RU2808266C1 - Способ прогнозирования течения беременности и определения степени риска нарушений развития эмбриона/плода и рождения ребенка с различной не генетической патологией - Google Patents
Способ прогнозирования течения беременности и определения степени риска нарушений развития эмбриона/плода и рождения ребенка с различной не генетической патологией Download PDFInfo
- Publication number
- RU2808266C1 RU2808266C1 RU2022119270A RU2022119270A RU2808266C1 RU 2808266 C1 RU2808266 C1 RU 2808266C1 RU 2022119270 A RU2022119270 A RU 2022119270A RU 2022119270 A RU2022119270 A RU 2022119270A RU 2808266 C1 RU2808266 C1 RU 2808266C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- pregnancy
- damps
- embryo
- fraction
- fetus
- Prior art date
Links
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 title claims abstract description 106
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 title claims abstract description 44
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 37
- 230000007170 pathology Effects 0.000 title claims description 11
- 230000013020 embryo development Effects 0.000 title description 2
- 206010012559 Developmental delay Diseases 0.000 title 1
- 230000008175 fetal development Effects 0.000 title 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 title 1
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 claims abstract description 46
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 22
- 208000012239 Developmental disease Diseases 0.000 claims abstract description 13
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 27
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 26
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 26
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 24
- 230000006378 damage Effects 0.000 claims description 20
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 claims description 9
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 claims description 9
- 108010033040 Histones Proteins 0.000 claims description 9
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 7
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 7
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 claims description 7
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 claims description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 6
- KISWVXRQTGLFGD-UHFFFAOYSA-N 2-[[2-[[6-amino-2-[[2-[[2-[[5-amino-2-[[2-[[1-[2-[[6-amino-2-[(2,5-diamino-5-oxopentanoyl)amino]hexanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)p Chemical compound C1CCN(C(=O)C(CCCN=C(N)N)NC(=O)C(CCCCN)NC(=O)C(N)CCC(N)=O)C1C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C(=O)NC(CC(C)C)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 KISWVXRQTGLFGD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 102000047918 Myelin Basic Human genes 0.000 claims description 4
- 101710107068 Myelin basic protein Proteins 0.000 claims description 4
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 claims description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims description 3
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 3
- 102000013674 S-100 Human genes 0.000 claims description 3
- 108700021018 S100 Proteins 0.000 claims description 3
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 3
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 claims description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 3
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 claims description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 29
- 230000003862 health status Effects 0.000 abstract description 23
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 abstract description 19
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 abstract description 18
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 238000005457 optimization Methods 0.000 abstract 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 28
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 27
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 22
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 18
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 18
- 230000036541 health Effects 0.000 description 17
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 16
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 11
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 10
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 10
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 102000004954 Biglycan Human genes 0.000 description 8
- 108090001138 Biglycan Proteins 0.000 description 8
- 230000035606 childbirth Effects 0.000 description 8
- 230000008569 process Effects 0.000 description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 7
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 7
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 6
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 6
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 6
- FPJHWYCPAOPVIV-VOZMEZHOSA-N (2R,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5R,6R)-5-acetamido-2-(hydroxymethyl)-6-methoxy-3-sulfooxyoxan-4-yl]oxy-4,5-dihydroxy-3-methoxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CO[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@H](O[C@@H]2O[C@H]([C@@H](OC)[C@H](O)[C@H]2O)C(O)=O)[C@H]1NC(C)=O FPJHWYCPAOPVIV-VOZMEZHOSA-N 0.000 description 5
- 229920000045 Dermatan sulfate Polymers 0.000 description 5
- 102100021816 Splicing factor 3B subunit 3 Human genes 0.000 description 5
- 101710190370 Splicing factor 3B subunit 3 Proteins 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 5
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 5
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 5
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 5
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 5
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- 102000016611 Proteoglycans Human genes 0.000 description 4
- 108010067787 Proteoglycans Proteins 0.000 description 4
- 108010060804 Toll-Like Receptor 4 Proteins 0.000 description 4
- 102100039360 Toll-like receptor 4 Human genes 0.000 description 4
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 4
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 4
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 4
- 101710183446 C-type lectin domain family 4 member E Proteins 0.000 description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 3
- 108010000684 Matrix Metalloproteinases Proteins 0.000 description 3
- 102000002274 Matrix Metalloproteinases Human genes 0.000 description 3
- 102100030216 Matrix metalloproteinase-14 Human genes 0.000 description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 3
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 3
- 102000019361 Syndecan Human genes 0.000 description 3
- 108050006774 Syndecan Proteins 0.000 description 3
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 3
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 3
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 3
- 229940051593 dermatan sulfate Drugs 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 3
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 3
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 201000011461 pre-eclampsia Diseases 0.000 description 3
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 3
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 3
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 3
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 3
- SQDAZGGFXASXDW-UHFFFAOYSA-N 5-bromo-2-(trifluoromethoxy)pyridine Chemical compound FC(F)(F)OC1=CC=C(Br)C=N1 SQDAZGGFXASXDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000051388 ADAMTS1 Human genes 0.000 description 2
- 108091005660 ADAMTS1 Proteins 0.000 description 2
- 206010000234 Abortion spontaneous Diseases 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 102100021943 C-C motif chemokine 2 Human genes 0.000 description 2
- 101710155857 C-C motif chemokine 2 Proteins 0.000 description 2
- 102100028699 C-type lectin domain family 4 member E Human genes 0.000 description 2
- 241000606161 Chlamydia Species 0.000 description 2
- 229920001287 Chondroitin sulfate Polymers 0.000 description 2
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002306 Glycocalyx Polymers 0.000 description 2
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 description 2
- 102000002812 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010004889 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102100037907 High mobility group protein B1 Human genes 0.000 description 2
- 101710168537 High mobility group protein B1 Proteins 0.000 description 2
- 102000003964 Histone deacetylase Human genes 0.000 description 2
- 108090000353 Histone deacetylase Proteins 0.000 description 2
- 101001011906 Homo sapiens Matrix metalloproteinase-14 Proteins 0.000 description 2
- 101000866795 Homo sapiens Non-histone chromosomal protein HMG-14 Proteins 0.000 description 2
- 101000831567 Homo sapiens Toll-like receptor 2 Proteins 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010056254 Intrauterine infection Diseases 0.000 description 2
- 102100031353 Non-histone chromosomal protein HMG-14 Human genes 0.000 description 2
- 208000002787 Pregnancy Complications Diseases 0.000 description 2
- 208000005107 Premature Birth Diseases 0.000 description 2
- 206010036590 Premature baby Diseases 0.000 description 2
- 102100030416 Stromelysin-1 Human genes 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 2
- 102100024333 Toll-like receptor 2 Human genes 0.000 description 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 2
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 2
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 2
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 229940059329 chondroitin sulfate Drugs 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 210000004517 glycocalyx Anatomy 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 2
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 description 2
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 description 2
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 2
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 2
- 208000015994 miscarriage Diseases 0.000 description 2
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 2
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- ZNNZYHKDIALBAK-UHFFFAOYSA-M potassium thiocyanate Chemical compound [K+].[S-]C#N ZNNZYHKDIALBAK-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229940116357 potassium thiocyanate Drugs 0.000 description 2
- 208000012113 pregnancy disease Diseases 0.000 description 2
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 2
- 208000000995 spontaneous abortion Diseases 0.000 description 2
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 2
- 230000008359 toxicosis Effects 0.000 description 2
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 2
- LOGFVTREOLYCPF-KXNHARMFSA-N (2s,3r)-2-[[(2r)-1-[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-hydroxybutanoic acid Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)CCCCN LOGFVTREOLYCPF-KXNHARMFSA-N 0.000 description 1
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- VKUYLANQOAKALN-UHFFFAOYSA-N 2-[benzyl-(4-methoxyphenyl)sulfonylamino]-n-hydroxy-4-methylpentanamide Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1S(=O)(=O)N(C(CC(C)C)C(=O)NO)CC1=CC=CC=C1 VKUYLANQOAKALN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GHCZTIFQWKKGSB-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid;phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O GHCZTIFQWKKGSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100026802 72 kDa type IV collagenase Human genes 0.000 description 1
- 102000051403 ADAMTS4 Human genes 0.000 description 1
- 108091005664 ADAMTS4 Proteins 0.000 description 1
- 102100032814 ATP-dependent zinc metalloprotease YME1L1 Human genes 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 102000004152 Bone morphogenetic protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 108090000654 Bone morphogenetic protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 102100032367 C-C motif chemokine 5 Human genes 0.000 description 1
- 108091016585 CD44 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101100476924 Caenorhabditis elegans sdc-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100256309 Caenorhabditis elegans sdc-3 gene Proteins 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 108010055166 Chemokine CCL5 Proteins 0.000 description 1
- 108010077544 Chromatin Proteins 0.000 description 1
- 102100027995 Collagenase 3 Human genes 0.000 description 1
- 108050005238 Collagenase 3 Proteins 0.000 description 1
- 208000032170 Congenital Abnormalities Diseases 0.000 description 1
- 208000002330 Congenital Heart Defects Diseases 0.000 description 1
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 description 1
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 1
- 206010011831 Cytomegalovirus infection Diseases 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 206010012438 Dermatitis atopic Diseases 0.000 description 1
- 101800000620 Disintegrin-like Proteins 0.000 description 1
- 208000030814 Eating disease Diseases 0.000 description 1
- 208000017701 Endocrine disease Diseases 0.000 description 1
- 102000005593 Endopeptidases Human genes 0.000 description 1
- 108010059378 Endopeptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000007665 Extracellular Signal-Regulated MAP Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108010007457 Extracellular Signal-Regulated MAP Kinases Proteins 0.000 description 1
- 208000019454 Feeding and Eating disease Diseases 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 102000001398 Granzyme Human genes 0.000 description 1
- 108060005986 Granzyme Proteins 0.000 description 1
- 108700010012 HMGN1 Proteins 0.000 description 1
- 102000008055 Heparan Sulfate Proteoglycans Human genes 0.000 description 1
- 229920002971 Heparan sulfate Polymers 0.000 description 1
- 102100024025 Heparanase Human genes 0.000 description 1
- 102100028176 High mobility group nucleosome-binding domain-containing protein 5 Human genes 0.000 description 1
- 108050003355 High mobility group nucleosome-binding domain-containing protein 5 Proteins 0.000 description 1
- 102100039869 Histone H2B type F-S Human genes 0.000 description 1
- 102000006947 Histones Human genes 0.000 description 1
- 101000627872 Homo sapiens 72 kDa type IV collagenase Proteins 0.000 description 1
- 101000766921 Homo sapiens C-type lectin domain family 4 member E Proteins 0.000 description 1
- 101001035372 Homo sapiens Histone H2B type F-S Proteins 0.000 description 1
- 101000990912 Homo sapiens Matrilysin Proteins 0.000 description 1
- 101000990902 Homo sapiens Matrix metalloproteinase-9 Proteins 0.000 description 1
- 101000990915 Homo sapiens Stromelysin-1 Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 102000001974 Hyaluronidases Human genes 0.000 description 1
- 108050009363 Hyaluronidases Proteins 0.000 description 1
- 102000004157 Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000604 Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- 206010020850 Hyperthyroidism Diseases 0.000 description 1
- 201000009794 Idiopathic Pulmonary Fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 102000003777 Interleukin-1 beta Human genes 0.000 description 1
- 108090000193 Interleukin-1 beta Proteins 0.000 description 1
- 108010006444 Leucine-Rich Repeat Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010064171 Lysosome-Associated Membrane Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000014944 Lysosome-Associated Membrane Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 102000009571 Macrophage Inflammatory Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010009474 Macrophage Inflammatory Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000002720 Malnutrition Diseases 0.000 description 1
- 102100030417 Matrilysin Human genes 0.000 description 1
- 108010076557 Matrix Metalloproteinase 14 Proteins 0.000 description 1
- 102100030412 Matrix metalloproteinase-9 Human genes 0.000 description 1
- 102000005741 Metalloproteases Human genes 0.000 description 1
- 108010006035 Metalloproteases Proteins 0.000 description 1
- 101710151803 Mitochondrial intermediate peptidase 2 Proteins 0.000 description 1
- DTERQYGMUDWYAZ-ZETCQYMHSA-N N(6)-acetyl-L-lysine Chemical compound CC(=O)NCCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O DTERQYGMUDWYAZ-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- 102000003945 NF-kappa B Human genes 0.000 description 1
- 108010057466 NF-kappa B Proteins 0.000 description 1
- 206010028851 Necrosis Diseases 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 101800000795 Proadrenomedullin N-20 terminal peptide Proteins 0.000 description 1
- 101150095449 SDC4 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150033203 Sdc3 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 1
- 108010022999 Serine Proteases Proteins 0.000 description 1
- 102000012479 Serine Proteases Human genes 0.000 description 1
- 201000010829 Spina bifida Diseases 0.000 description 1
- 208000006097 Spinal Dysraphism Diseases 0.000 description 1
- 101710108790 Stromelysin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102000000551 Syk Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108010016672 Syk Kinase Proteins 0.000 description 1
- 206010042778 Syndactyly Diseases 0.000 description 1
- 108090000054 Syndecan-2 Proteins 0.000 description 1
- 102000003698 Syndecan-3 Human genes 0.000 description 1
- 108090000068 Syndecan-3 Proteins 0.000 description 1
- 102100037220 Syndecan-4 Human genes 0.000 description 1
- 108010055215 Syndecan-4 Proteins 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 1
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 206010000210 abortion Diseases 0.000 description 1
- 231100000176 abortion Toxicity 0.000 description 1
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 210000005006 adaptive immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000005809 anti-tumor immunity Effects 0.000 description 1
- 210000001188 articular cartilage Anatomy 0.000 description 1
- 201000008937 atopic dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 238000009534 blood test Methods 0.000 description 1
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 230000004637 cellular stress Effects 0.000 description 1
- 206010008129 cerebral palsy Diseases 0.000 description 1
- 239000002975 chemoattractant Substances 0.000 description 1
- 210000003483 chromatin Anatomy 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009535 clinical urine test Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 208000028831 congenital heart disease Diseases 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 238000003748 differential diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 235000014632 disordered eating Nutrition 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 1
- 239000006274 endogenous ligand Substances 0.000 description 1
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 1
- 230000008497 endothelial barrier function Effects 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 210000001650 focal adhesion Anatomy 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 210000001983 hard palate Anatomy 0.000 description 1
- 201000000615 hard palate cancer Diseases 0.000 description 1
- 108010037536 heparanase Proteins 0.000 description 1
- 230000035874 hyperreactivity Effects 0.000 description 1
- 230000001631 hypertensive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000003832 immune regulation Effects 0.000 description 1
- 230000006058 immune tolerance Effects 0.000 description 1
- 229940124622 immune-modulator drug Drugs 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 108091005434 innate immune receptors Proteins 0.000 description 1
- 210000005007 innate immune system Anatomy 0.000 description 1
- 208000036971 interstitial lung disease 2 Diseases 0.000 description 1
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000002977 intracellular fluid Anatomy 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 description 1
- 238000009533 lab test Methods 0.000 description 1
- 210000004901 leucine-rich repeat Anatomy 0.000 description 1
- 230000021633 leukocyte mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000036244 malformation Effects 0.000 description 1
- 230000001071 malnutrition Effects 0.000 description 1
- 235000000824 malnutrition Nutrition 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000066 myeloid cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 210000000276 neural tube Anatomy 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 239000000101 novel biomarker Substances 0.000 description 1
- 208000015380 nutritional deficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 230000005305 organ development Effects 0.000 description 1
- 102000002574 p38 Mitogen-Activated Protein Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108010068338 p38 Mitogen-Activated Protein Kinases Proteins 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 230000009984 peri-natal effect Effects 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000003169 placental effect Effects 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 230000016412 positive regulation of cytokine production Effects 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000008741 proinflammatory signaling process Effects 0.000 description 1
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 1
- 239000003642 reactive oxygen metabolite Substances 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000008458 response to injury Effects 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 101150118392 sdc-2 gene Proteins 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 239000005495 thyroid hormone Substances 0.000 description 1
- 229940036555 thyroid hormone Drugs 0.000 description 1
- 102000027257 transmembrane receptors Human genes 0.000 description 1
- 108091008578 transmembrane receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 230000006492 vascular dysfunction Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Abstract
Изобретение относится к области биохимии. Описана тест-система для прогнозирования течения беременности и определения степени риска нарушений развития эмбриона/плода у женщин детородного возраста на ранних сроках беременности или до беременности. Также описан способ прогнозирования течения беременности и определения степени риска нарушений развития эмбриона/плода у женщин детородного возраста на ранних сроках беременности или до беременности, включающий использование описанной тест-системы. Техническим результатом является повышение точности прогноза течения беременности, развития эмбриона/плода, состояния здоровья будущего ребенка, оценки эффективности проводимой терапии и оптимизация прегравидарной подготовки. 2 н. и 8 з.п. ф-лы, 13 табл.,9 пр.
Description
Настоящее изобретение относится к области медицины, биохимии, иммунологии, акушерства и гинекологии, неонатологии, педиатрии.
В настоящее время участие иммунной системы в регуляции течения беременности и развитии эмбриона/плода не вызывает сомнений. Целый спектр иммунологических параметров связан с важными характеристиками репродуктивной функции женщин. Известно, что изменения показателей иммунной системы могут быть наиболее ранними признаками тех неблагоприятных изменений в организме женщины, которые пагубно влияют на течение самой беременности и развитие эмбриона и плода (Замалеева Р.С. и соавт., 2017; Цахилова С.Г. и соавт., 2016). Эти изменения могут быть индуцированы самыми разными эндогенными и экзогенными причинами. (Замалеева Р.С. и соавт., 2013; Marks K. Et al., 2020; Полетаев А.Б. и соавт., 2016). В то же время конкретные механизмы участия иммунной системы в процессах гестации и закладки органов и тканей эмбриона и плода во многом остаются неясными (Нефедова Д.Д. и соавт., 2013; Сотникова Н.Ю. и соавт., 2013; Абламуниц В.Г., 2016; Зубовская Е.Т. и соавт., 2018).
В норме иммунная система человека продуцирует антитела не только к чужеродным, но и практически ко всем собственным антигенам, т.е. аутоантитела (аАТ), которые участвуют практически во всех процессах, происходящих в организме. В условиях нормы сывороточное содержание аутоантител поддерживается в определенных границах. Патологическое повышение или снижение уровней аАТ может вести к различным патологическим состояниям. Изменения продукции аАТ различной специфичности могут быть следствием влияния как различных внешних, так и внутренних факторов (экологические факторы, стрессы, инфекции, эндокринно-метаболические нарушения и др.). (Полетаев А.Б. и соавт., 2016; Racanelli V., et. al., 2011; Atassi M.Z., et al., 2008). Причем эти изменения могут касаться и тех аАТ, поддержание физиологических концентраций которых критически важно для физиологического течения беременности и нормального развития эмбриона/плода (Замалеева Р.С. и соавт., 2013; Полетаев А.Б. и соавт., 2015; Замалеева Р.С. и соавт., 2017). Так, по данным Макарова О.В. с соавт. (2012), определение сывороточного уровня аАТ класса IgG к двуспиральной ДНК, антигенам мембран тромбоцитов (ТгМ-001-15; ТгМ-015-12), антигенам почек (KiM-05-300, KiS-07-120) и антигену митохондрий печени (НММР) существенно помогает в дифференциальной диагностике преэклампсии и хронических гипертензивных состояний у женщин в сроки 24-36 недель беременности, дает возможность прогнозировать развитие и тяжесть преэклампсии за 2-4 недели до появления ее первых клинических симптомов, и таким образом, принятие соответствующих мер позволяет улучшить перинатальные исходы, снизить материнскую и младенческую заболеваемость и смертность. Тесная взаимосвязь гестационного процесса и развития эмбриона/плода с сывороточным содержанием определенных материнских аАТ класса IgG, трансплацентарно проникающих к плоду, сегодня не вызывает сомнений (Замалеева Р.С. и соавт., 2017; Спиридонова Н.В. и соавт., 2015; Полетаев А.Б. и соавт., 2015; Edmiston Е. et.al., 2017). Однако вопрос о том, какие именно аАТ следует определять для прогноза течения беременности и развития эмбриона/плода во многом остается открытым. Следует отметить, что встречаемость генетически обусловленных пороков развития не превышает 3-14% от всех врожденных пороков. Остальная врожденная патология обусловлена различными неблагоприятными изменениями в организме матери (Полетаев А.Б. и соавт., 2001).
Изложенное выше послужило основанием для создания тест-системы для определения содержания аАТ к фракциям молекулярных паттернов, ассоциированных с повреждением (DAMPS - damage associated molecular patterns), изменения сывороточного уровня/аффинности которых коррелируют с осложненным течением беременности, нарушениями развития эмбриона/плода и рождением ребенка с различной патологией.
Ближайшим аналогом заявленного изобретения является способ прогнозирования течения беременности и определения степени риска нарушений развития эмбриона/плода и рождения ребенка с различными отклонениями (Патент РФ №2233121, 27 июля 2004 г.). В основе данного метода лежит определение сывороточного уровня аАТ к фракциям анионных белков хроматина ткани мозга и/или мембранных белков мозга. По степени отклонения одного или нескольких определяемых показателей судят о прогнозе течения беременности и ее исходах в соответствии с приведенными таблицами прогноза.
В то же время совершенно очевидно, что аАТ не ко всем антигенам используемых фракций имеют большую значимость для такого прогноза, что снижает прогностическую значимость данного способа. Поэтому задачей авторов состояла в идентификации из используемых ранее фракций тех белковых маркеров, антитела к которым наиболее диагностически значимы для решения поставленной задачи по повышению прогностической значимости таких тест-систем. В отличие от известного способа скринингового обследования заявленный способ, заключающийся в определении содержания аАТ к фракциям молекулярных паттернов, ассоциированных с повреждением (DAMPS), позволяет повысить точность прогнозирования течения беременности и развития эмбриона/плода.
В отличие от известного способа скринингового обследования предлагаемый нами способ, заключающийся в определении содержания аАТ к фракциям молекулярных паттернов, ассоциированных с повреждением (DAMPS), позволяет повысить точность прогнозирования течения беременности и развития эмбриона/плода.
Техническим результатом заявляемого изобретения является повышение точности прогноза течения беременности, развития эмбриона/плода, состояния здоровья будущего ребенка, оценки эффективности проводимой терапии и оптимизация прегравидарной подготовки.
Технический результат заявленного изобретения достигается за счет тест-системы для определения уровня аутоантител, содержащей планшеты для иммуноферментного анализа с по меньшей мере одной сорбированной фракцией молекулярных паттернов, ассоциированных с повреждением (DAMPS), отмывочный буфер, сыворотку - эталон, раствор конъюгата фермента с антителами к иммуноглобулинам класса G человека, раствор субстрата и стоп-раствор для остановки реакции,
Как вариант реализации заявленного изобретения, указанная тест-система может дополнительно включать сорбированный белок S100, а также основной белок миелина.
Как вариант, сорбированная фракция молекулярных паттернов, ассоциированных с повреждением (DAMPS) может являться фракцией белков, относящихся к негистоновым ядерным белкам (DAMPs-ACBP-C), а также фракцией белков, относящихся к мембранным белкам и/или белкам межклеточного матрикса (DAMPs-MP-C).
Также технический результат заявленного изобретения достигается за счет способа прогнозирования течения беременности и определения степени риска нарушений развития эмбриона/плода у женщин детородного возраста на ранних сроках беременности или до беременности, включающего забор крови у пациентки, получения сыворотки, определение в полученной сыворотке содержания аутоантител и отличающегося тем, что, определяют содержание аутоантител к по меньшей мере одной фракции молекулярных паттернов, ассоциированных с повреждением (DAMPS), и, при отклонении значения содержания определяемых аутоантител от эталонных значений более, чем на 20% в сторону повышения или более, чем на 25% в сторону снижения, делают вывод о повышенном риске осложнений течения беременности, нарушений развития эмбриона/плода и рождения ребенка с патологией.
Как вариант, указанный выше способ может дополнительно включать стадию определения содержание аутоантител к белку S100, и, при отклонении значения определяемых аутоантител от эталонных значений более, чем на 20% в сторону повышения или более, чем на 25% в сторону снижения, делают вывод о повышенном риске осложнений течения беременности, нарушений развития эмбриона/плода и рождения ребенка с патологией.
Как вариант, указанный выше способ может дополнительно включать определение содержания аутоантител к основному белку миелина и, при отклонении значения содержания определяемых аутоантител от эталонных значений более, чем на 20% в сторону повышения или более, чем на 25% в сторону снижения, делают вывод о повышенном риске осложнений течения беременности, нарушений развития эмбриона/плода и рождения ребенка с патологией.
Как вариант, в качестве фракции молекулярных паттернов, ассоциированных с повреждением (DAMPS) может быть использована фракция белков, относящихся к негистоновым ядерным белкам (DAMPs-ACBP-C).
Как вариант, в качестве фракции молекулярных паттернов, ассоциированных с повреждением (DAMPS) может быть использована фракция белков, относящихся к мембранным белкам и/или белкам межклеточного матрикса (DAMPs-MP-C).
Определение содержания исследуемых аАТ может быть проведено также другими способами, например, с помощью оптического биосенсора или любым другим способом определения уровня аАТ, известными из уровня техники.
Высокая эффективность предлагаемого способа может быть объяснена следующим. Как известно, поврежденная ткань генерирует эндогенные соединения организма, высвобождающиеся при повреждении клеток, так называемые белки DAMPs, которые способны инициировать неинфекционный воспалительный ответ. Многие белки DAMPs находятся в клеточном ядре и внутриклеточной жидкости. Семейство белков DAMPs включает белки межклеточного матрикса, белки теплового шока, негистоновые ядерные белки и др.
Так, например, HMGB1 (high-mobility group protein B1) - белок из группы ядерных негистоновых белков - взаимодействует с ДНК ядра клетки. При некрозе клеток и тканей он высвобождается из клеток и может связываться с рецептором врожденного иммунитета TLR4, что приводит к секреции цитокинов макрофагами и последующей воспалительной реакции [Wang Н. с соавт., 1999].
Белок HMGN1 высвобождается из клеток секрецией эндоплазматического ретикулума или через непрограммируемую гибель клеток после клеточного стресса или повреждения. HMGN1 служит мощным иммунным стимулятором, который способствует активации и миграции дендритных клеток и активации иммунных ответов, опосредованных Т-хелперами типа 1, которые усиливают противоопухолевый иммунитет. HMGN1 представляет собой эндогенный лиганд TLR4, который может вызывать как острую стимуляцию продукции цитокинов, так и долгосрочную толерантность, и, таким образом, он может играть модулирующую роль в стерильных воспалительных процессах, например, вызванных инфекцией, травмой или ишемией [Arts RJW, Huang PK, Yang D, Joosten LAB, van der Meer JWM, Oppenheim J J, Netea MG, Cheng SC. High-Mobility Group Nucleosome-Binding Protein 1 as Endogenous Ligand Induces Innate Immune Tolerance in a TLR4-Sirtuin-1 Dependent Manner in Human Blood Peripheral Mononuclear Cells. Front Immunol. 2018 Mar 14; 9: 526. doi: 10.33 89/fimmu.2018.00526. PMID: 29593748; PMCID: PMC5861144.].
Белки синдекана являются ключевыми компонентами эндотелиального гликокаликса и выделяются при воспалении. Синдеканы принадлежат к семейству трансмембранных гепарансульфатных протеогликанов типа I, которые у позвоночных состоят из четырех членов (Sdcl, Sdc2, Sdc3 и Sdc4). Основной белок этих протеогликанов состоит из внеклеточного, трансмембранного и внутриклеточного домена. Разрушение гликокаликса происходит под действием металлопротеиназ, гепараназ и гиалуронидаз. Эти шеддазы активируются активными формами кислорода и провоспалительными цитокинами, такими как фактор некроза опухоли альфа и интерлейкин-1бета. Обнаружено, что дезинтегринподобные металлопротеиназы ADAMTS1 и ADAMTS4 способны расщеплять эктодомен SDC-4 (S4ED) в положении рядом с N-концом. Более того, выделение S4ED с помощью ADAMTS1 приводит к клеточным ответам, таким как ингибирование миграции, изменения распределения F-актина, которые коррелируют с округлением клеток и уменьшением количества очаговых адгезий. ММР14 (матриксная металлопротеиназа 14 - мембранная эндопептидаза подсемейства матриксных металлопротеиназ), ММР2, ММР7 и ММР9 все имеют сайты расщепления внутри эктодоменов SDC-1 и SDC-4, в то время как ММРЗ также может расщеплять S1ED на одном сайте. Недавно было показано, что S2ED расщепляется ММР14 с образованием нескольких фрагментов. Тромбин (сериновая протеаза относится к ферментам класса гидролаз) может расщеплять эктодомен SDC-3, SDC-4 на фрагменты, которые взаимодействуют с эндотелиальными клетками, вызывая параклеточную гиперпроницаемость. Это может иметь важное значение в патогенезе сосудистой дисфункции во время сепсиса или состояний тромботической болезни, когда тромбин активируется.
Существует гипотеза, что фрагменты S3ED и S4ED могут действовать как молекулярные паттерны, связанные с повреждениями (DAMP). Рецепторы для S3ED и S4ED изучены недостаточно. Участие толл-подобного рецептора 4 (TLR4) остается спорным. Необходимы дальнейшие исследования для определения рецептора для фрагментов S3ED и S4ED, ответственных за эффекты разрушения барьера [Roh JS, Sohn DH. Damage-Associated Molecular Patterns in Inflammatory Diseases. Immune Netw. 2018 Aug 13; 18(4): e27. doi: 10.4110/in.2018.18.e27. PMID: 30181915; PMCID: PMC6117512.], [Jannaway M, Yang X, Meegan JE, Coleman DC, Yuan SY. Thrombin-cleaved syndecan-3/-4 ectodomain fragments mediate endothelial barrier dysfunction. PLoS One. 2019 May 15; 14(5): e0214737. doi: 10.1371/journal.pone.0214737. PMID: 31091226; PMCID: PMC6519803], [Bertrand J, Bollmann M. Soluble syndecans: biomarkers for diseases and therapeutic options. Br J Pharmacol. 2019 Jan; 176(1): 67-81. doi: 10.1111/bph.14397. Epub 2018 Jul 23. PMID: 29931674; PMCID: PMC6284332.], [Roh JS, Sohn DH. Damage-Associated Molecular Patterns in Inflammatory Diseases. Immune Netw. 2018 Aug 13; 18(4): e27. doi: 10.4110/in.2018.18.e27. PMID: 30181915; PMCID: PMC6117512.].
Бигликан - это белок внеклеточного матрикса. Бигликан состоит из белкового ядра, содержащего богатые лейцином области повторов, и двух цепей гликозаминогликанов (GAG), состоящих либо из хондроитинсульфата (CS), либо из дерматансульфата (DS), причем DS более распространены в большинстве соединительных тканей [10. Roughley PJ, White RJ. Dermatan sulphate proteoglycans of human articular cartilage. The properties of dermatan sulphate proteoglycans I and II. Biochem J. 1989 Sep 15; 262(3): 823-7. doi: 10.1042/bj2620823. PMID: 2590169; PMCID: PMC1133347.]. Бигликан в его растворимой форме действует как сигнал опасности, соединяющий врожденную и адаптивную иммунные системы. После тканевого стресса и повреждения бигликан протеолитически высвобождается из внеклеточного матрикса и превращается в немикробный сигнал опасности (DAMP). Белковое ядро бигликана может расщепляться несколькими протеолитическими ферментами, такими как ВМР1, матриксная металлопротеиназа (ММР)-2, ММР-3, ММР-13 и Granzyme В. В растворимой форме бигликан способен связываться как с TLR2/4 вызывая быструю активацию митоген-активируемой протеинкиназы р38, киназы, регулируемой внеклеточными сигналами (Erk), и усилителя каппа-легкой цепи ядерного фактора активированного В клетки (NF-κВ) и, следовательно, секреция TNF-α. Посредством TLR2/4-зависимой передачи сигналов бигликан запускает синтез различных хемоаттрактантов для нейтрофилов и макрофагов, таких как MIP-1α (воспалительный белок макрофагов - lα), MIP-2, МСР-1 (хемоаттрактантный белок моноцитов - 1) и RANTES. (регулируется при активации, нормальные Т-клетки экспрессируются и секретируются) [Nastase MV, Young MF, Schaefer L. Biglycan: a multivalent proteoglycan providing structure and signals. J Histochem Cytochem. 2012 Dec; 60(12): 963-75. doi: 10.1369/0022155412456380. Epub 2012 Jul 20. PMID: 22821552; PMCID: PMC3527886], [Zindel J, Kubes P. DAMPs, PAMPs, and LAMPs in Immunity and Sterile Inflammation. Annu Rev Pathol. 2020 Jan 24; 15: 493-518. doi: 10.1146/annurev-pathmechdis-012419-032847. Epub 2019 Nov 1. PMID: 31675482].
Связанный со сплайсосомой белок 130 (SAP 130), субъединица гистондеацетилазы (Гистондеацетилазы представляют собой класс ферментов, которые удаляют ацетильные группы из аминокислоты ε-N-ацетиллизина на гистоне, позволяя гистонам более плотно обволакивать ДНК), находится в ядре нормальных живых клеток, но диффундирует из умирающих или поврежденных клеток и попадает во внеклеточную среду). SAP 130 является одним из новых DAMP и специфически связывается с рецептором Mincle (индуцируемый макрофагами лектин С-типа, CLEC4E), что приводит к запуску провоспалительной передачи сигналов при различных инфекциях и асептическом воспалении. Mincle - это трансмембранный рецептор, который высоко экспрессируется на активированных миелоидных клетках и инициирует сигнальную ось тирозинкиназы селезенки (Syk) для передачи нижестоящих сигналов для опосредования воспалительного ответа. SAP 130 повышен в слизистой оболочке кишечника и в кровообращении у пациентов с болезнью Крона [Liu K, Liu D, Feng Y, Zhang H, Zeng D, Liu Q, Qu J. Spliceosome-associated protein 130: a novel biomarker for idiopathic pulmonary fibrosis. Ann Transl Med. 2020 Aug; 8(16): 986. doi: 10.21037/atm-20-4404. Erratum in: Ann Transl Med. 2021 Jul; 9(13): 1111. PMID: 32953786; PMCID: PMC7475450, [Relja B, Land WG. Damage-associated molecular patterns in trauma. Eur J Trauma Emerg Surg. 2020 Aug; 46(4): 751-775. doi: 10.1007/s00068-019-01235-w. Epub 2019 Oct 14. PMID: 31612270; PMCID: РМС7427761].
Известно, что те белки, которые активируют сигналы воспаления, как правило, блокируют сигналы апоптоза [Бурместер Г.-Р., 2020; Brien М.-Е. et al., 2019; Nadeau-Vallee М., et al., 2016]. Молекулы DAMPs, высвобождающиеся в организме женщины в ответ на повреждение любой локализации, индуцируют повышенный синтез аАТ, их связывающих. Во время беременности те из них, которые относятся к классу IgG, проходят плацентарный барьер и влияют на процессы апоптоза при развитии эмбриона/плода. Апоптоз имеет огромное значение в эмбриогенезе (включая имплантацию и органогенез). Так, например, нарушение гибели клеток в межпальцевых промежутках может привести в синдактилии, а отсутствие апоптоза избыточного эпителия при слиянии небных отростков или тканей, окружающих нервную трубку, приводит к нарушению слияния тканей с двух сторон, что проявляется расщеплением твердого неба и дефектом в тканях, ограничивающих спинномозговой канал (spina bifida), соответственно. Поэтому изменения физиологических уровней аАТ в крови матери, способных влиять на процессы апоптоза, могут иметь дизонтогенетические последствия.
Для проведения предлагаемого анализа требуется 0,01-0,02 мл сыворотки крови женщины (например, из подушечки пальца).
Фракция белков DAMPs может быть получена смешиванием различных коммерческих белков DAMPs. В качестве эффективного компонента заявляемой тест-системы может быть фракция молекул DAMPs, относящихся к негистоновым ядерным белкам (DAMPs-ACBP-C). Данный концентрат может быть получен, например, следующим способом.
Из 2 кг ткани свежего или свежезамороженного мозга крупного рогатого скота, хранившегося до использования не более 3 мес.при температуре не выше -20°С, выделяют фракцию клеточных ядер, используя общепринятые методы, например:
A. Мозг гомогенизируют в пяти объемах 0,01 М трис-хлоридного буферного раствора, рН 7,5, содержащего 0,15 М NaCl.
Б. Гомогенат центрифугируют при температуре 2-4°С в течение 5 мин при 1000 g.
B. Полученный осадок ресуспендируют в 0,32 М растворе сахарозы.
Г. Повторно центрифугируют в течение 5 мин при 1000 g и температуре 2-4°С.
Д. Повторяют процедуры по п. В и по п. Г по 5 раз.
Полученные ядра гомогенизируют в 0,01 М трис-хлоридном буферном растворе, рН 8,0, содержащем 2М NaCl, 2М мочевины и 0,01 об. % тритона X-100.
Суспензию центрифугируют, собирают супернатант, диализуют его против того же буферного раствора, но не содержащего NaCl (5 смен по 1 л; не менее 4 часа в каждой смене). Диализованный раствор белков наносят на хроматографическую колонку с анионообменником, уравновешенную 0,01 М трис-хлоридным буферным раствором, рН 7,5, содержащим 5 мМ ЭДТА.
В ходе последующей элюции белков с помощью раствора NaCl на том же буфере отбирают фракцию, элюируемую в диапазоне концентраций NaCl 0,3-0,7 М. Полученный препарат диализуют против буферного раствора. Диализат наносят на хроматографическую колонку с полибуферным обменником РВЕ-94 и проводят элюцию в линейном градиенте 0,1-1,0 М раствора роданистого калия с детекцией на длине волны 280 нм. Полученный материал используют в работе.
Также эффективным компонентом заявляемой тест-системы может быть фракция молекул DAMPs, относящихся к мембранным белкам и/или белкам межклеточного матрикса (DAMPs-MP-C). Данный концентрат может быть получен, например, следующим способом.
Из 1 кг ткани свежего или свежезамороженного мозга крупного рогатого скота, хранившегося до использования не более 3 мес. при температуре -20°С, выделяют фракцию клеточных мембран. Мозг гомогенизируют в десяти объемах 0,01 М трис-хлоридного буферного раствора, рН 7,5, содержащего 0,15 М NaCl. Центрифугируют при температуре 2-4°С в течение 5 мин при 1000 g, полученный осадок отбрасывают. К супернатанту добавляют сахарозу до концентрации 0,32 М; повторно центрифугируют при температуре 2-4°С в течение 10 мин при 3000 g, осадок отбрасывают, к супернатанту добавляют равный объем 0,32 М раствора сахарозы. Процедуру повторяют 2-3 раза. Полученный супернатант разбавляют дистиллированной водой в 2 раза и центрифугируют при температуре 2-4°С в течение 60 мин при 20000 g. Собирают осадок клеточных мембран.
Полученные мембраны гомогенизируют в 0,01 М трис-хлоридном буферном растворе, рН 7, содержащем 0,2 М NaCl. После центрифугирования собирают осадок, суспендируют его в 0,01 М трис-хлоридном буферном растворе, рН 7,5. После повторного центрифугирования осадок гомогенизируют в 0,01 М трис-хлоридном буферном растворе, рН 7,5, содержащем 0,1 об. % тритона Х-100 и 2М мочевины.
После центрифугирования при 20000g при температуре 2-4°С в течение 60 мин собирают супернатант, диализуют его против того же буферного раствора 5 смен по 1 л; не менее 4 ч в каждой смене) и наносят на хроматографическую колонку с полибуферным обменником РВЕ-94, уравновешенную 0,01 М трис-хлоридным буферным раствором, рН, 7,5(КП-5), содержащим 5 мМ ЭДТА.
При последующей ступенчатой элюции белков с помощью раствора NaCl на указанном буфере отбирают фракцию, элюируемую в диапазоне концентраций NaCl 0,1-0,3 М.
После диализа против 0,01М трис-хлоридного буфера, рН 7,5, содержащего 0,01 об % тритона Х-100 и 1 М мочевины, белки наносят на хроматографическую колонку с анионообменником.
Элюцию проводят линейным градиентом 0,01-0,40 М раствора роданистого калия, содержащего 0,01 об. % тритона Х-100 с детекцией на длине волны 280 нм. Полученный материал используют в работе.
При проведении анализа возможно определение аАТ к одной или нескольким фракциям белковых антигенов DAMPs, а также определение аАТ к различным очищенным антигенам, входящим в состав DAMPs. Например, в качестве таких белков может выступать белок S100, белки теплового шока. Также возможно включение в тест-систему отдельных других очищенных белков или белковых фракций, аАТ к которым могут оказывать влияние на развитие эмбриона/плода, например, основного белка миелина (ОБМ). Наиболее оптимально, когда диагностическая система состоит из 3-5 тест-антигенов, включая фракции белков DAMPs, относящихся к негистоновым ядерным белкам (DAMPs-ACBP-C) и белкам межклеточного матрикса (DAMPs-MP-С). Методика проведения иммуноферментного анализа представлена ниже.
1. Для сорбции на стандартные 96-луночные плоскодонные планшеты для иммуноферментного анализа готовят растворы полученных фракций белковых антигенов на карбонатном буфере. Приготовленные растворы вносят в отдельные лунки планшета. Накрытые крышками планшеты инкубируют ночь при 2-4°С.
2. Удаляют из лунок растворы белков и заливают в них блокирующий буфер (например, 0.5% раствор желатина на 0.15 М NaCl). Инкубируют 1 час при 37°С.
3. Отмывают планшеты отмывочным буфером (0.15 М NaCl с 0.05% твин-20).
4. Внесение тестируемых сывороток:
а) готовят разведения сывороток 1:200 на отмывочном буфере;
б) вносят разведенные сыворотки в лунки;
в) планшеты инкубируют ночь при 2-4°С.
5. Отмывают планшеты отмывочным буфером.
6. Проявление реакции:
а) Исходный раствор конъюгата пероксидазы хрена (или иного фермента) с антителами к иммуноглобулинам IgG человека разводят в необходимое число раз (в зависимости от его активности) отмывочным буфером;
б) раствор конъюгата вносят во все лунки планшета;
в) Планшеты инкубируют 60-90 мин при 37°С, либо 12-16 час при 2-4°С.
Конъюгат удаляют, а планшеты отмывают отмывочным буфером;
г) Сразу после этого в лунки вносят раствор субстрата (например, 0.01% тетраметилбензидина с 0.01% перекиси водорода на 0.05 М цитрат-фосфатном буфере рН 4.5-5 в случае применения пероксидазных конъюгатов). Инкубируют планшеты в темноте 10-15 мин при комнатной температуре.
7. По достижении оптимального уровня окрашивания (через 10-15 мин инкубации в темноте) реакцию останавливают добавлением 0.2-0.4 М серной кислоты.
8. Интенсивность окрашивания оценивают с помощью ИФА-ридера любой модели.
9. По полученным значениям оптической плотности содержимого лунок, рассчитывают относительную интенсивность реакции тестировавшихся сывороток с фракциями белковых антигенов по отношению к эталону (в процентах). В качестве эталона использовали образец сыворотки со средними значениями иммунореактивности с используемыми в работе системами антигенов.
10. Производят интерпретацию полученных данных. Если значения иммунореактивности анализируемой сыворотки крови с любым из антигенов лежат в диапазоне от 75 до 120% от соответствующих значений иммунореактивности эталона, предполагается, что сыворотка крови получена от женщины, относящейся к группе нормореактивных.
Если значение иммунореактивности анализируемой сыворотки крови с хотя бы одним из используемых антигенов составляет менее 75% от соответствующих значений иммунореактивности эталона, и, при этом, каждое из значений иммунореактивности анализируемой сыворотки крови с остальными антигенами не превышает 120% от соответствующих значений иммунореактивности эталона, предполагается, что сыворотка получена от женщины, относящейся к группе гипореактивных.
Если значение иммунореактивности анализируемой сыворотки хотя бы с одним из используемых антигенов превышает 120% от соответствующих значений иммунореактивности эталона, и, при этом, каждое из значений иммунореактивности анализируемой сыворотки с остальными антигенами составляет не менее 75% от соответствующих значений иммунореактивности эталона, предполагается, что сыворотка получена от женщины, относящейся к группе гиперреактивиых.
В том случае, если интенсивность реакции исследуемой сыворотки с разными используемыми антигенами различается более чем на 30%, то это свидетельствует о нескоординированных изменениях определяемых показателей, независимо от их значений.
Многочисленные исследования показали, что наиболее точный прогноз течения беременности и здоровья родившегося ребенка можно дать не при однократном исследовании указанных выше аАТ во время беременности, а при мониторинге беременности под контролем данной технологии. Оптимальным представляется трехкратное обследование на сроках 7-8, 14-15 и 20-22 неделях беременности. Особенно важно обследование в 1 триместре беременности, когда происходит закладка органов и тканей будущего ребенка.
В зависимости от динамики уровней исследуемых аАТ для наиболее точного прогноза течения беременности и здоровья родившегося ребенка нам представляется оптимальным деление беременных на следующие группы:
1 группа - женщины со стабильными нормореактивными сыворотками по результатам исследования и использованием заявленного изобретения;
2 группа - женщины со стабильно гиперреактивными сыворотками по результатам исследования и использованием заявленного изобретения;
3 группа - женщины со стабильно гипореактивными сыворотками по результатам исследования и использованием заявленного изобретения;
4 группа - женщины, у которых во время беременности гиперреактивность сывороток по результатам исследования и использованием заявленного изобретения;
5 группа - женщины, у которых во время беременности гипо- или нормореактивность сывороток по результатам исследования и использованием заявленного изобретения.
Дети были разделены на те же 5 групп, к которым относились их матери. Состояние здоровья детей оценивали при рождении, а также в возрасте 1-1,5 года по стандартной схеме обследования, включающей общие анализы крови и мочи, нейросонограмму, УЗИ брюшной полости и почек, консультации невропатолога, оториноларинголога, окулиста, ортопеда. В зависимости от показателей здоровья дети были отнесены к одной из следующих диспансерных групп здоровья: I - практически здоровые дети; IIa - дети с функциональными нарушениями и со склонностью к хроническим заболеваниям; IIб - часто болеющие дети, дети с хроническими заболеваниями; III - дети с грубыми отклонениями в состоянии здоровья, ведущими к инвалидизации.
У женщин 1 группы условия развития эмбриона/плода являются оптимальными; риск осложнений беременности и рождения детей с пороками развития минимален. В остальных группах он повышен. Особенно неблагоприятной в плане такого прогноза является 5 группа.
У женщин, относящихся к группе с разнонаправленными изменениями, возможны отклонения в иммунном звене регуляции эмбриона/плода и риск осложнений течения беременности, а также рождения ребенка с пороками развития. Степень этого риска зависит от степени и характера наблюдаемых отклонений в содержании исследуемых антител.
Данные, полученные при анализе течения беременности 742 женщин, обследованных с помощью данной технологии, состояния здоровья их новорожденных и показателей их здоровья в возрасте 1-1,5 года выявили закономерности, представленные в таблицах 1, 2 и 3. Обследование во время беременности проводили трехкратно на сроках, указанных выше.
Анализируя представленные таблицы, мы видим, что наилучшие показатели здоровья были у детей 1 группы, худшие - у детей 5 группы.
Данный анализ можно рекомендовать проводить перед планируемой беременностью. Это важно, потому что, если мы видим отклонения в содержании исследуемых аАТ, то характер наблюдаемых отклонений косвенно свидетельствует о тех причинах, которые вызвали эти отклонения. Так, например, снижение содержания определяемых аАТ свидетельствует, чаще всего, о наличии вирусной, вирусоподобной или другой инфекции, о возможном контакте с вредными веществами, приеме некоторых фармпрепаратов, нарушениях питания психоэмоциональных стрессах. Повышенный уровень исследуемых аАТ говорит о наличии острого инфекционного или аллергического процесса, аутоиммунных процессах. Если при проведении анализа с использованием фракциями DAMPs или в комплексе с различными очищенными антигенами наблюдаются нескоординированные или разнонаправленные изменения иммунореактивности по отношению к разным тест-антигенам, то у женщины, как правило, наблюдаются различные эндокринно-метаболические расстройства. Подобные изменения показателей наблюдаются также при инфекционно-воспалительных процессах в стадии манифестации или разрешения.
Правильно подобранная терапия, как правило, приводит к нормализации данных аАТ и тем самым риск рождения нездорового ребенка будет сведен к минимуму. Однако, в связи с тем, что во время беременности могут активироваться новые неблагоприятные факторы, прогностическая значимость такого исследования до беременности - женщин тогда можно условно относить к 1, 2 или 3 группе, т.е. к нормореактивным, гиперреактивным и гопореактивным по данному тесту, будет несколько снижена по сравнению с данными, представленными в таблицах (на 10-15%). Но, в любом случае, на беременность лучше выходить с нормальными уровнями данных аАТ.
В том случае, если содержание определяемых аАТ выходит за границы нормы, рекомендуем провести дополнительные уточняющие лабораторные исследования, чтобы выявить и устранить причину выявляемых отклонений и тем самым свести к минимуму риск неблагоприятного исхода беременности. Причем это актуально как во время предгравидарной подготовки, так и во время беременности.
Если при проводимой терапии как в период предгравидарной подготовки, так и во время беременности наблюдается тенденция к нормализации показателей предложенного теста, можно сделать вывод о ее эффективности. Таким образом, данная технология может быть использована для мониторинга проводимой терапии и оценки ее эффективности.
Предложенный метод может применяться как независимо от других, так и в комплексе с другими известными методами обследования, в результате чего возможен более точный прогноз течения и исхода беременности.
Заявленное изобретение иллюстрируется нижеследующими примерами.
Пример 1.
Обследуемая А.Л., 19 лет. Первая беременность. Наследственность не отягощена. Результаты диагностического теста приведены в таблице 4. Для сравнения точности прогноза течения беременности, развития эмбриона/плода, состояния здоровья будущего ребенка, оценки эффективности проводимой терапии в качестве аналога заявленного изобретения использовалось решение, указанное в патенте РФ №2233121.
Заключение: По результатам диагностического теста с использованием заявленного изобретения уровни всех исследуемых аАТ в норме на всех исследуемых сроках (1 группа). По результатам диагностического теста с использованием аналога на 22 нед. получен неблагоприятный прогноз течения беременности.
Течение беременности, исход родов, состояние здоровья ребенка в возрасте 1-1,5 года: Физиологическое течение беременности. Своевременные срочные роды. Новорожденный без признаков патологии. Мальчик, по шкале Апгар 9 баллов, рост 52 см, вес 3200 г. В возрасте 1,5 года I группа здоровья.
Таким образом, заявленное изобретение позволяет повысить точность прогноза течения беременности, развития эмбриона/плода, состояния здоровья будущего ребенка, оценки эффективности проводимой терапии и оптимизация прегравидарной подготовки.
Пример 2.
Обследуемая О.Ю., 36 лет. Первая беременность. Наследственность не отягощена.
Результаты диагностического теста приведены в таблице 5. Для сравнения точности прогноза течения беременности, развития эмбриона/плода, состояния здоровья будущего ребенка, оценки эффективности проводимой терапии в качестве аналога заявленного изобретения использовалось решение, указанное в патенте РФ №2233121.
Заключение: По результатам диагностического теста с использованием заявленного изобретения уровни исследуемых аАТ, в целом, выше нормы (2 группа). По результатам диагностического теста с использованием аналога на 7 и 15 неделях получены результаты, ассоциирующиеся с благоприятным течением беременности.
Течение беременности, исход родов, состояние здоровья ребенка в возрасте 1-1,5 года: Токсикоз первой половины беременности. Срочные роды, родился мальчик с врожденным пороком развития сердца. По шкале Апгар 6 баллов. Вес 3040 г. Рост 50 см. В возрасте 1 год - группа здоровья III.
Таким образом, заявленное изобретение позволяет повысить точность прогноза течения беременности, развития эмбриона/плода, состояния здоровья будущего ребенка.
Пример 3.
Обследуемая Е.И., 32 года. Вторая беременность. Первая беременность закончилась самопроизвольным выкидышем на сроке 7-8 нед. Наследственность не отягощена.
Результаты диагностического теста приведены в таблице 6. Для сравнения точности прогноза течения беременности, развития эмбриона/плода, состояния здоровья будущего ребенка, оценки эффективности проводимой терапии в качестве аналога заявленного изобретения использовалось решение, указанное в патенте РФ №2233121.
Заключение: По результатам диагностического теста с использованием заявленного изобретения уровни исследуемых аАТ ниже нормы (3 группа). По результатам диагностического теста с использованием аналога получены результаты, ассоциирующиеся с неблагоприятным течением беременности.
Исход беременности: Самопроизвольный выкидыш на сроке 10-11 нед.
Таким образом, заявленное изобретение позволяет повысить точность прогноза развития эмбриона/плода.
Пример 4.
Обследуемая С.А., 37 лет. Вторая беременность. Есть ребенок, 9 лет, здоров. Наследственность не отягощена.
Результаты диагностического теста приведен в таблице 7. Для сравнения точности прогноза течения беременности, развития эмбриона/плода, состояния здоровья будущего ребенка, оценки эффективности проводимой терапии в качестве аналога заявленного изобретения использовалось решение, указанное в патенте РФ №2233121.
Заключение: По результатам диагностического теста с использованием заявленного изобретения уровни исследуемых аАТ ниже нормы (3 группа). По результатам диагностического теста с использованием аналога за 1 месяц до беременности получены результаты, ассоциирующиеся с благоприятным течением беременности.
Течение беременности, исход родов, состояние здоровья ребенка в возрасте 1-1,5 года: Беременность осложнилась гестозом средней тяжести. Срочные роды, признаки гипотрофии и внутриутробного инфицирования плода. По шкале Апгар 6 баллов, Рост 50 см, вес 2800 г. В возрасте 1,5 года группа здоровья Пб (часто болеющий ребенок).
Таким образом, заявленное изобретение позволяет повысить точность прогноза течения беременности, развития эмбриона/плода, состояния здоровья будущего ребенка.
Пример 5.
Обследуемая В.Б., 37 лет. Планирует первую беременность. Наследственность не отягощена.
Результаты диагностического теста приведены в таблице 8. Для сравнения точности прогноза течения беременности, развития эмбриона/плода, состояния здоровья будущего ребенка, оценки эффективности проводимой терапии в качестве аналога заявленного изобретения использовалось решение, указанное в патенте РФ №2233121.
Заключение: По результатам диагностического теста с использованием заявленного изобретения уровни исследуемых аАТ, в целом, выше нормы (2 группа). Наблюдаются разнонаправленные нескоординированные изменения в содержании исследуемых аАТ. По результатам диагностического теста с использованием аналога получены результаты, ассоциирующиеся с благоприятным течением беременности.
В результате дополнительного лабораторного обследования выявлены хламидиоз и умеренный гипертиреоз. Проведено лечение, в результате которого в крови нормализовался уровень гормонов щитовидной железы; хламидии методом ПНР не выявлялись.
Результаты теста после лечения приведены в таблице 9.
Заключение: По результатам диагностического теста с использованием заявленного изобретения уровни всех исследуемых аАТ в норме (1 группа). По результатам диагностического теста с использованием аналога получены результаты, ассоциирующиеся с благоприятным течением беременности.
Во время беременности повторные обследования не проводились. Течение беременности, исход родов, состояние здоровья ребенка в возрасте 1-1,5 года: Физиологическое течение беременности. Новорожденный без признаков патологии. Девочка. По шкале Апгар 9 баллов. Вес 3400 г. В возрасте 1 год - 1 группа здоровья.
Таким образом, заявленное изобретение позволяет повысить точность прогноза течения беременности, развития эмбриона/плода, состояния здоровья будущего ребенка, оценки эффективности проводимой терапии и оптимизация прегравидарной подготовки.
Пример 6.
Обследуемая А.С. 27 лет. Вторая беременность. В анамнезе медицинский аборт. Наследственность не отягощена.
Результаты диагностического теста приведены в таблице 10. Для сравнения точности прогноза течения беременности, развития эмбриона/плода, состояния здоровья будущего ребенка, оценки эффективности проводимой терапии в качестве аналога заявленного изобретения использовалось решение, указанное в патенте РФ №2233121.
Заключение: По результатам диагностического теста с использованием заявленного изобретения наблюдается снижение уровней определяемых аАТ от высоких до нормальных значений (4 группа). По результатам диагностического теста с использованием аналога получены схожие результаты, однако на 14 неделе результат оказался не интерпретируемым (по полученным результатам не представлялось возможным сделать какие-либо выводы).
Течение беременности, исход родов, состояние здоровья ребенка в возрасте 1-1,5 года: Нефропатия II степени. Фетоплацентарная недостаточность. Преждевременные роды на сроке 31 нед. Вес 1150 г. Гипотрофия, морфо-функциональная незрелость. По шкале Апгар 5-6 баллов. В возрасте 1 года диагностирован детский церебральный паралич. Группа здоровья III.
Таким образом, заявленное изобретение позволяет повысить точность прогноза течения беременности, развития эмбриона/плода, состояния здоровья будущего ребенка, оценки эффективности проводимой терапии и оптимизация прегравидарной подготовки.
Пример 7.
Обследуемая Н.А., 30 лет. Один ребенок 2 года с атопическим дерматитом. Наследственность не отягощена.
Результаты диагностического теста представлены в таблице 11. Для сравнения точности прогноза течения беременности, развития эмбриона/плода, состояния здоровья будущего ребенка, оценки эффективности проводимой терапии в качестве аналога заявленного изобретения использовалось решение, указанное в патенте РФ №2233121.
Заключение: По результатам диагностического теста с использованием заявленного изобретения наблюдается подъем уровней определяемых аАТ от нормальных до высоких значений (5 группа). По результатам диагностического теста с использованием аналога на сроке 14 недель были получены результаты, ассоциирующиеся с благоприятным течением беременности.
Течение беременности, исход родов, состояние здоровья ребенка в возрасте 1-1,5 года: Беременность осложнилась нефропатией III степени. Преждевременные роды на сроке 36 нед.; мальчик 2800 г, по шкале Апгар 7 баллов, признаки внутриутробного инфицирования плода. В 1,5 года группа здоровья IIб.
Таким образом, заявленное изобретение позволяет повысить точность прогноза течения беременности, развития эмбриона/плода, состояния здоровья будущего ребенка, оценки эффективности проводимой терапии и оптимизация прегравидарной подготовки.
Пример 8.
Обследуемая А.С., 24 года. Первая беременность. Наследственность не отягощена.
Результаты диагностического теста представлены в таблице 12. Для сравнения точности прогноза течения беременности, развития эмбриона/плода, состояния здоровья будущего ребенка, оценки эффективности проводимой терапии в качестве аналога заявленного изобретения использовалось решение, указанное в патенте РФ №2233121.
Заключение: По результатам диагностического теста с использованием заявленного изобретения уровни исследуемых аАТ, в целом, ниже нормы (3 группа). По результатам диагностического теста с использованием аналога на сроке 6-7 недель были получены результаты, ассоциирующиеся с благоприятным течением беременности.
На 8-9 неделях беременности в ходе проведения дополнительного лабораторного обследования у пациентки была обнаружена цитомегаловирусная инфекция с повышенными титрами антител класса IgM. Пациентке было проведено трехкратно внутривенное введение препарата Пентаглобин с интервалом в 1 неделю, а затем, начиная с 16 недели беременности было проведено 2 пятидневных курса иммуномодулирующим препаратом, разрешенным при беременности, Виферон-2 с интервалом 2 недели.
Течение беременности, исход родов, состояние здоровья ребенка в возрасте 1-1,5 года: в первой половине беременности наблюдался ранний токсикоз (рвота беременных). В дальнейшем беременность протекала без осложнений. Срочные роды. Живой доношенный мальчик, рост 52 см, вес 3500; по шкале Апгар 9-10 баллов. В возрасте 1,5 года - I группа здоровья.
Таким образом, заявленное изобретение позволяет повысить точность прогноза течения беременности, развития эмбриона/плода, состояния здоровья будущего ребенка, оценки эффективности проводимой терапии и оптимизация прегравидарной подготовки.
Пример 9.
Обследуемая М.К, 34 года. Детей нет. Предгравидарная подготовка. У женщины болезнь Шегрена.
Результаты диагностического теста представлены в таблице 13.
Заключение: Уровни исследуемых аАТ выше нормы.
Проводимые лечебные мероприятия не дали существенного снижения показателей, исследуемых аАТ. Беременность не рекомендована.
Claims (10)
1. Тест-система для прогнозирования течения беременности и определения степени риска нарушений развития эмбриона/плода у женщин детородного возраста на ранних сроках беременности или до беременности, содержащая планшеты для иммуноферментного анализа с по меньшей мере одной сорбированной фракцией молекулярных паттернов, ассоциированных с повреждением (DAMPS), отмывочный буфер, сыворотку-эталон, раствор конъюгата фермента с антителами к иммуноглобулинам класса G человека, раствор субстрата и стоп-раствор для остановки реакции.
2. Тест-система по п. 1, дополнительно включающая сорбированный белок S100.
3. Тест-система по п. 1, дополнительно включающая сорбированный основной белок миелина.
4. Тест-система по п. 1, где сорбированная фракция молекулярных паттернов, ассоциированных с повреждением (DAMPS), является фракцией белков, относящихся к негистоновым ядерным белкам (DAMPs-ACBP-C).
5. Тест-система по п. 1, где сорбированная фракция молекулярных паттернов, ассоциированных с повреждением (DAMPS), является фракцией белков, относящихся к мембранным белкам и/или белкам межклеточного матрикса (DAMPs-MP-C).
6. Способ прогнозирования течения беременности и определения степени риска нарушений развития эмбриона/плода у женщин детородного возраста на ранних сроках беременности или до беременности, включающий забор крови у пациентки, получение сыворотки, определение в полученной сыворотке содержания аутоантител, отличающийся тем, что определяют содержание аутоантител к по меньшей мере одной фракции молекулярных паттернов, ассоциированных с повреждением (DAMPS), с использованием тест-системы по п. 1, и при отклонении значения содержания определяемых аутоантител от эталонных значений более чем на 20% в сторону повышения или более чем на 25% в сторону снижения делают вывод о повышенном риске осложнений течения беременности, нарушений развития эмбриона/плода и рождения ребенка с патологией.
7. Способ по п. 6, дополнительно включающий определение содержания аутоантител к белку S100, и при отклонении значения определяемых аутоантител от эталонных значений более чем на 20% в сторону повышения или более чем на 25% в сторону снижения делают вывод о повышенном риске осложнений течения беременности, нарушений развития эмбриона/плода и рождения ребенка с патологией.
8. Способ по п. 6, дополнительно включающий определение содержания аутоантител к основному белку миелина, и при отклонении значения содержания определяемых аутоантител от эталонных значений более чем на 20% в сторону повышения или более чем на 25% в сторону снижения делают вывод о повышенном риске осложнений течения беременности, нарушений развития эмбриона/плода и рождения ребенка с патологией.
9. Способ по п. 6, где фракция молекулярных паттернов, ассоциированных с повреждением (DAMPS), является фракцией белков, относящихся к негистоновым ядерным белкам (DAMPs-ACBP-C).
10. Способ по п. 6, где фракция молекулярных паттернов, ассоциированных с повреждением (DAMPS), является фракцией белков, относящихся к мембранным белкам и/или белкам межклеточного матрикса (DAMPs-MP-C).
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2808266C1 true RU2808266C1 (ru) | 2023-11-28 |
Family
ID=
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2233121C1 (ru) * | 2003-01-10 | 2004-07-27 | Общество с ограниченной ответственностью "Биофарм-тест" | Способ прогнозирования течения беременности и определения степени риска нарушений развития эмбриона/плода и рождения ребенка с различными отклонениями |
CN101163970A (zh) * | 2004-12-21 | 2008-04-16 | 耶鲁大学 | 先兆子痫的诊断 |
WO2010087985A2 (en) * | 2009-01-28 | 2010-08-05 | Yale University | Novel markers for detection of complications resulting from in utero encounters |
RU2542463C1 (ru) * | 2013-10-18 | 2015-02-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства имени В.Н. Городкова" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ прогнозирования перинатальных гипоксических поражений центральной нервной системы у новорожденных |
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2233121C1 (ru) * | 2003-01-10 | 2004-07-27 | Общество с ограниченной ответственностью "Биофарм-тест" | Способ прогнозирования течения беременности и определения степени риска нарушений развития эмбриона/плода и рождения ребенка с различными отклонениями |
CN101163970A (zh) * | 2004-12-21 | 2008-04-16 | 耶鲁大学 | 先兆子痫的诊断 |
WO2010087985A2 (en) * | 2009-01-28 | 2010-08-05 | Yale University | Novel markers for detection of complications resulting from in utero encounters |
RU2542463C1 (ru) * | 2013-10-18 | 2015-02-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства имени В.Н. Городкова" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ прогнозирования перинатальных гипоксических поражений центральной нервной системы у новорожденных |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Смирнова А.В., Борзова Н.Ю., Сотникова Н.Ю., Малышкина А.И. Клинико-иммунологические факторы риска очень ранних преждевременных родов. Проблемы репродукции. 2020; 26(2):113-119. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US20100137263A1 (en) | Assay for the detection of biomarkers associated with pregnancy related conditions | |
Darmochwal-Kolarz et al. | The concentrations of soluble HLA-G protein are elevated during mid-gestation and decreased in pre-eclampsia | |
Han et al. | Expression of pro-inflammatory protein S100A12 (EN-RAGE) in Behçet's disease and its association with disease activity: a pilot study | |
JP2019518225A (ja) | 早産を予測する方法及び組成物 | |
RU2552931C1 (ru) | Способ прогнозирования преэклампсии во втором триместре беременности | |
RU2461006C1 (ru) | Способ скринингового обследования женщин для пренатальной диагностики врожденных аномалий и внутриутробного инфицирования плода | |
RU2522244C1 (ru) | Способ прогнозирования прерывания беременности в первом триместре | |
Ovayolu et al. | Analyses of interleukin-6, presepsin and pentraxin-3 in the diagnosis and severity of late-onset preeclampsia | |
Shi et al. | Non‐invasive prediction of histologic chorioamnionitis using maternal serum markers in women with preterm prelabour rupture of membranes | |
JP2003532078A (ja) | 子宮内膜症の診断アッセイ | |
Alanbay et al. | Chitotriosidase, interleukin-1 beta and tumor necrosis factor alpha levels in mild preeclampsia | |
RU2808266C1 (ru) | Способ прогнозирования течения беременности и определения степени риска нарушений развития эмбриона/плода и рождения ребенка с различной не генетической патологией | |
Marchetti et al. | Diagnosis and management of obstetrical antiphospholipid syndrome: where do we stand | |
RU2304783C1 (ru) | Способ прогнозирования развития гестоза | |
RU2313095C1 (ru) | Способ прогнозирования перинатальных гипоксических поражений центральной нервной системы у новорожденных | |
Nishimaki et al. | Comparison of markers for fetal inflammatory response syndrome: Fetal blood interleukin‐6 and neonatal urinary β2‐microglobulin | |
RU2431844C1 (ru) | Способ прогнозирования состояния плода при беременности, осложненной многоводием и наличием в крови антител класса g k chlamydia trachomatis | |
RU2287823C1 (ru) | Способ прогнозирования гестоза | |
Chepanov et al. | Characteristics of autoantibodies associated with recurrent pregnancy loss | |
RU2290644C1 (ru) | Способ прогнозирования церебральных нарушений у новорожденных от матерей из группы высокого риска | |
Bayram et al. | The effect of maternal serum sFAS/sFASL system on etiopathogenesis of preeclampsia and severe preeclampsia | |
Yavari Kia et al. | Maternal serum and cervicovaginal IL-6 in patients with symptoms of preterm labor | |
Mardanian et al. | The diagnostic role of cervico-vaginal fluid interleukins-1α in endometriosis: A case-control study | |
Ali et al. | The value of Neutrophil gelatinase-associated lipocalin and Neutrophil/Lymphocyte Ratio in the diagnosis of preeclampsia and its severity | |
RU2526178C2 (ru) | Способ прогнозирования задержки внутриутробного роста плода |