RU2804399C1 - Способ стимуляции инвазионных личинок энтомопатогенных нематод рода Steinernema к переходу на питающуюся стадию - Google Patents
Способ стимуляции инвазионных личинок энтомопатогенных нематод рода Steinernema к переходу на питающуюся стадию Download PDFInfo
- Publication number
- RU2804399C1 RU2804399C1 RU2022122960A RU2022122960A RU2804399C1 RU 2804399 C1 RU2804399 C1 RU 2804399C1 RU 2022122960 A RU2022122960 A RU 2022122960A RU 2022122960 A RU2022122960 A RU 2022122960A RU 2804399 C1 RU2804399 C1 RU 2804399C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- mixture
- entomopathogenic nematodes
- genus
- transition
- larvae
- Prior art date
Links
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии и представляет собой способ стимуляции инвазионных личинок энтомопатогенных нематод рода Steinernema к переходу на питающуюся стадию, заключающийся в том, что 50 г живых гусениц большой вощинной огневки Galleria mellonella умерщвляют путем помещения в морозильную камеру при температуре -18°С на 1 час, затем помещают в гомогенизатор и изготавливают гомогенат; готовят агар Лурье по общепринятой методике; вносят в агар Лурье 10% весовых гохмогената из гусениц; охлаждают смесь естественным путем, периодически взбалтывая колбу для лучшего перемешивания; разливают полученную среду по чашкам Петри; автоклавируют смесь при 121°С в течение 25 минут; на поверхность остывшей смеси наносят очищенную культуру бактерий рода Xenorhabdus; спустя два дня на поверхность смеси вносят личинок непитающихся энтомопатогенных нематод рода Steinernema; визуально контролируют их переход к питающейся стадии по появлению мышечной активности пищевода и заглатыванию среды с бактериями. Заявленный способ позволяет стимулировать инвазионных личинок энтомопатогенных нематод рода Steinernema к переходу на питающуюся стадию, что позволяет применять этих энтомопатогенных нематод в борьбе с насекомыми-вредителями растений.
Description
Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к способам получения питающихся стадий инвазионных личинок энтомопатогенных нематод рода Steinernema из непитающихся. Изобретение можно применять в сельском хозяйстве (как биологический способ борьбы с насекомыми-вредителями растений) и в фундаментальной биологии (для изучения биологии энтомопатогенных нематод).
Почвенных энтомопатогенных нематод рода Steinernema активно используют в качестве агентов биологической борьбы с насекомыми-вредителями сельского хозяйства, поскольку (в отличие от химических инсектицидов) нет губительного воздействия на полезную фауну насекомых, а необходимые количества нематод можно наработать в прихозяйственных биолабораториях (Спиридонов, С.Э. 2006 Глава 12. Применение энтомопатогенных нематод в защите растений,. В книге: Прикладная нематология: [Буторина Н.Н., Зиновьева С.В., Кулинич О.А. и др.; отв. ред.: д.б.н. Зиновьева С.В., к.б.н. Чижов В.Н.]. Москва, КМК, - 2006, С. 291-325).
В процессе размножения на искусственных средах живая культура нематод должна осуществить ключевой переход из т.н. инвазионных (непитающихся) личинок к питанию содержимым культурального сосуда.
Известен способ механического подсаживания непитающихся личинок энтомопатогенных нематод на агар с культурой симбиотических для них бактерий (Ehlers R.U. et al. Liquid culture of the entomopathogenic nematode-bacterium-complex Heterorhabditis megidislPhotorhabdus luminescens // BioControl. - 1998. - T. 43. - №.1. - C. 77-86).
Его существенным недостатком является низкий процент перехода личинок на питающуюся стадию. Так, в указанной статье он составил 55% на 6 день и 74% на 8-й для комплекса Heterorhabditis megidis (нематода) + Photorhabdus luminescens (симбиотическая бактерия) у нематод первого поколения и не превысил 23% у нематод второго поколения. Наши собственные эксперименты с нематодами рода Steinernema и симбиотическими для них энтеробактериями рода Xenorhabdus свидетельствуют о полном (0%) отсутствии перехода личинок из непитающейся стадии к питающейся при использовании такого способа (за 14-дневный период наблюдения).
Технический результат заключается в том, что предлагаемый способ позволяет гарантированно стимулировать инвазионных личинок энтомопатогенных нематод рода Steinernema к переходу на питающуюся стадию.
Технический результат достигается тем, что в агар Лурье для культивирования личинок добавляют 10% гомогената из гусениц большой вощинной огневки (Galleria mellonella), на которых в природе паразитируют Steinernema.
Способ реализуется следующим образом:
1) 50 г живых гусениц большой вощинной огневки {Galleria mellonella) умерщвляют путем помещения в морозильную камеру при температуре - 18°С на 1 час;
2) извлекают гусениц из морозильной камеры, помещают в гомогенизатор и изготавливают гомогенат;
3) готовят агар Лурье по общепринятой методике (в плоскодонную колбу на 100 мл помещают 0,5 г триптона + 0,25 г дрожжевого экстракта + 0,25 г поваренной соли + 0,75 г агара и 50 мл дистиллированной воды, смесь подогревают до полного растворения частиц);
4) вносят в агар Лурье 10% (весовых) гомогената из гусениц;
5) охлаждают смесь естественным путем, периодически взбалтывая колбу для лучшего перемешивания
6) разливают полученную среду по чашкам Петри;
7) автоклавируют смесь при 121°С в течение 25 минут;
8) на поверхность остывшей смеси наносят очищенную культуру бактерий рода Xenorhabdus;
9) спустя два дня на поверхность смеси (с двухдневной культурой бактерий) вносят личинок непитающихся энтомопатогенных нематод рода Steinernema;
10) визуально контролируют их переход к питающейся стадии по появлению мышечной активности пищевода и заглатыванию среды с бактериями.
Наши эксперименты показали, что внесение поверхностно стерилизованных (0,1 мертиолятом или 0,1% гипохлоритом с последующей трехкратной промывкой автоклавированной водой) инвазионных личинок на 2-3-дневный слой развивающихся на агаризованной среде бактерий рода Xenorhabdus при наличии в толще среды частиц гомогенизированных тканей гусениц вощинной моли приводило к почти 88-100% переходу нематод к питающейся стадии. Это позволяет обеспечить моноксенность развития нематод (присутствие в культуральной среде только одного вида бактерий нужного рода). Культивирование нематод в колбах Эрленмейера с 50 мл такой среды в течение 21 дня позволяет получить выход до 2,5 млн. личинок на колбу.
Таким образом, полезность предлагаемого изобретения заключается в том, что предлагаемый способ позволяет гарантированно стимулировать инвазионных личинок энтомопатогенных нематод рода Steinernema к переходу на питающуюся стадию, что позволяет применять этих энтомопатогенных нематод в борьбе с насекомыми-вредителями растений.
Claims (1)
- Способ стимуляции инвазионных личинок энтомопатогенных нематод рода Steinernema к переходу на питающуюся стадию, заключающийся в том, что 50 г живых гусениц большой вощинной огневки Galleria mellonella умерщвляют путем помещения в морозильную камеру при температуре -18°С на 1 час, затем помещают в гомогенизатор и изготавливают гомогенат; готовят агар Лурье по общепринятой методике; вносят в агар Лурье 10% весовых гомогената из гусениц; охлаждают смесь естественным путем, периодически взбалтывая колбу для лучшего перемешивания; разливают полученную среду по чашкам Петри; автоклавируют смесь при 121°С в течение 25 минут; на поверхность остывшей смеси наносят очищенную культуру бактерий рода Xenorhabdus; спустя два дня на поверхность смеси вносят личинок непитающихся энтомопатогенных нематод рода Steinernema; визуально контролируют их переход к питающейся стадии по появлению мышечной активности пищевода и заглатыванию среды с бактериями.
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2804399C1 true RU2804399C1 (ru) | 2023-09-28 |
Family
ID=
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2522811C2 (ru) * | 2012-10-11 | 2014-07-20 | Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений Российской академии сельскохозяйственных наук | СПОСОБ ПОДГОТОВКИ СИМБИОТИЧЕСКИХ БАКТЕРИЙ РОДА Xenorhabdus, ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗ НЕМАТОД ВИДА Steinernema feltiae protense, К ХРАНЕНИЮ |
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2522811C2 (ru) * | 2012-10-11 | 2014-07-20 | Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений Российской академии сельскохозяйственных наук | СПОСОБ ПОДГОТОВКИ СИМБИОТИЧЕСКИХ БАКТЕРИЙ РОДА Xenorhabdus, ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗ НЕМАТОД ВИДА Steinernema feltiae protense, К ХРАНЕНИЮ |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| BUECHER E.J., Popiel I. Liquid culture of the entomogenous nematode Steinemema feltiae with its bacterial symbiont, J. Nematol., 1989, Vol.21, No2. - P.199-200. * |
| EHLERS R.U. et al. Liquid culture of the entomopathogenic nematode-bacterium-complex Heterorhabditis megidislPhotorhabdus luminescens, BioControl, 1998, т. 43, N 1, c. 77-86. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Ansari et al. | Entomopathogenic nematodes and their symbiotic bacteria for the biological control of Hoplia philanthus (Coleoptera: Scarabaeidae) | |
| Le Vieux et al. | The potential use of entomopathogenic nematodes to control Planococcus ficus (Signoret)(Hemiptera: Pseudococcidae) | |
| Wilson et al. | Laboratory tests of the potential of entomopathogenic nematodes for the control of field slugs (Deroceras reticulatum) | |
| SK2294A3 (en) | Method of biological destruction of molluses | |
| Creighton et al. | Heterorhabditis sp.(Nematoda: Heterorhabditidae): a nematode parasite isolated from the banded cucumber beetle Diabrotica balteata | |
| RU2804399C1 (ru) | Способ стимуляции инвазионных личинок энтомопатогенных нематод рода Steinernema к переходу на питающуюся стадию | |
| KR101230787B1 (ko) | 곤충병원성 선충 랍디티스 블루미를 이용한 해충 방제제 및 해충 방제 방법 | |
| Sankaranarayanan et al. | Biocontrol potential of entomopathogenic nematodes Heterorhabditis and Steinernema against pupae and adults of white grub Holotrichia serrata F. | |
| Sarwar et al. | Management of insect pests by means of entomopathogenic Nematodes | |
| Jorge et al. | The Yellow Fever Mosquito Aedes aegypti (Linnaeus): The Breeding Sites | |
| Butool et al. | Management of root-knot nematode, Meloidogyne incognita, infesting Egyptian henbane, Hyoscyamus muticus L., by the use of nematicides and oilcakes | |
| KR101089318B1 (ko) | 식물기생선충 방제용 제제 및 그 제조방법 | |
| Kumar et al. | Growth rate in media and pathogenicity of two species of entomopathogens found in Fiji | |
| Susurluk et al. | Quality control of in vitro produced Heterorhabditis bacteriophora (Rhabditida: Heterorhabditidae) strains isolated from Turkey | |
| KR20010108793A (ko) | 곤충병원성 선충 배양용 배지 및 그를 이용한 선충의 대량배양방법 | |
| Yuldasheva et al. | The importance of natural factors in controlling the number density of pest pests | |
| Mutalipassi | Re-defining the Concept of Model Species: An Experimental Approach on a Range of Marine Animals | |
| Fitri et al. | The Potential of Local Chitinolitic Bacteria Isolates as Larvacide of Aedes aegypti L. | |
| ŞAHİN | INNOVATIVE AGRICULTURAL PRACTICES ON PEST MANAGEMENT IN SOIL WITH ENTOMOPATHOGENIC NEMATODES | |
| Ahuja et al. | Qualitative Toxicity Bioassay of Bacteria Photorhabdus Associated Symbiotically with Entomopathogenic Nematode Heterorhabditis against Galleria mellonella | |
| BR102017018650A2 (pt) | Agente para o controle de pragas aquáticas compreendendo uma cepa de bacillus thuringiensis e cepa de photorhabdus asymbiotica, e método para controlar pragas aquáticas usando o mesmo | |
| Salinas et al. | In vitro culturing of the predatory soil nematode Clarkus papillatus | |
| Vozik et al. | Combination of Chemical and Biological Methods for Effective Plant Protection | |
| Mikaia | Efficacy of Entomopathogenic Nematodes Steinernema feltiae and Heterorhabditis bacteriophora against the Melon Aphid (Aphis gossypii Glow., Hemiptera, Aphididae) | |
| Ardakani et al. | Traditional knowledge of Iranian farmers on biological pest management |