RU2799445C1

RU2799445C1 - Composition and method of treatment of multiple sclerosis

Info

Publication number: RU2799445C1
Application number: RU2022116264A
Authority: RU
Inventors: Таолэй СУНЬ
Original assignee: Ухань Васт Кондакт Саенс Фаундэйшн Ко., Лтд.
Filing date: 2019-12-27
Publication date: 2023-07-05

Abstract

FIELD: medicine, neurology, immunology and therapy.

SUBSTANCE: group of inventions is intended for the treatment of multiple sclerosis. A method of treating a subject suffering from multiple sclerosis includes administering a pharmaceutical composition containing a gold cluster (AuC). The said AuC contains a gold core and a ligand bound to the gold core. Also the use of a gold cluster (AuC) for the preparation of a medicament for the treatment of multiple sclerosis in a subject, wherein the said AuC contains a gold core and a ligand associated with the gold core is presented.

EFFECT: use of the group of inventions makes it possible to increase the effectiveness of the treatment of multiple sclerosis.

20 cl, 12 dwg, 3 tbl, 1 ex

Description

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕFIELD OF TECHNOLOGY TO WHICH THE INVENTION RELATES

1. Настоящее изобретение относится к области рассеянного склероза, в частности, к композиции и способам лечения рассеянного склероза.1. The present invention relates to the field of multiple sclerosis, in particular, to compositions and methods for the treatment of multiple sclerosis.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИBACKGROUND OF THE INVENTION

2. Рассеянный склероз (PC), представляющий собой "рубцовую ткань во множественных областях", является аутоиммунным заболеванием, при котором иммунная система атакует миелиновую оболочку, которая окружает и защищает нервные волокна центральной нервной системы (ЦНС), вызывая воспаление. Когда миелин или нервные волокна повреждены или разрушены при PC, повреждение областей ЦНС может вызывать множество неврологических симптомов, которые различаются у людей с PC по типу и тяжести. Существует четыре типа PC: клинически изолированный синдром (КИС), ремиттирующий рассеянный склероз (РРС), первично-прогрессирующий рассеянный склероз (ППРС) и вторично-прогрессирующий рассеянный склероз (ВПРС). Общие симптомы включают мышечную слабость, онемение и покалывание, симптом Лермитта, проблемы с мочевым пузырем, проблемы с кишечником, усталость, головокружение и вертиго, сексуальную дисфункцию, спастичность и мышечные спазмы, тремор, проблемы со зрением, изменения походки и подвижности, эмоциональные изменения и депрессию, проблемы с обучением и памятью, а также боль.2. Multiple sclerosis (MS), which is "scar tissue in multiple areas", is an autoimmune disease in which the immune system attacks the myelin sheath that surrounds and protects nerve fibers in the central nervous system (CNS), causing inflammation. When myelin or nerve fibers are damaged or destroyed in MS, damage to areas of the CNS can cause a variety of neurological symptoms that vary in type and severity in people with MS. There are four types of MS: clinically isolated syndrome (CIS), relapsing-remitting multiple sclerosis (RRMS), primary progressive multiple sclerosis (PPMS), and secondary progressive multiple sclerosis (SPMS). Common symptoms include muscle weakness, numbness and tingling, Lhermitte sign, bladder problems, bowel problems, fatigue, dizziness and vertigo, sexual dysfunction, spasticity and muscle spasms, tremors, vision problems, changes in gait and mobility, emotional changes and depression, learning and memory problems, and pain.

3. Причина возникновения PC неизвестна, но считается, что она связана с генетической предрасположенностью, нарушениями в иммунной системе и факторами окружающей среды, которые в совокупности провоцируют заболевание.3. The cause of MS is unknown, but it is thought to be related to genetic predisposition, immune system disorders, and environmental factors that combine to cause the disease.

4. В то время как доступные лекарства помогают замедлить прогрессировать, изменяя способ функционирования иммунной системы или облегчая симптомы во время внезапного обострения болезни, когда человек испытывает ухудшение симптомов, по-прежнему существует серьезная потребность в новых лекарствах и способах лечения PC.4. While available medications help slow progression by changing the way the immune system functions or alleviating symptoms during a flare-up when a person experiences worsening symptoms, there is still a strong need for new drugs and treatments for MS.

РАСКРЫТИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯDISCLOSURE OF THE INVENTION

5. Целью настоящего изобретения является создание фармацевтической композиции и способа для лечения рассеянного склероза у субъекта.5. The purpose of the present invention is to provide a pharmaceutical composition and method for the treatment of multiple sclerosis in a subject.

6. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения способ лечения субъекта с рассеянным склерозом включает введение фармацевтической композиции субъекту с рассеянным склерозом в эффективном количестве; где указанная фармацевтическая композиция содержит кластер золота (AuC); причем указанный AuC содержит золотое ядро; и лиганд, связанный с золотым ядром.6. In some embodiments of the present invention, a method of treating a subject with multiple sclerosis comprises administering a pharmaceutical composition to a subject with multiple sclerosis in an effective amount; where the specified pharmaceutical composition contains a cluster of gold (AuC); moreover, the specified AuC contains a gold core; and a ligand associated with a gold core.

7. В некоторых вариантах осуществления способа по настоящему изобретению золотое ядро имеет диаметр менее 3 нм. В некоторых вариантах осуществления способа золотое ядро имеет диаметр в интервале 0,5-2,6 нм.7. In some embodiments of the method of the present invention, the gold core has a diameter of less than 3 nm. In some embodiments of the method, the gold core has a diameter in the range of 0.5-2.6 nm.

8. В некоторых вариантах осуществления способа по настоящему изобретению лиганд представляет собой выбранный из группы, состоящей из L-цистеина и его производных, D-цистеина и его производных, цистеинсодержащих олигопептидов и их производных и других тиолсодержащих соединений.8. In some embodiments of the method of the present invention, the ligand is selected from the group consisting of L-cysteine and its derivatives, D-cysteine and its derivatives, cysteine-containing oligopeptides and their derivatives, and other thiol-containing compounds.

9. В некоторых вариантах осуществления способа по настоящему изобретению L-цистеин и его производные выбирают из группы, включающей L-цистеин, N-изобутирил-L-цистеин (L-NIBC) и N-ацетил-L-цистеин (L-NAC), и где D-цистеин и его производные выбирают из группы, содержащей D-цистеин, N-изобутирил-D-цистеин (D-NIBC) и N-ацетил-D-цистеин (D-NAC).9. In some embodiments of the method of the present invention, L-cysteine and its derivatives are selected from the group consisting of L-cysteine, N-isobutyryl-L-cysteine (L-NIBC) and N-acetyl-L-cysteine (L-NAC) , and where D-cysteine and its derivatives are selected from the group consisting of D-cysteine, N-isobutyryl-D-cysteine (D-NIBC) and N-acetyl-D-cysteine (D-NAC).

10. В некоторых вариантах осуществления способа по настоящему изобретению цистеинсодержащие олигопептиды и их производные представляют собой цистеинсодержащие дипептиды, цистеинсодержащие трипептиды или цистеинсодержащие тетрапептиды.10. In some embodiments of the method of the present invention, the cysteine-containing oligopeptides and derivatives thereof are cysteine-containing dipeptides, cysteine-containing tripeptides, or cysteine-containing tetrapeptides.

11. В некоторых вариантах осуществления способа по настоящему изобретению цистеинсодержащие дипептиды выбирают из группы, состоящей из L-цистеин-L-аргинин дипептида (CR), L-аргинин-L-цистеин дипептида (RC), L-гистидин-L-цистеин дипептида (НС) и L-цистеин-L-гистидин дипептида (СН).11. In some embodiments of the method of the present invention, the cysteine containing dipeptides are selected from the group consisting of L-cysteine-L-arginine dipeptide (CR), L-arginine-L-cysteine dipeptide (RC), L-histidine-L-cysteine dipeptide (HC) and L-cysteine-L-histidine dipeptide (CH).

12. В некоторых вариантах осуществления способа по настоящему изобретению цистеинсодержащие трипептиды выбирают из группы, состоящей из глицин-L-цистеин-L-аргинин трипептида (GCR), L-пролин-L-цистеин-L-аргинин трипептида (PCR), L-лизин-L-цистеин-L-пролин трипептида (KCP) и L-глутатиона (GSH).12. In some embodiments of the method of the present invention, the cysteine-containing tripeptides are selected from the group consisting of glycine-L-cysteine-L-arginine tripeptide (GCR), L-proline-L-cysteine-L-arginine tripeptide (PCR), L- lysine-L-cysteine-L-proline tripeptide (KCP) and L-glutathione (GSH).

13. В некоторых вариантах осуществления способа по настоящему изобретению цистеинсодержащие тетрапептиды выбирают из группы, состоящей из глицин-L-серин-L-цистеин-L-аргинин тетрапептида (GSCR) и глицин-L-цистеин-L-серин-L-аргинин тетрапептида (GCSR).13. In some embodiments of the method of the present invention, the cysteine-containing tetrapeptides are selected from the group consisting of glycine-L-serine-L-cysteine-L-arginine tetrapeptide (GSCR) and glycine-L-cysteine-L-serine-L-arginine tetrapeptide (GCSR).

14. В некоторых вариантах осуществления способа по настоящему изобретению другие тиолсодержащие соединения выбирают из группы, состоящей из 1-[(2S)-2-метил-3-тиол-1-оксопропил]-L-пролина, тиогликолевой кислоты, меркаптоэтанола, тиофенола, D-3-троловола, N-(2-меркаптопропионил)-глицина и додецилмеркаптана.14. In some embodiments of the method of the present invention, other thiol-containing compounds are selected from the group consisting of 1-[(2S)-2-methyl-3-thiol-1-oxopropyl]-L-proline, thioglycolic acid, mercaptoethanol, thiophenol, D-3-trololol, N-(2-mercaptopropionyl)-glycine and dodecylmercaptan.

15. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения используется кластер золота (AuC) для приготовления лекарственного средства для лечения рассеянного склероза у субъекта, где указанный AuC содержит золотое ядро; и лиганд, связанный с золотым ядром.15. In some embodiments, implementation of the present invention uses a gold cluster (AuC) for the preparation of a drug for the treatment of multiple sclerosis in a subject, where the specified AuC contains a gold core; and a ligand associated with a gold core.

16. В некоторых вариантах применения по настоящему изобретению золотое ядро имеет диаметр менее 3 нм. В некоторых вариантах применения золотое ядро имеет диаметр в интервале 0,5-2,6 нм.16. In some applications of the present invention, the gold core is less than 3 nm in diameter. In some applications, the gold core has a diameter in the range of 0.5-2.6 nm.

17. В некоторых вариантах применения по настоящему изобретению лиганд представляет собой выбранный из группы, состоящей из L-цистеина и его производных, D-цистеина и его производных, цистеинсодержащих олигопептидов и их производных и других тиолсодержащих соединений.17. In some embodiments of the present invention, the ligand is selected from the group consisting of L-cysteine and derivatives thereof, D-cysteine and derivatives thereof, cysteine-containing oligopeptides and derivatives thereof, and other thiol-containing compounds.

18. В некоторых вариантах применения по настоящему изобретению L-цистеин и его производные выбирают из группы, состоящей из L-цистеина, N-изобутирил-L-цистеина (L-NIBC) и N-ацетил-L-цистеина (L-NAC), и где D-цистеин и его производные выбирают из группы, состоящей из D-цистеина, N-изобутирил-D-цистеина (D-NIBC) и N-ацетил-D-цистеина (D-NAC).18. In some embodiments of the present invention, L-cysteine and its derivatives are selected from the group consisting of L-cysteine, N-isobutyryl-L-cysteine (L-NIBC) and N-acetyl-L-cysteine (L-NAC) , and where D-cysteine and its derivatives are selected from the group consisting of D-cysteine, N-isobutyryl-D-cysteine (D-NIBC) and N-acetyl-D-cysteine (D-NAC).

19. В некоторых вариантах применения по настоящему изобретению цистеинсодержащие олигопептиды и их производные представляют собой цистеинсодержащие дипептиды, цистеинсодержащие трипептиды или цистеинсодержащие тетрапептиды.19. In some embodiments of the present invention, the cysteine-containing oligopeptides and derivatives thereof are cysteine-containing dipeptides, cysteine-containing tripeptides, or cysteine-containing tetrapeptides.

20. В некоторых вариантах применения по настоящему изобретению цистеинсодержащие дипептиды выбирают из группы, состоящей из L-цистеин-L-аргинин дипептида (CR), L-аргинин-L-цистеин дипептида (RC), L-гистидин-L-цистеин дипептида (НС) и L-цистеин-L-гистидин дипептида (СН).20. In some embodiments of the present invention, the cysteine-containing dipeptides are selected from the group consisting of L-cysteine-L-arginine dipeptide (CR), L-arginine-L-cysteine dipeptide (RC), L-histidine-L-cysteine dipeptide ( HC) and L-cysteine-L-histidine dipeptide (CH).

21. В некоторых вариантах применения по настоящему изобретению цистеинсодержащие трипептиды выбирают из группы, состоящей из глицин-L-цистеин-L-аргинин трипептида (GCR), L-пролин-L-цистеин-L-аргинин трипептида (PCR), L-лизин-L-цистеин-L-пролин трипептида (KCP) и L-глутатиона (GSH).21. In some embodiments of the present invention, the cysteine-containing tripeptides are selected from the group consisting of glycine-L-cysteine-L-arginine tripeptide (GCR), L-proline-L-cysteine-L-arginine tripeptide (PCR), L-lysine -L-cysteine-L-proline tripeptide (KCP) and L-glutathione (GSH).

22. В некоторых вариантах применения по настоящему изобретению цистеинсодержащие тетрапептиды выбирают из группы, состоящей из глицин-L-серин-L-цистеин-L-аргинин тетрапептида (GSCR) и глицин-L-цистеин-L-серин-L-аргинин тетрапептида (GCSR).22. In some embodiments of the present invention, the cysteine-containing tetrapeptides are selected from the group consisting of glycine-L-serine-L-cysteine-L-arginine tetrapeptide (GSCR) and glycine-L-cysteine-L-serine-L-arginine tetrapeptide ( GCSR).

23. В некоторых вариантах применения по настоящему изобретению другие тиолсодержащие соединения выбирают из группы, состоящей из 1-[(2S)-2-метил-3-тиол-1-оксопропил]-L-пролина, тиогликолевой кислоты, меркаптоэтанола, тиофенола, D-3-троловола, N-(2-меркаптопропионил)-глицина и додецилмеркаптана.23. In some embodiments of the present invention, other thiol-containing compounds are selected from the group consisting of 1-[(2S)-2-methyl-3-thiol-1-oxopropyl]-L-proline, thioglycolic acid, mercaptoethanol, thiophenol, D -3-trololol, N-(2-mercaptopropionyl)-glycine and dodecylmercaptan.

24. Цели и преимущества изобретения станут очевидными из следующего подробного описания предпочтительных вариантов его осуществления и прилагаемых чертежей.24. The objects and advantages of the invention will become apparent from the following detailed description of preferred embodiments and the accompanying drawings.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙBRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS

25. Предпочтительные варианты осуществления в соответствии с настоящим изобретением далее будут раскрыты со ссылкой на фигуры, на которых ссылочные цифры обозначают конкретные элементы.25. Preferred embodiments in accordance with the present invention will now be described with reference to the figures, in which reference numerals denote specific elements.

26. На фиг. 1 показаны УФ-видимые области спектра, изображения полученные с помощью просвечивающего электронного микроскопа (ТЕМ) и диаграммы распределения частиц по размерам, модифицированных лигандом L-NIBC наночастиц золота (L-NIBC-AuNPs) с различными размерами частиц.26. In FIG. 1 shows UV-visible spectral regions, transmission electron microscope (TEM) images and particle size distribution diagrams of L-NIBC ligand-modified gold nanoparticles (L-NIBC-AuNPs) with various particle sizes.

27. На фиг. 2 показаны УФ-видимые области спектра, изображения полученные с помощью ТЕМ и диаграммы распределения частиц по размерам, связанных лигандом L-NIBC кластеров золота (L-NIBC-AuCs) с различными размерами частиц.27. In FIG. 2 shows UV-visible spectral regions, TEM images and particle size distribution diagrams of L-NIBC ligand-bound gold clusters (L-NIBC-AuCs) with different particle sizes.

28. На фиг. 3 показаны инфракрасные области спектра L-NIBC-AuCs с различными размерами частиц.28. In FIG. 3 shows the infrared spectrum of L-NIBC-AuCs with different particle sizes.

29. На фиг. 4 показаны УФ-видимые области спектра, инфракрасные области спектра, изображения полученные с помощью ТЕМ и диаграммы распределения частиц по размерам, связанных CR-лигандом кластеров золота (CR-AuCs).29. In FIG. 4 shows UV-visible, infrared, TEM images and particle size distribution plots of CR-ligand bound gold clusters (CR-AuCs).

30. На фиг. 5 показаны УФ-видимые области спектра, инфракрасные области спектра, изображения полученные с помощью ТЕМ и диаграммы распределения частиц по размерам, связанных RC-лигандом кластеров золота (RC-AuCs).30. In FIG. 5 shows UV-visible, infrared, TEM images and particle size distribution plots of RC-ligand bound gold clusters (RC-AuCs).

31. На фиг. 6 показаны УФ-видимые области спектра, инфракрасные области спектра, изображения полученные с помощью ТЕМ и диаграммы распределения частиц по размерам, связанных лигандом 1-[(2S)-2-метил-3-тиол-1-оксопропил]-L-пролина (т.е. Сар) кластеров золота (Cap-AuCs).31. In FIG. 6 shows UV-visible, infrared, TEM images and size distributions of particles bound by ligand 1-[(2S)-2-methyl-3-thiol-1-oxopropyl]-L-proline ( i.e. Cap) gold clusters (Cap-AuCs).

32. На фиг. 7 показаны УФ-видимые области спектра, инфракрасные области спектра, изображения полученные с помощью ТЕМ и диаграммы распределения частиц по размерам, связанных лигандом GSH кластеров золота (GSH-AuCs).32. In FIG. 7 shows UV-visible, infrared, TEM images and particle size distribution plots of GSH-ligand bound gold clusters (GSH-AuCs).

33. На фиг. 8 показаны УФ-видимые области спектра, инфракрасные области спектра, изображения полученные с помощью ТЕМ и диаграммы распределения частиц по размерам, связанных лигандом D-NIBC кластеров золота (D-NIBC-AuCs).33. In FIG. 8 shows UV-visible, infrared, TEM images, and particle size distribution plots of D-NIBC ligand-bound gold clusters (D-NIBC-AuCs).

34. На фиг. 9 показаны УФ-видимые области спектра, инфракрасные области спектра, изображения полученные с помощью ТЕМ и диаграммы распределения частиц по размерам, связанных лигандом L-цистеином кластеров золота (L-Cys-AuCs).34. In FIG. 9 shows UV-visible, infrared, TEM images, and particle size distribution plots of L-cysteine ligand-bound gold clusters (L-Cys-AuCs).

35. На фиг. 10 представлен график, показывающий клинические показатели ЕАЕ.35. In FIG. 10 is a graph showing the clinical performance of EAE.

36. На фиг. 11 показаны уровни (a) TNF-α, (b) IL-17 и (с) IFN-γ в спинном мозге, где 1 обозначает «наивную» группу, 2 обозначает группу, получавшую физиологический раствор, 3 обозначает группу, получавшую преднизон, 4 обозначает группу, получавшую 50 мг/кг L-Cys-AuCs, 5 обозначает группу, получавшую 20 мг/кг L-Cys-AuCs, и 6 обозначает группу, получавшую 5 мг/кг L-Cys-AuCs.36. In FIG. 11 shows the levels of (a) TNF-α, (b) IL-17 and (c) IFN-γ in the spinal cord, where 1 denotes the "naive" group, 2 denotes the saline treated group, 3 denotes the prednisone treated group, 4 denotes the group treated with 50 mg/kg L-Cys-AuCs, 5 denotes the group treated with 20 mg/kg L-Cys-AuCs, and 6 denotes the group treated with 5 mg/kg L-Cys-AuCs.

37. На фиг. 12 показаны (а) изображения окрашивания спинного мозга методом с использованием красителей гематоксилина и эозина (НЕ), показывающие инфильтрацию иммунных клеток в спинной мозг, и (b) гистограмма, показывающая гистологические масштабы воспаления; где 1 обозначает «наивную» группу, 2 обозначает группу, получавшую физиологический раствор, 3 обозначает группу, получавшую преднизон, 4 обозначает группу, получавшую 50 мг/кг L-Cys-AuCs, 5 обозначает группу, получавшую 20 мг/кг L-Cys-AuCs, и 6 обозначает группу, получавшую 5 мг/кг L-Cys-AuCs.37. In FIG. 12 shows (a) hematoxylin and eosin (HE) staining images of the spinal cord showing infiltration of immune cells into the spinal cord, and (b) a histogram showing the histological extent of inflammation; where 1 denotes the "naive" group, 2 denotes the group treated with saline, 3 denotes the group treated with prednisone, 4 denotes the group treated with 50 mg/kg L-Cys-AuCs, 5 denotes the group treated with 20 mg/kg L-Cys -AuCs, and 6 represents the group receiving 5 mg/kg L-Cys-AuCs.

ОСУЩЕСТВЛЕНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯIMPLEMENTATION OF THE INVENTION

38. Следующее подробное описание некоторых вариантов осуществления изобретения даст возможность лучше понять настоящее изобретение.38. The following detailed description of some embodiments of the invention will enable a better understanding of the present invention.

39. По всему тексту данной заявки, где есть ссылки на публикации, полные описания этих публикаций включены в эту заявку в виде ссылок, для более полного раскрытия уровня техники, к которому относится данное изобретение.39. Throughout the text of this application, where there are references to publications, the full descriptions of these publications are included in this application by reference, for a more complete disclosure of the prior art to which this invention pertains.

40. Кластеры золота (AuCs) - это особая форма золота, существующая между атомами золота и наночастицами золота. AuCs имеют размер менее 3 нм и состоят из атомов золота в количестве от всего нескольких до нескольких сотен, что приводит к разрушению гранецентрированной кубической структуры укладки наночастиц золота. В результате AuCs демонстрируют молекулоподобные дискретные электронные структуры с отчетливым HOMO-LUMO-зазором, в отличие от непрерывных или квазинепрерывных энергетических уровней наночастиц золота. Это приводит к исчезновению эффекта поверхностного плазмонного резонанса и соответствующей полосы поглощения плазмонного резонанса (520±20 нм) в УФ-видимой области спектра, которой обладают обычные наночастицы золота.40. Gold clusters (AuCs) are a special form of gold that exists between gold atoms and gold nanoparticles. AuCs are less than 3 nm in size and consist of only a few to several hundred gold atoms, which leads to the destruction of the face-centered cubic structure of the stacking of gold nanoparticles. As a result, AuCs exhibit molecular-like discrete electronic structures with a distinct HOMO-LUMO gap, in contrast to the continuous or quasi-continuous energy levels of gold nanoparticles. This leads to the disappearance of the surface plasmon resonance effect and the corresponding plasmon resonance absorption band (520 ± 20 nm) in the UV-visible region of the spectrum, which ordinary gold nanoparticles have.

41. В настоящем изобретении представлен AuC, связанный лигандами.41. The present invention provides ligand bound AuC.

42. В некоторых вариантах осуществления изобретения AuC, связанный с лигандами, содержит лиганд и золотое ядро, где лиганд связан с золотым ядром. В некоторых вариантах осуществления изобретения диаметр золотого ядра находится в интервале 0,5-3 нм. В некоторых вариантах осуществления изобретения диаметр золотого ядра находится в интервале 0,5-2,6 нм.42. In some embodiments, the ligand-bound AuC comprises a ligand and a gold core, where the ligand is bound to the gold core. In some embodiments of the invention, the diameter of the gold core is in the range of 0.5-3 nm. In some embodiments of the invention, the diameter of the gold core is in the range of 0.5-2.6 nm.

43. В некоторых вариантах осуществления изобретения лиганд AuC, связанного с лигандами, представляет собой тиолсодержащее соединение или олигопептид. В некоторых вариантах лиганд связывается с золотым ядром с образованием связанного лигандами AuC через связь Au-S.43. In some embodiments, the ligand of the ligand-bound AuC is a thiol-containing compound or an oligopeptide. In some embodiments, the ligand binds to the gold core to form ligand-bound AuC via an Au-S bond.

44. В некоторых вариантах осуществления изобретения лиганд представляет собой, но не ограничивается, L-цистеин, D-цистеин или производное цистеина. В некоторых вариантах осуществления изобретения производным цистеина является N-изобутирил-L-цистеин (L-NIBC), N-изобутирил-D-цистеин (D-NIBC), N-ацетил-L-цистеин (L-NAC) или N-ацетил-D-цистеин (D-NAC).44. In some embodiments, the ligand is, but is not limited to, L-cysteine, D-cysteine, or a cysteine derivative. In some embodiments, the cysteine derivative is N-isobutyryl-L-cysteine (L-NIBC), N-isobutyryl-D-cysteine (D-NIBC), N-acetyl-L-cysteine (L-NAC), or N-acetyl -D-cysteine (D-NAC).

45. В некоторых вариантах осуществления изобретения лиганд представляет собой, но не ограничивается, цистеинсодержащий олигопептид и его производные. В некоторых вариантах осуществления изобретения цистеинсодержащий олигопептид представляет собой цистеинсодержащий дипептид. В некоторых вариантах осуществления изобретения цистеинсодержащий дипептид представляет собой L-цистеин-L-аргинин дипептид (CR), L-аргинин-L-цистеин дипептид (RC) или L-цистеин-L-гистидин дипептид (СН). В некоторых вариантах осуществления изобретения цистеинсодержащий олигопептид представляет собой цистеинсодержащий трипептид. В некоторых вариантах осуществления изобретения цистеинсодержащий трипептид представляет собой глицин-L-цистеин-L-аргинин трипептид (GCR), L-пролин-L-цистеин-L-аргинин трипептид (PCR) или L-глутатион (GSH). В некоторых вариантах осуществления изобретения цистеинсодержащий олигопептид представляет собой цистеинсодержащий тетрапептид. В некоторых вариантах осуществления изобретения цистеинсодержащий тетрапептид представляет собой глицин-L-серин-L-цистеин-L-аргинин тетрапептид (GSCR) или глицин-L-цистеин-L-серин-L-аргинин тетрапептид (GCSR).45. In some embodiments, the ligand is, but is not limited to, a cysteine-containing oligopeptide and derivatives thereof. In some embodiments, the cysteine-containing oligopeptide is a cysteine-containing dipeptide. In some embodiments, the cysteine-containing dipeptide is L-cysteine-L-arginine dipeptide (CR), L-arginine-L-cysteine dipeptide (RC), or L-cysteine-L-histidine dipeptide (CH). In some embodiments, the cysteine-containing oligopeptide is a cysteine-containing tripeptide. In some embodiments, the cysteine-containing tripeptide is a glycine-L-cysteine-L-arginine tripeptide (GCR), L-proline-L-cysteine-L-arginine tripeptide (PCR), or L-glutathione (GSH). In some embodiments, the cysteine-containing oligopeptide is a cysteine-containing tetrapeptide. In some embodiments, the cysteine-containing tetrapeptide is glycine-L-serine-L-cysteine-L-arginine tetrapeptide (GSCR) or glycine-L-cysteine-L-serine-L-arginine tetrapeptide (GCSR).

46. В некоторых вариантах осуществления изобретения лиганд представляет собой тиолсодержащее соединение. В некоторых вариантах тиолсодержащее соединение представляет собой 1-[(2S)-2-метил-3-тиол-1-оксопропил]-L-пролин, тиогликолевую кислоту меркаптоэтанол, тиофенол, D-3-троловол или додецилмеркаптан.46. In some embodiments, the ligand is a thiol-containing compound. In some embodiments, the thiol-containing compound is 1-[(2S)-2-methyl-3-thiol-1-oxopropyl]-L-proline, thioglycolic acid, mercaptoethanol, thiophenol, D-3-trololol, or dodecylmercaptan.

47. Настоящее изобретение раскрывает фармацевтическую композицию для лечения рассеянного склероза у субъекта. В некоторых вариантах осуществления изобретения субъектом является человек. В некоторых вариантах осуществления изобретения субъектом является домашнее животное, такое как собака.47. The present invention discloses a pharmaceutical composition for the treatment of multiple sclerosis in a subject. In some embodiments of the invention, the subject is a human. In some embodiments, the subject is a pet, such as a dog.

48. В некоторых вариантах осуществления изобретения фармацевтическая композиция содержит AuC, связанный с лигандами, как описано выше, и фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество. В некоторых вариантах осуществления изобретения вспомогательным веществом является фосфатно-буферный раствор или физиологический раствор.48. In some embodiments of the invention, the pharmaceutical composition contains AuC associated with ligands, as described above, and a pharmaceutically acceptable excipient. In some embodiments, the excipient is phosphate buffered saline or saline.

49. Настоящее изобретение раскрывает применение описанных выше AuCs, связанных лигандами, для приготовления лекарственного средства для лечения рассеянного склероза у субъекта.49. The present invention discloses the use of the ligand-linked AuCs described above for the preparation of a medicament for the treatment of multiple sclerosis in a subject.

50. Настоящее изобретение раскрывает применение описанных выше AuCs, связанных лигандами, для лечения рассеянного склероза у субъекта, или способ лечения рассеянного склероза у субъекта с применением описанных выше AuCs, связанных лигандами. В некоторых вариантах осуществления изобретения способ лечения включает введение субъекту фармацевтически эффективного количества AuCs, связанных лигандами. Фармацевтически эффективное количество может быть установлено с помощью обычных исследований in vivo.50. The present invention discloses the use of the ligand-bound AuCs described above for the treatment of multiple sclerosis in a subject, or a method of treating multiple sclerosis in a subject using the ligand-bound AuCs described above. In some embodiments, the method of treatment comprises administering to a subject a pharmaceutically effective amount of ligand-bound AuCs. A pharmaceutically effective amount can be determined using routine in vivo studies.

51. Следующие примеры приведены с единственной целью проиллюстрировать принципы настоящего изобретения; они никоим образом не ограничивают объем настоящего изобретения.51. The following examples are given for the sole purpose of illustrating the principles of the present invention; they do not limit the scope of the present invention in any way.

52. Примеры52. Examples

53. 1. Получение AuCs, связанных лигандами53. 1. Preparation of AuCs bound by ligands

54. 1.1 Растворяют HAuCl₄ в метаноле, воде, этаноле, n-пропаноле или этилацетате для получения раствора А, где концентрация HAuCl₄ составляет 0,01~0,03М;54. 1.1 Dissolve HAuCl ₄ in methanol, water, ethanol, n-propanol or ethyl acetate to obtain solution A, where the concentration of HAuCl ₄ is 0.01~0.03M;

55. 1.2 Растворяют лиганд с помощью растворителя для получения раствора В, где концентрация лиганда составляет 0,01~0,18М; лиганд включает, но не ограничивается, L-цистеин, D-цистеин и другие производные цистеина, такие как N-изобутирил-L-цистеин (L-NIBC), N-изобутирил-D-цистеин (D-NIBC), N-ацетил-L-цистеин (L-NAC), и N-ацетил-D-цистеин (D-NAC), цистеинсодержащие олигопептиды и их производные, включая, но не ограничиваясь, дипептиды, трипептиды, тетрапептиды и другие цистеинсодержащие пептиды, такие как L-цистеин-L-аргинин дипептид (CR), L-аргинин-L-цистеин дипептид (RC), L-цистеин L-гистидин дипептид (СН), глицин-L-цистеин-L-аргинин трипептид (GCR), L-пролин-L-цистеин-L-аргинин трипептид (PCR), L-глутатион (GSH), глицин-L-серин-L-цистеин-L-аргинин тетрапептид (GSCR) и глицин-L-цистеин-L-серин-L-аргинин тетрапептид (GCSR), и другие тиолсодержащие соединения, такие как одно или более, выбранные из 1-[(2S)-2-метил-3-тиол-1-оксопропил]-L-пролина, тиогликолевой кислоты, меркаптоэтанола, тиофенола, D-3-троловола и додецилмеркаптана; растворителем является один или более, выбранный из метанола, этилацетата, воды, этанола, n-пропанола, пентана, муравьиной кислоты, уксусной кислоты, диэтилового эфира, ацетона, анизола, 1-пропанола, 2-пропанола, 1-бутанола, 2-бутанола, пентанола, бутилацетата, трибутилметилового эфира, изопропилацетата, диметилсульфоксида, этилформиата, изобутилацетата, метилацетата, 2-метил-1-пропанолаи пропилацетата;55. 1.2 Dissolve the ligand with a solvent to obtain solution B, where the ligand concentration is 0.01~0.18M; ligand includes, but is not limited to, L-cysteine, D-cysteine and other cysteine derivatives such as N-isobutyryl-L-cysteine (L-NIBC), N-isobutyryl-D-cysteine (D-NIBC), N-acetyl -L-cysteine (L-NAC), and N-acetyl-D-cysteine (D-NAC), cysteine-containing oligopeptides and their derivatives, including, but not limited to, dipeptides, tripeptides, tetrapeptides, and other cysteine-containing peptides such as L- cysteine-L-arginine dipeptide (CR), L-arginine-L-cysteine dipeptide (RC), L-cysteine L-histidine dipeptide (CH), glycine-L-cysteine-L-arginine tripeptide (GCR), L-proline -L-cysteine-L-arginine tripeptide (PCR), L-glutathione (GSH), glycine-L-serine-L-cysteine-L-arginine tetrapeptide (GSCR) and glycine-L-cysteine-L-serine-L- arginine tetrapeptide (GCSR), and other thiol-containing compounds such as one or more selected from 1-[(2S)-2-methyl-3-thiol-1-oxopropyl]-L-proline, thioglycolic acid, mercaptoethanol, thiophenol, D-3-trololol and dodecylmercaptan; the solvent is one or more selected from methanol, ethyl acetate, water, ethanol, n-propanol, pentane, formic acid, acetic acid, diethyl ether, acetone, anisole, 1-propanol, 2-propanol, 1-butanol, 2-butanol , pentanol, butyl acetate, tributyl methyl ether, isopropyl acetate, dimethyl sulfoxide, ethyl formate, isobutyl acetate, methyl acetate, 2-methyl-1-propanol and propyl acetate;

56. 1.3 Смешивают раствор А и раствор В так, что мольное соотношение между HAuCl₄ и лигандом составляет 1:(0,01~100), перемешивают их на ледяной бане в течение 0,1~48 часов, добавляют 0,025~0,8 М раствора NaBH₄, этанола или метанола, продолжают перемешивать на водяной бане со льдом и проводят реакцию в течение 0,1~12 часов. Мольное соотношение между NaBH₄ и лигандом составляет 1:(0,01~100);56. 1.3 Mix solution A and solution B so that the mole ratio between HAuCl ₄ and ligand is 1:(0.01~100), stir them in an ice bath for 0.1~48 hours, add 0.025~0.8 M solution of NaBH ₄ , ethanol or methanol, continue to stir in an ice water bath and carry out the reaction for 0.1~12 hours. The molar ratio between NaBH ₄ and the ligand is 1:(0.01~100);

57. 1.4 Используют ультрафильтрационные пробирки 3K~30K MWCO для градиентного центрифугирования реакционного раствора при 8000~17500 об/мин в течение 10~100 мин после окончания реакции для получения осадка AuCs, связанного лигандами, с различными средними размерами частиц. Апертура фильтрующих мембран для ультрафильтрационных трубок различных пределов отсечения по молекулярной массе (MWCO) напрямую определяет размер AuCs, связанных лигандами, которые могут проходить через мембраны. Этот этап может быть при необходимости исключен;57. 1.4 Use 3K~30K MWCO ultrafiltration tubes to gradient centrifuge the reaction solution at 8000~17500 rpm for 10~100 min after the end of the reaction to obtain ligand-bound AuCs pellets with different average particle sizes. The aperture of filtration membranes for ultrafiltration tubes of various molecular weight cut-off (MWCO) directly determines the size of ligand-bound AuCs that can pass through the membranes. This step can be omitted if necessary;

58. 1.5 Растворяют осадок AuCs, связанных лигандами, с различными средними размерами частиц, полученный на этапе (1.4), в воде, помещая его в диализный мешок и подвергая его диализу в воде при комнатной температуре в течение 1~7 дней;58. 1.5 Dissolve the precipitate of ligand-bound AuCs with different average particle sizes obtained in step (1.4) in water by placing it in a dialysis bag and subjecting it to dialysis in water at room temperature for 1~7 days;

59. 1.6 Проводят лиофильную сушку AuCs, связанных лигандами, в течение 12~24 часов после диализа для получения порошкообразного или флокулянтного вещества, т.е. AuCs, связанных лигандами.59. 1.6 Freeze-dry AuCs bound by ligands for 12~24 hours after dialysis to obtain a powder or flocculating substance, i.e. AuCs bound by ligands.

60. Как было обнаружено, размер частиц порошкообразного или флокулирующего вещества, полученного вышеуказанным способом, составляет менее 3 нм (в основном в пределах 0,5-2,6 нм). Нет очевидного пика поглощения при 520 нм. Определено, что полученные порошок или хлопья представляют собой AuCs, связанные лигандами.60. The particle size of the powder or flocculating substance obtained by the above method was found to be less than 3 nm (generally in the range of 0.5-2.6 nm). There is no obvious absorption peak at 520 nm. It was determined that the resulting powder or flakes are AuCs bound by ligands.

61. 2. Получение и характеристика AuCs, связанных различными лигандами61. 2. Preparation and characterization of AuCs bound by various ligands

62. 2.1 Получение AuCs, связанных L-NIBC, т.е. L-NIBC-AuCs62. 2.1 Preparation of L-NIBC-bound AuCs, ie. L-NIBC-AuCs

63. На примере лиганда L-NIBC подробно описано получение и подтверждение AuCs, связанных лигандом L-NIBC.63. Using L-NIBC ligand as an example, the production and confirmation of AuCs bound by L-NIBC ligand is described in detail.

64. 2.1.1 Взвешивают 1,00 г HAuCl₄ и растворяют его в 100 мл метанола для получения 0,03 М раствора А;64. 2.1.1 Weigh out 1.00 g of HAuCl ₄ and dissolve it in 100 ml of methanol to obtain a 0.03 M solution A;

65. 2.1.2 Взвешивают 0,57 г L-NIBC и растворяют его в 100 мл ледяной уксусной кислоты (уксусной кислоты) для получения 0,03 М раствора В;65. 2.1.2 Weigh out 0.57 g of L-NIBC and dissolve it in 100 ml of glacial acetic acid (acetic acid) to obtain a 0.03 M solution B;

66. 2.1.3 Отмеряют 1 мл раствора А, смешивают его с 0,5 мл, 1 мл, 2 мл, 3 мл, 4 мл или 5 мл раствора В соответственно (т.е. мольное соотношение между HAuCl₄ и L-NIBC равно 1:0.5, 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5 соответственно), проводят реакцию на ледяной бане при перемешивании в течение 2 часов, быстро добавляют 1 мл свежеприготовленного 0,03 М (приготовленного путем взвешивания 11,3 мг NaBH₄ и растворения его в 10 мл этанола) этанольного раствора NaBH₄, когда раствор из ярко-желтого превратится в бесцветный, продолжают реакцию в течение 30 мин, далее после того как раствор приобретет темно-коричневый цвет, добавляют 10 мл ацетона для прекращения реакции.66. 2.1.3 Measure 1 ml of solution A, mix it with 0.5 ml, 1 ml, 2 ml, 3 ml, 4 ml or 5 ml of solution B, respectively (i.e. the molar ratio between HAuCl ₄ and L-NIBC equal to 1:0.5, 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, respectively), carry out the reaction in an ice bath with stirring for 2 hours, quickly add 1 ml of freshly prepared 0.03 M (prepared by weighing 11.3 mg of NaBH ₄ and dissolving it in 10 ml of ethanol) an ethanol solution of NaBH ₄ , when the solution turns from bright yellow to colorless, continue the reaction for 30 minutes, then after the solution becomes dark brown, add 10 ml of acetone to stop the reaction.

67. 2.1.4 После реакции реакционный раствор подвергают градиентному центрифугированию для получения порошка L-NIBC-AuCs с различными размерами частиц. Конкретный способ: после завершения реакции реакционный раствор переносят в ультрафильтрационную пробирку 30К MWCO объемом 50 мл и центрифугируют при 10000 об/мин в течение 20 мин, а ретентат во внутренней пробирке растворяют в сверхчистой воде для получения порошка с размером частиц около 2,6 нм. Затем смешанный раствор во внешней пробирке переносят в ультрафильтрационную пробирку 10К MWCO объемом 50 мл и центрифугируют при 13000 об/мин в течение 30 мин. Ретентат во внутренней трубке растворяют в сверхчистой воде для получения порошка с размером частиц около 1,8 нм. Затем смешанный раствор во внешней пробирке переносят в ультрафильтрационную пробирку 3K MWCO объемом 50 мл и центрифугируют при 17500 об/мин в течение 40 мин. Ретентат во внутренней трубке растворяют в сверхчистой воде для получения порошка с размером частиц около 1,1 нм.67. 2.1.4 After the reaction, the reaction solution is subjected to gradient centrifugation to obtain L-NIBC-AuCs powder with different particle sizes. Specific method: After completion of the reaction, the reaction solution is transferred into a 50 ml 30K MWCO ultrafiltration tube and centrifuged at 10,000 rpm for 20 minutes, and the retentate in the inner tube is dissolved in ultrapure water to obtain a powder with a particle size of about 2.6 nm. Then, the mixed solution in the outer tube was transferred to a 50 ml 10K MWCO ultrafiltration tube and centrifuged at 13,000 rpm for 30 minutes. The retentate in the inner tube is dissolved in ultrapure water to obtain a powder with a particle size of about 1.8 nm. Then, the mixed solution in the outer tube was transferred to a 50 ml 3K MWCO ultrafiltration tube and centrifuged at 17,500 rpm for 40 minutes. The retentate in the inner tube is dissolved in ultrapure water to obtain a powder with a particle size of about 1.1 nm.

68. 2.1.5 Осаждают порошок с тремя различными размерами частиц, полученный градиентным центрифугированием, удаляют растворитель, соответственно, высушивают сырой продукт N₂, растворяют его в 5 мл сверхчистой воды, помещают в диализный мешок (MWCO составляет 3 кДа), помещают диализный мешок в 2 л сверхчистой воды, меняют воду каждый последующий день, подвергают его диализу в течение 7 дней, высушивают посредством лиофилизации и сохраняют для дальнейшего использования.68. 2.1.5 Precipitate the powder with three different particle sizes obtained by gradient centrifugation, remove the solvent, respectively, dry the crude product with N ₂ , dissolve it in 5 ml of ultrapure water, put it in a dialysis bag (MWCO is 3 kDa), put the dialysis bag in 2 liters of ultrapure water, change the water every subsequent day, dialyze it for 7 days, freeze dry and save for later use.

69. 2.2 Определение характеристики L-NIBC-AuCs69. 2.2 Characterization of L-NIBC-AuCs

70. Эксперимент по определению характеристик был проведен в отношении порошка, полученного выше (L-NIBC-AuCs). Между тем, в качестве контроля используются модифицированные лигандом L-NIBC наночастицы золота (L-NIBC-AuNPs). Способ получения наночастиц золота, модифицированных лигандом, представляющим собой L-NIBC, относится к ссылке (W. Yan, L. Xu, С. Xu, W. Ma, H. Kuang, L. Wang и N.A. Kotov, Journal of the American Chemical Society 2012, 134, 15114; X. Yuan, B. Zhang, Z. Luo, Q. Yao, D.T. Leong, N. Yan and J. Xie, Angewandte Chemie International Edition 2014, 53, 4623).70. A characterization experiment was carried out on the powder prepared above (L-NIBC-AuCs). Meanwhile, L-NIBC ligand-modified gold nanoparticles (L-NIBC-AuNPs) are used as controls. A method for producing gold nanoparticles modified with a L-NIBC ligand is referred to in reference (W. Yan, L. Xu, C. Xu, W. Ma, H. Kuang, L. Wang, and N. A. Kotov, Journal of the American Chemical Society 2012, 134, 15114; X. Yuan, B. Zhang, Z. Luo, Q. Yao, D. T. Leong, N. Yan and J. Xie, Angewandte Chemie International Edition 2014, 53, 4623).

71. 2.2.1 Наблюдение за морфологией с помощью просвечивающего электронного микроскопа (ТЕМ)71. 2.2.1 Observation of morphology with a transmission electron microscope (TEM)

72. Тестовые порошки (образец L-NIBC-AuCs и образец L-NIBC-AuNPs) растворяли в сверхчистой воде до 2 мг/л, а затем способом висячей капли готовили тестовые образцы. Более конкретно, образцы объемом 5 мкл капали на ультратонкую углеродную пленку, где они испарялись естественным путем до полного исчезновения капли воды, а затем наблюдали за морфологией образцов с помощью ТЕМ высокого разрешения с полевой эмиссией JEM-2100F STEM/EDS.72. Test powders (sample L-NIBC-AuCs and sample L-NIBC-AuNPs) were dissolved in ultrapure water to 2 mg/l, and then test samples were prepared by hanging drop method. More specifically, 5 µl samples were dropped onto an ultrathin carbon film where they evaporated naturally until the water drop completely disappeared, and then the morphology of the samples was observed using a JEM-2100F STEM/EDS high resolution field emission TEM.

73. Четыре изображения L-NIBC-AuNPs, сделанных с помощью ТЕМ, показаны на снимках В, Е, Н и K на фиг. 1; три изображения L-NIBC-AuCs, сделанных с помощью ТЕМ, показаны на снимках В, Е и Н на фиг. 2.73. Four TEM images of L-NIBC-AuNPs are shown in images B, E, H, and K in FIG. 1; three TEM images of L-NIBC-AuCs are shown in panels B, E, and H in FIG. 2.

74. Изображения на фиг.2 показывают, что каждый из образцов L-NIBC-AuCs имеет однородный размер частиц и хорошую диспергируемость, а средний диаметр L-NIBC-AuCs (см. диаметр золотого ядра) составляет 1,1 нм, 1,8 нм и 2,6 нм соответственно, что хорошо согласуется с результатами на снимках С, F и I на фиг. 2. Для сравнения образцы L-NIBC-AuNPs имеют больший размер частиц. Их средний диаметр (см. диаметр золотого ядра) составляет 3,6 нм, 6,0 нм, 10,1 нм и 18,2 нм соответственно, что хорошо согласуется с результатами на снимках С, F, I и L на фиг. 1.74. The images in Figure 2 show that each of the L-NIBC-AuCs samples has a uniform particle size and good dispersibility, and the average diameter of L-NIBC-AuCs (see gold core diameter) is 1.1 nm, 1.8 nm and 2.6 nm, respectively, which is in good agreement with the results in pictures C, F, and I in FIG. 2. For comparison, samples of L-NIBC-AuNPs have a larger particle size. Their mean diameter (see gold core diameter) is 3.6 nm, 6.0 nm, 10.1 nm, and 18.2 nm, respectively, in good agreement with the results in images C, F, I, and L in FIG. 1.

75. 2.2.2 УФ-видимые спектры поглощения (UV-vis)75.2.2.2 UV-visible absorption spectra (UV-vis)

76. Тестируемые порошки (образец L-NIBC-AuCs и образец L-NIBC-AuNPs) растворяли в сверхчистой воде до концентрации 10 мг⋅л^-1, и УФ-видимые спектры поглощения измеряли при комнатной температуре. Диапазон сканирования составлял 190-1100 нм, ячейка для образца представляла собой стандартную кварцевую кювету с длиной оптического пути 1 см, а эталонная ячейка была заполнена сверхчистой водой.76. Test powders (sample L-NIBC-AuCs and sample L-NIBC-AuNPs) were dissolved in ultrapure water to a concentration of 10 mg l ^-1 and UV-visible absorption spectra were measured at room temperature. The scanning range was 190-1100 nm, the sample cell was a standard quartz cuvette with a 1 cm optical path length, and the reference cell was filled with ultrapure water.

77. УФ-видимые спектры поглощения четырех образцов L-NIBC-AuNPs различных размеров показаны на снимках A, D, G и J на фиг. 1, а статистическое распределение размера частиц показано на снимках С, F, I и L на фиг. 1; УФ-видимые спектры поглощения трех образцов L-NIBC-AuCs с различных размеров показаны на снимках A, D и G на фиг. 2, а статистическое распределение размеров частиц показано на снимках С, F и I на фиг. 2.77. UV-visible absorption spectra of four samples of L-NIBC-AuNPs of different sizes are shown in pictures A, D, G and J in FIG. 1, and the statistical distribution of particle size is shown in pictures C, F, I and L in FIG. 1; The UV-visible absorption spectra of three samples of L-NIBC-AuCs from different sizes are shown in pictures A, D and G in FIG. 2, and the statistical distribution of particle sizes is shown in pictures C, F and I in FIG. 2.

78. На фиг.1 показано, что из-за эффекта поверхностного плазмона L-NIBC-AuNPs имели пик поглощения около 520 нм. Положение пика поглощения зависит от размера частиц. Когда размер частиц составляет 3,6 нм, пик поглощения УФ-излучения возникает при 516 нм; когда размер частиц составляет 6,0 нм, пик поглощения УФ-излучения возникает при 517 нм; когда размер частиц составляет 10,1 нм, пик поглощения УФ-излучения возникает при 520 нм, а когда размер частиц составляет 18,2 нм, пик поглощения УФ-излучения возникает при 523 нм. Ни один из четырех образцов не имеет пика поглощения выше 560 нм.78. Figure 1 shows that, due to the surface plasmon effect, L-NIBC-AuNPs had an absorption peak around 520 nm. The position of the absorption peak depends on the particle size. When the particle size is 3.6 nm, the UV absorption peak occurs at 516 nm; when the particle size is 6.0 nm, the UV absorption peak occurs at 517 nm; when the particle size is 10.1 nm, the UV absorption peak occurs at 520 nm, and when the particle size is 18.2 nm, the UV absorption peak occurs at 523 nm. None of the four samples has an absorption peak above 560 nm.

79. На фиг. 2 показано, что в УФ-видимых спектрах поглощения трех образцов L-NIBC-AuCs с различными размерами частиц, пик поглощения эффекта поверхностного плазмона при 520 нм исчез, а два очевидных пика поглощения возникли выше 560 нм, и положение пиков поглощения незначительно менялось в зависимости от размеров частиц AuCs. Это связано с тем, что AuCs проявляют молекулоподобные свойства из-за разрушения гранецентрированной кубической структуры, что приводит к разрыву плотности состояний AuCs, расщеплению энергетического уровня, исчезновению эффекта плазмонного резонанса и возникновению нового пика поглощения в длинноволновом направлении. Можно сделать вывод, что все три образца порошка с различными размерами частиц, полученные выше, являются AuCs, связанными лигандами.79. In FIG. 2 shows that in the UV-visible absorption spectra of three L-NIBC-AuCs samples with different particle sizes, the absorption peak of the surface plasmon effect at 520 nm disappeared, and two obvious absorption peaks appeared above 560 nm, and the position of the absorption peaks changed slightly depending on on the particle size of AuCs. This is due to the fact that AuCs exhibit molecular-like properties due to the destruction of the face-centered cubic structure, which leads to a break in the density of states of AuCs, splitting of the energy level, disappearance of the plasmon resonance effect, and the appearance of a new absorption peak in the long-wavelength direction. It can be concluded that all three powder samples with different particle sizes obtained above are AuCs bound by ligands.

80. 2.2.3 Инфракрасная спектроскопия с преобразованием Фурье80. 2.2.3 Fourier transform infrared spectroscopy

81. Инфракрасные спектры измерялись на инфракрасном спектрометре с преобразованием Фурье VERTEX80V производства Bruker в режиме полного отражения плотного порошка в глубоком вакууме. Диапазон сканирования составляет 4000-400 см^-1, а количество сканирований - 64. В качестве примера были взяты образцы L-NIBC-AuCs, таким образом тестовые образцы представляли собой сухой порошок L-NIBC-AuCs с тремя различными размерами частиц, а контрольный образец представлял собой чистый порошок L-NIBC. Результаты показаны на фиг. 3.81. Infrared spectra were measured on a Bruker VERTEX80V Fourier Transform Infrared Spectrometer in high vacuum total reflection dense powder mode. The scan range is 4000-400 cm ^-1 and the number of scans is 64. Samples of L-NIBC-AuCs were taken as an example, so the test samples were L-NIBC-AuCs dry powder with three different particle sizes, and the control sample was pure L-NIBC powder. The results are shown in FIG. 3.

82. На фиг. 3 показан инфракрасный спектр L-NIBC-AuCs с различными размерами частиц. По сравнению с чистым L-NIBC (кривая внизу), все колебания растяжения S-Н L-NIBC-AuCs с различными размерами частиц полностью исчезли при 2500-2600 см^-1, в то время как другие характеристические пики L-NIBC все еще наблюдались, подтверждая, что молекулы L-NIBC были успешно связаны с поверхностью AuCs через связь Au-S. На фигуре также показано, что инфракрасный спектр AuCs, связанных лигандами, не имеет отношения к его размеру.82. In FIG. 3 shows the infrared spectrum of L-NIBC-AuCs with different particle sizes. Compared to pure L-NIBC (bottom curve), all S-H stretching variations of L-NIBC-AuCs with different particle sizes completely disappeared at 2500-2600 cm ^-1 , while other characteristic peaks of L-NIBC were still observed. , confirming that L-NIBC molecules were successfully bound to the surface of AuCs via an Au-S bond. The figure also shows that the infrared spectrum of AuCs bound by ligands is irrelevant to its size.

83. AuCs, связанные другими лигандами, получали способом, аналогичным вышеуказанному, за исключением того, что растворитель для раствора В, соотношение подачи между HAuCl₄ и лигандом, время реакции и количество добавляемого NaBH₄ были слегка скорректированы. Например: когда в качестве лиганда используют L-цистеин, D-цистеин, N-изобутирил-L-цистеин (L-NIBC) или N-изобутирил-D-цистеин (D-NIBC), в качестве растворителя выбирают уксусную кислоту; когда в качестве лиганда используют дипептид CR, дипептид RC или 1-[(2S)-2-метил-3-тиол-1-оксопропил]-L-пролин, в качестве растворителя выбирают воду, и так далее, и тому подобное; другие этапы аналогичны, поэтому никакой дополнительной информации здесь не приводится.83. AuCs bound by other ligands were prepared in the same manner as above, except that the solvent for solution B, the feed ratio between HAuCl ₄ and ligand, the reaction time, and the amount of NaBH ₄ added were slightly adjusted. For example: when L-cysteine, D-cysteine, N-isobutyryl-L-cysteine (L-NIBC) or N-isobutyryl-D-cysteine (D-NIBC) is used as the ligand, acetic acid is chosen as the solvent; when CR dipeptide, RC dipeptide or 1-[(2S)-2-methyl-3-thiol-1-oxopropyl]-L-proline is used as the ligand, water is selected as the solvent, and so on and so forth; the other steps are similar, so no further information is given here.

84. С помощью настоящего изобретения вышеуказанным способом был подготовлен и получен ряд AuCs, связанных лигандами. Лиганды и параметры процесса получения приведены в таблице 1.84. With the present invention, a series of ligand-bound AuCs was prepared and obtained by the above method. Ligands and production process parameters are shown in Table 1.

86. Образцы, перечисленные в таблице 1, подтверждены вышеуказанными способами. Характеристики пяти различных AuCs, связанных лигандами, показаны на фиг. 4 (CR-AuCs), на фиг. 5 (RC-AuCs), на фиг. 6 (Cap-AuCs) (Сар обозначает 1-[(2S)-2-метил-3-тиол-1-оксопропил]-L-пролин), на фиг. 7 (GSH-AuCs) и на фиг. 8 (D-NIBC-AuCs). На фигурах 4-8 показаны УФ-спектры (снимок А), инфракрасные спектры (снимок В), изображения полученные с помощью ТЕМ (снимок С) и распределение частиц по размерам (снимок D).86. The samples listed in Table 1 are confirmed by the above methods. The characteristics of five different ligand-bound AuCs are shown in FIG. 4 (CR-AuCs), in FIG. 5 (RC-AuCs), in FIG. 6 (Cap-AuCs) (Cap is 1-[(2S)-2-methyl-3-thiol-1-oxopropyl]-L-proline), FIG. 7 (GSH-AuCs) and in FIG. 8 (D-NIBC-AuCs). Figures 4-8 show UV spectra (Panel A), infrared spectra (Panel B), TEM images (Panel C) and particle size distribution (Panel D).

87. Результаты показывают, что все диаметры AuCs, связанных различными лигандами, полученными как показано в таблице 1, меньше 3 нм. УФ-спектры также показывают исчезновение пика при 520±20 нм и возникновение пика поглощения в других положениях. Положение пика поглощения может варьироваться в зависимости от лигандов и размеров частиц, а также структуры. В некоторых ситуациях не возникает характеристического пика поглощения, в основном из-за образования смесей AuCs с различными размерами частиц и структурами или определенных особых AuCs, которые перемещают положение пика поглощения за пределы диапазона УФ-видимой области спектра. Между тем, инфракрасные спектры с преобразованием Фурье также показывают исчезновение пика инфракрасного поглощения тиола лиганда (между пунктирными линиями на снимке В, фиг. 4-8), в то же время все другие характеристические инфракрасные пики сохраняются, что позволяет предположить, что все молекулы лиганда были успешно связаны с атомами золота с образованием AuCs, связанных лигандами, и, таким образом, в соответствии с настоящим изобретением были успешно получены AuCs, связанные лигандами, перечисленные в таблице 1.87. The results show that all the diameters of AuCs bound by various ligands, obtained as shown in Table 1, are less than 3 nm. The UV spectra also show the disappearance of the peak at 520±20 nm and the appearance of an absorption peak at other positions. The position of the absorption peak can vary depending on the ligands and particle sizes, as well as the structure. In some situations, there is no characteristic absorption peak, mainly due to the formation of mixtures of AuCs with different particle sizes and structures, or certain specific AuCs that move the position of the absorption peak outside the UV-visible spectral region. Meanwhile, the Fourier transform infrared spectra also show the disappearance of the ligand thiol infrared absorption peak (between the dotted lines in image B, Figs. 4-8), while all other characteristic infrared peaks are preserved, suggesting that all ligand molecules were successfully bonded to gold atoms to form the ligand-bound AuCs, and thus the ligand-bound AuCs listed in Table 1 were successfully produced in accordance with the present invention.

88. 3. Исследования на животных88. 3. Animal studies

89. 3.1 Материалы и животные89.3.1 Materials and animals

90. 3.1.1 Тестируемый образец90.3.1.1 Test item

91. В качестве тестируемого образца использовали L-Cys-AuCs с диаметром золотого ядра в интервале 0,5-1,5 нм (1,0±0,5 нм); способ получения соответствовал описанному выше с небольшими изменениями. На фиг. 9 показаны УФ-видимые области спектра, инфракрасные области спектра, изображения полученные с помощью ТЕМ и диаграммы распределения частиц по размерам, связанных лигандом L-цистеином кластеров золота (L-Cys-AuCs).91. L-Cys-AuCs with a gold core diameter in the range of 0.5-1.5 nm (1.0 ± 0.5 nm) was used as a test sample; the method of obtaining corresponded to that described above with minor changes. In FIG. 9 shows UV-visible, infrared, TEM images, and particle size distribution plots of L-cysteine ligand-bound gold clusters (L-Cys-AuCs).

92. 3.1.2 Положительный контрольный образец92. 3.1.2 Positive control sample

93. Преднизон (Shanghai Yuanye Biotechnology Co., Ltd).93. Prednisone (Shanghai Yuanye Biotechnology Co., Ltd).

94. 3.1.3 Состав дозы94. 3.1.3 Dose composition

95. Преднизон взвешивали в необходимом количестве и добавляли соответствующий объем физиологического раствора, осторожно перемешивали состав вихревым методом для обеспечения надлежащего перемешивания. L-Cys-AuCs взвешивали, добавляли соответствующий объем физиологического раствора и перемешивали вихревым методом для полного смешивания суспензии. Все соединения были свежеприготовленными и готовились ежедневно.95. Prednisone was weighed in the required amount and the appropriate volume of saline was added, the composition was gently mixed with a vortex method to ensure proper mixing. L-Cys-AuCs were weighed, an appropriate volume of saline was added and vortex mixed to completely mix the suspension. All compounds were freshly prepared and prepared daily.

96. 3.1.4 Животные для экспериментов96. 3.1.4 Experimental animals

97. Использовали самок мышей C57BL/6N в возрасте 7-9 недель. Животные содержались и за ними ухаживали в соответствии с правилами.97. Female C57BL/6N mice aged 7-9 weeks were used. Animals were kept and cared for in accordance with the rules.

99. 3.1.6 Процедуры99. 3.1.6 Procedures

100. На 0-й день мышей случайным образом группировали по массе тела, а затем вводили подкожно 200 мкг пептида миелинового олигодендроцитарного гликопротеина (MOG) в полном адъюванте Фрейнда (CFA) в правый и левый бок, по 100 мкл на каждый. Коклюшный токсин (РТХ) вводили внутрибрюшинно через 0 и 48 часов после иммунизации MOG. Соединения вводили с 1-го по 28-й день в соответствии с таблицей 2. Животных (10 мышей) ежедневно оценивали на наличие клинических признаков ЕАЕ. В конце экспериментов для НЕ-окрашивания (5 мышей) и анализа TNF-α, IL-17, IFN-γ с помощью набора Elisa использовали спинной мозг.100. On day 0, mice were randomly grouped by body weight and then injected subcutaneously with 200 μg of myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG) peptide in complete Freund's adjuvant (CFA) in the right and left flanks, 100 μl each. Pertussis toxin (PTX) was administered intraperitoneally 0 and 48 hours after MOG immunization. Compounds were administered from day 1 to day 28 according to Table 2. Animals (10 mice) were assessed daily for clinical signs of EAE. At the end of the experiments, the spinal cord was used for HE staining (5 mice) and TNF-α, IL-17, IFN-γ analysis with the Elisa kit.

101. 3.2 Результаты101. 3.2 Results

102. Животных ежедневно проверяли на наличие клинических признаков ЕАЕ в соответствии с рубрикой клинических оценок для группы ЕАЕ (таблица 3). Как показано на фиг.10, L-Cys-AuCs в дозах 50 мг/кг (50 mpK), 20 мг/кг (20 mpK) и 5 мг/кг (5mpK) предупреждали паралич у мышей группы ЕАЕ с 17-го дня; преднизон является положительным контролем, он способствовал значительному уменьшению клинических проявлений у группы ЕАЕ с 13-го дня.102. Animals were checked daily for the presence of clinical signs of EAE in accordance with the rubric of clinical assessments for the EAE group (table 3). As shown in Figure 10, L-Cys-AuCs at doses of 50 mg/kg (50 mpK), 20 mg/kg (20 mpK) and 5 mg/kg (5mpK) prevented paralysis in EAE mice from day 17 ; prednisone is a positive control, it contributed to a significant reduction in clinical manifestations in the EAE group from the 13th day.

104. Анализ TNF-α, IL-17 и IFN-γ в спинном мозге с помощью набора ELISA. TNF-α, IL-17 и IFN-γ являются индикаторами воспаления. L-Cys-AuCs в дозах 50 мг/кг, 20 мг/кг и 5 мг/кг способствовали значительному снижению выработки этих факторов воспаления у мышей с ЕАЕ (фиг. 11).104. Analysis of TNF-α, IL-17 and IFN-γ in the spinal cord using an ELISA kit. TNF-α, IL-17 and IFN-γ are indicators of inflammation. L-Cys-AuCs at 50 mg/kg, 20 mg/kg and 5 mg/kg significantly reduced the production of these inflammatory factors in EAE mice (FIG. 11).

105. НЕ-окрашивание спинного мозга использовали для изучения инфильтрации иммунных клеток в спинной мозг. Во время индукции ЕАЕ мононуклеарные воспалительные клетки проникают в спинной мозг, вызывая паралич у мышей с ЕАЕ, НЕ-окрашивание выявило значительное увеличение воспалительных клеток у мышей с ЕАЕ, а L-Cys-AuCs в дозах 50 мг/кг, 20 мг/кг и 5 мг/кг способствовали снижению инфильтрации иммунных клеток (фиг. 12(a)) и показали значительно более низкие гистологические масштабы воспаления (фиг. 12(b)).105. Non-staining of the spinal cord was used to study the infiltration of immune cells into the spinal cord. During EAE induction, mononuclear inflammatory cells invade the spinal cord causing paralysis in EAE mice, HE staining revealed a significant increase in inflammatory cells in EAE mice, and L-Cys-AuCs at doses of 50 mg/kg, 20 mg/kg and 5 mg/kg reduced immune cell infiltration (FIG. 12(a)) and showed significantly lower histological extent of inflammation (FIG. 12(b)).

106. L-Cys-AuCs другого размера и другие AuCs, связанные лигандами, различных размеров также оказывают влияние на ингибирование ЕАЕ, в то же время их влияние в определенной степени различается. Они не будут здесь подробно описаны.106. L-Cys-AuCs of a different size and other ligand-bound AuCs of different sizes also have an effect on EAE inhibition, while their effect differs to a certain extent. They will not be detailed here.

107. Промышленная применимость107. Industrial applicability

108. AuCs, связанные лигандами, могут применяться для лечения рассеянного склероза. Они подходят для промышленного применения.108. Ligand-bound AuCs can be used to treat multiple sclerosis. They are suitable for industrial applications.

Claims

1. A method of treating a subject suffering from multiple sclerosis, comprising:

administering the pharmaceutical composition to a subject with multiple sclerosis in an effective amount;

where the specified pharmaceutical composition contains a cluster of gold (AuC); wherein said AuC contains:

golden core; And

ligand bound to the gold core.

2. The method according to claim 1, wherein the gold core has a diameter of less than 3 nm.

3. The method according to claim 1, where the gold core has a diameter in the range of 0.5-2.6 nm.

4. The method of claim 1, wherein the ligand is selected from the group consisting of L-cysteine and derivatives thereof, D-cysteine and derivatives thereof, cysteine-containing oligopeptides and derivatives thereof, and other thiol-containing compounds.

5. The method of claim 4 wherein L-cysteine and its derivatives are selected from the group consisting of L-cysteine, N-isobutyryl-L-cysteine (L-NIBC) and N-acetyl-L-cysteine (L-NAC), and where D-cysteine and its derivatives are selected from the group consisting of D-cysteine, N-isobutyryl-D-cysteine (D-NIBC) and N-acetyl-D-cysteine (D-NAC).

6. The method of claim 4, wherein the cysteine-containing oligopeptides and their derivatives are cysteine-containing dipeptides, cysteine-containing tripeptides, or cysteine-containing tetrapeptides.

7. The method of claim 6 wherein the cysteine containing dipeptides are selected from the group consisting of L-cysteine-L-arginine dipeptide (CR), L-arginine-L-cysteine dipeptide (RC), L-histidine-L-cysteine dipeptide ( HC) and L-cysteine-L-histidine dipeptide (CH).

8. The method of claim 6 wherein the cysteine containing tripeptides are selected from the group consisting of glycine-L-cysteine-L-arginine tripeptide (GCR), L-proline-L-cysteine-L-arginine tripeptide (PCR), L-lysine -L-cysteine-L-proline tripeptide (KCP) and L-glutathione (GSH).

9. The method of claim 6, wherein the cysteine-containing tetrapeptides are selected from the group consisting of glycine-L-serine-L-cysteine-L-arginine tetrapeptide (GSCR) and glycine-L-cysteine-L-serine-L-arginine tetrapeptide ( GCSR).

10. The method according to claim 4, where other thiol-containing compounds are selected from the group containing 1-[(2S)-2-methyl-3-thiol-1-oxopropyl]-L-proline, thioglycolic acid, mercaptoethanol, thiophenol, D- 3-trololol, N-(2-mercaptopropionyl)-glycine and dodecylmercaptan.

11. Use of a gold cluster (AuC) for the preparation of a medicament for the treatment of multiple sclerosis in a subject, wherein said AuC contains:

- golden core; And

- ligand associated with the gold core.

12. Use according to claim 11, wherein the gold core has a diameter of less than 3 nm.

13. Use according to claim 11, wherein the gold core has a diameter in the range of 0.5-2.6 nm.

14. Use according to claim 11 wherein the ligand is selected from the group consisting of L-cysteine and derivatives thereof, D-cysteine and derivatives thereof, cysteine-containing oligopeptides and derivatives thereof, and other thiol-containing compounds.

15. Use according to claim 14 wherein L-cysteine and its derivatives are selected from the group consisting of L-cysteine, N-isobutyryl-L-cysteine (L-NIBC) and N-acetyl-L-cysteine (L-NAC) , and where D-cysteine and its derivatives are selected from the group consisting of D-cysteine, N-isobutyryl-D-cysteine (D-NIBC) and N-acetyl-D-cysteine (D-NAC).

16. Use according to claim 14, wherein the cysteine-containing oligopeptides and their derivatives are cysteine-containing dipeptides, cysteine-containing tripeptides, or cysteine-containing tetrapeptides.

17. Use according to claim 16 wherein the cysteine containing dipeptides are selected from the group consisting of L-cysteine-L-arginine dipeptide (CR), L-arginine-L-cysteine dipeptide (RC), L-histidine-L-cysteine dipeptide ( HC) and L-cysteine-L-histidine dipeptide (CH).

18. Use according to claim 16, wherein the cysteine-containing tripeptides are selected from the group consisting of glycine-L-cysteine-L-arginine tripeptide (GCR), L-proline-L-cysteine-L-arginine tripeptide (PCR), L-lysine -L-cysteine-L-proline tripeptide (KCP) and L-glutathione (GSH).

19. Use according to claim 16, wherein the cysteine-containing tetrapeptides are selected from the group consisting of glycine-L-serine-L-cysteine-L-arginine tetrapeptide (GSCR) and glycine-L-cysteine-L-serine-L-arginine tetrapeptide ( GCSR).

20. Use according to claim 14, wherein the other thiol-containing compounds are selected from the group consisting of 1-[(2S)-2-methyl-3-thiol-1-oxopropyl]-L-proline, thioglycolic acid, mercaptoethanol, thiophenol, D -3-trololol, N-(2-mercaptopropionyl)-glycine and dodecylmercaptan.