RU2788417C1 - Strain producing ergothioneine and its screening method - Google Patents
Strain producing ergothioneine and its screening method Download PDFInfo
- Publication number
- RU2788417C1 RU2788417C1 RU2021121867A RU2021121867A RU2788417C1 RU 2788417 C1 RU2788417 C1 RU 2788417C1 RU 2021121867 A RU2021121867 A RU 2021121867A RU 2021121867 A RU2021121867 A RU 2021121867A RU 2788417 C1 RU2788417 C1 RU 2788417C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- ergothioneine
- hericium erinaceus
- fermentation
- strain
- broth
- Prior art date
Links
- 229940093497 Ergothioneine Drugs 0.000 title claims abstract description 56
- SSISHJJTAXXQAX-ZETCQYMHSA-N L-ergothioneine Chemical compound C[N+](C)(C)[C@H](C([O-])=O)CC1=CNC(=S)N1 SSISHJJTAXXQAX-ZETCQYMHSA-N 0.000 title claims abstract description 56
- 240000000588 Hericium erinaceus Species 0.000 claims abstract description 68
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 20
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 20
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 claims abstract description 15
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 claims abstract description 15
- 229930003231 vitamins Natural products 0.000 claims abstract description 15
- 229940029983 VITAMINS Drugs 0.000 claims abstract description 13
- 229940021016 Vitamin IV solution additives Drugs 0.000 claims abstract description 13
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 13
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims abstract description 13
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 11
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims abstract description 10
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 10
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 54
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 54
- 235000007328 Hericium erinaceus Nutrition 0.000 claims description 48
- 229920002973 ribosomal RNA Polymers 0.000 claims description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 6
- 239000002609 media Substances 0.000 description 38
- 210000004027 cells Anatomy 0.000 description 15
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 10
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 8
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 8
- 239000001965 potato dextrose agar Substances 0.000 description 8
- OZAIFHULBGXAKX-UHFFFAOYSA-N precursor Substances N#CC(C)(C)N=NC(C)(C)C#N OZAIFHULBGXAKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229920001690 polydopamine Polymers 0.000 description 7
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N β-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 7
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 1-[(1S,2R,3R,4S,5R,6R)-3-carbamimidamido-6-{[(2R,3R,4R,5S)-3-{[(2S,3S,4S,5R,6S)-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-3-(methylamino)oxan-2-yl]oxy}-4-formyl-4-hydroxy-5-methyloxolan-2-yl]oxy}-2,4,5-trihydroxycyclohexyl]guanidine Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 6
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 6
- GUBGYTABKSRVRQ-YOLKTULGSA-N Maltose Natural products O([C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@H]1CO)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 GUBGYTABKSRVRQ-YOLKTULGSA-N 0.000 description 6
- 230000003115 biocidal Effects 0.000 description 6
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 6
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229930003270 Vitamin B Natural products 0.000 description 5
- 239000011720 vitamin B Substances 0.000 description 5
- 235000019156 vitamin B Nutrition 0.000 description 5
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N D-Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N D-sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 4
- BJHIKXHVCXFQLS-UYFOZJQFSA-N Fructose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C(=O)CO BJHIKXHVCXFQLS-UYFOZJQFSA-N 0.000 description 4
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 4
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 4
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 4
- 240000001016 Solanum tuberosum Species 0.000 description 4
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 4
- CZMRCDWAGMRECN-GDQSFJPYSA-N Sucrose Natural products O([C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)[C@@]1(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-GDQSFJPYSA-N 0.000 description 4
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 4
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 4
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 4
- 230000000877 morphologic Effects 0.000 description 4
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 4
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 210000001519 tissues Anatomy 0.000 description 4
- 210000002421 Cell Wall Anatomy 0.000 description 3
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 3
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 3
- 241000547652 Lepista sordida Species 0.000 description 3
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M Monopotassium phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 229940053207 Niacin Drugs 0.000 description 3
- 241000222350 Pleurotus Species 0.000 description 3
- 241000392433 Pleurotus sapidus Species 0.000 description 3
- 229960005322 Streptomycin Drugs 0.000 description 3
- 241000209149 Zea Species 0.000 description 3
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 3
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 3
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 3
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 3
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 3
- 235000005824 corn Nutrition 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 3
- DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N nicotinamide Chemical compound NC(=O)C1=CC=CN=C1 DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960003512 nicotinic acid Drugs 0.000 description 3
- 235000001968 nicotinic acid Nutrition 0.000 description 3
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 description 3
- 230000001131 transforming Effects 0.000 description 3
- 229920000160 (ribonucleotides)n+m Polymers 0.000 description 2
- 241000221198 Basidiomycota Species 0.000 description 2
- 229960005091 Chloramphenicol Drugs 0.000 description 2
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N Chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 2
- 241001126325 Cyanea capillata Species 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 2
- 241000123222 Hericium Species 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 229940049954 Penicillin Drugs 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- 235000007685 Pleurotus columbinus Nutrition 0.000 description 2
- 240000001462 Pleurotus ostreatus Species 0.000 description 2
- 235000001603 Pleurotus ostreatus Nutrition 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- 241001061127 Thione Species 0.000 description 2
- 240000008529 Triticum aestivum Species 0.000 description 2
- 229940088594 Vitamin Drugs 0.000 description 2
- 229930003756 Vitamin B7 Natural products 0.000 description 2
- PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N acetonitrile;hydrate Chemical compound O.CC#N PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 2
- 229960000626 benzylpenicillin Drugs 0.000 description 2
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 2
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 2
- 229920003013 deoxyribonucleic acid Polymers 0.000 description 2
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 2
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 2
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 2
- 238000011068 load Methods 0.000 description 2
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- QEVHRUUCFGRFIF-MDEJGZGSSA-N reserpine Chemical compound O([C@H]1[C@@H]([C@H]([C@H]2C[C@@H]3C4=C(C5=CC=C(OC)C=C5N4)CCN3C[C@H]2C1)C(=O)OC)OC)C(=O)C1=CC(OC)=C(OC)C(OC)=C1 QEVHRUUCFGRFIF-MDEJGZGSSA-N 0.000 description 2
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 2
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- BZKBCQXYZZXSCO-UHFFFAOYSA-N sodium hydride Inorganic materials [H-].[Na+] BZKBCQXYZZXSCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 2
- 239000011735 vitamin B7 Substances 0.000 description 2
- 235000011912 vitamin B7 Nutrition 0.000 description 2
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 235000021307 wheat Nutrition 0.000 description 2
- 241000186361 Actinobacteria <class> Species 0.000 description 1
- 241000762600 Agaricomycetidae Species 0.000 description 1
- 241000222382 Agaricomycotina Species 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N Ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940064005 Antibiotic throat preparations Drugs 0.000 description 1
- 229940083879 Antibiotics FOR TREATMENT OF HEMORRHOIDS AND ANAL FISSURES FOR TOPICAL USE Drugs 0.000 description 1
- 229940042052 Antibiotics for systemic use Drugs 0.000 description 1
- 229940042786 Antitubercular Antibiotics Drugs 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241000221751 Claviceps purpurea Species 0.000 description 1
- 241000758536 Dikarya Species 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L Dipotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N Glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- 229960003180 Glutathione Drugs 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- 240000001340 Gmelina philippensis Species 0.000 description 1
- 229940093922 Gynecological Antibiotics Drugs 0.000 description 1
- 241000123211 Hericiaceae Species 0.000 description 1
- 241000959662 Hydnaceae Species 0.000 description 1
- 210000001503 Joints Anatomy 0.000 description 1
- 240000000599 Lentinula edodes Species 0.000 description 1
- 235000001715 Lentinula edodes Nutrition 0.000 description 1
- 241001478222 Lepista caespitosa Species 0.000 description 1
- 229940055726 Pantothenic Acid Drugs 0.000 description 1
- 240000004247 Pleurotus eryngii Species 0.000 description 1
- 235000001681 Pleurotus eryngii Nutrition 0.000 description 1
- 241000222341 Polyporaceae Species 0.000 description 1
- 230000002292 Radical scavenging Effects 0.000 description 1
- 241000763682 Russulales Species 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 241001558929 Sclerotium <basidiomycota> Species 0.000 description 1
- 240000002057 Secale cereale Species 0.000 description 1
- 235000007238 Secale cereale Nutrition 0.000 description 1
- 229940024982 Topical Antifungal Antibiotics Drugs 0.000 description 1
- RMRCNWBMXRMIRW-WYVZQNDMSA-L Vitamin B12 Chemical compound N([C@@H]([C@@]1(C)[C@@](C)(CC(N)=O)[C@H](CCC(N)=O)\C(N1[Co+]C#N)=C(/C)\C1=N\C([C@H]([C@@]1(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=C\C1=N\C([C@H](C1(C)C)CCC(N)=O)=C/1C)[C@@H]2CC(N)=O)=C\1[C@]2(C)CCC(=O)NCC(C)OP([O-])(=O)O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H](N2C3=CC(C)=C(C)C=C3N=C2)O[C@@H]1CO RMRCNWBMXRMIRW-WYVZQNDMSA-L 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000000111 anti-oxidant Effects 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant Effects 0.000 description 1
- 230000037348 biosynthesis Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000036983 biotransformation Effects 0.000 description 1
- FAPWYRCQGJNNSJ-UBKPKTQASA-L calcium D-pantothenic acid Chemical compound [Ca+2].OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC([O-])=O.OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC([O-])=O FAPWYRCQGJNNSJ-UBKPKTQASA-L 0.000 description 1
- 229960002079 calcium pantothenate Drugs 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 125000003346 cobalamin group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 230000002538 fungal Effects 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Polymers 0.000 description 1
- 235000014304 histidine Nutrition 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 229940079866 intestinal antibiotics Drugs 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 238000002386 leaching Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 235000006109 methionine Nutrition 0.000 description 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 1
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000006011 modification reaction Methods 0.000 description 1
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L na2so4 Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940005935 ophthalmologic Antibiotics Drugs 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 235000019161 pantothenic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011713 pantothenic acid Substances 0.000 description 1
- GHOKWGTUZJEAQD-ZETCQYMHSA-N pantothenic acid Natural products OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC(O)=O GHOKWGTUZJEAQD-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 150000004804 polysaccharides Polymers 0.000 description 1
- 235000012015 potatoes Nutrition 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- LXNHXLLTXMVWPM-UHFFFAOYSA-N pyridoxine Chemical compound CC1=NC=C(CO)C(CO)=C1O LXNHXLLTXMVWPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing Effects 0.000 description 1
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 1
- 235000021122 unsaturated fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000004670 unsaturated fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- -1 vitamin B 1 Natural products 0.000 description 1
- 239000011715 vitamin B12 Substances 0.000 description 1
- 239000011726 vitamin B6 Substances 0.000 description 1
- 150000003697 vitamin B6 derivatives Chemical class 0.000 description 1
Images
Abstract
Description
Область техники, к которой относится изобретение The field of technology to which the invention belongs
Настоящее изобретение относится к области микробиологии, а в частности к штамму HT-3 Hericium erinaceus и к способу его скрининга.The present invention relates to the field of microbiology, and in particular to the HT-3 strain of Hericium erinaceus and to a method for its screening.
Предпосылки создания изобретенияPrerequisites for the creation of the invention
Эрготионеин, научным названием которого является внутренняя соль триметил-2-меркапто-L-гистидина, представляет собой природную 2-тиоимидазол-аминокислоту. Эрготионеин в растворенном состоянии имеет два таутомерных изомера, тиол и тион, и существует, в основном в форме тиона в условиях физиологического pH. Эрготионеин был впервые выделен Tanret С. из спорыньи (склероция, образованного грибком, паразитирующим на ржи, то есть, злаковом растении) в 1909 году. Чистый продукт представляет собой белые кристаллы, хорошо растворимые в воде до 0,9 моль/л при комнатной температуре, и является достаточно стабильным при физиологическом pH и в сильной щелочной среде.Ergothioneine, whose scientific name is trimethyl-2-mercapto-L-histidine internal salt, is a naturally occurring 2-thioimidazole-amino acid. Ergothioneine in solution has two tautomeric isomers, thiol and thione, and exists primarily in the form of thione at physiological pH. Ergothioneine was first isolated by Tanret C. from ergot (a sclerotium formed by a fungus that parasitizes rye, that is, a cereal plant) in 1909. The pure product is white crystals, highly soluble in water up to 0.9 mol/l at room temperature, and is quite stable at physiological pH and in a strong alkaline environment.
Эрготионеин имеет уникальные физиологические функции, такие как антиокислительное действие, акцептироваие свободных радикалов, образование хелатных комплексов с ионами металлов, защита от повреждения УФ-излучением, ингибирование рака и т.п., а в некоторых случаях, он превосходит природные антиоксиданты, такие как глутатион.Ergothioneine has unique physiological functions such as antioxidant action, free radical scavenging, metal ion chelation, UV damage protection, cancer inhibition, etc., and in some cases, it is superior to natural antioxidants such as glutathione. .
Эрготионеин присутствует в различных растениях и у животных. Однако животные не могут синтезировать эрготионеин сами по себе и могут получать его только с пищей. Многие микроорганизмы, такие как грибы и актиномицеты, могут синтезировать эрготионеин, но бактерии сами по себе не могут синтезировать это соединение. На данный момент было проведено еще больше исследований по продуцированию эрготионеина с использованием грибов.Ergothioneine is present in various plants and animals. However, animals cannot synthesize ergothioneine on their own and can only obtain it from food. Many microorganisms, such as fungi and actinomycetes, can synthesize ergothioneine, but bacteria cannot synthesize this compound on their own. At the moment, even more research has been done on the production of ergothioneine using mushrooms.
Как описано в заявке на патент Китая CN103184246A, «Способ биосинтеза эрготионеина», эрготионеин синтезируют путем инокуляции и ферментации мицелия макрогрибов (Lepista sordida, Pleurotus plumonarius и Pleurotus sapidus дикого типа), при этом наибольшее содержание эрготионеина в сбраживаемом бульоне составляло 51 мг/л для Lepista sordida, 48 мг/л для Pleurotus plumonarius и 37 мг/л для Pleurotus sapidus дикого типа. Выход эрготионеина был все еще невысоким, а цикл роста грибов довольно продолжительным.As described in Chinese Patent Application CN103184246A, "Method for Biosynthesis of Ergothioneine", ergothioneine is synthesized by inoculating and fermenting the mycelium of macrofungi ( Lepista sordida , Pleurotus plumonarius and Pleurotus sapidus wild type), with the highest content of ergothioneine in the fermented broth being 51 mg/l for Lepista sordida , 48 mg/l for Pleurotus plumonarius and 37 mg/l for wild-type Pleurotus sapidus . The yield of ergothioneine was still low, and the growth cycle of fungi was quite long.
В заявке на патент Китая CN103734022A «Штамм для получения эрготионеина и способы получения эрготионеина» раскрываются стадии синтеза эрготионеина посредством ферментации Pleurotus ostreatus и экстракции эрготионеина из клеток мицелия, но не раскрывается способ скрининга штаммов Pleurotus ostreatus.Chinese Patent Application CN103734022A "Ergothioneine Producing Strain and Methods for Producing Ergothionein" discloses the steps for synthesizing ergothioneine by Pleurotus ostreatus fermentation and extracting ergothionein from mycelial cells, but does not disclose a screening method for Pleurotus ostreatus strains.
В заявке на патент Китая CN102978121A «Способ получения эрготионеина посредством трансформации микроорганизмов» раскрывается получение эрготионеина посредством трансформации микроорганизма Lepista caespitosa. Однако биотрансформация влияет на жизнеспособность грибковых клеток, и эффективность такой трансформации невысока.Chinese patent application CN102978121A "Method for producing ergothioneine by transformation of microorganisms" discloses the production of ergothioneine by transformation of the microorganism Lepista caespitosa . However, biotransformation affects the viability of fungal cells, and the efficiency of such transformation is low.
Hericium erinaceus, также известный как гриб «Львиная грива», назван по его форме, напоминающей гребень. Гифы Hericium erinaceus имеют тонкие клеточные стенки с перегородками и пряжкой. Плодовые тела имеют вид колоний, плоско-полусферическую или головчатую форму с волосатыми мясистыми шипами на поверхности ворсинчатой части. В свежем виде, этот гриб является белым, а в высушенном виде, он имеет цвет от светло-желтого до светло-коричневого. Этот гриб имеет узкое основание или немного укороченный стебель, а также увеличенную верхнюю часть диаметром 3,5-10 см. На расстоянии, он похож на золотистый гребень, а поэтому его называют Hericium erinaceus. Hericium erinaceus является очень вкусным, а тело гриба является свежим, нежным и ароматным, и этот гриб известен как «вегетарианское мясное блюдо». Hericium erinaceus является не только очень вкусным, но также содержит множество аминокислот, 8 из которых необходимы человеческому организму, и кроме того, он богат полисахаридами, различными витаминами, неорганическими солями, пептидами и ненасыщенными жирными кислотами. Hericium erinaceus легко сбраживается и культивируется, растет быстро, и имеет короткий цикл роста и высокую урожайность. Hericium erinaceus , also known as the "Lion's Mane" mushroom, is named for its comb-like shape. The hyphae of Hericium erinaceus have thin cell walls with septa and a clasp. Fruiting bodies have the appearance of colonies, a flat-hemispherical or capitate shape with hairy fleshy spines on the surface of the villous part. When fresh, this mushroom is white, but when dried, it is light yellow to light brown in color. This mushroom has a narrow base or a slightly shortened stem, as well as an enlarged upper part with a diameter of 3.5-10 cm. From a distance, it looks like a golden comb, and therefore it is called Hericium erinaceus . Hericium erinaceus is very tasty and the body of the mushroom is fresh, tender and fragrant, and this mushroom is known as "vegetarian meat dish". Hericium erinaceus is not only delicious, but also rich in amino acids, 8 of which are necessary for the human body, and in addition, it is rich in polysaccharides, various vitamins, inorganic salts, peptides and unsaturated fatty acids. Hericium erinaceus is easy to ferment and cultivate, grows quickly, and has a short growth cycle and high yield.
Сущность изобретенияThe essence of the invention
Для решения проблемы, существующих в данной области, было разработано настоящее изобретение, относящееся к штамму Hericium erinaceus HT-3, который был депонирован в Китайской Коллекции Типовых Культур (CCTCC) 23 августа 2018 г., под депозитарным номером CCTCC No. M 2018567. Настоящее изобретение также относится к композиции, содержащей Hericium erinaceus и сбраживаемый бульон, и к способу скрининга Hericium erinaceus. Настоящее изобретение включает следующие варианты его осуществления: In order to solve the problems existing in the field, the present invention was developed relating to the Hericium erinaceus HT-3 strain, which was deposited in the China Type Culture Collection (CCTCC) on August 23, 2018, under the deposit number CCTCC No. M 2018567. The present invention also relates to a composition containing Hericium erinaceus and a fermentable broth and a method for screening Hericium erinaceus . The present invention includes the following embodiments:
1. Гриб Hericium erinaceus с депозитарным номером CCTCC No. M 2018567. 1. Mushroom Hericium erinaceus with deposit number CCTCC No. M2018567.
2. Гриб Hericium erinaceus согласно пункту 1, который имеет последовательность гена 18s рРНК, представленную в SEQ ID NO: 12. The fungus Hericium erinaceus according to item 1, which has the 18s rRNA gene sequence shown in SEQ ID NO: 1
(TTGTACTGTGAAACTGCGAATGGCTCATTAAATCAGTTATAGTTTATTTGATG GTACCTTGCTACATGGATAACTGTGGTAATTCTAGAGCTAATACATGCAATTAAGCC CCGACTTCCGGAAGGGGTGTATTTATTAGATAAAAAACCAACGCGGCTCGCCGCTCC TTTGGTGATTCATAATAACTTCTCGAATCGCATGGCCTTGTGCCGGCGATGCTTCATT CAAATATCTGCCCTATCAACTTTCGATGGTAGGATAGAGGCCTACCATGGTTTCAAC GGGTAACGGGGAATAAGGGTTCGATTCCGGAGAGGGAGCCTGAGAAACGGCTACC ACATCCAAGGAAGGCAGCAGGCGCGCAAATTACCCAATCCCGACACGGGGAGGTA GTGACAATAAATAACAATATAGGGCTCTTTTGGGTCTTATAATTGGAATGAGTACAA TTTAAATCCCTTAACGAGGAACAATTGGAGGGCAAGTCTGGTGCCAGCAGCCGCGG TAATTCCAGCTCCAATAGCGTATATTAAAGTTGTTGCAGTTAAAAAGCTCGTAGTTG AACTTCAGGCCTGGCCGGGCGGTCTGCCTAACGGTATGTACTGTCTGGCCGGGCCTT ACCTCCTGGTGAGCCGGCATGCCCTTCACTGGGTGTGTCGGGGAACCAGGACTTTTA CCTTGAGAAAATTAGAGTGTTCAAAGCAGGCCTATGCCCGAATACATTAGCATGGA ATAATAAAATAGGACGTGCGGTTCTATTTTGTTGGTTTCTAGAATCGCCGTAATGAT TAATAGGGATAGTTGGGGGCATTAGTATTGCGTTGCTAGAGGTGAAATTCTTGGATT TACGCAAGACTAACTACTGCGAAAGCATTTGCCAAGGATGTTTTCATTAATCAAGAA CGAAGGTTAGGGGATCGAAAACGATCAGATACCGTTGTAGTCTTAACAGTAAACTA TGCCGACTAGGGATCGGGCGACCTCAATTTAATGTGTCGCTCGGCACCTTACGAGAA ATCAAAGTCTTTGGGTTCTGGGGGGAGTATGGTCGCAAGGCTGAAACTTAAAGGAA TTGACGGAAGGGCACCACCAGGAGTGGAGCCTGCGGCTTAATTTGACTCAACACGG GGAAACTCACCAGGTCCAGACATAACTAGGATTGACAGATTGATAGCTCTTTCTTGA TTTTATGGGTGGTGGTGCATGGCCGTTCTTAGTTGGTGGAGTGATTTGTCTGGTTAAT TCCGATAACGAACGAGACCTTAACCTGCTAAATAGCCCGGCCGGCTTTTGCTGGTCGCTGGCTTCTTAGAGGG).(TTGTACTGTGAAACTGCGAATGGCTCATTAAATCAGTTATAGTTTATTTGATG GTACCTTGCTACATGGATAACTGTGGTAATTCTAGAGCTAATACATGCAATTAAGCC CCGACTTCCGGAAGGGGTGTATTTATTAGATAAAAAACCAACGCGGCTCGCCGCTCC TTTGGTGATTCATAATAACTTCTCGAATCGCATGGCCTTGTGCCGGCGATGCTTCATT CAAATATCTGCCCTATCAACTTTCGATGGTAGGATAGAGGCCTACCATGGTTTCAAC GGGTAACGGGGAATAAGGGTTCGATTCCGGAGAGGGAGCCTGAGAAACGGCTACC ACATCCAAGGAAGGCAGCAGGCGCGCAAATTACCCAATCCCGACACGGGGAGGTA GTGACAATAAATAACAATATAGGGCTCTTTTGGGTCTTATAATTGGAATGAGTACAA TTTAAATCCCTTAACGAGGAACAATTGGAGGGCAAGTCTGGTGCCAGCAGCCGCGG TAATTCCAGCTCCAATAGCGTATATTAAAGTTGTTGCAGTTAAAAAGCTCGTAGTTG AACTTCAGGCCTGGCCGGGCGGTCTGCCTAACGGTATGTACTGTCTGGCCGGGCCTT ACCTCCTGGTGAGCCGGCATGCCCTTCACTGGGTGTGTCGGGGAACCAGGACTTTTA CCTTGAGAAAATTAGAGTGTTCAAAGCAGGCCTATGCCCGAATACATTAGCATGGA ATAATAAAATAGGACGTGCGGTTCTATTTTGTTGGTTTCTAGAATCGCCGTAATGAT TAATAGGGATAGTTGGGGGCATTAGTATTGCGTTGCTAGAGGTGAAATTCTTGGATT TACGCAAGACTAACTACTGCGAAAGCATTTGCCAAGGATGTTTTCATTAATCAAGAA CGAAGGTTAGGGGATCGAAAACGATCAGATACCGTTGTAGTCTTAACAGTAAACTA TGCCGACTAGGGATCGGGCGACC TCAATTTAATGTGTCGCTCGGCACCTTACGAGAA ATCAAAGTCTTTGGGTTCTGGGGGGAGTATGGTCGCAAGGCTGAAACTTAAAGGAA TTGACGGAAGGGCACCACCAGGAGTGGAGCCTGCGGCTTAATTTGACTCAACACGG GGAAACTCACCAGGTCCAGACATAACTAGGATTGACAGATTGATAGCTCTTTCTTGA TTTTATGGGTGGTGGTGCATGGCCGTTCTTAGTTGGTGGAGTGATTTGTCTGGTTAAT TCCGATAACGAACGAGACCTTAACCTGCTAAATAGCCCGGCCGGCTTTTGCTGGTCGCTGGCTTCTTAGAGGG).
3. Гриб Hericium erinaceus согласно пункту 1, который имеет последовательность ITS, представленную в SEQ ID NO: 2 (TGCGGAAGGATCATTAATGAATTTGAAAGGAGTTGTTGCTGGCCTGAAACCCAGGC ATGTGCACGCTCCAATCTCATCCATCTTACACCTGTGCACCCTTGCGTGGGTCCGTCG GCTTTGCGGTCGATGGGCTTGCGTTTTTCATAAACTCTTATGTATGTAACAGAATGTC ATAATGCTATAAACGCATCTTATACAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGCTCTCGCA TCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAA TCATCGAATCTTTGAACGCACCTTGCGCCCCTTGGTATTCCGAGGGGCACGCCTGTT CGAGTGTCGTGAAATTCTCAACTCAATCCTCTTGTTATGAGAGGGCTGGGCTTGGAC TTGGAGGTCTTGCCGGTGCTCCCTCGGGAAGTCGGCTCCTCTTGAATGCATGAGTGG ATCCCTTTTGTAGGGTTTGCCCTTGGTGTGATAATTATCTACGCCGCGGGTAGCCTTG CGTTGGTCTGCTTCTAACCGTCTTCGGACAACTTTCATCTCAACTTGACCTCGAATCA GGCGGGACTACCCGCTGAACTTAAGCATATCA).3. Гриб Hericium erinaceus согласно пункту 1, который имеет последовательность ITS, представленную в SEQ ID NO: 2 (TGCGGAAGGATCATTAATGAATTTGAAAGGAGTTGTTGCTGGCCTGAAACCCAGGC ATGTGCACGCTCCAATCTCATCCATCTTACACCTGTGCACCCTTGCGTGGGTCCGTCG GCTTTGCGGTCGATGGGCTTGCGTTTTTCATAAACTCTTATGTATGTAACAGAATGTC ATAATGCTATAAACGCATCTTATACAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGCTCTCGCA TCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAA TCATCGAATCTTTGAACGCACCTTGCGCCCCTTGGTATTCCGAGGGGCACGCCTGTT CGAGTGTCGTGAAATTCTCAACTCAATCCTCTTGTTATGAGAGGGCTGGGCTTGGAC TTGGAGGTCTTGCCGGTGCTCCCTCGGGAAGTCGGCTCCTCTTGAATGCATGAGTGG ATCCCTTTTGTAGGGTTTGCCCTTGGTGTGATAATTATCTACGCCGCGGGTAGCCTTG CGTTGGTCTGCTTCTAACCGTCTTCGGACAACTTTCATCTCAACTTGACCTCGAATCA GGCGGGACTACCCGCTGAACTTAAGCATATCA).
4. Гриб Hericium erinaceus согласно пункту 1, который продуцирует эрготионеин в сбраживаемом бульоне, где количество эрготионеина в сбраживаемом бульоне составляет более 41 мг/л, и где сбраживаемый бульон получают из сбраживаемой среды, содержащей источник углерода, источник азота, неорганические соли и витамины.4. The fungus Hericium erinaceus according to item 1, which produces ergothioneine in the fermentation broth, wherein the amount of ergothioneine in the fermentation broth is more than 41 mg/l, and where the fermentation broth is obtained from a fermentation medium containing a carbon source, a nitrogen source, inorganic salts and vitamins.
5. Композиция, содержащая гриб Hericium erinaceus и сбраживаемый бульон, который содержит эрготионеин, где количество эрготионеина в сбраживаемом бульоне составляет более 41 мг/л, и где сбраживаемый бульон получают из сбраживаемой среды, содержащей источник углерода, источник азота, неорганические соли и витамины.5. A composition containing the fungus Hericium erinaceus and a fermentable broth that contains ergothioneine, where the amount of ergothioneine in the fermentable broth is more than 41 mg/l, and where the fermentable broth is obtained from a fermentation medium containing a carbon source, a nitrogen source, inorganic salts and vitamins.
6. Композиция согласно пункту 5, где гриб Hericium erinaceus представляет собой гриб Hericium erinaceus согласно любому из пунктов 1-4.6. The composition according to paragraph 5, where the fungus Hericium erinaceus is the fungus Hericium erinaceus according to any one of paragraphs 1-4.
7. Способ скрининга гриба Hericium erinaceus, включающий следующие стадии:7. Method for screening the fungus Hericium erinaceus , comprising the following steps:
(1) помещения тканевого блока гриба Hericium erinaceus на твердую среду с картофельным агаром с декстрозой, содержащую антибиотик; культивирования в течение 5-12 дней при 23~28°С для получения мицелия Hericium erinaceus; инокуляции мицелия Hericium erinaceus на твердой среде с картофельным агаром, содержащим декстрозу; культивирования в течение 5-12 дней при 23~28°С для получения штамма Hericium erinaceus;(1) placing a tissue block of the fungus Hericium erinaceus on a solid medium with potato dextrose agar containing an antibiotic; cultivation for 5-12 days at 23~28°C to obtain the mycelium of Hericium erinaceus ; inoculation of the mycelium of Hericium erinaceus on a solid medium with potato agar containing dextrose; cultivation for 5-12 days at 23~28°C to obtain a strain of Hericium erinaceus ;
(2) инокуляции штамма Hericium erinaceus, полученного в стадии (1), в сбраживаемую среду; культивирования в течение 12-20 дней при 23~26°С, где вещество-предшественник подают на дни 7-10 во время культивирования для получения сбраживаемого бульона; (2) inoculating the Hericium erinaceus strain obtained in step (1) into the fermentation medium; culturing for 12-20 days at 23~26°C, where the precursor substance is fed on days 7-10 during cultivation to obtain a fermentable broth;
(3) центрифугирования сбраживаемого бульона; удаления супернатанта для фильтрации; определения количества эрготионеина в фильтрате; и скрининга штамма на продуцирование эрготионеина;(3) centrifuging the fermented broth; removal of the supernatant for filtration; determining the amount of ergothioneine in the filtrate; and screening the strain for ergothioneine production;
предпочтительно, способ скрининга дополнительно включает, после стадии (2), стадию экстракционного вымачивания эрготионеина из клеток мицелия за их пределы.preferably, the screening method further comprises, after step (2), the step of extractively soaking the ergothioneine from the mycelial cells outside of them.
8. Способ скрининга согласно пункту 7, где стадию экстракционного вымачивания эрготионеина из клеток мицелия проводят путем:8. The screening method according to item 7, wherein the step of extracting ergothioneine from the mycelial cells is carried out by:
гомогенизации сбраживаемого бульона мицелия, а затем нагревания для экстракции эрготионеина из клеток мицелия за их пределы; илиhomogenizing the fermentable mycelium broth and then heating to extract ergothionein from the mycelial cells beyond them; or
сбора мицелия путем разделения твердой и жидкой фаз в бульоне для ферментации мицелия; получения суспензии мицелия путем добавления воды; гомогенизации; и последующего нагревания для экстракции эрготионеина из клеток мицелия за их пределы.collecting the mycelium by separating the solid and liquid phases in the broth for fermenting the mycelium; obtaining a suspension of mycelium by adding water; homogenization; and subsequent heating to extract ergothioneine from the mycelial cells beyond them.
9. Способ скрининга гриба Hericium erinaceus согласно пункту 7, где антибиотик на стадии (1) включает любой один компонент или комбинацию двух или более из этих компонентов, а именно, пенициллина, стрептомицина и хлорамфеникола.9. The method for screening the fungus Hericium erinaceus according to item 7, wherein the antibiotic in step (1) comprises any one component or a combination of two or more of these components, namely, penicillin, streptomycin and chloramphenicol.
10. Способ скрининга гриба Hericium erinaceus согласно пункту 7, где вещество-предшественник на стадии (2) включает любой один компонент или комбинацию двух или более из этих компонентов, а именно, цистеина, метионина и гистидина.10. The method for screening the fungus Hericium erinaceus according to item 7, wherein the precursor in step (2) comprises any one component or a combination of two or more of these components, namely cysteine, methionine and histidine.
11. Способ скрининга гриба Hericium erinaceus согласно пункту 7, где сбраживаемая среда содержит от 20 до 60 г/л источника углерода, от 10 до 30 г/л источника азота, от 2 до 5 г/л неорганических солей и 0,001~0,005 г/л витаминов.11. The method for screening the fungus Hericium erinaceus according to item 7, wherein the fermentation medium contains 20 to 60 g/l of carbon source, 10 to 30 g/l of nitrogen source, 2 to 5 g/l of inorganic salts, and 0.001~0.005 g/l l vitamins.
Преимущества настоящего изобретения заключаются в том, что штамм Hericium erinaceus HT-3 CCTCC No.: M 2018567, полученный в соответствии с настоящим изобретением, легко культивируется и имеет высокий выход эрготионеина.The advantages of the present invention are that the strain of Hericium erinaceus HT-3 CCTCC No.: M 2018567 obtained in accordance with the present invention is easy to cultivate and has a high yield of ergothioneine.
Способ скрининга гриба Hericium erinaceus согласно изобретению является простым, удобным в эксплуатации и недорогостоящим, а также он может быть применен для крупномасштабного скрининга, и позволяет легко отбирать штамм гриба с высоким выходом.The method for screening the fungus Hericium erinaceus according to the invention is simple, convenient to operate and inexpensive, and it can also be applied to large-scale screening, and can easily select a strain of the fungus with a high yield.
Описание чертежей Description of drawings
На фиг. 1 представлена фотография, иллюстрирующая морфологические характеристики колонии Hericium erinaceus HT-3 CCTCC NO: M 2018567.In FIG. 1 is a photograph illustrating the morphological characteristics of a colony of Hericium erinaceus HT-3 CCTCC NO: M 2018567.
На фиг. 2 представлена микрофотография мицелия Hericium erinaceus HT-3 CCTCC NO: M 2018567.In FIG. 2 is a micrograph of the mycelium of Hericium erinaceus HT-3 CCTCC NO: M 2018567.
На фиг. 3 представлена последовательность гена рРНК 18s Hericium erinaceus HT-3 CCTCC NO: M 2018567. In FIG. 3 shows the 18s rRNA gene sequence of Hericium erinaceus HT-3 CCTCC NO: M 2018567.
На фиг. 4 представлена последовательность ITS Hericium erinaceus HT-3 CCTCC NO: M 2018567.In FIG. 4 shows the ITS sequence of Hericium erinaceus HT-3 CCTCC NO: M 2018567.
На фиг. 5 представлена ВЭЖХ-хроматограмма, иллюстрирующая содержание эрготионеина в сбраживаемом бульоне Hericium erinaceus HT-3 CCTCC NO: M 2018567, определенное с помощью ВЭЖХ.In FIG. 5 is an HPLC chromatogram showing the content of ergothioneine in Hericium erinaceus HT-3 fermentation broth CCTCC NO: M 2018567 determined by HPLC.
Подробное описание изобретения Detailed description of the invention
Нижеследующее описание настоящего изобретения приводится лишь для иллюстрации конкретных вариантов его осуществления, и эти варианты не следует рассматривать как ограничение настоящего изобретения. Любые другие изменения, модификации, замены, комбинации и упрощения, не выходящие за рамки существа и принципа настоящего изобретения, рассматриваются как эквиваленты и входят в объем охраны изобретения.The following description of the present invention is provided only to illustrate specific embodiments thereof, and these variations should not be construed as limiting the present invention. Any other changes, modifications, substitutions, combinations and simplifications that do not go beyond the essence and principle of the present invention are considered as equivalents and are included in the scope of protection of the invention.
Экспериментальные методы, применяемые, как описано ниже, являются традиционными, если это не оговорено особо. The experimental methods used as described below are conventional unless otherwise noted.
Используемые ниже материалы и реагенты являются коммерчески доступными, если это не оговорено особо.The materials and reagents used below are commercially available unless otherwise noted.
В качестве конкретного варианта осуществления изобретения приводится штамм Hericium erinaceus HT-3 CCTCC No: M 2018567, который быстро растет на среде с картофельным агаром, содержащим декстрозу (то есть на твердой среде с PDA). Колония после культивирования при 25°С в течение 8 дней достигает 50-55 мм в диаметре, является белой, блестящей и расширяется радиально, а основание колонии имеет светло-коричневую окраску; см. фиг. 1 с морфологическими характеристиками колонии. Гифы штамма являются прочными и толстыми, состоят из трубчатых клеток с тонкими клеточными стенками, и имеют перегородки и ветви, а также соединения в виде пряжек, см. фиг. 2.As a specific embodiment of the invention, there is provided a strain of Hericium erinaceus HT-3 CCTCC No: M 2018567 which grows rapidly on dextrose-containing potato agar medium (ie, PDA solid medium). The colony after cultivation at 25°C for 8 days reaches 50-55 mm in diameter, is white, shiny and expands radially, and the base of the colony has a light brown color; see fig. 1 with morphological characteristics of the colony. The hyphae of the strain are strong and thick, composed of tubular cells with thin cell walls, and have septa and branches, as well as buckle-like connections, see FIG. 2.
Гриб «Львиная грива» представляет собой Hericium erinaceus (Rull ex F.) и принадлежит к роду Hydnaceae, Polyporaceae, Базидиомицетов и Грибов, а также является сапрофитом и известным съедобным грибом. Его форма напоминает ежа или гребень, а поэтому его обычно называют гребнем или грибом Львиная грива. В настоящем изобретении, Hericium erinaceus предпочтительно представляет собой Hericium erinaceus CCTCC No. M 2018567, который был депонирован в Китайской Коллекции Типовых Культур (CCTCC) 23 августа 2018 г.The 'Lion's Mane' mushroom is Hericium erinaceus (Rull ex F.) and belongs to the genus Hydnaceae, Polyporaceae , Basidiomycetes and Fungi, and is also a saprophyte and a well-known edible mushroom. Its shape resembles that of a hedgehog or a comb, which is why it is commonly referred to as a comb or Lion's Mane mushroom. In the present invention, Hericium erinaceus is preferably Hericium erinaceus CCTCC No. M 2018567, which was deposited with the China Type Culture Collection (CCTCC) on August 23, 2018.
Последовательность гена 18s рРНК Hericium erinaceus HT-3 CCTCC No. M2018567 представлена в SEQ ID NO: 1, см. фиг. 3. The 18s rRNA gene sequence of Hericium erinaceus HT-3 CCTCC No. M2018567 is shown in SEQ ID NO: 1, see FIG. 3.
Последовательность ITS Hericium erinaceus HT-3 CCTCC No. M 2018567 представлена в SEQ ID NO: 2, см. фиг. 4. ITS sequence Hericium erinaceus HT-3 CCTCC no. M 2018567 is shown in SEQ ID NO: 2, see FIG. four.
В качестве конкретного варианта осуществления изобретения, способ скрининга штамма Hericium, продуцирующего эрготион (Hericium erinaceus HT-3), включает: As a specific embodiment of the invention, a method for screening an ergothione-producing strain of Hericium ( Hericium erinaceus HT-3) comprises:
(1) вырезание блока ткани размером приблизительно 0,5×0,5 см из гриба Hericium erinaceus и помещение на твердую среду с PDA, содержащую антибиотик; культивирование в течение 5-12 дней, предпочтительно в течение 7-10 дней, при 23~28°С предпочтительно при температуре 24°С, с получением мицелия Hericium erinaceus; инокуляцию мицелия Hericium erinaceus на твердой среде с PDA; культивирование в течение 5-12 дней, предпочтительно в течение 8 дней, при 23~28°С, предпочтительно при температуре 24°С, с получением мицелия Hericium erinaceus,(1) excising a tissue block of approximately 0.5×0.5 cm from the fungus Hericium erinaceus and placing on a PDA solid medium containing an antibiotic; culturing for 5-12 days, preferably 7-10 days, at 23~28°C, preferably at 24°C, to obtain Hericium erinaceus mycelium; inoculation of Hericium erinaceus mycelium on solid medium with PDA; cultivation for 5-12 days, preferably for 8 days, at 23~28°C, preferably at 24°C, to obtain the mycelium of Hericium erinaceus ,
где твердая среда с PDA, как обычная твердая среда, является полусинтетической средой и была приготовлена путем выщелачивания раствора, полученного из 200 г картофеля, 20 г глюкозы, 15-20 г агара и 1000 мл воды, без регуляции pH.where the solid medium with PDA, as usual solid medium, is a semi-synthetic medium and was prepared by leaching a solution obtained from 200 g of potatoes, 20 g of glucose, 15-20 g of agar and 1000 ml of water, without adjusting the pH.
(2) инокуляцию штамма Hericium erinaceus, полученного на стадии (1), в сбраживаемую среду; культивирование в течение 12-20 дней, предпочтительно в течение 15 дней, при 23~28°С предпочтительно при 24°С, где вещество-предшественник подают на дни 7-10 во время культивирования для получения сбраживаемого бульона;(2) inoculating the Hericium erinaceus strain obtained in step (1) into the fermentation medium; cultivation for 12-20 days, preferably for 15 days, at 23~28°C, preferably at 24°C, where the precursor substance is fed for days 7-10 during cultivation to obtain a fermentable broth;
(3) центрифугирование сбраживаемого бульона со скоростью 8000~10000 об/мин, а предпочтительно 8000 об/мин, в течение 10~20 минут, предпочтительно в течение 20 минут, удаление супернатанта для фильтрации через микропористый 0,22 мкм-фильтр, определение количества эрготионеина в фильтрате и скрининг штамма на продуцирование эрготионеина. Тканевый блок гриба Hericium erinaceus на стадии (1) представляет собой ворсинчатую часть, стык ворсинок и ножки, среднюю часть и основание ножки, а предпочтительно, ворсинчатую часть.(3) Centrifuge the fermented broth at 8000~10000 rpm, and preferably 8000 rpm, for 10~20 minutes, preferably for 20 minutes, remove the supernatant to be filtered through a 0.22μm microporous filter, determine the amount ergothioneine in the filtrate and strain screening for ergothioneine production. The tissue block of the fungus Hericium erinaceus in step (1) is a villous part, a junction of the villi and a stem, a middle part and a stem base, and preferably a villous part.
Антибиотик на стадии (1) включает любой один компонент или комбинацию из двух или более компонентов, а именно, пенициллина, стрептомицина и хлорамфеникола, а предпочтительно стрептомицина. The antibiotic in step (1) comprises any one component or a combination of two or more components, namely penicillin, streptomycin and chloramphenicol, and preferably streptomycin.
Концентрация антибиотика составляет 0,01~0,1 г/л.The antibiotic concentration is 0.01~0.1g/L.
Вещество-предшественник на стадии (2) включает любой один компонент или комбинацию из двух или более компонентов, а именно, цистеина, метионина и гистидина.The precursor substance in step (2) comprises any one component or a combination of two or more components, namely cysteine, methionine and histidine.
Концентрация каждого из веществ-предшественников на стадии (2) составляет 1~3 мМ, соответственно.The concentration of each of the precursor substances in step (2) is 1~3 mM, respectively.
Определение количества эрготионеина в фильтрате на стадии (3) осуществляют с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии. Условиями ВЭЖХ могут быть: хроматографическая колонка: колонка Hypersil ODS C18 (250 мм×4,6 мм, размер частиц 5 мкм); температура колонки: 30°C; подвижная фаза: ацетонитрил-вода (3:97); скорость потока: 1,0 мл/мин; длина волны детектирования: 254 нм; объем загрузки: 20 мкл.The determination of the amount of ergothioneine in the filtrate in step (3) is carried out using high performance liquid chromatography. The HPLC conditions can be: chromatographic column: Hypersil ODS C18 column (250 mm×4.6 mm, particle size 5 µm); column temperature: 30°C; mobile phase: acetonitrile-water (3:97); flow rate: 1.0 ml/min; detection wavelength: 254 nm; loading volume: 20 µl.
В конкретном варианте осуществления изобретения, способ скрининга дополнительно включает стадию, проводимую после стадии (2), а именно, экстракционное вымачивание эрготионеина из клеток мицелия за их пределы. В конкретном варианте, стадию экстракционного вымачивания эрготионеина из клеток мицелия проводят путем гомогенизации сбраживаемого бульона мицелия при скорости от 1000 до 6000 об/мин, а предпочтительно при 4000 об/мин, в течение 20-100 минут, предпочтительно в течение 60 минут, с последующим повышением температуры сбраживаемого бульона до 60~100°С, предпочтительно 80°C, и нагреванием в течение 20~100 минут, предпочтительно в течение 50 минут, с последующей экстракцией эрготионеина из клеток мицелия за их пределы.In a specific embodiment of the invention, the screening method further comprises a step carried out after step (2), namely, extractive soaking of ergothioneine from mycelial cells beyond them. In a specific embodiment, the step of extracting the ergothioneine from the mycelium cells is carried out by homogenizing the fermentable mycelium broth at a speed of from 1000 to 6000 rpm, and preferably at 4000 rpm, for 20-100 minutes, preferably for 60 minutes, followed by by raising the temperature of the fermented broth to 60~100°C, preferably 80°C, and heating for 20~100 minutes, preferably for 50 minutes, followed by extraction of ergothioneine from the mycelial cells beyond them.
В конкретном варианте осуществления изобретения, стадию экстракционного вымачивания эрготионеина из клеток мицелия осуществляют посредством сбора мицелия путем разделения твердой и жидкой фаз в бульоне для ферментации мицелия; получения суспензии мицелия путем добавления воды с последующей гомогенизацией при скорости от 1000 до 6000 об/мин, а предпочтительно при 4000 об/мин, в течение 20-100 минут, а предпочтительно в течение 60 минут, с последующим повышением температуры сбраживаемого бульона до 60~100°С, предпочтительно 80°C, и нагреванием в течение 20~100 минут, предпочтительно в течение 60 минут, с последующей экстракцией эрготионеина из клеток мицелия за их пределы.In a particular embodiment of the invention, the step of extracting the ergothioneine from the mycelial cells is carried out by collecting the mycelium by separating the solid and liquid phases in the mycelial fermentation broth; obtaining a suspension of mycelium by adding water, followed by homogenization at a speed of 1000 to 6000 rpm, and preferably at 4000 rpm, for 20-100 minutes, and preferably for 60 minutes, followed by increasing the temperature of the fermented broth to 60 ~ 100°C, preferably 80°C, and heating for 20~100 minutes, preferably for 60 minutes, followed by extraction of ergothioneine from mycelial cells beyond them.
Сбраживаемая среда содержит от 20 до 60 г/л источника углерода, от 10 до 30 г/л источника азота, от 2 до 5 г/л неорганических солей и 0,001~0,005 г/л витаминов.The fermentation medium contains 20 to 60 g/L of carbon source, 10 to 30 g/L of nitrogen source, 2 to 5 g/L of inorganic salts, and 0.001~0.005 g/L of vitamins.
Кроме того, источник углерода, содержащийся в сбраживаемой среде, включает любой один компонент или комбинацию по меньшей мере из двух компонентов, а именно, растворимого крахмала, глюкозы, сахарозы, фруктозы, мальтозы и кукурузной муки;In addition, the carbon source contained in the fermentation medium includes any one component or a combination of at least two components, namely, soluble starch, glucose, sucrose, fructose, maltose and cornmeal;
предпочтительно, источник углерода, содержащийся в сбраживаемой среде, включает любой один компонент или комбинацию по меньшей мере из двух компонентов, а именно, глюкозы и мальтозы.preferably, the carbon source contained in the fermentation medium comprises any one component or a combination of at least two components, namely glucose and maltose.
Источник азота, содержащийся в сбраживаемой среде, включает любой один компонент или комбинацию по меньшей мере из двух компонентов, а именно, триптона, дрожжевого порошка, соевой муки, отрубей, порошкообразного соевого пептида, пшеничного пептона, казеинового пептона, жидкого кукурузного экстракта, говяжьего экстракта и сульфата аммония.The nitrogen source contained in the fermentation medium includes any one component or a combination of at least two components, namely, tryptone, yeast powder, soy flour, bran, powdered soy peptide, wheat peptone, casein peptone, liquid corn extract, beef extract and ammonium sulfate.
Предпочтительно, источник азота, содержащийся в сбраживаемой среде, включает любой любой один компонент или комбинацию по меньшей мере из двух компонентов, а именно, говяжьего экстракта и триптона.Preferably, the nitrogen source contained in the fermentation medium includes any one component or combination of at least two components, namely beef extract and tryptone.
Неорганическая соль, содержащаяся в сбраживаемой среде, включает любую одну из солей или комбинацию по меньшей мере двух солей из NaH2PO4, K2HPO4, KH2PO4 и MgSO4.The inorganic salt contained in the fermentation medium includes any one of the salts or a combination of at least two of NaH 2 PO 4 , K 2 HPO 4 , KH 2 PO 4 and MgSO 4 .
Предпочтительно, неорганическая соль, содержащаяся в сбраживаемой среде, представляет собой NaH2PO4.Preferably, the inorganic salt contained in the fermentation medium is NaH 2 PO 4 .
Витамины, содержащиеся в сбраживаемой среде, включают любой один витамин или комбинацию по меньшей мере из двух витаминов, а именно, витамина B1, витамина B2, ниацина, пантотеновой кислоты, витамина B6, витамина H и витамина B12; The vitamins contained in the fermentation medium include any one vitamin or a combination of at least two vitamins, namely vitamin B 1 , vitamin B 2 , niacin, pantothenic acid, vitamin B 6 , vitamin H and vitamin B 12 ;
предпочтительно, витамины, содержащиеся в сбраживаемой среде, включают любой один витамин или комбинацию из двух витаминов, а именно, витамина B1 и ниацина.preferably, the vitamins contained in the fermentation medium include any one vitamin or a combination of two vitamins, namely vitamin B 1 and niacin.
Настоящее изобретение также относится к композиции, содержащей сбраживаемый бульон Hericium erinaceus HT-3, где указанная композиция содержит эрготионеин, количество которого в сбраживаемом бульоне составляет по меньшей мере 41 мг/л, предпочтительно по меньшей мере 60 мг/л, более предпочтительно по меньшей мере 70 мг/л, еще более предпочтительно по меньшей мере 80 мг/л, а наиболее предпочтительно 90 мг/л, 100 мг/л, 110 мг/л, 120 мг/л, 130 мг/л, 140 мг/л или 150 мг/л. Hericium erinaceus HT-3 представляет собой Hericium erinaceus HT-3 CCTCC No. M 2018567 согласно изобретению. The present invention also relates to a composition containing Hericium erinaceus HT-3 fermentable broth, wherein said composition contains ergothioneine, the amount of which in the fermentable broth is at least 41 mg/l, preferably at least 60 mg/l, more preferably at least 70 mg/l, even more preferably at least 80 mg/l, and most preferably 90 mg/l, 100 mg/l, 110 mg/l, 120 mg/l, 130 mg/l, 140 mg/l or 150 mg/l. Hericium erinaceus HT-3 is Hericium erinaceus HT-3 CCTCC No. M 2018567 according to the invention.
ПримерыExamples
Пример 1Example 1
Скрининг штамма Hericium erinaceus на продуцирование эрготионеинаScreening of Hericium erinaceus strain for ergothioneine production
(1) Блоки ткани размером примерно 0,5×0,5 см вырезали из ворсинок плодовых тел Hericium erinaceus, образовавшихся на различных участках, помещали на твердую среду с PDA, содержащую антибиотики; культивировали при 24°С, и полученные мицелии инокулировали на твердой среде с PDA для очистки культуры. Очищенные штаммы инокулировали на скошенном PDA и хранили при 3~4°C для последующего использования;(1) Tissue blocks of approximately 0.5 x 0.5 cm were excised from the villi of Hericium erinaceus fruiting bodies formed at various sites, placed on PDA solid medium containing antibiotics; cultured at 24°C, and the resulting mycelia were inoculated on solid medium with PDA to purify the culture. Purified strains were inoculated onto a PDA slant and stored at 3~4°C for later use;
(2) Твердые штаммы, полученные на стадии (1), инокулировали в сбраживаемую среду и культивировали при 24°С в течение 16 дней для получения бульона для ферментации мицелия. Среда для ферментации состояла из 35 г/л сахарозы, 20 г/л жидкого кукурузного экстракта, 3 г/л KH2PO4, 3 мг/л витамина B1 и воды. После 10-дневной ферментации подавали аминокислоты-предшественники, цистеин, метионин и гистидин, каждую в концентрации 2 мМ, соответственно.(2) The solid strains obtained in step (1) were inoculated into the fermentation medium and cultured at 24° C. for 16 days to obtain a mycelium fermentation broth. The fermentation medium consisted of 35 g/l sucrose, 20 g/l liquid corn extract, 3 g/l KH 2 PO 4 , 3 mg/l vitamin B 1 and water. After a 10 day fermentation, the precursor amino acids cysteine, methionine and histidine were fed, each at a concentration of 2 mM, respectively.
(3) По окончании ферментации, бульон для ферментации мицелия гомогенизировали при 4000 об/мин в течение 60 минут, а затем гомогенизированный сбраживаемый бульон нагревали до 80°C в течение 50 минут, после чего эрготионеин подвергали вымачивающей экстракции из клеток мицелия в сбраживаемый бульон, центрифугировали при 8000 об/мин в течение 20 минут, а затем супернатант удаляли для фильтрации через микропористый 0,22 мкм-фильтр, и штамм с самым высоким содержанием эрготионеина в фильтрате был отобран и назван Hericium erinaceus HT-3.(3) At the end of fermentation, the mycelium fermentation broth was homogenized at 4000 rpm for 60 minutes, and then the homogenized fermentation broth was heated to 80°C for 50 minutes, after which ergothioneine was subjected to soak extraction from the mycelium cells into the fermentation broth, was centrifuged at 8000 rpm for 20 minutes, and then the supernatant was removed for filtration through a microporous 0.22 μm filter, and the strain with the highest content of ergothioneine in the filtrate was selected and named Hericium erinaceus HT-3.
Пример 2Example 2
Морфологическое наблюдение Hericium erinaceus HT-3Morphological observation of Hericium erinaceus HT-3
Hericium erinaceus HT-3 CCTCC NO: M 2018567 быстро размножался на среде с картофельным агаром, содержащим декстрозу, прилипая к поверхности среды и распространяясь в эту среду с поверхности. После культивирования при 25°С в течение 8 дней, колония достигла 50-55 мм в диаметре, становилась белой и бархатистой, а затем радиально расширялась в окружающую среду и имела светло-коричневое основание. Морфологические характеристики колонии представлены на фиг. 1. Гифы штамма были прочными и толстыми, состояли из трубчатых клеток с тонкими клеточными стенками и имели перегородки, ветви и соединения пряжки, см. фиг. 2. Hericium erinaceus HT-3 CCTCC NO: M 2018567 proliferated rapidly on dextrose-containing potato agar media, adhering to the surface of the medium and spreading into the medium from the surface. After cultivation at 25°C for 8 days, the colony reached 50-55 mm in diameter, became white and velvety, and then expanded radially into the environment and had a light brown base. The morphological characteristics of the colony are shown in Fig. 1. The hyphae of the strain were strong and thick, consisted of tubular cells with thin cell walls, and had septa, branches, and buckle joints, see FIG. 2.
Пример 3Example 3
Идентификация и классификация Hericium erinaceus HT-3Identification and classification of Hericium erinaceus HT-3
Hericium erinaceus HT-3 был идентифицирован путем секвенирования генома компанией Shanghai Shenggong Biological Engineering (Shanghai) Co., Ltd. Штамм был идентифицирован как Hericium erinaceus, и имел следующую таксономию: Fungi, Dikarya, Basidiomycota, Agaricomycotina, Agaricomycetidae, Russulales, Hericiaceae, Hericium. Результат секвенирования гена 18s рРНК показан на фиг. 3, а результат секвенирования ITS показан на фиг. 4. Hericium erinaceus HT-3 was identified by genome sequencing by Shanghai Shenggong Biological Engineering (Shanghai) Co., Ltd. The strain was identified as Hericium erinaceus and had the following taxonomy: Fungi, Dikarya, Basidiomycota, Agaricomycotina, Agaricomycetidae, Russulales, Hericiaceae, Hericium . The result of 18s rRNA gene sequencing is shown in FIG. 3 and the ITS sequencing result is shown in FIG. four.
Пример 4Example 4
Детектирование эрготионеинаErgothioneine detection
Сбраживаемый бульон HT-3 Примера 1 использовали в качестве тестируемого образца, а содержание эрготионеина определяли с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии. Условия ВЭЖХ: Хроматографическая колонка: колонка Hypersil ODS C18 (250 мм × 4,6 мм, размер частиц 5 мкм); температура колонки: 30°C; подвижная фаза: ацетонитрил-вода (3:97); скорость потока: 1,0 мл/мин; длина волны детектирования: 254 нм; объем загрузки: 20 мкл. Хроматограмма показана на фиг. 4, где а) представляет собой стандартный продукт (концентрация эрготионеина составляет 9,4 мкг/мл), а b) представляет собой сбраживаемый бульон для ферментации HT-3.The HT-3 fermentation broth of Example 1 was used as a test sample, and the ergothioneine content was determined by high performance liquid chromatography. HPLC conditions: Chromatography column: Hypersil ODS C18 column (250 mm×4.6 mm, particle size 5 µm); column temperature: 30°C; mobile phase: acetonitrile-water (3:97); flow rate: 1.0 ml/min; detection wavelength: 254 nm; loading volume: 20 µl. The chromatogram is shown in Fig. 4, where a) is a standard product (ergothioneine concentration is 9.4 µg/ml) and b) is a fermentable broth for HT-3 fermentation.
Пример 5Example 5
Оптимизация сбраживаемой средыFermentation media optimization
В этом примере, для эксперимента были выбраны пять сбраживаемых сред с различными компонентами, содержанием и значениями pH. Состав и pH каждой сбраживаемой среды показаны ниже в Таблице 1.In this example, five fermentation media with different components, contents and pH values were selected for the experiment. The composition and pH of each fermentation medium is shown in Table 1 below.
(1) Скошенный мицелий Hericium erinaceus CCTCC NO: M 2018567 инокулировали в жидкую посевную среду и культивировали в течение 5-10 дней при 15~30°C и 100~300 об/мин.(1) Slanted mycelium of Hericium erinaceus CCTCC NO: M 2018567 was inoculated into liquid seed medium and cultured for 5-10 days at 15~30°C and 100~300 rpm.
Жидкая посевная среда: 4% (мас/об) сахарозы, 1,5% (мас/об) порошкообразной соевой муки, 0,2% (мас/об) дигидрофосфата натрия, 0,1% (мас/об) сульфата натрия и вода, добавленная до 100%.Liquid seed medium: 4% (w/v) sucrose, 1.5% (w/v) powdered soy flour, 0.2% (w/v) sodium dihydrogen phosphate, 0.1% (w/v) sodium sulfate and water added to 100%.
(2) Посевной бульон, полученный на стадии (1), инокулировали в сбраживаемую среду для ферментации с добавлением веществ-предшественников и культивировали в течение 7-15 дней при 15~30°C и 100~300 об/мин. По окончании ферментации, сбраживаемый бульон собирали. Аминокислоты-предшественники, цистеин, метионин и гистидин, каждую в концентрации 2 мМ, добавляли на 10-й день ферментации.(2) The seed broth obtained in step (1) was inoculated into the fermentation medium for fermentation supplemented with precursor substances, and cultured for 7-15 days at 15~30°C and 100~300 rpm. At the end of the fermentation, the fermented broth was collected. Precursor amino acids, cysteine, methionine and histidine, each at a concentration of 2 mm, were added on the 10th day of fermentation.
(3) По окончании ферментации, бульон для ферментации мицелия гомогенизировали при 4000 об/мин в течение 60 минут, а затем гомогенизированный сбраживаемый бульон нагревали до 80°C в течение 50 минут, эрготионеин экстрагировали из клеток мицелия во внеклеточный сбраживаемый бульон, центрифугировали при 8000 об/мин в течение 20 минут, после чего супернатант удаляли для фильтрации через микропористый 0,22 мкм-фильтр и определяли содержание эрготионеина в фильтрате.(3) At the end of fermentation, the mycelium fermentation broth was homogenized at 4000 rpm for 60 minutes, and then the homogenized fermentation broth was heated to 80°C for 50 minutes, ergothionein was extracted from the mycelium cells into the extracellular fermentation broth, centrifuged at 8000 rpm for 20 minutes, after which the supernatant was removed for filtration through a microporous 0.22 μm filter and the content of ergothioneine in the filtrate was determined.
Было выбрано пять различных сред для ферментации, и оцененное содержание эрготионеина в конечном фильтрате показано в Таблице 1. Five different fermentation media were selected and the estimated ergothioneine content in the final filtrate is shown in Table 1.
Таблица 1Table 1
3 г/л KH2PO4 _
3 g/l
3 мг/лVitamin B 1
3 mg/l
5 г/л KH2PO4 _
5 g/l
5 мг/лVitamin B6
5 mg/l
3 г/л K2HPO4 _
3 g/l
1 мг/лVitamin H
1 mg/l
2 г/л KH2PO4 _
2 g/l
2 мг/лNiacin
2 mg/l
2 г/л NaH2PO4 _
2 g/l
2 мг/лVitamin B12
2 mg/l
В настоящее время описаны некоторые способы получения эрготионеина путем биологической ферментации. Так, например, эрготион может быть получен, например, путем культивирования мицелия Pleurotus eryngii в глубинно-жидкой культуре с выходом в конце ферментации, достигающим 62,20 мг/л; путем культивирования мицелия Lentinus edodes в глубинно-жидкой культуре с выходом в конце ферментации, достигающим 23,6 мг/л; путем жидкостной ферментации Lepista sordida с максимальным выходом 51 мг/л; путем жидкостной ферментации Pleurotus plumonarius с максимальным выходом 48 мг/л; путем жидкостной ферментации Pleurotus sapidus дикого типа с максимальным выходом 37 мг/л. Можно видеть, что выходы эрготионеина, полученного такими методами биологической ферментации, являются невысокими. Однако при использовании штамма согласно изобретению, более высокий выход эрготионеина может быть получен в условиях с использованием слегка оптимизированной среды.Several processes for the production of ergothioneine by biological fermentation have now been described. Thus, for example, ergothion can be obtained, for example, by cultivating the mycelium of Pleurotus eryngii in deep liquid culture with a yield at the end of fermentation reaching 62.20 mg/l; by cultivating the mycelium of Lentinus edodes in deep liquid culture with a yield at the end of fermentation reaching 23.6 mg/l; by liquid fermentation of Lepista sordida with a maximum yield of 51 mg/l; by liquid fermentation of Pleurotus plumonarius with a maximum yield of 48 mg/l; by liquid fermentation of wild-type Pleurotus sapidus with a maximum yield of 37 mg/l. It can be seen that the yields of ergothioneine obtained by such biological fermentation methods are low. However, when using the strain according to the invention, a higher yield of ergothioneine can be obtained under conditions using a slightly optimized medium.
--->--->
СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙSEQUENCE LIST
<110> BLOOMAGE BIOTECHNOLOGY CORPORATION LIMITED<110> BLOOMAGE BIOTECHNOLOGY CORPORATION LIMITED
SHANDONG BLOOMAGE HYINC BIOPHARM CORPORATION LIMITED SHANDONG BLOOMAGE HYINC BIOPHARM CORPORATION LIMITED
<120> ШТАММ, ПРОДУЦИРУЮЩИЙ ЭРГОТИОНЕИН, И СПОСОБ ЕГО СКРИНИНГА<120> ERGOTHIONEIN-PRODUCING STRAIN AND METHOD FOR ITS SCREENING
<130> PB00324<130> PB00324
<141> 2018-12-26<141> 2018-12-26
<160> 2<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1<210> 1
<211> 1316<211> 1316
<212> ДНК/РНК<212> DNA/RNA
<213> Hericium erinaceus<213> Hericium erinaceus
<400> 1<400> 1
ttgtactgtg aaactgcgaa tggctcatta aatcagttat agtttatttg atggtaccttttgtactgtg aaactgcgaa tggctcatta aatcagttat agtttatttg atggtacctt
60 60
gctacatgga taactgtggt aattctagag ctaatacatg caattaagcc ccgacttccggctacatgga taactgtggt aattctagag ctaatacatg caattaagcc ccgacttccg
120 120
gaaggggtgt atttattaga taaaaaacca acgcggctcg ccgctccttt ggtgattcatgaaggggtgt atttattaga taaaaaacca acgcggctcg ccgctccttt ggtgattcat
180 180
aataacttct cgaatcgcat ggccttgtgc cggcgatgct tcattcaaat atctgccctaaataacttct cgaatcgcat ggccttgtgc cggcgatgct tcattcaaat atctgcccta
240 240
tcaactttcg atggtaggat agaggcctac catggtttca acgggtaacg gggaataaggtcaactttcg atggtaggat agaggcctac catggtttca acgggtaacg gggaataagg
300 300
gttcgattcc ggagagggag cctgagaaac ggctaccaca tccaaggaag gcagcaggcggttcgattcc ggagagggag cctgagaaac ggctaccaca tccaaggaag gcagcaggcg
360 360
cgcaaattac ccaatcccga cacggggagg tagtgacaat aaataacaat atagggctctcgcaaattac ccaatcccga cacggggagg tagtgacaat aaataacaat atagggctct
420 420
tttgggtctt ataattggaa tgagtacaat ttaaatccct taacgaggaa caattggaggtttggggtctt ataattggaa tgagtacaat ttaaatccct taacgaggaa caattgggagg
480 480
gcaagtctgg tgccagcagc cgcggtaatt ccagctccaa tagcgtatat taaagttgttgcaagtctgg tgccagcagc cgcggtaatt ccagctccaa tagcgtatat taaagttgtt
540 540
gcagttaaaa agctcgtagt tgaacttcag gcctggccgg gcggtctgcc taacggtatggcagttaaaa agctcgtagt tgaacttcag gcctggccgg gcggtctgcc taacggtatg
600 600
tactgtctgg ccgggcctta cctcctggtg agccggcatg cccttcactg ggtgtgtcggtactgtctgg ccgggcctta ccctcctggtg agccggcatg cccttcactg ggtgtgtcgg
660 660
ggaaccagga cttttacctt gagaaaatta gagtgttcaa agcaggccta tgcccgaataggaaccagga cttttacctt gagaaaatta gagtgttcaa agcaggccta tgcccgaata
720 720
cattagcatg gaataataaa ataggacgtg cggttctatt ttgttggttt ctagaatcgccattagcatg gaataataaa ataggacgtg cggttctatt ttgttggttt ctagaatcgc
780 780
cgtaatgatt aatagggata gttgggggca ttagtattgc gttgctagag gtgaaattctcgtaatgatt aatagggata gttgggggca ttagtattgc gttgctagag gtgaaattct
840 840
tggatttacg caagactaac tactgcgaaa gcatttgcca aggatgtttt cattaatcaatggatttacg caagactaac tactgcgaaa gcatttgcca aggatgtttt cattaatcaa
900 900
gaacgaaggt taggggatcg aaaacgatca gataccgttg tagtcttaac agtaaactatgaacgaaggt taggggatcg aaaacgatca gataccgttg tagtcttaac agtaaactat
960 960
gccgactagg gatcgggcga cctcaattta atgtgtcgct cggcacctta cgagaaatcagccgactagg gatcgggcga cctcaattta atgtgtcgct cggcacctta cgagaaatca
1020 1020
aagtctttgg gttctggggg gagtatggtc gcaaggctga aacttaaagg aattgacggaaagtctttgg gttctggggg gagtatggtc gcaaggctga aacttaaagg aattgacgga
1080 1080
agggcaccac caggagtgga gcctgcggct taatttgact caacacgggg aaactcaccaagggcaccac caggagtgga gcctgcggct taatttgact caacacgggg aaactcacca
1140 1140
ggtccagaca taactaggat tgacagattg atagctcttt cttgatttta tgggtggtggggtccagaca taactaggat tgacagattg atagctcttt cttgatttta tgggtggtgg
1200 1200
tgcatggccg ttcttagttg gtggagtgat ttgtctggtt aattccgata acgaacgagatgcatggccg ttcttagttg gtggagtgat ttgtctggtt aattccgata acgaacgaga
1260 1260
ccttaacctg ctaaatagcc cggccggctt ttgctggtcg ctggcttctt agaggg ccttaacctg ctaaatagcc cggccggctt ttgctggtcg ctggcttctt agaggg
1316 1316
<210> 2<210> 2
<211> 605<211> 605
<212> ДНК/РНК<212> DNA/RNA
<213> Hericium erinaceus<213> Hericium erinaceus
<400> 2<400> 2
tgcggaagga tcattaatga atttgaaagg agttgttgct ggcctgaaac ccaggcatgttgcggaagga tcattaatga atttgaaagg agttgttgct ggcctgaaac ccaggcatgt
60 60
gcacgctcca atctcatcca tcttacacct gtgcaccctt gcgtgggtcc gtcggctttggcacgctcca atctcatcca tcttacacct gtgcaccctt gcgtgggtcc gtcggctttg
120 120
cggtcgatgg gcttgcgttt ttcataaact cttatgtatg taacagaatg tcataatgctcggtcgatgg gcttgcgttt ttcataaact cttatgtatg taacagaatg tcataatgct
180 180
ataaacgcat cttatacaac tttcaacaac ggatctcttg gctctcgcat cgatgaagaaataaacgcat cttatacaac tttcaacaac ggatctcttg gctctcgcat cgatgaagaa
240 240
cgcagcgaaa tgcgataagt aatgtgaatt gcagaattca gtgaatcatc gaatctttgacgcagcgaaa tgcgataagt aatgtgaatt gcagaattca gtgaatcatc gaatctttga
300 300
acgcaccttg cgccccttgg tattccgagg ggcacgcctg ttcgagtgtc gtgaaattctacgcaccttg cgccccttgg tattccgagg ggcacgcctg ttcgagtgtc gtgaaattct
360 360
caactcaatc ctcttgttat gagagggctg ggcttggact tggaggtctt gccggtgctccaactcaatc ctcttgttat gagagggctg ggcttggact tggaggtctt gccggtgctc
420 420
cctcgggaag tcggctcctc ttgaatgcat gagtggatcc cttttgtagg gtttgcccttcctcgggaag tcggctcctc ttgaatgcat gagtggatcc cttttgtagg gtttgccctt
480 480
ggtgtgataa ttatctacgc cgcgggtagc cttgcgttgg tctgcttcta accgtcttcgggtgtgataa ttatctacgc cgcgggtagc cttgcgttgg tctgcttcta accgtcttcg
540 540
gacaactttc atctcaactt gacctcgaat caggcgggac tacccgctga acttaagcatgacaactttc atctcaactt gacctcgaat caggcgggac tacccgctga acttaagcat
600 600
atcat atcat
605 605
<---<---
Claims (5)
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201811605008.5 | 2018-12-26 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2788417C1 true RU2788417C1 (en) | 2023-01-19 |
Family
ID=
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2430155C1 (en) * | 2009-12-30 | 2011-09-27 | Учреждение Российской академии медицинских наук Научно-исследовательский институт по изысканию новых антибиотиков им. Г.Ф. Гаузе РАМН | Basidiomycete inoculating mycelium and preparation method thereof |
CN103734022A (en) * | 2012-10-16 | 2014-04-23 | 中国科学院天津工业生物技术研究所 | Bacterial strain producing L-erythrothioneine and method of preparing the L-erythrothioneine |
US20170211107A1 (en) * | 2014-05-30 | 2017-07-27 | Tianjin Institute Of Industrial Biotechnology Chinese Academy Of Sciences | Method for producing ergothioneine |
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2430155C1 (en) * | 2009-12-30 | 2011-09-27 | Учреждение Российской академии медицинских наук Научно-исследовательский институт по изысканию новых антибиотиков им. Г.Ф. Гаузе РАМН | Basidiomycete inoculating mycelium and preparation method thereof |
CN103734022A (en) * | 2012-10-16 | 2014-04-23 | 中国科学院天津工业生物技术研究所 | Bacterial strain producing L-erythrothioneine and method of preparing the L-erythrothioneine |
US20170211107A1 (en) * | 2014-05-30 | 2017-07-27 | Tianjin Institute Of Industrial Biotechnology Chinese Academy Of Sciences | Method for producing ergothioneine |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
SHIN-YU CHEN et al., Contents of lovastatin, γ-aminobutyric acid and ergothioneine in mushroom fruiting bodies and mycelia. LWT - Food Science and Technology 47 (2012) 274e278. https://doi.org/10.1016/j.lwt.2012.01.019 Найдено онлайн: https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0023643812000357 Дата обращения 09.06.2022. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
AU2019413143B2 (en) | Strain producing ergothioneine and screening method thereof | |
US6372462B2 (en) | Process for producing, methods and compositions of cholesterol lowering agents from higher basidiomycetes mushrooms | |
KR100199920B1 (en) | The method of culturing cordyceps | |
CN112501029B (en) | Armillaria matsutake and method for producing ergothioneine by using same | |
CN110283856B (en) | Application of high-temperature-resistant Pleurotus ostreatus in ergothioneine production | |
Bamigboye et al. | Optimization of the process for producing biomass and exopolysaccharide from the king tuber oyster mushroom, Pleurotus tuber-regium (Agaricomycetes), for biotechnological applications | |
KR101833099B1 (en) | Method for producing cordycepin comprising of adding algal or protein medium | |
RU2788417C1 (en) | Strain producing ergothioneine and its screening method | |
Elisashvili et al. | Extracellular polysaccharide production by culinary-medicinal Shiitake mushroom Lentinus edodes (Berk.) Singer and Pleurotus (Fr.) P. Karst. species depending on carbon and nitrogen source | |
CN110656050B (en) | Inonotus obliquus strain obtained through ultraviolet mutagenesis | |
Ghada | Optimization of submerged culture conditions for mycelial biomass production by shiitake mushroom (Lentinus edodes) | |
Vinokurova et al. | Production of alkaloids by fungi of the genus Penicillium grown on wheat grain | |
KR101865292B1 (en) | Culture medium composition comprising mushroom extract for culturing phellinus linteus and culture method of phellinus linteus using thereof | |
US20090209013A1 (en) | Burkholderia rhizoxina micro-organisms, novel endosymbionts of rhizopus sp. and method for producing rhizoxin and/or rhizoxin-derivates using said micro-organisms | |
JP2004267004A (en) | Method for culturing cordyceps sinensis | |
KR20200095208A (en) | Co-culture method of mushroom mycelium | |
RU2787269C1 (en) | Method for production of fungal exopolysaccharides | |
RU2656143C1 (en) | Strain batidomicette stains laetiporus sulphureus vkpm f-1286 - producer of lipides | |
KR960009928B1 (en) | Process for preparing anticancer protein polyglycosides | |
JP2004242507A (en) | Culture medium for cordyceps sinensis | |
RU2620078C1 (en) | Fomitopsis pinicola vkpm f-1285 basidiomycete strain - producer of lipids | |
JPH08196267A (en) | Culture medium for cultivating basidiomycete and method for culturing and cultivating basidiomycete | |
JPS62275669A (en) | Production of yeast extract | |
KR100787537B1 (en) | Process for mass production of Tricholoma matsutake mycelium by liquid culture | |
JP2004242506A (en) | Culture medium for cordyceps sinensis |