RU2799050C2 - Application of pulsatilla chinensis extract for obtaining a drug for the treatment of viral and/or bacterial diseases - Google Patents
Application of pulsatilla chinensis extract for obtaining a drug for the treatment of viral and/or bacterial diseases Download PDFInfo
- Publication number
- RU2799050C2 RU2799050C2 RU2020126266A RU2020126266A RU2799050C2 RU 2799050 C2 RU2799050 C2 RU 2799050C2 RU 2020126266 A RU2020126266 A RU 2020126266A RU 2020126266 A RU2020126266 A RU 2020126266A RU 2799050 C2 RU2799050 C2 RU 2799050C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- mastitis
- injection
- cows
- treatment
- pulsatilla
- Prior art date
Links
Images
Abstract
Description
Область техникиTechnical field
Настоящее изобретение относится к применению экстракта Pulsatilla Chinensis для получения лекарственного средства для лечения вирусных и/или бактериальных заболеваний.The present invention relates to the use of an extract of Pulsatilla Chinensis for the preparation of a medicament for the treatment of viral and/or bacterial diseases.
Уровень техникиState of the art
Pulsatilla Chinensis (Bge.) Regel представляет собой растение пульсатилла из семейства Ranunculaceae, основной лекарственной частью которого являются его высушенные корни. Самые ранние сведения о пульсатилле встречаются в "Shen Nong's Materia Medica". Она имеет горький вкус, охлаждающие свойства и поступает в желудок, почки и сечение толстой кишки. Основные функции пульсатиллы представляют собой детумесценцию, охлаждение крови, прекращение диареи, снижение внутреннего тепла и т.д. Пульсатиллу традиционно применяют для лечения бактериальной дизентерии, а также она обладает хорошими терапевтическими эффектами при симптомах озноба и лихорадки, отека и боли в глазах. Пульсатилла обладает разнообразным фармакологическим действием, в основном для улучшения способности организма распознавать инородное тело и противостоять ему, снижать скорость пролиферации опухолевых клеток, уменьшать количество патогенных микроорганизмов и эффективно ингибировать реакцию окисления свободных радикалов. Среди них наиболее перспективным применением является разработка новых противовоспалительных и противоопухолевых лекарственных средств.Pulsatilla Chinensis (Bge.) Regel is a pulsatilla plant from the Ranunculaceae family, the main medicinal part of which is its dried roots. The earliest information about pulsatilla is found in Shen Nong's Materia Medica. It has a bitter taste, cooling properties and enters the stomach, kidneys and colon section. The main functions of Pulsatilla are detumescence, cooling of the blood, cessation of diarrhea, reduction of internal heat, etc. Pulsatilla is traditionally used to treat bacillary dysentery, and it also has good therapeutic effects in the symptoms of chills and fever, swelling and pain in the eyes. Pulsatilla has a variety of pharmacological effects, mainly to improve the body's ability to recognize and resist foreign body, reduce the rate of tumor cell proliferation, reduce the number of pathogens, and effectively inhibit the oxidation reaction of free radicals. Among them, the most promising application is the development of new anti-inflammatory and anticancer drugs.
Feng Xiuzhi et al. изучал роль пульсатиллы в апоптозе клеток и полагал, что пульсатилла оказывает хорошее индукционное действие на клетки рака желудка. Кроме того, пролиферация раковых клеток и репликация ДНК связаны с активными ингредиентами пульсатиллы, которые могут подавлять рост клеток HL260 и ингибировать пролиферацию клеток рака груди (MCF-7), клеток рака легких (PG), клеток рака толстой кишки (SW480), клеток злокачественной глиомы (U87MG) и других опухолевых клеток путем индукции апоптоза. Li Wenchao et al. применил спиртовой экстракт пульсатиллы к различным патогенным бактериям и изучил антибактериальный эффект экстрактов на различных растворителях. Было обнаружено, что все эти экстракты обладают антибактериальным действием, хотя эффекты различаются.Feng Xiuzhi et al. studied the role of pulsatilla in cell apoptosis and believed that pulsatilla has a good induction effect on gastric cancer cells. In addition, cancer cell proliferation and DNA replication are associated with the active ingredients of pulsatilla, which can suppress the growth of HL260 cells and inhibit the proliferation of breast cancer cells (MCF-7), lung cancer cells (PG), colon cancer cells (SW480), malignant glioma (U87MG) and other tumor cells by inducing apoptosis. Li Wenchao et al. applied an alcoholic extract of Pulsatilla to various pathogenic bacteria and studied the antibacterial effect of the extracts in various solvents. All of these extracts have been found to have antibacterial activity, although the effects vary.
Мастит дойных коров является одной из трех основных болезней коров, признанных в мире. Он часто возникает в период лактации. Основной причиной его возникновения является патогенная микробная инфекция. Другие причины включают неправильное доение, механические повреждения, вызванные травмами, и повреждения, вызванные химическими реагентами. Мастит дойных коров не только влияет на производство молока и вызывает экономические потери, но также влияет на качество молока и вредит здоровью человека.Dairy cow mastitis is one of the three major cow diseases recognized worldwide. It often occurs during lactation. The main cause of its occurrence is a pathogenic microbial infection. Other causes include improper milking, mechanical damage caused by trauma, and damage caused by chemicals. Dairy cow mastitis not only affects milk production and causes economic loss, but also affects milk quality and harms human health.
Мастит дойных коров можно разделить на две основные категории: латентный мастит и клинический мастит. Клинический мастит проявляется явными клиническими симптомами и видимыми изменениями в молоке и может быть разделен на три степени в зависимости от степени начала: 1 степень: ненормальное молоко; 2 степень: ненормальное молоко, вымя становится горячим, болезненным и увеличенным; 3 степень: ненормальное молоко, вымя становится горячим, болезненным и увеличенным, у коров проявляются симптомы системной инфекции. Клинический мастит в настоящее время является основной целью лечения в клинической практике. При выявлении у коров клинического мастита необходимо изолирующее лечение. Латентный мастит, также известный как субклинический мастит, является наиболее распространенным типом мастита у дойных коров. Этот тип мастита обычно не имеет клинических симптомов, разницу между молоком при нем и нормальным молоком нельзя отличить невооруженным глазом, и для диагностики требуются лабораторные реактивы. Кроме того, если этот тип мастита не достигает определенной доли в стаде, его обычно не лечат. Из-за скрытой заболеваемости латентный мастит дойных коров вызывает очень серьезные экономические потери.Dairy cow mastitis can be divided into two main categories: latent mastitis and clinical mastitis. Clinical mastitis is manifested by clear clinical symptoms and visible changes in milk and can be divided into three grades depending on the degree of onset: Grade 1: abnormal milk; Grade 2: abnormal milk, udder becomes hot, painful and enlarged; Grade 3: abnormal milk, udder becomes hot, painful and enlarged, cows show symptoms of a systemic infection. Clinical mastitis is currently the main target of treatment in clinical practice. If clinical mastitis is detected in cows, isolation treatment is necessary. Latent mastitis, also known as subclinical mastitis, is the most common type of mastitis in dairy cows. This type of mastitis usually has no clinical symptoms, the difference between its milk and normal milk cannot be distinguished with the naked eye, and laboratory reagents are required for diagnosis. Also, if this type of mastitis does not reach a certain proportion in the herd, it is usually left untreated. Due to latent morbidity, latent mastitis in dairy cows causes very serious economic losses.
В настоящее время для лечения мастита дойных коров в основном применяют такие способы как инфузия в вымя и внутривенная инъекция, и применяемые терапевтические лекарственные средства представляют собой в основном антибиотики, такие как цефкином, энрофлоксацин, пенициллин, стрептомицин и тому подобные. Однако длительное применение антибиотиков имеет тенденцию вызывать устойчивость к лекарственным средствам и влияет на лечебный эффект; в то же время, когда для лечения применяют антибиотики, остатки антибиотиков легко загрязняют источники молока и представляют опасность для здоровья человека. Стоит отметить, что, если мастит является грамотрицательной бактериальной инфекцией, применение лактамных антибиотиков вызывает разрушение клеточной стенки и выделение эндотоксина, вызывая покраснение, отек, жар и боль во всей области вымени, что усугубит состояние. Поэтому очень важно найти безопасный и эффективный способ лечения мастита у дойных коров.At present, methods such as udder infusion and intravenous injection are mainly used to treat mastitis in dairy cows, and the therapeutic drugs used are mainly antibiotics such as cefkinome, enrofloxacin, penicillin, streptomycin and the like. However, long-term use of antibiotics tends to cause drug resistance and affect the treatment effect; at the same time, when antibiotics are used for treatment, antibiotic residues easily contaminate milk sources and pose a risk to human health. It is worth noting that if mastitis is a Gram-negative bacterial infection, the use of lactam antibiotics causes cell wall breakdown and endotoxin release, causing redness, swelling, heat, and pain throughout the udder area, which will aggravate the condition. Therefore, it is very important to find a safe and effective way to treat mastitis in dairy cows.
В настоящее время нет сведений о применении соединений согласно настоящему изобретению для лечения вирусного и/или бактериального мастита у дойных коров.There is currently no information on the use of the compounds according to the present invention for the treatment of viral and/or bacterial mastitis in dairy cows.
Краткое описание изобретенияBrief description of the invention
Для решения указанной выше технической проблемы в настоящем изобретении предложено применение соединения сапонина B4 пульсатиллы, представленного формулой I, или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства для лечения вирусных и/или бактериальных заболеваний:In order to solve the above technical problem, the present invention proposes the use of a pulsatilla saponin B4 compound represented by formula I, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, for the preparation of a medicament for the treatment of viral and/or bacterial diseases:
В дополнительном аспекте лекарственное средство представляет собой состав, полученный из вышеуказанного соединения сапонина B4 пульсатиллы или его фармацевтически приемлемой соли в качестве активного ингредиента и фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ.In a further aspect, the drug is a formulation derived from the above pulsatilla saponin B4 compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient and pharmaceutically acceptable excipients.
В дополнительном аспекте состав представляет собой инъекцию, интрамаммарную инфузию, порошок, мазь, лосьон; предпочтительно состав для инъекции, интрамаммарной инфузии; более предпочтительно состав представляет собой инъекцию.In an additional aspect, the composition is an injection, intramammary infusion, powder, ointment, lotion; preferably a formulation for injection, intramammary infusion; more preferably the composition is an injection.
В другом аспекте заболевание представляет собой мастит дойных коров.In another aspect, the disease is dairy cow mastitis.
В дополнительном аспекте мастит дойных коров представляет собой клинический мастит, латентный мастит.In a further aspect, dairy cow mastitis is clinical mastitis, latent mastitis.
В дополнительном аспекте клинический мастит представляет собой клинический мастит, который лечат впервые, стойкий клинический мастит, т.е. клинический мастит, который лечили в течение длительного времени, но не излечили.In a further aspect, the clinical mastitis is first-time treated clinical mastitis, persistent clinical mastitis, i. clinical mastitis that has been treated for a long time but not cured.
В настоящем изобретении также предложено лекарственное средство для лечения вирусных и/или бактериальных заболеваний, которое представляет собой состав, полученный из вышеуказанного соединения сапонина B4 пульсатиллы или его фармацевтически приемлемой соли в качестве активного ингредиента и фармацевтически приемлемых вспомогательных материалов.The present invention also provides a medicament for the treatment of viral and/or bacterial diseases, which is a composition obtained from the above pulsatilla saponin B4 compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient and pharmaceutically acceptable auxiliary materials.
В дополнительном аспекте состав представляет собой инъекцию, интрамаммарную инфузию, порошок, мазь, лосьон; предпочтительно состав представляет собой инъекцию, интрамаммарную инфузию; более предпочтительно состав представляет собой инъекцию.In an additional aspect, the composition is an injection, intramammary infusion, powder, ointment, lotion; preferably the composition is an injection, intramammary infusion; more preferably the composition is an injection.
В другом аспекте заболевание представляет собой мастит дойных коров.In another aspect, the disease is dairy cow mastitis.
В дополнительном аспекте мастит дойных коров представляет собой клинический мастит, латентный мастит; предпочтительно, клинический мастит представляет собой клинический мастит, который лечат впервые, стойкий клинический мастит.In an additional aspect, dairy cow mastitis is clinical mastitis, latent mastitis; preferably, the clinical mastitis is first-time treated clinical mastitis, persistent clinical mastitis.
Экстракт пульсатиллы, предложенный в настоящем изобретении, представляет собой соединение сапонин B4 пульсатиллы, и его название на английском языке представляет собой Анемозид B4. Его номер CAS 129741-57-7, молекулярная формула C59H96O26, молекулярная масса 1221,38, и он представляет собой белый кристаллический порошок.The Pulsatilla extract of the present invention is a Pulsatilla saponin B4 compound, and its English name is Anemoside B4. Its CAS number is 129741-57-7, molecular formula is C 59 H 96 O 26 , molecular weight is 1221.38, and it is a white crystalline powder.
В настоящее время для лечения мастита в основном применяют антибиотики. Среди них чаще применяют дезинфицирующие и повреждающие нуклеиновые кислоты клетки антибиотики широкого спектра действия. Во время лечения и через 4-5 дней после лечения молоко необходимо выбрасывать, что приводит к большим экономическим потерям для фермеров и риску возникновения лекарственной устойчивости. Сапонин B4 пульсатиллы представляет собой натуральный активный ингредиент, извлеченный из китайской лекарственной травы пульсатиллы, не является токсичным и не вызывает устойчивости к лекарственным средствам. Соединение сапонин B4 пульсатиллы согласно настоящему изобретению обладает сильной биологической активностью и превосходным терапевтическим эффектом при мастите дойных коров. Нет необходимости выбрасывать молоко во время лечения и в конце лечения, что не только снижает экономические потери фермеров, но и снижает риск возникновения лекарственной устойчивости. Кроме того, сапонин B4 пульсатиллы не только обладает превосходным терапевтическим эффектом при клиническом мастите, но также обладает превосходным терапевтическим эффектом при стойком клиническом мастите и латентном мастите. В то же время инъекция сапонина пульсатиллы обладает такими преимуществами, как безопасность, высокая эффективность, отсутствие остатков, отсутствие лекарственной устойчивости и отсутствие токсических и побочных эффектов при лечении мастита дойных коров.Currently, antibiotics are mainly used to treat mastitis. Among them, broad-spectrum antibiotics that disinfect and damage cell nucleic acids are more often used. During treatment and 4-5 days after treatment, milk must be discarded, resulting in large economic losses for farmers and the risk of drug resistance. Pulsatilla Saponin B4 is a natural active ingredient extracted from the Chinese medicinal herb Pulsatilla, is non-toxic and does not cause drug resistance. The pulsatilla saponin B4 compound of the present invention has a strong biological activity and an excellent therapeutic effect in dairy cow mastitis. There is no need to throw away milk during treatment and at the end of treatment, which not only reduces the economic loss to farmers, but also reduces the risk of drug resistance. In addition, pulsatilla saponin B4 not only has an excellent therapeutic effect in clinical mastitis, but also has an excellent therapeutic effect in persistent clinical mastitis and latent mastitis. At the same time, pulsatilla saponin injection has the advantages of safety, high efficacy, no residue, no drug resistance, and no toxic and side effects in the treatment of dairy cow mastitis.
Очевидно, что в соответствии с вышеуказанным содержанием настоящего изобретения, в соответствии с обычными техническими знаниями и традиционными техническими средствами в данной области техники, различные формы модификации, замены или изменения могут быть выполнены без отступления от вышеуказанной основной технической идеи настоящего изобретения.Obviously, in accordance with the above content of the present invention, in accordance with the usual technical knowledge and conventional technical means in the art, various forms of modification, replacement or change can be made without departing from the above basic technical idea of the present invention.
Вышеуказанное содержание настоящего изобретения будет дополнительно подробно описано ниже посредством конкретных вариантов реализации в форме примеров. Однако не следует толковать, что объем вышеуказанного предмета настоящего изобретения ограничивается следующими примерами. Все технологии, реализованные на основе вышеуказанного содержания настоящего изобретения, входят в объем настоящего изобретения.The above contents of the present invention will be further detailed below by way of specific embodiments in the form of examples. However, it should not be construed that the scope of the above subject matter of the present invention is limited by the following examples. All technologies implemented on the basis of the above content of the present invention are included in the scope of the present invention.
Краткое описание чертежейBrief description of the drawings
На фигуре 1 представлена стандартная кривая для определения содержания сапонина B4 пульсатиллы.The figure 1 shows the standard curve for determining the content of saponin B4 pulsatilla.
На фигуре 2 представлено сравнение молока коров, страдающих клиническим маститом, до и после лечения инъекцией сапонина B4 пульсатиллы.Figure 2 shows a comparison of milk from cows suffering from clinical mastitis before and after treatment with an injection of pulsatilla saponin B4.
На фигуре 3 представлено сравнение молока коров, страдающих клиническим маститом, до и после лечения инъекцией сапонина B4 пульсатиллы.3 shows a comparison of milk from cows suffering from clinical mastitis before and after treatment with pulsatilla saponin B4 injection.
На фигуре 4 показан результат лечения коровы №8558, которую лечили в течение длительного времени, но не вылечили.The figure 4 shows the result of treatment of cow No. 8558, which was treated for a long time, but not cured.
На фигуре 5 показан результат лечения коров с латентным маститом.The figure 5 shows the result of treatment of cows with latent mastitis.
Варианты реализацииImplementation Options
Пример 1. Получение соединения согласно настоящему изобретениюExample 1 Preparation of a compound according to the present invention
Отбирали 100 кг лекарственного материала пульсатиллы, добавляли 10-кратное количество 70% этанола и дважды экстрагировали путем нагревания и кипячения с обратным холодильником. Экстракт концентрировали при пониженном давлении при 75°C, центрифугировали при 4000 об/мин в течение 10 минут. Супернатант пропускали через колонку с полярной макропористой адсорбционной смолой, и затем последовательно элюировали водой, 30% этанолом и 70% этанолом. Фракцию, элюируемую 70% этанолом, концентрировали при пониженном давлении при 75°C, а затем сушили распылением с получением 3450 г общего экстракта сапонинов пульсатиллы. После растворения экстракта в воде и фильтрации фильтрат загружали в динамическую аксиальную препаративную хроматографическую систему 200 (заполненную 10 мкм ODS), элюировали 50% метанолом, соответствующий элюент собирали в соответствии с хроматографическим пиком, концентрировали при пониженном давлении и лиофилизировали с получением 1700 г сапонина B4 пульсатиллы.100 kg of pulsatilla drug material was withdrawn, 10 times 70% ethanol was added and extracted twice by heating and refluxing. The extract was concentrated under reduced pressure at 75°C, centrifuged at 4000 rpm for 10 minutes. The supernatant was passed through a polar macroporous adsorption resin column and then eluted successively with water, 30% ethanol and 70% ethanol. The fraction eluted with 70% ethanol was concentrated under reduced pressure at 75° C. and then spray dried to obtain 3450 g of the total extract of pulsatilla saponins. After dissolving the extract in water and filtering, the filtrate was loaded into a 200 dynamic axial preparative chromatography system (filled with 10 μm ODS), eluted with 50% methanol, the corresponding eluent was collected according to the chromatographic peak, concentrated under reduced pressure and lyophilized to obtain 1700 g of pulsatilla saponin B4 .
Пример 2. Определение содержания соединения согласно настоящему изобретениюExample 2 Determination of the content of the compound according to the present invention
1. Инструменты и реагенты1. Tools and reagents
Высокоэффективный жидкостный хроматограф Agilent 1260 и ультрафиолетовый детектор DAD были приобретены у Agilent Technologies (China) Co., Ltd., электронные аналитические весы BP211D были приобретены у немецкой компании Sartorius, а ультразвуковой очиститель с цифровым программным управлением KQ-400DB был приобретен у Kunshan Ultrasonic Instrument Co., Ltd.The Agilent 1260 high performance liquid chromatograph and DAD UV detector were purchased from Agilent Technologies (China) Co., Ltd., the BP211D electronic analytical balance was purchased from Sartorius of Germany, and the KQ-400DB CNC ultrasonic cleaner was purchased from Kunshan Ultrasonic Instrument Co.,Ltd.
Образец сапонина B4 пульсатиллы, приготовленный в примере 1.Pulsatilla saponin B4 sample prepared in Example 1.
Стандартное вещество сапонин B4 пульсатиллы (номер партии: 111766-201702, содержание: 94,7%) было приобретено в Национальном институте контроля пищевых продуктов и лекарственных средств.Pulsatilla saponin B4 reference material (batch number: 111766-201702, content: 94.7%) was purchased from the National Institute of Food and Drug Administration.
2. Условия хроматографии2. Chromatography conditions
Хроматографическая колонка: Sepax Bio-C18 (4,6×250 мм, 5 мкм); подвижная фаза: метанол-вода (64:36); длина волны детектирования: 201 нм; скорость потока: 1,0 мл/мин.Chromatographic column: Sepax Bio-C18 (4.6×250 mm, 5 µm); mobile phase: methanol-water (64:36); detection wavelength: 201 nm; flow rate: 1.0 ml/min.
3. Приготовление раствора стандартного вещества3. Preparation of a solution of a standard substance
Точно взвешивали необходимое количество стандартного вещества сапонина B4 пульсатиллы, помещали его в мерную колбу объемом 10 мл, добавляли подвижную фазу для растворения и доводили объем до метки, чтобы получить раствор стандартного вещества (содержащий 1 мг мл сапонина B4 пульсатиллы).Accurately weigh the required amount of Pulsatilla Saponin B4 standard, place it in a 10 ml volumetric flask, add mobile phase to dissolve, and make up to the mark to obtain a standard solution (containing 1 mg ml of Pulsatilla Saponin B4).
4. Приготовление раствора образца4. Preparation of the sample solution
Точно взвешивали 10 мг образца сапонина B4 пульсатиллы, полученного в примере 1, помещали его в мерную колбу на 10 мл, добавляли подвижную фазу для растворения и доводили объем до метки, чтобы получить раствор образца.A 10 mg sample of pulsatilla saponin B4 obtained in Example 1 was accurately weighed, placed in a 10 ml volumetric flask, mobile phase was added to dissolve, and the volume was adjusted to the mark to obtain a sample solution.
5. Определение5. Definition
Точно отмеряли по 20 мкл раствора стандарта и раствора образца, вводили их в жидкостной хроматограф, регистрировали хроматограмму и рассчитывали содержание в соответствии с методом внешнего стандарта.Accurately measured 20 μl of the standard solution and sample solution, introduced them into the liquid chromatograph, recorded the chromatogram, and calculated the content in accordance with the external standard method.
6. Кривая стандарта и уравнение линейной регрессии6. Standard Curve and Linear Regression Equation
Отбирали стандартное вещество сапонина B4 пульсатиллы, точно взвешивали и помещали его в мерную колбу на 10 мл, добавляли подвижную фазу для растворения, доводили объем до метки, чтобы приготовить растворы стандартного вещества с концентрацией примерно 1 мг/мл, 5 мг/мл, 10 мг/мл, 15 мг/мл и 20 мг/мл соответственно. Точно отмеряли 20 мкл каждого раствора, вводили его в жидкостный хроматограф и регистрировали хроматограмму.Pulsatilla saponin B4 standard was taken, weighed accurately and placed in a 10 ml volumetric flask, mobile phase was added to dissolve, the volume was adjusted to the mark to prepare solutions of the standard at a concentration of approximately 1 mg/mL, 5 mg/mL, 10 mg /ml, 15 mg/ml and 20 mg/ml, respectively. Accurately measured 20 μl of each solution, injected it into a liquid chromatograph and recorded the chromatogram.
Таблица 1. Уравнение линейной регрессии для определения содержания стандартного вещества сапонина B4 пульсатиллыTable 1. Linear regression equation for determining the content of the standard substance saponin B4 of pulsatilla
R=0,9999Y=100.07+10.721
R=0.9999
Из экспериментальных результатов видно, что сапонин B4 пульсатиллы имеет хорошую линейную зависимость в диапазоне концентраций 1,04-20,80 мг/мл, R = 0,9999 и подходит для определения содержания сапонина B4 пульсатиллы.From the experimental results, it can be seen that pulsatilla saponin B4 has a good linear relationship in the concentration range of 1.04-20.80 mg / ml, R = 0.9999, and is suitable for determining the content of pulsatilla saponin B4.
7. Определение содержания сапонина B4 пульсатиллы в образце7. Determination of Pulsatilla Saponin B4 Content in a Sample
В соответствии со способом, описанным в пункте «3» выше, точно взвешивали 2 части стандартного вещества сапонина B4 пульсатиллы, по 10 мг каждой, помещали его в мерную колбу на 10 мл, добавляли подвижную фазу для растворения и доводили объем до метки для получения стандартного раствора 1 и стандартного раствора 2.In accordance with the method described in paragraph "3" above, 2 parts of the standard substance of pulsatilla saponin B4, 10 mg each, were accurately weighed, placed in a 10 ml volumetric flask, the mobile phase was added to dissolve, and the volume was adjusted to the mark to obtain a standard solution 1 and standard solution 2.
В соответствии со способом, описанным в пункте «4» выше, точно взвешивали 2 части образца сапонина B4 пульсатиллы, по 10 мг каждой, помещали его в мерную колбу на 10 мл, добавляли подвижную фазу для растворения и доводили объем до метки для получения раствора образца 1 и раствора образца 2.In accordance with the method described in paragraph "4" above, 2 parts of a sample of pulsatilla saponin B4, 10 mg each, were accurately weighed, placed in a 10 ml volumetric flask, mobile phase was added to dissolve, and the volume was adjusted to the mark to obtain a sample solution 1 and sample solution 2.
В соответствии с указанными выше условиями хроматографии точно отмеряли 20 мкл каждого раствора, вводили его в жидкостный хроматограф и регистрировали хроматограмму.In accordance with the above chromatography conditions, 20 μl of each solution was accurately measured, injected into a liquid chromatograph, and a chromatogram was recorded.
Таблица 2. Результаты определения содержания сапонина B4 пульсатиллыTable 2. Results of determining the content of saponin B4 of pulsatilla
Согласно результатам испытаний, содержание сапонина B4 пульсатиллы, полученное в данном эксперименте, составило 99,4%.According to the test results, the content of Pulsatilla saponin B4 obtained in this experiment was 99.4%.
Пример 3. Получение инъекции сапонина B4 пульсатиллыExample 3 Preparation of Pulsatilla Saponin B4 Injection
1) Состав: 1000 мл раствора для инъекций, приготовленного из 50 г сапонина B4 пульсатиллы с водой.1) Composition: 1000 ml solution for injection prepared from 50 g of pulsatilla saponin B4 with water.
2) Способ получения: Взвешивали 50 г сапонина B4 пульсатиллы, полученного в примере 1, добавляли 800 мл воды для инъекций для его полного растворения, фильтровали, доводили pH до 7,0, добавляли воду для инъекций до объема 1000 мл, фильтровали на фильтре тонкой очистки, помещали в емкость, закрывали и стерилизовали при 100°С в течение 30 мин.2) Preparation method: Weighed 50 g of pulsatilla saponin B4 obtained in Example 1, added 800 ml of water for injection to completely dissolve it, filtered, adjusted pH to 7.0, added water for injection to a volume of 1000 ml, filtered on a fine filter cleaning, placed in a container, closed and sterilized at 100°C for 30 min.
Пример 4. Получение порошка сапонина B4 пульсатиллыExample 4 Preparation of Pulsatilla Saponin B4 Powder
1) Состав: 1000 г порошка получали из 1000 г сапонина B4 пульсатиллы.1) Composition: 1000 g of powder was obtained from 1000 g of pulsatilla saponin B4.
2) Способ получения: Взвешивали 1000 г сапонина B4 пульсатиллы, полученного в примере 1, измельчали в мелкий порошок, пропускали через сито 100 меш и хорошо перемешивали.2) Production method: 1000 g of pulsatilla saponin B4 obtained in Example 1 was weighed, ground into a fine powder, passed through a 100 mesh sieve, and mixed well.
Пример 5. Получение интрамаммарной инфузии сапонина B4 пульсатиллыExample 5 Preparation of Intramammary Infusion of Pulsatilla Saponin B4
1) Состав: 1000 мл интрамаммарной инфузии получали из 50 г сапонина B4 пульсатиллы.1) Composition: 1000 ml intramammary infusion was prepared from 50 g pulsatilla saponin B4.
2) Способ получения: Взвешивали 50 г сапонина B4 пульсатиллы, полученного в примере 1, добавляли 800 мл дистиллированной воды для его полного растворения, фильтровали, доводили pH до 7,0, добавляли дистиллированную воду до объема 1000 мл, фильтровали на фильтре тонкой очистки, помещали в емкость, закрывали, стерилизовали при 100°С в течение 30 мин.2) Production method: Weighed 50 g of pulsatilla saponin B4 obtained in example 1, added 800 ml of distilled water to completely dissolve it, filtered, adjusted the pH to 7.0, added distilled water to a volume of 1000 ml, filtered on a fine filter, placed in a container, closed, sterilized at 100°C for 30 min.
Благоприятные эффекты настоящего изобретения будут описаны ниже посредством экспериментальных примеров.The beneficial effects of the present invention will be described below by means of experimental examples.
Экспериментальный пример 1. Влияние различных путей введения соединения согласно настоящему изобретению на терапевтический эффект при лечении мастита дойных коровExperimental Example 1 Effect of Different Routes of Administration of the Compound of the Invention on Therapeutic Effect in the Treatment of Dairy Cow Mastitis
В настоящее время пути введения для лечения мастита включают инфузию в вымя, внутримышечную инъекцию и внутривенную инъекцию.Presently, routes of administration for the treatment of mastitis include udder infusion, intramuscular injection, and intravenous injection.
Среди них инфузия в вымя представляет собой наиболее распространенный путь введения. Лекарственные средства вводят непосредственно в пораженную область вымени через соски для достижения эффекта местного применения и прецизионной терапии. В настоящее время существует множество коммерческих фармацевтических лекарственных средств для инфузии в вымя, таких как Aonaikang (
Внутримышечная инъекция заключается во введении лекарственных средств в мышечную ткань животных, чтобы лекарственные средства достигли пораженной области вымени через кровоток и оказали терапевтический эффект. Внутримышечная инъекция проста в применении и может в определенной степени контролировать симптомы системного воспаления и лихорадки, вызванные маститом.Intramuscular injection is the introduction of drugs into the muscle tissue of animals so that the drugs reach the affected area of the udder through the bloodstream and have a therapeutic effect. The intramuscular injection is easy to administer and can to some extent control the symptoms of systemic inflammation and fever caused by mastitis.
Внутривенная инъекция заключается в введении лекарственного средства непосредственно в венозную кровь животного, чтобы лекарственное средство попало в пораженную область вымени через кровоток. При внутривенной инъекции лекарственное средство быстро достигает места действия и может лечить системные симптомы. Однако внутривенная инъекция предъявляет определенные требования к свойствам лекарственного средства, который не может представлять собой суспензию и иметь незначительное раздражение кровеносных сосудов. Bayer (Германия) рекомендует лечение мастита путем внутривенного введения своего продукта Baytrli (энрофлоксацин), который может достигать более высокой концентрации в пораженной области вымени и оказывать в ней терапевтический эффект, и в то же время может контролировать системные инфекции.Intravenous injection consists of injecting the drug directly into the venous blood of the animal so that the drug enters the affected area of the udder through the bloodstream. When injected intravenously, the drug reaches the site of action quickly and can treat systemic symptoms. However, intravenous injection places certain requirements on the properties of the drug, which cannot be a suspension and have little irritation of the blood vessels. Bayer (Germany) recommends the treatment of mastitis by intravenous administration of its product Baytrli (enrofloxacin), which can reach a higher concentration in the affected area of the udder and have a therapeutic effect there, and at the same time can control systemic infections.
Три вышеуказанных пути введения для лечения мастита дойных коров имеют свои преимущества и недостатки. Этот эксперимент направлен на изучение терапевтического эффекта сапонина B4 пульсатиллы на мастит дойных коров и определение наиболее подходящего пути введения. Результаты данного исследования послужат важной информацией о том, как добиться наилучшего терапевтического эффекта сапонина B4 пульсатиллы, и для будущей разработки и упаковки лекарственного средства.The above three routes of administration for the treatment of mastitis in dairy cows have their own advantages and disadvantages. This experiment aims to investigate the therapeutic effect of pulsatilla saponin B4 on mastitis in dairy cows and determine the most appropriate route of administration. The results of this study will provide important information on how to achieve the best therapeutic effect of pulsatilla saponin B4 and for future drug development and packaging.
1. Тестируемые лекарственные средства1. Tested drugs
Инъекция сапонина B4 пульсатиллы, полученная в примере 3, в концентрации 50 мг/мл; интрамаммарная инфузия сапонина B4 пульсатиллы, полученная в примере 5, в концентрации 50 мг/мл.Injection of saponin B4 of pulsatilla obtained in example 3 at a concentration of 50 mg/ml; intramammary infusion of pulsatilla saponin B4, obtained in example 5, at a concentration of 50 mg/ml.
Положительный контроль: Интрамаммарная инфузия сульфата цефкинома, 8 г/единица (Eastern Along Pharmaceutical Co., Ltd., Nanhai, Foshan).Positive Control: Intramammary infusion of cefkinome sulfate, 8 g/unit (Eastern Along Pharmaceutical Co., Ltd., Nanhai, Foshan).
2. Тестируемые животные2. Test animals
Были отобраны 130 больных коров (клинический мастит 2 степени) и случайным образом разделены на 13 групп по 10 коров в каждой группе.Were selected 130 sick cows (clinical mastitis grade 2) and randomly divided into 13 groups of 10 cows in each group.
3. Дозировка и режим введения3. Dosage and mode of administration
Таблица 3. Дозировка и режим введенияTable 3. Dosage and mode of administration
Введение посредством внутримышечной инъекции в пораженную область вымени: инъекцию сапонина B4 пульсатиллы применяли для местной внутримышечной инъекции в пораженную область вымени один раз каждое утро и вечер в течение 7 дней;Administration by intramuscular injection into the affected area of the udder: Pulsatilla saponin B4 injection was used for local intramuscular injection into the affected area of the udder once every morning and evening for 7 days;
Введение посредством внутривенной инъекции: сапонин B4 пульсатиллы вводили внутривенно один раз в день в течение 7 дней;Administration by intravenous injection: Pulsatilla saponin B4 was administered intravenously once a day for 7 days;
Введение интрамаммарной инфузии: интрамаммарную инфузию сапонина B4 пульсатиллы и положительный контроль (интрамаммарная инфузия цефкинома сульфата) вводили посредством внутрипротоковой инфузии в пораженную область вымени один раз каждое утро и вечер в течение 7 дней.Intramammary infusion administration: Pulsatilla saponin B4 intramammary infusion and a positive control (cephkinome sulfate intramammary infusion) were administered via intraductal infusion into the affected area of the udder once every morning and evening for 7 days.
Для каждого пути введения сапонина В4 пульсатиллы согласно настоящему изобретению обеспечивали группу холостого контроля, которой вводили физиологический раствор в том же объеме.For each route of administration of the pulsatilla saponin B4 of the present invention, a blank control group was provided to which the same volume of saline was administered.
4. Руководство по оценке4. Evaluation guide
Перед каждым введением проверяли температуру тела коровы, дыхание, психическое состояние, статус кормления и другие показатели для наблюдения изменений в вымени и молоке.Before each administration, the cow's body temperature, respiration, mental state, feeding status and other parameters were checked to observe changes in the udder and milk.
Полное излечение: Клинические симптомы, такие как покраснение, отек, жар и боль в пораженной области вымени, полностью исчезли, и лактация восстановилась до нормального уровня.Complete cure: Clinical symptoms such as redness, swelling, heat and pain in the affected area of the udder completely disappeared and lactation was restored to normal levels.
Клиническое излечение: Клинические симптомы, такие как покраснение, отек, жар и боль в пораженной области вымени, по существу исчезли, и лактация практически восстановилась до нормального уровня.Clinical cure: Clinical symptoms such as redness, swelling, heat and pain in the affected area of the udder have essentially disappeared and lactation has almost returned to normal levels.
Отсутствие эффекта: Отсутствие значительного улучшения или даже ухудшения клинических симптомов в пораженной области вымени или рецидив в течение двух недель после отмены лекарственного средства, оба следует считать отсутствием эффекта.No effect: No significant improvement or even worsening of clinical symptoms in the affected area of the udder, or relapse within two weeks of discontinuation of the drug, both should be considered no effect.
Степень излечения рассчитывали следующим образом:The cure rate was calculated as follows:
Степень излечения
5. Результаты5. Results
Таблица 4. Степень излечения и время излечения мастита дойных коров, получавших лечение посредством различных путей введенияTable 4 Cure rates and cure times for mastitis in dairy cows treated by different routes of administration
Общая степень излечения и время излечения сапонином B4 пульсатиллы, вводимым различными путями, показаны в таблице 4: Все способы введения оказывают значительный эффект на лечение мастита дойных коров, и степень излечения в группе высокой дозы при каждом способе введения выше, чем для положительного контроля (интрамаммарная инфузия цефкинома сульфата). Среди них внутримышечная инъекция сапонина B4 пульсатиллы имеет наилучший лечебный эффект и самый короткий период лечения.The overall cure rate and cure time of pulsatilla saponin B4 administered by different routes are shown in Table 4: infusion of cefkinome sulfate). Among them, pulsatilla saponin B4 intramuscular injection has the best curative effect and the shortest treatment period.
Экспериментальный пример 2. Исследование сапонина B4 пульсатиллы согласно настоящему изобретению для лечения клинического маститаExperimental Example 2 Study of Pulsatilla Saponin B4 According to the Present Invention for the Treatment of Clinical Mastitis
1. Тестируемые лекарственные средства1. Tested drugs
Инъекция сапонина B4 пульсатиллы, полученная способом получения согласно примеру 3, в концентрации 50 мг/мл;Pulsatilla saponin B4 injection, obtained by the production method according to example 3, at a concentration of 50 mg/ml;
Контрольное лекарственное средство: Инъекция SHUANGDING 
2. Тестируемые животные2. Test animals
Отбирали 60 коров китайской голштинской породы массой приблизительно 612±47 кг, возрастом 3-5 лет, количеством родов 2-4, здоровых при клиническом обследовании и с клиническим маститом, возникшим естественным путем в период лактации, и случайным образом разделяли их на 5 групп, по 12 в каждой группе.We selected 60 Chinese Holstein cows weighing approximately 612 ± 47 kg, aged 3-5 years, number of births 2-4, healthy at clinical examination and with clinical mastitis that arose naturally during lactation, and randomly divided into 5 groups, 12 in each group.
3. Способ тестирования3. Testing method
3.1 Дозировка и режим введения3.1 Dosage and mode of administration
Таблица 5. Дозировка и режим введенияTable 5. Dosage and mode of administration
После начала тестирования коров, день перед введением регистрировали как D0. Рассчитывали дозируемое количество на основе массы тела в соответствии с заранее разработанным дозируемым веществом и дозировкой (таблица 5). Начиная с дня D1, каждой группе коров с клиническим маститом вводили тестируемое лекарственное средство (инъекция сапонина B4 пульсатиллы) или контрольное лекарственное средство (инъекция SHUANGDING) посредством внутримышечной инъекции один раз в день в течение 4-7 дней, в зависимости от излечения заболевания. Осуществляли наблюдение за клиническими симптомами коров в каждой группе до и после введения лекарственного средства (D0~D12), оценивали в соответствии со стандартом (более подробно см. в таблице 6) и регистрировали дозировку. В конце испытания (D12) на основании результатов наблюдения за вышеуказанными показателями оценивали терапевтический эффект для каждой коровы в соответствии со стандартом, и рассчитывали степень излечения и степень эффективности для каждой группы коров.After cows were tested, the day before administration was recorded as D0. The dosed amount was calculated based on body weight in accordance with the pre-designed dosed substance and dosage (Table 5). Starting from day D1, each group of cows with clinical mastitis was administered the test drug (pulsatilla saponin B4 injection) or the control drug (SHUANGDING injection) by intramuscular injection once a day for 4-7 days, depending on the cure of the disease. Clinical symptoms of cows in each group were monitored before and after drug administration (D0~D12), evaluated according to the standard (see Table 6 for details), and the dosage was recorded. At the end of the trial (D12), based on the results of observing the above indicators, the therapeutic effect for each cow was evaluated according to the standard, and the cure rate and the efficacy rate for each group of cows were calculated.
3.2 Стандарт оценки клинических симптомов дойных коров с клиническим маститом3.2 Clinical symptom assessment standard for dairy cows with clinical mastitis
В D0 (после выявления клинического мастита перед введением), D1 (после первого введения, перед вторым введением), D2~D7 (излеченные коровы прекращают получать лекарственное средство, и неизлеченные коровы продолжают получать лекарственное средство), D8~D12 (все коровы прекращают получать лекарство), регулярно проверяли клинические симптомы и симптомы, касающиеся вымени, каждой коровы, такие как психическое состояние, аппетит и питье и т.д., и выставляли оценку в соответствии со следующей таблицей (см. таблицу 6). Регистрировали клинические симптомы (оценка местных симптомов, касающихся вымени).In D0 (after clinical mastitis is detected before administration), D1 (after first administration, before second administration), D2~D7 (cured cows stop receiving the drug and non-cured cows continue to receive the drug), D8~D12 (all cows stop receiving medication), regularly checked the clinical and udder symptoms of each cow, such as mental state, appetite and drinking, etc., and scored according to the following table (see Table 6). Recorded clinical symptoms (assessment of local symptoms relating to the udder).
Таблица 6. Стандарт оценки клинических симптомов дойных коров с клиническим маститомTable 6 Standard for scoring clinical symptoms in dairy cows with clinical mastitis
3.3 Способ определения количества соматических клеток в коровьем молоке3.3 Method for determining the number of somatic cells in cow's milk
Собирали молоко коров, страдающих клиническим маститом, на D0, D7 и D12 теста, определяли и регистрировали количество соматических клеток.Collected milk from cows suffering from clinical mastitis, D0, D7 and D12 test, determined and recorded the number of somatic cells.
3.4 Оценка эффективности3.4 Performance evaluation
Проводили по оценке обследования клинических симптомовCarried out according to the assessment of the examination of clinical symptoms
Суточная степень излечения в дни 2-7: Начиная с D2, если корова, страдающая маститом, соответствовала «сумме оценок <1», ее считали излеченной. Суточная степень излечения в дни 2-7=
Суточная степень эффективности в дни 2-7: Начиная с D2, если корова, страдающая маститом, соответствовала «1 ≤ сумма оценок ≤ 2», лечение считали эффективным. Суточная степень эффективности лечения в дни 2-7=
Частота рецидивов: В течение периода с D5 по D12, если больная корова, признанная успешно вылеченной, после отмены лекарственного средства соответствовала «сумме оценок > 2», это рассматривали как рецидив. Частота рецидивов=
Степень излечения в день 12 (общая степень излечения): В D12, если корова, страдающая маститом, соответствовала «сумме оценок <1», ее считали излеченной в день 12. Степень излечения в день 12=
Степень эффективности лечения в день 12 (общая степень эффективности): В D12, если корова, страдающая маститом, соответствовала «1 ≤ сумма оценок ≤ 2», лечение считали эффективным. Степень эффективности в день 12=
С применением степени излечения в качестве основного индикатора и эффективности, оценки клинических симптомов и количества соматических клеток в качестве вторичных индикаторов, в полном объеме оценивали терапевтический эффект тестируемого лекарственного средства (инъекция сапонина B4 пульсатиллы) на клинический мастит у инфицированных естественным образом коров, и сравнивали его с терапевтическим эффектом контрольного лекарственного средства (инъекция SHUANGDING) для определения клинической рекомендуемой дозировки тестируемого лекарственного средства.Using the degree of cure as the main indicator and efficacy, evaluation of clinical symptoms and somatic cell count as secondary indicators, the therapeutic effect of the test drug (pulsatilla saponin B4 injection) on clinical mastitis in naturally infected cows was fully evaluated and compared with the therapeutic effect of the control drug (SHUANGDING injection) to determine the clinical recommended dosage of the test drug.
4. Результаты тестирования4. Test results
4.1 Результаты лечения коров с клиническим маститом в каждой группе4.1 Results of treatment of cows with clinical mastitis in each group
Из таблицы 7 видно, что при применении инъекции сапонина B4 пульсатиллы для лечения клинического мастита дойных коров, независимо от низкой, средней и высокой дозы, степень излечения за 7 дней и общая степень излечения выше таковых для контрольной группы, в которой применяли инъекцию SHUANGDING, и среднее время излечения меньше, чем в контрольной группе, что указывает на то, что инъекция сапонина B4 пульсатиллы превосходит инъекцию SHUANGDING в лечении клинического мастита. Общая степень излечения в группе высокой дозы выше, чем в группах средней и низкой доз. Общая степень излечения в группе средней дозы является такой же, как и в группе низкой дозы, но рецидивы отсутствуют, а среднее время излечения меньше, чем в группе низкой дозы, что демонстрирует определенный дозозависимый эффект.Table 7 shows that when Pulsatilla Saponin B4 Injection was used to treat clinical mastitis in dairy cows, regardless of low, medium, and high doses, the 7-day cure rate and overall cure rate were higher than those of the SHUANGDING injection control group, and the mean cure time is shorter than the control group, indicating that pulsatilla saponin B4 injection is superior to SHUANGDING injection in the treatment of clinical mastitis. The overall cure rate in the high dose group is higher than in the medium and low dose groups. The overall cure rate in the medium dose group is the same as in the low dose group, but there are no relapses and the mean time to cure is shorter than in the low dose group, demonstrating a certain dose-dependent effect.
Таблица 7. 4.1 Результаты терапевтических эффектов для коров с клиническим маститом в каждой группеTable 7. 4.1 Results of therapeutic effects for cows with clinical mastitis in each group
4.2 Оценка обследования клинических симптомов дойных коров с маститом в каждой группе4.2 Evaluation of the examination of the clinical symptoms of dairy cows with mastitis in each group
Из таблицы 8 видно, что оценка обследования клинических симптомов дойных коров с маститом в группе низкой дозы существенно не различалась между D0-D4 и D5-D12 (p>0,05), но значительно различалась между D5-D12 и D0-D2, между D7-D12 и D0-D4 (p<0,05), что указывает на то, что в группе низкой дозы у коров с маститом значительно улучшилось состояние на D5 и значительное количество излечилось на D7. Оценка обследования клинических симптомов дойных коров с маститом в группе средней дозы существенно не различалась между D0-D1, между D2-D5 и между D4-D12 (p>0,05), но значительно различалась между D3-D12 и D0-D2, между D6-D12 и D0-D3 (p<0,05), что указывает на то, что в группе средней дозы у коров наблюдалось значительное улучшение на D3 и значительное количество излечилось на D6. Оценка обследования клинических симптомов у дойных коров с маститом в группе высокой дозы существенно не различалась между D0-D3, между D1-D5, между D3-D6 и между D7-D12 (p>0,05), но значительно различалась между D4-D12 и D0, между D6-D12 и D0-D2, и между D7-D12 и D0-D6 (p<0,05), что указывает на то, что в группе высокой дозы у коров с маститом, как правило, улучшение началось в D4, количество излеченных коров значительно увеличилось на D6, и несколько коров излечилось на D7. Оценка обследования клинических симптомов у дойных коров с маститом в контрольной группе существенно не различалась между D0-D4, D2-D6 и D3-D12 (p>0,05), но значительно различалась между D5-D12 и D0-D4 и между D7-D12 и D0-D6 (p<0,05), что указывает на то, что в контрольной группе у коров наблюдалось улучшение на D5, и определенное количество коров излечилось на D7.It can be seen from Table 8 that the clinical symptom score of dairy cows with mastitis in the low dose group did not differ significantly between D0-D4 and D5-D12 (p>0.05), but significantly differed between D5-D12 and D0-D2, between D7-D12 and D0-D4 (p<0.05), indicating that in the low dose group, cows with mastitis improved significantly at D5 and a significant number were cured at D7. Survey scores for clinical symptoms of dairy cows with mastitis in the medium dose group did not differ significantly between D0-D1, between D2-D5, and between D4-D12 (p>0.05), but differed significantly between D3-D12 and D0-D2, between D6-D12 and D0-D3 (p<0.05), indicating that in the medium dose group cows showed a significant improvement at D3 and a significant number were cured at D6. Survey scores of clinical symptoms in dairy cows with mastitis in the high dose group did not differ significantly between D0-D3, between D1-D5, between D3-D6, and between D7-D12 (p>0.05), but differed significantly between D4-D12 and D0, between D6-D12 and D0-D2, and between D7-D12 and D0-D6 (p<0.05), indicating that cows with mastitis in the high dose group generally improved at D4, the number of cows cured increased significantly at D6, and several cows were cured at D7. Survey scores of clinical symptoms in dairy cows with mastitis in the control group did not differ significantly between D0-D4, D2-D6 and D3-D12 (p>0.05), but significantly differed between D5-D12 and D0-D4 and between D7- D12 and D0-D6 (p<0.05), indicating that in the control group cows improved at D5 and a certain number of cows were cured at D7.
Оценка обследования клинических симптомов в группе средней дозы на D0 была значительно выше, чем в группе низкой дозы и в группе высокой дозы (p<0,05), указывая на то, что заболевание у коров в группе средней дозы было более тяжелым; оценка клинических симптомов в группе средней дозы на D1 была значительно выше, чем в других 3 группах (p<0,05), оценка клинических симптомов в группе средней дозы на D2 была значительно выше, чем в группе низкой дозы и в группе высокой дозы (p<0,05), что указывает на то, что на ранней стадии лечения группа средней дозы оказывает очевидный эффект на улучшение клинических симптомов у коров с маститом; различия в оценке обследования клинических симптомов у коров между четырьмя группами на D3-D5 и D7 не были значительными (p>0,05); оценка обследования клинических симптомов у коров в контрольной группе на D12 была значительно выше, чем у коров в группе высокой дозы (p<0,05), что указывает на то, что терапевтический эффект в контрольной группе уступает таковому в группе, получавшей лечение с помощью пульсатиллы.The clinical symptom survey score in the medium dose group on D0 was significantly higher than in the low dose group and in the high dose group (p<0.05), indicating that the disease in cows in the medium dose group was more severe; the score of clinical symptoms in the middle dose group on D1 was significantly higher than in the other 3 groups (p<0.05), the score of clinical symptoms in the middle dose group on D2 was significantly higher than in the low dose group and in the high dose group ( p<0.05), indicating that early in the treatment the medium dose group had a clear effect on improving clinical symptoms in cows with mastitis; differences in cow clinical symptom scores between the four groups on D3-D5 and D7 were not significant (p>0.05); the D12 clinical symptom score of cows in the control group was significantly higher than cows in the high dose group (p<0.05), indicating that the therapeutic effect in the control group is inferior to that in the group treated with pulsatilla.
Таблица 8. Оценка обследования клинических симптомов дойных коров в каждой группеTable 8. Evaluation of the examination of the clinical symptoms of dairy cows in each group
Примечание: «G» обозначает «группа», «N» обозначает «количество коров», «L» обозначает «группу низкой дозы», «M» обозначает «группу средней дозы», «H» обозначает «группу высокой дозы»; «C» обозначает «контрольную группу»; иNote: "G" stands for "group", "N" stands for "number of cows", "L" stands for "low dose group", "M" stands for "medium dose group", "H" stands for "high dose group"; "C" stands for "control group"; And
В той же строке верхние индексы с разными заглавными буквами указывают на существенные различия (p<0,05), а верхние индексы с одинаковыми заглавными буквами указывают на отсутствие существенных различий (p>0,05); в том же столбце нижние индексы с разными заглавными буквами указывают на существенные различия (p<0,05), а индексы с одинаковыми заглавными буквами указывают на отсутствие существенных различий (p>0,05). То же самое относится к таблице ниже.In the same row, superscripts with different capital letters indicate significant differences (p<0.05), and superscripts with the same capital letters indicate no significant difference (p>0.05); in the same column, subscripts with different capital letters indicate significant differences (p<0.05) and subscripts with the same capital letters indicate no significant difference (p>0.05). The same applies to the table below.
4.3 Результаты обнаружения соматических клеток в коровьем молоке в каждой группе4.3 Results of detection of somatic cells in cow's milk in each group
Таблица 9. Результаты обнаружения соматических клеток в молоке излеченных коров в каждой группе (104/мл)Table 9. Results of the detection of somatic cells in the milk of cured cows in each group (10 4 /ml)
Из таблицы 9 видно, что количество соматических клеток в молоке коров в каждой группе продемонстрировало тенденцию к снижению на D0-D7. Разница между D7 и D12 в группе низкой дозы, группе средней дозы и контрольной группе была незначительной, но D7 значительно отличался от D0, что указывает на то, что при лечении лекарственным средством количество соматических клеток в молоке значительно улучшилось на D7, и после этого не произошло рецидива. В группе высокой дозы D0, D7 и D12 все значительно различались, что, с одной стороны, показало значительное улучшение количества соматических клеток в молоке, а с другой стороны, также было связано с более длительным средним временем выздоровления коров в этой группе. Различие в соматических клетках в молоке четырех групп коров в D0 не было значительным, что указывает на то, что с точки зрения соматических клеток в молоке коровы в каждой группе имели схожий статус заболевания на момент начала. В D7 количество соматических клеток в молоке у коров группы средней дозы было значительно ниже, чем у коров группы высокой дозы и контрольной группы, что было связано с более коротким средним временем излечения в группе средней дозы. В D12 день количество соматических клеток в молоке у коров в контрольной группе было значительно выше, чем у коров группы средней дозы, что указывает на то, что терапевтический эффект от инъекции сапонина B4 пульсатиллы при мастите дойных коров лучше, чем от инъекции SHUANGDING.Table 9 shows that the number of somatic cells in the milk of cows in each group showed a downward trend by D0-D7. The difference between D7 and D12 in the low dose group, the medium dose group and the control group was not significant, but D7 was significantly different from D0, indicating that the number of somatic cells in milk improved significantly at D7 during drug treatment, and thereafter did not a relapse occurred. In the high dose group, D0, D7 and D12 were all significantly different, which, on the one hand, showed a significant improvement in the number of somatic cells in milk, and on the other hand, was also associated with a longer average recovery time for cows in this group. The difference in somatic cells in milk of the four groups of cows in D0 was not significant, indicating that in terms of somatic cells in milk, cows in each group had similar disease status at onset. At D7, somatic cell counts in milk were significantly lower in medium dose cows than in high dose and control cows, which was associated with a shorter mean cure time in the medium dose group. At D12 day, the number of somatic cells in the milk of cows in the control group was significantly higher than that of cows in the medium dose group, indicating that the therapeutic effect of injection of pulsatilla saponin B4 for mastitis of dairy cows is better than that of injection of SHUANGDING.
Из терапевтического эффекта инъекции сапонина B4 пульсатиллы при клиническом мастите дойных коров, количества соматических клеток в молоке, степени клинического излечения и наблюдений за тестами на излечение, можно увидеть, что все инъекции сапонина B4 пульсатиллы с различными концентрациями оказывают очевидное терапевтическое действие на клинический мастит дойных коров, и данный эффект лучше, чем для положительного контроля, инъекции SHUANGDING. Кроме того, инъекция сапонина B4 пульсатиллы не является токсичной и не вызывает устойчивости к лекарственным средствам, и не существует необходимости выбрасывать молоко во время лечения и в конце лечения, что не только снижает экономические потери фермеров, но и снижает риск возникновения устойчивости к лекарственным средствам.From the therapeutic effect of injection of pulsatilla saponin B4 in clinical dairy cow mastitis, the number of somatic cells in milk, the degree of clinical cure and observations of cure tests, it can be seen that all injections of pulsatilla saponin B4 at various concentrations have a clear therapeutic effect on clinical mastitis of dairy cows. , and this effect is better than the positive control, SHUANGDING injection. In addition, the injection of pulsatilla saponin B4 is non-toxic and does not cause drug resistance, and there is no need to throw away milk during treatment and at the end of treatment, which not only reduces the economic loss of farmers, but also reduces the risk of drug resistance.
На фигурах 2 и 3 показано сравнение молока коров с клиническим маститом до и после лечения инъекцией сапонином B4 пульсатиллы. Как видно из фигур 2 и 3, в первый день лечения у коров с клиническим маститом в молоке было больше хлопьев. По мере увеличения времени лечения количество хлопьев постепенно уменьшалось, и молоко постепенно возвращалось к норме. После шестого дня лечения молоко нормализовалось. Это продемонстрировало, что инъекция сапонина B4 пульсатиллы оказывает значительное влияние на лечение клинического мастита и улучшение качества молока.Figures 2 and 3 show a comparison of milk from cows with clinical mastitis before and after treatment with pulsatilla saponin B4 injection. As can be seen from figures 2 and 3, cows with clinical mastitis had more flakes in their milk on the first day of treatment. As the treatment time increased, the amount of flakes gradually decreased and the milk gradually returned to normal. After the sixth day of treatment, the milk returned to normal. This demonstrated that pulsatilla saponin B4 injection had a significant effect on the treatment of clinical mastitis and improved milk quality.
Экспериментальный пример 3. Исследование сапонина B4 пульсатиллы согласно настоящему изобретению для лечения стойкого клинического мастита и латентного маститаExperimental Example 3 Study of Pulsatilla Saponin B4 According to the Present Invention for the Treatment of Persistent Clinical Mastitis and Latent Mastitis
1. Тестируемые лекарственные средства1. Tested drugs
Инъекция сапонина B4 пульсатиллы, полученная способом получения согласно примеру 3, в концентрации 50 мг/мл;Pulsatilla saponin B4 injection, obtained by the production method according to example 3, at a concentration of 50 mg/ml;
2. Тестируемые коровы2. Tested cows
В данном тесте было отобрано 8 коров, страдающих клиническим маститом, на молочной ферме Shijiazhuang Tianquan Dairy Cows Co., Ltd. Эти 8 коров получали лечение в течение примерно месяца, но не излечились (2 из них были почти утратили лактацию, т.е. почти не вырабатывали молока). Эти 8 коров лечили ветеринары фермы, лекарственные средства и способы лечения включали инфузию цефкинома сульфата в вымя, внутривенную инъекцию цефалоспоринов и желудочный зонд с Gongying San 
В данном тесте случайным образом было отобрано 6 коров с латентным маститом на молочной ферме Tianquan, у каждой из которых по меньшей мере одна область вымени имеет «++» или выше в последнем тесте LMT, проведенном ветеринаром.In this test, 6 cows with latent mastitis at Tianquan Dairy Farm were randomly selected, all of whom had at least one udder area of "++" or higher in the last LMT test performed by a veterinarian.
3. Содержание исследования3. Content of the study
Изучение влияние инъекции сапонина B4 пульсатиллы на стойкий клинический мастит и влияние инъекции сапонина B4 пульсатиллы на латентный мастит.To study the effect of pulsatilla saponin B4 injection on persistent clinical mastitis and the effect of pulsatilla saponin B4 injection on latent mastitis.
4. Тестируемые лекарственные средства, дозировка и режим введения4. Tested medicinal products, dosage and mode of administration
В данном тесте инъекцию сапонина B4 пульсатиллы, полученную способом получения из примера 3, применяли для лечения 6 коров со стойким клиническим маститом и 2 коров со стойким клиническим маститом и близких к прекращению лактации. Независимо от того, сколько участков вымени было воспалено, внутримышечную инъекцию (60 мл) осуществляли один раз в день.In this test, the injection of pulsatilla saponin B4, obtained by the preparation method of Example 3, was used to treat 6 cows with persistent clinical mastitis and 2 cows with persistent clinical mastitis and close to cessation of lactation. Regardless of how many areas of the udder were inflamed, an intramuscular injection (60 ml) was given once a day.
6 случайным образом выбранным коровам с латентным маститом, независимо от того, сколько участков вымени было воспалено, вводили внутримышечную инъекцию (30 мл) один раз в день.6 randomly selected cows with latent mastitis, regardless of how many areas of the udder were inflamed, were given an intramuscular injection (30 ml) once a day.
Таблица 10. Тестируемые лекарственные средства, дозировка и режим введенияTable 10. Tested drugs, dosage and mode of administration
5. Результаты тестирования5. Test results
5.1 Результат лечения коров со стойким клиническим маститом5.1 Outcome of treatment of cows with persistent clinical mastitis
В данном тесте были отобраны и получали лечение 8 коров с клиническим маститом, которые долгое время не получали лечение. После 3 введений четыре коровы были вылечены, у одной коровы наблюдали значительное улучшение, и одна корова не продемонстрировала значительного эффекта; он не был эффективным для двух коров, близких к прекращению лактации. Результаты исследования показали, что сапонин B4 пульсатиллы хорошо влияет на мастит у дойных коров, лечение которого с применением антибиотиков или других средств не является эффективным.In this test, 8 cows with clinical mastitis, which had not received treatment for a long time, were selected and treated. After 3 injections, four cows were cured, one cow showed a significant improvement, and one cow showed no significant effect; it was not effective in two cows close to lactation stop. The results of the study showed that saponin B4 of pulsatilla has a good effect on mastitis in dairy cows, the treatment of which with antibiotics or other means is not effective.
Результаты лечения некоторых коров, которые не получали лечение в течение долгого времени: Для коровы с ушной биркой с номером 8558 молоко коровы до лечения было жидким и содержало небольшое количество хлопьев, и результат теста LMT был «+++»; после однократной внутримышечной инъекции 60 мл сапонина B4 пульсатиллы в молоке не было видимых хлопьев, и цвет молока был слегка желтоватым. После второго введения молоко нормализовалось, и результат теста LMT, проведенного ветеринаром, представлял собой «++». Затем ветеринар перевел корову в стойло.Results of treatment of some cows that have not received treatment for a long time: For the cow with
На фигуре 4 представлено лечение коровы с номером 8558, которая долгое время не получала лечение. Из фигуры 4 видно, что по мере увеличения времени лечения секреция молока у коровы с номером 8558 постепенно нормализуется. После 2-разового введения молоко нормализовалось, корова была клинически излеченной.The figure 4 shows the treatment of
5.2 Лечение коров с латентным маститом5.2 Treatment of cows with latent mastitis
Согласно результатам теста LMT, проведенного ветеринаром фермы, случайным образом было выбрано 6 коров с латентным маститом, у всех из которых была хотя бы одна область вымени с «++» или выше. Инъекцию 30 мл сапонина B4 пульсатиллы вводили посредством внутримышечной инъекции. Через три дня результаты теста LMT у 5 коров значительно улучшились. Улучшение состояния другой коровы (№532006) было незначительным, но ухудшения не произошло.According to the results of the LMT test performed by the farm veterinarian, 6 cows with latent mastitis were randomly selected, all of which had at least one udder area with "++" or higher. An injection of 30 ml of pulsatilla saponin B4 was administered by intramuscular injection. After three days, the results of the LMT test in 5 cows improved significantly. The other cow (#532006) improved slightly, but did not worsen.
Таблица 11. Результаты теста латентного маститаTable 11. Latent Mastitis Test Results
Примечание: Поскольку на ферме нет детектора соматических клеток, тест необходимо проводить на других фермах. Ветеринар молочной фермы не выполнил тестирование соматических клеток, но результаты теста LMT после трех дней введения показали значительное улучшение у 5 коров с латентным маститом.Note: Since the farm does not have a somatic cell detector, the test must be performed on other farms. The dairy farm veterinarian did not perform somatic cell testing, but LMT test results after three days of administration showed significant improvement in 5 cows with latent mastitis.
Замечания об отдельных коровах: Для коровы №1106021, перед введением, у которой две области вымени слева были поражены латентным маститом, результаты теста LMT спереди слева и сзади слева были «++» и «+++» соответственно; сзади справа лактация совершенно прекратилась и молоко не выделялось; молоко первых трех надавливаний спереди справа было густым и желтого цвета, а после нескольких надавливаний появилась кровянистая слизистая жидкость без признаков молока. Сапонин B4 пульсатиллы 30 мл вводили посредством внутримышечной инъекции один раз в день, и через 3 дня введения не было улучшения спереди справа, результаты теста LMT спереди слева и сзади слева были «-» и «++» соответственно, количество соматических клеток значительным образом снизилось, и эффект был значительным.Notes on individual cows: For
Другим 5 коровам, страдающим латентным маститом, один раз в день вводили внутримышечно 30 мл сапонина B4 пульсатиллы. После трех дней лечения состояние 4 коров улучшилось, и результаты LMT показали, что количество соматических клеток уменьшилось; улучшение у другой коровы (№532006) не было значительным. На фиг. 5 показаны результаты лечения некоторых коров, страдающих латентным маститом, после трех дней лечения инъекцией сапонина B4 пульсатиллы. Из фиг. 5 видно, что состояние коров, страдающих латентным маститом, улучшилось после приема лекарственного средства.Another 5 cows suffering from latent mastitis were injected intramuscularly with 30 ml of pulsatilla saponin B4 once a day. After three days of treatment, the condition of 4 cows improved, and the results of LMT showed that the number of somatic cells decreased; the improvement in another cow (#532006) was not significant. In FIG. 5 shows the results of treating some cows suffering from latent mastitis after three days of treatment with an injection of pulsatilla saponin B4. From FIG. 5 shows that the condition of cows suffering from latent mastitis improved after taking the drug.
Результаты исследования показали, что сапонин B4 пульсатиллы хорошо влияет на латентный мастит.The results of the study showed that saponin B4 of pulsatilla has a good effect on latent mastitis.
Ветеринары фермы лечили заболевших коров с помощью инфузии цефкинома сульфата в вымя, внутривенных инъекций цефалоспоринов и введения через желудочный зонд Gongying San 
Латентный мастит является одним из наиболее распространенных типов мастита у дойных коров. Этот тип мастита обычно не имеет клинических симптомов, разницу между молоком при нем и нормальным молоком нельзя отличить невооруженным глазом, и для диагностики требуются лабораторные реактивы. Если этот тип мастита не достигает определенной доли в стаде, его обычно не лечат. Из-за скрытой заболеваемости латентный мастит дойных коров вызывает очень серьезные экономические потери. Когда инъекцию сапонина B4 пульсатиллы применяли для лечения 6 коров, страдающих латентным маститом, у четырех коров улучшилось состояние; одна корова продемонстрировала значительный эффект и снижение количества соматических клеток в тесте LMT; у одной коровы не было значительного улучшения. Результаты исследования показали, что сапонин B4 пульсатиллы хорошо влияет на латентный мастит.Latent mastitis is one of the most common types of mastitis in dairy cows. This type of mastitis usually has no clinical symptoms, the difference between its milk and normal milk cannot be distinguished with the naked eye, and laboratory reagents are required for diagnosis. If this type of mastitis does not reach a certain proportion in the herd, it is usually left untreated. Due to latent morbidity, latent mastitis in dairy cows causes very serious economic losses. When pulsatilla saponin B4 injection was used to treat 6 cows suffering from latent mastitis, four cows improved; one cow showed a significant effect and reduction in somatic cell count in the LMT test; one cow had no significant improvement. The results of the study showed that saponin B4 of pulsatilla has a good effect on latent mastitis.
Кроме того, во время лечения мастита у дойных коров случайным образом была выбрана испытанная инъекция сапонина B4 пульсатиллы, и Институту контроля лекарственных средств провинции Сычуань было поручено провести более 200 тестов на антибиотики, и антибиотический компонент не был обнаружен. На второй день после введения дойным коровам все молоко может пройти тест на остатки антибиотиков, проводимый на ферме. Сапонин B4 пульсатиллы мало влияет на иммуноглобулин и воспалительные факторы в коровьем молоке, таким образом, может гарантировать стабильность молочной композиции. Кроме того, отсутствие остатков не повлияет на качество свежего молока на молочных фермах.In addition, during the treatment of mastitis in dairy cows, a tested injection of pulsatilla saponin B4 was randomly selected, and the Sichuan Institute of Medicines Control was instructed to conduct more than 200 antibiotic tests, and the antibiotic component was not found. On the second day after administration to dairy cows, all milk can pass the on-farm antibiotic residue test. Pulsatilla saponin B4 has little effect on immunoglobulin and inflammatory factors in cow's milk, thus can guarantee the stability of the milk composition. In addition, the absence of residues will not affect the quality of fresh milk on dairy farms.
В настоящее время для лечения мастита в основном применяют антибиотики. Среди них чаще применяют дезинфицирующие и повреждающие нуклеиновые кислоты клетки антибиотики широкого спектра действия. Во время лечения и через 4-5 дней после лечения молоко необходимо выбрасывать, что приводит к большим экономическим потерям для фермеров и риску возникновения лекарственной устойчивости. Сапонин B4 пульсатиллы представляет собой натуральный активный ингредиент, извлеченный из китайской лекарственной травы пульсатиллы, не является токсичным и не вызывает устойчивости к лекарственным средствам. Соединение сапонин B4 пульсатиллы согласно настоящему изобретению обладает сильной биологической активностью и превосходным терапевтическим эффектом при мастите дойных коров. Нет необходимости выбрасывать молоко во время лечения и в конце лечения, что не только снижает экономические потери фермеров, но и снижает риск возникновения лекарственной устойчивости. Кроме того, сапонин B4 пульсатиллы не только обладает превосходным терапевтическим эффектом при клиническом мастите, но также обладает превосходным терапевтическим эффектом при стойком клиническом мастите и латентном мастите. В то же время инъекция сапонина пульсатиллы обладает такими преимуществами, как безопасность, высокая эффективность, отсутствие остатков, отсутствие лекарственной устойчивости и отсутствие токсических и побочных эффектов при лечении мастита дойных коров.Currently, antibiotics are mainly used to treat mastitis. Among them, broad-spectrum antibiotics that disinfect and damage cell nucleic acids are more often used. During treatment and 4-5 days after treatment, milk must be discarded, resulting in large economic losses for farmers and the risk of drug resistance. Pulsatilla Saponin B4 is a natural active ingredient extracted from the Chinese medicinal herb Pulsatilla, is non-toxic and does not cause drug resistance. The pulsatilla saponin B4 compound of the present invention has a strong biological activity and an excellent therapeutic effect in dairy cow mastitis. There is no need to throw away milk during treatment and at the end of treatment, which not only reduces the economic loss to farmers, but also reduces the risk of drug resistance. In addition, pulsatilla saponin B4 not only has an excellent therapeutic effect in clinical mastitis, but also has an excellent therapeutic effect in persistent clinical mastitis and latent mastitis. At the same time, pulsatilla saponin injection has the advantages of safety, high efficacy, no residue, no drug resistance, and no toxic and side effects in the treatment of dairy cow mastitis.
Claims (11)
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810097221.3 | 2018-01-31 | ||
| CN201810097221 | 2018-01-31 | ||
| PCT/CN2019/073239 WO2019149156A1 (en) | 2018-01-31 | 2019-01-25 | Uses of pulsatilla chinensis extract in preparing drug for treating viral and/or bacterial diseases |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2020126266A RU2020126266A (en) | 2022-02-28 |
| RU2799050C2 true RU2799050C2 (en) | 2023-07-03 |
Family
ID=
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101732517A (en) * | 2009-12-30 | 2010-06-16 | 东北农业大学 | Chinese medicinal composition for treating canine distemper and preparation method thereof |
| CN102100753B (en) * | 2011-03-05 | 2012-07-04 | 中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所 | Medicine for treating endometritis of milk cow |
| CN105535004A (en) * | 2016-02-02 | 2016-05-04 | 刘琦 | Application of anemoside B4 serving as EV71 virus inhibitor in preparing hand-foot-and-mouth disease resisting drugs |
| CN107137413A (en) * | 2017-06-21 | 2017-09-08 | 苏州大学 | Pulchinenoside B4Application in the medicine for preparing treatment pain |
| CN107441086A (en) * | 2017-07-27 | 2017-12-08 | 哈尔滨珍宝制药有限公司 | A kind of pharmaceutical composition and its production and use |
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101732517A (en) * | 2009-12-30 | 2010-06-16 | 东北农业大学 | Chinese medicinal composition for treating canine distemper and preparation method thereof |
| CN102100753B (en) * | 2011-03-05 | 2012-07-04 | 中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所 | Medicine for treating endometritis of milk cow |
| CN105535004A (en) * | 2016-02-02 | 2016-05-04 | 刘琦 | Application of anemoside B4 serving as EV71 virus inhibitor in preparing hand-foot-and-mouth disease resisting drugs |
| CN107137413A (en) * | 2017-06-21 | 2017-09-08 | 苏州大学 | Pulchinenoside B4Application in the medicine for preparing treatment pain |
| CN107441086A (en) * | 2017-07-27 | 2017-12-08 | 哈尔滨珍宝制药有限公司 | A kind of pharmaceutical composition and its production and use |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| CARLOS DIAS BARZON et al. Preliminary study of homeopathic treatment of subclinical mastitis evaluated through somatic cells count and California mastitis test //Int J High Dilution Res 2008; 7(24): 147-151. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US11793822B2 (en) | Uses of Pulsatilla Chinensis extract in preparing drug for treating viral and/or bacterial diseases | |
| RU2799050C2 (en) | Application of pulsatilla chinensis extract for obtaining a drug for the treatment of viral and/or bacterial diseases | |
| CN102153630B (en) | Ring octapeptide and preparation method and application thereof in medicament making | |
| KR20190048431A (en) | A composition for improving, preventing and treating of colitis diseases comprising cynanchi wilfordii radix fraction | |
| CN116763777A (en) | Application of 17-hydro-9-dehydroandrographolide-19-sodium sulfate in preparing medicament for treating cow mastitis | |
| CN102652773B (en) | Medicinal composition and preparation method thereof | |
| CN110575505A (en) | Medicine for treating acute bronchitis and acute attack of chronic bronchitis and preparation method and application thereof | |
| CN108992459B (en) | Application of peach gum polysaccharide in preparation of medicine for treating or preventing nephritis and pharmaceutical composition | |
| CN115192569B (en) | Use of Sphaeropsidin A in preparing medicine for preventing or treating inflammation induced diseases | |
| JP2007532527A (en) | Herbal extract for kidney injury | |
| WO2020098831A1 (en) | Gynecological qianjin capsule and quality control method therefor | |
| US20220323525A1 (en) | Fuke qianjin tablet and quality control method therefor | |
| CN117137965A (en) | Application of rhizoma corydalis extract in preparation of medicine for treating atopic dermatitis | |
| CN117860792A (en) | Use of composition containing active ingredient of ganoderma lucidum | |
| CN118178437A (en) | Application of ginsenoside Rk1 in preparation of medicines for treating ulcerative colitis | |
| CN110833570A (en) | Preparation method of three-flower Chinese angelica perfusate | |
| CN117815261A (en) | New medical application of saw palmetto fruit extract and soft capsule thereof | |
| CN113908193A (en) | Use of pharmaceutical composition in treatment of radiation pneumonitis | |
| CN109364147A (en) | A kind of ' Qianjin ' capsule to treat ganopathy and preparation method thereof | |
| CN117045726A (en) | White tea decoction, preparation method thereof and application thereof in inhibiting helicobacter pylori | |
| CN112618598A (en) | Preparation and quality detection of traditional Chinese medicine compound Xiaolinian for preventing and treating cow mastitis | |
| KR20190138519A (en) | Composition for Preventing or Treating Uterine Myoma Comprising Rhus verniciflua Stokes Extract |