RU2803623C1 - Штамм Phialocephala fortinii шт. F-833МКС661Ч1Н - продуцент комплекса биологически активных веществ, обладающих рострегуляторными свойствами - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к области биотехнологии и представляет собой штамм гриба Phialocephala fortinii шт. F-833МКС661Ч1Н, хранящийся во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов, коллекционный номер ВКПМ F-1731, является продуцентом комплекса биологически активных веществ, обладающих рострегуляторными свойствами. Изобретение позволяет получить препарат, используемый в качестве биостимулятора роста растений. 13 табл., 5 пр.

Description

Область техники

Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии и биотехнологии, касается биологических средств для стимуляции роста растений и повышения их продуктивности и представляет собой один из аспектов применения штамма гриба Phialocephala fortinii шт. F-833МКС661Ч1Н - продуцента комплекса биологически активных веществ, обладающих рострегуляторными свойствами, которые могут быть использованы в сельском хозяйстве.

Уровень техники

В практике ведения сельского хозяйства находят применения препараты регуляторы роста растений микробиологического происхождения.

Из уровня техники известен штамм грибной культуры Acremonium lichenicola - продуцент комплекса биологически активных веществ, обладающих ростстимулирующим и элиситорным действием (опубл. заявка RU95111397A1, кл. A01N 63/04, C12N 1/14, опубл. 20.06.1997).

Также из уровня техники известен бактериальный стимулятор роста растений на основе культуры Rhodococcus erythropolis, а именно, штамма бактерии Bacillus megaterium ОРР-31 для создания микробного биоудобрения со свойствами регулятора роста для использования в растениеводстве (патент RU2690420C1, кл. C12N 1/10, A01N 63/02, опубл. 03.06.2019).

Кроме того, из уровня техники известен на штамм бактерий штамм бактерий Pseudomonas fluorescens BS1506 на основе бактериальной культуры для защиты растений от фитопатогенных грибов и бактерий и стимуляции роста растений (патент RU2646160C2, кл. C12N 1/10, A01N 63/02, опубл. 01.03.2018).

В основе известных препаратов заложено биологическое действие регуляторов роста растений приводящее к повышению полевой всхожести, активизации ростовых и формообразовательных процессов, повышению устойчивости к неблагоприятным факторам среды, болезням, повышению урожайности, улучшению качества продукции.

Проблемы рационального природопользования и обеспечения населения безопасными для здоровья продуктами питания на основе биоорганического земледелия стало одним из способов уменьшения негативного воздействия сельского хозяйства на природу и человека. Альтернативой применения минеральных удобрений, а также химических протравителей семян и фунгицидов является более широкое использовать современных препаратов биологической природы: микробиологические препараты (биофунгициды, регуляторы роста растений и иммунорегуляторы), активаторы полезной микрофлоры, биоудобрения. Мировой рынок биотехнологий для сельского хозяйства и пищевой промышленности растет и важнейшее место в нем принадлежит микробиологическим препаратам.

Одним из направлений развития сельского хозяйства является его экологизация и стимулирования биодинамических и органических систем земледелия, которое направлено на укрепление жизнеспособности растения и его сопротивляемости к неблагоприятным факторам окружающей среды. Применение активаторов метаболизма - физиологически активных веществ, позволяет эффективно реализовать потенциальные возможности сорта или гибрида, заложенные в геноме. Такой потенциал заложен во взаимовыгодных отношениях растений и микромира, в котором они существуют. Так, микоризные грибы в природе вступают в симбиоз со многими травянистыми растениями и деревьями. Считается, что микоризные грибы увеличивают всасывающую поверхность корней; синтезируют многие биологически активные вещества, используемые растениями; переводят трудно усвояемые соединения фосфора почвы в растворимую форму, доступную растениям; защищают корни от поражения потенциальными патогенами и др.

Распространение, таксономическое положение и функции темноокрашенных септированных грибов.

Факт наличия как на поверхности, так и внутри корней, грибов, не образующих структуры, характерные арбускулярных микориз (AM), эктомикориз (ЭМ), эрикоидных микориз (ЭрМ) и симбиозов орхидных, был установлен давно. В ходе детального анализа корней бореальных древесных пород Э. Мелин (Melin, 1923, 1925) очень часто наблюдал грибы с темноокрашенным мицелием, и некоторые из них ему удалось выделить и поддерживать в культуре. Так как они выделялись из корней даже после поверхностной стерилизации, исследователь заключил, что они скорее заселяют ткани корня, чем являются ассоциированными с корневой системой обитателями почвы. Наиболее часто встречающийся изолят был отнесен к виду Mycelium radicis atrovirens (MRA), в то время как прочие являлись представителями рода Rhizoctonia. Эти грибы традиционно обсуждают в связи с ЭЭМ.

Э. Мелин (Melin, 1923) выделял два типа MRA, которые он назвал α и β. Первый тип встречается чаще и характеризуется образованием микросклероциев.

Так как эти грибы не образуют половых спороношений и имеют очень мало отличительных черт, не считая обычно темной окраски гиф, они были объединены в группу «темных септированных» (ТС) (Haselwandter, Read, 1982). Другие исследователи, подчеркивая их частое и очевидно не вредоносное для растения присутствие в тканях хозяина, описывали тот же самый тип грибов как «эндофиты» (Currah et al., 1987), «септированные эндофиты» (O’Dell et al., 1993) или «темноокрашенные септированные эндофиты» (ТСЭ) (Jumponnen, Тгарре, 1998). В обзорнай работе, посвященной встречаемости ТС грибов в разных группах растений, была приведены данные об их наличии у почти 600 видов, относящихся к 320 родам из 100 семейств растений (Jumponnen, Тгарре, 1998).

Таксономическое положение темноокрашенных септированных грибов

В. Гамсу (Gams, 1963) удалось индуцировать образование конидий у некоторых изолятов MRA α в культуре и установить, что они принадлежат к роду Phialocephala. Он подчеркнул, что MRA α, вероятно, представляет собой ряд различных генотипов. В дальнейшем работу продолжили К. Вонг и Г. Уилкокс (Wang, Wilcox, 1985), которые выделили множество штаммов грибов MRA-типа из корней хвойных, и. после инкубации от шести месяцев до года при низкой температуре (5 °С), индуцировали споруляцию у нескольких изолятов. Эти культуры оказались представителями трех различных родов и видов гифомицетов, образующих фиалиды, а именно Phialocephala fortinii, Chloridium pauciflorum и Phialophorc finlandia (сейчас Cadophorafinlandica).

На основании анализа последовательностей ядерной ДНК все четыре рода в настоящий момент относят к аскомицетам из порядка Helotiales. Внутри порядка вид Р. fortinii, как считают, родственен моллизиоидным таксонам из семейства Dermateaceae (Wilson et al., 2004).

Углубленный анализ таксономического положения и встречаемости Phialocephala fortinii подтвердил точку зрения Э. Мелина (Melin, 1923) и В. Гамса (Gams, 1963), что грибы, известные как MRA группа α, очень широко распространены и генетически разнородны. Было подтверждено, что вид Р. fortinii не обладает ни географической приуроченностью, ни специфичностью к хозяину, хотя его встречаемость, возможно, выше в местах с холодным климатом, и проявляется предпочтение в отношении некоторых семейств растений.

На основе культуральных характеристик было выделено четыре морфологических типа Phialocephala fortinii (Ahlich, Sieber, 1996). При последующих генетических исследованиях на популяционном уровне в Европе (Menkis et al., 2004; Queloz et al, 2005; Grunig et al., 2006; Sieber, Grunig, 2006) и Канаде (Piercey et al., 2004) было подтверждено, что P. fortinii sensu lato представляет собой несколько критических видов. В Европе встречается, как минимум, восемь таких видов Р. fortinii (Sieber, Grunig, 2006). Такие критические виды могут симпатрически расселяться на одном и том же участке и даже сосуществовать на одном фрагменте корня (Grunig et al., 2006).

Различные генотипы Phialocephala fortinii могут демонстрировать способность к образованию эктомикориз (Fernando, Currah, 1996; Kaldorf et al., 2004).

Функциональное значение темноокрашенных септированных грибов. На основании анализа литературных данных посвященных ТС-типу грибов, можно отметить, что детальных этиологических исследований растительных ответов на внедрение Р. fortinii было очень мало. Описаны случаи, когда растение может получать непосредственную выгоду от их присутствия, и тогда ТС грибы попадают в микоризную область мутуалистически-паразитического континуума (Francis, Read, 1995; Johnson et al., 1997).

В результате колонизации Phialocephala fortinii альпийских видов Carex (Haselwandter, Read, 1982) и Pinus contorta (Jumponnen et al., 1998) наблюдалось усиление поглощения P. Данные анализа утилизации полимеров Phialocephala fortinii (Caldwell et al., 2000) свидетельствуют о наличии выраженной сапротрофной активности. Среди полимерных источников С были целлюлоза, крахмал и эфиры жирных кислот. Белок и РНК подвергались гидролизу и могли служить потенциальными источниками органического N и источником N и Р соответственно. Было показано, что способность грибов к сапротрофии может быть выгодна для растения при росте на бедных почвах (Upson, 2006). Вид Р. fortinii образует гидроксаматный сидерофор, феррикроцин (Bartholdy et al., 2001), который может способствовать связыванию железа для автотрофного партнера.

В настоящее время технологически стало возможно целевое создание регуляторов роста растений на основе препаратов природного происхождения. Это комплексные препараты, отличающиеся высокой эффективностью и не вызывающие загрязнения окружающей среды.

Целью изобретения является получение нового штамма Phialocephala fortinii, продуцирующего комплекс биологически активных веществ, обладающих рострегуляторными свойствами.

Поставленная цель достигается тем, что выделен новый штамм Phialocephala fortinii шт. F-833МКС661Ч1Н, задепонированный во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов под номером F-1731.

Новый штамм Phialocephala fortinii получен в результате проведения селекционных работ в лаборатории имеет отличия от исходного. В результате сравнения вариантов методом фингерпринта с использованием праймера M 13 были найдены отличия от исходного варианта, которые выражены в изменении относительной яркости фрагмента, а также появлении дополнительного фрагмента 550 п.н., что может свидетельствовать о том, что в хромосоме данного образца могли произойти не только мутации типа точечных замен нуклеотидов, но и такие мутации, как инверсии или делеции.

Заявленный штамм имеет следующие характеристики.

Культурально-морфологические особенности штамма: Аэроб. Гриб дает медленно растущие прижато-бархатистые колонии черного цвета (ростовой коэффициент по Бухало, 1988 - равен 10). У культуры развит не только поверхностный, но и субстратный мицелий. Окраска среды под воздействием гриба не изменяется. При микроскопировании было выявлено, что гифы гриба темноокрашенные, с большим содержанием капель масла (диаметр гиф не превышает 3 мкм). На гифах формируется значительное количество интеркалярных, собранных в цепочки шаровидных хламидоспор.

Продукт, синтезируемый штаммом, - комплекс биологически активных веществ.

При культивировании штамма в течение 3-х недель в жидкой среде Гельцер с последующим выделением комплекса вторичных метаболитов полученный препарат дает увеличение показателя всхожести сельскохозяйственных культур на 20-30 %.

Биологическую активность определяли, используя стандартную методику биотестов на семенах растений. Штамм хранили на агаризованных питательных средах при температуре 4-7 °С с пересевами один раз в 3 месяца.

Агаризованная среда Гельцер (ГА), г/л, рН 6,2-6,6:

Глюкоза	8,0
K2HPO4 х3Н2О	0,6
KH2PO4	1,8
MgSO4х7Н2О	0,2
K2SO4	0,1
MnSO4	Следы
FeSO4	Следы
L-аспарагин	0,02
агар-агар	15,0
Вода водопроводная	-до 1 л

Размножение культуры осуществляли путем пересева на агаризованной среде Гельцер, состав которой представлен выше.

Условия и состав среды для ферментации: на жидкой питательной среде Гельцер продолжительность культивирования 21 день при температуре 26±1 °С и скорости перемешивания 150 об/мин.

Состав среды: жидкая питательная среда Гельцер, г/л, pH 6,0-6,4:

Глюкоза	8,0
K2HPO4 х3Н2О	0,6
KH2PO4	1,8
MgSO4х7Н2О	0,2
K2SO4	0,1
MnSO4	Следы
FeSO4	Следы
L-аспарагин	0,02
Вода водопроводная	-до 1 л

Штамм не является зоопатогенным, не является фитопатогенным, не представляет опасности для окружающей среды.

Препарат на основе грибной культуры Phialocephala fortinii шт. F-833МКС661Ч1Н получили при выращивании культуры в колбах. Проводили культивирование в колбах, затем осуществляли грубую и тонкую фильтрацию. Затем полученный продукт лиофильно высушивали. При проведении биотестов и химических анализов использовали лиофильно высушенный фильтрат культуральной жидкости.

Содержание фитогормонов в препарате: цитокинины (ЦК), гибберелины (ГА) - определяли хроматографическим методом.

Цитокинины представляют собой наиболее активные природные соединения, участвующие в гормональной регуляции онтогенеза растений и характеризующиеся способностью индуцировать деление растительных клеток.

Гибберелловая кислота ГА₃ наиболее широко применяется в сельском хозяйстве как регулятор роста растений. Однако ГА₇ представляет наибольший интерес, т.к. имеет более широкий спектр действия и физиологическую активность выше.

Индолилуксусная кислота (ИУК) является ростстимулятором, но из-за плохой растворимости в воде и относительно высокой стоимости имеет узкий спектр рекомендованных для обработки культур.

Все эти соединения, относящиеся к известным регуляторам роста растений, подробно описаны в литературе (Регуляторы роста растений. Под редакцией Г.С. Муровцева. М., 1979).

Заявляемый штамм позволил получить одновременно все эти соединения, что значительно повысило биологическую активность препарата и одновременно повысило экономическую эффективность его применения.

Биологическая активность сухого препарата на основе заявляемого штамма на семенах пшеницы сорта Лагуна, (контроль-вода) и содержание фитогормонов в этом препарате приведены в таблице 1.

Таблица 1
100 ppm		10 ppm		1 ppm		0,1ppm		Фитогормоны (мг/г сухого веса)
Стебли	Корни	Стебли	Корни	Стебли	Корни	Стебли	Корни	ЦК	ГА	ИУК
109,6 ± 6,3	108,5 ± 7,1	123,9 ± 3,5	129,8 ± 3,5	127,0 ± 5,9	99,9 ± 4,9	118,0 ± 5,3	128,0 ± 6,3	1,342	0,055	0,087

Способ получения штамма позволяет масштабировать процесс производства, что является необходимым условием коммерциализации проекта. Оптимальная концентрация штамма в препарате - 10 ppm. В таблице 2 приведен элементный состав лиофилизированного препарата.

Таблица 2
Элементы	Содержание, мг/г сух. веса
	Питательная среда	Препарат
Бор	0,083	0,044
Натрий	1,000	0,320
Магний	2,200	1,600
Кремний	1,400	0,550
Фосфор	9,500	7,200
Сера	1,900	0,650
Калий	2,200	17,000
Железо	0,095	0,023
Медь	0,053	0,004
Молибден	0,017	0,160
Йод	0,240	0,070
Литий	следы	0,034
Хром	следы	0,002
Индий	следы	0,067
Барий	следы	0,013

Анализ элементного состава показал, что препарат почти не содержит тяжелых металлов. В препарате по сравнению с питательной средой значительно увеличивается содержание калия и молибдена, содержание остальных элементов уменьшается.

Содержание свободных углеводов, мг/г сух. веса:

Сахароза	178
Глюкоза	376
Фруктоза	91
Маннит	106

В препарате содержатся следующие аминокислоты: лизин - 0,0066 мг, гистидин - 0,0547 мг, аспарагин - 0,0221 мг, серии - 0,0050 мг, глутамин - 0,0121 мг, глицин - 0,0218 мг, аланин - 0,0410 мг, валин - 0,0513 мг. Аминокислоты определяли методом ионнообменной хроматографии. При проведении жесткого гидролиза (с целью определения связанных аминокислот) в препарате определяется довольно широкий спектр аминокислот, присутствующих в небольших количествах. Качественный состав свободных аминокислот менее разнообразный, они также присутствуют в небольших количествах.

В препарате содержатся жирные кислоты, в том числе арахидоновая кислота, которая является важным компонентом комплекса метаболитов, стимулирующая рост и развитие растений. Содержание жирных кислот определяли методом газожидкостной хроматографии.

В препарате также содержится аскорбиновая кислота и цитрин (витамин Р). Определялись методом цветных реакций.

Данные по химическому составу препарата, мг/г сух. веса:

Фитогормоны	18,478
Аминокислоты	0,0660
Углеводы	751,000
Зольные элементы	27,737

Сведения, подтверждающие возможность осуществления предлагаемого изобретения. Изобретение подтверждается, но не ограничивается, следующими примерами.

Пример 1.

Оценка стимулирующего воздействия сухого препарата на основе продуктов метаболизма Phialocephala fortinii на рост озимого рапса.

Опыт проводился с озимым рапсом сорта Ливиус в Калининградской области, на участке с дерново-слабоподзолистой глееватой среднесуглинистой почвой. Схема опыта : 1- контроль - без обработки; 2- сухой препарат (1,0 мл/т) - осень* + 10 мл/га - осень** + 10 мл/га - весна*** (* - предпосевная обработка семян; ** - опрыскивание растений в фазу 5 листьев;*** - опрыскивание растений в фазу 10-12 листьев - образование соцветий). Вариантов в опыте 2, повторений - 4, делянок 8; общая площадь делянки 30 м², учетная - 20,0 м². Результаты испытаний представлены в таблице 2.

Таблица 2 - Влияние сухого препарата на массу 1000 семян озимого рапса, г
Вариант	Повторения				Среднее
	I	II	III	IV
1	4,98	5,36	5,10	4,84	5,07
2	5,34	5,40	5,38	5,18	5,33

По результатам проведенных испытаний весенняя обработка посевов озимого рапса препаратом обеспечила увеличение биомассы растений, количества семян на каждом растении, вследствие чего существенно увеличился урожай семян и выход масла с 1 га.

Пример 2.

Оценка воздействия сухого препарата на основе продуктов метаболизма Phialocephala fortinii на урожайность озимого ячменя.

Опыты проводились Орловской области, находящейся в пределах лесостепной и степной зон. Климат умеренно континентальный, с устойчиво холодной зимой и теплым летом.

На опытном поле были высеяны семена озимой пшеницы Су-1-07 и озимого ячменя ВНИИЗБК-272.

Таблица 3 - Влияние предпосевной обработки семян озимой пшеницы на урожайность
Варианты опыта	Урожайность, т/га	Прибавка урожайности т/га
1. Контроль (без обработки)	4,33
2. Обработка семян сухим препаратом на основе Phialocephala fortinii (1,0 мл/т семян) + опрыскивание посевов сухим препаратом на основе Phialocephala fortinii с расходом препарата 3 мл/га	4,58	0,25
НСР 0.5	0,19

Установлено, что за счет изучаемого варианта обработки семян озимой пшеницы препаратом на основе Phialocephala fortinii (1,0 мл/т семян) совместно с опрыскиванием посевов с расходом препарата 3 мл/га возрастает количество продуктивных стеблей (на 0,21 шт/раст), общая продуктивность растений, при этом увеличивается количество (на 9 шт.) и масса (на 0,37 г) семян с растения.

Таблица 4 - Влияние сухого препарата на основе Phialocephala fortinii на урожайность озимого ячменя
	Варианты опыта	Урожайность, т/га	Прибавка урожайности
			т/га	%
1.	1. Контроль (без обработки)	3,34
2.	2. Обработка семян препаратом на основе Phialocephala fortinii (1,0 мл/т семян) + опрыскивание посевов с расходом препарата 10 мл/га	3,51	0,17	5
	НСР05	0,11

Обработка семян озимого ячменя препаратом на основе Phialocephala fortinii (1,0 мл/т семян) + опрыскивание посевов с расходом препарата 3 мл/га способствует росту количество продуктивных стеблей (на 0,19 штук на растение или 6 %), увеличению количества (на 10 штук с растения или 11 %) и массы (на 0,37 г с растения или 11 %) семян с растения.

Пример 3.

Оценка влияния сухого препарата на основе продуктов метабилизма Phialocephala fortinii на предпосадочную обработку семенных клубней картофеля и вегетирующих растений.

Полевой опыт по изучению препарата проводили в условиях почвенно-климатической зоны подзолистых и дерново-подзолистых почв таежно-лесной области РФ.

Изучено влияние предпосадочной обработки семенных клубней и вегетирующих растений препаратом на всхожесть, развитие и продуктивность растений. Оценено влияние препарата на устойчивость растений картофеля к патогенам. Эксперименты проводили по схеме, представленной в таблице 5. Исследования осуществляли на среднераннем сорте Сантэ (Агрико, Нидерланды). Потенциальная урожайность сорта 33-40 т/га, товарность 95%, содержание крахмала высокое. Сорт устойчив к раку картофеля (Sinchytrium endobioticum), картофельной нематоде (Globodera rostochiensis), вирусным болезням (имеет иммунитет к вирусам X и Y), средневосприимчив к фитофторозу (по листьям), но клубни поражаются сильно, слабо поражаются фузариозной гнилью и сильно - фомозом. Результаты исследования представлены в таблицах 6-7.

Таблица 5 - Схема полевого деляночного опыта по испытанию сухого препарата на основе Phialocephala fortinii на картофеле
№ варианта	Вариант	Сроки применения препарата, нормы расхода
		Семенные клубни перед посадкой (05.05)	Бутонизация (02.07)	Бутонизация - начало цветения (12.07)
1	Контроль	Вода, 10 л/т	Вода, 300 л/га	Вода, 300 л/га
2	Опыт	Сухой препарат 1,0 мл/т	Вода, 300 л/га	Сухой препарат 10 мл/га
3	Эталон	Крезацин 1,6 г/т	Крезацин 20 г/га	Вода, 300 л/га

Препарат сдерживал распространение и развития болезней на растениях картофеля, в вариантах предпосадочной обработке клубней и опрыскивания растений в период бутонизации (табл.6).

Таблица 6 - Биологическая эффективность препаратов против болезней на растениях картофеля, %
Заболевание	Сроки учёта	Вариант
		Контроль	Сухой препарат на основе Phialocephala fortinii	Крезацин,
Ризоктониоз	25.06	36.8	19.3	0.4
Фитофтороз	23.07 31.07 08.08	0.0 4.2 16.4	0.0 2.8 14.0	0.0 0.0 13.2
Альтернариоз	03.07 23.07 31.07	3.2 20.3 55.4	2.3 24.3 45.2	0.5 20.5 40.2

Примечание: Биологическую эффективность препаратов рассчитывали против ризоктониоза по показателю распространенности болезни (Р %), против фитофтороза и альтернариоза - по степени развития болезни (R %). Сроки учетов: 25.06 - начало бутонизации, 23.07 -начало цветения, 31.07- полное цветение, 08.08 - начало отмирания ботвы, 11.08 - скашивание ботвы (11.08)

Учеты общей урожайности и урожайности товарной фракции (клубней размером более 30 мм) показали, что обработка семенного материала и растений препаратом оказала стимулирующее действие на потенциальную продуктивность растений картофеля (табл. 7). В результате его применения валовой сбор клубней увеличился на 2.6 т/га или на 10,8 % по отношению к контролю, а товарной фракции - на 3.2 т/га или на 14.0 % по отношению к контролю. Прибавка валового и товарного урожая картофеля от изучаемого препарата находилась на уровне эталонного. По фракционному составу клубней урожая вариант с применением препарата на основе Phialocephala fortinii для обработки семенных клубней и растений находился на уровне эталона (вариант 3).

Таблица 7 - Влияние сухого препарата на основе Phialocephala fortinii на продуктивность растений картофеля
Варианты	Урожайность клубней				Фракционный состав клубней, %
	Всего		В том числе. товарных клубней		< 30 мм	30-60 мм	>60 мм
	т/га	к контролю, %	т/га	к контролю, %
1	23.6	100,0	22.6	100	4,5	41,2	54,3
2	26.2	110.8	25.8	114.0	1.7	42,8	55.5
3	25.6	108.3	24.4	107.9	4,9	55,3	39.8
НСР 0.05	6.2

Препарат оказал положительное влияние на рост, развитие и продуктивность растений. Он сдерживал поражение растений ризоктониозом, фитофторозом, альтернариозом, в начальный период их развития. Клубневой анализ нового урожая показал, что в урожае с опытных делянок было меньше больных клубней, особенно поражённых паршой обыкновенной и ризоктониозом. Препарат повысил выход урожая здоровых клубней товарной фракции, при использовании его для предпосадочной обработки семенных клубней и опрыскивания растений в период бутонизации и начала цветения.

Пример 4.

Исследования проводили на виноградниках. Объекты исследований Солярис и Первенец Маграча (на богаре).

Изучали регулятор роста -препарата на основе Phialocephala fortinii в трех концентрациях - 1, 10 и 100 мг/л (по рекомендациям разработчика). На исследуемых сортах перед цветением и в период постоплодотворения проводили опрыскивание растений винограда ручным ранцевым опрыскивателем раствором миефита из расчета 0,4 л/куст. Затем, на модельных кустах проводили учеты, технологическую оценку и увологический анализ урожая винограда. В качестве контроля использовались кусты и урожай винограда, которые не подвергались обработке регуляторами роста. Результаты представлены в таблице 8.

Таблица 8 - Влияние сухого препарата на урожайность и качество ягод винограда
Регулятор роста, доза	Срок обработки	Сорт Солярис				Сорт Первенец Магарача
		Урожайность:		Сахаристость, %	Титруемая кислотность, г/дм3	Урожайность:		Сахаристость, %	Титруемая кислотность, г/дм3
		ц/га	%			ц/га	%
Контроль		174,0	100	18,3	11,2	264,4	100	18,8	8,1
Сухой препарат, 1 ррм	перед цветением	180,2	+3,6	20,2	10,4	265,6	+0,5	19,7	8,5
Сухой препарат, 10 ррм		185,7	+6,7	19,4	10,6	288,4	+9,1	19,7	8,9
Сухой препарат, 100 ррм		180,6	+3,8	21,2	10,6	279,2	+5,6	18,8	8,7
Сухой препарат, 1 ррм	в период постоплодот ворения	187,5	+7,8	17,2	10,2	274,8	+3,9	19,1	9,5
Сухой препарат, 10 ррм		176,6	+1,5	22,5	9,7	282,8	+7,0	18,7	10,0
Сухой препарат, 100 ррм		172,9	-0,6	20,4	10,7	280,8	+6,2	18,4	9,7

Пример 5.

Проведено испытание препарата в полевых условиях на перце, детерминатных томатах и огурцах корнишонах. Производство перца сорта Куртовска капия 1619 заложено на площади 85 дка. В качестве контроля служил посев перца Куртовска капия 1619 на площади 10 дка без обработки рассады препаратом. Томаты сорта Водолей выращивали на площади 10 дка, из которых 1 дка оставили в качестве контроля. Рассада производилась в неотопляемой полиэтиленовой оранжерее под туннелями без пикировки. Перед посевом проведено профилактическое обеззараживание семян стрептомицином сульфатом на 30 секунд с последующим опыливанием Тирамом 4 г/ кг. Норма посева - 4 г/м². Перед посевом и после всходов внесен гербицид Девринол 4Ф по 0,5 г и 0,3 г/м².

В фазе 2-х пар настоящих листочков сделана обработка растений сухим препаратом в концентрации 10 ррм, согласно рекомендациям.

В день рассаживания растений в грунт, проведена визуальная оценка рассады, в результате которой констатировано, что у обработанных препаратом растений сформирована более развитая корневая система, стебель большего диаметра, большее количество листьев, завязывание цветных бутонов раньше на 3 -4 дня, чем у контрольных растений.

Результаты производственного опыта указаны в табл. 9-12.

В посевах перца с обработкой рассады в фазе 2-х пар настоящих листочков препаратом в концентрации 10 ррм начало цветения и массовое цветение растений отметено на 11 дней раньше, чем в контрольном участке без обработки препаратом. Ранний урожай составил 1385 кг/дка при 1052 кг/дка в контроле или на 24% больше, чем с необработанных препаратом растений. Общий урожай с обработанных препаратом растений выше на 12% - 3126 кг/дка при 2751 кг/дка в контроле.

Таблица 9 - Фенологические наблюдения и фазы развития перца Куртовска капия в полевых условиях
Фенофаза	Дата	Урожай, кг/дка
Посев	26.02
Завязывание бутона	03.05
Разссаживание	03.05
Начало цветения	05.06
Массоое цветение	19.06
Начало плодообразования	05.08
Ранний урожай		1385
Общий урожай	07.11	3126

Таблица 10 - Сравнительные данные по фазам развития и урожайности. Перец Куртовска капия
Фенофаза	Обработка рассады препаратом		Контроль
	Дата	Урожай, кг/дка	Дата	Урожай, кг/дка
Посев	26.02		26.02
Начало цветения	05.06		26.05
Начало плодообразования	05.08
Ранний урожай		1385		1052
Общий урожай	07.11	3126		2751

Таблица 11 - Фенологические наблюдения и фазы развития детерминантных томатов сорта Водолей в полевых условиях
Фенофаза	Дата	Урожай, кг/дка
Посев	16.03
Завязывание бутона	01.05
Разссаживание	01.05
Начало цветения	27.05
Массоое цветение	05.06
Начало сбора продукции	17.08
Ранний урожай		2432
Общий урожай	15.10	6238

Таблица 12 - Сравнительные данные по фазам развития и урожайности. Томаты Водолей
Фенофаза	Обработка рассады		Контроль
	Дата	Урожай, кг/дка	Дата	Урожай, кг/дка
Посев	16.03		16.03
Начало цветения	27.05		06.06
Начало сбора продукции	17.08		27.08
Ранний урожай		2432		2111
Общий урожай	15.10	6238		5628

Применение препарата на томатах также как и на перце, ускоряет прохождение фаз развития и способствует получению более высокого раннего и общего урожая. На участке 1 дка без обработки рассады томатов препаратом, цвететие и массовое цветение запоздало на 11 дней. Сбор ранней продукции составил 2111 кг (ниже на 13,2 %), а общий урожай 5628 кг (ниже на 9,78 %).

Обработка рассады перца и томатов в фазе 2-х пар настоящих листочков препаратом в концентрации 10 ррм ускоряет развитие перца и томатов в полевых условиях, способствует получению более ранней продукции и увеличению общего урожая. Фазы начало цветения и массовое цветение наступают раньше на 7-11 дней, ранний урожай на перце больше на 24 %, на томатах на 13 %, общий урожай на перце выше на 12%, на томатах на 10 %, в сравнение с контролем.

Таким образом, технический результат заявляемого изобретения - стимуляция роста и, как следствие, повышение продуктивности сельскохозяйственных растений достигается тем, что для обработки растений используется штамм микромицета Phialocephala fortinii обладающий ярко выраженной рост-стимулирующей активностью.

Claims (1)

1. Штамм Phialocephala fortinii шт. F-833МКС661Ч1Н, продуцирующий комплекс биологически активных веществ, обладающих рострегуляторными свойствами, депонированный во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов под номером F-1731.