RU2790468C1 - Method for predicting the appearance of distant metastases of melanoma of the choroid - Google Patents
Method for predicting the appearance of distant metastases of melanoma of the choroid Download PDFInfo
- Publication number
- RU2790468C1 RU2790468C1 RU2022112110A RU2022112110A RU2790468C1 RU 2790468 C1 RU2790468 C1 RU 2790468C1 RU 2022112110 A RU2022112110 A RU 2022112110A RU 2022112110 A RU2022112110 A RU 2022112110A RU 2790468 C1 RU2790468 C1 RU 2790468C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- appearance
- tumor
- metastases
- predicting
- distant
- Prior art date
Links
Abstract
Description
Изобретение относится к медицине, в частности к специальности Патологическая анатомия, Офтальмология, Онкология. Предлагаемый способ информативен и может быть применен в работе врача-патологоанатома на этапе хирургического лечения меланомы хориоидеи (MX) в ходе прижизненного патолого-анатомического исследования операционного материала энуклеированных глаз на основании разработанной модели прогнозирования появления отдаленных метастазов MX, которая с чувствительностью 83,3% и специфичностью 92% позволяет прогнозировать появление вторичных очагов опухоли.The invention relates to medicine, in particular to the specialty Pathological Anatomy, Ophthalmology, Oncology. The proposed method is informative and can be applied in the work of a pathologist at the stage of surgical treatment of choroidal melanoma (MX) during an intravital pathological and anatomical study of the surgical material of enucleated eyes based on the developed model for predicting the appearance of distant MX metastases, which, with a sensitivity of 83.3% and specificity of 92% allows predicting the appearance of secondary tumor foci.
Данный способ позволяет спрогнозировать появление отдаленных метастазов MX на основе количественных показателей лимфоцитов и макрофагов, а также количественных показателей объемной плотности кровеносных сосудов в опухоли.This method makes it possible to predict the appearance of distant MX metastases based on the quantitative indicators of lymphocytes and macrophages, as well as quantitative indicators of the volumetric density of blood vessels in the tumor.
Ранняя диагностика метастазов, а также прогнозирование их появления при различных злокачественных новообразованиях (ЗНО) является актуальной в современной онкоморфологии с целью формирования скрининговых групп пациентов, потенциально угрожаемых по развитию метастатической болезни, а также для дальнейшей разработки углубленного клинико-инструментального дообследования и возможных подходов к лечебной тактике ведения.Early diagnosis of metastases, as well as prediction of their appearance in various malignant neoplasms (MNs), is relevant in modern oncomorphology in order to form screening groups of patients potentially threatened by the development of metastatic disease, as well as for the further development of in-depth clinical and instrumental additional examination and possible approaches to treatment. management tactics.
MX метастазирует вне зависимости от метода проведенного лечения. Таким образом прогнозирование появления ее вторичных очагов - актуальная проблема современной офтальмоонкологии. MX преимущественно метастазирует гематогенным путем, существенно снижая показатели выживаемости пациентов с данной патологией. Процессы ангиогенеза в опухоли, а также склонность атипичных клеток к «васкулярной мимикрии» играют важную роль в развитии отдаленных метастазов [Grossniklaus Н.Е., Eberhart C.G., Kivela T.T., editors (2018). WHO Classification of tumours of the eye. 4th edition. Lyon: IARC. 228р.]. При этом, вне зависимости от метода лечения, отдаленные метастазы могут выявляться с частотой в диапазоне 12-50% [Li Y, Shi J, Yang J, Ge S, Zhang J, Jia R, Fan X. Uveal melanoma: progress in molecular biology and therapeutics. Ther Adv Med Oncol. 2020; 12:1758835920965852. DOI: 10.1177/1758835920965852.; Beran TM, McCannel ТА, Stanton AL, Straatsma BR, Burgess BL. Reactions to and desire for prognostic testing in choroidal melanoma patients. Journal of genetic counseling. 2009;18(3):265-274. DOI: 10.1007/s 10897-009-9223-2; Damato BE, Heimann H, Kalirai H, Coupland SE. Age, survival predictors, and metastatic death in patients with choroidal melanoma: tentative evidence of a therapeutic effect on survival. JAMA ophthalmology. 2014;132 (5):605-13. DOI: 10.1001/jamaophthalmol.2014.77.; Панова И.Е., Власова O.C., Гюнтнер Е.И., Самкович Е.В., Шаманова А.Ю. Клинико-инструментальные критерии риска метастазирования меланомы хориоидеи. Российский офтальмологический журнал. 2019;12(3):30-36. DOI: 10.21516/2072-0076-2019-12-3-30-36; Panova IE, Vlasova OS, Gyuntner EI, Samkovich EV, Shamanova AYu. Clinical and instrumental criteria for the risk of metastasis of choroid melanoma. Russian Ophthalmological Journal. 2019;12(3):30-36 (in Russ.). DOI: 10.21516/2072-0076-2019-12-3-30-36; Pham ChM, Custer PL, Couch SM. Comparison of primary and secondary enucleation for uveal melanoma. Orbit. 2017; 36(6):422-427. DOI: 10.1080/01676830.2017.1337183].MX metastasizes regardless of the method of treatment. Thus, predicting the appearance of its secondary foci is an urgent problem of modern ophthalmo-oncology. MX predominantly metastasizes via the hematogenous route, significantly reducing the survival rates of patients with this pathology. The processes of angiogenesis in the tumor, as well as the tendency of atypical cells to "vascular mimicry" play an important role in the development of distant metastases [Grossniklaus H.E., Eberhart C.G., Kivela T.T., editors (2018). WHO Classification of tumors of the eye. 4th edition. Lyon: IARC. 228r.]. At the same time, regardless of the method of treatment, distant metastases can be detected with a frequency in the range of 12-50% [Li Y, Shi J, Yang J, Ge S, Zhang J, Jia R, Fan X. Uveal melanoma: progress in molecular biology and therapeutics. Ther Adv Med Oncol. 2020; 12:1758835920965852. DOI: 10.1177/1758835920965852.; Beran TM, McCannel TA, Stanton AL, Straatsma BR, Burgess BL. Reactions to and desire for prognostic testing in choroidal melanoma patients. Journal of genetic counseling. 2009;18(3):265-274. DOI: 10.1007/s 10897-009-9223-2; Damato BE, Heimann H, Kalirai H, Coupland SE. Age, survival predictors, and metastatic death in patients with choroidal melanoma: tentative evidence of a therapeutic effect on survival. JAMA ophthalmology. 2014;132(5):605-13. DOI: 10.1001/jamaophthalmol.2014.77.; Panova I.E., Vlasova O.S., Guntner E.I., Samkovich E.V., Shamanova A.Yu. Clinical and instrumental criteria for the risk of metastasis of choroidal melanoma. Russian ophthalmological journal. 2019;12(3):30-36. DOI: 10.21516/2072-0076-2019-12-3-30-36; Panova IE, Vlasova OS, Gyuntner EI, Samkovich EV, Shamanova AYu. Clinical and instrumental criteria for the risk of metastasis of choroid melanoma. Russian Ophthalmological Journal. 2019;12(3):30-36 (in Russ.). DOI: 10.21516/2072-0076-2019-12-3-30-36; Pham ChM, Custer PL, Couch SM. Comparison of primary and secondary enucleation for uveal melanoma. Orbit. 2017; 36(6):422-427. DOI: 10.1080/01676830.2017.1337183].
Последние годы обсуждается взаимодействие между клетками увеальной меланомы и ее микроокружением (лимфоциты, макрофаги), а также противоопухолевое и проопухолевое воздействие последних. Авторами показано, что к факторам неблагоприятного прогноза MX относятся повышенная инфильтрация MX туморинфильтрирующими лимфоцитами, макрофагами, пожилой возраст пациента, развитая сосудистая сеть [Impact of macrophages on tumor growth characteristics in a murine ocular tumor model /Stei M.M., Loeffler K.U., Kurts C, Hoeller Т., Pfarrer C, Holz F.G., Herwig-Carl M.C. // Exp Eye Res. - 2016. - 151. - P. 9-18. doi: 10.1016/j.exer.2016.07.008.; Makitie Т., Summanen P., Tarkkanen A.,Kivela T. Tumor-infiltrating macrophages (CD68(+) cells) and prognosis in malignant uveal melanoma / Invest Ophthalmol Vis Sci. - 2001. - 42(7). - P. 1414-21.].In recent years, the interaction between uveal melanoma cells and its microenvironment (lymphocytes, macrophages), as well as the antitumor and protumor effects of the latter, has been discussed. The authors showed that the factors of unfavorable prognosis of MX include increased infiltration of MX by tumor-filtering lymphocytes, macrophages, advanced age of the patient, developed vascular network [Impact of macrophages on tumor growth characteristics in a murine ocular tumor model /Stei M.M., Loeffler K.U., Kurts C, Hoeller T., Pfarrer C, Holz F.G., Herwig-Carl M.C. // Exp Eye Res. - 2016. - 151. - P. 9-18. doi: 10.1016/j.exer.2016.07.008.; Makitie T., Summanen P., Tarkkanen A., Kivela T. Tumor-infiltrating macrophages (CD68(+) cells) and prognosis in malignant uveal melanoma / Invest Ophthalmol Vis Sci. - 2001. - 42(7). - P. 1414-21.].
В некоторых работах показано, что для выявления скрытого метастазирования увеальных меланом возможно исследовать иммунологические параметры (уровень лимфоцитов) в сыворотке крови пациентов [Патент №2147373 Российская Федерация, МПК G01N 33/53. Способ выявления скрытого метастазирования при увеальной меланоме: заявл. 19.06.1998: опубл. 10.04.2000 / Лихванцева В.Г., Бровкина А.Ф., Гусев Г.А., Юровская Н.Н.; заявитель Московский НИИ глазных болезней имени Гельмгольца. - 9 с.]. Данный способ успешно применяется для иммунологического исследования сыворотки крови, но имеют ограниченное применение, так как не позволяют оценить клеточное микроокружение в самой опухоли меланомах хориоидеи при прижизненном патологоанатомическом "исследовании операционного материала энуклеированных глаз. Данный способ взят нами за прототип.Some studies have shown that in order to detect latent metastasis of uveal melanomas, it is possible to study immunological parameters (lymphocyte level) in the blood serum of patients [Patent No. 2147373 Russian Federation, IPC G01N 33/53. A method for detecting latent metastasis in uveal melanoma: Appl. 06/19/1998: publ. 04/10/2000 / Likhvantseva V.G., Brovkina A.F., Gusev G.A., Yurovskaya N.N.; Applicant Moscow Research Institute of Eye Diseases named after Helmholtz. - 9 p.]. This method has been successfully used for immunological examination of blood serum, but is of limited use, since it does not allow assessing the cellular microenvironment in the choroidal melanoma tumor itself during an in vivo pathoanatomical study of the surgical material of enucleated eyes. This method was taken by us as a prototype.
А также известен способ оценки степени васкуляризации ткани, основанный на определении кровеносных сосудов в ткани ИГХ-методом с антителом CD34 и измерении удельной плотности кровеносных сосудов [Патент №2366951 Российская Федерация, МПК G01N 33/483. Способ оценки степени васкуляризации: 2019140755: заявл. 31.03.2008: опубл. 10.09.2009 / Завалишина Л.Э., Андреева Ю.Ю., Франк Г.А., Петров А.Н., Батева М.В.; заявитель ФГУ МНИОИ им. П.А. Герцена Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи. - 6 с.]. Данный способ успешно применяется для иммуногистохимических исследований по специальности Патологическая анатомия, позволяет определить удельную плотность сосудов на единицу площади образца исследуемой ткани -отношение количества сосудов к площади исследуемой ткани. Данный способ имеет ограниченное применение, так как при данном способе оценивается только количество сосудов и не учитывается площадь просветов сосудов. Данный способ взят нами за прототип.And there is also a method for assessing the degree of tissue vascularization, based on the determination of blood vessels in the tissue by the IHC method with the CD34 antibody and the measurement of the specific density of blood vessels [Patent No. 2366951 Russian Federation, IPC G01N 33/483. Method for assessing the degree of vascularization: 2019140755: Appl. 03/31/2008: publ. 09/10/2009 / Zavalishina L.E., Andreeva Yu.Yu., Frank G.A., Petrov A.N., Bateva M.V.; applicant FGU MNIOI them. P.A. Herzen of the Federal Agency for High-Tech Medical Care. - 6 s.]. This method is successfully used for immunohistochemical studies in the specialty Pathological Anatomy, allows you to determine the specific density of blood vessels per unit area of the sample of the tissue under study - the ratio of the number of vessels to the area of the tissue under study. This method has limited application, since this method evaluates only the number of vessels and does not take into account the area of the lumen of the vessels. This method is taken by us as a prototype.
В основу предлагаемого способа положена задача, заключающаяся в определении количества CD4- Т-лимфоцитов хелперов/индукторов, CD68, Macrophage - макрофагов и объемной плотности кровеносных сосудов (иммунореактивных к CD34) в опухоли в ходе ИГХ исследования операционного материала энуклеированных глаз с опухолью и оценки полученных показателей относительно статистически достоверно рассчитанных пороговых уровней исследуемых параметров.The proposed method is based on the task of determining the number of CD4-T-lymphocytes helpers / inducers, CD68, Macrophage - macrophages and the volume density of blood vessels (immunoreactive to CD34) in the tumor during the IHC study of the surgical material of enucleated eyes with a tumor and evaluation of the obtained indicators relative to statistically reliably calculated threshold levels of the studied parameters.
Данный способ подразумевает использование комбинации широко применяемых в патологической анатомии стандартных методов ИГХ -исследования с использованием нами предлагаемой комбинации маркеров (антител) для обнаружения эндотелия кровеносных сосудов (CD34), макрофагов (CD68, Macrophage), Т лимфоцитов хелперов / индукторов (CD 4). Использование конкретной комбинации исследований обусловлено задачей предлагаемого способа, которой является обнаружение и количественная оценка исследуемых клеток и сосудов для дальнейшего прогнозирования появления отдаленных метастазов меланомы хориоидеи.This method involves the use of a combination of standard IHC methods widely used in pathological anatomy with the use of our proposed combination of markers (antibodies) for the detection of blood vessel endothelium (CD34), macrophages (CD68, Macrophage), helper/inducer T lymphocytes (CD 4). The use of a specific combination of studies is due to the objective of the proposed method, which is the detection and quantification of the studied cells and vessels for further prediction of the appearance of distant metastases of choroidal melanoma.
Изготовление ИГХ-микропрепаратов опухоли проводится стандартными методиками.The preparation of IHC-micropreparations of the tumor is carried out by standard methods.
Раскрытие предлагаемого способаDisclosure of the proposed method
Технический результат - обеспечение возможности прогнозирования появления отдаленных метастазов MX на основе количественных показателей лимфоцитов и макрофагов, объемной плотности кровеносных сосудов в опухоли.EFFECT: providing the possibility of predicting the appearance of distant MX metastases based on the quantitative indicators of lymphocytes and macrophages, the volumetric density of blood vessels in the tumor.
Предлагаемый способ включает в себя следующие этапы проведения:The proposed method includes the following steps:
1. Тканевой образец опухоли (меланомы хориоидеи), полученный после хирургического лечения (энуклеации), фиксируют в 10% забуференом формалине в течении 24 часов.1. A tissue sample of a tumor (choroidal melanoma) obtained after surgical treatment (enucleation) is fixed in 10% buffered formalin for 24 hours.
2. Осуществляют механизированную проводку материала в гистологическом процессоре в соответствии с программой аппарата Sakura, Tissue-Tek Xpress х50.2. Carry out mechanized wiring of the material in the histological processor in accordance with the program of the Sakura apparatus, Tissue-Tek Xpress x50.
3. Заливают тканевой материал в парафиновые блоки и нарезают гистологические срезы на микротоме, тканевые срезы толщиной до 4 мкм (для дальнейшего ИГХ -исследования).3. Tissue material is poured into paraffin blocks and histological sections are cut on a microtome, tissue sections up to 4 μm thick (for further IHC studies).
4. Осуществляют постановку ИГХ-реакции в аппаратах согласно стандартным протоколам проведения исследования в аппаратах:4. The IHC reaction is carried out in devices according to standard protocols for conducting research in devices:
A. в аппарате для иммуногистохимии «Бонд - III» (Bond- III) с принадлежностями 2020 используют антитела CD68 (514Н12) (Bond).A. The Bond-III immunohistochemistry apparatus with accessories 2020 uses CD68 (514H12) antibodies (Bond).
При помощи автоматических устройств Ventana BenchMark. используют антитела к эндотелию кровеносных сосудов CD34 (Clone QBEnd 10), первичное антитело Ready-to-use (Ventana)); к Т-лимфоцитам хелперам/индукторам CD4 (Clone SP35) первичное антитело Ready-to-use (Ventana)); Macrophage (Clone HAM56) (Ventana).Using automated Ventana BenchMark devices. using antibodies to the endothelium of blood vessels CD34 (Clone QBEnd 10), primary antibody Ready-to-use (Ventana)); to T-lymphocytes helpers/inducers of CD4 (Clone SP35) primary antibody Ready-to-use (Ventana)); Macrophage (Clone HAM56) (Ventana).
Б. в иммуностейнере автоматическом Ventana BenchMark ULTRA IHC/ISH system используют антитела CD34 (Clone QBEnd 10), CD4 (Clone SP35), Macrophage (Clone HAM56).B. in the Ventana BenchMark ULTRA IHC / ISH system automatic immunostainer, CD34 (Clone QBEnd 10), CD4 (Clone SP35), Macrophage (Clone HAM56) antibodies are used.
B. В аппарате для иммуногистохимии «Бонд - III» (Bond- III) с принадлежностями 2020 используют антитела к макрофагам (CD68 (Clone 514Н12) первичное антитело Ready-to-use (Bond)).B. The Bond-III immunohistochemistry apparatus with accessories 2020 uses antibodies to macrophages (CD68 (Clone 514H12) Ready-to-use primary antibody (Bond)).
5. Оценить приготовленные гистологические препараты с помощью световой микроскопии с оценкой области опухоли на 10 полей зрения при увеличении микроскопа 400. Сформировать оцифрованное электронное изображение микропрепарата (приготовленные микропрепараты фотографируются через встроенную в световой микроскоп камеру или сканируются в гистосканере) с использованием стандартных прикладных компьютерных программ проводят количественное вычисление исследуемых параметров с подсчетом на 10 полей зрения при увеличении 400.5. Evaluate the prepared histological preparations using light microscopy with an assessment of the tumor area at 10 fields of view at a microscope magnification of 400. Form a digitized electronic image of the micropreparation (prepared micropreparations are photographed through a camera built into the light microscope or scanned in a histoscanner) using standard applied computer programs. quantitative calculation of the studied parameters counting for 10 fields of view at a magnification of 400.
Этапы постановки ИГХ-реакции:Stages of setting up the IHC reaction:
1. Приготовить парафиновые срезы ткани опухоли (меланомы хориоидеи) на стеклах с адгезивным покрытием, покрытых поли-L-лизином1. Prepare paraffin sections of tumor tissue (choroidal melanoma) on adhesive-coated slides coated with poly-L-lysine
2. Поместить стекла с размещенными на них тканевыми срезами в термостат на 24 часа при температуре 60,2 градусов по Цельсию.2. Place the slides with tissue sections placed on them in a thermostat for 24 hours at a temperature of 60.2 degrees Celsius.
3. Поместить стекла с размещенными на них тканевыми срезами в аппараты: аппарат для иммуногистохимии «Бонд - III» (Bond- III) с принадлежностями 2020; в иммуностейнер автоматический Ventana BenchMark ULTRA IHC/ISH system3. Place the slides with tissue sections placed on them into the devices: apparatus for immunohistochemistry "Bond-III" (Bond-III) with accessories 2020; in automatic immunostainer Ventana BenchMark ULTRA IHC/ISH system
4. Провести автоматизировано депарафинирование срезов ткани опухоли, предварительную обработку, нанесение первичных антител, инкубацию с антителами CD34 (Clone QBEnd 10) (Ventana), CD4 (Clone SP35), Macrophage (Clone HAM56), CD68 (Clone 514H12) (Bond), докрашивание гематоксилином в соответствии с инструкциями и протоколами работы с данными антителами аппаратов.4. Carry out automated deparaffinization of tumor tissue sections, pretreatment, application of primary antibodies, incubation with antibodies CD34 (Clone QBEnd 10) (Ventana), CD4 (Clone SP35), Macrophage (Clone HAM56), CD68 (Clone 514H12) (Bond), staining with hematoxylin in accordance with the instructions and protocols for working with these antibodies of the apparatus.
Принцип окрашивания при ИГХ-исследовании:Staining principle for IHC study:
В соответствии с инструкциями к аппаратам и антителам продукты реакции преципитируются с комплексом антиген-антитело, окрашивая его в коричневый цвет и его оттенки. Гематоксилин обеспечивает визуализацию ядер клеток в срезах.In accordance with the instructions for the apparatus and antibodies, the reaction products are precipitated with the antigen-antibody complex, staining it in brown and its shades. Hematoxylin provides visualization of cell nuclei in sections.
В результате окраски гематоксилином ядра клеток приобретают синий либо сине-фиолетовый цвет.As a result of staining with hematoxylin, the cell nuclei acquire a blue or blue-violet color.
5. Стекла со срезами после протокола проводки в аппарате Ventana промыть в теплой мыльной воде. Провести дегидратацию тканевых срезов по протоколу изопропиловой проводки в аппарате карусельного типа Sakura, Tissue-Tek Xpress х50 в течении 1 минуты дважды в изопропиловом спирте (Изопреп (Biovitrum)), по 1 мин дважды в ксилоле (Xylen for histology). Провести автоматизированное покрытие тканевых срезов на стеклах под покровную пленку в аппарате Sakura, Tissue-Tek Film.5. Wash the slides with sections after the wiring protocol in the Ventana apparatus in warm soapy water. Carry out dehydration of tissue sections according to the protocol of isopropyl wiring in a carousel-type apparatus Sakura, Tissue-Tek Xpress x50 for 1 minute twice in isopropyl alcohol (Isoprep (Biovitrum)), 1 minute twice in xylene (Xylen for histology). Carry out automated coating of tissue sections on slides under the cover film in the Sakura, Tissue-Tek Film apparatus.
6. Стекла со срезами после протокола проводки в аппарате Bond поместить для автоматизированного покрытия тканевых срезов под покровную пленку в аппарат Sakura, Tissue-Tek Film.6. Place slides with sections after the Bond protocol for automated coating of tissue sections under the cover film in the Sakura, Tissue-Tek Film apparatus.
Оценить приготовленные гистологические препараты с помощью световой микроскопии с оценкой области опухоли на 10 полей зрения при увеличении микроскопа 400. При этом участки микропрепарата, содержащие иммунопозитивный компонент, окрашиваются в коричневый цвет и его оттенки, маркируют кровеносные сосуды (при проведении реакции с антителами к CD34), Т-лимфоциты хелперы/индукторы (с антителами к CD4), макрофаги (с антителами к CD68, Macrophage), а иммунонегативные - окрашиваются в сине-фиолетовый и оттенки синего или серого цветов [Руководство по иммуногистохимической диагностике опухолей человека. - 4-е изд., доп. И перераб./ Под ред. С.В. Петрова, Н.Т. Райхлина. - Казань, 2012. - 624 с.]. Использование конкретной комбинации маркеров обусловлено задачей предлагаемого способа, которой является обнаружение и количественная оценка объемной плотности кровеносных сосудов в MX, количества инфильтрирующих ткань опухоли макрофагов и Т-лимфоцитов хелперов/индукторов. Таким образом, в ходе анализа ИГХ-микропрепаратов проводится оценка по интенсивной окраске данных клеток коричневым хромогеном с последующим подсчетом количества клеток.Evaluate the prepared histological preparations using light microscopy with an assessment of the tumor area at 10 fields of view at a microscope magnification of 400. In this case, the sections of the micropreparation containing the immunopositive component are stained in brown and its shades, mark the blood vessels (when carrying out a reaction with antibodies to CD34) , T-lymphocytes helpers / inducers (with antibodies to CD4), macrophages (with antibodies to CD68, Macrophage), and immunonegative - stained in blue-violet and shades of blue or gray [Guidelines for the immunohistochemical diagnosis of human tumors. - 4th ed., add. And revised / Ed. S.V. Petrova, N.T. Raikhlin. - Kazan, 2012. - 624 p.]. The use of a specific combination of markers is due to the objective of the proposed method, which is the detection and quantification of the volumetric density of blood vessels in MX, the number of macrophages infiltrating the tumor tissue and helper/inducer T-lymphocytes. Thus, during the analysis of IHC micropreparations, an assessment is made by the intense staining of these cells with a brown chromogen, followed by counting the number of cells.
В предлагаемом способе для прогнозирования отдаленных метастазов MX предлагается количественно определять параметры с комбинацией иммуногистохимических маркеров (антител) для обнаружения эндотелия кровеносных сосудов (CD34), CD 4- Т-лимфоцитов и макрофагов (CD68, Macrophage) [Руководство по иммуногистохимической диагностике опухолей человека. - 4-е изд., доп. И перераб./ Под ред. С.В. Петрова, Н.Т. Райхлина. - Казань, 2012. - 624 с.]. Использование конкретной комбинации маркеров обусловлено задачей предлагаемого способа, которой является обнаружение и количественный подсчет в опухоли объемной плотности кровеносных сосудов, количества макрофагов и Т-лимфоцитов хелперов/индукторов.In the proposed method for predicting distant MX metastases, it is proposed to quantify parameters with a combination of immunohistochemical markers (antibodies) to detect blood vessel endothelium (CD34), CD 4-T-lymphocytes and macrophages (CD68, Macrophage) [Guidelines for the immunohistochemical diagnosis of human tumors. - 4th ed., add. And revised / Ed. S.V. Petrova, N.T. Raikhlin. - Kazan, 2012. - 624 p.]. The use of a specific combination of markers is due to the objective of the proposed method, which is the detection and quantitative calculation of the volumetric density of blood vessels in the tumor, the number of macrophages and helper/inducer T-lymphocytes.
Формируется оцифрованное электронное изображение микропрепарата (приготовленные микропрепараты фотографируются через встроенную в световой микроскоп камеру или сканируются в гистосканере) с использованием стандартных прикладных компьютерных программ проводят количественное вычисление исследуемых параметров с подсчетом на 10 полей зрения при увеличении 400.A digitized electronic image of a micropreparation is formed (prepared micropreparations are photographed through a camera built into a light microscope or scanned in a histoscanner) using standard applied computer programs, quantitative calculation of the studied parameters is carried out counting for 10 fields of view at a magnification of 400.
При патологоанатомическом исследовании энуклеированных глаз никакие манипуляции с пациентами не проводятся.During pathoanatomical examination of enucleated eyes, no manipulations with patients are carried out.
Для определения пороговых показателей исследуемых параметров в MX, для решения вышеуказанной задачи были исследованы 50 случая с меланомой хориоидеи (MX): 1 группа исследования представлена случаями MX без отдаленных метастазов (N=30) и 2 группа - с верифицированными отдаленными метастазами меланомы хориоидеи (в печень) (N=20).To determine the threshold values of the studied parameters in MX, to solve the above problem, 50 cases with choroidal melanoma (MX) were studied: the 1st group of the study was represented by cases of MX without distant metastases (N=30) and the 2nd group - with verified distant metastases of choroidal melanoma (in liver) (N=20).
Проведены гистологическое и иммуногистохимическое исследование (ИГХ) тканевых образцов с антителами к CD68, Macrophage для идентификации макрофагального звена клеточного окружения MX, CD 4- Т-лимфоцитов хелперов/индукторов, маркера к эндотелию кровеносных сосудов (CD 34). Для получения математической модели (уравнения) прогноза нами был проведен множественный логистический регрессионный анализ с принудительным включением трех переменных: показателей объемной плотности кровеносных сосудов (ИГХ исследование с использованием CD34), количество Т-лимфоцитов индукторов/хелперов CD4, количество макрофагов CD68, Macrophage. Проверка статистических гипотез показала, что уравнение (р<0,001) и его коэффициенты являются статистически значимыми (таблица 1).Histological and immunohistochemical studies (IHC) of tissue samples with antibodies to CD68, Macrophage were carried out to identify the macrophage element of the cellular environment MX, CD 4-T-lymphocytes helpers/inducers, a marker to the endothelium of blood vessels (CD 34). To obtain a mathematical model (equation) of the prediction, we performed a multiple logistic regression analysis with the forced inclusion of three variables: blood vessel volumetric density (IHC study using CD34), the number of CD4 inducer/helper T-lymphocytes, the number of CD68 macrophages, Macrophage. Testing statistical hypotheses showed that the equation (p<0.001) and its coefficients are statistically significant (Table 1).
гдеWhere
Р - вероятность появления метастазов опухоли.P is the probability of occurrence of tumor metastases.
Данная модель с чувствительностью 83,3% и специфичностью 92% позволяет прогнозировать появление метастазов MX, если рассчитанная по формуле вероятность Р - будет больше 0,5. Общий процент правильно классифицированных наблюдений составил 88,4%.This model, with a sensitivity of 83.3% and a specificity of 92%, makes it possible to predict the occurrence of MX metastases if the probability P - calculated by the formula is greater than 0.5. The overall percentage of correctly classified observations was 88.4%.
Применение данного способа в патологической анатомии, в онкологии позволит уже на этапе хирургического, лечения прогнозировать у пациентов появление отдаленных метастазов MX и в дальнейшем разрабатывать для данной категории больных прицельную скрининговую диагностику метастазов с целью раннего их обнаружения и коррекции тактики лечения.The use of this method in pathological anatomy, in oncology will allow, already at the stage of surgical treatment, to predict the appearance of distant MX metastases in patients and further develop targeted screening diagnostics of metastases for this category of patients in order to detect them early and correct treatment tactics.
Исходя из вышеперечисленного можно сделать вывод о том, что исследуемый способ информативен в отношении прогнозирования метастазов MX и может быть применен в работе врача-патологоанатома уже на этапе прижизненного: патолого-анатомического исследования операционного материала энуклеированных глаз при MX.Based on the above, it can be concluded that the method under study is informative in relation to the prediction of MX metastases and can be applied in the work of a pathologist already at the stage of in vivo: pathological and anatomical examination of the surgical material of enucleated eyes with MX.
Claims (7)
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2790468C1 true RU2790468C1 (en) | 2023-02-21 |
Family
ID=
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2147373C1 (en) * | 1998-06-19 | 2000-04-10 | Московский НИИ глазных болезней имени Гельмгольца | Method of revealing latent metastatic spread in patients with uveal melanoma |
| RU2280409C2 (en) * | 2004-07-12 | 2006-07-27 | Челябинская государственная медицинская академия | Method for differential diagnostics of melanomas, hemangiomas and choroid metastases |
| RU2347546C1 (en) * | 2007-09-13 | 2009-02-27 | Федеральное государственное учреждение "Межотраслевой научно-технический комплекс "Микрохирургия глаза" им. академика С.Н. Федорова Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи" | Method for prevention of metastasis in case of choroid melanoma fast regression after photodynamic therapy |
| RU2582751C1 (en) * | 2015-06-08 | 2016-04-27 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Московский научно-исследовательский институт глазных болезней имени Гельмгольца" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method for early diagnosis of metastases in choroid |
| CN109091682A (en) * | 2017-06-20 | 2018-12-28 | 首都医科大学附属北京同仁医院 | 99mNew application of the Tc-3P-RGD2 in terms of predicting mela-noma of choroid transfer |
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2147373C1 (en) * | 1998-06-19 | 2000-04-10 | Московский НИИ глазных болезней имени Гельмгольца | Method of revealing latent metastatic spread in patients with uveal melanoma |
| RU2280409C2 (en) * | 2004-07-12 | 2006-07-27 | Челябинская государственная медицинская академия | Method for differential diagnostics of melanomas, hemangiomas and choroid metastases |
| RU2347546C1 (en) * | 2007-09-13 | 2009-02-27 | Федеральное государственное учреждение "Межотраслевой научно-технический комплекс "Микрохирургия глаза" им. академика С.Н. Федорова Федерального агентства по высокотехнологичной медицинской помощи" | Method for prevention of metastasis in case of choroid melanoma fast regression after photodynamic therapy |
| RU2582751C1 (en) * | 2015-06-08 | 2016-04-27 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Московский научно-исследовательский институт глазных болезней имени Гельмгольца" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method for early diagnosis of metastases in choroid |
| CN109091682A (en) * | 2017-06-20 | 2018-12-28 | 首都医科大学附属北京同仁医院 | 99mNew application of the Tc-3P-RGD2 in terms of predicting mela-noma of choroid transfer |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ЖИДКОВА А. С. Прогнозирование течения увеальной меланомы (клинико-морфологическое исследование). Автореф. дисс. к.м.н. Челябинск, 2009, 29с. PEREZ-ALVAREZ M.J. et al., Choroidal metastasis from breast carcinoma, Diagnosis an follow-up with optical coherence tomography and fluorescein angiography, Arch Soc Esp Ofthalmol, 2009. vol.84, p. 267-270, реферат. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Toshima et al. | A novel serum marker, glycosylated Wisteria floribunda agglutinin-positive Mac-2 binding protein (WFA+-M2BP), for assessing liver fibrosis | |
| Lash et al. | Standardisation of uterine natural killer (uNK) cell measurements in the endometrium of women with recurrent reproductive failure | |
| Decenzo et al. | Antigenic deletion and prognosis of patients with stage A transitional cell bladder carcinoma | |
| CN104094116A (en) | Methods for detecting 5t4-positive circulating tumor cells and methods of diagnosis of 5t4-positive cancer in a mammalian subject | |
| CN103792364B (en) | For detecting reagent and the application thereof of circulating tumor cell ROR1 albumen in peripheral blood | |
| CN102298053B (en) | Composite antibody kit used in postoperative recurrence risk assessment of primary hepatocellular carcinoma | |
| CN106771185A (en) | A kind of nasopharyngeal carcinoma circulating tumor cell detection kit | |
| JP4628365B2 (en) | Immunohistochemical method | |
| CN105087775A (en) | Method and related kit for detecting c-MET/CEP7 gene status based on rare cells | |
| Lean et al. | Determination of grade and receptor status from the primary breast lesion by magnetic resonance spectroscopy | |
| RU2790468C1 (en) | Method for predicting the appearance of distant metastases of melanoma of the choroid | |
| JP2000515977A (en) | Testing for cell exposure to ethanol | |
| CN106198996A (en) | Early diagnosis biomarker, test kit and the application thereof of minimal change nephropathy | |
| CN105717104A (en) | Peripheral blood GPC3 detection method for hepatocellular carcinoma patient | |
| Hill et al. | Non-invasive prostate cancer characterization with diffusion-weighted MRI: insight from in silico studies of a transgenic mouse model | |
| JP2017037059A (en) | Method of assessing applicability of dendritic cell tumor vaccines and method of predicting survival rate | |
| RU2450790C2 (en) | Examination technique for diagnosis of malignant growth | |
| RU2681533C1 (en) | Method of differential diagnostics of mushroom mycosis | |
| RU2790775C1 (en) | Method for determining pseudo-vessels formed by macrophages in choroidal melanoma during a lifetime pathologic-anatomical examination | |
| RU2327420C1 (en) | Method of simultaneous verification of uveal melanoma course forecast | |
| US20140275292A1 (en) | Systems and methods employing human stem cell markers for detection, diagnosis and treatment of circulating tumor cells | |
| Bijelić et al. | Neoadjuvant Chemotherapy Affects TFF3 Peptide Expression in Luminal B Subtype of Breast Cancer–A Pilot Study | |
| Elousrouti et al. | The Clinicopathological Features and Prognostic Impact of HER2-Low Breast Tumors Subtype in Morocco: New Opportunity for Untreated Patients | |
| Chaabi et al. | TDT Positive in Blastic Dermal Infiltrate: Think of Blastic Plasmacytoid Dendritic Cell Neoplasm. | |
| CN112946268B (en) | Application of HHLA2 as prognostic marker in preparation of liver cancer prognosis prediction kit |