RU2807912C1 - 5-[4'-(1'',3''-бензоксазол-2''-ил)фенил]-10,15,20-трис(4'-сульфофенил)порфин в качестве флуоресцентного сенсора для обнаружения и количественного определения содержания альбумина - Google Patents
5-[4'-(1'',3''-бензоксазол-2''-ил)фенил]-10,15,20-трис(4'-сульфофенил)порфин в качестве флуоресцентного сенсора для обнаружения и количественного определения содержания альбумина Download PDFInfo
- Publication number
- RU2807912C1 RU2807912C1 RU2022133546A RU2022133546A RU2807912C1 RU 2807912 C1 RU2807912 C1 RU 2807912C1 RU 2022133546 A RU2022133546 A RU 2022133546A RU 2022133546 A RU2022133546 A RU 2022133546A RU 2807912 C1 RU2807912 C1 RU 2807912C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- albumin
- solution
- content
- phenyl
- benzoxazol
- Prior art date
Links
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 title claims abstract description 7
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 title claims abstract description 5
- JZRYQZJSTWVBBD-UHFFFAOYSA-N pentaporphyrin i Chemical compound N1C(C=C2NC(=CC3=NC(=C4)C=C3)C=C2)=CC=C1C=C1C=CC4=N1 JZRYQZJSTWVBBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 4
- 238000011002 quantification Methods 0.000 title claims description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims 2
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 claims abstract description 51
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 claims abstract description 51
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract description 13
- 238000002189 fluorescence spectrum Methods 0.000 abstract description 10
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 7
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 abstract description 3
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 abstract description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 abstract description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 abstract description 3
- 239000003269 fluorescent indicator Substances 0.000 abstract 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 39
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 21
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 21
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N dichloromethane Natural products ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 15
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 15
- 238000000034 method Methods 0.000 description 13
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- -1 porphyrin compound Chemical class 0.000 description 9
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N methanol Natural products OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N chloroform Substances ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 6
- BCMCBBGGLRIHSE-UHFFFAOYSA-N 1,3-benzoxazole Chemical group C1=CC=C2OC=NC2=C1 BCMCBBGGLRIHSE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- OHJMTUPIZMNBFR-UHFFFAOYSA-N biuret Chemical compound NC(=O)NC(N)=O OHJMTUPIZMNBFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000001840 matrix-assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 5
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N methyl pentane Natural products CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- URLKBWYHVLBVBO-UHFFFAOYSA-N p-dimethylbenzene Natural products CC1=CC=C(C)C=C1 URLKBWYHVLBVBO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Substances [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 4
- 150000004032 porphyrins Chemical class 0.000 description 4
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N toluene Substances CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 4
- KAESVJOAVNADME-UHFFFAOYSA-N 1H-pyrrole Natural products C=1C=CNC=1 KAESVJOAVNADME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RUDINRUXCKIXAJ-UHFFFAOYSA-N 2,2,3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,9,9,10,10,11,11,12,12,13,13,14,14,14-heptacosafluorotetradecanoic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)F RUDINRUXCKIXAJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- HUMNYLRZRPPJDN-UHFFFAOYSA-N benzenecarboxaldehyde Natural products O=CC1=CC=CC=C1 HUMNYLRZRPPJDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N bromophenol blue Chemical compound C1=C(Br)C(O)=C(Br)C=C1C1(C=2C=C(Br)C(O)=C(Br)C=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000013065 commercial product Substances 0.000 description 3
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 3
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N succinic acid Chemical compound OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N trifluoroacetic acid Substances OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N triphenylphosphine Substances C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910018072 Al 2 O 3 Inorganic materials 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonium chloride Substances [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N Bilirubin Chemical compound N1C(=O)C(C)=C(C=C)\C1=C\C1=C(C)C(CCC(O)=O)=C(CC2=C(C(C)=C(\C=C/3C(=C(C=C)C(=O)N\3)C)N2)CCC(O)=O)N1 BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N 0.000 description 2
- FRPHFZCDPYBUAU-UHFFFAOYSA-N Bromocresolgreen Chemical compound CC1=C(Br)C(O)=C(Br)C=C1C1(C=2C(=C(Br)C(O)=C(Br)C=2)C)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 FRPHFZCDPYBUAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N Cu2+ Chemical compound [Cu+2] JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000014311 Cushing syndrome Diseases 0.000 description 2
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 2
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 2
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 229910001431 copper ion Inorganic materials 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N monobenzene Natural products C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- QNGNSVIICDLXHT-UHFFFAOYSA-N para-ethylbenzaldehyde Natural products CCC1=CC=C(C=O)C=C1 QNGNSVIICDLXHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005375 photometry Methods 0.000 description 2
- 229910000027 potassium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011181 potassium carbonates Nutrition 0.000 description 2
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 2
- 239000001044 red dye Substances 0.000 description 2
- 239000012088 reference solution Substances 0.000 description 2
- 239000011684 sodium molybdate Substances 0.000 description 2
- 235000015393 sodium molybdate Nutrition 0.000 description 2
- TVXXNOYZHKPKGW-UHFFFAOYSA-N sodium molybdate (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].[O-][Mo]([O-])(=O)=O TVXXNOYZHKPKGW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000020 sulfo group Chemical group O=S(=O)([*])O[H] 0.000 description 2
- YNHJECZULSZAQK-UHFFFAOYSA-N tetraphenylporphyrin Chemical compound C1=CC(C(=C2C=CC(N2)=C(C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC(N=2)=C(C=2C=CC=CC=2)C2=CC=C3N2)C=2C=CC=CC=2)=NC1=C3C1=CC=CC=C1 YNHJECZULSZAQK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000355 1,3-benzoxazolyl group Chemical group O1C(=NC2=C1C=CC=C2)* 0.000 description 1
- FGYADSCZTQOAFK-UHFFFAOYSA-N 1-methylbenzimidazole Chemical compound C1=CC=C2N(C)C=NC2=C1 FGYADSCZTQOAFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OKBYNQIRLPVVIC-UHFFFAOYSA-N 2-bromoporphyrin Chemical compound [N]1C2=CC=C1C=C(N1)C=C(Br)C1=CC([N]1)=CC=C1C=C(N1)C=CC1=C2 OKBYNQIRLPVVIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MKNQNPYGAQGARI-UHFFFAOYSA-N 4-(bromomethyl)phenol Chemical compound OC1=CC=C(CBr)C=C1 MKNQNPYGAQGARI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZRYZBQLXDKPBDU-UHFFFAOYSA-N 4-bromobenzaldehyde Chemical compound BrC1=CC=C(C=O)C=C1 ZRYZBQLXDKPBDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010006895 Cachexia Diseases 0.000 description 1
- 208000005156 Dehydration Diseases 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 1
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 206010058819 Hyperalbuminaemia Diseases 0.000 description 1
- 208000037171 Hypercorticoidism Diseases 0.000 description 1
- 206010020850 Hyperthyroidism Diseases 0.000 description 1
- 208000003623 Hypoalbuminemia Diseases 0.000 description 1
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 1
- 241001662043 Icterus Species 0.000 description 1
- 206010023126 Jaundice Diseases 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 206010025476 Malabsorption Diseases 0.000 description 1
- 208000004155 Malabsorption Syndromes Diseases 0.000 description 1
- 208000002720 Malnutrition Diseases 0.000 description 1
- 206010029164 Nephrotic syndrome Diseases 0.000 description 1
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 201000005255 adrenal gland hyperfunction Diseases 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000003263 anabolic agent Substances 0.000 description 1
- 229940070021 anabolic steroids Drugs 0.000 description 1
- 229940057499 anhydrous zinc acetate Drugs 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- WDIHJSXYQDMJHN-UHFFFAOYSA-L barium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ba+2] WDIHJSXYQDMJHN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910001626 barium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003809 bile pigment Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000012496 blank sample Substances 0.000 description 1
- 208000034158 bleeding Diseases 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N butanedioic acid Chemical compound O[14C](=O)CC[14C](O)=O KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N 0.000 description 1
- 239000012482 calibration solution Substances 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 1
- OQNGCCWBHLEQFN-UHFFFAOYSA-N chloroform;hexane Chemical compound ClC(Cl)Cl.CCCCCC OQNGCCWBHLEQFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005595 deprotonation Effects 0.000 description 1
- 238000010537 deprotonation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 208000010227 enterocolitis Diseases 0.000 description 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000007954 hypoxia Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 239000002563 ionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 230000001678 irradiating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001000 lipidemic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 230000001071 malnutrition Effects 0.000 description 1
- 235000000824 malnutrition Nutrition 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 125000000250 methylamino group Chemical group [H]N(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 208000015380 nutritional deficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000065 osmolyte Effects 0.000 description 1
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N palladium Substances [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- 238000011197 physicochemical method Methods 0.000 description 1
- 208000008423 pleurisy Diseases 0.000 description 1
- 229920000867 polyelectrolyte Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- RKCAIXNGYQCCAL-UHFFFAOYSA-N porphin Chemical compound N1C(C=C2N=C(C=C3NC(=C4)C=C3)C=C2)=CC=C1C=C1C=CC4=N1 RKCAIXNGYQCCAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940072033 potash Drugs 0.000 description 1
- 235000015320 potassium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 201000009395 primary hyperaldosteronism Diseases 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 230000005588 protonation Effects 0.000 description 1
- 239000013074 reference sample Substances 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- ZNCPFRVNHGOPAG-UHFFFAOYSA-L sodium oxalate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)C([O-])=O ZNCPFRVNHGOPAG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940039790 sodium oxalate Drugs 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 239000001384 succinic acid Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000008359 toxicosis Effects 0.000 description 1
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 1
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 239000002676 xenobiotic agent Substances 0.000 description 1
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 1
- DJWUNCQRNNEAKC-UHFFFAOYSA-L zinc acetate Chemical compound [Zn+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O DJWUNCQRNNEAKC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000004246 zinc acetate Substances 0.000 description 1
- 229960000314 zinc acetate Drugs 0.000 description 1
Abstract
Изобретение относится к аналитической и биомедицинской химии, а именно к новому соединению, 5-[4′-(1′′,3′′-бензоксазол-2′′-ил)фенил]-10,15,20-трис(4′-сульфофенил)порфину формулы
Description
Изобретение относится к химической промышленности, а именно к получению соединения, которое может быть использовано в медицине, клинической лабораторной диагностике, биохимии, фармакопеи, аналитической химии, в качестве высокочувствительного флуоресцентного сенсора для обнаружения и определения содержания альбумина в водных растворах.
Альбумин - это белок, составляющий до 60% от общего количества белков плазмы крови. Основные функции альбумина сыворотки крови: связывание и транспорт катионов, анионов, жирных кислот, билирубина, витаминов, лекарств, ксенобиотиков; поддержание постоянства онкотического давления. Нормальный уровень сывороточного альбумина у взрослых составляет от 35 до 50 г/л. Для детей в возрасте менее 3 лет нормальный уровень - в пределах 25-55 г/л. Изменение содержания белка в сыворотке крови может свидетельствовать о различных нарушениях и заболеваниях. Гипоальбуминемия наблюдается при: а) снижении его синтеза в печени (цирроз печени, недоедание (кахексия), синдром мальабсорбции); б) повышении катаболизма (травма, инфекция, сепсис, лихорадка, гипоксия, синдром Кушинга, гипертиреоз, гиперкортицизм, злокачественные опухоли); в) аномальных потерях (шок, кровотечение, энтероколиты, нефротический синдром); г) патологическом распределении (после оперативных вмешательств, при ожогах, токсикозе, асците, плеврите). Гиперальбуминемия наблюдается при остром обезвоживании, при приеме анаболических стероидов [Иванов, Алексей Алексеевич. "Клиническая лабораторная диагностика." (2017): 432-432].
Известен способ определения альбумина с помощью биуретовой реакции [Медицинские лабораторные технологии. Справочник. Том 2. Под редакцией А.И.Карпищенко. Санкт-Петербург: Интермедика. 1999. Стр. 58-59]. Она основана на способности пептидной группы белков и полипептидов образовывать с ионами меди в щелочной среде комплексные соединения фиолетового цвета. Реакция позволяет обнаружить наличие пептидной группы: -CO-NH- в исследуемом веществе и, следовательно, является универсальной реакцией для обнаружения любых веществ белковой природы. Точность определения количества альбумина в растворе, содержащем и другие белки будет зависеть от степени их удаления. Например, при анализе содержания альбумина в крови биуретовым методом, глобулины предварительно осаждают сульфатом аммония или этанольным раствором трихлоруксусной кислоты и отделяют центрифугированием. Альбумины могут частично агрегировать и отделяться при центрифугировании, что приводит к занижению результата. Кроме того, точность количественного определения альбумина зависит от концентрации ионов Cu2+. При низком содержании ионов двухвалентной меди в среде значительная ошибка наблюдается при определении низких концентраций белка. При высоком содержании ионов Cu2+ необходимо увеличивать pH для их стабилизации, но при значительном увеличении pH проба мутнеет и становится непригодной для анализа [Альтшулер Б. Ю., Раков С. С., Ткачев Г. А. Методические аспекты лабораторного определения низких концентраций белка в биологических жидкостях (опыт применения математического анализа) //Вопросы медицинской химии. - 2001. - Т. 47. - №. 4. - С. 426-438].
Недостатками биуретового метода является невысокая специфичность, чувствительность биуретовой реакции к температуре, сложность приготовления биуретового реактива, состоящего из пяти химически чистых веществ.
Известен также способ фотокалориметрического определения содержания альбумина. Он основан на взаимодействии альбумина с красителем (бромкрезоловый зеленый, бромкрезоловый фиолетовый, бромфеноловый синий), в результате взаимодействия образуется окрашенный комплекс, интенсивность окраски которого пропорциональна концентрации альбумина в пробе. Наиболее распространенным красителем, используемым для определения альбумина, является бромкрезоловый зеленый, который был предложен F. Rodkey в 1965 г. Реакцию обычно проводят при pH 4,2-4,5, фотометрию осуществляют при 630 нм. Это наиболее широко используемый способ определения содержания альбумина в клинической биохимии [Инструкция по применению набора реагентов для определения содержания альбумина в сыворотке и плазме крови человека. АЛЬБУМИН ФС. Утверждена Приказом Росздравнадзора от 15 апреля 2009 г. №3004 - Пр/09 РУ № ФСР 2009/04712 от 06.02.2009 г.].
Ограничением применения метода является использование липемичных и гемолизированных образцов. Разрушенные эритроциты увеличивают светорассеяние, а гемоглобин, поглощающий свет в дальневолновой части спектра, делает фотометрию невозможной.
Известен также спектрофотометрический способ определения общего белка в биологических жидкостях [Патент 2593361 C1 Российская Федерация, МПК G01N 33/52 (2006.01), G01N 21/27 (2006.01) Спектрофотометрический способ определения белка в биологических жидкостях [Текст] / Анисимович Полина Владимировна (RU), Починок Татьяна Борисовна (RU), Темердашев Зауаль Ахлоович (RU), Токарева Елена Владимировна (RU); заявитель Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Кубанский государственный университет" (ФГБОУ ВПО "КубГУ") (RU); заявл. 21.02.2015; опубл. 10.08.2016 г., Бюл. №22], включающий смешивание образца биологической жидкости с раствором реагента, содержащим следующие компоненты: бромпирогаллоловый красный, молибдат натрия оксалат натрия, янтарную кислоту и воду. Для получения результата смешивают образец биологической жидкости и раствор реагента в соотношении 1:(5-200) соответственно и измеряют оптическую плотность пробы при длине волны в диапазоне 580-620 нм относительно холостой пробы, а затем определяют концентрацию белка методом градуировочного графика или методом одного эталона.
Недостатком является невозможность количественного определения альбуминов, в присутствии других белков в пробе, что вызвано близкой чувствительностью красителя бромпирогаллолового красного к альбумину и белкам глобулинового ряда.
Известен способ определения белка и муцина [Патент 2250465 С1 Российская Федерация, МПК G01N 33/52 (2000.01) Способ количественного определения муцина [Текст] / Стрелец Е.В. (RU), Егорова Е.Н. (RU); заявитель Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Тверская государственная медицинская академия Министерства здравоохранения Российской Федерации" (ГОУ ВПО Тверская ГМА Минздрава России) (RU); заявл. 07.06.2004; опубл. 20.04.2005 г., Бюл. №11], основанный на использовании спектрофотометрического метода по цветной реакций белков с бромфеноловым синим. Растворы белков с бромфеноловым синим в кислой среде образуют окрашенный комплекс, интенсивность которого пропорциональна содержанию белка.
Недостатком изобретения является невозможность количественного определения альбуминов, в присутствии других белков в пробе, что вызвано близкой чувствительностью красителя бромпирогаллолового красного к альбумину и гликопротеинам.
Существенным недостатком всех выше перечисленных изобретений является: недостаточная точность и длительное время проведения анализа; зависимость результатов от качества используемых реактивов; чувствительность существующих методов к температуре, невозможность определения альбумина в присутствии других белков. Существенным ограничением перечисленных изобретений являются строгие требования к анализируемому раствору: он должен быть спектрально прозрачен, т.е. не содержать избыточного количества триглицеридов, жиров, так как это придает мутность раствору; не допускается наличие разрушенных эритроцитов, приводящее к увеличению светорассеяния; исключатся повышенная концентрация желчных пигментов (иктеричность); раствор не должен содержать окрашенных веществ, поглощающих свет в дальневолновой части спектра.
Наиболее близким к изобретению в части селективности взаимодействия красителя с альбуминами является способ определения альбумина с композицией, включающей краситель - пирогаллоловый красный, молибдат натрия, янтарную кислоту, ацетат натрия, низкоатомный спирт и стабилизатор -ниооногенный ПАВ [Патент 2268476 С2 Российская Федерация, МПК G01N 33/68 (2006.01) Способ количественного определения белка в биологических жидкостях [Текст] / Шибанов Александр Николаевич (RU), Свистов Александр Евгеньевич (RU), Ким Юрий Вячеславович (RU), Иванов Вадим Михайлович (RU), Мамедова Анжела Мирзебалаевна (RU), Фигуровская Валентина Николаевна (RU); заявитель Общество с ограниченной ответственностью "Эйлитон" (ООО "Эйлитон") (RU); заявл. 30.03.2004; опубл. 20.01.2006 г., Бюл. №2]. Содержание альбумина оценивают по оптической плотности окрашенного раствора в диапазоне 600-700 нм.
Основными его недостатками являются повышенные требования к анализируемому образцу, измерения возможны только в спектрально прозрачных растворах, в моче и спиномозговой жидкости, не допускается наличие окрашенных соединений в анализируемом образце. К недостаткам также следует отнести многокомпонентность композиции и сложность ее приготовления.
Наиболее близким к заявленному изобретению в части использования флуоресценции для количественного определения альбумина является метод Лоури [Альтшулер Б.Ю., Раков С.С., Ткачев Г.А. Вопросы медицинской химии. 2001. №4. С. 426-438], основанный на определении по спектрам флуресценции содержания тирозина и триптофана в составе белковой молекулы.
Основным его недостатком является высокая чувствительность к присутствию в растворе небелковых соединений (лекарственных препаратов, неорганических солей кислот или оснований), способных связываться с альбумином, а также очень высокую зависимость результатов измерений от температуры, наличия осмолитов, детергентов, ионногенных ПАВ.
Задачей изобретения является получение водорастворимого порфирина с высоким выходом, который селективно связывается с альбумином, образуя флуоресцентный комплекс без ограничений к составу раствора. Поставленная задача достигается новым химическим соединением формулы:
.
Поставленная задача решена за счет того, что получено новое порфириновое соединение, содержащее три сульфо-группы и остаток бензоксазола, структура которого подтверждена физико-химическими методами анализа. Выбор порфирина обусловлен следующими причинами: три сульфо-группы обеспечивают растворимость соединения в водных и физиологических средах, а также способность соединения участвовать в кислотно-основных равновесиях за счет протонирования или депротонирования сульфо-групп порфирина, гетерильный заместитель (остаток бензоксазола) обеспечивает гидрофобно-гидрофильный баланс, необходимый для образования комплекса с альбуминами, а также селективное связывание с триптофановыми аминокислотными остатками альбумина. Полученный комплекс после воздействия на него светом с длиной волны 295 нм интенсивно флуоресцирует. Наличие максимума флуоресценции в области 370-380 нм свидетельствует о наличии альбумина в растворе. Для количественно оценки содержания альбумина оценивают флуоресценцию в анализируемой пробе и образце сравнения с известной концентрацией альбумина.
Для получения этого соединения используют следующие вещества:
- пара-ксилол нефтяной ТУ 38.101255-87;
- бензальдегид - коммерческий продукт TCI EUROPE N.V.;
- трифторуксусная кислота ту 6-09-3877-80;
- пиррол - ТУ 6-09-07-242-84;
- ацетат цинка - ГОСТ 5852-78;
- оксид алюминия - ТУ 6-09-426-75;
- хлороформ - ТУ 263-44493179-01 с изм. №1, 2;
- метанол - ГОСТ 2222-95;
- трифенилфосфин - коммерческий продукт TCI EUROPE N.V.;
- поташ (карбонат калия) - ГОСТ 4221-76;
- ацетат меди - ГОСТ 5852-79;
- ацетат палладия - ТУ 2625-024-00205067-2003;
- бензоксазол - коммерческий продукт TCI EUROPE N.V.;
- хлористый метилен - ТУ 2631-44493179-98 с изм. №1, 2, 3;
- гексан - ТУ 6-09-06-4521-77;
- бензол - ГОСТ 5955-75 с изм. №1, 2;
-толуол ТУ 2414-006-72021999-2009
Изобретение поясняется чертежами, где на фиг. 1 показан результат изменения спектров флуоресценции раствора альбумина и комплекса альбумина с порфириновым соединением. Спектры флуоресценции получены при облучении анализируемых растворов светом длиной волны 295 нм. Для анализа можно использовать любой спектрофлуориметр. Исходный спектр флуоресценции альбумина является типичным с максимумом флуоресценции 347 нм, что обеспечивается наличием триптофановых аминокислотных остатков в молекуле альбумина. В анализируемый раствор альбумина, объемом 2 мл добавлен раствор порфиринового соединения в количестве 40 мкл. Полученный комплекс более интенсивно флуоресцирует по сравнению с исходным альбумином с максимумом флуоресценции, приходящимся на 377 нм.
На фиг.2. показаны спектры флуоресценции комплекса альбумина с порфириновым соединением, с разной концентрацией белка: 0,028 масс.% - линия 1; 0,042 масс.% - линия 2; 0,056 масс.% - линия 3; 0,07 масс.% - линия 4; 0,084 масс.% - линия 5; 0,098 масс.% - линия 6.
На фиг.3 - зависимость интенсивности флуоресценции растворов комплекса альбумина с порфириновым соединением от концентрации альбумина. Зависимость интенсивности флуоресценции от содержания альбумина имеет линейный характер, что подтверждается численным значением коэффициента корреляции R2 = 0,990.
На фиг.4 - спектр флуоресценции анализируемого раствора с добавлением порфиринового раствора в соотношении 2 мл : 40мкл.
Заявленное соединение получают следующим образом:
Вначале получают 5-(4'-бромфенил)-10,15,20-трифенилпорфин следующим образом:
К кипящему раствору 2 мл трифторуксусной кислоты в 250 мл пара-ксилола при пропускании тока азота прибавляют из капельной воронки за 20 мин раствор 5 мл (72 ммоль) пиррола, 3,3 г (18 ммоль) 4-бромбензальдегида и 5,5 мл (54 ммоль) бензальдегида в 50 мл пара-ксилола. Смесь кипятят 40 мин в токе азота и затем 1 час в токе воздуха. Раствор охлаждают и нейтрализуют 20 мл 25%-ного раствора аммиака. Ксилол отгоняют с водяным паром, остаток в колбе отфильтровывают, высушивают при комнатной температуре, растворяют в 200 мл хлороформа и хроматографируют на колонке с Al2O3 (II ст. активности по Брокману), элюируя смесью хлороформом-гексан (1:1). Собирают первую темно-красную зону 5-(4'-бромфенил)-10,15,20-трифенилпорфина, содержащую в качестве примеси попутно образующийся тетрафенилпорфин. Элюат упаривают до 5 мл, монобромпорфирин осаждают 50 мл метанола, и высушивают при комнатной температуре до постоянного веса. Выход 1,14 г (23%). Rf 0,67 (силуфол, хлорофом). ЭСП (хлороформ), λmax, нм (lgε): 648 (3.63), 590 (3,77), 551 (3,91), 515 (4,26), 491(5,64). Масс-спектр (MALDI-TOF), m/z: рассчитано: 693,63 C44H29BrN4: Найдено: 694,42 [M+H]+.
Далее получают 5-(4'-бромфенил)-10,15,20-трифенилпорфинат цинка:
Растворяют 3 г (4,3 ммоль) 5-(4′-бромфенил)-10,15,20-трифенилпорфирина и 4,7 г (0,021 моль) безводного ацетата цинка в смеси 200 мл метанола и 100 мл хлороформа. Смесь кипятят 1,5 ч, контролируя протекание реакции с помощью ЭСП (изменение спектра с 4-х полосного на 2-х полосный). Смесь охлаждают, отгоняют избыток растворителя, остаток хроматографируют на колонке с Al 2 O 3 (III ст. активности по Брокману), элюируя хлорофором. Растворитель отгоняют, остаток промывают водой, отфильтровывают и высушивают при комнатной температуре до постоянной массы. Выход 3,3 г. (98%).
1H ЯМР δ, м.д.: 9,02-8,99m (2H, H8,12), 8,97-8,96m (2H, H2,18), 8,27-8,24m (4H, H3,7,13,17), 8,14-8,12m (1H, H4-HPh), 7,78-7,73m (10H; 8H, H2,6-HPh; 2H, H4-HPh), 7,59-7,51m (8H, H3,5-HPh) (CDCl3). ЭСП: λmax, нм (lgε): 595(3,70), 551(4,14), 424(5,51) (CHCl3). MALDI-TOF MS: m/z Рассчитано: C44H27BrN4Zn, 757,0156; Найдено: 757,5608.
Затем получают 5-[4'-(1'',3''-бензоксазол-2''-ил)фенил]-10,15,20-трифенилпорфинат цинка:
В колбе на 100 мл, снабженной магнитной мешалкой и обратным холодильником, кипятят при перемешивании в течении 52 ч смесь 1 г (0,132 ммоль)5-(4′-бромфенил)-10,15,20-трифенилпорфината цинка, 0,0592 г (0,264 ммоль) Pd(OAc)2, 0,0575 г (0,264 ммоль) Cu(OAc)2⋅H2O 0,34 г (0,132 ммоль) трифенилфосфина, 0,364 г (1,342 ммоль) карбоната калия, и 0,314 г (0,264 ммлоль) бензоксазола в 45 мл толуола. Далее смесь охлаждают до комнатной температуры и добавляют 50 мл хлористого метилена и фильтровали. Осадок промывают 10 мл хлористого метилена, объединенные органические фракции упаривают в вакууме. Остаток растворяют в 30 мл хлористого метилена и хроматографируют на колонке с селикагелем, элюируя первоначально смесью гексан- хлористый метилен (1:1) (сходит зона примесей тетрафенилпорфина), затем хлористым метиленом, собирая темно-красную зону моногетерилпорфирина. Растворитель упаривают досуха. Выход 0,131 г (64%). Rf 0,72 (силуфол, хлорофом).
1H ЯМР δ, м.д.: 9,00-8,95m (4H, H3,7,13,17), 8,67-8,66d (2H, H8,12, J = 7,67), 8,42-8,40d (2H, H2,18, J = 6,65), 8,24-8,23m (2H, H4-HPh), 8,12-8,11m (1H, H4-HPh), 7,96-7,94m (2H, H2,6-HPh), 7,94-7,92m (6H, 4H, H3,5-HPh; 2H, H2,6-HPh), 7,79-7,73m (4H, 2,6-HPh), 7.57-7.51m (2H, от бензоксазола), 7.48-7.46m (2H от бензоксазола), 7,22-7,20d (4H, H3,5-HPh; J = 8,06) (CDCl3). ЭСП: λmax, нм (lgε): 595(3,71), 552(4,10), 424(5,46) (CHCl3). MALDI-TOF MS: m/z Рассчитано: C51H31N5OZn, 795,21; Найдено: 795,45.
Получение заявляемого соединения - 5-[4'-(1'',3''-бензоксаазол-2''-ил)фенил]-10,15,20-трис(4'-сульфофенил)порфина.
В колбе на 50 мл, снабженную воздушным холодильником нагревают при перемешивании до 70°С 100 мг 5-[4'-(1'',3''-бензоксазол-2''-ил)фенил]-10,15,20-трифенилпорфинат цинка и 10 мл серной кислоты (98%). Смесь перемешивают при 70°С в течении 48 часов, затем охлаждают до комнатной температуры и перемешивают еще 72 часа. Затем смесь выливают на лёд. Тёмно-зелёную суспензию фильтруют, промывают холодной водой до отсутствия помутнения раствора хлорида бария, затем ацетоном. Сульфированный порфирин высушивают при комнатной температуре до постоянной массы. Выход 0,119 г (98%). Rf = 0,55 (EtOH - 25%-ный раствор аммиака (20:1). 1H ЯМР δ, м.д.: 8,92-8,89m (4H, H3,7,13,17), 8,67-8,66m (2H, H8,12), 8,44-8,43m (2H, H2,18), 8,22-8,21m (8H, H2,6-HPh), 8,07-8,06m (8H, H3,5-HPh), 8,01-7,94m (4H, от N-метилбензимидазола), 4,40 s (3H N-Me); -0,82 bs (2H, NH) (DMSO-d6). ЭСП: λmax, нм (lgε): 639(3,57), 581(3,75), 556(3,83), 517(4,06), 414(5,43) (H2O). MALDI-TOF MS: m/z Рассчитано: C52H36N6O9S3, 987,07; Найдено: 987,12.
1H ЯМР δ, м.д.: 8,93-8,87m (4H, H3,7,13,17), 8,69-8,67m (2H, H8,12), 8,52-8,51m (2H, H2,18), 8,22-8,20m (8H, H2,6-HPh), 8,07-8,05m (8H, H3,5-HPh), 7,65-7,54m (4H, от бензоксазола); -0,83 bs (2H, NH) (DMSO-d6). ЭСП: λmax, нм (lgε): 644(3,74), 589(3,84), 557(3,96), 521(4,12), 414(5,37) (H2O). MALDI-TOF MS: m/z Рассчитано: C51H33N5O10S3, 972,03; Найдено: 972,55.
Применение заявляемого соединения, пример 1:
Для обнаружения альбумина готовят концентрированный раствор 5-[4'-(1'',3''-бензоксазол-2''-ил)фенил]-10,15,20-трис(4'-сульфофенил)порфина в воде, для этого навеску соединения массой 0,00039г растворяют в 1 мл дистиллированной воды. Полученный раствор индикатора с концентраций 4.0⋅10-4 моль/л хранят в герметичной таре в светозащищенном месте. Полученный раствор порфиринового соединения добавляют в количестве в 20 мкл на каждые 1 мл анализируемого раствора. В флуоресцентную кювету помещают 2 мл раствора альбумина в воде с хлоридом натрия с концентрацией 0.05моль/л. Хлорид натрия вносят для нивелирования эффекта полиэлектролитного набухания белка. Регистрируют спектр флуоресценции с длиной волны возбуждающего света 295 нм, наличие максимума поглощения в области 370-380 нм свидетельствует о присутствии альбумина в пробе (фиг.1).
Количественное определения альбумина, пример 2:
1) Готовят раствор порфиринового соединения как в примере 1.
2) Готовят реперные растворы альбумина с известной концентрацией белка (Среп) в водном растворе, содержащем NaCl в концентрации 0.05моль/л при соотношении компонентов для приготовления реперных растворов белка и интенсивности флуоресценции на длине волны 377 нм полученных растворов при облучении светом 295 нм согласно таблице.
| Таблица | ||||
| № раствора | Масса навески альбумина, г | Масса раствора NaCl(0,05моль/л), г | Среп, масс.% альбумина | Fi, отн.ед. |
| 1 | 0,028 | 99,972 | 0,028 | 1411,269 |
| 2 | 0,042 | 99,958 | 0,042 | 1486,808 |
| 3 | 0,056 | 99,944 | 0,056 | 1544,654 |
| 4 | 0,070 | 99,930 | 0,070 | 1663,615 |
| 5 | 0,084 | 99,916 | 0,084 | 1731,462 |
| 6 | 0,098 | 99,902 | 0,098 | 1848,385 |
Навеску БСА кристаллического заданной массы растворяют в водном растворе NaCl согласно таблице, полученные растворы выдерживают не менее 30 мин перед анализом при периодическом перемешивании при комнатной температуре (18.-.25°С).
В флуоресцентную кювету с оптическим путем 1 см вносят 2 мл реперного раствора белка, затем туда же добавляют 40 мкл раствора порфиринового соединения, полученный раствор инкубируют при постоянном перемешивании в течение не менее 30 мин при температуре 25°С. Осуществляют измерение спектра флуоресценции при длине волны возбуждающего света 295 нм (фиг.2), фиксируя интенсивность флуоресценции каждого реперного раствора Fрепi при 377 нм (табл.1). По полученным данным строят градуировочный график, в координатах Fотн.ед=f(Среп).
3) Смешивают анализируемый раствор с раствором порфиринового соединения в соотношении: 2 мл к 40мкл, инкубируют пробу с перемешиванием в течение 30 мин, измеряют спектр флуоресценции при длине волны возбуждения 295нм. Фиксируют интенсивность флуоресценции Fx при 377 нм (Фиг.4).
4) Определяют концентрацию белка альбумина в анализируемом растворе Сх по градуировочному графику или по стандартной формуле относительно градуировочного раствора альбумина с более близким значением интенсивности флуоресценции:
Сх=Среп⋅Fx/Fреп,
Сх=0,07⋅1672,34/1663,62=0,0704 масс.%
Claims (3)
- 5-[4′-(1′′,3′′-Бензоксазол-2′′-ил)фенил]-10,15,20-трис(4′-сульфофенил)порфин формулы:
-
- в качестве флуоресцентного сенсора для обнаружения и количественного определения содержания альбумина.
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2807912C1 true RU2807912C1 (ru) | 2023-11-21 |
Family
ID=
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2250465C1 (ru) * | 2004-06-07 | 2005-04-20 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Тверская государственная медицинская академия Министерства здравоохранения Российской Федерации" (ГОУ ВПО Тверская ГМА Минздрава России) | Способ количественного определения муцина |
| RU2268476C2 (ru) * | 2004-03-30 | 2006-01-20 | Общество с ограниченной ответственностью "Эйлитон" (ООО "Эйлитон") | Способ количественного определения белка в биологических жидкостях |
| RU2593361C1 (ru) * | 2015-02-24 | 2016-08-10 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Кубанский государственный университет" (ФГБОУ ВПО "КубГУ") | Спектрофотометрический способ определения белка в биологических жидкостях |
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2268476C2 (ru) * | 2004-03-30 | 2006-01-20 | Общество с ограниченной ответственностью "Эйлитон" (ООО "Эйлитон") | Способ количественного определения белка в биологических жидкостях |
| RU2250465C1 (ru) * | 2004-06-07 | 2005-04-20 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Тверская государственная медицинская академия Министерства здравоохранения Российской Федерации" (ГОУ ВПО Тверская ГМА Минздрава России) | Способ количественного определения муцина |
| RU2593361C1 (ru) * | 2015-02-24 | 2016-08-10 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Кубанский государственный университет" (ФГБОУ ВПО "КубГУ") | Спектрофотометрический способ определения белка в биологических жидкостях |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| АЛЬТШУЛЕР Б.Ю. и др. Методические аспекты лабораторного определения низких концентраций белка в биологических жидкостях (опыт применения математического анализа), Вопросы медицинской химии, 2001, Т.47, N 4, с. 426-438. * |
| ГОРНУХИНА О.В. и др. 5-[4'-(1,3-Бензотиазол-2-ил)фенил]-2,3,7,8,12,18-гексаметил-13,17-ди-н-амил-порфирин: синтез, координационные свойства и сорбция на полипропиленовые материалы, Изв. вузов. Химия и хим. технология, 2018. Т.61, N 1, c. 49-54. SYRBU S.A. et al. Synthesis of Hetaryl-Substituted Asymmetric Porphyrins and Their Affinity to SARS-CoV-2 Helicase, Russ J Gen Chem, 2021, vol.91, no.6, p. 1039-1049. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Jiang et al. | An ultra-sensitive and ratiometric fluorescent probe based on the DTBET process for Hg 2+ detection and imaging applications | |
| US8383830B2 (en) | Cyanine compounds and their use in staining biological samples | |
| JP3153831B2 (ja) | メロシアニンタンパク質誤差指示薬 | |
| CN105572095B (zh) | 一种人血清白蛋白的检测试剂及定量检测方法 | |
| FI73839B (fi) | Foerfarande foer kvantitativ bestaemning av hemoglobinhalten i avfoering, urin eller magsaft. | |
| Niu et al. | A novel colorimetric and ratiometric fluorescent probe for sensing SO 2 derivatives and their bio-imaging in living cells | |
| Yang et al. | Fluorescent probe for Cu 2+ and the secondary application of the resultant complex to detect cysteine | |
| CN115490674A (zh) | 选择性检测同型半胱氨酸的荧光探针的合成及应用 | |
| KR102513508B1 (ko) | pH 검출용 염료 화합물, 이를 이용한 필름 및 키트 | |
| RU2807912C1 (ru) | 5-[4'-(1'',3''-бензоксазол-2''-ил)фенил]-10,15,20-трис(4'-сульфофенил)порфин в качестве флуоресцентного сенсора для обнаружения и количественного определения содержания альбумина | |
| JP2749615B2 (ja) | 新規な指示薬化合物、その製造法及び鉄分析系における該化合物の使用 | |
| WO2013189265A1 (zh) | 钾离子浓度检测方法、系统和试剂盒 | |
| Berry et al. | Detection of metabolic disorders: Chromatographic procedures and interpretation of results | |
| US8642764B1 (en) | Julolidine conjugates and methods for their preparation and use | |
| Blumberg et al. | Hemoglobin determined in 15 microL of whole blood by" front-face" fluorometry. | |
| Caccia | Spectrophotometric determination of pyrazinamide blood concentrations and excretion through the kidneys | |
| CN112225743B (zh) | 一种喹啉基近红外罗丹明荧光染料、比率荧光探针及其合成和应用 | |
| JPH0453265B2 (ru) | ||
| RU2813631C1 (ru) | 5-[4′-(N-МЕТИЛ-1′′,3′′-БЕНЗИМИДАЗОЛ-2′′-ИЛ)ФЕНИЛ]-10,15,20-ТРИС(4′-СУЛЬФОФЕНИЛ)ПОРФИН И ПРИМЕНЕНИЕ ЕГО В КАЧЕСТВЕ КИСЛОТНОГО ИНДИКАТОРА ДЛЯ ОПТИЧЕСКОГО И ВИЗУАЛЬНОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ рН | |
| Hollifield et al. | A phosphorimetric investigation of several sulfonamide drugs: a rapid direct procedure for the determination of drug levels in pooled human serum with specific application to sulfadiazine, sulfamethazine, sulfamerazine and sulfacetamide | |
| RU2818821C1 (ru) | 5-[4'-(1",3",7"-ТРИМЕТИКСАНТ-2"-ИЛ)ФЕНИЛ] 10,15,20-ТРИС-(N-МЕТИЛПИРИДИНИЙ-3'-ИЛ)ПОРФИРИН ТРИИОДИД, ПРОЯВЛЯЮЩИЙ СВОЙСТВА рН-ИНДИКАТОРА СИЛЬНОКИСЛЫХ СРЕД | |
| JPH11326207A (ja) | アスコルビン酸の定量方法 | |
| Sharma et al. | Practical Medical Biochemistry | |
| US3607081A (en) | Reagent for determination of globulin | |
| CN113512034B (zh) | 多信号荧光探针的合成及其同时区分Cys、SO2、GSH和Hcy的应用 |