RU2804542C1 - Кормовая добавка для крупного рогатого скота - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к области сельского хозяйства. Предложена кормовая добавка для крупного рогатого скота для повышения рубцового пищеварения, согласно которому крупному рогатому скоту вводят фитохимические вещества транс-коричного альдегида, ванилина, 7-гидроксикумарина, кверцетина дигидрата. Изобретение направлено на повышение рубцового пищеварения у крупного рогатого скота, а также ускорение течения обменных процессов в рубце. 14 ил., 4 табл.

Description

Изобретение относится к области сельского хозяйства и может быть использовано в отрасли животноводства.

Отказ от кормовых антибиотиков в животноводстве побуждает к поиску новых наиболее эффективных препаратов, например, таких как фитопрепараты - малые молекулы с выраженным биологически активным действием.

Установлено, что фитохимические вещества подавляют не только патогенную микрофлору, например, Salmonella typhimurium [1], Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus [2], Candida albicans [3], но являются также иммуностимуляторами [4], способствуют уменьшению окислительного стресса, корректируют показатели крови [5], влияют на метаболом кишечника [6] одновременно с увеличением продуктивных качеств животных [7].

Известен способ улучшения ферментации и снижение концентрации метана в рубце жвачных за счет введения экстракта травы полыни в дозировке 10,0 г на 1 кг сухого вещества рациона, а также корневищ и корней девясила в дозировке 6,0 г на 1 кг сухого вещества рациона [8]. В опыте при включении в рацион крупного рогатого скота смесь содержащую сухой экстракт Quercus cortex (5%), маннаноолигосахариды (20%), бета-глюканы (8%) отруби пшеничные (67%) способствовало снижению в рубце крупного рогатого скота представителей грамотрицательных бактерий филума Proteobacteria и увеличению целлюлозолитических эукариотов (грибков) филумов Ascomycota и Neocallimastigomycota [9]. Так же известны способы получения препарата обладающем антимикробным, иммуномодулирующим, язвозаживляющим и антикоагулятивным свойствами, путем обработки коры дуба водой. Предложенный способ позволяет получить готовый продукт, представляющий собой порошок, хорошо растворимый в воде с наличием в добавке дубильных веществ 47,5% микроэлементов, альдегидов, кетона, флаваниодов, а при воздействии электрохимическим активированным катодным водным раствором с рН 7-8 Eh=-300…-450 мВ на порошок коры дуба, получен сухой экстракт, подавляющий зоопатогенные бактерии [10, 11].

Так же известна добавка на основе неочищенного водного экстракта, включающей древесину и кору лиственницы сибирской и лиственницы Гмелина для повышения продуктивности телят и поросят отьемышей в молочный период выращивания. [12]. Однако, разнообразие фитохимических соединений крайне велико, а их свойства зависят от различных факторов [13], таких как вид растения, способ экстракции и очистки, ареал произрастания и т.д. Ввиду этого перед применением того или иного фитохимического вещества требуется проведение биологической аттестации, предполагающей установление антибактериальных качеств и позволяющей выявить эффективные дозировки, рекомендуемые в кормлении сельскохозяйственных животных.

Имеются разнообразные способы определения токсичности растительных экстрактов и их компонентов, в большинстве случаев используют метод in vitro. Например, метод коллективного поведения бактерий C. Violaceum характеризуется синтезированием сине-фиолетового пигмента виолацеина [13], известными методами являются исследования на рекомбинантных люминесцирующих штаммах E. coli, предоставляющий возможность в режиме реального времени получать информацию биологической активности [14]. Эффективность метода доказана на примере штаммов Vibrio fischeri и Escherichia coli при исследовании токсичности сточных вод [15] и бактерицидной активности высокодисперсных частиц металлов [16]. Учеными представлены данные биологической активности кормовых добавок: душицы обыкновенной, шалфея, корневища девясила, полыни горькой, шлемника байкальского, дигестарома, а также высокодисперсных частиц - Cu, Co, Mn на популяционную активность инфузорий S. Mytilus во временном периоде (1-3 часа). Данные представлены в виде: Tox (токсичные дозы) - 0-40 % выживаемость тест-объекта, LOEC (минимальные действующие концентрации) - 40-70 % выживаемость тест-объекта, NOEC (нетоксичные дозы) - 70-100 % выживаемость тест-объекта [17].

Задачей изобретения является биологическая аттестация фитохимических веществ: ванилина, кверцетин дигидрата, транс-коричный альдегида, 7-гидроксикумарина в тесте ингибирования бактериальной люминесценции, определение переваримости сухого вещества кормового субстрата при введении исследуемых добавок в опытах in vitro, что в свою очередь, позволит рекомендовать их в качестве кормовой добавки для крупного рогатого скота.

Пример.

В качестве объекта исследования были отобраны следующие фитохимические вещества:

1. транс-коричный альдегид (КА) (CAS: 104-55-2, чистота 99 %; Acros Organics, США) - главный компонент эфирного масла Cinnamomum sp., используемый в народной медицине как антиоксидантное, противовоспалительное и антибактериальное средство [18, 19].

2. ванилин (ВН) (CAS: 121-33-5, чистота 99 %; Acros Organics, США) - фенольный альдегид с молекулярной формулой C8H8O3, с присутствием в формуле гидроксильной и эфирной группы, прикрепленные к ароматическому кольцу. Это основной компонент экстракта Vanilla planifolia с выраженными противоопухолевыми, антибиотическими и кворум регулирующими свойствами [20].

3. 7-гидроксикумарин (КМ) (CAS: 93-35-6; чистота 99 %, Acros Organics, США) - лактон о-оксикоричной кислоты, гетероциклическое соединение из класса бензопиренов состава C₉H₆O₃, выделенный из семян Dipteryx odorata, обладающий большим диапазоном биоактивных свойств: бактерицидных, противовоспалительных, антиоксидантных и фермент-ингибирующих [21].

4. кверцетин дигидрат (КВ) (CAS: 6151-25-3, чистота 95 %; Acros Organics, США) - флавоноидное соединение структуры C₁₅H₁₀O₇ × 2H₂O, содержится в различных растениях и обладает антиоксидантной, антибактериальной и противопаразитарной активностью [22].

Методы исследования.

Для биологической аттестации фитохимических веществ навески, эквивалентные их молекулярным массам суспендировали в 1 мл воды дистиллированной, выдерживали 30 мин. на водяной бане при температуре 40±5°C, далее встряхивали. В 96-луночном биолюминесцентном планшете готовили серию разведений ванилина, кверцетин дигидрата, транс-коричный альдегида, 7-гидроксикумарина в концентрациях от 0,25 до 1,5×10^-8 моль/л. В качестве положительного контроля использовали дистиллированную воду. В роли отрицательного контроля выступал антибиотический препарат тетрациклина гидрохлорид (TH) (ОАО «Тюменский химико-фармацевтический завод», Россия) в дозировке от 5 до 2,4×10^-3 мг/мл, или от 0,01 до 4,9×10^-6 моль/л, соответственно.

Биологическую активность определяли с помощью рекомбинантного люминесцирующего штамма Escherichia coli K12 MG1655, несущего гибридную плазмиду pUC18 со встроенным EcoRI-фрагментом ДНК размером около 7 тысяч пар нуклеотидов, со структурными генами биолюминесценции почвенного микроорганизма Photorhabdus luminescens ZM1 («Эколюм», «НВО ИММУНОТЕХ», Россия). Для этого 100 мкл бактериальной суспензии, приготовленной по методике Алешиной Е.С. [23] вносили в лунку к исследуемому образцу и инкубировали в течение 3 часов, отмечая интенсивность люминесценции с периодом в 5 минут.

Аналогичные исследования в не ингибиторных концентрациях проводили на рубцовой жидкости, отобранную через хроническую фистулу рубца через 3 часа после кормления 11-месячных бычков казахской белоголовой породы со средней живой массой 250±6,0 кг, основной рацион которых, включал 30% концентратов и 70% грубых кормов. Перед экспериментом рубцовую жидкость тщательно встряхивали и процеживали через сложенную в 4 слоя стерильную марлю.

Для графического отображения полученных результатов вычисляли относительное значение биолюминесценции по формуле:

A = Io/Ik × 100%,

где Ik - светимость контрольной пробы, Io - светимость опытной пробы.

Метод позволяет определить, как интенсифицирующие, так и ингибирующие, субтоксичные дозы, и, соответственно вывести концентрации, рекомендуемые к дальнейшему тестированию in situ и in vivo.

Исследования по оценке переваримости кормового субстрата проводили при помощи инкубатора Daisy D200I (Ankom Technology, США) (модель искусственного рубца) с рубцовой жидкостью, 48-часовая экспозиция. В качестве модельного корма были использованы пшеничные отруби (ПО) в натуральном виде. Коэффициент переваримости сухого вещества корма (x) в процентах вычисляли по формуле:

,

где m - масса навески корма, мг; m1 - масса высушенного непереваренного остатка корма, мг; m2 - массовая доля влаги в корме, %. Влагу пшеничных отрубей определяли по разнице масс до и после высушивания по ГОСТ 31640-2012.

Результаты исследований.

Степень люминесценции бактериального штамма в среде с добавлением тестируемых веществ изменялась обратно пропорционально концентрации последних, что хорошо видно на 30-й минуте эксперимента, соответствующей стационарной фазе роста контрольной культуры (фигура 1, таблица 1).

При этом максимальным антибиотическим действием обладал транскоричный альдегид: он подавлял более 80% люминесценции (ЕС80) до концентрации 9,8⋅10^-4 моль/л, что было идентично действию гидрохлорида тетрациклина.

Примечательно, что антибиотик в дозе ниже 4,9×10^-4 моль/л стимулировал микробный кворум, а значения светимости были выше контрольных на 6,0-41,0% в зависимости от времени воздействия, чего не отмечалось у транс-коричного альдегида (таблица 2, фигура 2). Менее выраженными антибактериальными свойствами обладали ванилин и 7-гидроксикумарин с эффективными концентрациями 3,9⋅10^-3 и 1,6⋅10^-2 моль/л соответственно, тогда как первый также обладал гормезисным действием в субтоксических дозах с превышением контрольной светимости на 5,0-16,0 % (таблица 2, фигура 3, фигура 4, фигура 6). Кверцетин, напротив, значительно подавлял люминесценцию только в 0,25-молярном растворе (таблица 2, фигура 5). Следует отметить, что динамика люминесценции во всех образцах была неоднородной. Так, токсичность транс-коричного альдегида в концентрации 4,9×10^-4 (EC50) снизилась с 88,0% в начале до 38,0% в конце эксперимента, что вероятно, связано с его высокой степенью летучести и постепенным испарением (фигура 7). Тем не менее, при высоких дозах (более 1,9×10^-3 моль/л) усиления люминесценции не наблюдалось, что свидетельствует о быстрой гибели прокариот. В то же время в среде с ванилином показатели люминесценции при определенной концентрации практически не изменились, что свидетельствует о наличии бактериостатического эффекта (фигура 8).

Что касается дигидрата кверцетина и 7-гидроксикумарина, то здесь зависимость к снижению или увеличению люминесценции зависела от концентрации: в первом случае в диапазоне от 2,5×10^-1 до 3,1×10^-2 моль/л относительные значения люминесценция увеличивались с первой до последней минуты эксперимента, в диапазоне от 1,6×10^-2 до 1,9×10^-3 - только до 60-120 минут, после чего впоследствии снижались, в то время как при концентрациях ниже 9,8×10^-4 наблюдалось постепенное уменьшение относительной величины люминесценции, которое, однако, не приводило к критическим значениям (фигура 9, фигура 10).

Во втором случае токсичность образца с определенной концентрацией возрастала пропорционально времени воздействия постепенно от 2,5×10^-1 до 9,8×10^-4 моль/л. Другими словами, можно говорить о различиях в механизме действия изучаемых веществ на бактериальную клетку.

Так, в результате первого опыта были установлены следующие эффективные концентрации, подавляющие 80 %, 50 % и 20 % люминесценции соответственно: 9,8×10^-4; 4,9×10^-4; 6,1×10^-5 моль/л для транс-коричного альдегида; 3,9×10^-3; 1,9×10^-3; 4,9×10^-4 моль/л для ванилина; 2,5×10^-1; 1,2×10^-1; 9,8×10^-4 моль/л для дигидрата кверцетина; 1,6×10^-2; 9,8×10^-4; 4,9×10^-4 моль/л для 7-гидроксикумарина. Каждый третий из них в качестве субингибитора рекомендован для дальнейшего тестирования.

Во втором опыте исследуемые вещества в серии разведений, начиная с концентраций, представленных выше, соединяли с рубцовой жидкостью, которая в чистом виде также подавляет свечение индикаторного организма в течение первых 30 мин, но затем усиливает его в пять раз.

В то же время установлено, что транс-коричный альдегид, 7-гидроксикумарин и ванилин в сочетании с последними оказывают синергетическое действие, дополнительно подавляя бактериальный штамм. Так, действие первого продлевалось до разведения 1,9×10^-6, второго и третьего - до 3,8×10^-6 моль/л, при этом дегидрат кверцетина не обладает какой-либо токсичностью (таблица 3, фигура 11, фигура 12, фигура 13, фигура 14).

По результатам исследований in vitro установлено, что переваримость сухого вещества кормового субстрата увеличивается при добавлении фитохимических веществ в различных дозировках от 1,02% при введении кверцетина дигидрата в концентрации 2,5×10^-1 до 8,9% (Р≤0,01) при введении 7-гидроксикумарина относительно контроля (таблица 4). Наибольшее значение по переваримости наблюдалось при введении 7-гидроксикумарина в концентрации 4,9×10^-4 моль/л.

Так, фитохимические вещества - транскоричный альдегид, ванилин, 7-гидроксикумарин и дигидрат кверцетина обладают выраженным бактерицидным или бактериостатическим действием, механизм которых может быть связан, с нарушением транспорта ионов через цитоплазматическую мембрану, ее структурным нарушением, ингибированием ферментативных систем. Это подтверждается изменением интенсивности свечения штамма бактерий Escherichia coli K12 MG1655, опосредованным активностью люциферазы. При этом эффективные концентрации, подавляющие 80 %, 50 % и 20 % люминесценции, составляют: 6,1×10^-5 моль/л для транс-коричного альдегида; 4,9×10^-4 моль/л для ванилина; 9,8×10^-4 моль/л для дигидрата кверцетина; 4,9×10^-4 моль/л для 7-гидроксикумарина. Причем в сочетании с рубцовой жидкостью эти показатели снижаются за счет синергетического эффекта.

Это позволяет сделать вывод о возможности использования данных фитохимических веществ как альтернативы антибиотикам в субингибиторных дозах. Установлено, что фитохимические вещества, повысят рубцовое пищеварение у крупного рогатого скота, а также ускорит течение обменных процессов в рубце, позволяет рекомендовать их в качестве кормовой добавки для крупного рогатого скота.

Источники информации:

1. Aljumaah M.R., Suliman G.M., Abdullatif A.A., Abudabos A.M. Effects of phytobiotic feed additives on growth traits, blood biochemistry, and meat characteris-tics of broiler chickens exposed to Salmonella typhimurium // Poultry Science. - 2020. - v. 99, no. 11. - pp. 5744-5751. - DOI: 10.1016/j.psj.2020.07.033.

2. Krivonogova A., Isaeva A., Chentsova A., Musikhina N., Petropavlovsky M. The influence of phytobiotic based on essential oils of Salvia sclarea, Mentha canadensis, Mentha piperita and Coriandrum sativum on pathogenic microorganisms of lactating cow udder // E3S Web of Conferences. - 2021. - v. 282. - pp. 04013. - DOI: 10.1051/e3sconf/202128204013.

3. Krivonogova A., Isaeva A., Poryvaeva A., Chentsova A., Sharavyev P. Inhibitory effect of plant metabolites of Nigella sativa on conditionally pathogenic microflora of productive animals // E3S Web of Conferences. - 2021. - v. 282. - pp. 04014. - DOI: 10.1051/e3sconf/202128204014.

4. Kiczorowska B., Samolińska W., Al-Yasiry A.R.M., Kiczorowski P., Winiarska-Mieczan A. The natural feed additives as immunostimulants in monogas-tric animal nutrition - a review // Annals of animal science. - 2017. - v. 17. - no. 3. - pp. 605-625. - DOI: 10.1515/aoas-2016-0076.

5. Chodkowska K.A., Abramowicz-Pindor P.A., Tuśnio A., Gawin K., Taciak M., Barszcz M. Effect of Phytobiotic Composition on Production Parameters, Oxidative Stress Markers and Myokine Levels in Blood and Pectoral Muscle of Broiler Chickens // Animals. - 2022. - v. 12. - no. 19. - pp. 2625. - DOI: 10.3390/ani12192625.

6. Windisch W., Kroismayr A. The effects of phytobiotics on performance and gut function in monogastrics // World nutrition forum: The future of animal nutrition. - 2006. - pp. 85-90.

7. Ruesga-Gutiérrez E., Ruvalcaba-Gómez J.M., Gómez-Godínez L.J., Villagrán Z., Gómez-Rodríguez V.M., Heredia-Nava D., Arteaga-Garibay R.I. Allium-Based Phytobiotic for Laying Hens’ Supplementation: Effects on Productivity, Egg Quality, and Fecal Microbiota // Microorganisms. - 2022. - v. 10. - no. 1. - pp. 117. - DOI: 10.3390/microorganisms10010117.

8. Патент на изобретение RU № 2780832 Способ снижения концентрации метана в рубце жвачных животных / Б.С. Нуржанов, В.А. Рязанов, Е.В. Шейда, Г.К. Дускаев, Ш.Г. Рахматуллин: опубликовано 04.10.2022. Бюл. №.

9. Патент на изобретение RU №2744381 Кормовая добавка для крупного рогатого скота / Г.К. Дускаев, Ш.Г. Рахматуллин, Б.С. Нуржанов, А.Ф. Рысаев, Г.И. Левахин, О.А. Завьялов, А.Н. Фролов: опубликовано 09.03.2021. Бюл. №.

10. Патент на изобретение RU 2092173 Способ получения средства, обладающего антимикробным, иммуномодулирующим, язвозаживляющим и антикоагулятивным свойствами / А.А. Сохин, А.Г. Колесникова: опубликовано 10.10.1997. Бюл. №.

11. Патент на изобретение RU 2649812 Способ экстракции из твердого растительного сырья композиции химических соединений для подавления зоопатогенных бактерий / Д.Г. Дерябин, А.А. Галаджиева, С.А. Мирошников, Г.К. Дускаев, Б.Г. Рогачев, Л.Н. Павлов: опубликовано 04.04.2018. Бюл. №.

12. Патент на изобретение RU 2600698 Способ повышения продуктивности молодняка сельскохозяйственных животных / Е.Н. Медведева, В.А. Бабкин, Ч.Б. Кушеев, Н.А. Неверова, Ю.А. Малков, С.С. Ломбоева, Н.А. Олейников: опубликовано 27.10.2016. Бюл. №.

13. Тимофеев Н.П. Фитобиотики в мировой практике: виды растений и действующие вещества, эффективность и ограничения, перспективы (обзор) // Аграрная наука Евро-Северо-Востока. - 2021. - Т. 22. - № 6. - С. 804-825. - DOI: 10.30766/2072-9081.2021.22.6.804-825.

14. Kothari V., Sharma S., Padia D. Recent research advances on Chromobacterium violaceum. Asian Pacific Journal of Tropical Medicine. - 2017. - 10 (8): 744-752. - DOI: 10.1016/j.apjtm.2017.07.022

15. Failmezger J., Ludwig J., Nieβ A., Siemann-Herzberg M. Quantifying ribosome dynamics in Escherichia coli using fluorescence. FEMS Microbiology Letters. - 2017. - 364 (6): fnx055. - DOI: 10.1093/femsle/fnx055

16. Parvez S., Venkataraman C., Mukherji S. A review on advantages of implementing luminescence inhibition test (Vibrio fischeri) for acute toxicity prediction of chemicals // Environment international. - 2006. - v. 32. - no. 2. - pp. 265-268. - DOI: 10.1016/j.envint.2005.08.022.

17. Sizova E., Miroshnikov S., Yausheva E., Kosyan D. Comparative characteristic of toxicity of nanoparticles using the test of bacterial bioluminescence // Bio-sciences Biotechnology Research Asia. - 2015. - v. 12. - pp. 361-368. - DOI: 10.1/bbra/2047.

18. Salehi B., Machin L., Monzote L., Sharifi-Rad J., Ezzat S.M., Salem M.A., Cho W.C. Therapeutic potential of quercetin: new insights and perspectives for human health // Acs Omega. - 2020. - v. 5. - no. 20. - pp. 11849-11872. - DOI: 10.1021/acsomega.0c01818.

19. Błaszczyk N., Rosiak A., Kałużna-Czaplińska J. The potential role of cinnamon in human health // Forests. - 2021. - v. 12. - no. 5. - pp. 648. - DOI: 10.3390/f12050648.

20. Свидетельство о регистрации базы данных №2022620937 Биотестирование кормовых добавок / В.А. Рязанов, Е.В. Шейда, Г.К. Дускаев, Ш.Г. Рахматуллин, Г.И. Левахин, К.С. Инчагова: опубликовано 25.04.2022. Заявка № 2022620811 от 12.04.2022.

21. Arya S.S., Rookes J.E., Cahill D.M., Lenka S.K. Vanillin: A review on the therapeutic prospects of a popular flavouring molecule // Advances in traditional medicine. - 2021. - v. 21. - no. 3. - pp. 1-17. - DOI: 10.1007/s13596-020-00531-w.

22. Garg S.S., Gupta J., Sharma S., Sahu D. An insight into the therapeutic applications of coumarin compounds and their mechanisms of action // European Journal of Pharmaceutical Sciences. - 2020. - v. 152. - pp. 105424. - DOI: 10.1016/j.ejps.2020.105424.

23. Методы биолюминесцентного тестирования: Методические указания к лабораторному практикуму / Е.С. Алешина, И.Ф. Каримов, Д.Г. Дерябин. - Оренбург: Оренбургский государственный университет ЭБС АСВ, 2011. - 56 с.

Таблица 1
Концентрация (моль/л)	Степень биолюминесценции Escherichia coli K12 MG1655 при различной концентрации фитохимических веществ, I
	КА	Control КА	ВН	Control ВН	КВ	Control КВ	КМ	Control КМ
2,5×10-1	170,5	619342	145,0	410020	106050	718229	38895	636072
1,2×10-1	206,5	619342	164,5	410020	331850	718229	68254	636072
6,2×10-2	276,0	619342	183,5	410020	372470	718229	81022	636072
3,1×10-2	437,0	619342	203,0	410020	292270	718229	89471	636072
1,6×10-2	1845	619342	976,0	410020	293655	718229	153010	636072
7,8×10-3	9689	619342	8513	410020	311890	718229	190080	636072
3,9×10-3	16883	619342	55750	410020	360880	718229	214880	636072
1,9×10-3	24932	619342	151365	410020	393765	718229	235750	636072
9,8×10-4	60658	619342	243345	410020	444105	718229	266570	636072
4,9×10-4	143580	619342	312380	410020	538165	718229	407280	636072
2,4×10-4	313145	619342	374610	410020	579465	718229	641230	636072
1,2×10-4	451315	619342	398390	410020	617800	718229	696440	636072
6,1×10-5	460570	619342	393095	410020	614195	718229	691430	636072
3,1×10-5	490645	619342	381265	410020	625220	718229	663380	636072
1,5×10-5	497708	619342	380460	410020	614220	718229	631740	636072
7,6×10-6	509185	619342	374200	410020	633880	718229	619530	636072
3,8×10-6	517700	619342	380700	410020	637490	718229	606670	636072
1,9×10-6	521090	619342	380660	410020	630225	718229	603840	636072
9,5×10-7	523315	619342	376370	410020	660710	718229	594220	636072
4,8×10-7	517305	619342	375955	410020	638560	718229	595600	636072
2,4×10-7	523190	619342	371690	410020	645075	718229	596430	636072
1,2×10-7	524320	619342	380300	410020	672835	718229	604820	636072
6,0×10-8	529600	619342	372105	410020	657265	718229	619440	636072
3,0×10-8	546595	619342	383665	410020	652905	718229	694530	636072
1,5×10-8	528205	619342	378215	410020	633650	718229	698880	636072

Таблица 2
Вещество	Время мин	Интенсивность подавления люминесценции Escherichia coli K12 MG1655 (%) в среде с различным содержанием исследуемых веществ, моль/л
		2,5×10-1	1,2×10-1	6,2×10-2	3,1×10-2	1,6×10-2	7,8×10-3	3,9×10-3	1,9×10-3	9,8×10-4	4,9×10-4	2,4×10-4	1,2×10-4	6,1×10-5
КА	0	99,9	99,9	99,9	99,8	99,5	99,2	98,7	97,9	94,9	88,3	74,2	53,8	45,8
	90	100	100	100	100	99,8	99,4	98,4	96,4	88,2	68,3	33	17	20,7
	180	100	100	100	99,9	99,9	99,6	98,4	95,7	78,3	37,5	18,1	9,5	15,1
	среднее значение	100	100	100	99,9	99,8	99,3	98,2	96,3	87	64,3	36,8	21,5	23,1
ВН	0	99,9	99,9	99,9	99,9	99,6	95,8	81,2	64,7	48,7	35,7	20,1	14,2	8,6
	90	100	100	100	100	99,9	98,8	87,4	69,9	47,9	31,7	16,6	17,2	15
	180	100	100	100	99,9	99,9	98,6	88,8	72,1	46,6	30,7	17,7	16,4	14,1
	среднее значение	100	100	99,9	99,9	99,9	98,1	86,8	68,6	46,2	30,8	17,2	15,5	12,9
КМ	0	91	84,6	84,1	82	73,9	64,8	60,8	53,9	49,7	39,2	14,3	10	3,8
	90	95	89,6	88,9	86,8	80,7	72,7	70	65,5	61,8	46,3	-7	-15	-16
	180	100	100	100	99,9	99,9	99,6	98,4	95,7	78,3	37,5	18,1	9,5	15,1
	среднее значение	95,2	90,7	90,1	88,5	83	76,5	73,8	69,2	63,5	45,8	3,7	-3	-4
КВ	0	88,9	75,7	62,6	48,6	45,4	42,1	32,5	23	21,1	9,5	8,6	5,5	6
	90	69,5	41	49,7	40,1	27	18,3	16,6	22,4	25,4	24,6	23	22,2	23,7
	180	62,7	57,8	49,5	36,3	35	33,1	35,6	33	32,7	31,9	28,3	25,8	28,7
	среднее значение	72,9	53,6	50,5	42,9	35,5	32,7	29,5	28,2	27,9	24,1	21,4	18,9	20,7
ТН	0					100	99,9	99,9	99,8	91	29,4	-7	-11	3,9
	90					100	100	100	100	99,4	57,8	-6	-20	-17
	180					100	100	100	99,9	99,4	43,4	-29	-15	-10
	среднее значение					100	100	100	99,9	98,1	49,2	-11	-15	-9

Таблица 3
Вещество	Время, мин	Интенсивность подавления биолюминесценции Escherichia coli K12 MG1655 (%) в динамике в различных концентрациях, моль/л
		9,8×10-4	4,9×10-4	2,4×10-4	1,2×10-4	6,1×10-5	3,1×10-5	1,5×10-5	7,6×10-6	3,8×10-6	1,9×10-6	9,5×10-7	4,8×10-7	2,4×10-7	1,2×10-7
KA	0					99,9	99,8	98,8	97,6	95,6	89	74,4	53,6	32,3	11,6
	90					100	100	99,8	97,8	92,2	59,5	12,4	5,1	-3	-5
	180					100	100	100	99,2	88,3	26,8	8,8	5,5	2,9	1
	среднее значение					99,9	99,9	99,5	98,2	92	58,4	31,9	21,4	10,7	2,4
BH	0		99,6	99,6	99,9	99,4	94,9	85,5	64,4	44,6	28,9	23,4	14,5	11	10,3
	90		100	100	100	99,9	93,6	70,2	41	21,2	9,7	11,6	2,4	1	-1
	180		100	100	100	100	89,8	64,6	30,4	13,4	4,4	6,8	-2	-4	-5
	среднее значение		99,9	99,9	100	99,8	92,8	73,4	45,2	26,4	14,3	13,9	5	2,5	1,3
KM	0		70,2	60	62,5	57,1	56,7	54,4	54	46,4	36,5	30,3	23	-1	6,2
	90		65,3	57,6	57,5	54,1	51,9	43,9	42,2	34,6	19	12	5,3	-1	-3
	180		66,1	59,9	60,9	56,5	55	47,7	44,5	34,5	14,7	8,3	2,2	-7	-7
			67,2	59,1	60,3	55,9	54,5	48,6	46,9	38,5	23,4	16,9	10,2	-3	-1
KB	0	-5	4,6	7,5	11	13,2	5,6	10,4	3,5	4	4,2	3,4	3,9	0,4	-4
	90	-13	-21	-15	-8	-8	-10	-5	-10	-9	-5	-7	-8	-6	-11
	180	-18	-29	-19	-10	-10	-6	-2	-8	-3	-1	-7	-4	-1	0,9
	среднее значение	-12	-15	-9	-2	-2	-3	0,7	-5	-3	0	-3	-3	-2	-5

Claims (1)

1. Кормовая добавка для крупного рогатого скота для повышения рубцового пищеварения, характеризующаяся тем, что крупному рогатому скоту вводят фитохимические вещества транс-коричного альдегида, ванилина, 7-гидроксикумарина, кверцетина дигидрата, при этом транс-коричного альдегида в концентрации 6,1×10^-5 моль/л, ванилина – в концентрации 4,9×10^-4 моль/л, 7-гидроксикумарина – в концентрации 4,9×10^-4 моль/л и кверцетина дигидрата в концентрации 9,8×10^-4 моль/л.