RU2789822C1 - Method for optimizing laboratory diagnosis of thrombinemia in patients with covid-19 infection - Google Patents
Method for optimizing laboratory diagnosis of thrombinemia in patients with covid-19 infection Download PDFInfo
- Publication number
- RU2789822C1 RU2789822C1 RU2022112781A RU2022112781A RU2789822C1 RU 2789822 C1 RU2789822 C1 RU 2789822C1 RU 2022112781 A RU2022112781 A RU 2022112781A RU 2022112781 A RU2022112781 A RU 2022112781A RU 2789822 C1 RU2789822 C1 RU 2789822C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- thrombin
- covid
- thrombinemia
- peak
- infection
- Prior art date
Links
Images
Abstract
Description
Изобретение относится к медицине, а точнее - к диагностике состояния тромбинемии на основе лабораторного метода кинетики тромбина и может быть использовано в клинической практике врачами клинической лабораторной диагностики, инфекционистами, реаниматологами с целью оптимизации диагностики протромботического состояния у пациентов с инфекцией COVID-19.The invention relates to medicine, and more specifically to the diagnosis of thrombinemia based on the laboratory method of thrombin kinetics, and can be used in clinical practice by clinical laboratory diagnosticians, infectious disease specialists, resuscitators in order to optimize the diagnosis of a prothrombotic state in patients with COVID-19 infection.
Диагностика патологии системы гемостаза определяет решающую роль в лечении инфекции COVID-19. Маркерами ковид-ассоциированной коагулопатии и воспаления являются показатели, рекомендованные специалистами ISTH для определения у пациентов с COVID-19 [Временные рекомендации Международного Общества специалистов по Тромбозу и Гемостазу (ISTH) по выявлению и коррекции коагулопатии у пациентов с COVID-19]. При этом следует учитывать, что рекомендуемые стандартные гемостазиологические тесты, такие как протромбиновое время, активированное частичное тромбопластиновое время, уровень D-димера, фибриногена не способны выявить состояние тромбинемии (гиперкоагуляции, протромботической готовности) при новой короновирусной инфекции. Возможным решением данной проблемы может стать использование глобальных (интегральных) методов исследования системы гемостаза, которым является тест генерации (кинетики) тромбина. Предлагаемый тест является чувствительным и специфичным методом диагностики образования и количества тромбина (тромбинемии) и одним из оптимальных методов, коррелирующих с риском развития кровотечения или тромботическими событиями, в том числе при проведении антитромботической терапии.Diagnosis of the pathology of the hemostasis system determines a decisive role in the treatment of COVID-19 infection. Markers of covid-associated coagulopathy and inflammation are indicators recommended by ISTH specialists for determination in patients with COVID-19 [Interim recommendations of the International Society of Thrombosis and Hemostasis Specialists (ISTH) for the detection and correction of coagulopathy in patients with COVID-19]. At the same time, it should be taken into account that the recommended standard hemostatic tests, such as prothrombin time, activated partial thromboplastin time, D-dimer, fibrinogen levels, are not able to detect the state of thrombinemia (hypercoagulability, prothrombotic readiness) with a new coronovirus infection. A possible solution to this problem can be the use of global (integral) methods for studying the hemostasis system, which is a test for the generation (kinetics) of thrombin. The proposed test is a sensitive and specific method for diagnosing the formation and amount of thrombin (thrombinemia) and one of the optimal methods that correlates with the risk of bleeding or thrombotic events, including during antithrombotic therapy.
По данным научной литературы и реальной клинической практики в настоящее время не существует специфичного и чувствительного метода диагностики состояния тромбинемии (протромботической готовности, состояния гиперкоагуляции) у пациентов с острыми инфекционными заболеваниями, в том числе при инфекции Covid-19. Наиболее доступными тестами исследования гемостаза в реальной клинической практике до сих пор являются следующие: активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ), протромбиновое время (ПВ), определение плазменной активности антитромбина III (AT III), плазменная концентрация D-димера, уровень фибриногена И количество тромбоцитов [Raber M.N. Coagulation Tests / M.N. Raber - Butterworths, 1990]. Однако перечисленные выше лабораторные тесты не дают возможность оценить состояние тромбинемии и, как следствие, состояние протромботической готовности. Перечисленные скрининговые тесты коагуляции, отражая только 5% генерации (синтеза) тромбина, не решают полностью данную задачу, так как могут оставаться неизменными даже при развитии клинически значимого тромбоза, что не приемлемо для скрининга и, как следствие, выбора режима антитромботической терапии при патологии.According to the scientific literature and real clinical practice, there is currently no specific and sensitive method for diagnosing the state of thrombinemia (prothrombotic readiness, hypercoagulation state) in patients with acute infectious diseases, including Covid-19 infection. The most available tests for studying hemostasis in real clinical practice are still the following: activated partial thromboplastin time (APTT), prothrombin time (PT), determination of plasma activity of antithrombin III (AT III), plasma D-dimer concentration, fibrinogen level AND platelet count [Raber M.N. Coagulation Tests / M.N. Raber-Butterworths, 1990]. However, the laboratory tests listed above do not make it possible to assess the state of thrombinemia and, as a result, the state of prothrombotic readiness. The listed coagulation screening tests, reflecting only 5% of thrombin generation (synthesis), do not completely solve this problem, since they can remain unchanged even with the development of clinically significant thrombosis, which is unacceptable for screening and, as a result, for choosing an antithrombotic therapy regimen in pathology.
В отличие от широко используемых классических клоттинговых исследований, интегральные методы отображают кинетику всех стадий активации тромбина и формирования тромба, качество фибринового сгустка, функциональную активность тромбоцитов и фибринолиз [Röllig C. How I treat hyperleukocytosis in acute myeloid leukemia / C. Röllig, G. Ehninger // Blood - 2015. - T. 125 - №21 - 3246-3252 с.]. Данные тесты основаны на графической регистрации изменений вязкости и упруго-эластических свойств крови в процессе образования сгустка. Очень важно, что с помощью интегральных тестов исследуют не активность отдельных факторов свертывающей или противосвертывающей систем, а всю систему гемостаза в целом как результат взаимодействия данных факторов [Lang Т. Multi-centre investigation on reference ranges for ROTEM thromboelastometry. / T. Lang, A. Bauters, S.L. Braun, B. Pötzsch, K.-W. von Pape, H.-J. Kolde, M. Lakner // Blood Coagul. Fibrinolysis - 2005. - T. 16 - №4 - 301 - 10 с.].In contrast to the widely used classical clotting studies, integral methods reflect the kinetics of all stages of thrombin activation and thrombus formation, the quality of the fibrin clot, the functional activity of platelets and fibrinolysis [Röllig C. How I treat hyperleukocytosis in acute myeloid leukemia / C. Röllig, G. Ehninger // Blood - 2015. - T. 125 - No. 21 - 3246-3252 p.]. These tests are based on graphic registration of changes in blood viscosity and elastic properties of blood during clot formation. It is very important that with the help of integral tests, not the activity of individual factors of the coagulation or anticoagulation systems is examined, but the entire hemostasis system as a whole as a result of the interaction of these factors [Lang T. Multi-centre investigation on reference ranges for ROTEM thromboelastometry. / T. Lang, A. Bauters, S.L. Braun, B. Pötzsch, K.-W. von Pape, H.-J. Kolde, M. Lakner // Blood Coagul. Fibrinolysis - 2005. - T. 16 - No. 4 - 301 - 10 p.].
Одним из перспективных интегральных тестов для внедрения в реальную клиническую практику является тест генерации (кинетики) тромбина (ТГТ), который отражает именно состояние тромбинемии - количество генерируемого тромбина, кинетику его образования, а также служит финальной характеристикой соотношения прокоагулянтных и антикоагулянтных факторов [Carlier L. Ex vivo thrombin generation patterns in septic patients with and without disseminated intravascular coagulation/ L. Carlier [et al.] // Thrombosis Research. - 2015. - Vol. 135, №1. - p. 192-197]. Тест генерации (кинетики) тромбина (ТГТ) - измеряет кинетику и количество тромбина, образующегося в плазме крови при стандартной величине активации системы свертывания. Регистрируется кинетика возникновения и последующего исчезновения тромбина в плазме крови после активации свертывания.One of the promising integrated tests for implementation in real clinical practice is the thrombin generation (kinetics) test (TGT), which reflects the state of thrombinemia - the amount of generated thrombin, the kinetics of its formation, and also serves as the final characteristic of the ratio of procoagulant and anticoagulant factors [Carlier L. Ex vivo thrombin generation patterns in septic patients with and without disseminated intravascular coagulation/ L. Carlier [et al.] // Thrombosis Research. - 2015. - Vol. 135, no. 1. - p. 192-197]. Thrombin generation (kinetics) test (TGT) - measures the kinetics and amount of thrombin formed in blood plasma at a standard amount of activation of the coagulation system. The kinetics of the appearance and subsequent disappearance of thrombin in the blood plasma after the activation of coagulation is recorded.
Генерация тромбина как глобальный коагуляционный анализ более точно отражает тромботический фенотип, чем измерение отдельных локальных параметров коагуляционного каскада. ТГТ является чувствительным и специфичным методом диагностики образования тромбина и одним из лучших методов, коррелирующих с кровотечениями или тромботическими событиями [Bagot C.N., Leishman E., Onyiaodike С.С. et al., 2019; Duarte R.C.F. et al., 2017; Joly B.S. et al., 2018]. Основное различие между ТГТ И клоттинговыми тестами на свертывание заключается в том, что вторые описывают начало и конец образования фибринового сгустка (около 5% потребления тромбина), а ТГТ предоставляет информацию об общем потенциале свертывания, так как генерация тромбина не прекращается даже после образования сгустков фибрина.Thrombin generation as a global coagulation assay reflects the thrombotic phenotype more accurately than measurement of individual local parameters of the coagulation cascade. THT is a sensitive and specific method for diagnosing thrombin formation and one of the best methods that correlates with bleeding or thrombotic events [Bagot C.N., Leishman E., Onyiaodike C.S. et al., 2019; Duarte R.C.F. et al., 2017; Joly B.S. et al., 2018]. The main difference between THT and clotting tests for clotting is that the latter describe the beginning and end of fibrin clot formation (about 5% of thrombin consumption), while THT provides information on the overall clotting potential, since thrombin generation does not stop even after fibrin clots have formed. .
Наиболее близким к предлагаемому техническому решению проблемы является способ диагностики венозного тромбоза, основанный на методе определения D-димера [P.S. WELLS. Integrated strategies for the diagnosis of venous thromboembolism. - Jth. Volume 5, July 2007. - Pages 41-50 Issues 1 Special Issue: State of the Art]. Однако данный метод имеет низкую специфичность в виду того, что и фибриноген, и D-димер являются белками острофазового воспаления и закономерно увеличиваются при любом виде воспалении (инфекционном, асептическом, иммунным), беременности, старости, раке, и особенно при инфекции Covid-19 [Воробьева Н.А., Бедило Н.В., Сравнительная характеристика методов оценки тромбинемии у пациентов с внебольничной пневмонией Тромбоз, гемостаз, реология 2013 №2; Воробьева Н.А., Бедило Н.В. Оценка некоторых показателей гемостаза и эндотелиальной дисфункции у пациентов с внебольничной пневмонией Анестезиология и реаниматология, №1, 2014; Воробьева Н.А., Бедило Н.В. Способ прогнозирования неполного рентгенологического разрешения внебольничной пневмонии с использованием лабораторного мониторинга. Приоритет 2014134961 от 26.08.2014].The closest to the proposed technical solution to the problem is a method for diagnosing venous thrombosis, based on the method for determining the D-dimer [P.S. WELLS. Integrated strategies for the diagnosis of venous thromboembolism. - Jth.
Другим близким методом является способ скринингового обследования для выявления групп риска развития гиперкоагуляционного состояния в условиях экспедиционной работы В Арктике [Воробьева Н.А., Воробьева А.И., Мельничук Е.Ю. Способ скринингового обследования для выявления групп риска развития гиперкоагуляционного состояния в условиях экспедиционной работы в Арктике. Патент на изобретение №2767891 от 22 марта 2022 г.], где тест кинетики тромбина используется у практически здоровых людей для диагностики гиперкоагуляционного состояния в условиях морского арктического рейса. Однако данный метод не предусматривал оценку состояния тромбинемии в условиях системного воспаления, закономерно присутствующего у пациентов с инфекцией Covid-19.Another close method is the screening method for identifying risk groups for the development of a hypercoagulable state in the conditions of expeditionary work in the Arctic [Vorobyeva N.A., Vorobyova A.I., Melnichuk E.Yu. A screening method for identifying risk groups for developing a hypercoagulable state in conditions of expeditionary work in the Arctic. Patent for invention No. 2767891 dated March 22, 2022], where the thrombin kinetics test is used in practically healthy people to diagnose a hypercoagulable state during an Arctic sea voyage. However, this method did not assess the state of thrombinemia in conditions of systemic inflammation, which is naturally present in patients with Covid-19 infection.
Таким образом в настоящее время используемые и доступные лабораторные тесты не позволяют объективно и достоверно оценить риск развития и выраженность состояния тромбинемии, протромботической готовности, и, как следствие, выбрать соответствующий оптимальный режим антитромботической терапии (назначение профилактических или терапевтических доз антикоагулянтов) применительно к скринингу данного состояния при тяжелом течении инфекции Covid-19.Thus, the currently used and available laboratory tests do not allow to objectively and reliably assess the risk of development and severity of the state of thrombinemia, prothrombotic readiness, and, as a result, to choose the appropriate optimal antithrombotic therapy regimen (administration of prophylactic or therapeutic doses of anticoagulants) in relation to the screening of this condition. with severe Covid-19 infection.
Задачей настоящего изобретения является устранение существующих недостатков рутинных клоттинговых методов - объективизация (а именно измерение) анализируемого признака состояния тромбинемии и, как следствие, протромботической готовности на основе использования интегрального метода теста генерации (кинетики) тромбина, повышение диагностической значимости метода и упрощение интерпретации результатов, на основании которых выносят суждение о возможности наличия состояния протромботической готовности у пациентов с инфекцией Covid-19, на основе чего выбирается соответствующий режим антитромботической профилактики или терапии.The objective of the present invention is to eliminate the existing shortcomings of routine clotting methods - objectification (namely, measurement) of the analyzed sign of the state of thrombinemia and, as a result, prothrombotic readiness based on the use of an integral method of the thrombin generation (kinetics) test, increasing the diagnostic significance of the method and simplifying the interpretation of the results, by on the basis of which a judgment is made on the possibility of a state of prothrombotic readiness in patients with Covid-19 infection, on the basis of which an appropriate regimen of antithrombotic prophylaxis or therapy is selected.
Поставленная задача решается за счет того, что у пациентов с инфекцией Covid-19 проводиться лабораторная оценка состояния тромбинемии с использованием автоматического анализа параметров кинетики тромбина. Полученные результаты выражают в виде следующих показателей: время лаг-фазы (tLag), время образования пика тромбина (tPeak), пик тромбина (Peak) и эндогенный потенциал тромбина (AUC).The task is solved due to the fact that in patients with Covid-19 infection, a laboratory assessment of the state of thrombinemia is carried out using automatic analysis of the parameters of thrombin kinetics. The results are expressed as the following: lag phase time (tLag), thrombin peak time (tPeak), thrombin peak (Peak), and endogenous thrombin potential (AUC).
В доступных нам литературных источниках мы не обнаружили сведений по использованию метода Теста Генерации Тромбина для скрининга состояния тромботической готовности в условиях инфекции Covid-19 на основе которого выбирался режим антитромботической профилактики или терапии.In the literature available to us, we did not find information on the use of the Thrombin Generation Test method for screening the state of thrombotic readiness in conditions of Covid-19 infection, on the basis of which the antithrombotic prophylaxis or therapy regimen was selected.
Способ осуществляют следующим образом.The method is carried out as follows.
У пациентов, госпитализированных в ковидное отделение с подтвержденной методом ПЦР-анализа инфекцией Covid-19, выполняется забор венозной крови объемом 5 мл в вакуумный вакутейнер с 3,2% цитратом натрия. Полученные образцы крови центрифугируют при скорости 3000 оборотов в минуту в течение 15 минут. Определение параметров кинетики тромбина выполняется на автоматическом анализаторе «Ceveron®alpha» с TGA-модулем с использованием реагентов Ceveron TGA High (БиоХимМак). Анализируются следующие параметры кинетики тромбина: время лаг-фазы (tLag), время образования пика тромбина (tPeak), пик тромбина (Peak) и эндогенный потенциал тромбина (AUC). Программное обеспечение «Ceveron®alpha» автоматически рассчитывает показатели генерации/кинетики тромбина в образце в течение 10-15 минут, результаты представляются в нМ тромбина, генерированного в образце для каждой точки времени в течение всего процесса свертывания.In patients hospitalized in the covid department with PCR-confirmed Covid-19 infection, 5 ml of venous blood is taken into a vacuum vacutainer with 3.2% sodium citrate. The obtained blood samples are centrifuged at 3000 rpm for 15 minutes. Determination of parameters of thrombin kinetics is performed on the Ceveron®alpha automatic analyzer with a TGA module using Ceveron TGA High reagents (BioChemMac). The following parameters of thrombin kinetics are analyzed: lag phase time (tLag), thrombin peak formation time (tPeak), thrombin peak (Peak), and endogenous thrombin potential (AUC). The Ceveron®alpha software automatically calculates thrombin generation/kinetics in the sample over 10-15 minutes, the results are reported in nM of thrombin generated in the sample for each time point during the entire clotting process.
Используя референтные показатели кинетики тромбина (см. таблицу 1) делается заключение о наличии или отсутствии состояния тромбинемии как фактора риска развития тромботических и сосудистых осложнений (венозные/артериальные тромбозы, ТЭЛА, инсульты, инфаркты, транзиторные ишемические атаки). Данный способ скринингового обследования пациентов с инфекцией Covid-19 для выявления групп риска развития состояния тромботической готовности, основан на интегральном анализе системы гемостаза с использованием количества генерируемого тромбина, кинетики его образования для финальной характеристики соотношения прокоагулянтных и антикоагулянтных факторов.Using the reference indicators of thrombin kinetics (see Table 1), a conclusion is made about the presence or absence of thrombinemia as a risk factor for the development of thrombotic and vascular complications (venous / arterial thrombosis, pulmonary embolism, strokes, heart attacks, transient ischemic attacks). This method of screening patients with Covid-19 infection to identify risk groups for developing a state of thrombotic readiness is based on an integral analysis of the hemostasis system using the amount of generated thrombin, the kinetics of its formation for the final characterization of the ratio of procoagulant and anticoagulant factors.
При необходимости возможно провести динамический контроль (мониторинг) показателей кинетики тромбина для контроля эффективности назначенного профилактического или терапевтического режима антитромботической терапии.If necessary, it is possible to conduct dynamic control (monitoring) of indicators of thrombin kinetics to control the effectiveness of the prescribed prophylactic or therapeutic regimen of antithrombotic therapy.
Основанием для использования теста кинетики тромбина при инфекции Covid-19 явились результаты анализа вышеперечисленных параметров у пациентов с индифицированным вирусом SARS-CoV-2, госпитализированных в ковидное отделение ГБУЗ АО «Первая городская клиническая больница им. Е.Е. Волосевич» г. Архангельска.The basis for the use of the thrombin kinetics test in case of Covid-19 infection was the results of the analysis of the above parameters in patients with identified SARS-CoV-2 virus, hospitalized in the covid department of the State Budgetary Institution of Health of JSC “First City Clinical Hospital named after I.I. HER. Volosevich, Arkhangelsk.
Объектом исследования являлись пациенты со среднетяжелым и тяжелым течением COVID-19, госпитализированные в ГБУЗ АО ПГКБ им. Е.Е. Волосевич г. Архангельска в период с марта 2020 года по май 2021 года. В проспективное клинико-лабораторное исследование были включены 100 пациентов с выделенным вирусом SARS-CoV-2, средний возраст обследуемых составил 63 [31;85] года, преобладали женщины - 60%.The object of the study were patients with moderate and severe COVID-19, hospitalized in the State Budgetary Institution of Health of the Federal District Clinical Hospital named after. HER. Volosevich, Arkhangelsk in the period from March 2020 to May 2021. A prospective clinical and laboratory study included 100 patients with the isolated SARS-CoV-2 virus, the average age of the subjects was 63 [31;85] years, women predominated - 60%.
Критериями включения в исследование явились: подтвержденная методом ПЦР анализа инфекция Covid-19; госпитализация в ковидное отделение; письменное добровольное информированное согласие на участие в исследовании; возраст старше 18 лет. Критерии не включения: отказ на участие в исследовании; возраст младше 18 лет.The inclusion criteria for the study were: PCR-confirmed Covid-19 infection; hospitalization in the covid department; written voluntary informed consent to participate in the study; age over 18 years old. Non-inclusion criteria: refusal to participate in the study; age under 18 years old.
Дизайн исследования был одобрен локальным этическим комитетом Северного государственного медицинского университета.The study design was approved by the local ethics committee of the Northern State Medical University.
Забор образцов плазмы осуществлялся в двух точках: первая точка - при госпитализации пациента в стационар до назначения антитромботической терапии, вторая точка - на 3-5 сутки госпитализации на фоне антитромботической терапии низкомолекулярными гепаринами. Материалом для исследования явилась венозная кровь, полученная путем венепункции локтевой вены. Полученные образцы крови центрифугировали при скорости 3000 оборотов в минуту в течение 15 минут. Лабораторные исследования выполнены базе Регионального центра антитромботической терапии ГБУЗ Архангельской области «Первая городская клиническая больница им. Е.Е. Волосевич» г. Архангельска. Определение параметров кинетики тромбина проводилось на автоматическом анализаторе «Ceveron®alpha» с TGA-модулем с использованием реагентов Ceveron TGA High (БиоХимМак). Проанализированы следующие параметры кинетики тромбина: время лаг-фазы (tLag), время образования пика тромбина (tPeak), пик тромбина (Peak), эндогенный потенциал тромбина (AUC).Plasma sampling was carried out at two points: the first point - during the patient's hospitalization before the appointment of antithrombotic therapy, the second point - on the 3rd-5th day of hospitalization against the background of antithrombotic therapy with low molecular weight heparins. The material for the study was venous blood obtained by venipuncture of the cubital vein. The obtained blood samples were centrifuged at a speed of 3000 rpm for 15 minutes. Laboratory studies were performed on the basis of the Regional Center for Antithrombotic Therapy of the State Budgetary Institution of Healthcare of the Arkhangelsk Region “First City Clinical Hospital named after I.I. HER. Volosevich, Arkhangelsk. The parameters of thrombin kinetics were determined on a Ceveron®alpha automatic analyzer with a TGA module using Ceveron TGA High reagents (BioChemMac). The following parameters of thrombin kinetics were analyzed: lag phase time (tLag), thrombin peak formation time (tPeak), thrombin peak (Peak), endogenous thrombin potential (AUC).
Каждый из вышеперечисленных параметров имеет диагностическое значение. Lag time представляет собой эквивалент времени свертывания в традиционном тесте на коагуляцию. Peak thrombin представляет наибольшую концентрацию тромбина, которая может быть получена. Time to peak представляет скорость генерации тромбина. Исследуемая плазма может достигать time to peak быстрее или медленнее, что отражает гипер- или гипокоагуляционные состояния. Наконец, эндогенный тромбиновый потенциал AUC представляет собой общее количество тромбина, которое может генерировать образец плазмы под действием двух противоположных (про- и антикоагулянтных) активаторов, действующих в плазме (фиг. 1).Each of the above parameters has a diagnostic value. Lag time is the equivalent of the clotting time in a traditional coagulation test. Peak thrombin represents the highest concentration of thrombin that can be obtained. Time to peak represents the rate of thrombin generation. Tested plasma may reach time to peak faster or slower, reflecting hyper- or hypocoagulable states. Finally, endogenous thrombin potential AUC is the total amount of thrombin that can generate a plasma sample under the action of two opposite (pro- and anticoagulant) activators acting in plasma (Fig. 1).
Используемые референтные показатели ТГТ представлены в таблице 1 [Полеводова О.А. Диагностика и мониторинг терапии жизнеугрожающих геморрагических и тромботических осложнений у пациентов с заболеваниями системы крови - канд. дис. Москва 2019].Used reference indicators of THT are presented in table 1 [Polevodova O.A. Diagnosis and monitoring of therapy for life-threatening hemorrhagic and thrombotic complications in patients with diseases of the blood system - Cand. dis. Moscow 2019].
Исходя из временных методических рекомендаций определяли коагулологические показатели (протромбиновое время, D-димер, АЧТВ, фибриноген) - с использованием реактивов «Diagnostica Stago» на автоматическом коагулометре «StaCompact», Roshe (Швейцария) в течение 30 минут с момента забора крови в вакутейнер [Временные методические рекомендации «Профилактика, диагностика и лечение новой коронавирусной инфекции (COVID-19)». Версия 11 от 07.05.2021 http://nasci.ru/?id=40123&download=1, дата обращения 30 марта 2022].Based on temporary guidelines, coagulological parameters (prothrombin time, D-dimer, APTT, fibrinogen) were determined using the Diagnostica Stago reagents on the StaCompact automatic coagulometer, Roshe (Switzerland) within 30 minutes from the moment blood was taken into the vacutainer [ Interim guidelines "Prevention, diagnosis and treatment of novel coronavirus infection (COVID-19)". Version 11 dated May 7, 2021 http://nasci.ru/?id=40123&download=1, accessed March 30, 2022].
Статистический анализ выполнен с использованием программы SPSS версия 20,0 и калькулятор MedCalc. Количественные переменные представлены как М (mean) ± SD в случае нормального распределения и Me (median) и 25, 75 percentile при иных распределениях. Количественные переменные сравнивались с использованием параметрических и непараметрических тестов. Достоверными считались различия при р<0,05. Использованы методы корреляционного анализа (коэффициенты линейной корреляции Пирсона и ранговой корреляции Спирмена), регрессионного анализа (множественная линейная регрессия и множественная логистическая регрессия) и ROC.Statistical analysis was performed using SPSS version 20.0 and the MedCalc calculator. Quantitative variables are presented as M (mean) ± SD for a normal distribution and Me (median) and 25.75 percentile for other distributions. Quantitative variables were compared using parametric and nonparametric tests. Differences were considered significant at p<0.05. Methods of correlation analysis (Pearson's linear correlation coefficients and Spearman's rank correlation), regression analysis (multiple linear regression and multiple logistic regression) and ROC were used.
Обследуемые пациенты были в возрасте 63 [31; 85] года, в основном преобладали женщины - 60%. Динамика рутинных лабораторных показателей системы гемостаза у пациентов с Covid-19 представлена в таблице 2.The examined patients were aged 63 [31; 85] years, women predominated - 60%. The dynamics of routine laboratory parameters of the hemostasis system in patients with Covid-19 is presented in Table 2.
Было выявлено, что уровень D-димера статистически значимо повышается к 4-м суткам госпитализации, не смотря на проводимую антикоагулянтную терапию с использованием низкомолекулярных гепаринов, при этом уровень фибриногена и ферритина снижались только к 10-м суткам терапии. При этом важно отметить, что указанные маркеры относятся к лабораторным маркерам как гиперкоагуляции, так и системного воспаления (фиг. 1). Важно отметить, что рутинные клотинговые тесты (АЧТВ, MHO (ПВ) не показали диагностической значимости для выявления состояния тромбинемии.It was found that the level of D-dimer increased statistically significantly by the 4th day of hospitalization, despite the ongoing anticoagulant therapy using low molecular weight heparins, while the levels of fibrinogen and ferritin decreased only by the 10th day of therapy. It is important to note that these markers are laboratory markers of both hypercoagulability and systemic inflammation (Fig. 1). It is important to note that routine clotting tests (APTT, MHO (PT) did not show diagnostic significance for detecting the state of thrombinemia.
Результаты теста кинетики тромбина в нашем исследовании указывают на повышение прокоагулянтного потенциала крови у пациентов с Covid-19 при госпитализации в стационар. Так, было установлено, что статистически значимо укорачивалось время инициации свертывания, время достижения пиковой концентрации тромбина и время увеличения пиковой концентрации тромбина у пациентов в 1-е сутки госпитализации, что свидетельствовало о значимой активации тромбина и состоянии тромбинемии - протромботической активности (таблица 3).The results of the thrombin kinetics test in our study indicate an increase in the procoagulant potential of the blood in patients with Covid-19 during hospitalization. Thus, it was found that the time of coagulation initiation, the time to reach the peak thrombin concentration and the time to increase the peak thrombin concentration in patients on the 1st day of hospitalization were statistically significantly shortened, which indicated a significant activation of thrombin and the state of thrombinemia - prothrombotic activity (table 3).
Следующим этапом явился анализ показателей теста кинетики тромбина на фоне антитромботической терапии низкомолекулярными гепаринами, где была отмечена динамика снижения активности тромбинемии по всем анализируемым показателям теста кинетики тромбина (таблица 4).The next step was to analyze the indicators of the thrombin kinetics test against the background of antithrombotic therapy with low molecular weight heparins, where the dynamics of the decrease in thrombinemia activity was noted for all analyzed indicators of the thrombin kinetics test (table 4).
Проведен анализ возможной связи отдельных показателей теста кинетики тромбина с рекомендуемыми BMP (версия 11.0) лабораторными маркерами острофазового воспаления и дисбаланса в системе гемостаза (фиг. 2-6).An analysis of the possible relationship of individual indicators of the thrombin kinetics test with the recommended BMP (version 11.0) laboratory markers of acute phase inflammation and imbalance in the hemostasis system was carried out (Fig. 2-6).
Так, была выявлена связь времени инициации свертывания (Tlag) с уровнем фибриногена (rS=-0,7(р=0,001) и СРБ (rS=-0,1(p=0,01); времени достижения пика генерации тромбина (tPeak) со всеми маркерами воспаления (D-димером (rS=-0,4 (р=0,001), ферритином (rS=-0,2(p=0,01), СРБ (rS=-0,3(p=0,05), фибриногеном (rS=-0,5(p=0,001)); пиковой концентрации тромбина (Peak thrombin) с уровнем фибриногена (rS=0,3 р=0,001); индекса скорости (VI) с уровнем фибриногена (rS=0,2, р<0,001); эндогенного тромбинового потенциала (ЕТР, AUC) с уровнем фибриногена (rS=0,4, р=0,001) и СРБ (rS=0,1, р=0,001) (фиг. 2-6).Thus, a relationship was found between the clotting initiation time (Tlag) and the level of fibrinogen (rS=-0.7(p=0.001) and CRP (rS=-0.1(p=0.01); time to reach the peak of thrombin generation (tPeak ) with all markers of inflammation (D-dimer (rS=-0.4 (p=0.001), ferritin (rS=-0.2(p=0.01), CRP (rS=-0.3(p=0 .05), fibrinogen (rS=-0.5(p=0.001)); peak thrombin concentration (Peak thrombin) with fibrinogen level (rS=0.3 p=0.001); speed index (VI) with fibrinogen level (rS =0.2, p<0.001), endogenous thrombin potential (ETR, AUC) with fibrinogen level (rS=0.4, p=0.001) and CRP (rS=0.1, p=0.001) (Fig. 2- 6).
Полученные результаты свидетельствуют о значимом повышении уровня эндогенного тромбинового потенциала и наличии тромбинемии по всем тестам кинетики тромбина в зависимости от острофазового воспаления при новой короновирусной инфекции.The results obtained indicate a significant increase in the level of endogenous thrombin potential and the presence of thrombinemia in all tests of thrombin kinetics, depending on acute phase inflammation in a new coronovirus infection.
Таким образом, тест генерации (кинетики) тромбина может рассматриваться в качестве маркера развития тромбинемии - протромботической готовности у пациентов с среднетяжелым и тяжелым течением новой короновирусной инфекцией.Thus, the thrombin generation (kinetics) test can be considered as a marker for the development of thrombinemia - prothrombotic readiness in patients with moderate and severe new coronovirus infection.
Данные результаты нашего исследования согласуются с отдельными данными, что многие провоспалительные эффекты тромбина имеют важную роль в развития сосудистых событий как на уровне макро- так и микроциркуляции [Favaretto Е. Thrombin generation and intracranial atherosclerotic disease in patients with a transient ischaemic attack /Е. Favaretto [et al.] // Thrombosis Research. - 2017. - Vol. 155. - P. 72-77].These results of our study are consistent with individual data that many of the pro-inflammatory effects of thrombin have an important role in the development of vascular events both at the level of macro- and microcirculation [Favaretto E. Thrombin generation and intracranial atherosclerotic disease in patients with a transient ischaemic attack /E. Favaretto [et al.] // Thrombosis Research. - 2017. - Vol. 155. - P. 72-77].
Апробирование скринингового метода мониторинга тромбинемии на проспективной выборке пациентов с новой короновирусной инфекцией показало, что в 100% случаев данный метод выявляет состояние тромбинемии в отличие от клоттинговых методов, которые не показали свою диагностическую ценность в плане диагностики состояния тромбинемии.Testing of the screening method for monitoring thrombinemia on a prospective sample of patients with a new coronovirus infection showed that in 100% of cases this method reveals the state of thrombinemia, unlike clotting methods, which have not shown their diagnostic value in terms of diagnosing the state of thrombinemia.
Представляем несколько клинических примеров, демонстрирующих значимость данного скринингового метода для лабораторной диагностики состояния тромбинемии в условиях инфекции Covid-19. Хронометрические и структурные показатели системы гемостаза (фибриноген, АЧТВ и MHO), включая широко используемый и рекомендуемый тест определения уровня D-димера, во всех случаях не показали состояния тромбинемии в отличии от теста генерации тромбина.We present several clinical examples demonstrating the significance of this screening method for the laboratory diagnosis of thrombinemia in conditions of Covid-19 infection. Chronometric and structural parameters of the hemostasis system (fibrinogen, APTT and MHO), including the widely used and recommended test for determining the level of D-dimer, in all cases did not show the state of thrombinemia, in contrast to the thrombin generation test.
Клинические примерыClinical examples
1. Пациент Р., мужчина 69 года. Сопутствующие заболевания (коморбитность) - гипертоническая болезнь III ст., риск 3, сахарный диабет 2 типа, ИМТ 38 кг/м2, курит. КТ-3 - среднетяжелая пневмония, поражено 50-75% легких.1. Patient R., male, 69 years old. Concomitant diseases (comorbidity) - hypertension stage III,
Уровень D-димера - без динамики. Показатели теста генерации тромбина в динамике - состояние тромбинемии при поступлении и регрессия тромбинемии при назначении антитромботической терапии надропарином в терапевтической дозе. Выздоровление.D-dimer level - without dynamics. Indicators of the thrombin generation test in dynamics - the state of thrombinemia at admission and regression of thrombinemia when antithrombotic therapy with nadroparin at a therapeutic dose is prescribed. Recovery.
2. Пациентка С., женщина 82 года. Сопутствующие заболевания (коморбитность) - гипертоническая болезнь III ст., риск 4, сахарный диабет 2 типа, ИМТ 29 кг/м2, не курит. КТ-4 - тяжелая пневмония, поражено более 75% легких.2. Patient S., woman, 82 years old. Concomitant diseases (comorbidity) - hypertension stage III,
Уровень D-димера - без динамики. Показатели теста генерации тромбина в динамике - состояние тромбинемии при поступлении и регрессия тромбинемии при назначении антитромботической терапии надропарином в терапевтической дозе. Выздоровление через тяжелый постковидный синдром.D-dimer level - without dynamics. Indicators of the thrombin generation test in dynamics - the state of thrombinemia at admission and regression of thrombinemia when antithrombotic therapy with nadroparin at a therapeutic dose is prescribed. Recovery through severe post-COVID syndrome.
3. Пациентка П., женщина 78 года. Сопутствующие заболевания (коморбитность) - ОНМК 4 года назад, гипертоническая болезнь III ст., риск 4, сахарный диабет 2 типа, ИМТ 34 кг/м2, не курит. КТ-3 - среднетяжелая пневмония, поражено 50-75% легких.3. Patient P., woman, 78 years old. Concomitant diseases (comorbidity) -
Уровень D-димера - без динамики. Показатели теста генерации тромбина в динамике - состояние тромбинемии при поступлении и регрессия тромбинемии при назначении антитромботической терапии надропарином в терапевтической дозе. ВыздоровлениеD-dimer level - without dynamics. Indicators of the thrombin generation test in dynamics - the state of thrombinemia at admission and regression of thrombinemia when antithrombotic therapy with nadroparin at a therapeutic dose is prescribed. Recovery
4. Пациент М., мужчина 58 года. Сопутствующие заболевания (коморбитность) - сахарный диабет 2 типа, ИМТ 28 кг/м2, ХОБЛ, курит. КТ-3 - среднетяжелая пневмония, поражено 50-75% легких.4. Patient M., male, 58 years old. Concomitant diseases (comorbidity) -
Уровень D-димера - без динамики. Показатели теста генерации тромбина в динамике - состояние тромбинемии при поступлении и регрессия тромбинемии при назначении антитромботической терапии надропарином в терапевтической дозе. Выздоровление через фиброз легкого.D-dimer level - without dynamics. Indicators of the thrombin generation test in dynamics - the state of thrombinemia at admission and regression of thrombinemia when antithrombotic therapy with nadroparin at a therapeutic dose is prescribed. Recovery through pulmonary fibrosis.
5. Пациент О., мужчина 47 года. Сопутствующие заболевания (коморбитность) - гипертоническая болезнь III ст., риск 4, ИМТ 32 кг/м2, не курит. КТ-3 - среднетяжелая пневмония, поражено 50-75% легких.5. Patient O., male, 47 years old. Concomitant diseases (comorbidity) - hypertension III degree,
Уровень D-димера - без динамики. Показатели теста генерации тромбина в динамике - состояние тромбинемии при поступлении и регрессия тромбинемии при назначении антитромботической терапии надропарином в терапевтической дозе. Выздоровление.D-dimer level - without dynamics. Indicators of the thrombin generation test in dynamics - the state of thrombinemia at admission and regression of thrombinemia when antithrombotic therapy with nadroparin at a therapeutic dose is prescribed. Recovery.
Данные настоящего проспективного клинического исследования демонстрируют простоту и полезность предложенного лабораторного метода способа скрининга состояния тромбинемии. Кроме того, разработанный и апробированный метод значительно оптимизирует лабораторную диагностику состояния именно тромбинемии на фоне острого воспаления в отличии от базовых хронометрических и структурных тестов (фибриноген, АЧТВ, ПВ, D-димер), которые в данных условиях не показали свою диагностическую ценность. Немаловажно, что врач-клиницист «красной» зоны ковидного госпиталя получает объективный показатель, указывающий на возможность присутствия состояния тромбинемии на фоне острого воспаления при инфекции Covid-19, что невозможно при использовании лабораторного теста уровня Д-димера.Data from this prospective clinical study demonstrate the simplicity and usefulness of the proposed laboratory method for screening for thrombinemia. In addition, the developed and tested method significantly optimizes the laboratory diagnosis of thrombinemia against the background of acute inflammation, in contrast to the basic chronometric and structural tests (fibrinogen, APTT, PT, D-dimer), which under these conditions did not show their diagnostic value. It is important that the clinician of the “red” zone of the covid hospital receives an objective indicator indicating the possibility of the presence of a thrombinemia state against the background of acute inflammation in case of Covid-19 infection, which is impossible when using a laboratory test for the level of D-dimer.
Сведения об известных аналогахInformation about known analogues
1. Воробьева Н.А., Бедило Н.В., Сравнительная характеристика методов оценки тромбинемии у пациентов с внебольничной пневмонией Тромбоз, гемостаз, реология 2013 №2.1. Vorobieva N.A., Bedilo N.V., Comparative characteristics of methods for assessing thrombinemia in patients with community-acquired pneumonia Thrombosis, hemostasis, rheology 2013 No. 2.
2. Воробьева Н.А., Бедило Н.В. Оценка некоторых показателей гемостаза и эндотелиальной дисфункции у пациентов с внебольничной пневмонией Анестезиология и реаниматология, №1, 2014.2. Vorobieva N.A., Bedilo N.V. Evaluation of some indicators of hemostasis and endothelial dysfunction in patients with community-acquired pneumonia Anesthesiology and resuscitation, No. 1, 2014.
3. Воробьева Н.А., Бедило Н.В. Способ прогнозирования неполного рентгенологического разрешения внебольничной пневмонии с использованием лабораторного мониторинга. Приоритет 2014134961 от 26.08.2014.3. Vorobieva N.A., Bedilo N.V. A method for predicting incomplete radiological resolution of community-acquired pneumonia using laboratory monitoring. Priority 2014134961 dated 08/26/2014.
4. Воробьева Н.А., Воробьева А.И., Мельничук Е.Ю. Способ скринингового обследования для выявления групп риска развития гиперкоагуляционного состояния в условиях экспедиционной работы в Арктике. Патент на изобретение №2767891 от 22 марта 2022 г.4. Vorobieva N.A., Vorobieva A.I., Melnichuk E.Yu. A screening method for identifying risk groups for developing a hypercoagulable state in conditions of expeditionary work in the Arctic. Patent for invention No. 2767891 dated March 22, 2022
5. А.А. Мельник Тест генерации тромбина - уникальный метод интегральной оценки системы гемостаза Медична газета «Здоров'я Украïи 21 сторiччя» №2 (375), сiчень 2016 p.; Hemker Н.С., Аl Dieri R., De Smedt E. et al. // Thromb. Haemost. 2006; 96: 553-561.5. A.A. Melnik Thrombin generation test - a unique method for the integral assessment of the hemostasis system Hemker H.C., Al Dieri R., De Smedt E. et al. // Thromb. haemost. 2006; 96:553-561.
6. Armando Tripodi. Thrombin Generation Assay and Its Application in the Clinical Laboratory // Clinical Chemistry. - 2016. - No. 5. - S. 699-707.6. Armando Tripodi. Thrombin Generation Assay and Its Application in the Clinical Laboratory // Clinical Chemistry. - 2016. - No. 5. - S. 699-707.
7. Eichinger S. Prediction of recurrent venous thromboembolism by endogenous thrombin potential and D-dimer / S. Eichinger [et al.] // Clin Chem. - 2008. - Vol. 54, №12. - P. 2042-20487. Eichinger S. Prediction of recurrent venous thromboembolism by endogenous thrombin potential and D-dimer / S. Eichinger [et al.] // Clin Chem. - 2008. - Vol. 54, no. 12. - P. 2042-2048
8. Hemker H.C., Beguin S. Thrombin generation in plasma: its assessment via the endogenous thrombin potential. Throm. Haemost. 1995; 74(5): 134-138.8. Hemker H.C., Beguin S. Thrombin generation in plasma: its assessment via the endogenous thrombin potential. Throm. haemost. 1995; 74(5): 134-138.
9. Hemker H.C., Al Dieri R., De Smedt E. et al. Thrombin generation, a function test of the haemostatic-thrombotic system // Thromb Haemost.. - 2006. - Вып. 96, №5. - С. 553-5619. Hemker H.C., Al Dieri R., De Smedt E. et al. Thrombin generation, a function test of the haemostatic-thrombotic system // Thromb Haemost.. - 2006. - Vol. 96, no. 5. - pp. 553-561
10. Raber M.N. Coagulation Tests / M.N. Raber - Butterworths, 1990.10. Raber M.N. Coagulation Tests / M.N. Raber - Butterworths, 1990.
11. Wells P.S. Integrated strategies for the diagnosis of venous thromboembolism. - Jth. Volume 5, July 2007. - Pages 41-50 Issues1 Special Issue: State of the Art.11. Wells P.S. Integrated strategies for the diagnosis of venous thromboembolism. - Jth.
Claims (1)
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2789822C1 true RU2789822C1 (en) | 2023-02-10 |
Family
ID=
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU1672372A1 (en) * | 1988-10-03 | 1991-08-23 | Белорусский государственный институт усовершенствования врачей | Method for diagnosis of thrombinemia |
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU1672372A1 (en) * | 1988-10-03 | 1991-08-23 | Белорусский государственный институт усовершенствования врачей | Method for diagnosis of thrombinemia |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| VOROBYEVA N. et al. On the Issue of Thrombinemia in Moderate COVID-19 [abstract]. Res Pract Thromb Haemost. 2021 Oct; 5 (Suppl 2). KHALIRAKHMANOV A.F. et al. Pathogenesis, Diagnosis, and Treatment of Hemostatic Disorders in COVID-19 Patients. April 2021. Acta Naturae. 13(2): 79-84. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Artang et al. | Fully automated thromboelastograph TEG 6s to measure anticoagulant effects of direct oral anticoagulants in healthy male volunteers | |
| Raparelli et al. | Low‐grade endotoxemia and platelet activation in cirrhosis | |
| Boneu et al. | D-dimers, thrombin antithrombin III complexes and prothrombin fragments 1+ 2: diagnostic value in clinically suspected deep vein thrombosis | |
| Podda et al. | Usefulness of PFA‐100® testing in the diagnostic screening of patients with suspected abnormalities of hemostasis: comparison with the bleeding time | |
| Mei et al. | Evaluation the combined diagnostic value of TAT, PIC, tPAIC, and sTM in disseminated intravascular coagulation: a multi-center prospective observational study | |
| Lim et al. | A review of global coagulation assays—is there a role in thrombosis risk prediction? | |
| JP4733326B2 (en) | Methods for predicting the presence of hemostatic dysfunction in patient samples | |
| Chapman et al. | The use of D‐Dimer assay by enzyme immunoassay and latex agglutination techniques in the diagnosis of deep vein thrombosis | |
| Matsumoto et al. | Frequency of abnormal biphasic aPTT clot waveforms in patients with underlying disorders associated with disseminated intravascular coagulation | |
| EP4113524A1 (en) | Method for measuring platelet activation based on soluble clec-2 and platelet count | |
| Lauridsen et al. | Coagulation profile after spontaneous intracerebral hemorrhage: a cohort study | |
| Larsson et al. | Comparison of point-of-care hemostatic assays, routine coagulation tests, and outcome scores in critically ill patients | |
| Tomkiewicz-Pajak et al. | Aspirin resistance in adult patients after Fontan surgery | |
| US7202048B2 (en) | Onset of force development as a marker of thrombin generation | |
| JP6870807B2 (en) | A method for assaying D-dimer specific for venous thromboembolism, and its use for diagnosing pulmonary embolism and deep vein thrombosis. | |
| Fricke et al. | A multicenter clinical evaluation of the Clot Signature Analyzer | |
| RU2789822C1 (en) | Method for optimizing laboratory diagnosis of thrombinemia in patients with covid-19 infection | |
| Kopytek et al. | Viscoelastic properties of plasma fibrin clots are similar in patients on rivaroxaban and vitamin K antagonists | |
| Takayama et al. | Dielectric blood coagulometry for the early detection of sepsis-induced disseminated intravascular coagulation: a prospective observational study | |
| Stegnar et al. | Evaluation of pre-analytical, demographic, behavioural and metabolic variables on fibrinolysis and haemostasis activation markers utilised to assess hypercoagulability | |
| RU2767891C2 (en) | Method of screening examination for detection of risk groups of developing hypercoagulation state in conditions of expeditionary work in the arctic | |
| Grand’Maison et al. | Not Logged In Login | |
| RU2737277C1 (en) | Method for prediction of risk of venous thromboembolic complications in severe burn injury | |
| Kato et al. | Differences in the composition of activated partial thromboplastin time (APTT) reagents affect clot waveform analysis | |
| Ajmal et al. | Predictive role of natural anticoagulants in prognosis of chronic liver disease in pediatric age group |