyclotetradecin-2,12-diyl)bis(2-methyl-4-oxobutanoate) and dimethyl (2S,2'S)-4,4'-(7,8,17,18-tetrahydro- 6H,16H-bis[1]benzothieno[5,6-b:6',5'-i][1,4,8,11]tetraoxacyclotetradecine-2,12-diyl)bis(2-methyl-4-oxobutanoate ). LC-MS (C 34 H 36 O 10 S 2 Na) (ES, m/z): 691 [M+Na] + .
Стадия 2: (2S,2'S)-4,4'-(7,8,17,18-тетрагидро-6Н,16Н-бис[1]бензотиено[5,6-b:5',6'-i][1,4,8,11]тетраоксациклотетрадецин-2,12-диил)бис(2-метил-4-оксобутановая кислота) и (2S,2'S)-4,4'-(7,8,17,18-тетрагидро-6Н,16Н-бис[1]бензотиено[5,6-b:6',5'-i][1,4,8,11]тетраоксациклотетрадецин-2,12-диил)бис(2-метил-4-оксобутановая кислота)Step 2: (2S,2'S)-4,4'-(7,8,17,18-tetrahydro-6H,16H-bis[1]benzothieno[5,6-b:5',6'-i][ 1,4,8,11]tetraoxacyclotetradecin-2,12-diyl)bis(2-methyl-4-oxobutanoic acid) and (2S,2'S)-4,4'-(7,8,17,18-tetrahydro- 6H,16H-bis[1]benzothieno[5,6-b:6',5'-i][1,4,8,11]tetraoxacyclotetradecin-2,12-diyl)bis(2-methyl-4-oxobutanoic acid)
К перемешанному раствору смеси 1:1 диметил (2S,2'S)-4,4'-(7,8,17,18-тетрагидро-6H,16H-бис[1]бензотиено[5,6-b:5',6'-i][1,4,8,11]тетраоксациклотетрадецин-2,12-диил)бис(2-метил-4-оксобутаноат) и диметил (2S,2'S)-4,4'-(7,8,17,18-тетрагидро-6H,16H-бис[1]бензотиено[5,6-b:6',5'-i][1,4,8,11]тетраоксациклотетрадецин-2,12-диил)бис(2-метил-4-оксобутаноат) (67 мг, 0.10 ммоль) в МеОН (1.0 мл), THF (1.0 мл) и воде (0.2 мл) добавляли LiOH (24 мг, 1.0 ммоль). Реакционную смесь оставляли перемешиваться в течение 4 ч и затем очищали с помощью ВЭЖХ с обратными фазами (градиент MeCN/вода с 0.1% TFA) с получением смеси 1:1 (2S,2'S)-4,4'-(7,8,17,18-тетрагидро-6H,16H-бис[1]бензотиено[5,6-b:5',6'-i][1,4,8,11]тетраоксациклотетрадецин-2,12-диил)бис(2-метил-4-оксобутановая кислота) и (2S,2'S)-4,4'-(7,8,17,18-тетрагидро-6H,16H-бис[1]бензотиено[5,6-b:6',5'-i][1,4,8,11]тетраоксацикло-тетрадецин-2,12-диил)бис(2-метил-4-оксобутановая кислота). ЖХ-МС (C32H33O10S2) (ES, m/z): 641 [M+H]+. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 12.20 (brs, 2H), 8.18 (s, 2H), 7.52 (s, 2H), 7.40 (s, 2H), 4.27-4.18 (m, 8H), 3.42-3.34 (m, 2H), 3.10-3.03 (m, 2H), 2.92-2.85 (m, 2H), 2.29 (brs, 4H), 1.17 (d, J=6.8 Гц, 6Н).To a stirred solution of a 1:1 mixture of dimethyl (2S,2'S)-4,4'-(7,8,17,18-tetrahydro-6H,16H-bis[1]benzothieno[5,6-b:5',6 '-i][1,4,8,11]tetraoxacyclotetradecin-2,12-diyl)bis(2-methyl-4-oxobutanoate) and dimethyl (2S,2'S)-4,4'-(7,8,17 ,18-tetrahydro-6H,16H-bis[1]benzothieno[5,6-b:6',5'-i][1,4,8,11]tetraoxacyclotetradecin-2,12-diyl)bis(2- methyl 4-oxobutanoate) (67 mg, 0.10 mmol) in MeOH (1.0 ml), THF (1.0 ml) and water (0.2 ml) was added LiOH (24 mg, 1.0 mmol). The reaction mixture was left stirring for 4 h and then purified by reverse phase HPLC (MeCN/water with 0.1% TFA gradient) to give a 1:1 mixture of (2S,2'S)-4,4'-(7,8,17 ,18-tetrahydro-6H,16H-bis[1]benzothieno[5,6-b:5',6'-i][1,4,8,11]tetraoxacyclotetradecin-2,12-diyl)bis(2- methyl 4-oxobutanoic acid) and (2S,2'S)-4,4'-(7,8,17,18-tetrahydro-6H,16H-bis[1]benzothieno[5,6-b:6',5 '-i][1,4,8,11]tetraoxacyclo-tetradecine-2,12-diyl)bis(2-methyl-4-oxobutanoic acid). LC-MS (C 32 H 33 O 10 S 2 ) (ES, m/z): 641 [M+H] + . 1 H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 12.20 (brs, 2H), 8.18 (s, 2H), 7.52 (s, 2H), 7.40 (s, 2H), 4.27-4.18 (m, 8H), 3.42-3.34 (m, 2H), 3.10-3.03 (m, 2H), 2.92-2.85 (m, 2H), 2.29 (brs, 4H), 1.17 (d, J=6.8 Hz, 6H).
Пример 79: (2S,2'S)-4,4'-(1,3-пропандиилбис{окси[6-(дифторметокси)-1-бензотиен-5,2-диил]})бис(2-метил-4-оксобутановая кислота)Example 79: (2S,2'S)-4,4'-(1,3-propanediylbis{oxy[6-(difluoromethoxy)-1-benzothiene-5,2-diyl]})bis(2-methyl-4-oxobutanoic acid)
К перемешанному раствору метил (2S)-4-[6-(дифторметокси)-5-гидрокси-1-бензотиофен-2-ил]-2-метил-4-оксобутаноата (54 мг, 0.16 ммоль) и K2CO3 (109 мг, 0.788 ммоль) в DMF (0.8 мл) добавляли 1,3-дибромпропан (8 мкл, 0.08 ммоль). Смесь нагревали до 50°С в течение 4 ч. После охлаждения до комнатной температуры смесь обрабатывали LiOH (2М в воде, 790 мкл, 1.58 ммоль) и оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 4 ч. Смесь затем концентрировали под пониженным давлением и очищали с помощью ВЭЖХ с обратными фазами (градиент MeCN/вода с 0.1% TFA) с получением (2S,2'S)-4,4'-(1,3-пропандиилбис{окси[6-(дифторметокси)-1-бензотиен-5,2-диил]})бис(2-метил-4-оксобутановая кислота). ЖХ-МС (C31H28F4O10S2Na) (ES, m/z): 723 [M+23]+. 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 12.25 (s, 2H), 8.27 (s, 2H), 7.94 (s, 2H), 7.73 (s, 2H), 7.20 (t, J=74.0 Гц, 2Н), 4.33-4.29 (m, 4Н), 3.46-3.40 (m, 2H), 3.12 (dd, J=17.5, 4.9 Гц, 2Н), 2.94-2.87 (m, 2H), 2.37-2.32 (m, 2H), 1.19 (d, J=7.1 Гц, 6Н).To a stirred solution of methyl (2S)-4-[6-(difluoromethoxy)-5-hydroxy-1-benzothiophen-2-yl]-2-methyl-4-oxobutanoate (54 mg, 0.16 mmol) and K 2 CO 3 ( 109 mg, 0.788 mmol) 1,3-dibromopropane (8 μL, 0.08 mmol) was added to DMF (0.8 ml). The mixture was heated to 50°C for 4 hours. After cooling to room temperature, the mixture was treated with LiOH (2M in water, 790 μL, 1.58 mmol) and left stirring at room temperature for 4 hours. The mixture was then concentrated under reduced pressure and purified with reverse phase HPLC (MeCN/water with 0.1% TFA gradient) to give (2S,2'S)-4,4'-(1,3-propanediylbis{oxy[6-(difluoromethoxy)-1-benzothiene-5,2 -diyl]})bis(2-methyl-4-oxobutanoic acid). LC-MS (C 31 H 28 F 4 O 10 S 2 Na) (ES, m/z): 723 [M+23] + . 1 H NMR (500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 12.25 (s, 2H), 8.27 (s, 2H), 7.94 (s, 2H), 7.73 (s, 2H), 7.20 (t, J=74.0 Hz, 2H), 4.33-4.29 (m, 4H), 3.46-3.40 (m, 2H), 3.12 (dd, J=17.5, 4.9 Hz, 2H), 2.94-2.87 (m, 2H), 2.37-2.32 (m, 2H), 1.19 (d, J=7.1 Hz, 6H).
Примеры 80 и 172, как показано в Таблице 19 ниже, или могут быть получены в соответствии со способами, аналогичными описанным в Примере 79 выше, с применением подходящих исходных материалов, описанных выше в Способах получения или Промежуточных соединениях, или получены из коммерческих источников.Examples 80 and 172, as shown in Table 19 below, or can be prepared in accordance with methods similar to those described in Example 79 above, using suitable starting materials described above in Preparation Methods or Intermediates, or obtained from commercial sources.
Пример 173: (4-(5-(3-((2-(3-Карбоксипропаноил)-4-фтор-6-метоксибензо[b]тиофен-5-ил)окси)пропил)-6-метокситиено[3,2-b]пиридин-2-ил)-4-оксобутановая кислотаExample 173: (4-(5-(3-((2-(3-Carboxypropanoyl)-4-fluoro-6-methoxybenzo[b]thiophen-5-yl)oxy)propyl)-6-methoxythieno[3,2 -b]pyridin-2-yl)-4-oxobutanoic acid
трет-Бутил 4-(5-(3-гидроксипропил)-6-метокситиено[3,2-b]пиридин-2-ил)-4-оксобутаноат (76 мг, 0.20 ммоль) добавляли в виалу, содержащую этил 4-(4-фтор-5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаноат (250 мг, 0.77 ммоль), PS-TPP (319 мг, 0.600 ммоль), DIAD (0.117 мл, 0.600 ммоль) и THF (3 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 3 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь фильтровали, промывали THF (5 мл). Добавляли МеОН (2 мл), воду (3 мл) и LiOH (48 мг, 2.0 ммоль), и реакционную смесь перемешивали в течение дополнительных 2 ч. Затем реакцию останавливали НОАс и концентрировали под пониженным давлением. Остаток суспендировали в DCM (5 мл) и добавляли TFA (1 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч. Реакционную смесь затем концентрировали под пониженным давлением, и остаток очищали с помощью ВЭЖХ с обратными фазами (градиент ацетонитрил/вода с 0.1% TFA) с получением (4-(5-(3-((2-(3-карбоксипропаноил)-4-фтор-6-метоксибензо[b]тиофен-5-ил)окси)пропил)-6-метокситиено[3,2-b]пиридин-2-ил)-4-оксобутановой кислоты. ЖХ-МС (C28H27FNO9S2) (ES, m/z): 604 [M+H]+. 1H ЯМР (600 МГц, DMSO-d6) δ 8.34 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 4.17 (t, J=6.3 Гц, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.90 (s, 3H), 3.35-3.29 (m, 4H), 3.10-3.04 (m, 2H), 2.63-2.58 (m, 4H), 2.18-2.13 (m, 2H).tert-Butyl 4-(5-(3-hydroxypropyl)-6-methoxythieno[3,2-b]pyridin-2-yl)-4-oxobutanoate (76 mg, 0.20 mmol) was added to a vial containing ethyl 4-( 4-fluoro-5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanoate (250 mg, 0.77 mmol), PS-TPP (319 mg, 0.600 mmol), DIAD (0.117 ml, 0.600 mmol ) and THF (3 ml). The reaction mixture was stirred for 3 hours at room temperature. The reaction mixture was filtered, washed with THF (5 ml). MeOH (2 mL), water (3 mL) and LiOH (48 mg, 2.0 mmol) were added and the reaction mixture was stirred for an additional 2 h. The reaction was then quenched with HOAc and concentrated under reduced pressure. The residue was suspended in DCM (5 ml) and TFA (1 ml) was added. The reaction mixture was stirred for 1 hour. The reaction mixture was then concentrated under reduced pressure and the residue was purified by reverse phase HPLC (acetonitrile/water gradient with 0.1% TFA) to give (4-(5-(3-((2- (3-carboxypropanoyl)-4-fluoro-6-methoxybenzo[b]thiophen-5-yl)oxy)propyl)-6-methoxythieno[3,2-b]pyridin-2-yl)-4-oxobutanoic acid. LC -MS (C 28 H 27 FNO 9 S 2 ) (ES, m/z): 604 [M+H] + . 1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.34 (s, 1H), 8.31 ( s, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 4.17 (t, J=6.3 Hz, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.90 (s, 3H), 3.35-3.29 (m , 4H), 3.10-3.04 (m, 2H), 2.63-2.58 (m, 4H), 2.18-2.13 (m, 2H).
Пример 174, как показано в Таблице 20 ниже, или может быть получен в соответствии со способами, аналогичными описанным в Примере 173 выше, с применением подходящих исходных материалов, описанных выше в Способах получения или Промежуточных соединениях, или получен из коммерческих источников.Example 174, as shown in Table 20 below, or can be prepared in accordance with methods similar to those described in Example 173 above, using suitable starting materials described in Preparation Methods or Intermediates above, or obtained from commercial sources.
Пример 175: 4,4'-(Пропан-1,3-диилбис(6-метоксибензо[b]тиофен-5,2-диил))бис(4-оксобутаннитрил)Example 175: 4,4'-(Propane-1,3-diylbis(6-methoxybenzo[b]thiophene-5,2-diyl))bis(4-oxobutanenitrile)
4-(5-Бром-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаннитрил (35 мг, 0.11 ммоль), комплекс никель (II) бромид этиленгликоль диметиловый эфир (10 мг, 0.033 ммоль), марганец (24 мг, 0.44 ммоль), NaI (8 мг, 0.06 ммоль) и 4,4'-диметокси-2,2'-бипиридин (7 мг, 0.03 ммоль) объединяли в виале. В виалу добавляли раствор 4-(5-(3-бромпропил)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-4-оксобутаннитрила (40 мг, 0.11 ммоль) в DMPU (1.1 мл). К реакционной смеси добавляли 5% об./об. растворы в DMPU Ру (88 мкл, 0.055 ммоль) и TMS-C1 (84 мкл, 0.033 ммоль). Реакционную смесь дегазировали Ar в течение 5 мин, и затем перемешивали и нагревали при 90°С в течение 2 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли DMSO (2 мл) и фильтровали. Фильтрат очищали с помощью ВЭЖХ с обратными фазами (ACN/вода с модификатором TFA) с получением 4,4'-(пропан-1,3-диилбис(6-метоксибензо[b]тиофен-5,2-диил))бис(4-оксобутаннитрил). ЖХ-МС (C29H27N2O4S2) (ES, m/z): 531 [М+Н]+. 1H ЯМР (499 МГц, DMSO-d6) δ 8.26 (s, 2H), 7.78 (s, 2H), 7.61 (s, 2H), 3.89 (s, 6H), 3.55-3.45 (m, 4H), 2.81-2.76 (m, 4H), 2.74-2.69 (m, 4H), 1.95-1.90 (m, 2H).4-(5-Bromo-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanenitrile (35 mg, 0.11 mmol), nickel (II) complex ethylene glycol bromide dimethyl ether (10 mg, 0.033 mmol), manganese ( 24 mg, 0.44 mmol), NaI (8 mg, 0.06 mmol) and 4,4'-dimethoxy-2,2'-bipyridine (7 mg, 0.03 mmol) were combined in a vial. A solution of 4-(5-(3-bromopropyl)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-4-oxobutanenitrile (40 mg, 0.11 mmol) in DMPU (1.1 ml) was added to the vial. 5% v/v was added to the reaction mixture. solutions in DMPU Ru (88 μl, 0.055 mmol) and TMS-C1 (84 μl, 0.033 mmol). The reaction mixture was degassed with Ar for 5 minutes, and then stirred and heated at 90°C for 2 hours. The reaction mixture was cooled to room temperature, diluted with DMSO (2 ml) and filtered. The filtrate was purified by reverse phase HPLC (ACN/water with TFA modifier) to give 4,4'-(propane-1,3-diylbis(6-methoxybenzo[b]thiophene-5,2-diyl))bis(4 -oxobutanenitrile). LC-MS (C 29 H 27 N 2 O 4 S 2 ) (ES, m/z): 531 [M+H] + . 1 H NMR (499 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.26 (s, 2H), 7.78 (s, 2H), 7.61 (s, 2H), 3.89 (s, 6H), 3.55-3.45 (m, 4H), 2.81-2.76 (m, 4H), 2.74-2.69 (m, 4H), 1.95-1.90 (m, 2H).
Пример 176: (S)-4-(5-((3-((2-((S)-3-Карбоксибутаноил)-4-фтор-6-метоксибензо[b]тиофен-5-ил)окси)пропил)амино)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутановая кислотаExample 176: (S)-4-(5-((3-((2-((S)-3-Carboxybutanoyl)-4-fluoro-6-methoxybenzo[b]thiophen-5-yl)oxy)propyl) amino)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoic acid
Смесь (S)-метил 4-(5-амино-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата (37 мг, 0.12 ммоль), (S)-метил 4-(5-(3-бромпропокси)-4-фтор-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата (54 мг, 0.12 ммоль) и карбоната калия (67 мг, 0.48 ммоль) дегазировали Ar. К смеси добавляли DMF (1.0 мл), и реакционную смесь перемешивали и нагревали при 60°С в течение 2 дней. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и затем добавляли NaOH (1.0 M в воде, 0.48 мл, 0.48 ммоль). Смесь дополнительно разбавляли DMSO (1.5 мл) и затем перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакцию останавливали TFA (0.056 мл, 0.72 ммоль) и фильтровали. Фильтрат очищали с помощью ВЭЖХ с обратными фазами (ACN/вода с 0.1% TFA) с получением (S)-4-(5-((3-((2-((S)-3-карбокси бутаноил)-4-фтор-6-метоксибензо[b]тиофен-5-ил)окси)пропил)амино)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутановой кислоты. ЖХ-МС (C31H33FNO9S2) (ES, m/z): 646 [М+Н]+. 1H ЯМР (499 МГц, DMSO-d6) δ 8.32 (s, 1Н), 8.11 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.45 (s, 1H), 7.04 (s, 1H), 4.17 (t, J=5.9 Гц, 2H), 3.92 (s, 3H), 3.90 (s, 3H), 3.47 (dd, J=17.6, 8.6 Гц, 1H), 3.43-3.34 (m, 3H), 3.17-3.05 (m, 2H), 2.94-2.95 (m, 2H), 2.09-2.02 (m, 2H), 1.20-1.15 (m, 6H).A mixture of (S)-methyl 4-(5-amino-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate (37 mg, 0.12 mmol), (S)-methyl 4-(5 -(3-bromopropoxy)-4-fluoro-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate (54 mg, 0.12 mmol) and potassium carbonate (67 mg, 0.48 mmol) were degassed with Ar . DMF (1.0 ml) was added to the mixture, and the reaction mixture was stirred and heated at 60°C for 2 days. The reaction mixture was cooled to room temperature and then NaOH (1.0 M in water, 0.48 mL, 0.48 mmol) was added. The mixture was further diluted with DMSO (1.5 ml) and then stirred at room temperature for 1 hour. The reaction was stopped with TFA (0.056 ml, 0.72 mmol) and filtered. The filtrate was purified by reverse phase HPLC (ACN/water with 0.1% TFA) to give (S)-4-(5-((3-((2-((S)-3-carboxybutanoyl)-4-fluoro -6-methoxybenzo[b]thiophen-5-yl)oxy)propyl)amino)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoic acid. LC-MS (C 31 H 33 FNO 9 S 2 ) (ES, m/z): 646 [M+H] + . 1 H NMR (499 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.32 (s, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.45 (s, 1H), 7.04 (s, 1H), 4.17 ( t, J=5.9 Hz, 2H), 3.92 (s, 3H), 3.90 (s, 3H), 3.47 (dd, J=17.6, 8.6 Hz, 1H), 3.43-3.34 (m, 3H), 3.17-3.05 (m, 2H), 2.94-2.95 (m, 2H), 2.09-2.02 (m, 2H), 1.20-1.15 (m, 6H).
Пример 177, как показано в Таблице 21 ниже, или может быть получен в соответствии со способами, аналогичными описанным в Примере 176 выше, с применением подходящих исходных материалов, описанных выше в Способах получения или Промежуточных соединениях, или получен из коммерческих источников.Example 177, as shown in Table 21 below, or can be prepared in accordance with methods similar to those described in Example 176 above, using suitable starting materials described above in Preparation Methods or Intermediates, or obtained from commercial sources.
Пример 178: (S)-4-(5-(3-((2-((S)-4-((N,N-диметилсульфамоил)амино)-3-метил-4-оксобутаноил)-4-фтор-6-метоксибензо[b]тиофен-5-ил)окси)пропокси)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутановая кислотаExample 178: (S)-4-(5-(3-((2-((S)-4-((N,N-dimethylsulfamoyl)amino)-3-methyl-4-oxobutanoyl)-4-fluoro- 6-methoxybenzo[b]thiophen-5-yl)oxy)propoxy)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoic acid
Стадия 1: трет-бутил (S)-4-(5-(3-((4-фтор-6-метокси-2-((S)-4-метокси-3-метил-4-оксобутаноил)бензо[b]тиофен-5-ил)окси)пропокси)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатStep 1: tert-butyl (S)-4-(5-(3-((4-fluoro-6-methoxy-2-((S)-4-methoxy-3-methyl-4-oxobutanoyl)benzo[b ]thiophen-5-yl)oxy)propoxy)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
Смесь (S)-метил 4-(5-(3-бромпропокси)-4-фтор-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата (111 мг, 0.248 ммоль), (S)-трет-бутил 4-(5-гидрокси-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата (87 мг, 0.25 ммоль) и карбоната калия (137 мг, 0.993 ммоль) дегазировали Ar. К смеси добавляли DMF (1.0 мл), и реакционную смесь перемешивали и нагревали при 40°С в течение 18 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и затем разбавляли EtOAc и водой. Органический слой отделяли, высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (EtOAc/гексан) с получением трет-бутил (S)-4-(5-(3-((4-фтор-6-метокси-2-((S)-4-метокси-3-метил-4-оксобутаноил)бензо[b]тиофен-5-ил)окси)пропокси)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата. ЖХ-МС (C36H42FO10S2) (ES, m/z): 739 [M+Na]+. 1H ЯМР (499 МГц, DMSO-d6) δ 8.30 (s, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 4.26 (q, J=5.9 Гц, 4H), 3.86 (s, 3Н), 3.85 (s, 3Н), 3.60 (s, 3Н), 3.48 (dd, J=17.7, 8.7 Гц, 1H), 3.39-3.33 (m, 1H), 3.23 (dd, J=17.7, 5.0 Гц, IH), 3.07 (dd, J=17.1, 5.0 Гц, 1H), 3.02-2.93 (m, 1H), 2.91-2.81 (m, 1H), 2.23-2.18 (m, 2H), 1.35 (s, 9H), 1.20-1.15 (m, 6H).Mixture of (S)-methyl 4-(5-(3-bromopropoxy)-4-fluoro-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate (111 mg, 0.248 mmol), ( S)-tert-butyl 4-(5-hydroxy-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate (87 mg, 0.25 mmol) and potassium carbonate (137 mg, 0.993 mmol) degassed Ar. DMF (1.0 ml) was added to the mixture, and the reaction mixture was stirred and heated at 40°C for 18 hours. The reaction mixture was cooled to room temperature and then diluted with EtOAc and water. The organic layer was separated, dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography (EtOAc/hexane) to give tert-butyl (S)-4-(5-(3-((4-fluoro-6-methoxy-2-((S)-4-methoxy- 3-methyl-4-oxobutanoyl)benzo[b]thiophen-5-yl)oxy)propoxy)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate. LC-MS (C 36 H 42 FO 10 S 2 ) (ES, m/z): 739 [M+Na] + . 1 H NMR (499 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.30 (s, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 4.26 ( q, J=5.9 Hz, 4H), 3.86 (s, 3H), 3.85 (s, 3H), 3.60 (s, 3H), 3.48 (dd, J=17.7, 8.7 Hz, 1H), 3.39-3.33 (m , 1H), 3.23 (dd, J=17.7, 5.0 Hz, IH), 3.07 (dd, J=17.1, 5.0 Hz, 1H), 3.02-2.93 (m, 1H), 2.91-2.81 (m, 1H), 2.23-2.18 (m, 2H), 1.35 (s, 9H), 1.20-1.15 (m, 6H).
Стадия 2: (S)-4-(5-(3-((2-((S)-4-(трет-бутокси)-3-метил-4-оксобутаноил)-6-метоксибензо[b]тиофен-5-ил)окси)пропокси)-4-фтор-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутановая кислотаStep 2: (S)-4-(5-(3-((2-((S)-4-(tert-butoxy)-3-methyl-4-oxobutanoyl)-6-methoxybenzo[b]thiophene-5 -yl)oxy)propoxy)-4-fluoro-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoic acid
NaOH (1.0 M в воде, 0.94 мл, 0.94 ммоль) добавляли к смеси (S)-трет-бутил 4-(5-(3-((4-фтор-6-метокси-2-((S)-4-метокси-3-метил-4-оксобутаноил)-бензо[b]тиофен-5-ил)окси)пропокси)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата (135 мг, 0.188 ммоль) в THF (0.94 мл) и МеОН (0.94 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь останавливали HCl (2.0 М в воде, 0.47 мл, 0.94 ммоль) и разбавляли EtOAc и водой. Органический слой отделяли, высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали под пониженным давлением с получением (S)-4-(5-(3-((2-((S)-(трет-бутокси)-3-метил-4-оксобутаноил)-6-метоксибензо[b]тиофен-5-ил)окси)пропокси)-4-фтор-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутановой кислоты. ЖХ-МС (C35H40FO10S2) (ES, m/z): 725 [M+Na]+.NaOH (1.0 M in water, 0.94 mL, 0.94 mmol) was added to the mixture of (S)-tert-butyl 4-(5-(3-((4-fluoro-6-methoxy-2-((S)-4- methoxy-3-methyl-4-oxobutanoyl)-benzo[b]thiophen-5-yl)oxy)propoxy)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate (135 mg, 0.188 mmol) in THF (0.94 ml) and MeOH (0.94 ml). The mixture was stirred at room temperature for 1 hour. The reaction mixture was quenched with HCl (2.0 M in water, 0.47 ml, 0.94 mmol) and diluted with EtOAc and water. The organic layer was separated, dried over MgSO 4 , filtered and concentrated under reduced pressure to give (S)-4-(5-(3-((2-((S)-(tert-butoxy)-3-methyl-4- oxobutanoyl)-6-methoxybenzo[b]thiophen-5-yl)oxy)propoxy)-4-fluoro-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoic acid. LC-MS (C 35 H 40 FO 10 S 2 ) (ES, m/z): 725 [M+Na] + .
Стадия 3: (S)-4-(5-(3-((2-((S)-4-((N,N-диметилсульфамоил)амино)-3-метил-4-оксобутаноил)-4-фтор-6-метоксибензо[b]тиофен-5-ил)окси)пропокси)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутановая кислотаStep 3: (S)-4-(5-(3-((2-((S)-4-((N,N-dimethylsulfamoyl)amino)-3-methyl-4-oxobutanoyl)-4-fluoro- 6-methoxybenzo[b]thiophen-5-yl)oxy)propoxy)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoic acid
Основание Хунига (0.062 мл, 0.36 ммоль) и TBTU (23 мг, 0.071 ммоль) добавляли к смеси (S)-4-(5-(3-((2-((S)-4-(трет-бутокси)-3-метил-4-оксобутаноил)-6-метокси-бензо[b]тиофен-5-ил)окси)пропокси)-4-фтор-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутановой кислоты (50 мг, 0.071 ммоль) в DCM (0.7 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Добавляли N,N-диметилсульфамид (11 мг, 0.085 ммоль), и смесь перемешивали в течение дополнительных 4 ч. Затем добавляли TFA (0.055 мл, 0.71 ммоль); и смесь перемешивали и нагревали до 45°С в течение 2 ч. Смесь охлаждали до комнатной температуры и концентрировали под пониженным давлением. Остаток очищали с помощью ВЭЖХ с обратными фазами (ACN/вода с 0.1% TFA) с получением (S)-4-(5-(3-((2-S)-4-((N,N-диметилсульфамоил)амино)-3-метил-4-оксобутаноил)-4-фтор-6-метоксибензо[b]тиофен-5-ил)окси)пропокси)-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутановой кислоты. ЖХ-МС (C33H38FN2O11S3) (ES, m/z): 775 [M+Na]+. 1H ЯМР (499 МГц, DMSO-d6) δ 11.50 (s, 1Н), 8.30 (s, 1Н), 8.22 (s, 1Н), 7.59 (s, 1Н), 7.56 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 4.26 (q, J=5.9 Гц, 4H), 3.87 (s, 3H), 3.85 (s, 3H), 3.48 (dd, J=17.8, 9.8 Гц, 1Н), 3.40 (dd, J=17.3, 8.4 Гц, 1Н), 3.16 (dd, J=17.8, 4.4 Гц, 1Н), 3.09 (dd, J=17.3, 5.3 Гц, 1Н), 3.00-2.94 (m, 1Н), 2.94-2.87 (m, 1Н), 2.79 (s, 6H), 2.23-2.17 (m, 2H), 1.21-1.15 (m, 6H).Hunig's base (0.062 ml, 0.36 mmol) and TBTU (23 mg, 0.071 mmol) were added to the mixture of (S)-4-(5-(3-((2-((S)-4-(tert-butoxy)- 3-methyl-4-oxobutanoyl)-6-methoxy-benzo[b]thiophen-5-yl)oxy)propoxy)-4-fluoro-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4 -oxobutanoic acid (50 mg, 0.071 mmol) in DCM (0.7 ml). The mixture was stirred at room temperature for 30 minutes. N,N-dimethylsulfamide (11 mg, 0.085 mmol) was added and the mixture was stirred for an additional 4 hours. TFA (0.055 ml, 0.71 mmol) was then added; and the mixture was stirred and heated to 45°C for 2 hours. The mixture was cooled to room temperature and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by reverse phase HPLC (ACN/water with 0.1% TFA) to give (S)-4-(5-(3-((2-S)-4-((N,N-dimethylsulfamoyl)amino) -3-methyl-4-oxobutanoyl)-4-fluoro-6-methoxybenzo[b]thiophen-5-yl)oxy)propoxy)-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4- oxobutanoic acid. LC-MS (C 33 H 38 FN 2 O 11 S 3 ) (ES, m/z): 775 [M+Na] + . 1 H NMR (499 MHz, DMSO-d 6 ) δ 11.50 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.52 ( s, 1H), 4.26 (q, J=5.9 Hz, 4H), 3.87 (s, 3H), 3.85 (s, 3H), 3.48 (dd, J=17.8, 9.8 Hz, 1H), 3.40 (dd, J =17.3, 8.4 Hz, 1H), 3.16 (dd, J=17.8, 4.4 Hz, 1H), 3.09 (dd, J=17.3, 5.3 Hz, 1H), 3.00-2.94 (m, 1H), 2.94-2.87 ( m, 1H), 2.79 (s, 6H), 2.23-2.17 (m, 2H), 1.21-1.15 (m, 6H).
Пример 179, как показано в Таблице 22 ниже, или может быть получен в соответствии со способами, аналогичными описанным в Примере 178 выше, с применением подходящих исходных материалов, описанных выше в Способах получения или Промежуточных соединениях, или получен из коммерческих источников.Example 179, as shown in Table 22 below, or can be prepared in accordance with methods similar to those described in Example 178 above, using suitable starting materials described in Preparation Methods or Intermediates above, or obtained from commercial sources.
Пример 180: (S)-4-(5-(3-((2-((S)-3-Карбоксибутаноил)-4-фтор-6-метоксибензо[b]тиофен-5-ил)окси)пропокси)-6-гидроксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутановая кислотаExample 180: (S)-4-(5-(3-((2-((S)-3-Carboxybutanoyl)-4-fluoro-6-methoxybenzo[b]thiophen-5-yl)oxy)propoxy)- 6-hydroxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoic acid
Стадия 1: метил (S)-4-(5-(3-((4-фтор-6-метокси-2-((S)-4-метокси-3-метил-4-оксобутаноил)бензо[b]тиофен-5-ил)окси)пропокси)-6-(метоксиметокси)бензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноатStep 1: Methyl (S)-4-(5-(3-((4-fluoro-6-methoxy-2-((S)-4-methoxy-3-methyl-4-oxobutanoyl)benzo[b]thiophene -5-yl)oxy)propoxy)-6-(methoxymethoxy)benzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate
Смесь метил (S)-4-(5-(3-бромпропокси)-4-фтор-6-метоксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата (30 мг, 0.068 ммоль), метил (S)-4-(5-гидрокси-6-(метоксиметокси)бензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата (23 мг, 0.068 ммоль) и карбоната калия (38 мг, 0.27 ммоль) дегазировали Ar. К смеси добавляли DMF (0.5 мл), и реакционную смесь перемешивали и нагревали при 40°С в течение 24 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и затем применяли без обработки или очистки в следующей реакции. ЖХ-МС (C34H38FO11S2) (ES, m/z): 705 [M+H]+.Mixture of methyl (S)-4-(5-(3-bromopropoxy)-4-fluoro-6-methoxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate (30 mg, 0.068 mmol), methyl (S)-4-(5-hydroxy-6-(methoxymethoxy)benzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate (23 mg, 0.068 mmol) and potassium carbonate (38 mg, 0.27 mmol ) degassed Ar. DMF (0.5 ml) was added to the mixture, and the reaction mixture was stirred and heated at 40°C for 24 hours. The reaction mixture was cooled to room temperature and then used without treatment or purification in the next reaction. LC-MS (C 34 H 38 FO 11 S 2 ) (ES, m/z): 705 [M+H] + .
Стадия 2: (S)-4-(5-(3-((2-((S)-3-карбоксибутаноил)-4-фтор-6-метоксибензо[b]тиофен-5-ил)окси)пропокси)-6-гидроксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутановая кислотаStep 2: (S)-4-(5-(3-((2-((S)-3-carboxybutanoyl)-4-fluoro-6-methoxybenzo[b]thiophen-5-yl)oxy)propoxy)- 6-hydroxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoic acid
NaOH (0.55 мл, 1.0 М в воде, 0.55 ммоль) добавляли к раствору метил (S)-4-(5-(3-((4-фтор-6-метокси-2-((S)-4-метокси-3-метил-4-оксобутаноил)бензо[b]тиофен-5-ил)окси)пропокси)-6-(метоксиметокси)бензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутаноата (48 мг, 0.068 ммоль) в DMSO (2.5 мл) при 20°С. Реакционную смесь затем перемешивали при 20°С в течение 15 мин. Реакционную смесь останавливали HCl (0.280 мл, 37% в воде, 3.41 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 20°С в течение 20 ч. Реакционную смесь фильтровали. Остаток очищали с помощью ВЭЖХ с обратными фазами (ACN/вода с 0.1% TFA) с получением (S)-4-(5-(3-((2-((S)-3-карбоксибутаноил)-4-фтор-6-метоксибензо[b]тиофен-5-ил)окси)пропокси)-6-гидроксибензо[b]тиофен-2-ил)-2-метил-4-оксобутановой кислоты. ЖХ-МС (C30H30FO10S2) (ES, m/z): 633 [M+H]+. 1H ЯМР (499 МГц, DMSO-d6) δ 12.17 (s, 2H), 9.70 (s, 1Н), 8.30 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.33 (s, 1H), 4.31-4.26 (m, 4H), 3.87 (s, 3H), 3.46 (dd, J=17.6, 8.6 Гц, 1H), 3.38 (dd, J=17.2, 8.4 Гц, 1H), 3.13 (dd, J=17.6, 5.1 Гц, 1H), 3.06 (dd, J=17.2, 5.3 Гц, 1H), 2.91-2.85 (m, 2H), 2.24-2.18 (m, 2H), 1.19 (d, J=7.2 Гц, 6Н).NaOH (0.55 ml, 1.0 M in water, 0.55 mmol) was added to the solution of methyl (S)-4-(5-(3-((4-fluoro-6-methoxy-2-((S)-4-methoxy- 3-methyl-4-oxobutanoyl)benzo[b]thiophen-5-yl)oxy)propoxy)-6-(methoxymethoxy)benzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoate (48 mg, 0.068 mmol) in DMSO (2.5 ml) at 20°C. The reaction mixture was then stirred at 20°C for 15 minutes. The reaction mixture was quenched with HCl (0.280 ml, 37% in water, 3.41 mmol). The reaction mixture was stirred at 20°C for 20 hours. The reaction mixture was filtered. The residue was purified by reverse phase HPLC (ACN/water with 0.1% TFA) to give (S)-4-(5-(3-((2-((S)-3-carboxybutanoyl)-4-fluoro-6 -methoxybenzo[b]thiophen-5-yl)oxy)propoxy)-6-hydroxybenzo[b]thiophen-2-yl)-2-methyl-4-oxobutanoic acid. LC-MS (C 30 H 30 FO 10 S 2 ) (ES, m/z): 633 [M+H] + . 1 H NMR (499 MHz, DMSO-d 6 ) δ 12.17 (s, 2H), 9.70 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.48 ( s, 1H), 7.33 (s, 1H), 4.31-4.26 (m, 4H), 3.87 (s, 3H), 3.46 (dd, J=17.6, 8.6 Hz, 1H), 3.38 (dd, J=17.2, 8.4 Hz, 1H), 3.13 (dd, J=17.6, 5.1 Hz, 1H), 3.06 (dd, J=17.2, 5.3 Hz, 1H), 2.91-2.85 (m, 2H), 2.24-2.18 (m, 2H ), 1.19 (d, J=7.2 Hz, 6H).
Примеры с 181 по 190, как показано в Таблице 23 ниже, или могут быть получены в соответствии со способами, аналогичными описанным в Примере 180 выше, с применением подходящих исходных материалов; описанных выше в Способах получения или Промежуточных соединениях, или получены из коммерческих источников.Examples 181 to 190, as shown in Table 23 below, or can be prepared in accordance with methods similar to those described in Example 180 above, using suitable starting materials; described above in Preparation Methods or Intermediates, or obtained from commercial sources.
ОЦЕНКА БИОЛОГИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯASSESSMENT OF BIOLOGICAL ACTION
Отдельные соединения, описанные в приведенных здесь Примерах, определяются как агонисты STING путем (i) связывания с белком STING, о чем свидетельствует снижение связывания меченного тритием лиганда cGAMP с белком STING, по меньшей мере, на 20% при 20 мкМ (концентрация тестируемого соединения) в биохимическом анализе конкурентного связывания [3H]cGAMP с STING и (ii) определения продукции интерферона с 6% или большей индукцией секреции IFN-β при 30 мкМ в клеточном анализе ТНР1 (где индукция, вызванная cGAMP при 30 мкМ, была установлена как 100%).The individual compounds described in the Examples herein are determined to be STING agonists by (i) binding to the STING protein, as evidenced by a reduction in the binding of tritium-labeled cGAMP ligand to the STING protein by at least 20% at 20 μM (test compound concentration) in a biochemical assay for the competitive binding of [ 3 H]cGAMP to STING and (ii) determining interferon production with a 6% or greater induction of IFN-β secretion at 30 μM in a THP1 cell assay (where the induction caused by cGAMP at 30 μM was found to be 100 %).
Синтез [3H]-cGAMPSynthesis of [ 3H ]-cGAMP
В пластиковую пробирку AMICON объемом 50 мл добавляли 2.3 мл буферного раствора, содержащего 80 мМ TrisCl, 200 мМ MgCl2 и 20 мМ NaCl с последующим добавлением 0.32 мл 10 мМ водного раствора GTP. Затем добавляли раствор [3H]ATP (21 Ки/ммоль, 45 мКи) в 0.5 мл H2O с последующим добавлением 1 мл раствора 1 мг/мл ДНК (активатора ДНК из семенников сельди, Sigma, #D6898) и 53 мкл 47 мМ раствора фермента cGAS. Добавляли дополнительную H2O, чтобы довести общий объем до 10 мл.2.3 ml of a buffer solution containing 80 mM TrisCl, 200 mM MgCl 2 and 20 mM NaCl was added to a 50 ml AMICON plastic tube, followed by the addition of 0.32 ml of a 10 mM aqueous solution of GTP. Then a solution of [ 3 H]ATP (21 Ci/mmol, 45 mCi) in 0.5 ml H 2 O was added, followed by the addition of 1 ml of a solution of 1 mg/ml DNA (DNA activator from herring testes, Sigma, #D6898) and 53 µl 47 mM cGAS enzyme solution. Additional H 2 O was added to bring the total volume to 10 ml.
Реакционную смесь перемешивали в течение 2 часов при 37°С, и затем добавляли непосредственно в центрифужную пробирку Amicon Ultra-15 10K и центрифугировали в течение 1 часа при 4,000 g. Собранный раствор затем очищали на полупрепаративной колонке Mono Q, используя следующие подвижные фазы:The reaction mixture was stirred for 2 hours at 37°C and then added directly to an Amicon Ultra-15 10K centrifuge tube and centrifuged for 1 hour at 4,000 g. The collected solution was then purified on a semipreparative Mono Q column using the following mobile phases:
А: 0.05 М TrisCl, pH 8.5, доведенный 1 М NaOH.A: 0.05 M TrisCl, pH 8.5, adjusted with 1 M NaOH.
В: 0.05 М TrisCl, 0.5 М NaCl, pH 8.5, доведенный 1 М NaOH.B: 0.05 M TrisCl, 0.5 M NaCl, pH 8.5, adjusted with 1 M NaOH.
Градиент: 100% А в течение 5 минут с последующим линейным градиентом до 50:50 (А:В) в течение 25 минут, 3 мл/мин, 254 нм.Gradient: 100% A for 5 minutes followed by a linear gradient to 50:50 (A:B) for 25 minutes, 3 ml/min, 254 nm.
Собранные фракции продукта объединяли и доводили до общего объема 30 мл с помощью буфера А. Суммарный выход 15.5 мКи [3H]cGAMP был выделен с радиохимической чистотой 98.0% при удельной радиоактивности 21.5 Ки/ммоль.The collected product fractions were combined and brought to a total volume of 30 ml with buffer A. A total yield of 15.5 mCi of [ 3 H]cGAMP was isolated with a radiochemical purity of 98.0% with a specific radioactivity of 21.5 Ci/mmol.
Фермент cGAScGAS enzyme
Рекомбинантный ДНК-вектор был химически синтезирован для экспрессии усеченного фермента cGAS человека (остатки 161-522). Чтобы способствовать экспрессии и очистке, амино-конец содержит гексагистидиновую метку, метку SUMO и сайт расщепления TEV. Рекомбинантный фермент был сверхэкспрессирован в отдельных компетентных клетках ROSETTA™ 2(DE3) (Novagen). Аффинную очистку проводили с использованием HIS-Select HF Nickel Affinity Gel (Sigma) с последующей эксклюзионной хроматографией с использованием колонки Hi-Load 26/60 SUPERDEX200 (GE Healthcare) препаративной степени очистки. Фракции объединяли, концентрировали, быстро замораживали в жидком азоте и хранили при -80°С до возникновения необходимости.A recombinant DNA vector was chemically synthesized to express a truncated human cGAS enzyme (residues 161–522). To facilitate expression and purification, the amino terminus contains a hexahistidine tag, a SUMO tag, and a TEV cleavage site. The recombinant enzyme was overexpressed in single competent ROSETTA™ 2(DE3) cells (Novagen). Affinity purification was performed using HIS-Select HF Nickel Affinity Gel (Sigma) followed by size exclusion chromatography using a preparative grade Hi-Load 26/60 SUPERDEX200 column (GE Healthcare). Fractions were pooled, concentrated, quickly frozen in liquid nitrogen and stored at -80°C until needed.
Анализ связывания с фильтром 3H-cGAMP (HAQ STING)H-cGAMP Filter 3 Binding Assay (HAQ STING)
Способность соединений связывать STING количественно оценивается по их способности конкурировать с меченным тритием лигандом cGAMP за мембрану человеческого рецептора STING с использованием радиоактивного анализа связывания с фильтром. В анализе связывания используется рецептор STING, полученный из клеточных мембран Trichoplusia ni (Т.ni; Expression Systems, номер по каталогу 94-002F, www.expressionsystems.com), сверхэкспрессирующий полноразмерный HAQ STING и меченный тритием лиганд cGAMP.The ability of compounds to bind STING is quantified by their ability to compete with tritium-labeled cGAMP ligand for the human STING receptor membrane using a radioactive filter binding assay. The binding assay uses the STING receptor, derived from Trichoplusia ni cell membranes (T.ni; Expression Systems, catalog no. 94-002F, www.expressionsystems.com), overexpressing full-length HAQ STING and tritium-labeled cGAMP ligand.
Базовый протокол анализа с фильтром HAQ STING представляет собой следующее:The basic analysis protocol with the HAQ STING filter is as follows:
Соединения последовательно титровали с помощью Hamilton STARPlus CORE в 96-луночном планшете (Greiner, #651201) с использованием 1:3 десятиточечного формата дозовой зависимости. После приготовления соединения рабочая концентрация мембраны STING (SEQ. ID. No. 1) 2.2 мкг/мл была приготовлена путем разбавления концентрированной мембраны в буфере для анализа (1x PBS; Invitrogen #SH30028.02) и 7-х гомогенизации в гомогенизаторе Даунса с использованием ручного гомогенизатора тканей (Wheaton, #357546). 148 мкл приготовленной мембраны затем вручную добавляли в каждую лунку 96-луночного полипропиленового планшета с глубокими лунками (Fisher Scientific, #12-566-121). После добавления мембраны в соответствующие лунки добавляли либо 2 мкл титрованного тестируемого соединения, контроля DMSO (Sigma #276855), либо холодного контроля cGAMP с помощью BIOMEK FX. Затем соединение и мембрану предварительно инкубировали в течение 60 минут при комнатной температуре, чтобы дать возможность связываемому соединению прийти в равновесие. После уравновешивания готовили 8 нМ лиганда [3Н] c-GAMP путем разбавления в буфере для анализа, а затем вручную добавляли 50 мкл этого рабочего раствора в каждую лунку планшета для анализа. Затем планшеты инкубировали при комнатной температуре в течение 60 минут, и затем содержимое каждого аналитического планшета фильтровали через 96-луночный фильтровальный планшет GF/B (PerkinElmer, #6005250) с использованием харвестера клеток TomTec Mach III, снабженного 20 мМ буфера HEPES (Fisher Scientific, #BP299500). Затем фильтровальные планшеты высушивали при 55°С в течение 30 минут, используя сушильный шкаф под давлением, после чего в каждую лунку добавляли 30 мкл сцинтиллята Ultima Gold F. Затем измеряли уровни трития для каждой реакционной лунки, используя планшет-ридер PerkinElmer TopCount. После нормализации до контролей рассчитывали процент активности для каждой концентрации соединения путем измерения количества оставшейся радиоактивности. График процентной активности в зависимости от логарифма концентрации соединения строили с помощью 4-параметрического уравнения доза - эффект для расчета значений ЕС50.Compounds were titrated sequentially using Hamilton STARPlus CORE in a 96-well plate (Greiner, #651201) using a 1:3 ten-point dose response format. After compound preparation, a working concentration of 2.2 μg/mL for STING membrane (SEQ. ID. No. 1) was prepared by diluting the concentrated membrane in assay buffer (1x PBS; Invitrogen #SH30028.02) and homogenizing 7 times in a Dounce homogenizer using manual tissue homogenizer (Wheaton, #357546). 148 μL of the prepared membrane was then manually added to each well of a 96-well polypropylene deep well plate (Fisher Scientific, #12-566-121). After addition of the membrane, either 2 μl of titrated test compound, DMSO control (Sigma #276855), or cold cGAMP control using BIOMEK FX was added to the appropriate wells. The compound and membrane were then pre-incubated for 60 minutes at room temperature to allow the compound to be bound to equilibrate. After equilibration, 8 nM [ 3 H]c-GAMP ligand was prepared by diluting in assay buffer, and then 50 μl of this working solution was manually added to each well of the assay plate. The plates were then incubated at room temperature for 60 minutes, and then the contents of each assay plate were filtered through a 96-well GF/B filter plate (PerkinElmer, #6005250) using a TomTec Mach III cell harvester equipped with 20 mM HEPES buffer (Fisher Scientific, #BP299500). The filter plates were then dried at 55°C for 30 minutes using a pressure oven, after which 30 μl of Ultima Gold F scintillate was added to each well. Tritium levels were then measured for each reaction well using a PerkinElmer TopCount plate reader. After normalization to controls, the percent activity for each compound concentration was calculated by measuring the amount of radioactivity remaining. Percent activity versus logarithm of compound concentration was plotted using a 4-parameter dose-response equation to calculate EC50 values.
Конечные условия реакции представляли собой следующие:The final reaction conditions were as follows:
Генерация полноразмерного вируса STING (HAQ)Generation of full-length STING virus (HAQ)
Вирус STING был создан с использованием бакуловирусной системы на основе клеток насекомых. Клетки Sƒ21 Spodoptera frugiperda (Kempbio, Inc.) разводили до 5е5 клеток/мл в среде Sf-900II SFM (Life Technologies #10902088) без антибиотиков. Суспензию клеток добавляли в каждую лунку обработанного 6-луночного планшета (2 мл на лунку, всего 1е6 клеток), и клетки оставляли прикрепляться в течение, по меньшей мере, 30 минут. В это время 1 мл смеси для котрансфекции собирали путем соединения 500 нг ДНК HAQ STING [STING(l-379)R71H,G230A,H232R,R293Q-GG-AviTag-GS-HRV3C-HIS8/pBAC1] (заказной синтез Genewiz) с 1 мл среды Sf-900II SFM, содержащей 10 мкл реагента Cellfectin® II (Invitrogen #10362100) и 100 нг вирусного остова BestBac 2.0, линеаризованная ДНК бакуловируса с удаленными v-cath/chiA (Expression Systems #91-002). Смеси для трансфекции инкубировали в течение 30 мин. После инкубации осторожно удаляли среду из прикрепившихся клеток в 6-луночном планшете, добавляли 1 мл трансфекционных смесей (1 мл на лунку), и планшет помещали в увлажненный инкубатор при 27°С. На следующий день в каждую лунку 6-луночного планшета добавляли 1 мл среды Sf-900II SFM (без антибиотиков). После добавления среды клетки оставляли инкубироваться с ДНК (SEQ. ID. No. 2) при 27°С в течение 5-7 дней, чтобы получить запас вируса Р0. Для создания запасов вируса P1 0.5 мл супернатанта вируса Р0 добавляли к 50 мл неинфицированных клеток Sƒ21 (высеянных за день до инфицирования с плотностью 5×105 клеток/мл, чтобы обеспечить удвоение в течение одной ночи) в среде Sf-900II SFM, содержащей 5 мкг/мл гентамицина (Invitrogen #15710072). Затем инфицированные клетки инкубировали при 27°С в течение 3 дней, встряхивая при 110 об/мин (ATR Biotech Multitron Infors HT #AJ118). На 3 день подсчитывали культуры P1 с использованием ViCell XR (Beckman Coulter Life Sciences #383556), чтобы подтвердить, что произошло инфицирование (размер клеток на ≥3 мкм больше, чем у неинфицированных клеток, и жизнеспособность приблизительно 85-95%). Культуры собирали в конические пробирки на 50 мл и центрифугировали при 2000xg в течение 10 минут при 4°С. Супернатанты вируса Р1 сливали в чистые центрифужные пробирки объемом 50 мл, и оставшиеся клеточные осадки Р1 использовали для получения клеток насекомых, инфицированных бакуловирусом (BIIC). Среда для криоконсервации, содержащая среду Sf-900II SFM с 10% инактивированной нагреванием FBS, 10% DMSO (Sigma #D2650) и 5 мкг/мл гентамицина, была приготовлена и стерилизована через фильтр 0.22 мкМ непосредственно перед использованием. Клеточные осадки Р1 ресуспендировали до плотности 2е7 клеток/мл и аликвотировали в криопробирки (1 мл на пробирку). Криопробирки помещали в контейнеры для замораживания клеток на ночь при -80°С и на следующий день переносили в жидкий азот для длительного хранения. Для создания запаса вируса Р2 0.5 мл супернатанта вируса Р1 добавляли к 50 мл неинфицированных клеток Sƒ21 (высеянных за день до инфицирования с плотностью 5×105 клеток/мл, чтобы обеспечить удвоение в течение одной ночи) в среде Sf-900II SFM, содержащей 5 мкг/мл гентамицина. Эти клетки инкубировали при 27°С в течение 3 дней при встряхивании при 110 об/мин перед сбором запаса Р2 с центрифугированием при 2000xg в течение 10 минут при 4°С. Вирусные супернатанты Р2 сливали и отбрасывали, тогда как клеточные осадки Р2 использовали для генерации Р2 BIIC по тому же протоколу, который описан выше. Протокол генерации бакуловирусов был валидирован для последовательного получения BIIC Р1/Р2 с титрами 2е9 БОЕ/мл (2е7 клеток/мл × 100 БОЕ/клетку).The STING virus was created using an insect cell-based baculovirus system. Sƒ21 Spodoptera frugiperda cells (Kempbio, Inc.) were diluted to 5e5 cells/ml in Sf-900II SFM medium (Life Technologies #10902088) without antibiotics. The cell suspension was added to each well of the treated 6-well plate (2 ml per well, 16 cells total) and the cells were allowed to attach for at least 30 minutes. At this time, 1 ml of co-transfection mixture was collected by combining 500 ng of HAQ STING DNA [STING(l-379)R71H,G230A,H232R,R293Q-GG-AviTag-GS-HRV3C-HIS8/pBAC1] (custom Genewiz synthesis) with 1 ml Sf-900II SFM medium containing 10 μl Cellfectin® II reagent (Invitrogen #10362100) and 100 ng BestBac 2.0 viral backbone, linearized v-cath/chiA-deleted baculovirus DNA (Expression Systems #91-002). Transfection mixtures were incubated for 30 min. After incubation, medium was carefully removed from adherent cells in the 6-well plate, 1 ml of transfection mixtures was added (1 ml per well), and the plate was placed in a humidified incubator at 27°C. The next day, 1 ml of Sf-900II SFM medium (without antibiotics) was added to each well of a 6-well plate. After adding medium, cells were allowed to incubate with DNA (SEQ. ID. No. 2) at 27°C for 5-7 days to obtain a stock of P0 virus. To create P1 virus stocks, 0.5 ml of P0 virus supernatant was added to 50 ml of uninfected Sƒ21 cells (seeded the day before infection at a density of 5 × 10 5 cells/ml to ensure doubling within one night) in Sf-900II SFM medium containing 5 µg/ml gentamicin (Invitrogen #15710072). Infected cells were then incubated at 27°C for 3 days with shaking at 110 rpm (ATR Biotech Multitron Infors HT #AJ118). On day 3, P1 cultures were counted using ViCell XR (Beckman Coulter Life Sciences #383556) to confirm that infection had occurred (cell size ≥3 μm larger than uninfected cells and approximately 85–95% viability). Cultures were collected in 50 ml conical tubes and centrifuged at 2000xg for 10 minutes at 4°C. P1 virus supernatants were poured into clean 50-ml centrifuge tubes, and the remaining P1 cell pellets were used to prepare baculovirus-infected insect cells (BIIC). Cryopreservation medium containing Sf-900II SFM medium with 10% heat-inactivated FBS, 10% DMSO (Sigma #D2650) and 5 μg/ml gentamicin was prepared and filter sterilized with a 0.22 μM filter immediately before use. P1 cell pellets were resuspended to a density of 2e7 cells/ml and aliquoted into cryovials (1 ml per tube). Cryovials were placed in containers for freezing cells overnight at -80°C and the next day transferred to liquid nitrogen for long-term storage. To create a stock of P2 virus, 0.5 ml of P1 virus supernatant was added to 50 ml of uninfected Sƒ21 cells (seeded the day before infection at a density of 5 × 10 5 cells/ml to ensure doubling within one night) in Sf-900II SFM medium containing 5 µg/ml gentamicin. These cells were incubated at 27°C for 3 days with shaking at 110 rpm before collecting the P2 stock with centrifugation at 2000xg for 10 minutes at 4°C. P2 viral supernatants were decanted and discarded, whereas P2 cell pellets were used to generate P2 BIICs using the same protocol described above. The baculovirus generation protocol was validated to sequentially generate P1/P2 BIICs with titers of 2e9 PFU/mL (2e7 cells/mL × 100 PFU/cell).
Экспрессия полноразмерного STING (HAQ)Expression of full-length STING (HAQ)
Для образования мембран STING, BIIC Р1/Р2 амплифицировали в течение ночи путем добавления размороженных BIIC к клеткам Sƒ21, высеянным с плотностью 1.0×106 клеток/мл. Объем BIIC, использованный для заражения культуры, рассчитывали с использованием предполагаемого титра BIIC 2е9 БОЕ/мл для достижения MOI 10 при амплификации в течение ночи. После культивирования в течение ночи клетки подсчитывали на ViCell XR, чтобы подтвердить, что произошло инфицирование (размер клеток на ≥3 мкм больше; чем у неинфицированных клеток, и жизнеспособность примерно 80-90%). Объем инфицированных клеток Sƒ21 после амплификации на протяжении ночи, использованный для инфицирования крупномасштабной экспрессии Trichoplusia ni (T.ni; Expression Systems, номер по каталогу 94-002F, www.expressionsystems.com), высеянных с плотностью 1.0×106 в среде для культивирования клеток (ESF921 SFM, содержащей 5 мкг/мл гентамицина) при MOI - 2.0, рассчитывали на основе (100 БОЕ/инфицированная клетка Sƒ21). Клетки оставляли экспрессироваться в течение 48 часов при 27°С перед сбором клеточного осадка путем центрифугирования при 3,400xg в течение 10 минут при 4°С. Клетки Т. ni подсчитывали на ViCell XR для подтверждения наличия инфекции (размер клеток на ≥3 мкм больше, чем неинфицированных клеток, и жизнеспособность приблизительно 80-90%) до сбора клеток.To form STING membranes, P1/P2 BIICs were amplified overnight by adding thawed BIICs to Sƒ21 cells seeded at a density of 1.0×10 6 cells/ml. The volume of BIIC used to infect the culture was calculated using an estimated BIIC titer of 2e9 PFU/mL to achieve an MOI of 10 for overnight amplification. After overnight culture, cells were counted on a ViCell XR to confirm that infection had occurred (cell size ≥3 μm larger than uninfected cells and approximately 80–90% viability). Volume of infected Sƒ21 cells after overnight amplification used to infect large-scale expression Trichoplusia ni (T.ni; Expression Systems, catalog number 94-002F, www.expressionsystems.com), seeded at a density of 1.0 x 10 6 in culture medium cells (ESF921 SFM containing 5 μg/ml gentamicin) at an MOI of 2.0, calculated on the basis of (100 PFU/infected Sƒ21 cell). Cells were allowed to express for 48 hours at 27°C before collecting the cell pellet by centrifugation at 3,400xg for 10 minutes at 4°C. T. ni cells were counted on a ViCell XR to confirm the presence of infection (cell size ≥3 μm larger than uninfected cells and viability approximately 80–90%) before cell collection.
Генерация полноразмерных мембран STING (HAQ)Generation of full-length STING membranes (HAQ)
Исходные буферные реагенты:Initial buffer reagents:
1) 1 М HEPES рН 7.5, Teknova, номер по каталогу Н1035;1) 1 M HEPES pH 7.5, Teknova, catalog number H1035;
2) 5 М NaCl, Sigma Aldrich, номер по каталогу S5150-1L;2) 5 M NaCl, Sigma Aldrich, catalog number S5150-1L;
3) KCl, Sigma Aldrich, номер по каталогу 319309-500ML;3) KCl, Sigma Aldrich, catalog number 319309-500ML;
4) Таблетки ингибитора протеаз cOmplete без EDTA, Roche Diagnostics, номер по каталогу 11873580001;4) cOmplete protease inhibitor tablets without EDTA, Roche Diagnostics, catalog number 11873580001;
5) Бензоназа, универсальная нуклеаза. Pierce, номер по каталогу 88702.5) Benzonase, a universal nuclease. Pierce, part number 88702.
Буфер для лизиса [25 мМ HEPES рН 7.5, 10 мМ MgCl2, 20 мМ KCl, (бензоназа 1:5000, таблетка ингибитора протеаз cOmplete/50 мл)] добавляли к осадку клеток, экспрессирующих полноразмерный STING (HAQ), полученный выше, в 5 мл буфера для лизиса на грамм клеточного осадка. Осадок ресуспендировали и гомогенизировали двадцать раз с использованием гомогенизатора Wheaton Dounce для разрушения клеточной мембраны. Затем гомогенизированный лизат пропускали через микрофлюидизатор EMULSIFLEX-C5 при давлении, близком к 5000 PSI. Ресуспендированный осадок центрифугировали при 36,000 об/мин (100,000xg) в сверхвысокоскоростной центрифуге с ротором 45Ti в течение 45 минут при 4°С. Супернатант удаляли. Затем осадок ресуспендировали в промывочном буфере [(25 мМ HEPES рН 7.5, 1 мМ MgCl2, 20 мМ KCl, 1 М NaCl (таблетка ингибитора протеаз cOmplete/50 мл)] в объеме 50 мл осадка/центрифужную пробирку. Смесь осадка/промывочного буфера затем гомогенизировали, используя стеклянный гомогенизатор на льду (20 ходов), с последующим центрифугированием при 36,000 об/мин в течение 45 минут при 4°С. Супернатант удаляли. Стадию промывки повторяли еще раз. Полученную мембрану ресуспендировали в 20 мМ HEPES рН 7.5, 500 мМ NaCl, 10% глицерина, ингибиторах протеаз, не содержащих EDTA (1 таблетка/50 мл). Концентрацию белка измеряли с помощью анализа Брэдфорда (Bio-Rad Protein Assay, номер по каталогу 500-0006), и обогащение белками определяли с помощью SDS-PAGE и подтверждали анализом Вестерн-блоттинг. Ресуспендированные мембраны хранили при -80°С.Lysis buffer [25 mM HEPES pH 7.5, 10 mM MgCl 2 , 20 mM KCl, (benzonase 1:5000, cOmplete protease inhibitor tablet/50 ml)] was added to the pellet of cells expressing full-length STING (HAQ) obtained above, in 5 ml lysis buffer per gram of cell pellet. The pellet was resuspended and homogenized twenty times using a Wheaton Dounce homogenizer to disrupt the cell membrane. The homogenized lysate was then passed through an EMULSIFLEX-C5 microfluidizer at a pressure approaching 5000 PSI. The resuspended pellet was centrifuged at 36,000 rpm (100,000xg) in an ultra-high speed centrifuge with a 45Ti rotor for 45 minutes at 4°C. The supernatant was removed. The pellet was then resuspended in wash buffer [(25 mM HEPES pH 7.5, 1 mM MgCl 2 , 20 mM KCl, 1 M NaCl (cOmplete protease inhibitor tablet/50 ml)] in a volume of 50 ml pellet/centrifuge tube. Sediment/wash buffer mixture then homogenized using a glass homogenizer on ice (20 strokes), followed by centrifugation at 36,000 rpm for 45 minutes at 4° C. The supernatant was removed. The washing step was repeated again. The resulting membrane was resuspended in 20 mM HEPES pH 7.5, 500 mM NaCl, 10% glycerol, EDTA-free protease inhibitors (1 tablet/50 ml) Protein concentration was measured using a Bradford assay (Bio-Rad Protein Assay, part number 500-0006) and protein enrichment was determined using SDS -PAGE and confirmed by Western blot analysis.Resuspended membranes were stored at -80°C.
Аминокислотная последовательность полноразмерного HAQ STING [STING(1-379)R71H,G230A,H232R,R293Q-GG-AviTag-GS-HRV3C-HIS8]:Amino acid sequence of full-length HAQ STING [STING(1-379)R71H,G230A,H232R,R293Q-GG-AviTag-GS-HRV3C-HIS8]:
Последовательность плазмидной ДНК полноразмерного HAQ [STING(1-379)R71H,G230A,H232R,R293Q-GG-AviTag-GS-HRV3C-HIS8/pBAC1]:Plasmid DNA sequence of full-length HAQ [STING(1-379)R71H,G230A,H232R,R293Q-GG-AviTag-GS-HRV3C-HIS8/pBAC1]:
Некоторые соединения по настоящему описанию оценивали в анализе связывания HAQ STING in vitro, как описано выше. В следующей таблице приведены биологические данные для этих соединений в виде значений ЕС50.Certain compounds disclosed herein were evaluated in an in vitro HAQ STING binding assay as described above. The following table shows the biological data for these compounds in the form of EC50 values.
Анализ связывания с фильтром 3H-cGAMP (WT STING)H-cGAMP Filter 3 Binding Assay (WT STING)
Способность соединений связывать STING количественно оценивается по их способности конкурировать с меченным тритием лигандом cGAMP за мембрану человеческого рецептора STING с использованием радиоактивного анализа связывания с фильтром. В анализе связывания используется рецептор STING, полученный из клеточных мембран Trichoplusia ni (T.ni; Expression Systems, номер по каталогу 94-002F, www.expressionsystems.com). сверхэкспрессирующий полноразмерный WT STING и меченный тритием лиганд cGAMP.The ability of compounds to bind STING is quantified by their ability to compete with tritium-labeled cGAMP ligand for the human STING receptor membrane using a radioactive filter binding assay. The binding assay uses the STING receptor, derived from the cell membranes of Trichoplusia ni (T.ni; Expression Systems, catalog no. 94-002F, www.expressionsystems.com). overexpressing full-length WT STING and tritium-labeled cGAMP ligand.
Базовый протокол анализа с фильтром WT STING представляет собой следующее: 16 нМ лиганда [3Н] c-GAMP получали разбавлением в буфере для анализа, и 50 мкл этого рабочего раствора добавляли вручную в каждую лунку планшета для анализа. После добавления лиганда в соответствующие лунки с помощью BIOMEK FX добавляли 2 мкл либо титрованного тестируемого соединения, контроля DMSO (Sigma #276855), либо холодного контроля cGAMP. Серийно титрованное соединение получали на приборе Hamilton STARPlus CORE в 96-луночном планшете (Greiner, #651201) с использованием 1:3 десятиточечного формата дозовой зависимости. После добавления соединения рабочая концентрация 2.2 мкг/мл мембраны STING (SEQ. ID. No. 3) была приготовлена путем разбавления концентрированной мембраны в буфере для анализа (1x PBS; Invitrogen #SH30028.02) и 7-х гомогенизации в гомогенизаторе Даунса с использованием ручного гомогенизатора тканей (Wheaton, #357546). 148 мкл этой приготовленной мембраны затем вручную добавляли в каждую лунку 96-луночного полипропиленового планшета с глубокими лунками (Fisher Scientific, #12-566-121). Затем соединение, лиганд и мембрану инкубировали в течение 60 минут при комнатной температуре перед тем, как содержимое каждого аналитического планшета фильтровали через 96-луночный фильтровальный планшет GF/B (PerkinElmer, #6005250) с использованием харвестера клеток TomTec Mach III, снабженного 20 мМ буфера HEPES (Fisher Scientific, #BP299500). Затем фильтровальные планшеты высушивали при 55°С в течение 30 минут, используя сушильный шкаф под давлением VWR, после чего в каждую лунку добавляли 30 мкл сцинтиллята Ultima Gold F. Затем измеряли уровни трития для каждой реакционной лунки, используя планшет-ридер PerkinElmer TopCount.The basic WT STING filter assay protocol is as follows: 16 nM [ 3 H]c-GAMP ligand was prepared by dilution in assay buffer, and 50 μl of this working solution was manually added to each well of the assay plate. After adding ligand to the appropriate wells using BIOMEK FX, 2 μl of either titrated test compound, DMSO control (Sigma #276855), or cold cGAMP control was added. Serial titration of the compound was prepared on a Hamilton STARPlus CORE instrument in a 96-well plate (Greiner, #651201) using a 1:3 ten-point dose response format. After compound addition, a working concentration of 2.2 μg/mL STING membrane (SEQ. ID. No. 3) was prepared by diluting the concentrated membrane in assay buffer (1x PBS; Invitrogen #SH30028.02) and homogenizing 7 times in a Dounce homogenizer using manual tissue homogenizer (Wheaton, #357546). 148 μL of this prepared membrane was then manually added to each well of a 96-well polypropylene deep well plate (Fisher Scientific, #12-566-121). The compound, ligand and membrane were then incubated for 60 minutes at room temperature before the contents of each assay plate were filtered through a GF/B 96-well filter plate (PerkinElmer, #6005250) using a TomTec Mach III cell harvester supplied with 20 mM buffer HEPES (Fisher Scientific, #BP299500). The filter plates were then dried at 55°C for 30 minutes using a VWR pressure dryer, after which 30 μl of Ultima Gold F scintillate was added to each well. Tritium levels were then measured for each reaction well using a PerkinElmer TopCount plate reader.
После нормализации до контролей рассчитывали процент активности для каждой концентрации соединения путем измерения количества оставшейся радиоактивности. График процентной активности в зависимости от логарифма концентрации соединения строили с помощью 4-параметрического уравнения доза - эффект для расчета значений ЕС50.After normalization to controls, the percent activity for each compound concentration was calculated by measuring the amount of radioactivity remaining. Percent activity versus logarithm of compound concentration was plotted using a 4-parameter dose-response equation to calculate EC50 values.
Конечные условия реакции представляли собой следующие:The final reaction conditions were as follows:
Генерация полноразмерного вируса STING (WT)Generation of full-length STING virus (WT)
Вирус STING был создан с использованием бакуловирусной системы на основе клеток насекомых. Клетки Sƒ21 Spodoptera frugiperda (Kempbio, Inc.) разводили до 5е5 клеток/мл в среде Sf-900II SFM (Life Technologies #10902088) без антибиотиков. Суспензию клеток добавляли в каждую лунку обработанного 6-луночного планшета (2 мл на лунку, всего 1е6 клеток), и клетки оставляли прикрепляться в течение, по меньшей мере, 30 минут. В это время 1 мл смеси для котрансфекции собирали путем соединения 500 нг WT STING[STING(1-379)H232R-gg-AviTag-gs-HRV3C-HIS8/pBAC1] (заказной синтез Genewiz) с 1 мл среды Sf-900II SFM, содержащей 10 мкл реагента Cellfectin® II (Invitrogen #10362100) и 100 нг вирусного остова BestBac 2.0, линеаризованная ДНК бакуловируса с удаленными v-cath/chiA (Expression Systems #91-002). Смеси для трансфекции инкубировали в течение 30 мин. После инкубации осторожно удаляли среду из прикрепившихся клеток в 6-луночном планшете, добавляли 1 мл трансфекционных смесей (1 мл на лунку), и планшет помещали в увлажненный инкубатор при 27°С. На следующий день в каждую лунку 6-луночного планшета добавляли 1 мл среды Sf-900II SFM (без антибиотиков). После добавления среды клетки оставляли инкубироваться с ДНК [(SEQ. ID. No. 4) и линеаризованный вирусный остов BestBac 2.0] при 27°С в течение 5-7 дней, чтобы получить запас вируса Р0. Для создания запасов вируса Р1 0.5 мл супернатанта вируса Р0 добавляли к 50 мл не инфицированных клеток Sƒ21 (высеянных за день до инфицирования с плотностью 5×105 клеток/мл, чтобы обеспечить удвоение в течение одной ночи) в среде Sf-900II SFM, содержащей 5 мкг/мл гентамицина (Invitrogen #15710072). Затем инфицированные клетки инкубировали при 27°С в течение 3 дней, встряхивая при 110 об/мин (ATR Biotech Multitron Infors HT #AJ118). На 3 день подсчитывали культуры Р1 с использованием ViCell XR (Beckman Coulter Life Sciences #383556), чтобы подтвердить, что произошло инфицирование (размер клеток на ≥3 мкм больше, чем у неинфицированных клеток, и жизнеспособность приблизительно 85-95%). Культуры собирали в конические пробирки на 50 мл и центрифугировали при 2000xg в течение 10 минут при 4°С. Супернатанты вируса Р1 сливали в чистые центрифужные пробирки объемом 50 мл, и оставшиеся клеточные осадки Р1 использовали для получения клеток насекомых, инфицированных бакуловирусом (BIIC). Среда для криоконсервации; содержащая среду Sf-900II SFM с 10% инактивированной нагреванием FBS; 10% DMSO (Sigma #D2650) и 5 мкг/мл гентамицина, была приготовлена и стерилизована через фильтр 0.22 мкМ непосредственно перед использованием. Клеточные осадки Р1 ресуспендировали до плотности 2е7 клеток/мл и аликвотировали в криопробирки (1 мл на пробирку). Криопробирки помещали в контейнеры для замораживания клеток на ночь при -80°С и на следующий день переносили в жидкий азот для длительного хранения. Для создания запаса вируса Р2 0.5 мл супернатанта вируса Р1 добавляли к 50 мл неинфицированных клеток Sƒ21 (высеянных за день до инфицирования с плотностью 5×105 клеток/мл, чтобы обеспечить удвоение в течение одной ночи) в среде Sf-900II SFM, содержащей 5 мкг/мл гентамицина. Эти клетки инкубировали при 27°С в течение 3 дней при встряхивании при 110 об/мин перед сбором запаса Р2 с центрифугированием при 2000xg в течение 10 минут при 4°С. Вирусные супернатанты Р2 сливали и отбрасывали, тогда как клеточные осадки Р2 использовали для генерации Р2 BIIC по тому же протоколу, который описан выше. Протокол генерации бакуловирусов был валидирован для последовательного получения BIIC Р1/Р2 с титрами 2е9 БОЕ/мл (2е7 клеток/мл × 100 БОЕ/клетку).The STING virus was created using an insect cell-based baculovirus system. Sƒ21 Spodoptera frugiperda cells (Kempbio, Inc.) were diluted to 5e5 cells/ml in Sf-900II SFM medium (Life Technologies #10902088) without antibiotics. The cell suspension was added to each well of the treated 6-well plate (2 ml per well, 16 cells total) and the cells were allowed to attach for at least 30 minutes. At this time, 1 ml of co-transfection mixture was collected by combining 500 ng of WT STING[STING(1-379)H232R-gg-AviTag-gs-HRV3C-HIS8/pBAC1] (custom synthesis Genewiz) with 1 ml of Sf-900II SFM medium. containing 10 μl of Cellfectin® II reagent (Invitrogen #10362100) and 100 ng of BestBac 2.0 viral backbone, linearized v-cath/chiA-deleted baculovirus DNA (Expression Systems #91-002). Transfection mixtures were incubated for 30 min. After incubation, medium was carefully removed from adherent cells in the 6-well plate, 1 ml of transfection mixtures was added (1 ml per well), and the plate was placed in a humidified incubator at 27°C. The next day, 1 ml of Sf-900II SFM medium (without antibiotics) was added to each well of a 6-well plate. After addition of medium, cells were allowed to incubate with DNA [(SEQ. ID. No. 4) and linearized BestBac 2.0 viral backbone] at 27°C for 5-7 days to obtain a stock of P0 virus. To create P1 virus stocks, 0.5 ml of P0 virus supernatant was added to 50 ml of uninfected Sƒ21 cells (seeded the day before infection at a density of 5 × 10 5 cells/ml to ensure doubling within one night) in Sf-900II SFM medium containing 5 µg/ml gentamicin (Invitrogen #15710072). Infected cells were then incubated at 27°C for 3 days with shaking at 110 rpm (ATR Biotech Multitron Infors HT #AJ118). On day 3, P1 cultures were counted using ViCell XR (Beckman Coulter Life Sciences #383556) to confirm that infection had occurred (cell size ≥3 μm larger than uninfected cells and approximately 85-95% viability). Cultures were collected in 50 ml conical tubes and centrifuged at 2000xg for 10 minutes at 4°C. P1 virus supernatants were poured into clean 50-ml centrifuge tubes, and the remaining P1 cell pellets were used to prepare baculovirus-infected insect cells (BIIC). Medium for cryopreservation; containing Sf-900II SFM medium with 10% heat-inactivated FBS; 10% DMSO (Sigma #D2650) and 5 µg/ml gentamicin were prepared and filter sterilized with a 0.22 µM filter immediately before use. P1 cell pellets were resuspended to a density of 2e7 cells/ml and aliquoted into cryovials (1 ml per tube). Cryovials were placed in containers for freezing cells overnight at -80°C and the next day transferred to liquid nitrogen for long-term storage. To create a stock of P2 virus, 0.5 ml of P1 virus supernatant was added to 50 ml of uninfected Sƒ21 cells (seeded the day before infection at a density of 5 × 10 5 cells/ml to ensure doubling within one night) in Sf-900II SFM medium containing 5 µg/ml gentamicin. These cells were incubated at 27°C for 3 days with shaking at 110 rpm before collecting the P2 stock with centrifugation at 2000xg for 10 minutes at 4°C. P2 viral supernatants were decanted and discarded, whereas P2 cell pellets were used to generate P2 BIICs using the same protocol described above. The baculovirus generation protocol was validated to sequentially generate P1/P2 BIICs with titers of 2e9 PFU/mL (2e7 cells/mL × 100 PFU/cell).
Экспрессия полноразмерного STING (WT)Expression of full-length STING (WT)
Для образования мембран STING, BIIC Р1/Р2 амплифицировали в течение ночи путем добавления размороженных BIIC к клеткам Sƒ21, высеянным с плотностью 1.0×106 клеток/мл. Объем BIIC, использованный для заражения культуры, рассчитывали с использованием предполагаемого титра BIIC 2е9 БОЕ/мл для достижения MOI 10 при амплификации в течение ночи. После культивирования в течение ночи клетки подсчитывали на ViCell XR, чтобы подтвердить; что произошло инфицирование (размер клеток на ≥3 мкм больше; чем у неинфицированных клеток; и жизнеспособность примерно 80-90%). Объем инфицированных клеток Sƒ21 после амплификации на протяжении ночи, использованный для инфицирования крупномасштабной экспрессии Trichoplusia ni (T.ni; Expression Systems, номер по каталогу 94-002F, www.expressionsystems.com), высеянных с плотностью 1.0×106 в среде для культивирования клеток (ESF921 SFM, содержащей 5 мкг/мл гентамицина) при MOI=2.0, рассчитывали на основе (100 БОЕ/инфицированная клетка Sƒ21). Клетки оставляли экспрессироваться в течение 48 часов при 27°С перед сбором клеточного осадка путем центрифугирования при 3,400xg в течение 10 минут при 4°С. Клетки Т. ni подсчитывали на ViCell XR для подтверждения наличия инфекции (размер клеток на ≥3 мкм больше, чем неинфицированных клеток, и жизнеспособность приблизительно 80-90%) до сбора клеток.To form STING membranes, P1/P2 BIICs were amplified overnight by adding thawed BIICs to Sƒ21 cells seeded at a density of 1.0×10 6 cells/ml. The volume of BIIC used to infect the culture was calculated using an estimated BIIC titer of 2e9 PFU/mL to achieve an MOI of 10 for overnight amplification. After overnight culture, cells were counted on ViCell XR to confirm; that infection has occurred (cell size ≥3 µm larger than uninfected cells; and viability approximately 80-90%). Volume of infected Sƒ21 cells after overnight amplification used to infect large-scale expression Trichoplusia ni (T.ni; Expression Systems, catalog number 94-002F, www.expressionsystems.com), seeded at a density of 1.0 x 10 6 in culture medium cells (ESF921 SFM containing 5 μg/ml gentamicin) at MOI=2.0, calculated on the basis of (100 PFU/infected Sƒ21 cell). Cells were allowed to express for 48 hours at 27°C before collecting the cell pellet by centrifugation at 3,400xg for 10 minutes at 4°C. T. ni cells were counted on a ViCell XR to confirm the presence of infection (cell size ≥3 μm larger than uninfected cells and viability approximately 80–90%) before cell collection.
Генерация полноразмерной мембраны STING (WT)Generation of full-length STING membrane (WT)
Исходные буферные реагенты:Initial buffer reagents:
1) 1 М HEPES рН 7.5, Teknova, номер по каталогу Н1035;1) 1 M HEPES pH 7.5, Teknova, catalog number H1035;
2) 5 М NaCl, Sigma Aldrich, номер по каталогу S5150-1L;2) 5 M NaCl, Sigma Aldrich, catalog number S5150-1L;
3) KCl, Sigma Aldrich, номер по каталогу 319309-500ML;3) KCl, Sigma Aldrich, catalog number 319309-500ML;
4) Таблетки ингибитора протеаз cOmplete без EDTA, Roche Diagnostics, номер по каталогу 11873580001;4) cOmplete protease inhibitor tablets without EDTA, Roche Diagnostics, catalog number 11873580001;
5) Бензоназа, универсальная нуклеаза. Pierce, номер по каталогу 88702.5) Benzonase, a universal nuclease. Pierce, part number 88702.
Буфер для лизиса [25 мМ HEPES рН 7.5, 10 мМ MgCl2, 20 мМ KCl, (бензоназа 1:5000, таблетка ингибитора протеаз cOmplete/50 мл)] добавляли к осадку клеток, экспрессирующих полноразмерный STING (WT), полученный выше, в 5 мл буфера для лизиса на грамм клеточного осадка. Осадок ресуспендировали и гомогенизировали двадцать раз с использованием гомогенизатора Wheaton Dounce для разрушения клеточной мембраны. Затем гомогенизированный лизат пропускали через микрофлюидизатор Emulsiflex-C5 при давлении, близком к 5000 PSI. Ресуспендированный осадок центрифугировали при 36,000 об/мин (100.000xg) в сверхвысокоскоростной центрифуге с ротором 45Ti в течение 45 минут при 4°С. Супернатант удаляли. Затем осадок ресуспендировали в промывочном буфере [(25 мМ HEPES рН 7.5, 1 мМ MgCl2, 20 мМ KCl, 1 М NaCl (таблетка ингибитора протеаз cOmplete/50 мл)] в объеме 50 мл осадка/центрифужную пробирку. Смесь осадка/промывочного буфера затем гомогенизировали, используя стеклянный гомогенизатор на льду (20 ходов), с последующим центрифугированием при 36,000 об/мин в течение 45 минут при 4°С. Супернатант удаляли. Стадию промывки повторяли еще раз. Полученную мембрану ресуспендировали в 20 мМ HEPES рН 7.5, 500 мМ NaCl, 10% глицерина, ингибиторах протеаз, не содержащих EDTA (1 таблетка/50 мл). Концентрацию белка измеряли с помощью анализа Брэдфорда (Bio-Rad Protein Assay, номер по каталогу 500-0006), и обогащение белками определяли с помощью SDS-PAGE и подтверждали анализом Вестерн-блоттинг. Ресуспендированные мембраны хранили при -80°С.Lysis buffer [25 mM HEPES pH 7.5, 10 mM MgCl 2 , 20 mM KCl, (benzonase 1:5000, cOmplete protease inhibitor tablet/50 ml)] was added to the pellet of cells expressing full-length STING (WT) obtained above, in 5 ml lysis buffer per gram of cell pellet. The pellet was resuspended and homogenized twenty times using a Wheaton Dounce homogenizer to disrupt the cell membrane. The homogenized lysate was then passed through an Emulsiflex-C5 microfluidizer at a pressure approaching 5000 PSI. The resuspended pellet was centrifuged at 36,000 rpm (100,000xg) in an ultra-high-speed centrifuge with a 45Ti rotor for 45 minutes at 4°C. The supernatant was removed. The pellet was then resuspended in wash buffer [(25 mM HEPES pH 7.5, 1 mM MgCl 2 , 20 mM KCl, 1 M NaCl (cOmplete protease inhibitor tablet/50 ml)] in a volume of 50 ml pellet/centrifuge tube. Sediment/wash buffer mixture then homogenized using a glass homogenizer on ice (20 strokes), followed by centrifugation at 36,000 rpm for 45 minutes at 4° C. The supernatant was removed. The washing step was repeated again. The resulting membrane was resuspended in 20 mM HEPES pH 7.5, 500 mM NaCl, 10% glycerol, EDTA-free protease inhibitors (1 tablet/50 ml) Protein concentration was measured using a Bradford assay (Bio-Rad Protein Assay, part number 500-0006) and protein enrichment was determined using SDS -PAGE and confirmed by Western blot analysis.Resuspended membranes were stored at -80°C.
Аминокислотная последовательность полноразмерного STING WT[STING(1-379)H232R-gg-AviTag-gs-HRV3C-HIS8]:Amino acid sequence of full-length STING WT[STING(1-379)H232R-gg-AviTag-gs-HRV3C-HIS8]:
Последовательность плазмидной ДНК полноразмерного WT STING [STING(1-379)H232R-gg-AviTag-gs-HRV3C-HIS8/pBAC1]:Plasmid DNA sequence of full-length WT STING [STING(1-379)H232R-gg-AviTag-gs-HRV3C-HIS8/pBAC1]:
Некоторые соединения по настоящему описанию оценивали в анализе связывания WT STING in vitro, как описано выше. В следующей таблице приведены биологические данные для этих соединений в виде значений ЕС50.Certain compounds disclosed herein were evaluated in an in vitro WT STING binding assay as described above. The following table shows the biological data for these compounds in the form of EC50 values.
Секреция IFN-β в культуре клеток ТНР1 (5 ч)Secretion of IFN-β in THP1 cell culture (5 h)
Способность соединений стимулировать секрецию интерферона-бета из клеток ТНР1 измеряли с использованием набора IFN-β AlphaLISA человека (Perkin Elmer, номер по каталогу AL265F). Базовый протокол представляет собой следующее: Акустический дозатор Labcyte Echo 550 использовали для переноса 120 нл соединения, растворенного в DMSO, в лунки пустого стерильного 384-луночного микропланшета (Corning, номер по каталогу 3712). Клетки ТНР1 (American Type Culture Collection (Американская коллекция типовых культур), номер по каталогу TIB202), предварительно замороженные в среде для восстановления (Life Technologies, номер по каталогу 12648-010), размораживали и сразу же разводили 10-кратно в среде для анализа при 37°С (RPMI 1640+L-глутамин & феноловый красный, Life Technologies, номер по каталогу 11875-085; 0.5% инактивированной нагреванием фетальной бычьей сыворотки, Sigma Aldrich, номер по каталогу F4135; 1 мМ пирувата натрия, Life Technologies, номер по каталогу 11360-070; 1х неотносящихся к незаменимым аминокислот; Life Technologies, номер по каталогу 11140-050). Жизнеспособность и количество клеток определяли с использованием счетчика клеток Beckman Coulter V-Cell XR. Суспензию клеток центрифугировали при 200×g в течение 5 мин при комнатной температуре. Клетки ресуспендировали до плотности 0.8×106 /мл в аналитической среде при 37°С. Последующие переносы жидкости выполнялись либо с помощью электронной многоканальной пипетки Matrix, либо с помощью автоматизированной платформы для работы с жидкостями Agilent Bravo. Анализ начинали с внесения 40 мкл предварительно приготовленной клеточной суспензии в лунки планшета, содержащего соединения. После 5 часов инкубации при 37°С и 5% СО2 в увлажненной атмосфере планшет с клетками и соединениями центрифугировали при 200×g в течение 5 минут при комнатной температуре. Из каждой лунки 5 мкл супернатанта переносили в соответствующие лунки белого 384-луночного планшета (Perkin Elmer, номер по каталогу №6005620). В эти лунки, содержащие супернатант, добавляли 10 мкл 5× акцепторных гранул с анти-аналитом (50 мкг/мл буфера AlphaLISA HiBlock) и инкубировали в течение 30 минут при комнатной температуре, встряхивая на орбитальном шейкере для планшетов. В каждую лунку добавляли 10 мкл 5× биотинилированного антитела против анализируемого вещества (5 нМ в буфере AlphaLISA HiBlock) и инкубировали на орбитальном шейкере для планшетов в течение 60 минут при комнатной температуре или на протяжении ночи при 4°С. В каждую лунку добавляли 25 мкл 2× донорных гранул SA (80 мкг/мл в буфере AlphaLISA HiBlock) и инкубировали в течение 30-45 мин при комнатной температуре в темноте, встряхивая на орбитальном шейкере для планшетов. Затем планшет считывали на Perkin Elmer Envision (λех=680 нм, λem=570 нм). Эффект в процентах сигнала AlphaLISA при каждой концентрации соединения рассчитывали на основе положительных контролей 30 мкМ cGAMP и отрицательных контролей 0.3% DMSO. График зависимости эффекта в процентах от логарифма концентрации соединения соответствовал 4-параметрическому уравнению концентрация-эффект для расчета значений ЕС50. Исследуемые соединения тестировали при концентрациях 30000, 10000, 3333, 1111, 370.4, 123.4, 41.2, 13.7, 4.6 и 1.5 нМ с 0.3% остаточного DMSO. Контрольное соединение, cGAMP, тестировали при концентрациях 100000, 33333, 11111, 3704, 1235, 412, 137, 46 и 15 нМ с 0.3% остаточного DMSO. Соединения по настоящему описанию оценивали на секрецию IFN-β в культуре клеток ТНР1, как описано выше. В следующей таблице представлены биологические данные для этих соединений в виде процента активации по отношению к 2'3'-cGAMP при концентрации 30 мкМ.The ability of the compounds to stimulate the secretion of interferon-beta from THP1 cells was measured using a human IFN-beta AlphaLISA kit (Perkin Elmer, catalog number AL265F). The basic protocol is as follows: A Labcyte Echo 550 acoustic pipette was used to transfer 120 nL of compound dissolved in DMSO into the wells of an empty, sterile 384-well microplate (Corning part number 3712). THP1 cells (American Type Culture Collection, cat. no. TIB202), previously frozen in recovery medium (Life Technologies, cat. no. 12648-010), were thawed and immediately diluted 10-fold in assay medium. at 37°C (RPMI 1640+L-Glutamine & Phenol Red, Life Technologies, part number 11875-085; 0.5% heat inactivated fetal bovine serum, Sigma Aldrich, part number F4135; 1 mM sodium pyruvate, Life Technologies, part number according to catalog 11360-070; 1x non-essential amino acids; Life Technologies, catalog number 11140-050). Cell viability and number were determined using a Beckman Coulter V-Cell XR cell counter. The cell suspension was centrifuged at 200×g for 5 min at room temperature. Cells were resuspended to a density of 0.8×10 6 /ml in analytical medium at 37°C. Subsequent liquid transfers were performed using either the Matrix electronic multichannel pipette or the Agilent Bravo automated liquid handling platform. The assay began by adding 40 μl of the pre-prepared cell suspension into the wells of the plate containing the compounds. After 5 hours of incubation at 37°C and 5% CO 2 in a humidified atmosphere, the plate with cells and compounds was centrifuged at 200×g for 5 minutes at room temperature. From each well, 5 μl of supernatant was transferred to the corresponding wells of a white 384-well plate (Perkin Elmer, cat. no. 6005620). To these wells containing the supernatant, 10 μl of 5× anti-analyte acceptor beads (50 μg/ml AlphaLISA HiBlock buffer) was added and incubated for 30 minutes at room temperature with shaking on an orbital plate shaker. 10 μl of 5× biotinylated anti-analyte antibody (5 nM in AlphaLISA HiBlock buffer) was added to each well and incubated on an orbital plate shaker for 60 minutes at room temperature or overnight at 4°C. 25 μl of 2× SA donor beads (80 μg/ml in AlphaLISA HiBlock buffer) was added to each well and incubated for 30–45 min at room temperature in the dark with shaking on an orbital plate shaker. The plate was then read on a Perkin Elmer Envision (λex=680 nm, λem=570 nm). The percentage effect of AlphaLISA signal at each compound concentration was calculated based on positive controls of 30 μM cGAMP and negative controls of 0.3% DMSO. A plot of effect as a percentage of the logarithm of compound concentration was fitted to a 4-parameter concentration-effect equation to calculate EC50 values. The test compounds were tested at concentrations of 30000, 10000, 3333, 1111, 370.4, 123.4, 41.2, 13.7, 4.6 and 1.5 nM with 0.3% residual DMSO. The control compound, cGAMP, was tested at concentrations of 100,000, 33333, 11111, 3704, 1235, 412, 137, 46 and 15 nM with 0.3% residual DMSO. The compounds herein were assessed for IFN-β secretion in cultured THP1 cells as described above. The following table presents the biological data for these compounds as percent activation relative to 2'3'-cGAMP at a concentration of 30 μM.
Следует понимать, что целый ряд из рассмотренных выше и других отличительных признаков и функций или их альтернативы желательно могут быть объединены во многие другие системы или заявки. Также будет понятно, что целый ряд в настоящее время непредвиденных или непредусмотренных альтернатив, модификаций, вариаций или улучшений в них может быть впоследствии сделан специалистами в данной области техники, и также предполагается, что они охватываются следующей формулой изобретения.It should be understood that a number of the above and other features and functions, or alternatives thereof, may desirably be combined into many other systems or applications. It will also be understood that a number of currently unforeseen or unforeseen alternatives, modifications, variations or improvements thereto may subsequently be made by those skilled in the art and are also intended to be covered by the following claims.
Claims (108)
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201862652018P | 2018-04-03 | 2018-04-03 | |
| US62/652,018 | 2018-04-03 | ||
| US201962809956P | 2019-02-25 | 2019-02-25 | |
| US62/809,956 | 2019-02-25 | ||
| PCT/US2019/025088 WO2019195124A1 (en) | 2018-04-03 | 2019-04-01 | Benzothiophenes and related compounds as sting agonists |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2020132585A RU2020132585A (en) | 2022-05-06 |
| RU2806274C2 true RU2806274C2 (en) | 2023-10-30 |
Family
ID=
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2811736C1 (en) * | 2023-11-10 | 2024-01-16 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр онкологии имени Н.Н. Блохина" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина" Минздрава России) | New chemical compound that stimulates production of human interferon-beta by activating sting signaling pathway and method of its preparation |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2015077354A1 (en) * | 2013-11-19 | 2015-05-28 | The University Of Chicago | Use of sting agonist as cancer treatment |
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2015077354A1 (en) * | 2013-11-19 | 2015-05-28 | The University Of Chicago | Use of sting agonist as cancer treatment |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| GOPINATH P. et al., As many as six tandem reactions in one step! Unprecedented formation of highly functionalized benzothiophenes, Chem. Commun., 2009, v. 46, p. 7131-7133. ИСАКОВ Д.В. и др., Циклоферон: механизмы действия и новые перспективы применения в клинической практике, Фармакотерапия, Клиническая медицина, 2015, N 9, с. 46-51. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2811736C1 (en) * | 2023-11-10 | 2024-01-16 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр онкологии имени Н.Н. Блохина" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина" Минздрава России) | New chemical compound that stimulates production of human interferon-beta by activating sting signaling pathway and method of its preparation |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP7326319B2 (en) | Benzothiophenes and Related Compounds as STING Agonists | |
| AU2017339418B2 (en) | Benzo[b]thiophene compounds as sting agonists | |
| US11702430B2 (en) | Aza-benzothiophene compounds as STING agonists | |
| US10501458B2 (en) | Substituted bicyclic fused ring compounds as indoleamine-2,3-dioxygenase inhibitors | |
| US20230074558A1 (en) | Dimeric compounds as sting agonists | |
| EP3891166A1 (en) | Cyclic di-nucleotide compounds as sting agonists | |
| RU2806274C2 (en) | Benzothiophenes and related compounds as sting agonists | |
| US20220024964A1 (en) | Cyclic Di-Nucleotide Compounds as STING Agonists |