RU2794035C1

RU2794035C1 - Способ диагностики тромбинемии у пациентов с инфекцией covid-19

Info

Publication number: RU2794035C1
Application number: RU2022122548A
Authority: RU
Inventors: Надежда Александровна Воробьева; Алена Ивановна Воробьева; Александра Сергеевна Бартенева
Filing date: 2022-08-19
Publication date: 2023-04-11

Abstract

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической лабораторной диагностике, инфектологии, реаниматологии, и может быть использовано для диагностики развития состояния тромбинемии у пациентов с инфекцией Covid-19. У пациентов с инфекцией Covid-19 среднетяжелого и тяжелого течения проводится забор венозной крови объемом 4,5 мл в вакуумный вакутейнер с ЭДТА. Проводят молекулярно-генетический анализ генов системы гемостаза методом полимеразной цепной реакции с последующим рестрикционным анализом продукта. При детекции генотипа -675 4G/4G или -675 4G/5G гена PAI-1 rs1799889, или генотипа 20210 (G/A) гена Factor II rs1799963, или генотипа -455 G/A или -455 А/А гена Factor I rs1800790 диагностируют тромбинемию у пациентов с инфекцией Covid-19. Способ обеспечивает эффективную диагностику развития состояния тромбинемии у пациентов с инфекцией Covid-19 за счет использования молекулярно-генетических маркеров, определяющих генетическую детерминацию к развитию тромбинемии при инфекции Covid-19. 8 ил., 11 табл., 5 пр.

Description

Изобретение относится к медицине, а точнее к диагностике тяжести состояния тромбинемии на основе лабораторного метода молекулярно-генетического скрининга, и может быть использовано в клинической практике врачами клинической лабораторной диагностики, инфекционистами, реаниматологами с целью прогнозирования развития генетически детерминированного протромботического состояния (тромбинемии) у пациентов с инфекцией Covid-19.

Во время пандемии, вызванной новой коронавирусной инфекцией, особую группу риска составляют пациенты с сердечно-сосудистыми заболеваниями, особенно при наличии в анамнезе тромботических событий. Распространение коронавирусной инфекции представляет особую опасность в отношении декомпенсации имеющихся хронических заболеваний, специфического поражения сердечно-сосудистой системы, особенно в случае тяжелого течения коронавирусной инфекции и высокого риска неблагоприятных исходов в виде тромботических событий у пациентов с тромбофилическими состояниями высокого риска.

Данные зарубежных исследований, свидетельствуют о высокой частоте тромботических осложнений у госпитализированных пациентов с Covid-19 некритического течения, несмотря на проведение стандартной тромбопрофилактики. Патогенез короновирусной инфекции сложен и до сих пор изучен, что во многом зависит от особенностей вируса и исходного состояния системы гемостаза пациента [Bikdeli В, Madhavan MV, Jimenez D, et al. COVID-19 and Thrombotic or Thromboembolic Disease: Implications for Prevention, Antithrombotic Therapy, and Follow-up. JACC. 2020. doi.10.1016/j.jacc.2020.04.031].

Провоспалительные цитокины при инфекции COVID-19 стимулируют экспрессию тканевого тромбопластина на иммунных клетках и инициируют активацию свертывания крови. Дисфункция эндотелия, вызванная воспалением, дополнительно ускоряет протромботическую реакцию, повышенную генерацию тромбина, угнетается фибринолитическая система за счет уменьшения активности активатора плазминогена урокиназного типа и повышения высвобождения PAI-I [Graham R.L., Baric R.S. 2010; Du L., He Y., Zhou Y., Liu S., Zheng B-J., Jiang S., Lan J., Ge J., Yu J., Shan S., Zhou H., Fan S., Zhang Q., Shi X., Wang Q., Zhang L., Wang X., 2020; Li F., Li W., Farzan M., Harrison S.С. 2005; Khaitovich A.B. Coronaviruses 2020]

Лабораторная диагностика протромботического состояния (тромбинемии) определяет решающую роль как в патогенезе, так и в интенсивной терапии инфекции Covid-19. В настоящее время лабораторными маркерами ковид-ассоциированной коагулопатии и воспаления являются показатели, рекомендованные специалистами ISTH для определения у пациентов с Covid-19 [Временные рекомендации Международного Общества специалистов по Тромбозу и Гемостазу (ISTH) по выявлению и коррекции коагулопатии у пациентов с COVID-19]. При этом следует учитывать, что рекомендуемые стандартные гемостазиологические тесты, такие как протромбиновое время, активированное частичное тромбопластиновое время, уровень Д-димера, фибриногена не способны выявить состояние тромбинемии (гиперкоагуляции, протромботической готовности) при новой короновирусной инфекции и прогнозировать тяжесть протромботического состояния.

Цель предлагаемого способа состояла в поиске молекулярно-генетических маркеров, определяющих генетическую детерминацию к развитию протромботического состояния (тромбинемии) при инфекции Covid-19. То есть, нами выдвигалась гипотеза, согласно которой клиническому проявлению тромбинемии у части пациентов с инфекции Covid-19 может предшествовать наличие наследственного генетически детерминированного тромбофилического состояния, характеризующегося повышенным риском развития нарушения в системе гемостаза и как следствие этого - тромбинемии на фоне носительства полиморфизма в генах PAI-1 6754G/5G, фибриногена и протромбина. В связи с этим мы посчитали возможным в группе пациентов с диагнозом новая коронавирусная инфекция провести молекулярно-генетическое исследование на предмет наличия генетического полиморфизма в системе гемостаза, указывающих на наследственное тромбофилическое состояние, связанное с регуляции кинетики (генерации) тромбина.

Возможным решением данной проблемы может стать использование молекулярно-генетического скрининга на наличие наследственно детерминированной тромбофилии (наследственной тромботической готовности) с использованием метода ПЦР (полимеразно-цепной реакции) -диагностики. Предлагаемый тест является объективным и специфичным методом диагностики наследственно детерминированной тромбинемии и одним из оптимальных методов, коррелирующих с прогнозированием развития протромботического состояния.

В настоящее время изучаются вопросы генетической предрасположенности к короновирусной инфекции. Это изменения в гене АПФ2, которые меняют структуру рецептора и могут облегчить или усложнить вирусу проникновение в клетку, а также в гене белка АРОЕ. Существуют отдельные данные свидетельствующие о том, что дефицит функции белка АроЕ при SARS-CoV-2 может способствовать прогрессированию заболевания и развитию осложнений, обсуждается влияние генов гистосовместимости 1 типа на течение ковид-инфекции [Nersisyan S.A., Shkurnikov M.Y., Osipyants A.I., Vechorko V.I. 2020].

При этом значению наследственных тромбофилий высокого риска при инфекции, вызванной вирусом SARS-CoV-2 не уделяется должного внимания. Известно, что наследственно детерминированные тромбофилии высокого риска такие как мутация фактора II (протромбина), фактора V Лейдена, а также аллельные варианты в гене PAI-1 (ингибитор активатора плазминогена 1-го типа) могут не проявлять себя в течение всей жизни, а при таких триггерах как инфекция, беременность могут манифестировать органными нарушениями с формированием синдрома полиорганной недостаточности (СПОН) на фоне прогрессирования тромбинемии и тромбозами различной локализации. Важно отметить, что результаты молекулярно-генетического анализа для выявления протромбогенного полиморфизма в генах системы гемостаза могут влиять на интенсивность и длительность антитромботической терапии [Bagot C.N., Leishman E., Onyiaodike С.С. et al., 2019; Duarte R.C.F. et al., 2017; Joly B.S. et al., 2018]

В настоящее время не существует достоверного способа прогнозирования тяжести развития протромботического состояния (тромбинемии) при инфекции Covid-19 с использованием молекулярно-генетических маркеров.

Наиболее близким к предлагаемому техническому решению проблемы является способ прогнозирования тяжести острого синдрома диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови с использованием генетического мониторинга [Воробьева Н.А., Недашковский Э.В. Способ прогнозирования тяжести острого синдрома диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови с использованием генетического мониторинга]. Однако данный метод нацелен на выявление и прогнозирование синдрома острого диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови и не при инфекции Covid-19.

Другим близким методом является способ скринингового обследования для выявления групп риска развития гиперкоагуляционного состояния в условиях экспедиционной работы в Арктике [Воробьева Н.А., Воробьева А.И., Мельничук Е.Ю. Способ скринингового обследования для выявления групп риска развития гиперкоагуляционного состояния в условиях экспедиционной работы в Арктике. Патент на изобретение №2767891 от 22 марта 2022 г. ], где тест кинетики тромбина используется у практически здоровых людей для диагностики гиперкоагуляционного состояния в условиях морского арктического рейса. Однако данный метод не предусматривал оценку состояния тромбинемии в условиях системного воспаления, закономерно присутствующего у пациентов с инфекцией Covid-19 и не использует молекулярно-генетический скрининг.

Таким образом в настоящее время используемые и доступные лабораторные тесты не позволяют объективно и достоверно прогнозировать риск развития и тяжесть состояния тромбинемии, протромботической готовности при инфекции Covid-19 на фоне генетической предрасположенности, и, как следствие, выбрать соответствующий оптимальный режим антитромботической терапии (назначение профилактических или терапевтических доз антикоагулянтов) применительно к скринингу данного состояния при тяжелом течении инфекции Covid-19.

Задачей настоящего изобретения является устранение существующих недостатков лабораторных методов прогнозирования риска развития тромбинемии на основе использования молекулярно-генетического метода, на основании которого выносят суждение о возможности риска развития состояния протромботической готовности на фоне генетической предрасположенности к тромбофилии у пациентов с инфекцией Covid-19, на основе чего выбирается соответствующий режим антитромботической профилактики или терапии.

Поставленная задача решается за счет того, что у пациентов с инфекцией Covid-19 проводиться молекулярно-генетический скрининг риска развития тяжелого состояния тромбинемии на фоне генетической предрасположенности к тромбофилии с использованием метода ПЦР-анализа.

В доступных нам литературных источниках мы не обнаружили сведений по использованию молекулярно-генетического метода для скрининга состояния тромботической готовности в условиях инфекции Covid-19, на основе которого выбирался режим антитромботической профилактики или терапии.

Способ осуществляют следующим образом.

У пациентов, госпитализированных в ковидное отделение с подтвержденной методом ПЦР-анализа инфекцией Covid-19 выполняется забор венозной крови объемом 4,5 мл в вакуумный вакутейнер с ЭДТА для выполнения молекулярно-генетического скрининга на наследственную тромбофилию. В качестве материала исследования используется образец геномной ДНК, полученной из лейкоцитов периферической крови по методу Miller S.A. и соавт. Стабилизация крови осуществляется раствором 4% ЭДТА. Для генотипирования аллельного полиморфизма и мутаций испольуется метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) с последующим рестрикционным анализом продукта.

Для объективизации и подтверждения тяжести состояния тромбинемии дополнительно использовался лабораторный метод кинетики тромбина. Определение параметров кинетики тромбина выполняется на автоматическом анализаторе «Ceveron®alpha» с TGA-модулем с использованием реагентов Ceveron TGA High (БиоХимМак). Анализировались параметры кинетики тромбина: время лаг-фазы (tLag), время образования пика тромбина (tPeak), пик тромбина (Peak) и эндогенный потенциал тромбина (AUC). При необходимости возможно провести динамический контроль (мониторинг) показателей кинетики тромбина для контроля эффективности назначенного профилактического или терапевтического режима антитромботической терапии.

Основанием для использования молекулярно-генетического скрининга тромбинемии при инфекции Covid-19 явились результаты проведенного лабораторного анализа у пациентов с индифицированным вирусом SARS-CoV-2, госпитализированных в ковидное отделение ГБУЗ АО «Первая городская клиническая больница им. Е.Е. Волосевич» г. Архангельска. Объектом исследования являлись пациенты со среднетяжелым и тяжелым течением Covid-19, госпитализированные в ГБУЗ АО ПГКБ им. Е.Е. Волосевич г. Архангельска в период с марта 2020 года по май 2021 года. В проспективное клинико-лабораторное исследование были включены 100 пациентов с выделенным вирусом SARS-CoV-2, средний возраст обследуемых составил 63 [31;85] года, преобладали женщины - 60%.

Критериями включения в исследование явились: подтвержденная методом ПЦР анализа инфекция Covid-19; госпитализация в ковидное отделение; письменное добровольное информированное согласие на участие в исследовании; возраст старше 18 лет. Критерии не включения: отказ на участие в исследовании; возраст младше 18 лет. Дизайн исследования был одобрен локальным этическим комитетом Северного государственного медицинского университета.

Исследования состояло из трех точек, в 1-ю точку - при поступлении проводился забор крови для исследования системы гемостаза, ОАК, ферритина СРБ, молекулярно-генетического скрининга, теста генерации тромбина. Во 2 точку - на 4-е сутки госпитализации и 3 точку на 10-е сутки перед выпиской определяли в динамике показатели ОАК, коагулограммы, ферритин, СРБ. Материалом для исследования молекулярно-генетического скрининга являлась венозная кровь, полученная путем венепункции локтевой вены в вакутейнер с ЭДТА. Для анализа коагуляционных показателей (вакутейнер с цитратом натрия) полученные образцы крови центрифугировали при скорости 3000 оборотов в минуту в течении 15 минут. Исходя из временных методических рекомендаций определяли коагулологические показатели (протромбиновое время, Д-димер, АЧТВ, фибриноген) - с использованием реактивов «Diagnostica Stago» на автоматическом коагулометре «StaCompact», Roshe (Швейцария) в течение 30 минут с момента забора крови в вакутейнер [Временные методические рекомендации «Профилактика, диагностика и лечение новой коронавирусной инфекции (COVID-19)». Версия 11 от 07.05.2021 http://nasci.ru/?id=40123&download=1, дата обращения 30 марта 2022]. Дополнительно для оценки степени выраженности тромбинемии определяли показатели кинетики тромбина на автоматическом анализаторе «Ceveron®alpha» с TGA-модулем с использованием реагентов Ceveron TGA High (БиоХимМак). Все лабораторные исследования выполнены на базе Регионального центра антитромботической терапии ГБУЗ Архангельской области «Первая городская клиническая больница им. Е.Е. Волосевич» г. Архангельска.

Статистический анализ выполнен с использованием программы SPSS версия 20,0 и калькулятор MedCalc. Количественные переменные представлены как М (mean) ± SD в случае нормального распределения и Me (median) и 25, 75 percentile при иных распределениях. Количественные переменные сравнивались с использованием параметрических и непараметрических тестов. Достоверными считались различия при р<0,05. Использованы методы корреляционного анализа (коэффициенты линейной корреляции Пирсона и ранговой корреляции Спирмена), регрессионного анализа (множественная линейная регрессия и множественная логистическая регрессия) и ROC-анализ.

Целью исследования явился анализ молекулярно-генетических маркеров у пациентов с коронавирусной инфекцией идентифицированным вирусом SARS-CoV-2 как прогностического триггера развития протромботического состояния (тромбинемии).

Медианный возраст пациентов составил 63 лет, из них женщины - 60 %, 4 класс тяжести короновирусной пневмонии наблюдался в 56% случаях, в меньшем количестве встречались пневмонии КТ-3, КТ-2 (фиг. 1). У госпитализированных пациентов с внегоспитальными пневмониями картина по СКТ соответствовала КТ - 4, госпитальные пневмонии развились у 1/3 пациентов, также преобладали КТ-4.

Сопутствующая патология присутствующая у пациентов представлена на фигуре 2.

Данные проведенного молекулярно-генетического тестирования показали, что самым распространенным аллельным вариантом практически у всех исследуемых генов системы гемостаза явился «дикий тип», лишь в гене PAI-1 преобладал гетерозиготный аллельный вариант (49%), гомозиготный 34%. (таблица 1).

Динамика рутинных лабораторных показателей системы гемостаза у пациентов с Covid-19 представлена в таблице 2.

Было выявлено, что уровень Д-димера статистически значимо повышается к 4-м суткам госпитализации, не смотря на проводимую антикоагулянтную терапию с использованием низкомолекулярных гепаринов, при этом уровень фибриногена и ферритина снижались только к 10-м суткам терапии. При этом важно отметить, что указанные маркеры относятся к лабораторным маркерам как гиперкоагуляции, так и системного воспаления (фиг. 3, 4). Важно отметить, что рутинные клотинговые тесты (АЧТВ, MHO (ПВ) не показали диагностической значимости для выявления состояния тромбинемии.

Далее проанализирована зависимость наличия генетического полиморфизма факторов системы гемостаза FII 20210 G>A, FV 1691 G>A, PAI-1 675 5G>4G с тяжестью тромбинемии у пациентов с Covid-19. Было выявлено статистически значимое увеличение к 4-м суткам уровня фибриногена (более 6,0 г/л; р<0,05) у пациентов с гетерозиготным аллельным вариантом в генах PAI-1, фактора V и II. Д-димер изменялся не достоверно с тенденцией к повышению у большинства пациентов не зависимо от генотипа (таблица 3).

По клиническим рекомендациям научного общества ISTH в наследственным тромбофилиям высокого риска относится полиморфизм (мутация) в генах факторов II и V. Мы проанализировали наличие взаимосвязи генетического полиморфизма в генах фактора протромбина FII 20210 G>A и фактора V Лейден с уровнем тромбинемии у пациентов с Covid-19. Было обнаружено, что уровень тромбинемии был выше у пациентов с наличием генетического полиморфизма в гене фактора протромбина (FII 20210 G>A), а также с наличием генетического полиморфизма в 5 факторе свертывания (фиг. 5).

Проведя регрессионный анализ независимых предикторов тромбинемии и зависимой переменной Д-димера при поступлении (1-е сутки), мы выявили, что риск повышения уровня Д-димера более 0,5 мг/л, возрастал у пациентов с наличием генетического полиморфизма в генах PAI-1 (гетерозиготный аллельный вариант: β 95% ДИ 1,4 [0,6-2,13] р=0,001; гомозиготный: β 95% ДИ 2,0 [0,3-1,5] р=0,008) и гетерозиготного аллельного варианта в гене фактора II (протромбин) (таблица 4).

По данным многофакторного анализа на повышение уровня Д-димера выше референсных значений достоверно влияло наличие аллельного полиморфизма в гене PAI-1 (ОШ [95% ДИ] 1,2 [0,1-2,5] р=0,005) и значения ферритина выше 200 пг/мл (ОШ [95% ДИ] 2,4 [1,1-5,4]; р=0,036) (таблица 5).

Результаты теста кинетики тромбина в нашем исследовании указывали на повышение прокоагулянтного потенциала крови у пациентов с Covid-19 при госпитализации в стационар. Так, было установлено, что статистически значимо укорачивалось время инициации свертывания, время достижения пиковой концентрации тромбина и время увеличения пиковой концентрации тромбина у пациентов в 1-е сутки госпитализации, что свидетельствовало о значимой активации тромбина и состоянии тромбинемии - протромботической активности (таблица 6).

Корреляционный анализ показателя теста генерации тромбина - времени инициации свертывания с генотипом фактора I свертывания (фибриноген), показал отрицательную умеренную взаимосвязь, то есть наличие гетерозиготного полиморфизма в гене фибриногена ассоциировано с уменьшением времени задержки свертывания. Наличие гетерозиготного и гомозиготного полиморфизма в гене фибриногена ассоциировано с увеличением пиковой концентрации тромбина, которая достоверно выше в отличие от пациентов без полиморфизма (фиг. 6).

Наличие гетерозиготного и гомозиготного полиморфизма в гене PAI-1 было ассоциировано с уменьшением времени достижения пика тромбина, т.е. у пациентов с полиморфизмом в гене PAI-1 пик тромбина достигался быстрее (фиг. 7).

Корреляционный анализ уровня эндогенного потенциала тромбина (AUC) и генотипов генов PAI-1, факторов свертывания II и I, показал, что наличие гетерозиготного и гомозиготного полиморфизма в гене фибриногена, PAI-1 ассоциировано с повышением эндогенного потенциала тромбина (фиг. 8).

Таким образом, молекулярно-генетический скрининг на наследственной детерминированную тромбинемию у пациентов с инфекцией Covid-19 показал, что:

1. уровень фибриногена статистически значимо был выше в группах пациентов с наличием генетического полиморфизма в генах FV, FII, PAI-1;

2. при поступлении уровень Д-димера и фибриногена был статистически значимо выше у пациентов с гетерозиготным полиморфизмом в генах FII (протромбина). Результаты линейной регрессии показали положительную статистически значимую зависимость уровня Д-димера с генетическим полиморфизмом в генах FII, PAI-1;

3. многофакторный анализ показал, что высокий уровень Д-димера (более 0,5 мг/л) был ассоциирован с наличием генетического полиморфизма в гене PAI-1;

4. установлено, что статистически значимо снижается время инициации свертывания (Tlag, min), время достижения пиковой концентрации тромбина (tPeak, min) у пациентов с Covid-19 в 1-е сутки госпитализации при наличии генетического полиморфизма в генах фибриногена и PAI-1;

5. продемонстрировано, что повышенная генерация тромбина, проявляющаяся повышенным уровнем эндогенного тромбинового потенциала (AUC), может являться прогностическим признаком протромботического состояния у пациентов с генетическим полиморфизмом в генах PAI-1 и фибриногена.

Таким образом, аллельные варианты в генах PAI-1, протромбина (FII), фибриногена (FI) определяют высокий уровень тромбинемии по показателям теста кинетики тромбина (эндогенного тромбинового потенциала (AUC), пиковой концентрации тромбина (Peak thrombin), времени достижения пика генерации тромбина (tPeak), фибриногена и Д-димера у пациентов с Covid-19 во весь период госпитализации. Выявлена значимая положительная корреляция полиморфизма в генах PAI-1 и фибриногена (FI) с показателем TGA - AUC (rS=0,3; р=0,03 и rS=0,6; р=0,02).

Полученные результаты свидетельствуют о генетической детерминации состояния тромбинемии при наличии у пациентов с новой короновирусной инфекции аллельных вариантов в генах PAI-1, протромбина (фактора II) и фибриногена (фактора I).

Таким образом, молекулярно-генетический скрининг на наличие наследственно детерминированной тромбинемии может рассматриваться в качестве прогностического маркера развития состояния тромбинемии - протромботической готовности у пациентов с среднетяжелым и тяжелым течением новой короновирусной инфекцией.

Представляем несколько клинических примеров, демонстрирующих значимость молекулярно-генетического скрининга для прогнозирования состояния тромбинемии в условиях инфекции Covid-19.

Клинические примеры.

1. Пациент Р., мужчина 69 года. Сопутствующие заболевания (коморбитность) - гипертоническая болезнь III ст., риск 3, сахарный диабет 2 типа, ИМТ 38 кг/м2, курит. КТ-3 - среднетяжелая пневмония, поражено 50-75% легких. В анамнезе - тромбоз подколенной вены правой нижней конечности 6 лет назад. Данные молекулярно-генетического скрининга - носитель гетерозиготного полиморфизма в гене PAI-1.

Уровень Д-димера - без динамики. Показатели теста генерации тромбина в динамике - состояние тромбинемии при поступлении и регрессия тромбинемии при назначении антитромботической терапии надропарином в терапевтической дозе (не профилактической). Выздоровление.

2. Пациентка С., женщина 82 года. Сопутствующие заболевания (коморбитность) - гипертоническая болезнь III ст., риск 4, сахарный диабет 2 типа, ИМТ 29 кг/м², не курит. КТ-4 -тяжелая пневмония, поражено более 75% легких. В анамнезе - перенесенная тромбоэмболия легочной артерии низкого риска 12 лет назад. Данные молекулярно-генетического скрининга - носитель гетерозиготного полиморфизма в гене протромбина.

Уровень Д-димера - без динамики. Показатели теста генерации тромбина в динамике - состояние тромбинемии при поступлении и регрессия тромбинемии при назначении антитромботической терапии надропарином в терапевтической дозе (не профилактической). Выздоровление через тяжелый постковидный синдром.

3. Пациентка П., женщина 78 года. Сопутствующие заболевания (коморбитность) - ОНМК 4 года назад, гипертоническая болезнь III ст., риск 4, сахарный диабет 2 типа, ИМТ 34 кг/м², не курит. КТ-3 - среднетяжелая пневмония, поражено 50-75% легких. В анамнезе - перенесенное ОНМК 4 года назад. Данные молекулярно-генетического скрининга - носитель гомозиготного полиморфизма в гене фибриногена.

Уровень Д-димера - без динамики. Показатели теста генерации тромбина в динамике - состояние тромбинемии при поступлении и регрессия тромбинемии при назначении антитромботической терапии надропарином в терапевтической дозе (не профилактической). Выздоровление

4. Пациент М., мужчина 58 года. Сопутствующие заболевания (коморбитность) - сахарный диабет 2 типа, ИМТ 28 кг/м², ХОБЛ, курит. КТ-3 - среднетяжелая пневмония, поражено 50-75% легких. В анамнезе - перенесенная тромбоэмболия легочной артерии низкого риска 7 лет назад. Данные молекулярно-генетического скрининга - носитель гетерозиготного полиморфизма в гене протромбина.

Уровень Д-димера - без динамики. Показатели теста генерации тромбина в динамике - состояние тромбинемии при поступлении и регрессия тромбинемии при назначении антитромботической терапии надропарином в терапевтической дозе (не профилактической). Выздоровление через фиброз легкого.

5. Пациент О., мужчина 47 года. Сопутствующие заболевания (коморбитность) - гипертоническая болезнь III ст., риск 4, ИМТ 32 кг/м², не курит. КТ-3 - среднетяжелая пневмония, поражено 50-75% легких. В анамнезе - перенесенный флеботромбоз левой нижней конечности с признаками флотации 16 лет назад. Данные молекулярно-генетического скрининга - носитель гетерозиготного полиморфизма в гене PAI-1.

Данные настоящего проспективного клинического исследования демонстрируют полезность предложенного молекулярно-генетического скрининга состояния тромбинемии при инфекции Covid-19. Врач-клиницист «красной» зоны ковидного госпиталя получает дополнительный объективный показатель, указывающий на возможность прогнозирования состояния тромбинемии на фоне острого воспаления при инфекции Covid-19. Мониторинг наличия генетического полиморфизма в медицине критических состояний необходим при проведении патогенетической оправданной терапии, а также в превентивных целях. Полученные результаты указывают на возможные молекулярные механизмы состояния тромбинемии при инфекции Covid-19, и свидетельствуют о целесообразности широкого внедрения методов ДНК-диагностики в клиническую практику для оценки тяжести и прогнозирования протромбогенного состояния.

Сведения об известных аналогах

1. Воробьева Н.А., Недашковский Э.В. Способ прогнозирования тяжести острого ДВС-синдрома с использованием генетического мониторинга Патент на изобретение №2303262 от 20 июля 2007.

2. Воробьева Н.А., Воробьева А.И. Способ прогнозирования флотации тромба в системе нижней полой вены с дополнительным использованием молекулярно-генетического мониторинга Патент на изобретение №2517215 от 18 марта 2014 г.

3. Garred P, J Strom J, Quist L, Taaning E, Madsen HO. Association of mannose-binding lectin polymorphisms with sepsis and fatal outcome, in patients with systemic inflammatory response syndrome. J Infect Dis. 2003 Nov 1; 188(9): 1394-403. Epub 2003 Oct 15.

4. Gordon AC, Lagan AL, Aganna E, Cheung L, Peters CJ, McDermott MF, Millo JL, Welsh KI, Holloway P, Hitman GA, Piper RD, Garrard CS, Hinds CJ.TNF and TNFR polymorphisms in severe sepsis and septic shock: a prospective multicentre study. Genes Immun. 2004 Nov 04; [Epub ahead of print].

5. Haralambous E, Hibberd ML, Hermans PW, Ninis N, Nadel S, Levin M. Role of functional plasminogen-activator-inhibitor-1 4G/5G promoter polymorphism in susceptibility, severity, and outcome of meningococcal disease in Caucasian children. Crit Care Med. 2003 Dec;31(12):2788-93.

Claims

Способ диагностики развития состояния тромбинемии у пациентов с инфекцией Covid-19, отличающийся тем, что у пациентов с инфекцией Covid-19 среднетяжелого и тяжелого течения проводится забор венозной крови объемом 4,5 мл в вакуумный вакутейнер с ЭДТА, проводят молекулярно-генетический анализ системы гемостаза методом полимеразной цепной реакции с последующим рестрикционным анализом продукта и при детекции генотипа -675 4G/4G или -675 4G/5G гена PAI-1 rs1799889, или генотипа 20210 (G/A) гена Factor II rs1799963, или генотипа -455 G/A или -455 А/А гена Factor I rs1800790 диагностируют тромбинемию у пациентов с инфекцией Covid-19.