RU2790296C1

RU2790296C1 - METHOD FOR DETERMINING THE SUBLINES OF THE TUBERCULOSIS CAUSATIVE AGENT OF THE L2 beijing LINE ON BIOLOGICAL MICROCHIPS

Info

Publication number: RU2790296C1
Application number: RU2022128473A
Authority: RU
Inventors: Данила Вадимович Зименков; Анастасия Игоревна Уштанит
Filing date: 2022-11-02
Publication date: 2023-02-16

Abstract

FIELD: biology, microbiology and medicine.

SUBSTANCE: invention disloses a method for identifying the genotype of the causative agent of tuberculosis and its belonging to one of the sublines of the L2 Beijing line. The method is based on multiplex PCR with simultaneous fluorescent labeling of PCR products on an oligonucleotide microchip containing a set of specific discriminating oligonucleotides.

EFFECT: invention enables to analyze DNA isolated directly from a clinical sample, to identify sublines, genotypes, strains of the causative agent of tuberculosis associated with increased virulence and transmissivity, to carry out epidemiological genotyping.

6 cl, 3 dwg, 5 tbl, 5 ex

Description

Область техники, к которой относится изобретениеThe field of technology to which the invention belongs

Изобретение относится к молекулярной биологии, микробиологии и медицине и обеспечивает способ определения генотипа возбудителя туберкулеза и его принадлежности к одной из су 6 линий семейства L2 Beijing.The invention relates to molecular biology, microbiology and medicine and provides a method for determining the genotype of a tuberculosis pathogen and its belonging to one of the su 6 lines of the L2 Beijing family.

Уровень техникиState of the art

Туберкулез уносит каждый год миллионы жизней во всем мире. По данным Всемирной Организации Здравоохранения в 2020 году около 10 миллионов человек в мире больны Mycobacterium tuberculosis. В России, согласно данным официальной статистики, в 2020 году зарегистрировано впервые выявленных больных около 47 тысяч человек. При этом все более широкое распространение получают штаммы М. tuberculosis, устойчивые к действию противотуберкулезных препаратов. Неуклонно растет количество случаев туберкулеза с множественной, широкой и даже тотальной лекарственной устойчивостью. Устойчивость к наиболее эффективным препаратам первого ряда (рифампицин и изониазид) определяет туберкулез с множественной лекарственной устойчивостью (МЛУ), дополнительная устойчивость к препаратам второй линии (инъекционные препараты и фторхинолоны) определяет пред-широкую лекарственную устойчивость туберкулеза (Пре-ШЛУ). Лечение МЛУ и ШЛУ туберкулеза является основной проблемой из-за ограниченного количества эффективных препаратов.Tuberculosis claims millions of lives every year around the world. According to the World Health Organization, in 2020, about 10 million people in the world are sick with Mycobacterium tuberculosis. In Russia, according to official statistics, about 47,000 newly diagnosed patients were registered in 2020. At the same time, strains of M. tuberculosis resistant to the action of anti-tuberculosis drugs are becoming more widespread. The number of cases of tuberculosis with multiple, extensive and even total drug resistance is steadily increasing. Resistance to the most effective first-line drugs (rifampicin and isoniazid) defines multidrug-resistant TB (MDR), additional resistance to second-line drugs (injectables and fluoroquinolones) defines pre-extensive drug resistance (Pre-XDR). Treatment of MDR and XDR TB is a major challenge due to the limited number of effective drugs.

Во избежание высокого роста заболеваний лекарственно устойчивыми формами туберкулеза требуется своевременно осуществлять молекулярное генотипирование для выявления эпидемиологически значимых штаммов, ассоциированных с широкой и тотальной лекарственной устойчивостью и высокой трансмиссивностью.In order to avoid a high increase in drug-resistant forms of tuberculosis, timely molecular genotyping is required to identify epidemiologically significant strains associated with extensive and total drug resistance and high transmissibility.

Молекулярное генотипирование возбудителя туберкулеза - это эффективное средство по контролю за распространением заболевания: мониторинг путей передачи заболевания, детектирование или подтверждение вспышки, выявление эндогенной реактивации или экзогенной реинфекции, определение лабораторных ошибок или кросс-контаминации. Совместное применение генотипирования и методов определения лекарственной устойчивости позволит своевременно выявлять эволюционно успешные штаммы возбудителя туберкулеза с множественной или широкой лекарственной устойчивостью.Molecular genotyping of the causative agent of tuberculosis is an effective tool for controlling the spread of the disease: monitoring the ways of disease transmission, detection or confirmation of an outbreak, detection of endogenous reactivation or exogenous reinfection, detection of laboratory errors or cross-contamination. The combined use of genotyping and methods for determining drug resistance will allow timely detection of evolutionarily successful strains of the causative agent of tuberculosis with multiple or extensive drug resistance.

В настоящее время внутри вида Mycobacterium tuberculosis выделяют семь филогенетических линий, названных по географическому принципу, т.е. региону их преобладания или первичного выделения: Lineage 1 Indo-Oceanic («индонезийская» линия), Lineage 2 East-Asian («восточная Азиатская» линия), Lineage 3 East-African Indian («восточная Африкано-Индийская» линия), Lineage 4 Euro-American («Евро-Американская» линия), lineage 5 West African 1 («западноафриканская 1» линия), lineage 6 West African 2 («западноафриканская 2» линия), Lineage 7 Ethiopia («Эфиопия»). Каждая линия определяется уникальным полиморфизмом в геноме (Riojas MA, McGough KJ, Rider-Riojas С J, Rastogi N, Hazbon MH. Phylogenomic analysis of the species of the Mycobacterium tuberculosis complex demonstrates that Mycobacterium africanum, Mycobacterium bovis, Mycobacterium caprae, Mycobacterium microti and Mycobacterium pinnipedii are later heterotypic synonyms of Mycobacterium tuberculosis. Int J Syst Evol Microbiol. 2018 Jan;68(1):324-332. doi: 10.1099/ijsem.0.002507. Epub 2017 Dec 5. PMID: 29205127). Некоторые сублинии и даже штаммы филогенетических линий М. tuberculosis превалируют в диагностике многих стран. Так, на территории РФ и стран бывшего СССР широкое распространение получил вариант линии L2 Beijing В0/148, отличающийся повышенной устойчивостью к противотуберкулезным препаратам и более быстрым ростом субпопуляции по сравнению с популяциями других линий (CAS, EAI), что показывает «успешность» этого варианта М. tuberculosis в России (Parwati I, van Crevel R, van Soolingen D. Possible underlying mechanisms for successful emergence of the Mycobacterium tuberculosis Beijing genotype strains. Lancet Infect Dis. 2010 Feb; 10(2): 103-11. doi: 10.1016/S1473-3099(09)70330-5. PMID: 20113979).Currently, within the species Mycobacterium tuberculosis, seven phylogenetic lines are distinguished, named according to the geographical principle, i.e. the region of their predominance or primary allocation: Lineage 1 Indo-Oceanic ("Indonesian" line), Lineage 2 East-Asian ("East Asian" line), Lineage 3 East-African Indian ("East African-Indian" line), Lineage 4 Euro-American ("Euro-American" line), lineage 5 West African 1 ("West African 1" line), lineage 6 West African 2 ("West African 2" line), Lineage 7 Ethiopia ("Ethiopia"). Each lineage is defined by a unique polymorphism in the genome (Riojas MA, McGough KJ, Rider-Riojas C J, Rastogi N, Hazbon MH. Phylogenomic analysis of the species of the Mycobacterium tuberculosis complex demonstrates that Mycobacterium africanum, Mycobacterium bovis, Mycobacterium caprae, Mycobacterium microti and Mycobacterium pinnipedii are later heterotypic synonyms of Mycobacterium tuberculosis Int J Syst Evol Microbiol 2018 Jan;68(1):324-332 doi: 10.1099/ijsem.0.002507 Epub 2017 Dec 5 PMID: 29205127). Some sublines and even strains of phylogenetic lines of M. tuberculosis prevail in the diagnosis of many countries. Thus, on the territory of the Russian Federation and the countries of the former USSR, the variant of the L2 Beijing B0 / 148 line, which is characterized by increased resistance to anti-tuberculosis drugs and a faster growth of the subpopulation compared to the populations of other lines (CAS, EAI), has become widespread, which shows the "success" of this variant. M. tuberculosis in Russia (Parwati I, van Crevel R, van Soolingen D. Possible underlying mechanisms for successful emergence of the Mycobacterium tuberculosis Beijing genotype strains. Lancet Infect Dis. 2010 Feb; 10(2): 103-11. doi: 10.1016 /S1473-3099(09)70330-5.PMID: 20113979).

Следует отметить, что в РФ генотип Beijing является самым распространенным и встречается в среднем у 50% пациентов (Igor Mokrousov. Insights into the origin, emergence, and current spread of a successful Russian clone of Mycobacterium tuberculosis. Clinical microbiology reviews 2013; 26(2):342-60). В настоящее время установление генотипа Beijing является клинически значимой задачей, поскольку его штаммы демонстрируют важные патогенные свойства, например повышенную вирулентность в организме мышей, вакцинированных БЦЖ (Lopez В, Aguilar D, Orozco Н, Burger М, Espitia С, Ritacco V, et al. A marked difference in pathogenesis and immune response induced by different Mycobacterium tuberculosis geneotypes. Clin Exp Immunol. 2003;133:30-7), ассоциацию с множественной лекарственной устойчивостью (Mokrousov I, Narvskaya О, Vyazovaya A, Otten T, Jiao WW, Gomes LL, Suffys PN, Shen AD, Vishnevsky B. Russian "successful" clone B0/W148 of Mycobacterium tuberculosis Beijing genotype: a multiplex PCR assay for rapid detection and global screening. Journal of Clinical Microbiology 2012 Nov 50(11):3757-9), способность быстро размножаться в человеческих макрофагах и высокую трансмиссивность (Tran N Buu, Dick van Soolingen, Mai N T Huyen, Nguyen T N Lan, Hoang T Quy, Edine W Tiemersma, Kristin Kremer, Martien W Borgdorff, Frank G J Cobelens. Increased transmission of Mycobacterium tuberculosis Beijing genotype strains associated with resistance to streptomycin: a population-based study. PLoS One 2012 13; 7(8):e42323). Ha данный момент семейство L2 Beijing разделяется на две основные ветви: древний Beijing (ancient/atypical или прото-Beijing) и современный Beijing (modern/typical) (Mokrousov, I. et al. Phylogenetic reconstruction within Mycobacterium tuberculosis Beijing genotype in northwestern Russia. Res Microbiol. 153, 629-637 (2002)). Всего же по разным подсчетам L2 включает в себя 20-30 подтипов (среди которых наиболее известны B0/W148, САО, 94-32).It should be noted that the Beijing genotype is the most common in the Russian Federation and occurs on average in 50% of patients (Igor Mokrousov. Insights into the origin, emergence, and current spread of a successful Russian clone of Mycobacterium tuberculosis. Clinical microbiology reviews 2013; 26(2 ):342-60). Determining the Beijing genotype is currently a clinically significant task, since its strains show important pathogenic properties, such as increased virulence in BCG-vaccinated mice (Lopez B, Aguilar D, Orozco H, Burger M, Espitia C, Ritacco V, et al. A marked difference in pathogenesis and immune response induced by different Mycobacterium tuberculosis geneotypes. Clin Exp Immunol. 2003;133:30-7), association with multidrug resistance (Mokrousov I, Narvskaya O, Vyazovaya A, Otten T, Jiao WW, Gomes LL, Suffys PN, Shen AD, Vishnevsky B. Russian "successful" clone B0/W148 of Mycobacterium tuberculosis Beijing genotype: a multiplex PCR assay for rapid detection and global screening.Journal of Clinical Microbiology 2012 Nov 50(11):3757-9 ), the ability to multiply rapidly in human macrophages and high transmissibility (Tran N Buu, Dick van Soolingen, Mai N T Huyen, Nguyen T N Lan, Hoang T Quy, Edine W Tiemersma, Kristin Kremer, Martien W Borgdorff, Frank G J Cobelens. Increased transmission of Mycobacterium tuberculosis Beijing genotype strains associated with resistance to streptomycin: a population-based study. PLoS One 2012 13; 7(8):e42323). Currently, the L2 Beijing family is divided into two main branches: ancient Beijing (ancient/atypical or proto-Beijing) and modern Beijing (modern/typical) (Mokrousov, I. et al. Phylogenetic reconstruction within Mycobacterium tuberculosis Beijing genotype in northwestern Russia. Res Microbiol 153, 629-637 (2002)). In total, according to various estimates, L2 includes 20–30 subtypes (among which the best known are B0/W148, SAO, 94–32).

Modern Beijing распространен по всему миру, тогда как основная популяция Ancient Beijing сосредоточена в Восточной Азии и юго-восточной части Сибири. Современный Modern Beijing обладает эволюционно «улучшенными» качествами, такими как повышенная вирулентность, ассоциированность с МЛУ и ШЛУ, корреляция с трансмиссивностью (Ribeiro SC, Gomes LL, Amaral ЕР, Andrade MR, Almeida FM, Rezende AL, Lanes VR, Carvalho EC, Suffys PN, Mokrousov I, Lasunskaia EB. Mycobacterium tuberculosis strains of the modern sublineage of the Beijing family are more likely to display increased virulence than strains of the ancient sublineage. J Clin Microbiol. 2014 Jul;52(7):2615-24. doi: 10.1128/JCM.00498-14. Epub 2014 May 14. PMID: 24829250; PMCID: PMC4097719)Modern Beijing is distributed throughout the world, while the main population of Ancient Beijing is concentrated in East Asia and southeastern Siberia. Modern Modern Beijing has evolutionarily "improved" qualities, such as increased virulence, association with MDR and XDR, correlation with transmissibility (Ribeiro SC, Gomes LL, Amaral EP, Andrade MR, Almeida FM, Rezende AL, Lanes VR, Carvalho EC, Suffys PN, Mokrousov I, Lasunskaia EB Mycobacterium tuberculosis strains of the modern sublineage of the Beijing family are more likely to display increased virulence than strains of the ancient sublineage J Clin Microbiol 2014 Jul;52(7):2615-24 doi : 10.1128/JCM.00498-14. Epub 2014 May 14. PMID: 24829250; PMCID: PMC4097719)

Эпидемия туберкулеза в России в значительной степени связана с активным распространением мультирезистентных штаммов генотипа Beijing и его вариантов B0/W148 (Casali, N.. Nikolayevskyy, V., Balabanova, Y., Harris, S.R., Ignatyeva, O., Kontsevaya, I., Corander, J., Bryant, J., Parkhill, J., Nejentsev, S., Horstmann, R.D., Brown, T. & Drobniewski, F. Evolution and transmission of drug-resistant tuberculosis in a Russian population. Nature Genetics 2014 46, 279-86) и 94-32 (Umpeleva T, Belousova K, Golubeva L, Boteva T, Morozova I, Vyazovaya A, Mokrousov I, Eremeeva N, Vakhrusheva D. Molecular characteristics of Mycobacterium tuberculosis in the "closed" Russian town with limited population migration. Infect Genet Evol. 2020 Apr;79:104174. doi: 10.1016/j.meegid.2020.104174), (Mokrousov I, Chernyaeva E, Vyazovaya A, et al. Rapid Assay for Detection of the Epidemiologically Important Central Asian/Russian Strain of the Mycobacterium tuberculosis Beijing Genotype. J Clin Microbiol. 2018 Jan 24;56(2):e01551-17. doi: 10.1128/JCM.01551-17).The tuberculosis epidemic in Russia is largely associated with the active spread of multidrug-resistant strains of the Beijing genotype and its variants B0/W148 (Casali, N.. Nikolayevskyy, V., Balabanova, Y., Harris, S.R., Ignatyeva, O., Kontsevaya, I. , Corander, J., Bryant, J., Parkhill, J., Nejentsev, S., Horstmann, R.D., Brown, T. & Drobniewski, F. Evolution and transmission of drug-resistant tuberculosis in a Russian population.Nature Genetics 2014 46, 279-86) and 94-32 (Umpeleva T, Belousova K, Golubeva L, Boteva T, Morozova I, Vyazovaya A, Mokrousov I, Eremeeva N, Vakhrusheva D. Molecular characteristics of Mycobacterium tuberculosis in the "closed" Russian town with limited population migration. Infect Genet Evol. 2020 Apr;79:104174. doi: 10.1016/j.meegid.2020.104174), (Mokrousov I, Chernyaeva E, Vyazovaya A, et al. Rapid Assay for Detection of the Epidemiologically Important Central Asian /Russian Strain of the Mycobacterium tuberculosis Beijing Genotype J Clin Microbiol 2018 Jan 2 4;56(2):e01551-17. doi: 10.1128/JCM.01551-17).

Для генотипирования возбудителя туберкулеза и идентификации сублиний Beijing применяются следующие молекулярные методы:The following molecular methods are used to genotype the causative agent of tuberculosis and identify Beijing sublines:

1. Полногеномное секвенирование1. Whole genome sequencing

В настоящее время полногеномное секвенирование становится стадартом генетических исследований возбудителя туберкулеза, позволяющим одновременно проводить генотипирование, определение детерминант устойчивости к антибактериальным препаратам, изучать эпидемиологические особенности распространения возбудителя, выявлять случаи вспышек и трансмиссий.Currently, whole genome sequencing is becoming a standard for genetic studies of the causative agent of tuberculosis, which allows simultaneous genotyping, determination of determinants of resistance to antibacterial drugs, study of the epidemiological features of the spread of the pathogen, and detection of outbreaks and transmissions.

Стандартом де факто в настоящее время является получение коротких прочтений с низким уровнем ошибок методом Illumina, выравнивание последовательностей на референс геном М. tuberculosis H37Rv и получение списка мутаций произошедших в клиническом штамме.The current de facto standard is to obtain short reads with a low error rate using the Illumina method, align sequences to the M. tuberculosis H37Rv reference genome, and obtain a list of mutations that have occurred in a clinical strain.

Последовательность около 10% генома остается неизвестной из-за повторяющейся структуры, и обычно исключается из анализа. Общее количество замен для штамма лини L2 составляет около 1800, большинство из которых, по всей видимости, являются нейтральными. Для установления «родственной» связи двух клинических штаммов принят порог в 5 мутаций, который был определен исходя из серийного анализа последовательных изолятов от одного пациента при длительно сохраняющемся бактериовыделении. Аналогичный критерий используется для выявления и разделения случаев рецидивов заболевания и реинфекции другим штаммом.The sequence of about 10% of the genome remains unknown due to repetitive structure, and is usually excluded from analysis. The total number of substitutions for strain L2 is about 1800, most of which appear to be neutral. To establish a “related” relationship between two clinical strains, a threshold of 5 mutations was adopted, which was determined based on the serial analysis of consecutive isolates from one patient with long-term bacterial excretion. A similar criterion is used to identify and separate cases of disease recurrence and reinfection with another strain.

К недостаткам метода относится высокая стоимость проведения анализа, необходимость пулирования образцов, жесткие требования к чистоте и количеству геномной ДНК, высокие требования к квалификации персонала, проводящего секвенирование и биоинформатический анализ (Meehan CJ, Goig GA, Kohl ТА, Verboven L, Dippenaar A, Ezewudo M, Farhat MR, Guthrie JL, Laukens K, Miotto P, Ofori-Anyinam B, Dreyer V, Supply P, Suresh A, Utpatel C, van Soolingen D, Zhou Y, Ashton PM, Brites D, Cabibbe AM, de Jong ВС, de Vos M, Menardo F, Gagneux S, Gao Q, Heupink TH, Liu Q, Loiseau C, Rigouts L, Rodwell TC, Tagliani E, Walker TM, Warren RM, Zhao Y, Zignol M, Schito M, Gardy J, Cirillo DM, Niemann S, Comas I, Van Rie A. Whole genome sequencing of Mycobacterium tuberculosis: current standards and open issues. Nat Rev Microbiol. 2019 Sep;17(9):533-545. doi: 10.1038/s41579-019-0214-5. PMID: 31209399).The disadvantages of the method include the high cost of analysis, the need for pooling samples, stringent requirements for the purity and quantity of genomic DNA, high qualification requirements for personnel conducting sequencing and bioinformatics analysis (Meehan CJ, Goig GA, Kohl TA, Verboven L, Dippenaar A, Ezewudo M, Farhat MR, Guthrie JL, Laukens K, Miotto P, Ofori-Anyinam B, Dreyer V, Supply P, Suresh A, Utpatel C, van Soolingen D, Zhou Y, Ashton PM, Brites D, Cabibbe AM, de Jong VS , de Vos M, Menardo F, Gagneux S, Gao Q, Heupink TH, Liu Q, Loiseau C, Rigouts L, Rodwell TC, Tagliani E, Walker TM, Warren RM, Zhao Y, Zignol M, Schito M, Gardy J, Cirillo DM, Niemann S, Comas I, Van Rie A. Whole genome sequencing of Mycobacterium tuberculosis: current standards and open issues Nat Rev Microbiol 2019 Sep;17(9):533-545 doi: 10.1038/s41579-019- 0214-5.PMID: 31209399).

2. IS1610-RFLP2.IS1610-RFLP

RFLP - restriction fragment length polymorphism, полиморфизм длин рестрикционного фрагмента - метод филогенетического анализа, основанный на использовании изменений в областях, примыкающих к консервативным последовательностям ДНК. Для М. tuberculosis используют RFLP по инсерционной последовательности IS6110 (insertion sequence), присутствующей в количестве порядка 10 копий в геноме и являющейся уникальной для М. tuberculosis (Coros, A. IS6110, a Mycobacterium tuberculosis Complex-Specific Insertion Sequence, Is Also Present in the Genome of Mycobacterium smegmatis, Suggestive of Lateral Gene Transfer among Mycobacterial Species / A. Coros, E. DeConno, K.M. Derbyshire // JOURNAL OF BACTERIOLOGY. - 2008. - V. 190(9). - P. 3408-3410).RFLP - restriction fragment length polymorphism, restriction fragment length polymorphism - a phylogenetic analysis method based on the use of changes in regions adjacent to conservative DNA sequences. For M. tuberculosis, RFLP is used for the insertion sequence IS6110 (insertion sequence), which is present in about 10 copies in the genome and is unique to M. tuberculosis (Coros, A. IS6110, a Mycobacterium tuberculosis Complex-Specific Insertion Sequence, Is Also Present in the Genome of Mycobacterium smegmatis, Suggestive of Lateral Gene Transfer among Mycobacterial Species / A. Coros, E. DeConno, K. M. Derbyshire // JOURNAL OF BACTERIOLOGY - 2008. - V. 190(9) - P. 3408-3410).

Недостатком IS1610-RFLP является сложность сравнительного анализа результатов, полученных в разных лабораториях, так как сравниваются фотоизображения ДНК - электрофореза, которые сильно варьируют в зависимости от параметров постановки эксперимента.The disadvantage of IS1610-RFLP is the complexity of the comparative analysis of the results obtained in different laboratories, since photoimages of DNA electrophoresis are compared, which vary greatly depending on the parameters of the experiment.

3. Сполиготипирование3. Spoligotyping

Сполиготипирование - метод типирования возбудителя туберкулеза, основанный на анализе полиморфизма прямых повторов локуса CRISPR генома М. tuberculosis, разделенных уникальными последовательностями (спейсерами) (Kamerbeek J, Schouls L, Kolk A, van Agterveld M, van Soolingen D, Kuijper S, et al. Simultaneous detection and strain differentiation of Mycobacterium tuberculosis for diagnosis and epidemiology. J Clin Microbiol. 1997;35:907-14). Дж. Камербек предложил его в 1996 году на смену уже существующему RFLP анализу, как более быстрый и простой метод, способный сократить время генотипирования до 2-3 дней за счет использования меньшего количества геномной ДНК для анализа. После амплификации с помощью универсальных праймеров, нацеленных на повторяющуюся последовательность, проводится гибридизация на нейлоновых мембранах с иммобилизованными олигонуклеотидами с последовательностями 43 уникальных спейсеров.Spoligotyping is a method for typing the causative agent of tuberculosis based on the analysis of polymorphism of direct repeats of the CRISPR locus of the M. tuberculosis genome separated by unique sequences (spacers) (Kamerbeek J, Schouls L, Kolk A, van Agterveld M, van Soolingen D, Kuijper S, et al. Simultaneous detection and strain differentiation of Mycobacterium tuberculosis for diagnosis and epidemiology J Clin Microbiol 1997;35:907-14). J. Kamerbek proposed it in 1996 to replace the already existing RFLP analysis, as a faster and simpler method that can reduce the genotyping time to 2-3 days by using a smaller amount of genomic DNA for analysis. After amplification with universal primers targeting the repeat sequence, hybridization is carried out on nylon membranes with immobilized oligonucleotides with the sequences of 43 unique spacers.

Линии L2 Beijing соответствует несколько профилей, причем подавляющее большинство изолятов обладает профилем SIT 1, для которого характерно наличие только 9 последних спейсеров. Таким образом, типировать сублинии внутри Beijing с помощью сполиготипирования невозможно.Line L2 Beijing corresponds to several profiles, and the vast majority of isolates have the SIT 1 profile, which is characterized by the presence of only the last 9 spacers. Thus, it is not possible to type sublines within Beijing using spolygotyping.

4. MIRU-VNTR4. MIRU-VNTR

Метод VNTR - variable numbers tandem repeat основывается на подсчете числа тандемных повторов в геноме. Изначально он разрабатывался для определения нескольких патогенов Bacillus anthracis и Yersinia pestis (Le Fleche, P. A tandem repeats database for bacterial genomes: application to the genotyping of Yersinia pestis and Bacillus anthracis / P. Le Fleche, Y. Hauck, L. Onteniente, et al. // BMC Microbiology. - 2001. - V. 1:2). Подтип этого метода в применении к М. tuberculosis MIRU - Mycobacterial Interspersed Repetitive Units - был разработан в 2001 году, и являлся заменой метода IS6110-RFLP, так как позволял генотипировать также и те штаммы, в которых содержание IS6110 было критически мало для проведения анализа (Frothingham, R. Genetic diversity in the Mycobacterium tuberculosis complex based on variable numbers of tandem DNA repeats / R. Frothingham, W.A. Meeker-O'Cormell // Microbiology. - 1998. - V. 144. - P. 1189-1196). Изначально MIRU-VNTR была разработана для анализа полиморфизмов в 12 локусах тандемных повторов, а затем был создан расширенный метод для анализа 24 локусов, обладающий повышенной разрешающей способностью и являющийся стандартом в настоящее время (Supply, P. Multilocus Variable Number Tandem Repeat Genotyping of Mycobacterium tuberculosis Technical Guide / P. Supply // INSERM U629 Institut de Biologie/Institut Pasteur de Lille. - 2005).The VNTR - variable numbers tandem repeat method is based on counting the number of tandem repeats in the genome. It was originally developed to identify several pathogens of Bacillus anthracis and Yersinia pestis (Le Fleche, P. A tandem repeats database for bacterial genomes: application to the genotyping of Yersinia pestis and Bacillus anthracis / P. Le Fleche, Y. Hauck, L. Onteniente, et al., BMC Microbiology, 2001, v. 1:2). A subtype of this method applied to M. tuberculosis MIRU - Mycobacterial Interspersed Repetitive Units - was developed in 2001, and was a replacement for the IS6110-RFLP method, since it also allowed genotyping those strains in which the content of IS6110 was critically low for analysis ( Frothingham, R. Genetic diversity in the Mycobacterium tuberculosis complex based on variable numbers of tandem DNA repeats / R. Frothingham, W. A. Meeker-O'Cormell // Microbiology 1998 V 144 P 1189-1196). Initially, MIRU-VNTR was developed to analyze polymorphisms at 12 tandem repeat loci, and then an extended method was created for the analysis of 24 loci, with increased resolution and is currently the standard (Supply, P. Multilocus Variable Number Tandem Repeat Genotyping of Mycobacterium tuberculosis Technical Guide / P. Supply // INSERM U629 Institut de Biologie/Institut Pasteur de Lille. - 2005).

Заметными минусами данного метода является его трудоемкость, так как помимо двенадцати или двадцати четырех (в зависимости от количества исследуемых локусов) ПЦР реакций требуется провести также и соответствующее число электрофорезов для одного штамма. При этом в некоторых локусах необходимо дискриминировать изменение фрагмента на 50 пар оснований при общей длине порядка тысячи пар оснований. Еще одной сложностью является низкое наполнение публичных баз данных, так в базе MIRU-VNTRplus (https.//www.miru-vntrplus.org/) доступно всего порядка 150 профилей, что позволяет идентифицировать только основные сублинии возбудителя.The noticeable disadvantages of this method is its laboriousness, since in addition to twelve or twenty-four (depending on the number of studied loci) PCR reactions, it is also necessary to carry out the corresponding number of electrophoresis for one strain. At the same time, in some loci, it is necessary to discriminate a fragment change by 50 base pairs with a total length of about a thousand base pairs. Another difficulty is the low content of public databases, as only about 150 profiles are available in the MIRU-VNTRplus database (https.//www.miru-vntrplus.org/), which makes it possible to identify only the main pathogen sublines.

5. SNP анализ5. SNP analysis

В настоящее время разработано большое количество методов для филогенетического анализа возбудителя туберкулеза и определения важных сублиний на основе определения однонуклеотидных замен в геноме. Часть методов использует данные полногеномного секвенирования для определения генотипа штамма (Thawornwattana Y, Mahasirimongkol S, Yanai H, Maung HMW, Cui Z, Chongsuvivatwong V, Palittapongampim P. Revised nomenclature and SNP barcode for Mycobacterium tuberculosis lineage 2. Microb Genom. 2021 Nov;7(11):000697. doi: 10.1099/mgen.0.000697. PMID: 34787541; PMCID: PMC8743535), другой подход состоит в разработке аллель-специфичной ПЦР в форате реалтайм, или с детекцией на электрофорезе (Carcelen М, Abascal Е, Herranz М, Santanton S, Zenteno R, Ruiz Serrano MJ, Bouza E, Perez-Lago L, Garcia-de-Viedma D. Optimizing and accelerating the assignation of lineages in Mycobacterium tuberculosis using novel alternative single-tube assays. PLoS One. 2017 Nov 1;12(11):e0186956. doi: 10.1371/journal.pone.0186956. PMID: 29091913; PMCID: PMC5665510). Ограничением в последнем случае является низкий уровень мультиплексности анализа, позволяющий выявить либо только главные линии возбудителя, либо одну важную с точки зрения разработчика сублинию.Currently, a large number of methods have been developed for the phylogenetic analysis of the causative agent of tuberculosis and the identification of important sublines based on the determination of single nucleotide substitutions in the genome. Some methods use whole genome sequencing data to determine the strain genotype (Thawornwattana Y, Mahasirimongkol S, Yanai H, Maung HMW, Cui Z, Chongsuvivatwong V, Palittapongampim P. Revised nomenclature and SNP barcode for Mycobacterium tuberculosis lineage 2. Microb Genom. 2021 Nov;7 (11): 000697. doi: 10.1099/mgen.0.000697. PMID: 34787541; PMCID: PMC8743535), another approach is to develop an allele-specific PCR in real-time phorate, or with detection by electrophoresis (Carcelen M, Abascal E, Herranz M , Santanton S, Zenteno R, Ruiz Serrano MJ, Bouza E, Perez-Lago L, Garcia-de-Viedma D, Optimizing and accelerating the assignment of lineages in Mycobacterium tuberculosis using novel alternative single-tube assays, PLoS One, 2017 Nov 1 ;12(11):e0186956. doi: 10.1371/journal.pone.0186956. PMID: 29091913; PMCID: PMC5665510). The limitation in the latter case is the low level of analysis multiplexity, which makes it possible to identify either only the main lines of the pathogen, or one important subline from the developer's point of view.

Таким образом, в связи с широким распространением штаммов Beijing, представляющих серьезную угрозу успешной реализации национальных программ борьбы с туберкулезом, стоит серьезная задача в создании эффективных и недорогих методов идентификации сублиний штаммов Beijing.Thus, in connection with the wide distribution of Beijing strains, which pose a serious threat to the successful implementation of national tuberculosis control programs, there is a serious task in creating effective and inexpensive methods for identifying sublines of Beijing strains.

Раскрытие сущности изобретенияDisclosure of the essence of the invention

В результате проведенных обширных научных исследований, анализа баз данных нуклеотидных последовательностей NCBI http://vvww.ncbi.nlm.nih.gov/genome/genomes/ 166, Welcome Trust Sanger institute http://www.sanger.ac.uk/resources/downloads/bacteria/ mycobacterium.html, авторы настоящего изобретения обнаружили, что задача разработки способа определения может быть успешно решена путем использования олигонуклеотидных микрочипов (биочипов), содержащих олигонуклеотидные зонды, последовательности которых специфичны к филогенетическим однонуклеотидным заменам в геноме возбудителя.As a result of extensive scientific research, analysis of NCBI nucleotide sequence databases http://vvww.ncbi.nlm.nih.gov/genome/genomes/ 166, Welcome Trust Sanger institute http://www.sanger.ac.uk/resources /downloads/bacteria/ mycobacterium.html, the authors of the present invention found that the task of developing a detection method can be successfully solved by using oligonucleotide microarrays (biochips) containing oligonucleotide probes, the sequences of which are specific to phylogenetic single nucleotide substitutions in the pathogen genome.

Технология олигонуклеотидных микрочипов низкой плотности успешно зарекомендовала себя для идентификации лекарственно-устойчивых изолятов возбудителя туберкулеза и определения главных филогенентическких линий, циркулирующих на территории России. Заявляемый в настоящем изобретении способ выгодно отличается от известных из уровня техники методов возможностью анализа ДНК возбудителя, выделенной из клинического материала, с целью установления наличия/отсутствия точечных филогенетических мутаций и высокой степенью мультиплексности, позволяющей проводить точное генотипирование штаммов линии L2 Beijing. Метод не требует дорогостоящего оборудования и высококвалифицированного персонала. Данные, полученные с помощью заявленного способа, могут быть использованы для эпидемиологических исследований, мониторинга высоковирулентных штаммов (клонов) в условиях клинической лаборатории областного уровня.Low-density oligonucleotide microarray technology has successfully proven itself for the identification of drug-resistant isolates of the causative agent of tuberculosis and the identification of the main phylogenetic lines circulating in Russia. The method claimed in the present invention compares favorably with the methods known from the prior art by the possibility of analyzing pathogen DNA isolated from clinical material in order to establish the presence/absence of point phylogenetic mutations and a high degree of multiplexity, which allows accurate genotyping of strains of the L2 Beijing line. The method does not require expensive equipment and highly qualified personnel. The data obtained using the claimed method can be used for epidemiological studies, monitoring of highly virulent strains (clones) in a clinical laboratory at the regional level.

В своем первом аспекте данное изобретение обеспечивает способ определения генотипа штамма возбудителя туберкулеза. Способ основан на мультиплексной ПЦР с получением флуоресцентно-меченных фрагментов микобактериального генома с последующей гибридизацией этих фрагментов на биологическом микрочипе, содержащем набор олигонуклеотидов.In its first aspect, the present invention provides a method for determining the genotype of a tuberculosis strain. The method is based on multiplex PCR to obtain fluorescently labeled fragments of the mycobacterial genome, followed by hybridization of these fragments on a biological microchip containing a set of oligonucleotides.

Способ предусматривает следующие стадии:The method includes the following steps:

а) обеспечение олигонуклеотидного микрочипа для установления наличия/отсутствия точечных мутаций, представляющего собой подложку, содержащую множество дискретных элементов, в каждом из которых иммобилизован уникальный олигонуклеотидный зонд, последовательности которых представлены SEQ ID NO: 1-90 (Перечень последовательностей 1.);a) providing an oligonucleotide microarray for establishing the presence/absence of point mutations, which is a substrate containing a plurality of discrete elements, each of which immobilizes a unique oligonucleotide probe, the sequences of which are presented by SEQ ID NO: 1-90 (Sequence Listing 1.);

б) мультиплексную амплификацию с одновременным флуоресцентным маркированием при использовании геномной ДНК микобактерий туберкулезного комплекса в качестве матрицы и набора праймеров, последовательности которых представлены SEQ ID NO: 91-142 (Перечень последовательностей 2.), с получением флуоресцентно-меченных фрагментов микобактериального генома;b) multiplex amplification with simultaneous fluorescent labeling using genomic DNA of mycobacterium tuberculosis complex as a template and a set of primers, the sequences of which are presented by SEQ ID NO: 91-142 (Sequence Listing 2.), to obtain fluorescently labeled fragments of the mycobacterial genome;

в) гибридизацию амплифицированных флуоресцентно-меченных продуктов, полученных на стадии (а), на олигонуклеотидном микрочипе с образованием дуплексов с иммобилизованными зондами в условиях, обеспечивающих разрешение в один нуклеотид между образующимися в результате гибридизации совершенными и несовершенными дуплексами;c) hybridization of the amplified fluorescently labeled products obtained in step (a) on an oligonucleotide microchip to form duplexes with immobilized probes under conditions that ensure one nucleotide resolution between perfect and imperfect duplexes resulting from hybridization;

г) регистрацию результатов гибридизации на олигонуклеотидном микрочипе, проведенной на стадии (в) с использованием анализатора флуоресценции и программного обеспечения, что позволяет использовать программную обработку интенсивностей сигналов с последующей интерпретацией результатов, которую проводят в соответствии со схемой, приведенной в Таблице 4.d) registration of the results of hybridization on an oligonucleotide microchip carried out at stage (c) using a fluorescence analyzer and software, which allows the use of software processing of signal intensities with subsequent interpretation of the results, which is carried out in accordance with the scheme shown in Table 4.

В одном из своих воплощений способ характеризуется тем, что амплификацию фрагментов микобактериального генома проводят, используя ДНК, выделенную из материала клинического образца (мокроту, экссудат, бронхоальвеолярный лаваж, кровь) или предварительно выращенной культуры микроорганизма.In one of its embodiments, the method is characterized in that the amplification of fragments of the mycobacterial genome is carried out using DNA isolated from the clinical sample material (sputum, exudate, bronchoalveolar lavage, blood) or a pre-grown culture of the microorganism.

В следующем воплощении способ характеризуется тем, что на стадии (а) для флуоресцентного маркирования получаемых ПЦР-фрагментов используют флуоресцентно меченый дезоксиуридинтрифосфат.In a further embodiment, the method is characterized in that, in step (a), fluorescently labeled deoxyuridine triphosphate is used to fluorescently label the resulting PCR fragments.

Краткое описание фигур и таблицBrief description of figures and tables

Фигура 1. Схема размещения элементов биочипа для идентификации сублиний штаммов М. tuberculosis линии L2 Beijing.Figure 1. Layout of biochip elements for identifying sublines of strains of M. tuberculosis line L2 Beijing.

Фигура 2. Флуоресцентная картина гибридизации биочипа и результаты интерпретации при анализе ДНК, выделенной из клинического образца, содержащего штамм М. tuberculosis генотипа Beijing B0/W148.Figure 2. Fluorescent pattern of hybridization of the biochip and the results of interpretation in the analysis of DNA isolated from a clinical sample containing a strain of M. tuberculosis genotype Beijing B0/W148.

Фигура 3. Флуоресцентная картина гибридизации биочипа и результаты интерпретации при анализе ДНК, выделенной из клинического образца, содержащего штамм М. tuberculosis генотипа Beijing 94-32.Figure 3. Fluorescent pattern of hybridization of the biochip and the results of interpretation in the analysis of DNA isolated from a clinical sample containing a strain of M. tuberculosis genotype Beijing 94-32.

Таблица 1. Перечень последовательностей олигонуклеотидов, иммобилизованных на биочипе, используемых для детекции филогенетических полиморфизмов М. tuberculosis линии Beijing.Table 1. Sequence listing of oligonucleotides immobilized on a biochip used for the detection of phylogenetic polymorphisms of M. tuberculosis of the Beijing line.

Таблица 2. Перечень последовательностей и концентраций праймеров, используемых в реакционных смесях стадии мультиплексной ПЦР заявляемого способа.Table 2. List of sequences and concentrations of primers used in the reaction mixtures of the multiplex PCR stage of the proposed method.

Таблица 3. Темературно-временной режим стадии ПЦР.Table 3. Temperature-time regime of the PCR stage.

Таблица 4. Интерпретация данных анализа однонуклеотидных замен. Соответствие наличия мутаций (m) и генотипа штамма.Table 4. Interpretation of single nucleotide substitution data. Correspondence between the presence of mutations (m) and the genotype of the strain.

Таблица 5. Сравнительный анализ результатов гибридизации олигонуклеотидного биочипа для детекции филогенетических полиморфизмов М. tuberculosis линии Beijing и MIRU-VNTR типирования.Table 5. Comparative analysis of the results of hybridization of the oligonucleotide biochip for the detection of phylogenetic polymorphisms of M. tuberculosis of the Beijing line and MIRU-VNTR typing.

Осуществление изобретенияImplementation of the invention

В заявленном способе предложено использование мультиплексной амплификации и флуоресцентного маркирования фрагментов микобактериального генома с получением флуоресцентно-меченных ПЦР-продуктов, при этом в качестве матрицы может быть использована геномная ДНК, выделенная из клинических изолятов - культур клеток микобактерий, выращенных в жидкой или на твердой средах. Заявленный способ также предусматривает использование оригинального олигонуклеотидного микрочипа с иммобилизованными специфическими олигонуклеотидными зондами, процедуры гибридизации, регистрации и интерпретации результатов.The claimed method proposes the use of multiplex amplification and fluorescent labeling of fragments of the mycobacterial genome to obtain fluorescently labeled PCR products, while genomic DNA isolated from clinical isolates - cell cultures of mycobacteria grown in liquid or solid media can be used as a matrix. The claimed method also involves the use of an original oligonucleotide microarray with immobilized specific oligonucleotide probes, hybridization procedures, registration and interpretation of results.

Принципиальная схема анализа микобактериальной ДНК с целью определения сублинии Beijing с помощью олигонуклеотидного микрочипа.Schematic diagram of mycobacterial DNA analysis to determine the Beijing sublineage using an oligonucleotide microarray.

Образцы клинических изолятов подвергали процедурам лизиса и очистки ДНК от клеточного дебриса с целью получения геномной ДНК, пригодной для проведения ПЦР. Одним из способов является простое кипячение с детергентом (Kent, Р.Т., and G.P. Kubica. Public health mycobacteriology. A guide for level III laboratory. 1985 Centers for Disease Control and Prevention, Atlanta, GA). Для этих целей также могут быть использованы иные способы, известные специалистам в данной области, такие как разрушение клеток с помощью ультразвука (Padilla Е, Gonzalez V, Manterola JM, et al. Evaluation of two different cell lysis methods for releasing mycobacterial nucleic acids in the INNO-LiPA mycobacteria test. 2003. Diagnostic Microbiology and Infectious Diseases. 46(1): 19-23), лизис при помощи гуанидина тиоцианата - саркозина (Chakravorty S, Tyagi JS. Novel use of guanidinium isothiocyanate in the isolation of Mycobacterium tuberculosis DNA from clinical material. 2001. FEMS Microbiology Letters. 205(1): 113-7.) и т.д.Samples of clinical isolates were subjected to lysis and purification of DNA from cell debris in order to obtain genomic DNA suitable for PCR. One method is simply boiling with detergent (Kent, P.T., and G.P. Kubica. Public health mycobacteriology. A guide for level III laboratory. 1985 Centers for Disease Control and Prevention, Atlanta, GA). Other methods known to those skilled in the art can also be used for this purpose, such as sonication of cells (Padilla E, Gonzalez V, Manterola JM, et al. Evaluation of two different cell lysis methods for releasing mycobacterial nucleic acids in the INNO-LiPA mycobacteria test 2003 Diagnostic Microbiology and Infectious Diseases 46(1): 19-23) Lysis by guanidinium thiocyanate-sarcosine (Chakravorty S, Tyagi JS Novel use of guanidinium isothiocyanate in the isolation of Mycobacterium tuberculosis DNA from clinical material 2001 FEMS Microbiology Letters 205(1): 113-7.), etc.

Очистку геномной ДНК после проведения лизиса проводили с использованием автоматических роботизированных станций, например Freedom EVO® Clinical (Tecan Group Ltd., Германия), или коммерческих наборов, таких, например, как «ПРОБА-НК» (ООО «НПО «ДНК-Технология», Регистрационное удостоверение Росздравнадзора № ФСР 2008/02938), «Реагент в пробирках для выделения ДНК из биопроб с целью последующего анализа методом полимеразной цепной реакции (ДНК-ЭКСПРЕСС)» (ООО «НПФ «Литех», Регистрационное удостоверение Росздравнадзора ФСР 2007/00362), Комплект реагентов для выделения РНК/ДНК из клинического материала «РИБО-преп» по ТУ 9398-071-01897593-2008 (ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора, Регистрационное удостоверение Росздравнадзора ФСР 2008/03147).Purification of genomic DNA after lysis was carried out using automatic robotic stations, such as Freedom EVO® Clinical (Tecan Group Ltd., Germany), or commercial kits, such as PROBA-NK (LLC NPO DNA-Technology , Registration certificate of Roszdravnadzor No. FSR 2008/02938), “Reagent in test tubes for DNA isolation from bioassays for the purpose of subsequent analysis by polymerase chain reaction (DNA-EXPRESS)” (LLC “NPF “Litekh”, Registration certificate of Roszdravnadzor FSR 2007/00362) , A set of reagents for the isolation of RNA / DNA from clinical material "RIBO-prep" according to TU 9398-071-01897593-2008 (FBUN Central Research Institute of Epidemiology of Rospotrebnadzor, Registration certificate of Roszdravnadzor FSR 2008/03147).

Полученный препарат микобактериальной геномной ДНК использовали в качестве матрицы в мультиплексной ПЦР. В ходе амплификации происходила наработка 25 фрагментов генома возбудителя туберкулеза. Праймеры для проведения мультиплексной ПЦР выбирали таким образом, чтобы они фланкировали интересующие области генома микобактерий.The resulting preparation of mycobacterial genomic DNA was used as a template in multiplex PCR. During the amplification, 25 fragments of the genome of the causative agent of tuberculosis were generated. Primers for multiplex PCR were chosen so that they flank regions of interest in the mycobacteria genome.

Используя специализированное программное обеспечение, например Oligo v. 6.3 (Molecular Biology Insights Inc., США) или Fast PCR (http://www.biocenter.helsinki.fi/bi/Programs/fastpcr.htm) или другие коммерчески доступные программы, или программы, свободно доступные в сети Internet, рассчитывали температуры плавления праймеров и, варьируя их длину, добивались того, чтобы разброс температур отжига праймеров внутри набора не превышал 3-4°С. При подборе праймеров избегали таких последовательностей, которые способны формировать вторичные структуры типа шпильки с высокими температурами плавления, а также последовательностей, образующих между собой дуплексы, состоящие более чем из трех-пяти нуклеотидов. Каждый выбранный праймер должен обладать уникальной специфичностью в отношении анализируемого участка последовательности генома микобактерий туберкулезного комплекса. Специфичность праймеров проверяли с помощью программного обеспечения, использующего поиск в базах нуклеотидных последовательностей по алгоритму BLAST (например, www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST).Using specialized software such as Oligo v. 6.3 (Molecular Biology Insights Inc., USA) or Fast PCR (http://www.biocenter.helsinki.fi/bi/Programs/fastpcr.htm) or other commercially available programs, or programs freely available on the Internet, calculated the melting temperatures of the primers and, by varying their length, ensured that the scatter of primer annealing temperatures within the set did not exceed 3–4°C. When choosing primers, we avoided those sequences that are capable of forming hairpin-type secondary structures with high melting temperatures, as well as sequences that form duplexes with each other, consisting of more than three to five nucleotides. Each selected primer should have a unique specificity for the analyzed region of the genome sequence of Mycobacterium tuberculosis complex. The specificity of the primers was checked using software that uses a database search of nucleotide sequences using the BLAST algorithm (for example, www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST).

Для обеспечения эффективной амплификации с одновременным введением флуоресцентной метки во все вышеперечисленные сегменты микобактериального генома в едином реакционном объеме использовали праймеры следующей конструкции. Последовательность каждого добавляемого в реакционную смесь праймера состояла из двух частей - 3'-специфичной, т.е. комплементарной последовательности фрагмента генома М. tuberculosis, и 5'-универсальной (адаптерной), различавшейся для прямых и обратных праймеров. Помимо таких праймеров, содержащих и специфические, и адаптерные последовательности, в реакционную смесь добавляли два праймера, последовательности которых комплементарны последовательностям адаптерной части составных праймеров (SEQ ID NO: 91 и SEQ ID NO: 92). Данные адаптерные праймеры присутствовали в реакционной смеси в различных концентрациях, с целью наработки преимущественно одноцепочечных фрагментов, последовательности которых комплементарны последовательностям олигонуклеотидов, иммобилизованных на биочипе.To ensure efficient amplification with the simultaneous introduction of a fluorescent label into all of the above segments of the mycobacterial genome in a single reaction volume, primers of the following design were used. The sequence of each primer added to the reaction mixture consisted of two parts - 3'-specific, i.e. complementary sequence of a fragment of the M. tuberculosis genome, and 5'-universal (adapter), which differed for forward and reverse primers. In addition to these primers containing both specific and adapter sequences, two primers were added to the reaction mixture, the sequences of which are complementary to the sequences of the adapter portion of the composite primers (SEQ ID NO: 91 and SEQ ID NO: 92). These adapter primers were present in the reaction mixture at various concentrations in order to generate predominantly single-stranded fragments, the sequences of which are complementary to the sequences of the oligonucleotides immobilized on the biochip.

Расчетные температуры плавления специфичных и адаптерных последовательностей выбирали равными 70°С и 55°С, соответственно, а профиль амплификации включал две стадии по 30 циклов каждая, с температурами отжига 64°С на первой, и 50°С на второй стадии. Таким образом, в ходе ПЦР в едином реакционном объеме на первой стадии за счет гибридизации и элонгации составных праймеров при использовании геномной ДНК в качестве матрицы происходила наработка двуцепочечных ПЦР-продуктов, содержащих на концах последовательности, специфичные к адаптерным праймерам, а затем, в ходе второй стадии, полученные ПЦР-продукты служили матрицей для наработки одноцепочечных фрагментов при использовании адаптерных праймеров с меньшей температурой отжига (Zimenkov D.V., Kulagina E.V., Antonova O.V., Zhuravlev V.Y. and Gryadunov D.A. Simultaneous drug resistance detection and genotyping of Mycobacterium tuberculosis using a low-density hydrogel microarray. 2016. Journal of antimicrobial chemotherapy. 71(6): 1520-1531).The calculated melting temperatures of specific and adapter sequences were chosen to be 70°C and 55°C, respectively, and the amplification profile included two stages of 30 cycles each, with annealing temperatures of 64°C in the first and 50°C in the second stage. Thus, in the course of PCR in a single reaction volume, at the first stage, due to hybridization and elongation of composite primers using genomic DNA as a template, double-stranded PCR products were generated containing sequences specific to adapter primers at the ends, and then, during the second stages, the resulting PCR products served as a template for the production of single-stranded fragments using adapter primers with a lower annealing temperature (Zimenkov D.V., Kulagina E.V., Antonova O.V., Zhuravlev V.Y. and Gryadunov D.A. Simultaneous drug resistance detection and genotyping of Mycobacterium tuberculosis using a low-density hydrogel microarray 2016 Journal of antimicrobial chemotherapy 71(6): 1520-1531).

Флуоресцентное маркирование исследуемых фрагментов микобактериального генома проводили, добавляя в ПЦР-смесь флуоресцентный субстрат - конъюгат дезоксиуридинтрифосфата и красителя индодикарбоцианинового ряда, с длиной волны возбуждения, равной (640±5) нм и длиной волны флуоресценции, равной (665±5) нм (ООО "Люмипроб РУС", Москва, Россия). В ходе ПЦР данный субстрат встраивался Taq-ДНК-полимеразой в растущую цепь ДНК, обеспечивая на выходе флуоресцентно-меченные ПЦР-продукты, анализируемые далее посредством гибридизации на биочипе.Fluorescent labeling of the studied fragments of the mycobacterial genome was carried out by adding to the PCR mixture a fluorescent substrate - a conjugate of deoxyuridine triphosphate and an indodicarbocyanine dye, with an excitation wavelength of (640 ± 5) nm and a fluorescence wavelength of (665 ± 5) nm (OOO " Lumiprob RUS", Moscow, Russia). During PCR, this substrate was inserted into the growing DNA chain by Taq-DNA polymerase, providing fluorescently labeled PCR products at the output, which were further analyzed by hybridization on a biochip.

При выборе однонуклеотидных филогенетических полиморфизмов руководствовались данными массового полногеномного секвенирования клинических образцов и последующего филогенетического анализа (Coll F, Phelan J, Hill-Cawthorne GA, et al. Genome-wide analysis of multi- and extensively drug-resistant Mycobacterium tuberculosis. Nat Genet. 2018 Feb;50(2):307-316. doi: 10.1038/s41588-017-0029-0. Epub 2018 Jan 22, Shitikov E, Kolchenko S, Mokrousov I, et al. Evolutionary pathway analysis and unified classification of East Asian lineage of Mycobacterium tuberculosis. Sci Rep.2017 Aug 23;7(1):9227. doi: 10.1038/s41598-017-10018-5). Для каждого ампликона подбирался олигонуклеотидный зонд с референсной последовательностью для оценки эффективности амплификации фрагмента. Для каждой позиции однонуклеотидного полиморфизма подбирались два зонда с последовательностью «дикого» типа и «мутантной» последовательностью. При выборе дискриминирующих олигонуклеотидов для иммобилизации на биочипе учитывалась вторичная структура и вырожденность геномной последовательности в окрестности. Специфичность в отношении анализируемой последовательности определяла длину дискриминирующих олионуклеотидов. Используя программное обеспечение, например Oligo v. 7 (Molecular Biology Insights Inc., США), рассчитывали температуры плавления олигонуклеотидов и добивались того, чтобы разброс температур плавления олигонуклеотидов составлял не более 2-3°С. Избегали таких олигонуклеотидов, которые способны формировать вторичные структуры с высокими температурами плавления. Положение определяемых вариабельных нуклеотидов выбирали по возможности ближе к середине олигонуклеотидного зонда.When choosing single nucleotide phylogenetic polymorphisms, we were guided by the data of mass whole genome sequencing of clinical samples and subsequent phylogenetic analysis (Coll F, Phelan J, Hill-Cawthorne GA, et al. Genome-wide analysis of multi- and extensively drug-resistant Mycobacterium tuberculosis. Nat Genet. 2018 Feb;50(2):307-316 doi: 10.1038/s41588-017-0029-0 Epub 2018 Jan 22, Shitikov E, Kolchenko S, Mokrousov I, et al Evolutionary pathway analysis and unified classification of East Asian lineage of Mycobacterium tuberculosis Sci Rep. 2017 Aug 23;7(1):9227 doi: 10.1038/s41598-017-10018-5). For each amplicon, an oligonucleotide probe with a reference sequence was selected to evaluate the efficiency of fragment amplification. For each position of a single nucleotide polymorphism, two probes were selected with a "wild" type sequence and a "mutant" sequence. When choosing discriminating oligonucleotides for immobilization on a biochip, the secondary structure and the degeneracy of the genomic sequence in the vicinity were taken into account. The specificity for the analyzed sequence determined the length of the discriminating olionucleotides. Using software such as Oligo v. 7 (Molecular Biology Insights Inc., USA), the melting points of the oligonucleotides were calculated and the spread of the melting points of the oligonucleotides was not more than 2-3°C. Avoided those oligonucleotides that are able to form secondary structures with high melting points. The position of the determined variable nucleotides was chosen as close as possible to the middle of the oligonucleotide probe.

Дискриминирующие олигонуклеотиды иммобилизовали в гелевых элементах, которые наносились на подложку формата предметного стекла в виде капель диаметром от 50 до 100 мкм с периодом 50-100 мкм, с использованием автоматизированной станции. В качестве материала подложки использовали полимеры (полипропилен, полиэтилен, полибутилентерефталат, полиметакрилат, поликарбонат, полистирол), либо стекло. Совместная полимеризация олигонуклеотидов с основными компонентами геля обеспечивалась за счет действия ультрафиолетового излучения. В результате этой реакции иммобилизуемые молекулы ковалентно присоединялись к мономерам растущей полимерной цепи и равномерно распределялись во всем объеме каждой гелевой ячейки (Rubina AY, SV, Dementieva EI et al. Hydrogel drop microchips with immobilized DNA: properties and methods for large-scale production. 2004. Analytical Biochemistry. 325: 92-106).Discriminating oligonucleotides were immobilized in gel elements, which were deposited on a slide format substrate in the form of droplets with a diameter of 50 to 100 µm with a period of 50–100 µm, using an automated station. Polymers (polypropylene, polyethylene, polybutylene terephthalate, polymethacrylate, polycarbonate, polystyrene) or glass were used as the substrate material. Joint polymerization of oligonucleotides with the main components of the gel was provided by the action of ultraviolet radiation. As a result of this reaction, the immobilized molecules covalently attached to the monomers of the growing polymer chain and were evenly distributed throughout the entire volume of each gel cell (Rubina AY, SV, Dementieva EI et al. Hydrogel drop microchips with immobilized DNA: properties and methods for large-scale production. 2004 Analytical Biochemistry 325:92-106).

ПЦР-продукты, полученные на стадии ПЦР, гибридизовали на дифференцирующем биочипе с иммобилизованными олигонуклеотидами, комплементарными последовательностям изучаемых на предмет наличия полиморфизмов. Гибридизацию проводили в растворе, содержащем буферный компонент для поддержания рН, соль для создания ионной силы и хаотропный (дестабилизирующий водородные связи) агент, в герметичной гибридизационной камере при температуре, зависящей от температуры плавления иммобилизованных на микрочипе дискриминирующих олигонуклеотидов.The PCR products obtained at the PCR stage were hybridized on a differentiating biochip with immobilized oligonucleotides complementary to the sequences studied for the presence of polymorphisms. Hybridization was carried out in a solution containing a buffer component to maintain pH, a salt to create ionic strength, and a chaotropic (hydrogen bond destabilizing) agent in a sealed hybridization chamber at a temperature dependent on the melting temperature of discriminating oligonucleotides immobilized on a microarray.

В качестве дестабилизирующего водородные связи агента использовали, например, гуанидин тиоцианат, мочевину или формамид. Выбор оптимальной температуры гибридизации проводили с учетом удобства практического применения системы. Дискриминирующие олигонуклеотиды, заявленные в настоящем изобретении, обладали температурой плавления в интервале от 42 до 44°С, что позволило проводить гибридизацию при 37°С в подобранном буфере.As the hydrogen bond destabilizing agent, for example, guanidine thiocyanate, urea or formamide has been used. The choice of the optimal hybridization temperature was carried out taking into account the convenience of the practical application of the system. Discriminating oligonucleotides of the present invention had a melting point in the range from 42 to 44°C, which allowed hybridization at 37°C in a matched buffer.

Дискриминацию совершенных и несовершенных дуплексов выполняли путем сравнения интенсивностей флуоресценции ячеек, в которых образовались дуплексы. Интенсивность сигнала в ячейке, в которой образовался совершенный гибридизационный дуплекс (Iсов) выше, чем в таковой, где образовался несовершенный дуплекс (Iнесов). Проведение гибридизации при оптимальных условиях (температура, подобранная концентрация хаотропного агента и ионная сила гибридизационного буфера) позволили добиться соотношения Iсов/Iнесов≥2 между двумя ячейками, содержащими зонды, принадлежащие одной группе, и различающиеся на один нуклеотид.Discrimination between perfect and imperfect duplexes was performed by comparing the fluorescence intensities of cells in which duplexes were formed. The signal intensity in the cell in which a perfect hybridization duplex (Icom) was formed is higher than in that in which an imperfect duplex (Incom) was formed. Carrying out hybridization under optimal conditions (temperature, selected concentration of the chaotropic agent and ionic strength of the hybridization buffer) made it possible to achieve the ratio Icom/Inesov≥2 between two cells containing probes belonging to the same group and differing by one nucleotide.

Установление генотипа возбудителя основано на сравнении сигналов в группах ячеек, содержащих олигонуклеотиды, последовательности которых комплементарны фрагментам, содержащим генотип-специфические однонуклеотидные полиморфизмы. При сравнении также учитывается сигнал от гибридизации соответствующего ампликона в консервативной области свободной от возможных замен. При первышении порога сигнала более чем в 10 раз по сравнению с фоновыми значениями гибридизации, вычисленными как среднее значение сигнала в пустых ячейках, проводилось сравнение и делалось заключение о наличии или отсутствии полиморфизма, характерного для какой-либо сублинии Beijing.Establishment of the pathogen genotype is based on comparison of signals in groups of cells containing oligonucleotides whose sequences are complementary to fragments containing genotype-specific single nucleotide polymorphisms. The comparison also takes into account the signal from the hybridization of the corresponding amplicon in a conservative region free from possible substitutions. When the signal threshold was exceeded by more than 10 times compared to the background hybridization values calculated as the average value of the signal in empty cells, a comparison was made and a conclusion was made about the presence or absence of polymorphism characteristic of any Beijing subline.

Данный алгоритм реализовывали в программном обеспечении анализатора флуоресценции биочипов, позволяющем проводить автоматическую регистрацию и интерпретацию результатов посредством захвата флуоресцентной картины гибридизации, вычисления сигнала в каждой ячейке, сравнения сигналов внутри групп и выдачи отчета о принадлежности образца к одному из генотипов Beijing.This algorithm was implemented in the biochip fluorescence analyzer software, which allows automatic registration and interpretation of the results by capturing the fluorescent hybridization pattern, calculating the signal in each cell, comparing signals within groups, and issuing a report on whether the sample belongs to one of the Beijing genotypes.

Далее изобретение будет проиллюстрировано примерами, которые предназначены для обеспечения лучшего понимания сущности заявленного изобретения, но не должны рассматриваться как ограничивающие данное изобретение.The invention will now be illustrated by examples, which are intended to provide a better understanding of the essence of the claimed invention, but should not be construed as limiting the present invention.

Пример 1. Изготовление гидрогелевого биочипа для идентификации генотипа возбудителя туберкулеза и его принадлежности к одной из сублиний линии L2 Beijing.Example 1. Production of a hydrogel biochip to identify the genotype of the causative agent of tuberculosis and its belonging to one of the sublines of the L2 Beijing line.

Олигонуклеотидные зонды с последовательностями SEQ ID NO: 1-90 (Таблица 1.) синтезируют на автоматическом синтезаторе ABI-394 DNA/RNA synthesizer («Applied Biosystems», США) с использованием стандартного фосфорамидитного метода. Зонды содержат спейсер со свободной аминогруппой для ковалентной иммобилизации в гидрогеле, которая вводилась в процессе синтеза с использованием 5'-Amino-Modifier С6 («Glen Research)))), США). Проводят очистку зондов обращенно-фазовой ВЭЖХ на хроматографе «Gilson», Франция.Oligonucleotide probes with sequences SEQ ID NO: 1-90 (Table 1) were synthesized on an ABI-394 DNA/RNA synthesizer (Applied Biosystems, USA) using a standard phosphoramidite method. The probes contain a spacer with a free amino group for covalent immobilization in the hydrogel, which was introduced during the synthesis using 5'-Amino-Modifier C6 (Glen Research))), USA). Probes are cleaned by reverse-phase HPLC on a Gilson chromatograph, France.

Биочипы на основе гидрогеля изготавливали методом сополимеризационной иммобилизации по ранее разработанной методике, описанной в статье Rubina A.Y., Pan'kov S.V. et al. Anal. Biochem., 2004, v. 325, p.92-106, doi: 10.1016/j.ab.2003.10.010.Hydrogel-based biochips were fabricated by copolymerization immobilization according to a previously developed method described in the article by Rubina A.Y., Pan'kov S.V. et al. Anal. Biochem., 2004, v. 325, p.92-106, doi: 10.1016/j.ab.2003.10.010.

Композиция для приготовления сополимеризационных микрочипов включала растворы 4,75% метакриламида, 0,25% N,N'-метиленбисакриламида, 50% глицерина, 5% N,N,N',N'-тетраметилэтилендиамина (TEMED), водные растворы олигонуклеотидов в концентрации 500-2000 пмоль/мкл, содержащих аминогруппу на 5'-конце, и 0,1 пмоль красителя Texas Red (Thermo Fischer Scientific, США). Композиции переносят в колодцы 384-луночного микротитровального планшета (Genetix, Великобритания), перемешивают и наносят на полимеризационные пластины в виде массива капель объемом ~0,1 нл с помощью роботизированного автоматического микродозатора, обеспечивающего перенос капель композиций последовательно и в строго определенном порядке в заданное место пластины с точностью 10 мкм. Полимеризацию гелевых элементов индуцируют УФ-облучением с длиной волны 350 нм и интенсивностью 0,06 мкВ/см2 в течение 40 минут при 20°С. По окончании полимеризации пластины промывали 0,1 М PBS-буфером, содержащим 0,1% Tween 20, при 65°С в течение 2 часов, затем деионизованной водой и высушивают. Разрезание полимеризационных пластин на индивидуальные подложки микрочипов выполняют с использованием лазера, фиксированного на двухкоординатном позиционере, после чего подложки вкладывают в пластиковые держатели формата предметного стекла и проводили технологический контроль качества. Диаметр гидрогелевых элементов составлял (100±5) мкм, а расстояние между элементами (200±10) мкм.The composition for the preparation of copolymerization microchips included solutions of 4.75% methacrylamide, 0.25% N,N'-methylenebisacrylamide, 50% glycerol, 5% N,N,N',N'-tetramethylethylenediamine (TEMED), aqueous solutions of oligonucleotides at a concentration of 500-2000 pmol/µl, containing an amino group at the 5'-end, and 0.1 pmol of Texas Red dye (Thermo Fischer Scientific, USA). The compositions are transferred into the wells of a 384-well microtiter plate (Genetix, UK), mixed and applied to the polymerization plates in the form of an array of drops with a volume of ~0.1 nl using a robotic automatic microsampler, which ensures the transfer of drops of the compositions sequentially and in a strictly defined order to a given place plates with an accuracy of 10 µm. Polymerization of the gel elements is induced by UV irradiation with a wavelength of 350 nm and an intensity of 0.06 μV/cm2 for 40 minutes at 20°C. After completion of polymerization, the plates were washed with 0.1 M PBS buffer containing 0.1% Tween 20 at 65°C for 2 hours, then with deionized water and dried. Cutting polymerization plates into individual microchip substrates is performed using a laser fixed on a two-coordinate positioner, after which the substrates are placed in plastic holders of the glass slide format and technological quality control was carried out. The diameter of the hydrogel elements was (100±5) µm, and the distance between the elements was (200±10) µm.

Схема размещения элементов изготовленного биочипа для идентификации филогенетических замен в геноме возбудителя туберкулеза линии L2 Beijing, приведена на Фигуре 1. Биочип состоит из 96 элементов, 90 из которых содержат иммобилизованные олигонуклеотидные зонды с SEQ ID NO: 1-90, три элемента с иммобилизованным флуоресцентным маркером - аналогом красителя Су5. Ячейки с маркером используются для правильного позиционирования биочипа при регистрации флуоресцентного изображения после проведения гибридизации и его обработки программным обеспечением анализатора биочипов (сканера) при автоматическом получении результатов. Три ячейки гидрогеля, свободные от олигонуклеотидов и красителей, предназначены для контроля качества отмывки биочипа.The layout of the elements of the manufactured biochip for identifying phylogenetic substitutions in the genome of the causative agent of tuberculosis line L2 Beijing is shown in Figure 1. The biochip consists of 96 elements, 90 of which contain immobilized oligonucleotide probes with SEQ ID NO: 1-90, three elements with an immobilized fluorescent marker - an analogue of the dye Su5. Cells with a marker are used for the correct positioning of the biochip when registering a fluorescent image after hybridization and its processing by the software of the biochip analyzer (scanner) with automatic results. Three cells of the hydrogel, free from oligonucleotides and dyes, are designed to control the quality of washing the biochip.

Биочип обеспечивает идентификацию 30 филогенетических полиморфизмов в геноме М. tuberculosis, позволяющих отнести штаммы линии L2 Beijing к одной из 23 сублиний, условно пронумерованных от 2 до 30 (Таблица 4). Каждая сублиния имеет свой уникальный профиль, причем древовидная таксономическая структура обеспечивает иерархичность наследования однонуклеотидных полиморфизмов, что снижает вероятность ошибочного определения сублинии для более современных штаммов. Линии от L2.3 до L2.18 относят к «древней» прото-Beijing, линии от 21 до 30 - к современному Beijing. Сублиния генотипа L2.27 соответствует сублинии (штамму или клону) Beijing B0/W148, a L2.29 - широко распространенному кластеру CAO (Central Asia Outbreak) и MIRU типу 94-32. Назначение каждого олигонуклеотидного зонда, SEQ ID NO: 1-90 присутствующего на биочипе, приведено в Таблице 1.The biochip provides the identification of 30 phylogenetic polymorphisms in the M. tuberculosis genome, which make it possible to attribute strains of the L2 Beijing line to one of 23 sublines conventionally numbered from 2 to 30 (Table 4). Each subline has its own unique profile, and the tree-like taxonomic structure provides a hierarchy of inheritance of single nucleotide polymorphisms, which reduces the likelihood of erroneous subline identification for more modern strains. Lines from L2.3 to L2.18 belong to the "ancient" proto-Beijing, lines from 21 to 30 - to modern Beijing. The L2.27 genotype subline corresponds to the Beijing B0/W148 subline (strain or clone), while L2.29 corresponds to the widespread cluster of CAO (Central Asia Outbreak) and MIRU type 94-32. The purpose of each oligonucleotide probe, SEQ ID NO: 1-90 present on the biochip, is shown in Table 1.

Пример 2. Обработка клинического образца и выделение ДНК. Проведение мультиплексной ПЦР и гибридизации на олигонуклеотидном микрочипе. Регистрация и интерпретация результатов гибридизации.Example 2 Treatment of a Clinical Sample and DNA Extraction. Conducting multiplex PCR and hybridization on an oligonucleotide microarray. Registration and interpretation of hybridization results.

Обработка клинического образца и выделение ДНК.Clinical sample processing and DNA extraction.

Клинический образец культуры М. tuberculosis суспендируют в 400 мкл ТЕ буфера (10 мМ Трис-HCl, 1 мМ ЭДТА), рН 8,0, содержащего 1% (об./об.) Тритон Х-100 и выдерживают в сухом термостате при 95°С в течение 30 мин.A clinical specimen of M. tuberculosis culture is suspended in 400 µl of TE buffer (10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA), pH 8.0, containing 1% (v/v) Triton X-100 and kept in a dry thermostat at 95 °C for 30 min.

Образец центрифугируют при 10000 об/мин в течение 10 мин. и дальнейшую очистку ДНК проводят с использованием набора «ПРОБА-НК» (ООО «НПО «ДНК-Технология») согласно инструкции производителя. Полученный раствор ДНК в объеме 50 мкл используют для проведения мультиплексной ПЦР.The sample is centrifuged at 10,000 rpm for 10 minutes. and further DNA purification is carried out using the PROBA-NK kit (NPO DNA-Technology LLC) according to the manufacturer's instructions. The resulting DNA solution in a volume of 50 μl is used for multiplex PCR.

Проведение мультиплексной ПЦР.Conducting multiplex PCR.

Для каждого анализируемого образца готовят 5 стерильных пробирок вместимостью 0,2 мл для проведения ПЦР, маркируя их «An», «Bn», «Cn», «Dn» и «En», где N - номер анализируемого образца.For each analyzed sample, 5 sterile test tubes with a capacity of 0.2 ml are prepared for PCR, marking them "An", "Bn", "Cn", "Dn" and "En", where N is the number of the analyzed sample.

Каждая ПЦР-смесь содержит:Each PCR mix contains:

- 1X ПЦР-буфер для HS Taq ДНК полимеразы (ЗАО «Евроген», Россия»);- 1X PCR buffer for HS Taq DNA polymerase (ZAO Evrogen, Russia);

- по 200 мкМ dATP, dCTP, dGTP, dUTP (Евроген);- 200 µM dATP, dCTP, dGTP, dUTP (Evrogen);

- 1 мкМ флуоресцентного субстрата Sulfo-Cyanine5 dUTP (ООО "Люмипроб РУС", Москва, Россия)- 1 μM fluorescent substrate Sulfo-Cyanine5 dUTP (OOO Lumiprob RUS, Moscow, Russia)

- соответствующая смесь праймеров (А, В, С, D или Е). Последовательности праймеров SEQ ID NO: 91-142 представлены в Таблице 2.- the appropriate mixture of primers (A, B, C, D or E). The primer sequences SEQ ID NO: 91-142 are shown in Table 2.

- 5 ед. HS Taq ДНК полимеразы (ЗАО «Евроген», Россия»);- 5 units HS Taq DNA polymerase (CJSC Evrogen, Russia);

К 30 мкл ПЦР-смеси An, Bn, Cn, Dn и En вносят 1 мкл раствора ДНК соответствующего образца N.To 30 µl of the PCR mixture of An, Bn, Cn, Dn and En add 1 µl of the DNA solution of the corresponding sample N.

Мультиплексную ПЦР проводили на программируемом термостате S1000 (Bio-Rad, США) согласно температурному режиму, приведенному в Таблице 3.Multiplex PCR was performed on a programmable thermostat S1000 (Bio-Rad, USA) according to the temperature regime shown in Table 3.

Проведение гибридизации и отмывки на биочипе.Carrying out hybridization and washing on a biochip.

В пробирку объемом 0,5 мл вносят 10 мкл гибридизационного буфера (3М гуанидинтиоцианата, 75 мМ буфера HEPES рН 7,5, 7,5 мМ ЭДТА). Вносят по 4 мкл реакционной смеси из пробирок An, Bn, Cn, Dn и En. Полученную смесь перемешивают на вортексе, капли собирают центрифугированием в течение 10 с при 1000 g.10 μl of hybridization buffer (3M guanidine thiocyanate, 75 mM HEPES buffer pH 7.5, 7.5 mM EDTA) is added to a 0.5 ml tube. Add 4 µl of the reaction mixture from test tubes An, Bn, Cn, Dn and En. The resulting mixture was vortexed, drops were collected by centrifugation for 10 s at 1000 g.

30 мкл полученной гибридизационной смеси вносят в одно из отверстий реакционной камеры биочипа. Гибридизацию проводят при 37°С в течение 6-12 часов. По окончании гибридизации биочип трижды промывают дистиллированной водой при 37°С, снимают гибридизационную камеру и высушивают биочип в потоке воздуха.30 μl of the obtained hybridization mixture is introduced into one of the openings of the reaction chamber of the biochip. Hybridization is carried out at 37°C for 6-12 hours. Upon completion of hybridization, the biochip is washed three times with distilled water at 37°C, the hybridization chamber is removed, and the biochip is dried in an air stream.

Регистрация и интерпретация результатов гибридизации.Registration and interpretation of hybridization results.

Регистрацию флуоресцентного изображения микрочипа выполняют на универсальном аппаратно-программном комплексе (УАПК) (ООО «БИОЧИП-ИМБ», Россия) для анализа биологических микрочипов с использованием специализированного программного обеспечения 'ImageWare®' (ООО «БИОЧИП-ИМБ»).Registration of the fluorescent image of the microchip is performed on a universal hardware-software complex (UAPK) (LLC "BIOCHIP-IMB", Russia) for the analysis of biological microchips using specialized software 'ImageWare®' (LLC "BIOCHIP-IMB").

Интерпретацию результатов проводят согласно приведенному выше алгоритму, сопоставляя мутационный профиль и генотип по Таблице 4, и реализованному в модуле программного обеспечения для анализа флуоресцентных изображений микрочипов 'Image-ware®'.The interpretation of the results is carried out according to the above algorithm, comparing the mutation profile and genotype according to Table 4, and implemented in the software module for the analysis of fluorescent images of microarrays 'Image-ware®'.

Пример 3. Анализ клинического образца, содержащего штамм М. tuberculosis генотипа Beijing В0/W148.Example 3 Analysis of a clinical specimen containing the Beijing B0/W148 genotype M. tuberculosis strain.

Клинический образец (бронхоальвеолярный лаваж), полученный от пациента, с подтвержденным микроскопией наличием кислотоустойчивых бактерий (БК+), разделяют на 2 части, одну из которых после деконтаминации (N-ацетил-L-цистеин и NaOH) и нейтрализации передают для микробиологических исследований. Идентификацию микобактерий туберкулезного комплекса проводят по результатам биохимических тестов (Kent РТ, Kubica GP. Public health mycobacteriology. A guide for level III laboratory. Atlanta, GA: Centers for Disease Control and Prevention, 1985). Вторую часть образца мокроты анализируют согласно изобретению, как описано в Примерах 1 и 2.A clinical sample (bronchoalveolar lavage) obtained from a patient with microscopy-confirmed presence of acid-fast bacteria (BA+) is divided into 2 parts, one of which, after decontamination (N-acetyl-L-cysteine and NaOH) and neutralization, is transferred for microbiological studies. Identification of Mycobacterium tuberculosis complex is carried out according to the results of biochemical tests (Kent RT, Kubica GP. Public health mycobacteriology. A guide for level III laboratory. Atlanta, GA: Centers for Disease Control and Prevention, 1985). The second part of the sputum sample is analyzed according to the invention, as described in Examples 1 and 2.

На Фигуре 2 представлен результат анализа ДНК, выделенной из данного клинического образца и исследованной согласно изобретению.The Figure 2 presents the result of the analysis of DNA isolated from this clinical sample and investigated according to the invention.

Согласно алгоритму обработки результатов гибридизации, описанному выше в данном образце установлено наличие ДНК микобактерий туберкулезного комплекса линии L2 Beijing.According to the algorithm for processing the results of hybridization, described above, the presence of DNA of mycobacteria of the tuberculosis complex line L2 Beijing was found in this sample.

Анализ группы ячеек, с зондами, специфичными к полиморфизмам в однонуклеотидных позициях, показал наличие полиморфизмов: g63146t, a1145848с, c4137829t, t1892017с, g15263lit, g3024343a, g1265070t, c1477596t, что означает, что данный штамм не принадлежит к древней группе Beijing. Анализ группы ячеек, с зондами, специфичными к полиморфизмам в однонуклеотидных позициях: 782634, 1059643, 2376135, 1692069, 1947282, 3056767, 1364706, 1145736, 1332899 показал отсутствие полиморфизмов в соответствующих позициях, а наличие полиморфизма t1947325c однозначно относит данный штамм к генотипу Beijing B0/W148.Analysis of a group of cells with probes specific for polymorphisms in single nucleotide positions showed the presence of polymorphisms: g63146t, a1145848c, c4137829t, t1892017c, g15263lit, g3024343a, g1265070t, c1477596t, which means that this strain does not belong to the ancient Beijing group. Analysis of a group of cells with probes specific for polymorphisms in single nucleotide positions: 782634, 1059643, 2376135, 1692069, 1947282, 3056767, 1364706, 1145736, 1332899 showed the absence of polymorphisms in the corresponding positions, and the presence of polymorphism t1947 unambiguously refers to the 5c0 Beijing strain23 /W148.

Методом MIRU-VNTR типирования подтверждают генотип Beijing B0/W148 для этого клинического образца. Определение аллельного полиморфизма по 24 локусам MIRU-VNTR выявило MIRU-профиль данного штамма: 273335444432657253213423, который соответствует MIRU-типу 100-32 и принадлежит кластеру генотипов Beijing B0/W148 (согласно международной базе MIRU-VNTRplus).MIRU-VNTR typing confirms the Beijing B0/W148 genotype for this clinical specimen. Determination of allelic polymorphism at 24 MIRU-VNTR loci revealed the MIRU profile of this strain: 273335444432657253213423, which corresponds to the MIRU type 100-32 and belongs to the Beijing B0/W148 genotype cluster (according to the international database MIRU-VNTRplus).

Пример 4. Анализ клинического образца, содержащего штамм М. tuberculosis генотипа Beijing 94-32.Example 4 Analysis of a clinical specimen containing the Beijing 94-32 genotype M. tuberculosis strain.

На Фигуре 3 представлен результат анализа ДНК, выделенной из данного клинического образца и исследованной согласно изобретению.The Figure 3 presents the result of the analysis of DNA isolated from this clinical sample and investigated according to the invention.

Анализ группы ячеек, с зондами, специфичными к полиморфизмам в однонуклеотидных позициях, показал наличие полиморфизмов: g63146t, a1145848c, c4137829t, t1892017c, g1526311t, g3024343a, g1265070t, c1477596t, что означает, что данный штамм не принадлежит к древней группе Beijing. Анализ группы ячеек, с зондами, специфичными к полиморфизмам в однонуклеотидных позициях: 782634, 1059643, 2376135, 1692069, 1947282, 3056767, 1947325, 1145736, 1332899 показал отсутствие полиморфизмов в соответствующих позициях, а наличие полиморфизма g1364706a однозначно относит данный штамм к генотипу Beijing 94-32.Analysis of a group of cells with probes specific for polymorphisms in single nucleotide positions showed the presence of polymorphisms: g63146t, a1145848c, c4137829t, t1892017c, g1526311t, g3024343a, g1265070t, c1477596t, which means that this strain does not belong to the ancient Beijing group. Analysis of a group of cells with probes specific for polymorphisms in single nucleotide positions: 782634, 1059643, 2376135, 1692069, 1947282, 3056767, 1947325, 1145736, 1332899 showed the absence of polymorphisms in the corresponding positions, and the presence of the polymorphism g13647 unequivocally refers to the Beijing strain6 -32.

Методом MIRU-VNTR типирования был подтверждают генотип Beijing 94-32 этого клинического образца. Определение аллельного полиморфизма по 24 локусам MIRU-VNTR выявило MIRU-профиль данного штамма: 253335444432658253213423, который соответствует MIRU-типу 94-32 и принадлежит кластеру генотипов Beijing 94-32 Central Asia (согласно международной базе MIRU-VNTRplus).The Beijing 94-32 genotype of this clinical sample was confirmed by MIRU-VNTR typing. Determination of allelic polymorphism at 24 MIRU-VNTR loci revealed the MIRU profile of this strain: 253335444432658253213423, which corresponds to the MIRU type 94-32 and belongs to the Beijing 94-32 Central Asia genotype cluster (according to the international database MIRU-VNTRplus).

Пример 5. Анализ клинических образцов, содержащих штаммы М. tuberculosis различных генотипов Beijing.Example 5 Analysis of clinical specimens containing strains of M. tuberculosis of different Beijing genotypes.

В качестве сравнения был использован метод молекулярного генотипирования MIRU-VNTR, аналогично как показано в Примерах 3 и 4. Результаты генотипирования с помощью гибридизации на биологических микрочипах и данные MIRU-VNTR анализа приведены в Таблице 5.As a comparison, the MIRU-VNTR molecular genotyping method was used, similarly as shown in Examples 3 and 4. The results of genotyping by hybridization on biological microarrays and MIRU-VNTR analysis data are shown in Table 5.

--->--->

<?xml version="1.0" encoding="UTF-8"?><?xml version="1.0" encoding="UTF-8"?>

<!DOCTYPE ST26SequenceListing PUBLIC "-//WIPO//DTD Sequence Listing <!DOCTYPE ST26SequenceListing PUBLIC "-//WIPO//DTD Sequence Listing

1.3//EN" "ST26SequenceListing_V1_3.dtd">1.3//EN" "ST26SequenceListing_V1_3.dtd">

<ST26SequenceListing originalFreeTextLanguageCode="ru" <ST26SequenceListing originalFreeTextLanguageCode="en"

nonEnglishFreeTextLanguageCode="ru" dtdVersion="V1_3" nonEnglishFreeTextLanguageCode="en" dtdVersion="V1_3"

fileName="Перечень последовательностей Зименков ДВ.xml" fileName="Sequence listing Zimenkov DV.xml"

softwareName="WIPO Sequence" softwareVersion="2.2.0" softwareName="WIPO Sequence" softwareVersion="2.2.0"

productionDate="2022-10-29">productionDate="2022-10-29">

</ApplicationIdentification> </ApplicationIdentification>

<ApplicantName languageCode="ru">Федеральное государственное <ApplicantName languageCode="en">Federal State

бюджетное учреждение науки Институт молекулярной биологии им. В.А. budgetary institution of science Institute of Molecular Biology. V.A.

Энгельгардта Российской академии наук (ИМБ РАН)</ApplicantName>Engelhardt of the Russian Academy of Sciences (IMB RAS)</ApplicantName>

<ApplicantNameLatin>Engelhardt Institute of Molecular Biology, <ApplicantNameLatin>Engelhardt Institute of Molecular Biology,

Russian Academy of Sciences</ApplicantNameLatin>Russian Academy of Sciences</ApplicantNameLatin>

<InventionTitle languageCode="ru">СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СУБЛИНИЙ <InventionTitle languageCode="en">THE METHOD FOR DEFINING SUBLINES

ВОЗБУДИТЕЛЯ ТУБЕРКУЛЕЗА ЛИНИИ L2 Beijing НА БИОЛОГИЧЕСКИХ OF TUBERCULOSIS LINE L2 Beijing ON BIOLOGICAL

МИКРОЧИПАХ</InventionTitle>MICROCHIPS</InventionTitle>

<INSDSeq_length>20</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>20</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division> <INSDSeq_division>PAT</INSDSeq_division>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_key>source</INSDFeature_key> <INSDFeature_key>source</INSDFeature_key>

<INSDFeature_location>1..20</INSDFeature_location> <INSDFeature_location>1..20</INSDFeature_location>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name> <INSDQualifier_name>mol_type</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>other DNA</INSDQualifier_value> <INSDQualifier_value>other DNA</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

<INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name> <INSDQualifier_name>organism</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>synthetic construct</INSDQualifier_value> <INSDQualifier_value>synthetic construct</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_key>misc_feature</INSDFeature_key> <INSDFeature_key>misc_feature</INSDFeature_key>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_name>product</INSDQualifier_name> <INSDQualifier_name>product</INSDQualifier_name>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>agcaacacgcgtcgtggttg</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>agcaacacgcgtcgtggttg</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>17</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>17</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_location>1..17</INSDFeature_location> <INSDFeature_location>1..17</INSDFeature_location>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>tggttgatgcgtgagat</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>tggttgatgcgtgagat</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>17</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>17</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>tggttgattcgtgagat</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>tggttgattcgtgagat</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>22</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>22</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_location>1..22</INSDFeature_location> <INSDFeature_location>1..22</INSDFeature_location>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>ggcgaacacgagcccagcgatc</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>ggcgaacacgagcccagcgatc</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>19</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>19</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_location>1..19</INSDFeature_location> <INSDFeature_location>1..19</INSDFeature_location>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>ccagcgatctggtatatgg</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>ccagcgatctggtatatgg</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>20</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>20</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>ccagcgatctagtatatggc</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>ccagcgatctagtatatggc</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>26</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>26</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_location>1..26</INSDFeature_location> <INSDFeature_location>1..26</INSDFeature_location>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>cagtgccgggacgaacaatctcgatg</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>cagtgccgggacgaacaatctcgatg</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>18</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>18</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_location>1..18</INSDFeature_location> <INSDFeature_location>1..18</INSDFeature_location>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>cttcgtggccgggttatc</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>cttcgtggccgggttatc</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>20</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>20</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>atcttcgtggtcgggttatc</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>atcttcgtggtcgggttatc</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>22</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>22</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>cgcgtcgcaaaatacaaccagc</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>cgcgtcgcaaaatacaaccagc</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>20</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>20</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>cgtgcgagacgaaataggta</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>cgtgcgagacgaaataggta</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>20</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>20</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>cgtgcgagacgcaataggta</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>cgtgcgagacgcaataggta</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>21</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>21</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_location>1..21</INSDFeature_location> <INSDFeature_location>1..21</INSDFeature_location>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>ggcgatttcgccggtgaatcc</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>ggcgatttcgccggtgaatcc</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>16</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>16</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_location>1..16</INSDFeature_location> <INSDFeature_location>1..16</INSDFeature_location>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>cctaccggctcggcga</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>cctaccggctcggcga</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>18</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>18</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>atcctaccgtctcggcga</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>atcctaccgtctcggcga</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>21</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>21</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>15</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>15</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_location>1..15</INSDFeature_location> <INSDFeature_location>1..15</INSDFeature_location>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>gctcggcgaggcggt</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>gctcggcgaggcggt</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>17</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>17</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>ggctcggagaggcggtc</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>ggctcggagaggcggtc</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>21</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>21</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>gtgtcgaggtcgcccatgacg</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>gtgtcgaggtcgcccatgacg</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>18</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>18</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>ccgccatggaaatacagc</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>ccgccatggaaatacagc</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>19</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>19</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>gccgccatgtaaatacagc</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>gccgccatgtaaatacagc</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>21</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>21</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>17</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>17</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>cggcaggtgccatcgtg</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>cggcaggtgccatcgtg</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>16</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>16</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>cggcaggggccatcgt</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>cggcaggggccatcgt</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>20</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>20</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>ggtttcggtgtccgcgctgc</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>ggtttcggtgtccgcgctgc</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>17</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>17</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>tcgcatatgtggtttcg</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>tcgcatatgtggtttcg</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>19</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>19</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>atcgcatatgcggtttcgg</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>atcgcatatgcggtttcgg</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>23</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>23</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_location>1..23</INSDFeature_location> <INSDFeature_location>1..23</INSDFeature_location>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>tacgcgagcagatggcctaccgg</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>tacgcgagcagatggcctaccgg</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>15</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>15</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>ggatcgccggtgatg</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>ggatcgccggtgatg</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>17</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>17</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>ggatcgctggtgatgtg</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>ggatcgctggtgatgtg</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>29</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>29</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_location>1..29</INSDFeature_location> <INSDFeature_location>1..29</INSDFeature_location>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>gtacctagccaatgacgtcaccacgtttc</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>gtacctagccaatgacgtcaccacgtttc</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>18</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>18</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>tgatgcccatcggctgac</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>tgatgcccatcggctgac</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>18</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>18</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>ttgatgcccaccggctga</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>ttgatgcccaccggctga</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>23</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>23</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>ggtgaccgcgctcaaaccgaacg</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>ggtgaccgcgctcaaaccgaacg</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>18</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>18</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>catcaccagcagggtgac</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>catcaccagcagggtgac</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>15</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>15</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>caccagccgggtgac</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>caccagccgggtgac</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>26</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>26</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>cgagcatccgcaggttcgtcaacacc</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>cgagcatccgcaggttcgtcaacacc</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>17</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>17</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>cagtgtgtgcggcttgg</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>cagtgtgtgcggcttgg</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>17</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>17</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>cagtgtgtgaggcttgg</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>cagtgtgtgaggcttgg</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>29</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>29</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>cccattgttcggcgaagtcggtgtcatcc</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>cccattgttcggcgaagtcggtgtcatcc</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>15</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>15</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>ccaggccaacggcgg</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>ccaggccaacggcgg</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>15</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>15</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>ccaggccaagggcgg</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>ccaggccaagggcgg</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>21</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>21</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>cacaccaccgaagtcgtcttg</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>cacaccaccgaagtcgtcttg</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>16</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>16</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>cgaaccgtcgcagtag</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>cgaaccgtcgcagtag</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>17</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>17</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>ccgaaccttcgcagtag</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>ccgaaccttcgcagtag</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>32</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>32</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_location>1..32</INSDFeature_location> <INSDFeature_location>1..32</INSDFeature_location>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>gtcgtattccgagttgttcagcccgttggtag</INSDSeq_sequenc <INSDSeq_sequence>gtcgtattccgagttgttcagcccgttggtag</INSDSeq_sequenc

e>e>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>16</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>16</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>gtagccggtgaccgcg</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>gtagccggtgaccgcg</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>17</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>17</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>ggtagccgatgaccgcg</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>ggtagccgatgaccgcg</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>24</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>24</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_location>1..24</INSDFeature_location> <INSDFeature_location>1..24</INSDFeature_location>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>ctcggtggtatcggaccggggccg</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>ctcggtggtatcggaccggggccg</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>19</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>19</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>ggccgcacgccgggatggt</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>ggccgcacgccgggatggt</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>19</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>19</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>ggccgcacgtcgggatggt</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>ggccgcacgtcgggatggt</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>23</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>23</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>ctgatcaaccgggtcgtcaagga</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>ctgatcaaccgggtcgtcaagga</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>16</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>16</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>gggttcggtcgtcgag</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>gggttcggtcgtcgag</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>17</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>17</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>gggttctgtcgtcgagg</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>gggttctgtcgtcgagg</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>26</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>26</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>19</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>19</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>ttaatggcccgatggggct</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>ttaatggcccgatggggct</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>19</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>19</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>gttaatggtccgatggggc</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>gttaatggtccgatggggc</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>20</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>20</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>gccgccgagatccgcgacgc</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>gccgccgagatccgcgacgc</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>19</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>19</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>cgacgcggtggcgaactcc</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>cgacgcggtggcgaactcc</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>17</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>17</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>gacgcggcggcgaactc</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>gacgcggcggcgaactc</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>29</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>29</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>actacaagattggtgaggtgcacgacggc</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>actacaagattggtgaggtgcacgacggc</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>17</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>17</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>acggcgcagccaccatg</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>acggcgcagccaccatg</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>16</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>16</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>acggcgcggccaccat</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>acggcgcggccaccat</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>21</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>21</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>cttcggtgacgcgctcgtcgc</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>cttcggtgacgcgctcgtcgc</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>17</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>17</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>cggcgtcggcttcggtg</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>cggcgtcggcttcggtg</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>19</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>19</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>accggcgtcagcttcggtg</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>accggcgtcagcttcggtg</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>21</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>21</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>gcgtcggggcatgtgatccga</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>gcgtcggggcatgtgatccga</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>16</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>16</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>tatcgcgggcagagcg</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>tatcgcgggcagagcg</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>16</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>16</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>tatcgcgggcggagcg</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>tatcgcgggcggagcg</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>30</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>30</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_location>1..30</INSDFeature_location> <INSDFeature_location>1..30</INSDFeature_location>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>ttcttaccgagattggcaaagagcggctgg</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>ttcttaccgagattggcaaagagcggctgg</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>15</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>15</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>gctggcaagggccgg</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>gctggcaagggccgg</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>14</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>14</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_location>1..14</INSDFeature_location> <INSDFeature_location>1..14</INSDFeature_location>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>gctggcgagggccg</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>gctggcgaggggccg</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>27</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>27</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_location>1..27</INSDFeature_location> <INSDFeature_location>1..27</INSDFeature_location>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>gtccttcatgatcgctgatcagctgac</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>gtccttcatgatcgctgatcagctgac</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>18</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>18</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>gaccgcttgacgtatcgc</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>gaccgcttgacgtatcgc</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>17</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>17</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>gaccgcttggcgtatcg</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>gaccgcttggcgtatcg</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>18</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>18</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>ggcgccccgctccatgac</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>ggcgccccgctccatgac</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>18</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>18</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>cgtccgccggcaacatgg</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>cgtccgccggcaacatgg</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>19</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>19</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>cgtccgccgtcaacatggc</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>cgtccgccgtcaacatggc</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>27</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>27</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>17</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>17</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>ggggcgtgcacggtttc</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>ggggcgtgcacggtttc</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>16</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>16</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>ggggcgcgcacggttt</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>ggggcgcgcacggttt</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>24</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>24</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>cttatcggctctccggcaaccagc</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>cttatcggctctccggcaaccagc</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>20</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>20</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>tgtaccggctggcttatcgg</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>tgtaccggctggcttatcgg</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>21</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>21</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>tgtaccggctagcttatcggc</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>tgtaccggctagcttatcggc</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>22</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>22</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>18</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>18</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>cgcgcctgctcgcagtga</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>cgcgcctgctcgcagtga</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>18</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>18</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>cgcgcctgcacgcagtga</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>cgcgcctgcacgcagtga</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>23</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>23</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>tcgatcgaggccggcaagatcac</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>tcgatcgaggccggcaagatcac</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>19</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>19</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>aagatcacaaaaatccatg</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>aagatcacaaaaatccatg</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>21</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>21</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>oligonucleotide <INSDQualifier_value>oligonucleotide

zond</INSDQualifier_value>zond</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>caagatcacacaaatccatgt</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>caagatcacacaaatccatgt</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>17</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>17</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

<INSDQualifier_value>primer</INSDQualifier_value> <INSDQualifier_value>primer</INSDQualifier_value>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>atgagagaaaccaggta</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>atgagagaaaccaggta</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>17</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>17</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>ttaatacgcttgagggt</INSDSeq_sequence> <INSDSeq_sequence>ttaatacgcttgagggt</INSDSeq_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>39</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>39</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_location>1..39</INSDFeature_location> <INSDFeature_location>1..39</INSDFeature_location>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>atgagagaaaccaggtaggcggcgttgaagtccccgagc</INSDSeq_ <INSDSeq_sequence>atgagagaaaccaggtaggcggcgttgaagtccccgagc</INSDSeq_

sequence>sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>40</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>40</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_location>1..40</INSDFeature_location> <INSDFeature_location>1..40</INSDFeature_location>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>ttaatacgcttgagggtccaccgctacgggcgacaaaccc</INSDSeq <INSDSeq_sequence>ttaatacgcttgagggtccaccgctacgggcgacaaaccc</INSDSeq

_sequence>_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>39</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>39</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>atgagagaaaccaggtagggtggccgccttcattggcga</INSDSeq_ <INSDSeq_sequence>atgagagaaaccaggtagggtggccgccttcattggcga</INSDSeq_

sequence>sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>39</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>39</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>ttaatacgcttgagggtgaaggcgccaccccagcggaaa</INSDSeq_ <INSDSeq_sequence>ttaatacgcttgagggtgaaggcgccaccccagcggaaa</INSDSeq_

sequence>sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>40</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>40</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>atgagagaaaccaggtaccaggcagcttttggcctgtcac</INSDSeq <INSDSeq_sequence>atgagagaaaccaggtaccaggcagcttttggcctgtcac</INSDSeq

_sequence>_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>40</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>40</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>ttaatacgcttgagggtgctaaccgtgcctgctcgcggtc</INSDSeq <INSDSeq_sequence>ttaatacgcttgagggtgctaaccgtgcctgctcgcggtc</INSDSeq

_sequence>_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>40</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>40</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>atgagagaaaccaggtaggccatcggcagcgggcagatca</INSDSeq <INSDSeq_sequence>atgagagaaaccaggtaggccatcggcagcgggcagatca</INSDSeq

_sequence>_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>40</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>40</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>ttaatacgcttgagggtgcgcttcgattcgggccgtttcg</INSDSeq <INSDSeq_sequence>ttaatacgcttgagggtgcgcttcgattcgggccgtttcg</INSDSeq

_sequence>_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>40</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>40</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>atgagagaaaccaggtacgaagtcggcggcgatttcgccg</INSDSeq <INSDSeq_sequence>atgagagaaaccaggtacgaagtcggcggcgatttcgccg</INSDSeq

_sequence>_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>39</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>39</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>ttaatacgcttgagggttgtcagccagcgtggcgtgcac</INSDSeq_ <INSDSeq_sequence>ttaatacgcttgagggttgtcagccagcgtggcgtgcac</INSDSeq_

sequence>sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>39</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>39</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>atgagagaaaccaggtaacaatcgcgtcagcgccgacgg</INSDSeq_ <INSDSeq_sequence>atgagagaaaccaggtaacaatcgcgtcagcgccgacgg</INSDSeq_

sequence>sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>40</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>40</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>ttaatacgcttgagggtgccaacgtgtcccgatcaagccg</INSDSeq <INSDSeq_sequence>ttaatacgcttgagggtgccaacgtgtcccgatcaagccg</INSDSeq

_sequence>_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>40</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>40</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>atgagagaaaccaggtacgtacacccagtcgccgctccca</INSDSeq <INSDSeq_sequence>atgagagaaaccaggtacgtacacccagtcgccgctccca</INSDSeq

_sequence>_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>40</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>40</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>ttaatacgcttgagggttcgagccgttgctatcgggcagc</INSDSeq <INSDSeq_sequence>ttaatacgcttgagggttcgagccgttgctatcgggcagc</INSDSeq

_sequence>_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>40</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>40</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>atgagagaaaccaggtatcctgcgctacgcgagcagatgg</INSDSeq <INSDSeq_sequence>atgagagaaaccaggtatcctgcgctacgcgagcagatgg</INSDSeq

_sequence>_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>37</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>37</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_location>1..37</INSDFeature_location> <INSDFeature_location>1..37</INSDFeature_location>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>ttaatacgcttgagggttggaactccgggtggcggcg</INSDSeq_se <INSDSeq_sequence>ttaatacgcttgagggttggaactccgggtggcggcg</INSDSeq_se

quence>quence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>40</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>40</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>atgagagaaaccaggtaccccggacctgacgaacctgatc</INSDSeq <INSDSeq_sequence>atgagagaaaccaggtaccccggacctgacgaacctgatc</INSDSeq

_sequence>_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>38</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>38</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_location>1..38</INSDFeature_location> <INSDFeature_location>1..38</INSDFeature_location>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>ttaatacgcttgagggtggatggctcacccaggcgccg</INSDSeq_s <INSDSeq_sequence>ttaatacgcttgagggtggatggctcacccaggcgccg</INSDSeq_s

equence>sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>40</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>40</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>atgagagaaaccaggtagttgttcggcctaccgtatcgca</INSDSeq <INSDSeq_sequence>atgagagaaaccaggtagttgttcggcctaccgtatcgca</INSDSeq

_sequence>_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>40</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>40</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>ttaatacgcttgagggtcactcgaccaattcgttcggttt</INSDSeq <INSDSeq_sequence>ttaatacgcttgagggtcactcgaccaattcgttcggttt</INSDSeq

_sequence>_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>40</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>40</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>atgagagaaaccaggtagtcgacagcgccagaaaatgcgc</INSDSeq <INSDSeq_sequence>atgagagaaaccaggtagtcgacagcgccagaaaatgcgc</INSDSeq

_sequence>_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>40</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>40</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>ttaatacgcttgagggtccgcaggagaagatcgcatgatt</INSDSeq <INSDSeq_sequence>ttaatacgcttgagggtccgcaggagaagatcgcatgatt</INSDSeq

_sequence>_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>38</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>38</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>atgagagaaaccaggtagctgcgttcgcccgcctggac</INSDSeq_s <INSDSeq_sequence>atgagagaaaccaggtagctgcgttcgcccgcctggac</INSDSeq_s

equence>sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>40</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>40</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>ttaatacgcttgagggtccccgaagacatcggcaaccggg</INSDSeq <INSDSeq_sequence>ttaatacgcttgagggtccccgaagacatcggcaaccggg</INSDSeq

_sequence>_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>40</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>40</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>atgagagaaaccaggtacggtggcaacgcgaagcacacca</INSDSeq <INSDSeq_sequence>atgagagaaaccaggtacggtggcaacgcgaagcacacca</INSDSeq

_sequence>_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>40</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>40</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>ttaatacgcttgagggtcgctgacgatctttgcctcccag</INSDSeq <INSDSeq_sequence>ttaatacgcttgagggtcgctgacgatctttgcctcccag</INSDSeq

_sequence>_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>40</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>40</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>atgagagaaaccaggtacacgtcgaggcggcagtcgtatt</INSDSeq <INSDSeq_sequence>atgagagaaaccaggtacacgtcgaggcggcagtcgtatt</INSDSeq

_sequence>_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>40</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>40</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>ttaatacgcttgagggttgcgacctgagcacatccgtgac</INSDSeq <INSDSeq_sequence>ttaatacgcttgagggttgcgacctgagcacatccgtgac</INSDSeq

_sequence>_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>37</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>37</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>atgagagaaaccaggtagggcccctggccggggtgaa</INSDSeq_se <INSDSeq_sequence>atgagagaaaccaggtagggcccctggccggggtgaa</INSDSeq_se

quence>quence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>37</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>37</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>ttaatacgcttgagggtcggcgcacccgcaccacgtc</INSDSeq_se <INSDSeq_sequence>ttaatacgcttgagggtcggcgcacccgcaccacgtc</INSDSeq_se

quence>quence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>40</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>40</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>atgagagaaaccaggtagggagtggggcctgatcaaccgg</INSDSeq <INSDSeq_sequence>atgagagaaaccaggtagggagtggggcctgatcaaccgg</INSDSeq

_sequence>_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>40</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>40</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>ttaatacgcttgagggtgacagcgacgcgttgacggtcac</INSDSeq <INSDSeq_sequence>ttaatacgcttgagggtgacagcgacgcgttgacggtcac</INSDSeq

_sequence>_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>40</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>40</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>atgagagaaaccaggtacgaaccgagttcgacgccgccga</INSDSeq <INSDSeq_sequence>atgagagaaaccaggtacgaaccgagttcgacgccgccga</INSDSeq

_sequence>_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>40</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>40</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>ttaatacgcttgagggtaggttggggtcgcgttctgcagc</INSDSeq <INSDSeq_sequence>ttaatacgcttgagggtaggttggggtcgcgttctgcagc</INSDSeq

_sequence>_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>40</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>40</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>atgagagaaaccaggtaccaccgagcgcatcctgtactac</INSDSeq <INSDSeq_sequence>atgagagaaaccaggtaccaccgagcgcatcctgtactac</INSDSeq

_sequence>_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>40</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>40</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>ttaatacgcttgagggttgatgccgcgctcctgttcctgt</INSDSeq <INSDSeq_sequence>ttaatacgcttgagggttgatgccgcgctcctgttcctgt</INSDSeq

_sequence>_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>40</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>40</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>atgagagaaaccaggtagcgtgtgtggcggtgtacgccga</INSDSeq <INSDSeq_sequence>atgagagaaaccaggtagcgtgtgtggcggtgtacgccga</INSDSeq

_sequence>_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>37</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>37</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>ttaatacgcttgagggttttgccttgggccgcggcga</INSDSeq_se <INSDSeq_sequence>ttaatacgcttgagggttttgccttgggccgcggcga</INSDSeq_se

quence>quence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>40</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>40</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>atgagagaaaccaggtacgggcagcaagtgagtcgatacg</INSDSeq <INSDSeq_sequence>atgagagaaaccaggtacgggcagcaagtgagtcgatacg</INSDSeq

_sequence>_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>40</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>40</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>ttaatacgcttgagggtcggtcctgcgcgagcaacttgag</INSDSeq <INSDSeq_sequence>ttaatacgcttgagggtcggtcctgcgcgagcaacttgag</INSDSeq

_sequence>_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>40</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>40</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>atgagagaaaccaggtatggcagcgacccgtgatcgcatg</INSDSeq <INSDSeq_sequence>atgagagaaaccaggtatggcagcgacccgtgatcgcatg</INSDSeq

_sequence>_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>40</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>40</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>ttaatacgcttgagggttcgaagaacaccgagctcaccgg</INSDSeq <INSDSeq_sequence>ttaatacgcttgagggttcgaagaacaccgagctcaccgg</INSDSeq

_sequence>_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>40</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>40</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>atgagagaaaccaggtacgaacgggcaggctaaggaagtt</INSDSeq <INSDSeq_sequence>atgagagaaaccaggtacgaacgggcaggctaaggaagtt</INSDSeq

_sequence>_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>37</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>37</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>ttaatacgcttgagggtccggcgcttgcggggcgaaa</INSDSeq_se <INSDSeq_sequence>ttaatacgcttgagggtccggcgcttgcggggcgaaa</INSDSeq_se

quence>quence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>40</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>40</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>atgagagaaaccaggtacgcggccgttaggtcgcggatct</INSDSeq <INSDSeq_sequence>atgagagaaaccaggtacgcggccgttaggtcgcggatct</INSDSeq

_sequence>_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>40</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>40</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>ttaatacgcttgagggtcttctcgctgttgggtgtcatgg</INSDSeq <INSDSeq_sequence>ttaatacgcttgagggtcttctcgctgttgggtgtcatgg</INSDSeq

_sequence>_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>40</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>40</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>atgagagaaaccaggtatggtccgtcagcacgccgatcgg</INSDSeq <INSDSeq_sequence>atgagagaaaccaggtatggtccgtcagcacgccgatcgg</INSDSeq

_sequence>_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>40</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>40</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>ttaatacgcttgagggttcggcatcgtgctggttgccgga</INSDSeq <INSDSeq_sequence>ttaatacgcttgagggttcggcatcgtgctggttgccgga</INSDSeq

_sequence>_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>40</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>40</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>atgagagaaaccaggtatgttggccctgtcgatcgaggcc</INSDSeq <INSDSeq_sequence>atgagagaaaccaggtatgttggccctgtcgatcgaggcc</INSDSeq

_sequence>_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

<INSDSeq_length>40</INSDSeq_length> <INSDSeq_length>40</INSDSeq_length>

<INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype> <INSDSeq_moltype>DNA</INSDSeq_moltype>

<INSDSeq_feature-table> <INSDSeq_feature-table>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

<INSDFeature_quals> <INSDFeature_quals>

</INSDQualifier> </INSDQualifier>

</INSDFeature_quals> </INSDFeature_quals>

</INSDFeature> </INSDFeature>

</INSDSeq_feature-table> </INSDSeq_feature-table>

<INSDSeq_sequence>ttaatacgcttgagggtccgtaacgggtccaatgttgaag</INSDSeq <INSDSeq_sequence>ttaatacgcttgagggtccgtaacgggtccaatgttgaag</INSDSeq

_sequence>_sequence>

</INSDSeq> </INSDSeq>

</SequenceData> </SequenceData>

</ST26SequenceListing></ST26SequenceListing>

<---<---

Claims

1. A method for determining the genotype of a strain of the causative agent of tuberculosis line L2 Beijing, including:

a) providing an oligonucleotide microchip for determining the presence/absence of point polymorphisms, which is a substrate containing a plurality of discrete elements, each of which immobilizes a unique oligonucleotide probe, each of which is represented by the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1-90;

b) multiplex amplification with simultaneous fluorescent labeling using the genomic DNA of mycobacterium tuberculosis complex as a template and a set of primers, each of which is represented by the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 91-142, to obtain fluorescently labeled fragments of the mycobacterial genome;

c) hybridization of the amplified fluorescently labeled products obtained in step (a) on an oligonucleotide microchip to form duplexes with immobilized probes under conditions that ensure one nucleotide resolution between perfect and imperfect duplexes resulting from hybridization;

d) registration of the results of hybridization on an oligonucleotide microchip carried out at stage (c) using a fluorescence analyzer and software, which allows the use of software processing of signal intensities with subsequent interpretation of the results.

2. The method according to claim 1, characterized in that the oligonucleotide microchip is a substrate with hydrogel elements obtained by the method of chemical or photoinduced copolymerization and containing immobilized oligonucleotide probes, each of which is represented by the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1-90.

3. The method according to claim 1, wherein the amplification of fragments of the mycobacterial genome is carried out using a DNA sample isolated from sputum, exudate, bronchoalveolar lavage or bronchial washings, or a DNA sample isolated from a clinical isolate of mycobacteria.

4. The method according to p. 1, in which during the stage of multiplex amplification of fragments of the M. tuberculosis genome, a set of specific primers is used, the sequences of which are presented by SEQ ID NO: 91-142.

5. The method according to claim 1, characterized in that in step (a) fluorescently labeled deoxyuridine triphosphate is used for fluorescent labeling of the resulting PCR fragments.

6. The method according to claim 1, in which at the stage of recording and interpreting the results of hybridization, a profile of phylogenetic polymorphisms is identified and compared with reference profiles obtained from the analysis of whole genome sequencing data.