RU2802957C1 - Гибридные производные урсоловой кислоты и галловой кислоты, содержащие 1,2,3-триазольные линкеры, обладающие антиоксидантной и противовоспалительной активностью - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к медицине, конкретно к гибридным производным урсоловой и галловой кислот, содержащим 1,2,3-триазольные линкеры, а именно к 3-(2-(4-((3β-ацетоксиурс-12-ен)-28-иламинометил)-1H-1,2,3-триазол-1-ил)этокси)-4,5-((R,S)-метоксиметилендиокси)-бензоату 1а и 5-(((1-(2-(3β-ацетоксиурс-12-ен-28-оиламино)этил)-1Н-1,2,3-триазол-4-ил)метокси)карбонил)-1,2,3 тригидроксибензолу 1b. Техническим результатом изобретения является разработка новых эффективных агентов, обладающих высокими антиоксидантными свойствами и противовоспалительной активностью, на основе доступных растительных метаболитов урсоловой кислоты и галловой кислоты. 3 ил., 1 табл., 14 пр.

Description

Изобретение относится к новым химическим соединениям, конкретно 3-(2-(4-((3β-ацетоксиурс-12-ен)-28-иламинометил)-1H-1,2,3-триазол-1-ил)этокси)-4,5-метоксиметилендиокси)-бензоату 1а и 5-(((1-(2-(3β-ацетоксиурс-12-ен-28-оиламино)этил)-1Н-1,2,3-триазол-4-ил)метокси)карбонил)-1,2,3 тригидроксибензолу 1b, обладающим антиоксидантной и противовоспалительной активностью.

Указанные свойства определяют возможность использования соединений в медицине в качестве фармацевтических препаратов.

Современные клинические и эпидемиологические данные указывают на сильную корреляцию между хроническим воспалением и возникновением злокачественных новообразований [1]. Сверхэкспрессия оксида азота (NO) и активных форм кислорода (АФК) тесно связаны с хронической воспалительной реакцией, приводящей к серьезным заболеваниям, прогрессирование которых можно эффективно отсрочить или уменьшить с помощью природных метаболитов через сигнальный путь PI3K/AKT [2][3]. Пероксинитрит, мощный окислитель, который образуется в результате реакции NO и аниона супероксида, связан также с аутоиммунными расстройствами [4]. Экспрессия индуцибильной NO синтазы iNOS повышается во время воспаления и приводит к устойчивой продукции NO в течение продолжительного времени [5]. Удаление избыточных АФК и NO играют жизненно важную роль в защите клеток и ингибировании перекисного окисления липидов [2]. Использование нетоксичных противовоспалительных и антиоксидантных средств, в ряде случаев позволяет ингибировать развитие и малигнизацию предраковых клеток [1][6]. Традиционные нестероидные противовоспалительные средства (НПВС) рассматриваются в качестве препаратов, которые могут способствовать предотвращению онкологических заболеваний [1], но их длительное применение, как правило, ограничено из-за побочных эффектов (желудочно-кишечная, сердечно-сосудистая токсичность). Поэтому разработка новых эффективных противовоспалительных средств на основе нетоксичных природных соединений является задачей большой важности. В настоящее время ведется активный поиск новых полусинтетических противовоспалительных препаратов с использованием нетоксичных природных соединений, таких как пентациклические тритерпеноиды (ПТ) [7] [8].

Известно, что ПТ растительного происхождения являются мультитаргетными веществами, которые взаимодействуют с разнообразными клеточными мишенями и сигнальными путями, участвующими в выживании, прогрессировании и устойчивости раковых клеток [9]. Благодаря противоопухолевым свойствам и общей низкой токсичности тритерпеноиды рассматриваются как перспективные средства для лечения и профилактики рака [10].

ПТ уменьшают тяжесть острого и хронического воспаления за счет модуляции ключевых белков в сигнальных путях, которые контролируют воспалительные процессы. [11][12]. Урсоловая кислота (УК) - доступный ПТ, который выделяют из различного растительного сырья [13]. (УК) может ослаблять острое воспаление за счет ингибирования индуцибельной NO-синтазы и ЦОГ-2, а также за счет активации цитопротекторных белков антиоксидантно-реактивного элемента (ARE), тем самым устраняя токсичные нуклеофильные продукты, возникающие в результате воспалительной реакции [14][15].

Несмотря на наличие антиоксидантных свойств УК, связанное с ингибированием ферментов, участвующих в образовании АФК, и сверхэкспрессией NO [15][16], УК является плохим поглотителем радикалов и неспособна связывать ионы металлов [17]. Другим существенным недостатком УК, является низкая полярность, что определяет слабую растворимость в воде и низкую биодоступность потенциальных лекарственных средств на основе УК.

Доступный природный метаболит галловая кислота (ГК), известная своими антиоксидантными и противовоспалительными свойствами [18][19], имеет высокий синтетический потенциал для создания гибридов с тритерпеноидами. Промышленным способом получения ГК является гидролитическое расщепление танниновых кислот [20]. К недостаткам ГК относятся высокая полярность, что не позволяет растворяться в маслах и жирах, и невысокая активность по подавлению сверхэкспрессии NO [21].

Гибридизация УК с соединениями, содержащими полярные группы [22], например, гидроксилсодержащими производными или азагетероциклами, является широко используемой стратегией для получения конъюгатов с более высокой активностью или биодоступностью [23].

Задачей настоящего изобретения, является разработка новых эффективных агентов, обладающих высокими антиоксидантными свойствами и противовоспалительной активностью (подавление сверхэкспрессии оксида азота), на основе доступных растительных метаболитов урсоловой кислоты 2 и галловой кислоты 3.

Прототипами и ближайшими структурными аналогами заявляемого средства являются пентациклический тритерпеноид - урсоловая кислота 2 и фенолокислота -галловая кислота 3:

Поставленная задача решается новыми гибридными производными урсоловой и галловой кислот 1, содержащих 1,2,3-триазольные линкеры:

3-(2-(4-((3β-ацетоксиурс-12-ен)-28-иламинометил)-1H-1,2,3-триазол-1-ил)этокси)-4,5-метоксиметилендиокси)-бензоатом 1а, и 5-(((1-(2-(3β-ацетоксиурс-12-ен-28-оиламино)этил)-1Н-1,2,3-триазол-4-ил)метокси)карбонил)-1,2,3 тригидроксибензолом 1b, обладающими противовоспалительной и антиоксидантной активностью.

Получение гибридных производных УК с ГК содержащих 1,2,3-триазольный линкер заключались в реакциях 1,3-циклоприсоединения, катализируемых солями одновалентной меди: взаимодействие производных урсоловой кислоты, содержащей терминальную пропаргильную группу с производными галловой кислоты, содержащих азидный заместитель, или производных урсоловой кислоты, содержащей азидную группу с производными галловой кислоты, содержащих терминальный пропаргильный заместитель

Промежуточные соединения пропаргильные и азидные производные УК и ГК получали в соответствии с фиг.1 и 2. Синтез соединений 1a, 1b осуществляли в соответствии с фиг. 3.

Результаты изучения антиоксидантной и противовоспалительной активности in vitro представлены в Таблице 1.

Таблица 1 Антиоксидантная и противовоспалительная активность invitro гибридных соединений УК и ГК. Значения IC50 тритерпеноидно-галловых гибридов (единица измерения:μM, среднее ± SD, n = 3)
Соединение	DPPH·	NO
6	19.82±0.48	НА100
8	24.56±0.37	НА100
15	15.54±0.22	НА100
16	18.72±1.09	НА100
17	3.57±0.52	45.09±3.96
1a	1.61±0.08	26.10±2.38
18	5.04±0.44	50.35±2.40
19	6.96±0.23	92.33±4.72
1b	2.07±0.14	26.64±1.70
УК (2)	НА100	НА100
ГК (3)	9.30±0.82	НА100
Vc	21.92±0.34	НА100
Перифозин	НА100	23.18±2.25

«НТ»: не тестировалось. “НА¹⁰⁰”: «Не активно»: величина изучаемого показателя после введения тестовых соединений в концентрации свыше 100 μM составляла не менее 70% по сравнению с контролем (без введения тестовых соединений). Vc -аскорбиновая кислота.

Соединения 6,8 не содержат фрагменты триазола и ГК.

Соединение 16 не содержит фрагменты ГК.

Соединение 17 не содержит фрагмент триазола.

Перифозин (1,1-диметилпиперидиний-4-ил октадецилфосфат) использовался как известный суппрессор NO.

Из данных таблицы 1 следует, что гибридные соединения УК и ГК, содержащие 1,2,3-триазольный линкер 1a, 1b, проявили высокий уровень антиоксидантной активности, существенно превосходящей показатели известных антиоксидантов витамина С и галловой кислоты. Показатели ингибирования экспрессии NO (ингибрования iNOS) соединения близки к показателям перифозина, однако последний не обладает антиоксидантной активностью.

Спектральные исследования выполнены в Химическом Сервисном Центре коллективного пользования СО РАН.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами:

Примеры 1a,1b,1c. Синтезы промежуточных производных УК с азидными и пропаргильными заместителями

Синтез производных УК: 3β-ацетоксиурс-12-ен)-28-оил хлорида 2a[23]пропаргилурсолата4[24], 2-бромоэтилусолата 5 [25]метил 4,5-дигидрокси-3-(2-(урсолоилокси)этокси)бензоата[21; синтез производных ГК: метил 3-гидрокси-4,5-((R,S)-метоксиметилендиокси)бензоата9, метил 3-(2-бромэтокси)-4,5-((R,S)-метоксиметилендиокси)бензоата[25] осуществляли, как описано ранее.

Пример 1a. Синтез 2-азидоэтил-3 β -ацетоксиурс-12-ен-28-оата (соединение 6 , схема 1)

Суспензию (2-бромоэтил)-3β-ацетоксиурс-12-ен-28-оата5 (2,7 ммоль), азида натрия (0,25 г, 3,8 ммоль) в ДМФА (20,0 мл) интенсивно перемешивали при 50-55° С в течение 5 ч (контроль методом ТСХ). Смесь выливали в воду (80 мл) и экстрагировали МТБЭ (3×20 мл). Объединенный органический слой отделяли, промывали водой (2×20 мл), сушили (Na₂SO₄) и концентрировали в вакууме. Концентрат хроматографировали на короткой колонке с силикагелем (CH₂Cl₂) и концентрировали с получением азида 6 (1,3 г, 84%) в виде белого твердого вещества.

ИК (KBr) νmax (см^-1): 484, 559, 644, 663, 683, 756, 798, 827, 841, 854, 914, 926, 945, 974, 995, 1034, 1109, 1140, 1167, 1182, 1200, 1225, 1242, 1284, 1304, 1329, 1346, 1362, 1375, 1387, 1464, 1657, 1736, 2073, 2104, 2719, 2868, 2924, 2937, 2972, 3331. ЯМР ¹Н (400.13 МГц, CDCl₃,δ, м.д., J/Гц): 0.73 (3H, с, H-26^§), 0.76 (3H, с, H-25^§), 0.84 ( 3H, д, J=6.5, H-30^#), 0.84 (3H, с, H-24^§), 0.92 (3H, д, J=6.3, H-29^#), 0.97 (3H, с, H-23^§), 1.06 (3H, с, H-27), 2.21 (1Н, д, J_18,19 = 11.0, Н-18), 3.10 (1Н, м, Н-3), 3.42 (2Н, м, CH₂-N₃), 4.14 (2H, т, J=5.2, OCH₂), 5.25 (1Н, т, J=3.6, Н-12). ЯМР ¹³С (100.62 МГц, CDCl₃, δ, м.д.): 15.3 (C-24), 15.5 (C-25), 16.8 (C-26), 16.9 (C-29), 18.1 (C-6), 21 (C-30), 23.1 (C-11), 23.4 (C-27), 24 (C-16), 27 (C-2), 27.8 (C-15), 28 (C-23), 30.4 (C-21), 32.8 (C-7), 36.3 (C-22), 36.8 (C-10), 38.4 (C-1), 38.6 (C-4), 38.6 (C-19), 38.9 (C-20), 39.3 (C-8), 41.8 (C-14), 47.3 (C-9), 48.0 (C-17), 49.8 (CH₂-N₃), 52.6 (C-18), 55 (C-5), 62.7 (OCH₂), 78.8 (C-3), 125.6 (C-12), 137.8 (C-13), 177.1 (C-28). Найдено, m/z: 525.3920 [M]⁺. C₃₂H₅₁ O₃ N₃ Вычислено, m/z: 525.3925

Пример 1b. Синтез N-((3 β -ацетоксиурс-12-ен)-28-оил)пропаргиламин (соединение 7 , схема 1)

К перемешиваемой смеси гидрохлорида пропаргиламина (0.36 г, 4.0 ммоль) в CHCl₃ (20 мл) и Et₃N (2.0 г, 19 ммоль) добавляли раствор хлорангидрида 2a (1.3 г, 2.73 ммоль) в CHCl₃ (15 мл).по каплям при 5-10°C. После перемешивания в течение 4 часов при температуре окружающей среды смесь последовательно промывали водным раствором. NaHCO₃ (5%, 30 мл), водн. HCl (0,1 н., 30 мл), воду (30 мл), сушили (Na₂SO₄) и концентрировали в вакууме. Концентрат хроматографировали на колонке с силикагелем (CH₂Cl₂-МТБЭ) и концентрировали с получением амида7 (1,26 г, 87%) в виде белого твердого вещества.

ИК (KBr) νmax (см^-1): 455, 509, 559, 579, 625, 663, 756, 810, 903, 922, 951, 970, 985, 1007, 1028, 1080, 1093, 1146, 1188, 1248, 1304, 1371, 1390, 1454, 1514, 1653, 1734, 2856, 2872, 2926, 2947, 2970, 3311, 3412. ЯМР ¹Н (400.13 МГц, CDCl₃,δ, м.д., J/Гц): 0.76 (3H, с, H-26^§), 0.79-0.88 (9H, м, H-25^§, H-30^#, H-24^§), 0.91 (6H, H-29^#, H-23^§), 1.05 (3H, с, H-27), 2.03 (3H, с, CH₃CO), 2.17 (1H, т, J=2.4, C≡H), 3.92 (2Н, м, NHCH ₂), 4.45 (1Н, м, H-3), 5.31 (1Н, т, J=3.3, Н-12), 6.06 (1Н, т, J=4.0, N-H). ЯМР ¹³С (100.62 МГц, CDCl₃, δ, м.д.): 15.4 (С-25), 16.5 (С-24), 16.7 (С-26), 17.1 (C-29), 18.0 (C-6), 21.1 (C-30), 21.2 (CH₃CO), 23.1 (C-27), 23.2 (C-11), 23.4 (C-2), 24.7 (C-16), 27.6 (C-15), 27.9 (C-23), 29.5 (NHCH₂), 30.6 (C-21), 32.4 (C-7), 36.6 (C-10), 36.7 (C-22), 37.5 (C-1), 38.1 (C-4), 38.9 (C-19), 39.4 (C-8), 39.5 (C-20), 42.2 (C-14), 47.3 (C-9), 47.6 (C-17), 53.5 (C-18), 55.0 (C-5), 71.4 (C≡CH), 79.5 (C≡CH), 80.7 (C-3), 125.8 (C-12), 139.6 (C-13), 170.9 (CH₃ CO), 177.8 (C-28). Найдено, m/z: 535.4020 [M]⁺. C₃₅H₅₃ O₃ N.Вычислено, m/z: 535.4025

Пример 1c. Синтез N-(2-азидоэтил)-(3 β -ацетоксиурс-12-ен)-28-оил-амида (соединение 8 , схема 1)

К перемешиваемой смеси 2-азидоэтанамина (1 мл ~50% раствора в CH₂Cl₂, ~5.8 ммоль) в CHCl₃ (20 мл) и Et₃N (2.0 г, 19 ммоль) добавляли раствор хлорангидрида 2a (1.3 г, 2.73 ммоль) в CHCl₃ (15 мл) по каплям при 5-10°C. После перемешивания в течение 4 часов при температуре окружающей среды смесь последовательно промывали водным раствором. NaHCO₃ (5%, 30 мл), водн. HCl (0,1 н., 30 мл), водой (30 мл), сушили (Na₂SO₄) и концентрировали в вакууме. Концентрат хроматографировали на колонке с силикагелем (CH₂Cl₂-МТБЭ) с получением амида8 (1,3 г, 84%) в виде бледно-желтого стекла .

ИК (KBr) νmax (см^-1): 511, 530, 557, 608, 661, 764, 787, 829, 903, 924, 951, 972, 985, 1007, 1028, 1080, 1093, 1103, 1120, 1147, 1174, 1188, 1246, 1304, 1346, 1369, 1390, 1456, 1520, 1647, 1734, 2100, 2856, 2872, 2928, 2947, 2970, 3402. ЯМР ¹Н (400.13 МГц, CDCl₃,δ, м.д., J/Гц): 0.76 (3H, с, H-26^§), 0.79-0.88 (9H, м, H-25^§, H-30^#, H-24^§), 0.92 (6H, H-29^#, H-23^§), 1.07 (3H, с, H-27), 2.02(3H, с, CH₃CO), 3.15 (1Н, м, NHCH ₂-α), 3.38 (2Н, м, CH₂-N₃), 3.50 (1Н, м, NHCH ₂-β), 4.46 (1Н, м, H-3), 5.25 (1Н, т, J=3.3, Н-12), 6.21 (1Н, т, J=5.3, N-H). ЯМР ¹³С (100.62 МГц, CDCl₃, δ, м.д.): 15.4 (C-25), 16.6 (C-24), 16.7 (C-26), 17.1 (C-29), 18.0 (C-6), 21.1 (C-30), 21.2 (CH₃COO), 23.1 (C-27), 23.3 (C-11), 23.4 (C-2), 24.7 (C-16), 27.7 (C-15), 27.9 (C-23), 30.7 (C-21), 32.5 (C-7), 36.7 (C-10), 36.9 (C-22), 37.5 (NH-CH₂), 38.1 (C-1), 38.6 (C-4), 38.9 (C-19), 39.4 (C-8), 39.6 (C-20), 42.3 (C-14), 47.3 (C-9), 47.7 (C-17), 50.7 (CH₂N₃), 53.7 (C-18), 55.1 (C-5), 80.7 (C-3), 125.8 (C-12), 139.5 (C-13), 170.9 (CH₃ CO-), 178.4 (C-28). Найдено, m/z: 566.4187 [M]⁺. C₃₄ H₅₄ O₃ N₄.Вычислено, m/z: 566.4190

Примеры 2a,2b,2c. Синтезы промежуточных производных ГК с азидными и пропаргильными заместителями

Пример 2a. Синтез метил 3-(проп-2-инилокси)-4,5-((R,S)-метоксиметилендиокси) бензоата (соединение 10 , схема 2)

Суспензию метил-3-гидрокси-4,5-(метоксиметилендиокси)-бензоата9 (1,0 г, 4,4 ммоль), пропаргилбромида (1,0 г, 4,4 ммоль) в ДМФА (15 мл), безводного измельченного K₂CO₃ (2,7 г, 19,5 г). ммоль) и KI (0,01 г, 0,06 ммоль) интенсивно перемешивали при комнатной температуре в течение 24 ч (контроль методом ТСХ). Смесь выливали в воду (100 мл) и экстрагировали МТБЭ (2×30 мл). Объединенный органический слой промывали водой (2×50 мл), сушили (Na₂SO₄) и концентрировали в вакууме. Концентрат хроматографировали на короткой колонке с силикагелем (CH₂Cl₂) и концентрировали с получением пропаргилового эфира 10 (0,9 г, 77%) в виде белых кристаллов.

т.пл.94-95°C (dec.). ИК (KBr) νmax (см^-1): 604, 640, 656, 679, 696, 725, 764, 777, 822, 874, 912, 962, 993, 1063, 1105, 1194, 1213, 1228, 1248, 1331, 1362, 1437, 1512, 1612, 1643, 1720, 2133, 2955, 2983, 3007, 3296, 3306. ¹H ЯМР (400.13 МГц, CDCl₃, δ, м.д.): 2.53 (т, 1H, J= 2.5 Гц, C≡C-H),3.41 (с, 3H, CH-OCH ₃), 3.86 (с, 3H, COOCH ₃), 4.82 (м, 2H, CH ₂-C≡C), 6.93 (с, 1H, CH-OMe), 7.28 (д, 1H, J=1.4 Гц, Ar-H), 7.32 (д, 1H, J=1.4 Гц, Ar-H). ЯМР ¹³С (125.76 МГц, CDCl₃, δ, м.д.): 49.9 (CHOCH₃), 52.1 (COOCH₃), 57.1 (-O-CH₂-C≡), 76.1 (-C≡C-H), 77.6 (-C≡C-H), 103.9 (Ar-2), 112.1 (Ar-6), 120.2 (O-CH-OMe), 124.1 (Ar-1), 138.3 (Ar-4), 140 (Ar-3), 147.2 (Ar-5), 165.9 (COOMe). Найдено, m/z: 264.0618 [M]⁺. C₁₃ H₁₂ O₆ Вычислено, m/z: 264.0628

Пример 2b. Синтез метил 3-(2-азидоэтокси)-4,5-((R,S)-метоксиметилендиокси)бензоата (соединение 12 , схема 2)

Суспензию бромида 11 (3 ммоль), азида натрия (6,2 ммоль) в ДМФА (10,0 мл) интенсивно перемешивали при 50-55° С в течение 5 ч (контроль методом ТСХ). Смесь выливали в воду (50 мл) и экстрагировали МТБЭ (2×30 мл). Объединенный органический слой отделяли, промывали водой (2×20 мл), сушили (Na₂SO₄) и концентрировали в вакууме. Концентрат хроматографировали на короткой колонке с силикагелем (CH₂Cl₂) и концентрировали с получением азида 12 , 96%.

Т.пл.46.7°C (разл.)ИК (KBr) νmax (см^-1): 409, 494, 530, 555, 625, 642, 690, 723, 764, 777, 822, 845, 854, 866, 879, 891, 916, 999, 1028, 1105, 1140, 1184, 1194, 1,2,30, 1259, 1304, 1321, 1340, 1365, 1385, 1400, 1437, 1514, 1608, 1637, 1707, 2060, 2114, 2148, 2181, 2847, 2881, 2949, 2985, 3001, 3016, 3088. ¹H ЯМР (400.13 МГц, CDCl₃, δ, м.д.): 3.41 (с, 3H, CH-OCH ₃), 3.61 (т, 2H, J= 4.9 Гц, CH₂N₃), 3.86 (с, 3H, COOCH ₃), 4.30 (т, 2H, J= 4.9 Гц, -CH₂O), 6.92 (с, 1H, CH-OMe), 7.26 (д, 1H, J=1.2 Гц, Ar-H), 7.33 (д, 1H, J=1.2 Гц, Ar-H).ЯМР ¹³С (125.76 МГц, CDCl₃, δ, м.д.): 50.1 (-CH₂N₃), 50.2 (CHOCH₃), 52.1 (COOCH₃), 68.6 (ArOCH₂), 103.9 (Ar-2), 111.8 (Ar-6), 120.3 (OCHOMe), 124.4 (Ar-1), 138.2 (Ar-4), 141.0 (Ar-3), 147.4 (Ar-5), 166.1 (COOMe). Найдено, m/z: 295.0802 [M]⁺. C₁₂ H₁₃ O₆ N₃ Вычислено, m/z: 295.0799

Пример 2с. Синтез 5-((проп-2-инилокси) карбонил)бензол-1,2,3-триил триацетат (соединение 14 , схема 2)

К охлаждаемому льдом раствору 5-(хлоркарбонил)бензол-1,2,3-триилтриацетата 13 (1,56 г, 4,9 ммоль) в CHCl₃ (10 мл) и Et₃N (1,5 мл) добавляли по каплям пропаргиловый спирт (0,26 г, 4,9 ммоль). Смесь перемешивали в течение 3 часов. Органический слой промывали водным раствором HCl. (1%, 30 мл), промывали водой (2×30 мл), сушили (Na₂SO₄) и концентрировали в вакууме. Концентрат хроматографировали на короткой колонке с силикагелем (CH₂Cl₂), получали пропаргилового эфира 12 (1,49 г, 84%) в виде белых кристаллов.

Т.пл.64-65°C. ИК (KBr) νmax (см^-1): 457, 528, 567, 590, 636, 669, 708, 741, 764, 779, 818, 856, 897, 918, 949, 1005, 1022, 1059, 1095, 1173, 1194, 1221, 1240, 1275, 1327, 1371, 1431, 1498, 1606, 1616, 1730, 1776, 2125, 2951, 3271. ¹H ЯМР (400.13 МГц, CDCl₃, δ, м.д.): 2.28 (с, 6H, COOCH ₃), 2.29 (с, 3H, COOCH ₃), 2.53 (т, 1H, J= 2.3 Гц, C≡C-H),3.86 (с, 3H, COOCH ₃), 4.88 (д, 2H, J= 2.3, CH ₂-C≡C), 7.80 (с, 2H, Ar-H). ЯМР ¹³С (100.62 МГц, CDCl₃, δ, м.д.): 20.0 (COOCH₃), 20.4 (2×COOCH₃), 52.8 (O-CH₂-C≡), 75.3 (C≡C-H), 77.0 (C≡C-H), 122.3 (Ar-2,6), 127.3 (Ar-1), 138.8 (Ar-4), 143.3 (Ar-3,5), 163.5 (Ar-COO), 166.2 (CH₃ COO-Ar-4), 167.4 (CH₃ COO-Ar-3,5). Найдено, m/z: 334.0687 [M]⁺. C₁₆ H₁₄ O₈ Вычислено, m/z: 334.0683

Примеры 3 Взаимодействие пропаргилпроизводныхУКс азидами ГК

К суспензии пропаргилпроизводноготритерпеноида6 или 7 (0,5 ммоль) в смеси t-BuOH (3 мл) и воды (1 мл) добавляли смесь CuSO₄×5H₂O (0,05 ммоль) и аскорбата натрия (0,05 ммоль) в воде (0,3 мл). Смесь перемешивали в течение 0,5 ч при комнатной температуре с последующим добавлением азида 12 или 2-гидроксиэтилазида (0,5 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 10-24 ч (контроль ТСХ). Смесь выливали в воду со льдом, экстрагировали МТБЭ (3×30 мл). Органическую фазу сушили (Na₂SO₄) и концентрировали в вакууме. Концентрат хроматографировали на колонке с силикагелем (SiO₂, CH₂Cl₂-МТБЭ) с получением гибридов тритерпеноид-галловая кислота с триазольными линкерами 1a, 15,16.

Пример 3a. Синтез метил 3-(2-(4-((3 β -гидроксиурс-12-ен)-28-оилоксиметил)-1Н-1,2,3-триазол-1-ил)этокси)-4,5-((R, S)-метоксиметилендиокси)-бензоата (соединение 15 , схема 3)

Выход 69%, белый порошок. ИК (KBr) νmax (см^-1): 661, 681, 731, 766, 785, 825, 868, 883, 914, 951, 995, 1032, 1107, 1142, 1182, 1194, 1228, 1246, 1302, 1319, 1344, 1365, 1383, 1439, 1510, 1608, 1635, 1674, 1720, 2872, 2928, 2949, 3151, 3433. ЯМР ¹Н (400.13 МГц, CDCl₃,δ, м.д., J/Гц): 0.46-0.49 (3H, м, H-26^§), 0.69 (3H, с, H-25^§), 0.75 ( 3H, д, J=6.5, H-30^#), 0.79 (3H, с, H-24^§), 0.85 (3H, м, H-29^#), 0.90 (3H, с, H-23^§), 0.97 (3H, с, H-27), 2.13 (1Н, д, J_18,19 = 11.3, Н-18), 3.12 (1Н, т, J=4.9, Н-3), 3.37 (3Н, м, CHOCH ₃ ), 3.80 (3Н, м, COOCH ₃ ), 4.46 (2H, м, CH₂CH ₂N), 4.70 (2H, м, CH ₂CH₂N), 5.03-5.13 (2Н, м, COOCH ₂ ), 5.13 (1Н, м, Н-12), 6.88 (1H, br.с, CH-OMe), 7.22 (2H, м, Ar-H), 7.76 (1H, д, J=3.3, OCH₂C=CH). ЯМР ¹³С (125.76 МГц.CDCl₃, δ, м.д.): 15.3 (С-25), 15.5 (С-24), 16.5 (С-26), 16.6 (С-26'), 16.8 (С-29), 18.1 (С-6), 21.0 (С-30), 23.0 (С-11), 23.3 (С-27), 24.0 (С-16), 27.0 (С-2), 27.7 (С-15), 28.0 (С-23), 30.4 (С-21), 32.8 (С-7), 36.4 (С-22), 36.7 (С-10), 38.4 (С-1), 38.6 (С-4), 38.6 (С-19), 38.9 (С-20), 39.3 (С-8), 39.3 (С-8'), 41.8 (С-14), 41.8 (С-14'), 47.3 (С-9), 47.9 (С-17), 49.5 (CH₂ CH₂N), 50.3 (CHOCH₃), 50.3 (CHOC'H₃), 52.1 (COOCH₃'), 52.6 (С-18), 52.6 (С-18'), 55.0 (С-5), 57.1 (OCH₂CH₂), 68.0 (CH₂OAr), 78.7 (С-3), 104.2 (Ar-6), 111.6 (Ar-2), 111.8 (Ar-2'), 120.3 (OCHO), 124.4 (Ar-1), 125 (N-CH), 125.1 (N-CH'), 125.5 (С-12), 137.7 (С-13), 137.8 (С-13'), 138.1 (Ar-4), 140.4 (CH₂ CN), 140.4 (CH₂ C'N), 143.2 (Ar-3), 147.3 (Ar-5), 147.3 (Ar-5'), 165.8 (ArCOOMe), 177.2 (С-28). Найдено, m/z: 789.4552 [M]⁺. C₄₅H₆₃O₉N₃ Вычислено, m/z: 789.4559.

Пример 3b. Синтез 3-(2-(4-((3 β -гидроксиурс-12-ен)-28-оилоксиметил)-1Н-1,2,3-триазол-1-ил)этанол (соединение 16 , схема 3)

Выход 71%, белыйпорошок. ИК (KBr) ν max (см^-1): 459, 511, 559, 608, 665, 756, 787, 806, 829, 868, 903, 951, 972, 985, 1007, 1028, 1047, 1078, 1142, 1174, 1188, 1246, 1306, 1315, 1371, 1390, 1456, 1522, 1637, 1734, 2874, 2928, 2947, 2968, 3404.ЯМР ¹Н (400.13 МГц, CDCl₃,δ, м.д., J/Гц): 0.51 (3H, с, H-26^§), 0.76-0.83 ( 9H, H-25^§, H-30^#, H-24^§), 0.81 (3H, с, H-24^§), 0.85 (3H, м, H-29^#), 0.88 (3H, с, H-23^§), 1.02 (3H, с, H-27), 1.99 (3H, с, CH₃CO), 3.85 -4.10 (3H, м, CH₂CH ₂OH, OH), 4.1-4.5 (5H, м, CH ₂ CH₂OH, H-3, O=C-NH-CH₂) 5.27 (1Н, м, Н-12), 6.51 (1H, br.с, NH), 7.61 (1H, с, NHCH₂C=CH). ЯМР ¹³С (100.61 МГц, CDCl₃, δ, м.д.): 15.3 (С-25), 16.3 (С-24), 16.5 (С-26), 17 (C-29), 17.9 (C-6), 21 (C-30), 21.1 (CH₃CO), 23.0 (C-27), 23.1 (C-11), 23.3 (C-2), 24.6 (C-16), 27.6 (C-15), 27.8 (C-23), 30.6 (C-21), 32.4 (C-7), 34.7 (CONHCH₂), 36.6 (C-10), 36.8 (C-22), 37.4 (C-4), 38.1 (C-1), 38.8 (C-19), 39.3 (C-8), 39.5 (C-20), 42.1 (C-14), 47.2 (C-9), 47.4 (C-17), 52.5 (NCH₂CH₂O), 53.3 (C-18), 55 (C-5), 60.8 (CH₂ CH₂OH), 80.6 (C-3), 1,2,3.3 (N-NCH), 125.9 (C-12), 138.9 (C-13), 144.2 (CH₂-C=CH), 170.9 (CH₃ CO), 178.3 (C-28).Найдено, m/z: 622,4462 [M]⁺. C₃₇ H₅₈ O₄ N₄.Вычислено, m/z: 622,4458

Пример 3c. Синтез метил 3-(2-(4-((3 β -ацетоксиурс-12-ен)-28-иламинометил)-1Н-1,2,3-триазол-1-ил)этокси)-4,5-((R, S)-метоксиметилендиокси)-бензоат (соединение 1a , схема 3)

Выход 74%, белый порошок. ИК (KBr) νmax (см^-1): 559, 609, 665, 733, 768, 808, 820, 868, 885, 916, 951, 972, 1005, 1036, 1107, 1146, 1192, 1248, 1300, 1319, 1342, 1369, 1439, 1510, 1610, 1637, 1722, 2874, 2949, 3149, 3417. ЯМР ¹Н (400.13МГц, CDCl₃,δ, м.д., J/Гц): 0.37-0.47 (3H, м, H-26^§), 0.73-0.79 (9H, м, H-25^§, H-30^#, H-24^§), 0.85-0.90 (6H, м, H-29^#, H-23^§), 0.95-1.05 (3H, м, H-27), 1.98 (3H, с, CH₃CO), 3.39 (3Н, м, CHOCH ₃ ), 3.82 (3Н, м, COOCH ₃ ), 4.30-3.53 (5H, м, CONH-CH ₂, CH₂CH ₂N, H-3), 4.68 (2H, м, OCH ₂CH₂N), 5.22 (1Н, м, Н-12), 6.0 (1H, уш.с CON-H), 6.87 (1H, м, CH-OMe), 7.24 (1H, м, Ar-H), 7.42 (1H, м, Ar-H), 7.71 (1H, м, NHCH₂C=CH). ЯМР ¹³С(100.13 МГц, CDCl₃,δ, м.д., J/Гц): 15.3 (С-25), 16.1(С-24), 16.2(С-24'), 16.4 (C-26), 17.0 (C-29), 17.8 (C-6), 21.0 (C-30), 21.1 (C-CH₃CO), 23.0 (C-27), 23 (C-27'), 23.0 (C-11), 23.3 (C-2), 24.7 (C-16), 27.5 (C-15), 27.5 (C-15'), 27.8 (C-23), 30.6 (C-21), 32.3 (C-7), 32.4 (C-7'), 34.6 (CONHCH₂), 36.5 (C-10), 36.5 (C-10'), 36.8 (C-22), 36.8 (C-22'), 37.4 (C-4), 38 (C-1), 38.8 (C-19), 39.2 (C-8), 39.2 (C-8'), 39.5 (C-20), 42.1 (C-14), 47.2 (C-9), 47.2 (C-9'), 47.4 (C-17), 47.5 (C-17'), 49.4 (NCH₂CH₂O), 50.3 (CHOCH₃), 50.4 (CHOCH₃'), 52.1 (COOCH₃), 53.4 (C-18), 54.9 (C-5), 67.9 (CH₂OAr), 80.6 (C-3), 104.1 (Ar-6), 111.4 (Ar-2), 111.5 (Ar-2'), 120.3 (OCHO), 1,2,3.3 (NNCH), 1,2,3.4 (NNCH'), 124.4 (Ar-1), 125.9 (C-12), 138 (Ar-4), 138 (Ar-4'), 138.9 (C-13), 138.9 (C-13'), 140.4 (CH₂-C=CH), 140.5 (CH₂-C=CH’), 144.6 (Ar-3), 147.2 (Ar-5), 147.2 (Ar-5'), 165.7 (Ar-COOMe), 170.8 (CH₃ CO), 178.0 (C-28). Найдено, m/z: 830.4818 [M]⁺. C₄₇ H₆₆ O₉N₄ Вычислено, m/z: 830.4824

Примеры 4. Взаимодействие пропаргилпроизводныхГК с азидами УК

К смеси пропаргилового производного 10 или 12 (0,5 ммоль), в t-BuOH (3 мл) и воде (1 мл) добавляли раствор CuSO₄×5H₂O (0,05 ммоль) и аскорбата натрия (0,05 ммоль) в воде (0,3 мл) и перемешивали в течение 0,5 ч при комнатной температуре. К смеси добавляли тритерпеноидный азид 6 (0,5 ммоль) с последующим перемешиванием при комнатной температуре 10-24 ч (контроль ТСХ). Реакционную смесь выливали в воду со льдом, экстрагировали МТБЭ (3×30 мл). Органическую фазу сушили (Na₂SO₄) и концентрировали в вакууме. Концентрат хроматографировали на колонке с силикагелем (SiO₂, CH₂Cl₂-МТБЭ) с получением гибридов тритерпеноид-галловая кислота с триазольными линкерами.

Пример 4a. Синтез 3-((1-(2-(3 β -гидроксиурс-12-ен-28-оилокси)этил)-1H-1,2,3-триазол-4-ил)метокси)-4,5-((R ,S)-метоксиметилендиокси)бензоата (соединение 18 , схема 3)

Выход 58%, белый порошок. ИК (KBr) νmax (см^-1): 663, 679, 766, 829, 849, 868, 883, 912, 951, 974, 997, 1036, 1097, 1142, 1180, 1196, 1,2,30, 1246, 1300, 1319, 1346, 1365, 1439, 1510, 1608, 1635, 1722, 2872, 2928, 2949, 3145, 3435. ЯМР ¹Н (500.13 МГц, CDCl₃,δ, м.д., J/Гц): 0.61 (3H, с, H-26^§), 0.72 (3H, с, H-25^§), 0.79 ( 3H, д, J=6.5, H-30^#), 0.84 (3H, с, H-24^§), 0.89 (3H, м, H-29^#), 0.95 (3H, с, H-23^§), 1.01 (3H, с, H-27), 2.11 (1Н, д, J_18,19 = 11.3, Н-18), 3.14 (1Н, т, J=4.8, Н-3), 3.39 (3Н, м, CHOCH ₃ ), 3.84 (3Н, м, COOCH ₃ ), 4.15 (2H, м, CH₂CH ₂N), 4.58 (2H, м, OCH ₂CH₂N), 5.14 (1Н, т, J=3.6, Н-12), 5.33 (2Н, м, ArOCH ₂ ), 6.87 (1H, уш.с, CH-OMe), 7.24 (1H, м, Ar-H), 7.42 (1H, м, Ar-H), 7.68 (1H, с, OCH₂C=CH). ЯМР ¹³С (125.76 МГц. CDCl₃, δ, м.д.): 15.2 (C-24), 15.4 (C-25), 16.7 (C-26), 16.8 (C-29), 18.0 (C-6), 20.9 (C-30), 23 (C-11), 23.3 (C-27), 24 (C-16), 27 (C-2), 27.7 (C-15), 27.9 (C-23), 30.3 (C-21), 32.7 (C-7), 36.4 (C-22), 36.7 (C-10), 38.4 (C-1), 38.5 (C-4), 38.6 (C-19), 38.8 (C-20), 39.3 (C-8), 41.8 (C-14), 47.2 (C-9), 48 (C-17), 49.0 (CH₂-N), 50.1 (CHOCH₃), 52.0 (COOCH₃), 52.6 (C-18), 55.0 (C-5), 61.9 (ArOCH₂), 63.4 (COOCH₂), 78.7 (C-3), 103.8 (Ar-6), 112 (Ar-2), 120.1 (OCHO), 1,2,3.1 (N-CH), 124.4 (Ar-1), 125.6 (C-12), 137.7 (C-13), 138.1 (Ar-4), 140.8 (CH₂C=CN), 143.4 (Ar-3), 147.2 (Ar-5), 165.9 (ArCOOMe), 176.8 (C-28). Найдено, m/z: 789.4565 [M]⁺. C₄₅ H₆₃ O₉N₃ Вычислено, m/z: 789.4559

Пример 4b. Синтез 5-(((1-(2-(3 β -ацетоксиурс-12-ен-28-оилокси)этил)-1Н-1,2,3-триазол-4-ил)метокси)карбонил)бензол-1,2, 3-триилтриацетата (соединение 19 , схема 3)

Выход 72%, белый порошок. ИК (KBr) νmax (см^-1): 590, 663, 758, 789, 810, 829, 850, 903, 968, 985, 1012, 1028, 1053, 1092, 1111, 1165, 1184, 1200, 1248, 1323, 1371, 1429, 1444, 1456, 1495, 1601, 1730, 1786, 2874, 2929, 2949, 3149, 3435, 3408. ЯМР ¹Н (500.13 МГц, CDCl₃,δ, м.д., J/Гц): 0.58 (3H, с, H-26^§), 0.77-0.83 (9H, с, H-25^§, H-30^#, H-24^§), 0.87 (3H, м, H-29^#), 0.89 (3H, с, H-23^§), 0.95 (3H, с, H-27), 2.00 (3H, с, CH₃CO ), 2.09 (1Н, д, J_18,19 = 11.4, Н-18), 2.24 (6H, с, CH ₃COO-Ar ), 2.25 (3H, с, CH₃COO-Ar ), 4.35 (2H, м, CH₂CH ₂N), 4.44 (1Н, т, J=7.7, Н-3), 4.56 (2H, м, OCH ₂CH₂N), 5.11 (1Н, т, J=3.6, Н-12), 5.41 (2Н, м, COOCH ₂ C=), 7.70 (1H, с, OCH₂C=CH), 7.75 (2H, м, Ar-H). ЯМР ¹³С (100.62 МГц, CDCl₃, δ, м.д.): 15.3 (C-25), 16.5 (C-24), 16.8 (C-26), 16.8 (C-29), 18.0 (C-6), 20.0 (C-30), 20.4 (CH₃COOAr-3,5), 20.9 (CH₃CO), 21.1 (CH₃COOAr-4)), 23.0 (C-11), 23.2 (C-27), 23.3 (C-2), 23.9 (C-16), 27.6 (C-15), 27.9 (C-23), 30.2 (C-21), 32.6 (C-7), 36.4 (C-22), 36.6 (C-10), 37.5 (C-4), 38.0 (C-1), 38.6 (C-19), 38.7 (C-20), 39.2 (C-8), 41.7 (C-14), 47.1 (C-9), 48.0 (CH₂ CH₂N), 49.0 (C-17), 52.6 (C-18), 55.0 (C-5), 58.3 (ArCOOCH₂), 62.0 (OCH₂CH₂N), 80.7 (C-3), 122.2 (Ar-6), 124.7 (N-NC-H), 125.5 (C-12), 127.6 (Ar-1), 137.7 (C-13), 138.7 (CH₂CN=N), 142.4 (Ar-4), 143.3 (Ar-3,5), 164.1 (ArCOO), 166.1 (CH₃ COOAr-4), 167.3 (CH₃ COOAr-3,5), 170.8 (CH₃ CO), 176.8 (C-28). Найдено, m/z: 901.4716 [M]⁺. C₅₀H₆₇O₁₂N₃ Вычислено, m/z: 901.4719

Пример 5. Синтез 5-(((1-(2-(3 β -ацетоксиурс-12-ен-28-оиламино)этил)-1Н-1,2,3-триазол-4-ил)метокси)карбонил)-1,2,3 тригидроксибензол 1b

К перемешиваемому раствору производного ацетата 19 (0,3 ммоль) в i-PrOH (2,5 мл) добавляли N₂H₄×H₂O (80% 375 мг, 6 ммоль) при комнатной температуре. После перемешивания в течение 1 ч (контроль ТСХ) добавляли воду (50 мл) и раствор HClводн. (3%, 20 мл). Смесь экстрагировали CHCl₃ (3×20 мл). Органическую фазу сушили (Na₂SO₄) и концентрировали в вакууме. Концентрат хроматографировали (SiO₂, CH₂Cl₂-МТБЭ) с получением производного 1b(82%) в виде белого порошка.

Выход 82% as белый порошок. ИК (KBr) νmax (см^-1): 469, 555, 609, 646, 663, 737, 758, 798, 825, 845, 874, 906, 991, 1032, 1092, 1109, 1142, 1211, 1246, 1313, 1373, 1454, 1512, 1535, 1612, 1720, 2723, 2874, 2928, 2949, 2968, 3151, 3390. ЯМР ¹Н (500.13 МГц, CDCl₃,δ, м.д., J/Гц): 0.56 (3H, с, H-26^§), 0.77 (6H, м, H-25^§, H-30^#), 0.79 (3H, H-24^§), 0.82 (3H, с, H-29^#), 0.85 (3H, с, H-23^§), 0.95 (3H, с, H-27), 2.01 (3H, с, CH ₃CO), 2.06 (1H, д, J_18,19 = 11.0, Н-18), 4.36 (2Н, м, COO-CH ₂), 4.42 (1Н, т, J=6.5, H-3), 4.58 (2H, м, CH ₂CH₂N), 5.09 (1H, с, H-12), 5.35 (2H, м, ArCOOCH ₂), 7.20 (2H, с, Ar-H), 6.90-7.70 (3H, br.м, OH), 7.73 (1H, br.с, N=CH-C). ЯМР ¹³С (125.77 МГц, CDCl₃, δ, м.д.): 15.2 (C-25), 16.4 (C-24), 16.7 (C-26), 16.8 (C-29), 17.9 (C-6), 20.8 (C-30), 21.1 (CH₃CO), 23 (C-11), 23.2 (C-27), 23.3 (C-2), 24 (C-16), 27.6 (C-15), 27.8 (C-23), 30.2 (C-21), 32.6 (C-7), 36.4 (C-22), 36.5 (C-10), 37.4 (C-4), 38 (C-1), 38.5 (C-19), 38.7 (C-20), 39.2 (C-8), 41.7 (C-14), 47.1 (C-9), 48 (C-17), 49.3 (OCH₂ CH₂N), 52.6 (C-18), 55 (C-5), 57.1 (OCH₂CH₂N), 61.8 (ArOCH₂), 80.9 (C-3), 109.8 (Ar-2,6), 120.4 (Ar-1), 124.8 (N-CH=C), 125.5 (C-12), 137.3 (Ar-4), 137.7 (C-13), 142.7 (N-CH=C), 144 (Ar-3,5), 166.4 (ArCOO), 171.1 (CH₃ CO), 177.0 (C-28). Найдено, m/z: 775.4398 [M]⁺. C₄₄H₆₁O₉N₃ Вычислено, m/z: 775.4402

Примеры 6a, 6b Определение антиоксидантных и противовоспалительных свойств.

Все коммерчески доступные реагенты приобретались в специализированных коммерческих компаниях, имели аналитическую чистоту и были использованы без дополнительной очистки. Набор для обнаружения NO был приобретен в NanjingJianchengBioengineeringInstitute. Перифозин, DPPH и витамин C (Vc) были приобретены у AladdinReagentCo., Ltd. (Шанхай, Китай). Клетки RAW 264.7 были получены из Китайского центра коллекции типовых культур (Ухань, провинция Хубэй, Китай). Эмбриональная бычья сыворотка, среда DMEM с высоким содержанием глюкозы, трипсин и концентрированная исходная смесь пенициллина и стрептомицина были приобретены у Gibco (Карлсбад, Калифорния, США).

Пример 6a. Нейтрализация свободных радикалов DPPHinvitro

Нейтрализацию свободных радикалов DPPH определяли спектрофотометрически после темновой реакции гибридов при комнатной температуре (5-50 мкг/мл) в течение 1 часа со стандартным раствором 0,4 ммоль/л дифенилпикрилгидразила в растворе этанола - 20 ммоль/л Трис. -HCl-буфер (рН 7,4) (объемное соотношение 2:1) при комнатной температуре в течение 30 мин. Концентрации тестируемых соединений, витамина С (Vc) в экспериментах составляла 5, 10, 30, 50 мкг/мл. Величину поглощения определяли при 517 нм, включая холостой контроль Ab и образцы As. Эффективность поглощения свободных радикалов DPPH вычисляли по следующей формуле:

Эффективность удаления свободных радикалов DPPH (%) = (Ab-As)/Ab×100%

Пример 6b Эксперименты по эффективности удаления NO методом Грисса.

Клетки RAW264.7 культивировали в среде DMEM с высоким содержанием глюкозы с добавлением 10% эмбриональной телячьей сыворотки и 1‰ по массе тетрагидрофурана при температуре 37°С, 5% СО2 и насыщенной влажности. Суспензию клеток высевали в 96-луночные планшеты в количестве 8 × 10⁴ клеток/100 мкл на лунку и культивировали в течение 24 часов. Клетки контрольной группы культивировали в среде, содержащей 0,1% ДМСО, и в группу стимуляции ЛПС добавляли ЛПС 1 мкг/мл, по сравнению с холостым контролем. Клетки обрабатывали 0,039, 1,56, 6,25, 25, 100 мкМ или 3,13, 6,25, 12,5, 25, 50 мкМ тестируемых соединений. После 24 часов введения проводили отбор 70 мклсупернатантакультуральной среды. Эффективность ингибирования экспрессии NO в каждом образце определяли в строгом соответствии с инструкциями набора для анализа оксида азота (NO) (кат. №: A013-2-1, Нанкинский институт биоинженерии Цзяньчэн, Нанкин, Цзянсу, Китай). Метод заключается в добавлении равных объемов реагента Грисса I и реагента Грисса II и определении оптической плотности при 540 нм с помощью устройства для считывания микропланшетов. Содержание NO рассчитывали по стандартной нитритной кривой. Рассчитывали эффективность ингибирования продукции NO в клетках RAW264.7 при различных концентрациях каждого соединения. Величину поглощения измеряли с помощью считывающего устройства MK3-Microplate Reader (LabSystems, Хельсинки, Финляндия).

Уровень ингибирования выработки NO (%) = (Показатель с воздействием ЛПС -показатель с ЛПС и введением соединений) / (Показатель с воздействием ЛПС - холостой контроль) × 100%.Данные представляют собой среднее ± SEM из 3 независимых экспериментов. Данные были проанализированы с использованием однофакторного дисперсионного анализа и критерия Даннета.

[1] V.R. Yadav, S. Prasad, B. Sung, R. Kannappan, B.B. Aggarwal, Targeting inflammatory pathways by triterpenoids for prevention and treatment of cancer, Toxins (Basel). 2 (2010) 2428-2466.

[2] N. Sultana, Z. Saeed Saify, Naturally occurring and synthetic agents as potential anti-inflammatory and immunomodulants, Anti-Inflamm. \& Anti-Allergy Agents Med. Chem. (Formerly Curr. Med. Chem. Anti-Allergy Agents). 11 (2012) 3-19.

[3] S. Quideau, D. Deffieux, C. Douat-Casassus, L. Pouységu, Plant polyphenols: chemical properties, biological activities, and synthesis, Angew. Chemie Int. Ed. 50 (2011) 586-621.

[4] L. Soundararajan, A. Dharmarajan, P. Samji, Regulation of pleiotropic physiological roles of nitric oxide signaling, Cell. Signal. (2022) 110496.

[5] R. Zamora, Y. Vodovotz, T.R. Billiar, Inducible nitric oxide synthase and inflammatory diseases, Mol. Med. 6 (2000) 347-373.

[6] E. Half, N. Arber, Colon cancer: preventive agents and the present status of chemoprevention, Expert Opin. Pharmacother. 10 (2009) 211-219.

[7] T.-Y. Zhang, C.-S. Li, L.-T. Cao, X.-Q. Bai, D.-H. Zhao, S.-M. Sun, New ursolic acid derivatives bearing 1, 2, 3-triazole moieties: design, synthesis and anti-inflammatory activity in vitro and in vivo, Mol. Divers. 26 (2022) 1129-1139.

[8] A. V Lipeeva, M.P. Dolgikh, T.G. Tolstikova, E.E. Shults, A Study of Plant Coumarins. 18. Conjugates of Coumarins with Lupane Triterpenoids and 1, 2, 3-Triazoles: Synthesis and Anti-Inflammatory Activity, Russ. J. Bioorganic Chem. 46 (2020) 125-132.

[9] M.K. Shanmugam, A.H. Nguyen, A.P. Kumar, B.K.H. Tan, G. Sethi, Targeted inhibition of tumor proliferation, survival, and metastasis by pentacyclic triterpenoids: potential role in prevention and therapy of cancer, Cancer Lett. 320 (2012) 158-170.

[10] J.A.R. Salvador, A.S. Leal, A.S. Valdeira, D.P.S. Alho, S.A.C. Figueiredo, S.M. Silvestre, V.I.S. Mendes, Oleanane-, ursane-, and quinone methide friedelane-type triterpenoid derivatives: Recent advances in cancer treatment, Eur. J. Med. Chem. 142 (2017) 95-130. https://doi.org/10.1016/j.ejmech.2017.07.013.

[11] M.N. Laszczyk, Pentacyclic triterpenes of the lupane, oleanane and ursane group as tools in cancer therapy, Planta Med. 75 (2009) 1549-1560.

[12] M.S. Yates, M. Tauchi, F. Katsuoka, K.C. Flanders, K.T. Liby, T. Honda, G.W. Gribble, D.A. Johnson, J.A. Johnson, N.C. Burton, others, Pharmacodynamic characterization of chemopreventive triterpenoids as exceptionally potent inducers of Nrf2-regulated genes, Mol. Cancer Ther. 6 (2007) 154-162.

[13] L. López-Hortas, P. Pérez-Larrán, E. Falqué, H. Dom\’\inguez, Recent developments on the extraction and application of ursolic acid. A review, Food Res. Int. 103 (2018) 130-149.

[14] K. Taguchi, H. Motohashi, M. Yamamoto, Molecular mechanisms of the Keap1--Nrf2 pathway in stress response and cancer evolution, Genes to Cells. 16 (2011) 123-140.

[15] R. Checker, S.K. Sandur, D. Sharma, R.S. Patwardhan, S. Jayakumar, V. Kohli, G. Sethi, B.B. Aggarwal, K.B. Sainis, Potent anti-inflammatory activity of ursolic acid, a triterpenoid antioxidant, is mediated through suppression of NF-kappaB, AP-1 and NF-AT, PLoS One. 7 (2012) e31318.

[16] S. Habtemariam, Antioxidant and Anti-inflammatory Mechanisms of Neuroprotection by Ursolic Acid: Addressing brain injury, cerebral ischemia, cognition deficit, anxiety, and depression, Oxid. Med. Cell. Longev. 2019 (2019). https://doi.org/10.1155/2019/8512048.

[17] E.L. Nguemfo, T. Dimo, A.B. Dongmo, A.G.B. Azebaze, K. Alaoui, A.E. Asongalem, Y. Cherrah, P. Kamtchouing, Anti-oxidative and anti-inflammatory activities of some isolated constituents from the stem bark of Allanblackia monticola Staner LC (Guttiferae), Inflammopharmacology. 17 (2009) 37-41.

[18] L.B. Correa, T.A. Pádua, L.N. Seito, T.E.M.M. Costa, M.A. Silva, A.L.P. Candéa, E.C. Rosas, M.G. Henriques, Anti-inflammatory effect of methyl gallate on experimental arthritis: inhibition of neutrophil recruitment, production of inflammatory mediators, and activation of macrophages, J. Nat. Prod. 79 (2016) 1554-1566.

[19] M.S. Dhingra, S. Dhingra, R. Chadha, T. Singh, M. Karan, Design, synthesis, physicochemical, and pharmacological evaluation of gallic acid esters as non-ulcerogenic and gastroprotective anti-inflammatory agents, Med. Chem. Res. 23 (2014) 4771-4788.

[20] F.H.A. Fernandes, H.R.N. Salgado, Gallic acid: review of the methods of determination and quantification, Crit. Rev. Anal. Chem. 46 (2016) 257-265.

[21] C.-S. Seo, S.-J. Jeong, S.-R. Yoo, N.-R. Lee, H.-K. Shin, Quantitative analysis and in vitro anti-inflammatory effects of gallic acid, ellagic acid, and quercetin from radix sanguisorbae, Pharmacogn. Mag. 12 (2016) 104-108.

[22] T.Y. Zhang, C.S. Li, L.T. Cao, X.Q. Bai, D.H. Zhao, S.M. Sun, New ursolic acid derivatives bearing 1,2,3-triazole moieties: design, synthesis and anti-inflammatory activity in vitro and in vivo, Mol. Divers. (2021). https://doi.org/10.1007/s11030-021-10236-0.

[23] C.W. Lee, N.H. Park, J.W. Kim, B.H. Um, A. V. Shpatov, E.E. Shults, I. V. Sorokina, S.A. Popov, Study of skin anti-ageing and anti-inflammatory effects of dihydroquercetin, natural triterpenoinds, and their synthetic derivatives1, Russ. J. Bioorganic Chem. 38 (2012) 328-334. https://doi.org/10.1134/S1068162012030028.

[24] S.A. Popov, M.D. Semenova, D.S. Baev, T.S. Frolova, M.A. Shestopalov, C. Wang, Z. Qi, E.E. Shults, M. Turks, Synthesis and cytotoxicity of hybrids of 1, 3, 4-or 1, 2, 5-oxadiazoles tethered from ursane and lupane core with 1, 2, 3-triazole, Steroids. 162 (2020) 108698.

[25] S.A. Popov, C. Wang, Z. Qi, E.E. Shults, M. Turks, Synthesis of water-soluble ester-linked ursolic acid--gallic acid hybrids with various hydrolytic stabilities, Synth. Commun. (2021) 2466-2477.

Claims (3)

1. Гибридные производные урсоловой и галловой кислот, содержащие 1,2,3-триазольные линкеры, 3-(2-(4-((3β-ацетоксиурс-12-ен)-28-иламинометил)-1H-1,2,3-триазол-1-ил)этокси)-4,5-метоксиметилендиокси)-бензоат 1а и 5-(((1-(2-(3β-ацетоксиурс-12-ен-28-оиламино)этил)-1Н-1,2,3-триазол-4-ил)метокси)карбонил)-1,2,3-тригидроксибензол 1b,
3. обладающие антиоксидантной и противовоспалительной активностью.