RU2788149C1 - Proteins dclk1 and ripk1 biomarkers of simple schizophrenia - Google Patents
Proteins dclk1 and ripk1 biomarkers of simple schizophrenia Download PDFInfo
- Publication number
- RU2788149C1 RU2788149C1 RU2021133491A RU2021133491A RU2788149C1 RU 2788149 C1 RU2788149 C1 RU 2788149C1 RU 2021133491 A RU2021133491 A RU 2021133491A RU 2021133491 A RU2021133491 A RU 2021133491A RU 2788149 C1 RU2788149 C1 RU 2788149C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- schizophrenia
- dclk1
- proteins
- ripk1
- patients
- Prior art date
Links
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims abstract description 49
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 49
- 206010039636 Schizophrenia simple Diseases 0.000 title claims abstract description 41
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 title claims abstract description 21
- 101700031367 DCLK1 Proteins 0.000 claims abstract description 43
- 102100000586 DCLK1 Human genes 0.000 claims abstract description 42
- 210000002966 Serum Anatomy 0.000 claims abstract description 34
- 101710025088 66 Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 101710027426 Ba71V-121 Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 101700024634 CDK16 Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 101700007872 CDK7 Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 102100006116 CDK7 Human genes 0.000 claims abstract description 3
- 101700036757 ERN1 Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 102100016655 ERN1 Human genes 0.000 claims abstract description 3
- 101700014948 ERN2 Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 101700085586 IRE1A Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 101700019719 IRE1B Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 101710007526 MAP3K14 Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 101700044505 PUB33 Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 101700045570 PUB34 Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 101700046887 PUB35 Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 101700066160 PUB51 Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 101700067511 PUB52 Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 101700068819 PUB53 Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 101700086326 PUB70 Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 101700052395 ire-1 Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 101710044472 pufB Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 201000000980 schizophrenia Diseases 0.000 abstract description 34
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 abstract description 17
- 238000003748 differential diagnosis Methods 0.000 abstract description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 46
- 208000002851 Paranoid Schizophrenia Diseases 0.000 description 25
- 206010039639 Schizophrenia, paranoid type Diseases 0.000 description 25
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 20
- 206010061284 Mental disease Diseases 0.000 description 13
- 230000003340 mental Effects 0.000 description 12
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 9
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 8
- 238000000575 proteomic Methods 0.000 description 8
- 206010002855 Anxiety Diseases 0.000 description 7
- 206010057666 Anxiety disease Diseases 0.000 description 7
- 230000036506 anxiety Effects 0.000 description 7
- 201000007185 autism spectrum disease Diseases 0.000 description 7
- 230000007958 sleep Effects 0.000 description 6
- 210000004369 Blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 description 5
- 238000002553 single reaction monitoring Methods 0.000 description 5
- 206010016275 Fear Diseases 0.000 description 4
- 102000019058 Glycogen Synthase Kinase 3 beta Human genes 0.000 description 4
- 108010051975 Glycogen Synthase Kinase 3 beta Proteins 0.000 description 4
- 238000000585 Mann–Whitney U test Methods 0.000 description 4
- 210000002381 Plasma Anatomy 0.000 description 4
- 206010061920 Psychotic disease Diseases 0.000 description 4
- 101700069676 RIPK1 Proteins 0.000 description 4
- 102100014279 RIPK1 Human genes 0.000 description 4
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 4
- 230000036651 mood Effects 0.000 description 4
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 4
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 4
- 101700064369 A2M Proteins 0.000 description 3
- 102100000684 A2M Human genes 0.000 description 3
- 210000001015 Abdomen Anatomy 0.000 description 3
- 206010059512 Apoptosis Diseases 0.000 description 3
- 101700002274 PZP Proteins 0.000 description 3
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 3
- HWHLPVGTWGOCJO-UHFFFAOYSA-N Trihexyphenidyl Chemical compound C1CCCCC1C(C=1C=CC=CC=1)(O)CCN1CCCCC1 HWHLPVGTWGOCJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 3
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 238000010219 correlation analysis Methods 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing Effects 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N formic acid Chemical compound OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- 230000021597 necroptosis Effects 0.000 description 3
- 230000036407 pain Effects 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 238000010833 quantitative mass spectrometry Methods 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- 210000003169 Central Nervous System Anatomy 0.000 description 2
- 206010012374 Depressed mood Diseases 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 108090001096 Immunoglobulin M Proteins 0.000 description 2
- 102000004854 Immunoglobulin M Human genes 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- 108020004999 Messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 102000003867 Phospholipid Transfer Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108090000216 Phospholipid Transfer Proteins Proteins 0.000 description 2
- 108010026552 Proteome Proteins 0.000 description 2
- 206010037175 Psychiatric disease Diseases 0.000 description 2
- 101700019695 RIPK Proteins 0.000 description 2
- 206010038743 Restlessness Diseases 0.000 description 2
- 210000002784 Stomach Anatomy 0.000 description 2
- ZEWQUBUPAILYHI-UHFFFAOYSA-N Trifluoperazine Chemical compound C1CN(C)CCN1CCCN1C2=CC(C(F)(F)F)=CC=C2SC2=CC=CC=C21 ZEWQUBUPAILYHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 230000000561 anti-psychotic Effects 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 2
- 230000000875 corresponding Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000002651 drug therapy Methods 0.000 description 2
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 230000003902 lesions Effects 0.000 description 2
- 230000004301 light adaptation Effects 0.000 description 2
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 230000001404 mediated Effects 0.000 description 2
- 229920002106 messenger RNA Polymers 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 210000002569 neurons Anatomy 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic Effects 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 239000012474 protein marker Substances 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 230000035807 sensation Effects 0.000 description 2
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 2
- 230000005062 synaptic transmission Effects 0.000 description 2
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 2
- ZUXABONWMNSFBN-UHFFFAOYSA-N 3-chloro-6-(4-methylpiperazin-1-yl)-5H-benzo[b][1,4]benzodiazepine Chemical compound C1CN(C)CCN1C1=C(C=CC=C2)C2=NC2=CC=C(Cl)C=C2N1 ZUXABONWMNSFBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710027066 ALB Proteins 0.000 description 1
- 102100001249 ALB Human genes 0.000 description 1
- 229940005529 ANTIPSYCHOTICS Drugs 0.000 description 1
- 208000008190 Agammaglobulinemia Diseases 0.000 description 1
- 229940025141 Anafranil Drugs 0.000 description 1
- 206010002383 Angina pectoris Diseases 0.000 description 1
- 206010002942 Apathy Diseases 0.000 description 1
- 102000005666 Apolipoprotein A-I Human genes 0.000 description 1
- 108010059886 Apolipoprotein A-I Proteins 0.000 description 1
- 102000009081 Apolipoprotein A-II Human genes 0.000 description 1
- 108010087614 Apolipoprotein A-II Proteins 0.000 description 1
- 208000006673 Asthma Diseases 0.000 description 1
- 206010003645 Atopy Diseases 0.000 description 1
- 210000003050 Axons Anatomy 0.000 description 1
- 210000004204 Blood Vessels Anatomy 0.000 description 1
- 210000004556 Brain Anatomy 0.000 description 1
- 206010006451 Bronchitis Diseases 0.000 description 1
- 102100007826 C4BPA Human genes 0.000 description 1
- 101700051748 C4BPA Proteins 0.000 description 1
- -1 CCL4 Proteins 0.000 description 1
- FFGPTBGBLSHEPO-UHFFFAOYSA-N Carbamazepine Chemical compound C1=CC2=CC=CC=C2N(C(=O)N)C2=CC=CC=C21 FFGPTBGBLSHEPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WSPOMRSOLSGNFJ-AUWJEWJLSA-N Chlorprothixene Chemical compound C1=C(Cl)C=C2C(=C/CCN(C)C)\C3=CC=CC=C3SC2=C1 WSPOMRSOLSGNFJ-AUWJEWJLSA-N 0.000 description 1
- 229960001552 Chlorprothixene Drugs 0.000 description 1
- GDLIGKIOYRNHDA-UHFFFAOYSA-N Clomipramine Chemical compound C1CC2=CC=C(Cl)C=C2N(CCCN(C)C)C2=CC=CC=C21 GDLIGKIOYRNHDA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010028780 Complement C3 Proteins 0.000 description 1
- 102000016918 Complement C3 Human genes 0.000 description 1
- 108010028778 Complement C4 Proteins 0.000 description 1
- 108010069112 Complement System Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000000989 Complement System Proteins Human genes 0.000 description 1
- 102000010170 Death domain Human genes 0.000 description 1
- 108050001718 Death domain Proteins 0.000 description 1
- NIJJYAXOARWZEE-UHFFFAOYSA-N Depacane Chemical group CCCC(C(O)=O)CCC NIJJYAXOARWZEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 208000002173 Dizziness Diseases 0.000 description 1
- 210000001198 Duodenum Anatomy 0.000 description 1
- 208000001187 Dyskinesias Diseases 0.000 description 1
- 206010014128 Echopraxia Diseases 0.000 description 1
- 229940088598 Enzyme Drugs 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 208000006881 Esophagitis Diseases 0.000 description 1
- 108060002921 FKBP2 Proteins 0.000 description 1
- 102100011848 FPR2 Human genes 0.000 description 1
- 206010066392 Fear of death Diseases 0.000 description 1
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 1
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 1
- 229940012952 Fibrinogen Drugs 0.000 description 1
- 229940019698 Fibrinogen containing hemostatics Drugs 0.000 description 1
- 102000005915 GABA Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010005551 GABA Receptors Proteins 0.000 description 1
- 208000009471 Gastroesophageal Reflux Diseases 0.000 description 1
- 206010017885 Gastrooesophageal reflux disease Diseases 0.000 description 1
- 102000018899 Glutamate Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010027915 Glutamate Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000014702 Haptoglobin Human genes 0.000 description 1
- 108050005077 Haptoglobin Proteins 0.000 description 1
- 206010019909 Hernia Diseases 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- 102100016020 IFNG Human genes 0.000 description 1
- 101700086956 IFNG Proteins 0.000 description 1
- 102100007002 IGHM Human genes 0.000 description 1
- 101700069760 IGHM Proteins 0.000 description 1
- 102100015891 IL12RB2 Human genes 0.000 description 1
- 101710035564 IL12RB2 Proteins 0.000 description 1
- 102100015890 IL13RA1 Human genes 0.000 description 1
- 101710034343 IL13RA1 Proteins 0.000 description 1
- 206010021425 Immune system disease Diseases 0.000 description 1
- 108090001122 Immunoglobulin A Proteins 0.000 description 1
- 108090001095 Immunoglobulin G Proteins 0.000 description 1
- 210000000936 Intestines Anatomy 0.000 description 1
- PGLTVOMIXTUURA-UHFFFAOYSA-N Iodoacetamide Chemical compound NC(=O)CI PGLTVOMIXTUURA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010022998 Irritability Diseases 0.000 description 1
- 102100012023 KMO Human genes 0.000 description 1
- 108060000515 KMO Proteins 0.000 description 1
- 206010024264 Lethargy Diseases 0.000 description 1
- 102100011076 MAP7D1 Human genes 0.000 description 1
- 101710009603 MAP7D1 Proteins 0.000 description 1
- 102000035165 MAPRE family Human genes 0.000 description 1
- 206010057840 Major depression Diseases 0.000 description 1
- 206010061532 Mitral valve disease Diseases 0.000 description 1
- 208000003067 Myocardial Ischemia Diseases 0.000 description 1
- 102100012209 NKG7 Human genes 0.000 description 1
- 101700083114 NKG7 Proteins 0.000 description 1
- 206010030216 Oesophagitis Diseases 0.000 description 1
- 102000012404 Orosomucoid Human genes 0.000 description 1
- 108010061952 Orosomucoid Proteins 0.000 description 1
- 210000000496 Pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 206010033645 Pancreatitis Diseases 0.000 description 1
- 208000008469 Peptic Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 102000013566 Plasminogen Human genes 0.000 description 1
- 108010051456 Plasminogen Proteins 0.000 description 1
- 231100000614 Poison Toxicity 0.000 description 1
- 108010071690 Prealbumin Proteins 0.000 description 1
- 102000007584 Prealbumin Human genes 0.000 description 1
- 102000029610 Protein S Human genes 0.000 description 1
- 108010066124 Protein S Proteins 0.000 description 1
- 206010037596 Pyelonephritis Diseases 0.000 description 1
- 102100016862 RGS1 Human genes 0.000 description 1
- 101700045428 RGS1 Proteins 0.000 description 1
- 101710005031 RMDN1 Proteins 0.000 description 1
- 208000004124 Rheumatic Heart Disease Diseases 0.000 description 1
- 229940072554 Risperidone 6 MG Drugs 0.000 description 1
- 101710009148 SERPINA1 Proteins 0.000 description 1
- 102100010113 SLC27A2 Human genes 0.000 description 1
- 108091006440 SLC27A2 Proteins 0.000 description 1
- 208000007888 Sinus Tachycardia Diseases 0.000 description 1
- 206010041349 Somnolence Diseases 0.000 description 1
- 238000003646 Spearman's rank correlation coefficient Methods 0.000 description 1
- BGRJTUBHPOOWDU-UHFFFAOYSA-N Sulpiride Chemical compound CCN1CCCC1CNC(=O)C1=CC(S(N)(=O)=O)=CC=C1OC BGRJTUBHPOOWDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010043269 Tension headache Diseases 0.000 description 1
- 208000008548 Tension-Type Headache Diseases 0.000 description 1
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 1
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 1
- 208000001072 Type 2 Diabetes Mellitus Diseases 0.000 description 1
- 108009000112 Type II diabetes mellitus Proteins 0.000 description 1
- 210000003462 Veins Anatomy 0.000 description 1
- 229940088594 Vitamin Drugs 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 229940050528 albumin Drugs 0.000 description 1
- 230000036626 alertness Effects 0.000 description 1
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000001475 anti-trypsic Effects 0.000 description 1
- 239000000164 antipsychotic agent Substances 0.000 description 1
- 239000002876 beta blocker Substances 0.000 description 1
- 238000003766 bioinformatics method Methods 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M buffer Substances [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000004027 cells Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 201000001352 cholecystitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000749 chronicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 230000001149 cognitive Effects 0.000 description 1
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 1
- 210000003618 cortical neuron Anatomy 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent Effects 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drugs Drugs 0.000 description 1
- 230000002996 emotional Effects 0.000 description 1
- 230000001667 episodic Effects 0.000 description 1
- 230000001815 facial Effects 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000002496 gastric Effects 0.000 description 1
- 201000006860 gastroesophageal reflux disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002068 genetic Effects 0.000 description 1
- 230000003400 hallucinatory Effects 0.000 description 1
- 230000003057 hepatoprotector Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000002318 immunoblotting Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 230000037356 lipid metabolism Effects 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000004630 mental health Effects 0.000 description 1
- 230000029115 microtubule polymerization Effects 0.000 description 1
- 230000000051 modifying Effects 0.000 description 1
- 238000002552 multiple reaction monitoring Methods 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 230000001703 neuroimmune Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 201000009859 osteochondrosis Diseases 0.000 description 1
- 230000035778 pathophysiological process Effects 0.000 description 1
- 230000002085 persistent Effects 0.000 description 1
- 238000003825 pressing Methods 0.000 description 1
- 239000004089 psychotropic agent Substances 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000000392 somatic Effects 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 230000036262 stenosis Effects 0.000 description 1
- 200000000009 stenosis Diseases 0.000 description 1
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 1
- 230000001960 triggered Effects 0.000 description 1
- 229960001322 trypsin Drugs 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 239000002753 trypsin inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 102000028599 vitamin D binding proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091022026 vitamin D binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229930003231 vitamins Natural products 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036642 wellbeing Effects 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 235000021119 whey protein Nutrition 0.000 description 1
Abstract
Description
Настоящее изобретение относится к медицине, конкретно к психиатрии и может быть использовано для более точной дифференциальной параклинической диагностики простой формы шизофрении, на основании определения концентрации белков DCLK1 и RIPK1 в сыворотке крови больных и здоровых лиц.The present invention relates to medicine, specifically to psychiatry, and can be used for more accurate differential paraclinical diagnosis of a simple form of schizophrenia, based on the determination of the concentration of DCLK1 and RIPK1 proteins in the blood serum of patients and healthy individuals.
Шизофрения является тяжелым мультифакториальным заболеванием, требующим больших медицинских ресурсов из-за раннего начала и высокой хронизации процесса [5], что приводит к стойкому нарушению социальной адаптации и трудоспособности больных в молодом возрасте [19]. Шизофрения проявляется разными клиническими фенотипами, гетерогенность которых препятствует пониманию ее патофизиологических процессов [1]. Наличие выраженной негативной симптоматики у больных простой шизофренией отражает более тяжелое течение простой формы шизофрении [18]. Основным препятствием в разработке высокоэффективных тактик лечения шизофрении является отсутствие в диагностических критериях современные данных о патогенезе заболевания.Schizophrenia is a severe multifactorial disease that requires large medical resources due to the early onset and high chronicity of the process [5], which leads to a persistent impairment of social adaptation and disability of patients at a young age [19]. Schizophrenia manifests itself in different clinical phenotypes, the heterogeneity of which hinders the understanding of its pathophysiological processes [1]. The presence of pronounced negative symptoms in patients with simple schizophrenia reflects a more severe course of a simple form of schizophrenia [18]. The main obstacle in the development of highly effective tactics for the treatment of schizophrenia is the lack of modern data on the pathogenesis of the disease in the diagnostic criteria.
Диагностические тесты на основе протеомных биомаркеров предполагается использовать для повышения точности диагностики, мониторинга прогрессирования заболевания, для определения вариантов лечения и ответа на терапию. Создание панели протеомных маркеров будет являться более точной и чувствительной диагностической системой, отвечающей таким требованиям, как воспроизводимость в клинических условиях, экономическая доступность и использование неинвазивных материалов, таких как плазма и сыворотка крови [4]. Учитывая неоднородность симптомов внутри нозологии, биомаркеры помогут стратифицировать пациентов на основе молекулярных подтипов, что позволит эффективней подбирать лекарственную терапию.Diagnostic tests based on proteomic biomarkers are expected to be used to improve the accuracy of diagnosis, monitor disease progression, determine treatment options, and respond to therapy. The creation of a panel of proteomic markers will be a more accurate and sensitive diagnostic system that meets such requirements as clinical reproducibility, economic availability, and the use of non-invasive materials such as blood plasma and serum [4]. Given the heterogeneity of symptoms within a nosology, biomarkers will help to stratify patients based on molecular subtypes, which will allow more efficient selection of drug therapy.
Первые попытки создать диагностическую панель для дифференциальной диагностики психических расстройств были предприняты в 2010 году. Группой исследователей под руководством E. Schwarz был разработан тест для диагностики шизофрении, основанный на количественной оценке белков сыворотки крови. Данный тест позволял количественно оценить 51 белок с чувствительностью и специфичностью 83% [13]. Высокая чувствительность и специфичность позволили авторам идентифицировать заболевание до проявления клинических симптомов и дифференцировать подтипы внутри одной нозологии на основе молекулярных профилей. Однако последующие этапы оптимизации тестовой панели для дифференцировки шизофрении от иных психических расстройств проведены не были. Причины, приведшие к остановке разработки, авторами не озвучены. Таким образом, диагностическая панель для дифференциальной диагностики шизофрении не была создана.The first attempts to create a diagnostic panel for the differential diagnosis of mental disorders were made in 2010. A group of researchers led by E. Schwarz developed a test for diagnosing schizophrenia based on the quantitative assessment of blood serum proteins. This test made it possible to quantify 51 proteins with a sensitivity and specificity of 83% [13]. High sensitivity and specificity allowed the authors to identify the disease before the onset of clinical symptoms and to differentiate subtypes within the same nosology based on molecular profiles. However, the subsequent stages of optimization of the test panel for differentiating schizophrenia from other mental disorders were not carried out. The reasons that led to the stop of development were not announced by the authors. Thus, a diagnostic panel for the differential diagnosis of schizophrenia has not been established.
В работе [12] описана попытка разработать панель диагностики развития психотических состояний у лиц с высоким риском психоза. Авторами описаны доказательства нарушения регуляции каскада комплемента и свертывающей системы при данных расстройствах. Некоторые белки комплемента оказались важными предикторами развития психоза, включая C4BPA, C1r, C6 и C8A. Данные белки функционально взаимодействуют с белками свертывающей системы крови - плазминогеном и витамин К-зависимым белком S. Основные причины этих изменений согласуются с данными об активации воспалительных процессов, предшествующих психозу и другим психическим расстройствам, что может быть связанно с генетической изменчивостью комплемента C4. Некоторые выявленные в исследовании белки, такие как альфа-2-макроглобулин (A2M), μu тяжелая цепь иммуноглобулина М (IGHM), и белок-переносчик фосфолипидов (PLTP) были выделены среди 10% наиболее информативных предикторов [12]. Однако эти результаты также невозможно рассматривать в качестве биомаркеров отдельных психических расстройств, т.к. эти нейроиммунные аномалии, сходные для многих заболеваний, могут проявляться при множестве фенотипических проявлений.The paper [12] describes an attempt to develop a panel for diagnosing the development of psychotic states in individuals at high risk of psychosis. The authors describe evidence of dysregulation of the complement cascade and coagulation system in these disorders. Several complement proteins have been shown to be important predictors of psychosis, including C4BPA, C1r, C6, and C8A. These proteins functionally interact with the proteins of the blood coagulation system - plasminogen and vitamin K-dependent protein S. The main reasons for these changes are consistent with the data on the activation of inflammatory processes that precede psychosis and other mental disorders, which may be associated with genetic variability of complement C4. Some proteins identified in the study, such as alpha-2-macroglobulin (A2M), μu immunoglobulin M heavy chain (IGHM), and phospholipid transfer protein (PLTP) were identified among the 10% most informative predictors [12]. However, these results also cannot be considered as biomarkers of individual mental disorders, because. these neuroimmune anomalies, which are similar for many diseases, can manifest themselves in a variety of phenotypic manifestations.
Кроме этого, расширенный патентный поиск выявил 6 патентов, по маркерам психических расстройств. В частности, Korth опубликовал патент под названием «Метод и биомаркеры для диагностики психических заболеваний in vitro» [8]. Это изобретение относится к способу диагностики наличия психического расстройства или предрасположенности к психическому расстройству на основании изменения уровня экспрессии мРНК ряда маркерных генов NKG7, RGS1, CCL4, IFNG, IL12RB2, IL13RA1, KMO, FPR2, SLC27A2 и C3. К недостаткам этого способа относится то, что экспрессия мРНК не может быть постоянным и точным диагностическим маркером, так как зависит от множества факторов. Кроме того, основная доказательная база данного патента построена на животных моделях, что не может иметь прямой интерпретации на человека.In addition, an advanced patent search revealed 6 patents for markers of mental disorders. In particular, Korth published a patent titled "Method and biomarkers for the diagnosis of mental illness in vitro" [8]. This invention relates to a method for diagnosing the presence of a mental disorder or predisposition to a mental disorder based on changes in the expression level of mRNA of a number of marker genes NKG7, RGS1, CCL4, IFNG, IL12RB2, IL13RA1, KMO, FPR2, SLC27A2 and C3. The disadvantages of this method include the fact that mRNA expression cannot be a constant and accurate diagnostic marker, as it depends on many factors. In addition, the main evidence base of this patent is based on animal models, which cannot be directly interpreted in humans.
Известен еще один патент, описывающий применение биомаркера для диагностики психических заболеваний: «Применение GSK-3beta в качестве раннего диагностического реагента психических расстройств по крови» (Application of GSK-3beta as a blood marker in preparation of mental disorder early-diagnosis reagent) [3] В данном изобретении раскрыто применение GSK-3beta в качестве маркера для расстройств аутистического спектра (РАС). GSK-3beta можно использовать в качестве реагента для ранней диагностики РАС по крови, а время выявления его у новорожденных составляет 0-3 месяца. Неинвазивная вспомогательная диагностика РАС может быть проведена с использованием небольшого количества крови, таким образом упрощается крупномасштабный скрининг РАС у младенцев, а также облегчается раннее обнаружение, раннее вмешательство и раннее лечение РАС. Основным недостатком этого метода является то, что эта модель основана на полуколичественном анализе выполняемым с помощью очень трудоемкого и редко используемого в клинической практике метода вестерн-блоттинга. И РАС далеко не всегда во взрослом возрасте перерастают в шизофрению.Another patent is known that describes the use of a biomarker for the diagnosis of mental illness: "Application of GSK-3beta as a blood marker in preparation for mental disorder early-diagnosis reagent" [3 ] This invention discloses the use of GSK-3beta as a marker for autism spectrum disorders (ASD). GSK-3beta can be used as a reagent for the early diagnosis of ASD by blood, and the time to detect it in newborns is 0-3 months. Non-invasive assistive diagnosis of ASD can be performed using a small amount of blood, thus facilitating large-scale screening for ASD in infants and facilitating early detection, early intervention, and early treatment of ASD. The main disadvantage of this method is that this model is based on a semi-quantitative analysis performed using a very laborious and rarely used in clinical practice Western blot method. And ASD does not always develop into schizophrenia in adulthood.
Кроме того, известно еще 4 патента, относящихся к маркерам психических расстройств. Применение белка, связывающего витамин d, в качестве маркера в диагностике депрессии при психических заболеваниях (Application of vitamin D binding protein as marker in diagnosis of mental disease depression) [16]. Белковый маркер сыворотки для диагностики депрессии и его применение (Serum protein marker for diagnosing depression and application thereof) [14]. Мутации 5 'области гена 5-ht1a человека, ассоциированные белки 5' области и диагностический тест для большой депрессии и связанных с ней психических заболеваний (Mutations of the 5' region of the human 5-ht1a gene, associated proteins of the 5' region and a diagnostic test for major depression and related mental illnesses) [2] Маркер депрессии и соответствующий способ диагностики (Depression diagnosis marker and preparation method thereof) [15]. Но все эти патенты описывают маркеры депрессии, а не шизофрении.In addition, 4 more patents related to markers of mental disorders are known. Application of vitamin D binding protein as marker in diagnosis of mental disease depression [16]. Serum protein marker for diagnosing depression and its application [14]. Mutations of the 5' region of the human 5-ht1a gene, associated proteins of the 5' region and a diagnostic test for major depression and related mental illnesses) [2] Depression diagnosis marker and preparation method thereof [15]. But all of these patents describe markers of depression, not schizophrenia.
Представленные в практически во всех приведенных выше исследованиях белки в основном являются высокоэкспрессируемыми в сыворотке крови, задействованы в очень многих биологических процессах в организме и потому не могут претендовать на роль специфических биомаркеров. Следовательно, в дальнейшей перспективе исследования должны быть сосредоточены на минорных белках с низким содержанием в сыворотке крови, в частности нейроспецифичные белки, обладают большим диагностическим потенциалом для психических расстройств. Несмотря на явную необходимость изучения минорных белков, таких исследований не выявлено.The proteins presented in almost all of the above studies are mainly highly expressed in blood serum, are involved in many biological processes in the body, and therefore cannot claim the role of specific biomarkers. Therefore, in the longer term, research should focus on minor proteins with low levels in serum, in particular neurospecific proteins, which have great diagnostic potential for psychiatric disorders. Despite the clear need to study minor proteins, such studies have not been identified.
Современные методы количественной протеомики представленные безметочными масс-спектрометрическими подходами, использующими зависимость между содержанием измеряемого пептида и уровнем масс-спектрометрического сигнала, являются одним из лучших решений в поиске протеомных биомаркеров, в том числе и для минорных белков. Использование метода - мониторинг множественных или выбранных реакций SRM/MRM (Single/Multiple Reaction Monitoring) [10] для обнаружения пептидов в сложных биологических смесях, таких как плазма и сыворотка человека является самым точным из существующих методов детекции аналитов в биологических жидкостях. Преимущество этого подхода в том, что нет ограничений в отношении количества выборок и это обеспечивает большую статистическую мощность. Основным преимуществом количественной масс-спектрометрии является чувствительность данного метода к малым концентрациям аналитов, что позволяет анализировать в том числе и нейроспецифичные белки, не определяющиеся в плазме крови здоровых лиц. Создание платформ, использующих меньшее количество аналитов, но большее количество клинических образцов, обеспечит точную статистическую интерпретацию и позволит быстро валидировать полученные результаты.Modern methods of quantitative proteomics, represented by label-free mass spectrometric approaches that use the relationship between the content of the measured peptide and the level of the mass spectrometric signal, are one of the best solutions in the search for proteomic biomarkers, including those for minor proteins. The use of the SRM/MRM (Single/Multiple Reaction Monitoring) method [10] for the detection of peptides in complex biological mixtures, such as human plasma and serum, is the most accurate of the existing methods for detecting analytes in biological fluids. The advantage of this approach is that there are no restrictions on the number of samples and this provides more statistical power. The main advantage of quantitative mass spectrometry is the sensitivity of this method to low concentrations of analytes, which makes it possible to analyze, among other things, neurospecific proteins that are not detected in the blood plasma of healthy individuals. Creating platforms that use fewer analytes but more clinical samples will provide accurate statistical interpretation and allow for rapid validation of results.
Для постановки диагноза простой формы шизофрении используют анамнестические и клинико-психометрические шкалы, основанные на клинических оценках преобладания тех или иных симптомов. До сих пор не существует параклинических методов диагностики шизофрении, так как до настоящего времени не выявлено специфичных биологических маркеров этого заболевания.To make a diagnosis of a simple form of schizophrenia, anamnestic and clinical psychometric scales are used, based on clinical assessments of the prevalence of certain symptoms. Until now, there are no paraclinical methods for diagnosing schizophrenia, since no specific biological markers of this disease have been identified so far.
Задачей предлагаемого изобретения является выявление биомаркеров, которые могут быть использованы для дифференциальной диагностики простой формы шизофрении.The objective of the invention is to identify biomarkers that can be used for the differential diagnosis of a simple form of schizophrenia.
Настоящее изобретение основано на открытии новых протеомных маркеров простой шизофрении, DCLK1 и RIPK1, которые могут служить в качестве дополнительных параклинических критериев дифференциальной диагностики простой и параноидной шизофрении.The present invention is based on the discovery of new proteomic markers of simple schizophrenia, DCLK1 and RIPK1, which can serve as additional paraclinical criteria for the differential diagnosis of simple and paranoid schizophrenia.
Поставленную задачу решают путем определения концентрации белков DCLK1 и RIPK1 в сыворотке крови с помощью метода количественной масс-спектрометрии и проведения оценки уровня различий в концентрациях белков в исследуемых группах с помощью статистического анализа.The problem is solved by determining the concentration of DCLK1 and RIPK1 proteins in blood serum using the method of quantitative mass spectrometry and assessing the level of differences in protein concentrations in the study groups using statistical analysis.
В результате проведенного комплекса исследований выявлены белки, которые могут являться биомаркерами простой формы шизофрении - белки серин/треонин-протеинкиназа (DCLK1) и рецепторная серин/треонин-протеинкиназа 1 (RIPK1). Эти белки впервые выявлены в высоких концентрациях в сыворотке крови больных простой шизофренией.As a result of the complex of studies, proteins were identified that can be biomarkers of a simple form of schizophrenia - proteins serine/threonine protein kinase (DCLK1) and receptor serine/threonine protein kinase 1 (RIPK1). These proteins were detected for the first time in high concentrations in the blood serum of patients with simple schizophrenia.
В настоящем изобретении описаны результаты выявленных значимых различий уровней DCLK1 и RIPK1 у больных простой и параноидной шизофренией, а именно: значительное увеличение содержания DCLK1 и RIPK1 в сыворотке крови больных простой шизофренией (DCLK1 22,3 [7,2;57,0] нг/мл, RIPK1 51,5 [29,2;75,6] нг/мл) в сравнении с больными параноидной шизофренией (DCLK1 9,9 [2,8;15,5] нг/мл, RIPK1 28,0 [1,5;54,3] нг/мл). Сравнение общей группы больных шизофренией со здоровыми лицами также показало статистически значимые различия, что дает основание предложить белки DCLK1 и RIPK1 в качестве биомаркеров простой шизофрении.The present invention describes the results of the revealed significant differences in the levels of DCLK1 and RIPK1 in patients with simple and paranoid schizophrenia, namely: a significant increase in the content of DCLK1 and RIPK1 in the blood serum of patients with simple schizophrenia (DCLK1 22.3 [7.2; 57.0] ng/ ml, RIPK1 51.5 [29.2;75.6] ng/ml) compared with patients with paranoid schizophrenia (DCLK1 9.9 [2.8;15.5] ng/ml, RIPK1 28.0 [1, 5;54.3] ng/ml). Comparison of the general group of patients with schizophrenia with healthy individuals also showed statistically significant differences, which gives grounds to propose DCLK1 and RIPK1 proteins as biomarkers of simple schizophrenia.
Оба белка участвуют в модулировании нейротрансмиссии. Так белок DCLK1 связан с белками, регулирующими нейротрансмиссию через глутаматные и ГАМК рецепторы, а белок RIPK1 участвует в процессах апоптоза и некроптоза в нейронах головного мозга, запускающихся воспалением. Так по данным литературы DCLK1 был выявлен в качестве регулятора полимеризации микротрубочек в нейронах [0], что является одним из ключевых механизмов в обеспечении нейропластичности. Кроме того варианты гена, кодирующего DCLK1 связывают с психическими расстройствами [0]. Другой белок RIPK1 принимает ключевое участие в регуляции TNF-опосредованного апоптоза, некроптоза клеток в процессе иммунного ответа и воспалении [0]. В литературе имеются многочисленные доказательства, что иммунологические нарушения у больных шизофренией могут играть значимую роль в этиологии и патогенезе этого заболевания [17].Both proteins are involved in modulating neurotransmission. Thus, the DCLK1 protein is associated with proteins that regulate neurotransmission through glutamate and GABA receptors, and the RIPK1 protein is involved in the processes of apoptosis and necroptosis in brain neurons triggered by inflammation. Thus, according to the literature, DCLK1 was identified as a regulator of microtubule polymerization in neurons [0], which is one of the key mechanisms in neuroplasticity. In addition, variants of the gene encoding DCLK1 are associated with mental disorders [0]. Another protein, RIPK1, plays a key role in the regulation of TNF-mediated apoptosis, cell necroptosis during the immune response, and inflammation [0]. There is ample evidence in the literature that immunological disorders in patients with schizophrenia can play a significant role in the etiology and pathogenesis of this disease [17].
Таким образом, сущностью данного изобретения являются белковые биомаркеры, предлагаемые в качестве дополнительных критериев (достоверные различия по уровню DCLK1 и RIPK у больных простой шизофренией по сравнению с больными параноидной шизофренией) дифференциальной диагностики простой и параноидной шизофрении. При повышении содержания белков DCLK1 до 22,3 нг/мл и RIPK1 до 51,5 нг/мл в сыворотке крови, диагностируется простая шизофрения. Таким образом, эти белки, характеризуются тем, что могут служить в качестве дополнительных параклинических критериев при проведении дифференциальной диагностики простой и параноидной шизофрении.Thus, the essence of this invention are protein biomarkers proposed as additional criteria (significant differences in the level of DCLK1 and RIPK in patients with simple schizophrenia compared with patients with paranoid schizophrenia) for the differential diagnosis of simple and paranoid schizophrenia. With an increase in the content of DCLK1 proteins up to 22.3 ng / ml and RIPK1 up to 51.5 ng / ml in the blood serum, simple schizophrenia is diagnosed. Thus, these proteins are characterized by the fact that they can serve as additional paraclinical criteria in the differential diagnosis of simple and paranoid schizophrenia.
Уровни DCLK1 и RIPK могут быть определенны с помощью таких методов, как иммуноферментный анализ (ИФА), иммуноблоттинг, хроматография, спектроскопия, масс-спектрометрия и других аналитических методов.DCLK1 and RIPK levels can be determined using methods such as enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), immunoblotting, chromatography, spectroscopy, mass spectrometry, and other analytical methods.
Предлагаемое изобретение осуществляют следующим образом.The present invention is carried out as follows.
Условия проведения исследования, определяющие значимость его результатовResearch conditions that determine the significance of its results
В качестве основного материала биохимических исследований использовалась сыворотка крови больных простой и параноидной шизофренией и здоровых лиц. Клиническая верификация диагнозов выполнена квалифицированными врачами клиник Научно-исследовательского института психического здоровья Федерального государственного бюджетного научного учреждения «Томский национальный исследовательский медицинский центр Российской академии наук» согласно клиническим критериям, утвержденным Международной классификации болезней 10-го пересмотра (МКБ-10). Забор крови осуществляли из локтевой вены утром натощак с использованием пробирок типа Vacuette с активатором образования сгустка согласно стандартной процедуре и до назначения лекарственной терапии. Для отделения сыворотки, от форменных элементов кровь центрифугировали при 1500 об/мин и охлаждении до +4°С в течении 30 мин.The blood serum of patients with simple and paranoid schizophrenia and healthy individuals was used as the main material for biochemical studies. Clinical verification of diagnoses was performed by qualified clinicians of the Research Institute of Mental Health of the Federal State Budgetary Scientific Institution "Tomsk National Research Medical Center of the Russian Academy of Sciences" according to the clinical criteria approved by the International Classification of Diseases 10th Revision (ICD-10). Blood sampling was carried out from the cubital vein in the morning on an empty stomach using Vacuette tubes with a clot activator according to the standard procedure and before the appointment of drug therapy. To separate the serum from the formed elements, the blood was centrifuged at 1500 rpm and cooled to +4°C for 30 min.
В исследование были включены 35 больных шизофренией (18 женщин, 17 мужчин) в возрасте 30,0 [23,0;49,0] лет, поделенных на две подгруппы пациенты с простой (F20.6) и параноидной (F20.0) шизофренией. Согласно анамнестическим данным у отобранных пациентов наблюдался перерыв в приеме антипсихотической терапии от 2-3 месяцев до года. На момент обследования длительность заболевания обследуемых пациентов с простой шизофренией составила 12,5 [6,5;17] лет и возрастом дебюта шизофрении 21,3±6,5 лет. В группе пациентов с параноидной шизофренией длительность заболевания составила 5,0 [3,5;7,0] лет и средним возраст дебюта заболевания 29,6±9 лет. Контрольную группу составили 13 здоровых лиц (6 женщин, 7 мужчин) в возрасте 37 [26;49] лет.The study included 35 patients with schizophrenia (18 women, 17 men) aged 30.0 [23.0; 49.0] years, divided into two subgroups - patients with simple (F20.6) and paranoid (F20.0) schizophrenia . According to the anamnestic data, the selected patients had a break in taking antipsychotic therapy from 2-3 months to a year. At the time of the examination, the duration of the disease in the examined patients with simple schizophrenia was 12.5 [6.5; 17] years and the age of onset of schizophrenia was 21.3 ± 6.5 years. In the group of patients with paranoid schizophrenia, the duration of the disease was 5.0 [3.5; 7.0] years and the average age of the onset of the disease was 29.6±9 years. The control group consisted of 13 healthy individuals (6 women, 7 men) aged 37 [26;49] years.
Методология исследования:Research methodology:
Для проведения протеомного количественного масс-спектрометрического исследования применялись следующие методы: The following methods were used to conduct proteomic quantitative mass spectrometric studies:
1. иммуноаффинная жидкостная хроматография,1. immunoaffinity liquid chromatography,
2. ферментативный гидролиз белков на ультрафильтрах,2. enzymatic hydrolysis of proteins on ultrafilters,
3. Количественный масс-спектрометрический анализ с использованием синтетических пептидных стандартов,3. Quantitative mass spectrometric analysis using synthetic peptide standards,
4. Статистическая обработка и анализ полученных результатов.4. Statistical processing and analysis of the obtained results.
Сыворотка крови на первом этапе подвергалась иммуноаффинной хроматографии. Сыворотку 3-кратно разводили натрий-фосфатный буфером и центрифугировали при 16 000 об/мин в течение 1 минуты при 4°С, и фильтровали через стандартный фильтр Filtropur S (Sarstedt, Germany) диаметром 22 микрона. После этого образцы очищали на хроматографической колонке Multiple Affinity Removal Column Human-14 4.6 x 100 mm (Agilent, USA) от мажорных белков (альбумин, IgG, антитрипсин, IgA, трансферрин, гаптоглобин, фибриноген, альфа-2-макроглобулин, кислый альфа-1-гликопротеин, IgM, аполипопротеин AI, аполипопротеин AII, комплемент C3 и транстиретин) [13;4]. Далее очищенную смесь белков подвергали ферментативному гидролизу на концентрирующих фильтрах Amicon Ultra-0.5 mL (Merk Millipore, France) на 30 кДа, в объеме 100 мкл и содержанием около 1,5 мг белка в образце. Белки в образцах подвергались алкилированию 50 мМ йодацетамидом в течение 1 часа при 25°С а затем для гидролиза сывороточных белков применяли фермент Трипсин Sequencing Grade Modified Trypsin (Promega, USA) в соотношении общая масса фермента/общая масса белка =1/100 в течение 12 часов при температуре 37°C. Для получения раствора пептидов фильтры промывали 30% раствором муравьиной кислоты c помощью центрифугирования при 9000 об/мин в течение 15 минут и температуре 20°C. Затем пробы высушивали на роторном испарителе.The blood serum at the first stage was subjected to immunoaffinity chromatography. Serum was diluted 3-fold with sodium phosphate buffer and centrifuged at 16,000 rpm for 1 minute at 4°C, and filtered through a standard Filtropur S filter (Sarstedt, Germany) with a diameter of 22 microns. After that, the samples were purified on a Multiple Affinity Removal Column Human-14 4.6 x 100 mm (Agilent, USA) from major proteins (albumin, IgG, antitrypsin, IgA, transferrin, haptoglobin, fibrinogen, alpha-2-macroglobulin, acid alpha- 1-glycoprotein, IgM, apolipoprotein AI, apolipoprotein AII, complement C3 and transthyretin) [13;4]. Further, the purified mixture of proteins was subjected to enzymatic hydrolysis on Amicon Ultra-0.5 mL concentrating filters (Merk Millipore, France) at 30 kDa, in a volume of 100 μl and containing about 1.5 mg of protein in the sample. The proteins in the samples were subjected to alkylation with 50 mM iodoacetamide for 1 hour at 25°C and then the enzyme Trypsin Sequencing Grade Modified Trypsin (Promega, USA) was used to hydrolyze whey proteins at a ratio of total enzyme mass/total protein mass = 1/100 for 12 hours at 37°C. To obtain a solution of peptides, the filters were washed with a 30% formic acid solution by centrifugation at 9000 rpm for 15 minutes and a temperature of 20°C. The samples were then dried on a rotary evaporator.
На следующем этапе проводился количественный масс-спектрометрический анализ для определения абсолютной концентрации белков серин/треонин-протеинкиназы DCLK1 (Serine/threonine-protein kinase DCLK1, DCLK1) и рецепторной серин/треонин-протеинкиназы 1 (Receptor-interacting serine/threonine-protein kinase 1, RIPK1 в группах простой и параноидной шизофрении методом мониторинга селективных реакций (Selected Reaction Monitoring, SRM) с использованием синтетических пептидных стандартов с включением стабильных изотопов углерода 13C и азота 15N. Образцы анализировали на нано-потоковой хроматографической системе Dionex UltiMate 3000 RSLCnano System с аналитической колонкой Zorbax 300SB-C18, при скорости потока 0,4 мкл/мин Целевой масс-спектрометрический анализ выполняли на тройном квадрупольном масс-спектрометре TSQ Vantage (Thermo Fisher Scientific, USA). ESI ионизацию образца проводили при напряжении 2,0 кВ. Сканирование осуществляли с окном изоляции 1,2 m/z и 0,8 m/z для первого и третьего квадруполя, соответственно, диапазон окна толерантности родительского иона составил 0,5 m/z, время цикла составило 1,2 сек. Результаты сравнения хроматографических профилей эндогенного пептида и синтетического стандарта были проверены в автоматическом режиме при помощи Skyline MacCoss Lab Software (версия 4.1.0) для. Для определения количества белка соотношение, рассчитанное в Skyline, перемножали на известное содержание каждого стандарта, а затем данные обрабатывались в автоматическом режиме в программном обеспечении QuanBrowser Thermo Xcalibur 2.2 SP1.48.At the next stage, a quantitative mass spectrometric analysis was carried out to determine the absolute concentration of proteins serine/threonine-protein kinase DCLK1 (Serine/threonine-protein kinase DCLK1, DCLK1) and receptor-interacting serine/threonine-protein kinase 1 (Receptor-interacting serine/threonine-protein kinase 1 , RIPK1 in the groups of simple and paranoid schizophrenia by Selected Reaction Monitoring (SRM) using synthetic peptide standards with the inclusion of stable isotopes of carbon 13C and nitrogen 15N. Samples were analyzed on a Dionex UltiMate 3000 RSLCnano System with an analytical column Zorbax 300SB-C18, at a flow rate of 0.4 µl/min isolation window 1.2 m/z and 0.8 m/z for the first and third quad rupole, respectively, the range of the tolerance window of the parent ion was 0.5 m/z, the cycle time was 1.2 sec. The results of comparing the chromatographic profiles of the endogenous peptide and the synthetic standard were checked automatically using the Skyline MacCoss Lab Software (version 4.1.0) for. To determine the amount of protein, the ratio calculated in Skyline was multiplied by the known content of each standard, and then the data was processed automatically in the QuanBrowser Thermo Xcalibur 2.2 SP1.48 software.
Статистическая обработка результатов и выявление значимых различий между несколькими независимыми группами, характеризующимися количественными признаками и не подчиняющихся нормальному закону распределения (данные были проверены на нормальность при помощи критериев Колмогорова-Смирнова и Шапиро-Уилка), оценивалась с использованием непараметрического рангового критерия Краскела-Уоллиса, для двух независимых групп - с помощью непараметрического критерия Манна-Уитни. Корреляционный анализ проводился с расчетом коэффициента ранговой корреляции по Спирмену.Statistical processing of the results and identification of significant differences between several independent groups, characterized by quantitative characteristics and not subject to the normal distribution law (the data were tested for normality using the Kolmogorov-Smirnov and Shapiro-Wilk tests), was assessed using the non-parametric Kruskal-Wallis rank test, for two independent groups - using the non-parametric Mann-Whitney test. Correlation analysis was carried out with the calculation of the Spearman rank correlation coefficient.
Первым этапом выполнением этой задачи было проведение качественной масс-спектрометрии сыворотки крови и сравнительного анализа белковых спектров сыворотки крови больных простой и параноидной формой шизофрении и здоровых лиц. Работа включала в себя иммуноаффинную хроматографию сыворотки крови, гель-электрофорез по методу Лэммли [9] и масс-спектрометрический анализ и идентификацию белков в помощью международных баз данных. В результате были выявлены статистически значимые отличия белкового профиля исследуемых групп. Далее было проведено сравнение протеомов больных простой и параноидной шизофренией при условии исключения из массива данных белков, обнаруженных в контрольной группе с помощью статистических методов. Анализ показал высокий процент различий между протеомами больных простой и параноидной формами шизофрении. Далее, для выявления белков, которые могут использоваться в качестве маркерных белков, были использованы с методы биоинформатики и программа PANTHER ™ GO slim, а также базы данных REACTOME. Также для каждого белка проводился анализ ассоциации гена с шизофренией по базе данных DISGENET.The first step in this task was to carry out qualitative mass spectrometry of blood serum and a comparative analysis of protein spectra of blood serum of patients with simple and paranoid schizophrenia and healthy individuals. The work included immunoaffinity chromatography of blood serum, gel electrophoresis according to the Laemmli method [9], and mass spectrometric analysis and identification of proteins using international databases. As a result, statistically significant differences in the protein profile of the studied groups were revealed. Next, the proteomes of patients with simple and paranoid schizophrenia were compared, provided that proteins detected in the control group using statistical methods were excluded from the data array. The analysis showed a high percentage of differences between the proteomes of patients with simple and paranoid forms of schizophrenia. Further, to identify proteins that can be used as marker proteins, bioinformatics methods and the PANTHER ™ GO slim program, as well as the REACTOME database, were used. Also, for each protein, the association of the gene with schizophrenia was analyzed using the DISGENET database.
По результатам такого анализа для валидации белков в качестве биомаркеров шизофрении были выбраны 2 белка: серин/треонин-протеинкиназа DCLK1 (Serine/threonine-protein kinase DCLK1, DCLK1) и рецепторная серин/треонин-протеинкиназа 1 (Receptor-interacting serine/threonine-protein kinase 1, RIPK1).Based on the results of this analysis, 2 proteins were selected as biomarkers of schizophrenia for protein validation: serine/threonine-protein kinase DCLK1 (Serine/threonine-protein kinase DCLK1, DCLK1) and receptor-interacting serine/threonine-protein kinase 1 (Receptor-interacting serine/threonine-protein kinase 1, RIPK1).
Измерение содержания белка DCLK1 в сыворотке крови исследуемых группMeasurement of the DCLK1 protein content in the blood serum of the studied groups
Изобретение будет понятно из следующего описания и приложенных к нему таблиц.The invention will be clear from the following description and tables attached thereto.
Авторы патента с помощью количественной масс-спектрометрии выявили трехкратное увеличение концентрации DCLK1 у больных шизофренией по сравнению со здоровыми лицами. При разделении больных шизофренией на подгруппы пациентов с простой и параноидной шизофренией было выявлено, что медиана в группе больных простой шизофренией значительно превышает показатели остальных групп. Корреляционный анализ исключил влияние половых и возрастных факторов, на концентрацию DCLK1 в группах больных параноидной и простой шизофренией.The authors of the patent using quantitative mass spectrometry revealed a three-fold increase in the concentration of DCLK1 in patients with schizophrenia compared with healthy individuals. When dividing patients with schizophrenia into subgroups of patients with simple and paranoid schizophrenia, it was found that the median in the group of patients with simple schizophrenia significantly exceeds the indicators of other groups. Correlation analysis excluded the influence of gender and age factors on the concentration of DCLK1 in groups of patients with paranoid and simple schizophrenia.
Таблица 1 Концентрация DCLK1 в сыворотке крови в группах параноидной, простой шизофрении и здоровых лицTable 1 Serum DCLK1 concentration in groups of paranoid, simple schizophrenia and healthy individuals
Эти результаты также подтверждены с помощью парных сравнений исследуемых групп. Сравнение уровней DCLK1 с помощью U-критерия Манна-Уитни в сыворотке крови здоровых лиц и пациентов с параноидной шизофренией не выявило достоверных различий (p=0,2), однако значимы различия были выявлены между группами больных простой шизофренией и здоровыми лицами (р=0,01) а также между больными простой и параноидной шизофрении (р=0,037). На основании этого авторы патента делают вывод, что основной вклад в достоверность различий концентраций DCLK1 вносят показатели именно пациентов с простой шизофренией.These results are also confirmed by pairwise comparisons of study groups. Comparison of DCLK1 levels using the Mann-Whitney U-test in the blood serum of healthy individuals and patients with paranoid schizophrenia did not reveal significant differences (p=0.2), however, significant differences were found between groups of patients with simple schizophrenia and healthy individuals (p=0 .01) as well as between patients with simple and paranoid schizophrenia (p=0.037). Based on this, the authors of the patent conclude that the main contribution to the reliability of differences in DCLK1 concentrations is made by the indicators of patients with simple schizophrenia.
Кроме того, выявленное значительное повышение концентрации DCLK1 в сыворотке крови пациентов с негативной симптоматикой в общей группе больных шизофренией (p=0,0017). В группе параноидной шизофрении достоверных отличий в концентрациях между позитивной и негативной симптоматикой выявлено не было. На основании этих данных можно сделать вывод, что основной вклад в достоверность различий концентраций DCLK1 вносят показатели именно пациентов с простой шизофренией. Это также подтверждается результатами парных сравнений исследуемых групп.In addition, a significant increase in the concentration of DCLK1 in the blood serum of patients with negative symptoms in the general group of patients with schizophrenia was found (p=0.0017). In the group of paranoid schizophrenia, there were no significant differences in concentrations between positive and negative symptoms. Based on these data, it can be concluded that the main contribution to the reliability of differences in DCLK1 concentrations is made by the parameters of patients with simple schizophrenia. This is also confirmed by the results of pairwise comparisons of the studied groups.
На основании полученных результатов можно сделать вывод, что DCLK1 является значимым патогенетическим фактором простой шизофрении. Кроме того, белок DCLK1 ранее уже был ранее связан с патогенезом шизофрении. Предполагается, что регуляция экспрессии гена Dclk1 может происходить под действием психотропных препаратов. Таким образом, полученные результаты позволяют использовать концентрации белка DCLK1 в качестве дополнительного параклинического критерия и обозначить DCLK1 как биомаркер простой формы шизофрении.Based on the obtained results, it can be concluded that DCLK1 is a significant pathogenetic factor in simple schizophrenia. In addition, the DCLK1 protein has previously been associated with the pathogenesis of schizophrenia. It is assumed that the regulation of Dclk1 gene expression can occur under the influence of psychotropic drugs. Thus, the obtained results make it possible to use DCLK1 protein concentrations as an additional paraclinical criterion and designate DCLK1 as a biomarker of a simple form of schizophrenia.
Измерение содержания белка RIPK1 в сыворотке крови исследуемых группMeasurement of the RIPK1 protein content in the blood serum of the studied groups
В результате количественного масс спектрометрического анализа авторы патента выявили, что концентрации RIPK1 в группе больных шизофренией (0,2-89 нг/мл) значительно превышают таковые в группе контроля (0,2-34 нг/мл) (U-критерий Манна-Уитни p=0,009). В дальнейшем был проведен сравнительный анализ концентраций белка RIPK1 в подгруппах больных простой и параноидной шизофренией. С помощью критерия Краскела-Уоллиса выявлены значительные отличия между всеми исследуемыми группами. Результаты концентраций представлены в Таблице 2. DCLK1 в исследуемых подгруппах больных в сравнении со здоровыми лицами. При этом медиана концентрации RIPK1 больных простой шизофренией двукратно превышает аналогичный показатель в группе больных параноидной шизофренией.As a result of quantitative mass spectrometric analysis, the authors of the patent found that the concentrations of RIPK1 in the group of patients with schizophrenia (0.2-89 ng/ml) significantly exceed those in the control group (0.2-34 ng/ml) (Mann-Whitney U-test p=0.009). Subsequently, a comparative analysis of RIPK1 protein concentrations in subgroups of patients with simple and paranoid schizophrenia was carried out. Using the Kruskal-Wallis test, significant differences were revealed between all the studied groups. The results of the concentrations are presented in Table 2. DCLK1 in the studied subgroups of patients in comparison with healthy individuals. At the same time, the median concentration of RIPK1 in patients with simple schizophrenia is two times higher than that in the group of patients with paranoid schizophrenia.
Таблица 2. Концентрация RIPK1 в сыворотке крови в группах параноидной, простой шизофрении и здоровых лицTable 2. Serum RIPK1 concentration in groups of paranoid, simple schizophrenia and healthy individuals
Групповое сравнение уровней RIPK1 в сыворотке крови здоровых лиц и пациентов в подгруппах больных простой и параноидной шизофренией подтверждает описанный выше результат. Так попарное сравнение с применением U-критерия Манна-Уитни выявило значимые различия между группами больных простой шизофренией и здоровых лиц (р=0,002), а также между больными простой и параноидной шизофрении (р=0,04), и не выявило достоверных различий между больными параноидной шизофрении и здоровыми лицами (p=0,057).A group comparison of the levels of RIPK1 in the blood serum of healthy individuals and patients in subgroups of patients with simple and paranoid schizophrenia confirms the result described above. Thus, pairwise comparison using the Mann-Whitney U-test revealed significant differences between groups of patients with simple schizophrenia and healthy individuals (p=0.002), as well as between patients with simple and paranoid schizophrenia (p=0.04), and did not reveal significant differences between patients with paranoid schizophrenia and healthy individuals (p=0.057).
При анализе различий в концентрациях RIPK1 при помощи U-критерия Манна-Уитни в сыворотке крови пациентов с негативной и позитивной симптоматикой (p=0,02) выявлены достоверные различия в концентрациях RIPK1. Значения медиан для негативной симптоматики составили 48,7 [24,7;61,5] нг/мл и для позитивной симптоматики 4,9 [0,3;36,5] нг/мл. Этот факт также указывает связь концентраций RIPK1 с патогенетическими механизмами простой формы шизофрении. Корреляционный анализ также исключил влияние половых и возрастных факторов, и длительности заболевания на концентрацию RIPK1 в группах больных параноидной и простой шизофренией.The analysis of differences in RIPK1 concentrations using the Mann-Whitney U test in the blood serum of patients with negative and positive symptoms (p=0.02) revealed significant differences in RIPK1 concentrations. Median values for negative symptoms were 48.7 [24.7;61.5] ng/mL and for positive symptoms 4.9 [0.3;36.5] ng/mL. This fact also indicates the relationship of RIPK1 concentrations with the pathogenetic mechanisms of a simple form of schizophrenia. Correlation analysis also ruled out the influence of gender and age factors, and the duration of the disease on the concentration of RIPK1 in the groups of patients with paranoid and simple schizophrenia.
Таким образом, было обнаружено, что концентрации белка RIPK1 в сыворотке крови пациентов с простой шизофренией в два раза выше, чем у пациентов с параноидной шизофренией и значительно выше, чем у здоровых лиц. Таким образом, это доказывает возможность использования белка RIPK1 в качестве белкового маркера простой шизофрении.Thus, it was found that the concentration of RIPK1 protein in the blood serum of patients with simple schizophrenia is two times higher than in patients with paranoid schizophrenia and significantly higher than in healthy individuals. Thus, this proves the possibility of using the RIPK1 protein as a protein marker for simple schizophrenia.
Использование в качестве биомаркеров простой шизофрении, представленных в данном патенте белков, обусловлено их функциональными свойствами и участием в патогенезе данного заболевания. Выявленное увеличение их абсолютной концентрации в сыворотке крови больных простой шизофренией позволяет использовать данные белки в качестве биомаркеров данного заболевания.The use of proteins presented in this patent as biomarkers of simple schizophrenia is due to their functional properties and participation in the pathogenesis of this disease. The revealed increase in their absolute concentration in the blood serum of patients with simple schizophrenia makes it possible to use these proteins as biomarkers of this disease.
Клинический пример №1. Пациент Н., 36 лет, не работает, инвалид 2 группы. Неоднократно лечился в психиатрических стационарах с 2003 года. Clinical example No. 1. Patient N., 36 years old, does not work, disabled of the 2nd group. Repeatedly treated in psychiatric hospitals since 2003.
Диагноз: Шизофрения простая. F20.6Diagnosis: Schizophrenia simple. F20.6
Соматически: Бронхиальная астма, атопическая. Скользящая грыжа пищеводного отверстия диафрагмы. Язвенная болезнь ДПК, ремиссия. Дискинезия ЖКТ по гипотоническому типу. Хр. Бронхит. Синусовая тахикардия, контролируемая бета блокаторами.Somatically: Bronchial asthma, atopic. Sliding hernia of the esophageal opening of the diaphragm. Peptic ulcer of the duodenum, remission. Gastrointestinal dyskinesia of the hypotonic type. Chr. Bronchitis. Sinus tachycardia controlled by beta blockers.
Неврологически: Головная боль напряжения.Neurologically: Tension headache.
Психическое состояние при поступлении: Полностью ориентирован. Неусидчив. Совершал множество мелких движений. Одет неряшливо. Предъявлял жалобы на раздражительность, сниженное настроение, тревогу. Указывал, что в периоды особенной апатии не мог себя заставить встать с постели, заниматься какими-либо делами. Из-за ощущения необъяснимого страха не выходил на улицу, не посещал врача. Отмечал беспокойный сон, чувство разбитости утром. Периодически чувствовал дискомфорт в животе, который «поднимался в голову, а из головы выходил наружу». При шуме воды слышал оклики, испытывал напряжение в многолюдных местах. Боялся возможного ухудшения самочувствия. Критика к состоянию частичная. Многословен. Склонен к рассуждательству. Мимика и парамимика обеднены, парамимичен. Постоянно требовал назначить больше нейролептиков и капельниц, "чтобы очистить сосуды". Высказывал опасения, что "вдруг станет хуже, и никто не подойдет". Суицидальные мысли не выявлялись.Mental state at admission: Fully oriented. Restless. He made many small movements. Dressed sloppily. Complained of irritability, low mood, anxiety. He pointed out that during periods of particular apathy he could not force himself to get out of bed, to do any business. Due to a feeling of inexplicable fear, he did not go out into the street, did not visit a doctor. He noted restless sleep, a feeling of weakness in the morning. Periodically felt discomfort in the abdomen, which "raised in the head, and went out of the head." At the sound of water, I heard hails, felt tension in crowded places. I was afraid of a possible deterioration in well-being. Criticism to the state is partial. verbose. Inclined to talk. Mimicry and paramimicry are impoverished, paramimic. Constantly demanded to prescribe more antipsychotics and droppers, "to clear the blood vessels." He expressed fears that "suddenly it will get worse, and no one will come." Suicidal thoughts were not detected.
Лечение: Риссет 8 мг, депакин хроно 1500 мг, азалептин 100 мг на ночь, циклодол 4 мг. Психическое состояние при выписке: В результате лечения состояние больного улучшилось. Выровнялось настроение, нормализовался сон, упорядочилось поведение, прошла тревога, перестали беспокоить оклики и неприятные ощущения в животе.Treatment: Risset 8 mg, depakine chrono 1500 mg, azaleptin 100 mg at night, cyclodol 4 mg. Mental state at discharge: As a result of treatment, the patient's condition improved. The mood has evened out, sleep has normalized, behavior has become more orderly, anxiety has passed, hails and unpleasant sensations in the stomach have ceased to bother.
При поступлении в сыворотке крови определялось повышенные концентрации RIPK1 (47 нг/мл) и DCLK1 (41 нг/мл), оба показателя значительно превосходят референтные значения показателей у здоровых лиц, 1,8-10,4 нг/мл и 0,2-34 нг/мл соответственно.Upon admission, elevated concentrations of RIPK1 (47 ng / ml) and DCLK1 (41 ng / ml) were determined in the blood serum, both indicators significantly exceed the reference values \u200b\u200bof indicators in healthy individuals, 1.8-10.4 ng / ml and 0.2- 34 ng/ml, respectively.
Клинический пример №2. Пациент К., 55 лет, не работает, инвалид 2 группы. Неоднократно лечился в психиатрических стационарах с 2003 года.Clinical example No. 2. Patient K., 55 years old, does not work, disabled of the 2nd group. Repeatedly treated in psychiatric hospitals since 2003.
Диагноз: Шизофрения простая. F20.6Diagnosis: Schizophrenia simple. F20.6
Соматически: ИБС, стенокардия напряжения. Ревматическая болезнь сердца, сложный митральный порок с преобладанием стеноза. Нарушение липидного обмена П стадии. Гастроэзофагальная рефлюксная болезнь. Хр. эзофагит. Сахарный диабет П типа, ст. компенсации. Хр. панкреатит, ремиссия.Somatically: ischemic heart disease, exertional angina. Rheumatic heart disease, complex mitral valve disease with a predominance of stenosis. Violation of lipid metabolism II stage. Gastroesophageal reflux disease. Chr. esophagitis. Type II diabetes mellitus, Art. compensation. Chr. pancreatitis, remission.
Неврологически: Знаков очагового поражения ЦНС не найдено.Neurologically: Signs of focal lesions of the central nervous system were not found.
Психическое состояние при поступлении: Полностью ориентирован. Беседовал охотно. Подробно описывал свои переживания. Монотонен, гипомимичен. Речь в форме монолога. Выражение лица страдальческое. Настроение снижено, испытывал тревогу, беспокойство о собственном здоровье, страх смерти. Жаловался на боли в левом подреберье и по ходу кишечника. Боли постоянные, ноющие, не связанные с погрешностью в диете, усиливающиеся при психоэмоциональной нагрузке. Высказывал опасения, что болен тяжелым заболеванием поджелудочной железы, от которого может умереть. Временами сомневался в справедливости подобных опасений, но совладать с ними не мог. Испытывал слабость, утомляемость, вялость. Был нарушен сон. Не мог собраться с мыслями, они расплывались, временами пропадали или, наоборот, «крутились в голове», «наплывали». По-прежнему думал о смерти отца, испытывал чувство вины, что не помог ему. Дома «оборудовал спальное место» в чуланчике, где скрывался от грозы, сильного ветра, любого сильного ненастья. В мышлении склонность к резонерству, бедность, однообразие образов и ассоциаций, схематизм. Бредово-галлюцинаторные расстройства не выявлялись. Отмечалась рассеянность.Mental state at admission: Fully oriented. He spoke willingly. He described his experiences in detail. Monotonous, hypomic. Speech in the form of a monologue. Painful facial expression. The mood was lowered, he experienced anxiety, anxiety about his own health, fear of death. He complained of pain in the left hypochondrium and along the intestines. The pain is constant, aching, not associated with an error in the diet, aggravated by psycho-emotional stress. He expressed fears that he was ill with a serious disease of the pancreas, from which he could die. At times he doubted the validity of such fears, but he could not cope with them. He experienced weakness, fatigue, lethargy. Sleep was disturbed. I could not collect my thoughts, they blurred, sometimes disappeared, or, conversely, “spun in my head”, “floated”. He still thought about the death of his father, felt guilty that he had not helped him. At home, he “equipped a sleeping place” in a closet, where he hid from thunderstorms, strong winds, and any severe bad weather. In thinking, there is a tendency to reasoning, poverty, uniformity of images and associations, schematism. Delusional hallucinatory disorders were not detected. Distraction was noted.
Лечение: эглонил 100 мг в/м, трифтазин 10 мг, анафранил 50 мг, финлепсин 400 мг, симптоматическая, витаминотерапия, гепатопротекторы.Treatment: eglonil 100 mg / m, triftazin 10 mg, anafranil 50 mg, finlepsin 400 mg, symptomatic, vitamin therapy, hepatoprotectors.
Психическое состояние при выписке: В результате лечения состояние больного значительно улучшилось. Выровнялось настроение, боли в животе не возникали, однако сохранялась тяжесть в подреберье. Нормализовался сон. Прошел страх за свое здоровье. Стал бодрее, подвижнее. Однако ипохондрическая настороженность сохраняется. Стало более упорядоченным мышление, уменьшилось чувство вины в отношении отца. Сохраняется эмоциональная монотонность, резонерство, бедность и однообразие ассоциаций.Mental state at discharge: As a result of treatment, the patient's condition improved significantly. The mood improved, there were no pains in the abdomen, but heaviness in the hypochondrium remained. Sleep normalized. The fear for my health is gone. He became more cheerful, more mobile. However, hypochondriacal alertness persists. Thinking has become more orderly, the feeling of guilt towards the father has decreased. Emotional monotony, reasoning, poverty and monotony of associations remain.
При поступлении в сыворотке крови определялось повышенные концентрации RIPK1 (52 нг/мл) и DCLK1 (69 нг/мл), оба показателя значительно превосходят референтные значения показателей у здоровых лиц, 1,8-10,4 нг/мл и 0,2-34 нг/мл соответственно.Upon admission, elevated concentrations of RIPK1 (52 ng / ml) and DCLK1 (69 ng / ml) were determined in the blood serum, both indicators significantly exceed the reference values \u200b\u200bof indicators in healthy individuals, 1.8-10.4 ng / ml and 0.2- 34 ng/ml, respectively.
Клинический пример №3. Пациент П., 63 года, работает, инвалид 2 группы. Неоднократно лечился в психиатрических стационарах с 1996 года.Clinical example No. 3. Patient P., 63 years old, works, invalid of the 2nd group. Repeatedly treated in psychiatric hospitals since 1996.
Диагноз: Шизофрения параноидная, эпизодический тип течения со стабильным дефектом. F20.02Diagnosis: Paranoid schizophrenia, episodic type of course with a stable defect. F20.02
Соматически: Гипертоническая болезнь 2 ст. Хр. калькул. пиелонефрит (ремиссия), хр. некальк. холецистит (ремиссия).Somatically: Hypertension 2 tbsp. Chr. calculator pyelonephritis (remission), hr. non-calc. cholecystitis (remission).
Неврологически: Остеохондроз пояснично-крестцового отдела диска L4-L5.Neurologically: Osteochondrosis of the lumbosacral disc L 4 -L 5 .
Психическое состояние при поступлении: Считал, что за ним следят, хотят навредить, «подставить», «посадить за наркотики». Был тревожным, не спал ночами, появились странности в поведении, в высказываниях. Без конца звонил сыновьям, и посторонним лицам, спрашивая не приходили ли милиционеры, «все ли в порядке», «не сгорела ли дача». Выявляется тревога, подавленное настроение, пессимистичные размышления о жизни, работе, семье. При описании своих страхов и проблем становится напряженным и хмурым, избегает визуального контакта.Mental state at admission: He believed that they were following him, they wanted to harm him, “set him up”, “put him in jail for drugs.” He was anxious, did not sleep at night, there were oddities in behavior, in statements. He called his sons and strangers endlessly, asking if the police had come, “is everything in order”, “whether the dacha has burned down”. Anxiety, depressed mood, pessimistic thoughts about life, work, family are revealed. When describing his fears and problems, he becomes tense and gloomy, avoids visual contact.
Лечение: Хлорпротиксен 120 мг, рисперидон 6 мг, циклодол 4 мг.Treatment: Chlorprothixene 120 mg, risperidone 6 mg, cyclodol 4 mg.
Психическое состояние при выписке: На фоне лечения уменьшилась тревога, улучшилось настроение, нормализовался сон. Сохраняется пассивность, бездеятельность, отгороженность.Mental state at discharge: During treatment, anxiety decreased, mood improved, sleep returned to normal. Passivity, inactivity, isolation persist.
При поступлении в сыворотке крови определялось немного превышенная концентрация RIPK1 (19 нг/мл) и концентрация DCLK1 (11 нг/мл) соответствующая референтным значениям показателей у здоровых лиц, 1,8-10,4 нг/мл и 0,2-34 нг/мл соответственно.Upon admission in the blood serum, a slightly exceeded concentration of RIPK1 (19 ng / ml) and a concentration of DCLK1 (11 ng / ml) were determined, corresponding to the reference values of indicators in healthy individuals, 1.8-10.4 ng / ml and 0.2-34 ng /ml, respectively.
Клинический пример №4. Пациентка А., 19 лет, студентка, инвалид 2 группы.Clinical example No. 4. Patient A., 19 years old, student, invalid of the 2nd group.
Диагноз: Шизофрения параноидная, непрерывный тип течения. F20.00Diagnosis: Paranoid schizophrenia, continuous flow type. F20.00
Соматически: Без соматической патологии.Somatically: No somatic pathology.
Неврологически: Знаков очагового поражения ЦНС не найдено.Neurologically: Signs of focal lesions of the central nervous system were not found.
Психическое состояние при поступлении: При поступлении испытывала сильный страх, казалось, что окружающие и родители хотят ей смерти: считала, что «в ней течет ядовитая кровь. Отмечались неприятные давящие ощущения внизу живота, сонливость, головокружения, чувство общей слабости и снижения психической продуктивности.Mental state at admission: Upon admission, she experienced severe fear, it seemed that those around her and her parents wanted her to die: she believed that “poisonous blood flows in her. There were unpleasant pressing sensations in the lower abdomen, drowsiness, dizziness, a feeling of general weakness and a decrease in mental productivity.
Лечение: трифтазин 10 мг, флоуксетин 20 мг, циклодол 4 мг, феназепам 2.0 в/м н/н №8.Treatment: triftazin 10 mg, flowuxetine 20 mg, cyclodol 4 mg, phenazepam 2.0 IM n/n No. 8.
Психическое состояние при выписке: На фоне лечения стала спокойней, упорядочилось поведение, уменьшилась тревога. Сохранились параноидные переживания, хоть и в несколько деактуализированной форме.Mental state at discharge: On the background of treatment, she became calmer, her behavior improved, anxiety decreased. Paranoid experiences persisted, albeit in a somewhat deactualized form.
При поступлении в сыворотке крови определялось немного превышенная концентрация RIPK1 (15 нг/мл) и концентрация DCLK1 (6 нг/мл) соответствующая референтным значениям показателей у здоровых лиц, 1,8-10,4 нг/мл и 0,2-34 нг/мл соответственно.Upon admission in the blood serum, a slightly exceeded concentration of RIPK1 (15 ng / ml) and a concentration of DCLK1 (6 ng / ml) were determined corresponding to the reference values of indicators in healthy individuals, 1.8-10.4 ng / ml and 0.2-34 ng /ml, respectively.
ЛитератураLiterature
1. Ahmed, A. O. Schizophrenia heterogeneity revisited: Clinical, cognitive, and psychosocial correlates of statistically-derived negative symptoms subgroup / A. O. Ahmed, G. P. Strauss, R. W. Buchanan, B. Kirkpatrick, W. T. Carpenter // J Psychiatr Res. - 2018. - Vol. 97. - P. 8-15.1. Ahmed, A. O. Schizophrenia heterogeneity revisited: Clinical, cognitive, and psychosocial correlates of statistically-derived negative symptoms subgroup / A. O. Ahmed, G. P. Strauss, R. W. Buchanan, B. Kirkpatrick, W. T. Carpenter // J Psychiatr Res. - 2018. - Vol. 97. - P. 8-15.
2. Albert Paul, Lemonde Sylvie. Mutations of the 5' region of the human 5-HT1A gene, associated proteins of the 5' region and a diagnostic test for major depression and related mental illnesses. United States patent US20060019293, 13 July 2005.2. Albert Paul, Lemonde Sylvie. Mutations of the 5' region of the human 5-HT1A gene, associated proteins of the 5' region and a diagnostic test for major depression and related mental illnesses. United States patent US20060019293, July 13, 2005.
3. Chu Dandan; Gu Jinhua; Wu Qian; Shen Xin. Application of GSK-3beta as a blood marker in preparation of mental disorder early-diagnosis reagent. Chinese patent. CN111690732A, september 2020.3. Chu Dandan; Gu Jinhua; Wu Qian; Shen Xin. Application of GSK-3beta as a blood marker in preparation of mental disorder early-diagnosis reagent. Chinese patent. CN111690732A, September 2020.
4. Garcia, S. Depletion of Highly Abundant Proteins of the Human Blood Plasma: Applications in Proteomics Studies of Psychiatric Disorders / S. Garcia, P. A. Baldasso, P. C. Guest, D. Martins-de-Souza // Methods Mol Biol. - 2017. - Vol. 1546. - P. 195-204.4. Garcia, S. Depletion of Highly Abundant Proteins of the Human Blood Plasma: Applications in Proteomics Studies of Psychiatric Disorders / S. Garcia, P. A. Baldasso, P. C. Guest, D. Martins-de-Souza // Methods Mol Biol. - 2017. - Vol. 1546. - P. 195-204.
5. Hany, M. Schizophrenia [Electronic resource] / M. Hany, B. Rehman, Y. Azhar, J. Chapman // Treasure Island (FL): StatPearls Publishing. - 2020. - Mode of access: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK539864/. - Date of access: 15.02.2021.5. Hany, M. Schizophrenia [Electronic resource] / M. Hany, B. Rehman, Y. Azhar, J. Chapman // Treasure Island (FL): StatPearls Publishing. - 2020. - Mode of access: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK539864/. - Date of access: 02/15/2021.
6. 
7. Koizumi, H. DCLK1 phosphorylates the microtubule-associated protein MAP7D1 to promote axon elongation in cortical neurons / H. Koizumi, H. Fujioka, K. Togashi, J. Thompson, J.R. Yates 3rd, J. G. Gleeson, K. Emoto // Dev Neurobiol. - 2017. - Vol. 77, № 4. - P. 493-510.7. Koizumi, H. DCLK1 phosphorylates the microtubule-associated protein MAP7D1 to promote axon elongation in cortical neurons / H. Koizumi, H. Fujioka, K. Togashi, J. Thompson, J.R. Yates 3rd, J. G. Gleeson, K. Emoto // Dev Neurobiol. - 2017. - Vol. 77, No. 4. - P. 493-510.
8. Korth, Carsten Trossbach, Svenja, Hecher Laura. Method and biomarkers for in vitro diagnosis of mental disorders. International petent No.PCT/EP2017/080504, WO/2018/096141, 31 June.2018.8. Korth, Carsten Trossbach, Svenja, Hecher Laura. Method and biomarkers for in vitro diagnosis of mental disorders. International patent No.PCT/EP2017/080504, WO/2018/096141, 31 June.2018.
9. Laemmli U. Slab gel electrophoresis: SDS-PAGE with discontinuous buffers /U. Laemmli // Nature. - 1979. - Vol. 227. - P. 680-685.9. Laemmli U. Slab gel electrophoresis: SDS-PAGE with discontinuous buffers /U. Laemmli // Nature. - 1979. - Vol. 227.-P. 680-685.
10. Lange, V. Selected reaction monitoring for quantitative proteomics: a tutorial / V. Lange, P. Picotti, B. Domon, R. Aebersold // Molecular systems biology. - 2008. - Vol. 4. - P. 222.10. Lange, V. Selected reaction monitoring for quantitative proteomics: a tutorial / V. Lange, P. Picotti, B. Domon, R. Aebersold // Molecular systems biology. - 2008. - Vol. 4. - P. 222.
11. Meng, H. Death-domain dimerization-mediated activation of RIPK1 controls necroptosis and RIPK1-dependent apoptosis / H. Meng, Z. Liu, X. Li, H. Wang, T. Jin, G. Wu, B. Shan, D.E. Christofferson, C. Qi, Q. Yu, Y. Li, J. Yuan // Proc. Natl Acad. Sci. USA. - 2018. - Vol. 115. - P. E2001-E2009.11. Meng, H. Death-domain dimerization-mediated activation of RIPK1 controls necroptosis and RIPK1-dependent apoptosis / H. Meng, Z. Liu, X. Li, H. Wang, T. Jin, G. Wu, B. Shan , D.E. Christofferson, C. Qi, Q. Yu, Y. Li, J. Yuan // Proc. Natl Acad. sci. USA. - 2018. - Vol. 115. - P. E2001-E2009.
12. Mongan D. Development of Proteomic Prediction Models for Transition to Psychotic Disorder in the Clinical High-Risk State and Psychotic Experiences in Adolescence / D. Mongan, M. 
13. Schwarz, E. Validation of a blood-based laboratory test to aid in the confirmation of a diagnosis of schizophrenia / E. Schwarz, R. Izmailov, M. Spain, A. Barnes, J. P. Mapes, P. C. Guest, H. Rahmoune, S. Pietsch, F. M. Leweke, M. Rothermundt, J. Steiner, D. Koethe, L. Kranaster, P. Ohrmann, T. Suslow, Y. Levin, B. Bogerts, N. J. van Beveren, G. McAllister, N. Weber, D. Niebuhr, D. Cowan, R. H. Yolken, S. Bahn // Biomark Insights. - 2010. - Vol. 5. - P. 39-47.13. Schwarz, E. Schwarz, R. Izmailov, M. Spain, A. Barnes, J. P. Mapes, P. C. Guest, H. Rahmoune Validation of a blood-based laboratory test to aid in the confirmation of a diagnosis of schizophrenia , S. Pietsch, F. M. Leweke, M. Rothermundt, J. Steiner, D. Koethe, L. Kranaster, P. Ohrmann, T. Suslow, Y. Levin, B. Bogerts, N. J. van Beveren, G. McAllister, N. Weber, D. Niebuhr, D. Cowan, R. H. Yolken, S. Bahn // Biomark Insights. - 2010. - Vol. 5. - P. 39-47.
14. Yuan Yonggui, Chen Suzhen. Serum protein marker for diagnosing depression and application thereof. Chinese patent CN111551751, 18 August.2020.14. Yuan Yonggui, Chen Suzhen. Serum protein marker for diagnosing depression and application thereof. Chinese patent CN111551751, 18 August.2020.
15. Zhang Xiaozhe, Liu Xinxin, Liu Dan, Cheng Mengchun, Zhao Nan. Depression diagnosis marker and preparation method thereof. Chinese patent CN111141863 12. May.2020.15. Zhang Xiaozhe, Liu Xinxin, Liu Dan, Cheng Mengchun, Zhao Nan. Depression diagnosis marker and preparation method thereof. Chinese patent CN111141863 12. May.2020.
16. Zhang Zhijun, Shi Yachen, Application of vitamin D binding protein as marker in diagnosis of mental disease depression. Chinese patent CN111351945, 30 June 2020.16. Zhang Zhijun, Shi Yachen, Application of vitamin D binding protein as a marker in diagnosis of mental disease depression. Chinese patent CN111351945, 30 June 2020.
17. Ветлугина, Т. П. Клинико-динамические аспекты психонейроиммунологии (на модели шизофрении) / Т. П. Ветлугина, О. А. Лобачева, Н. Н. Найденова, А. В. Семке // Патофизиология психических расстройств. - 2006. - С. 143-154.17. Vetlugina, T. P. Clinical and dynamic aspects of psychoneuroimmunology (on the model of schizophrenia) / T. P. Vetlugina, O. A. Lobacheva, N. N. Naydenova, A. V. Semke // Pathophysiology of mental disorders. - 2006. - S. 143-154.
18. Корнетова, Е. Г. Шизофрения с преобладанием негативных нарушений: клинико-конституциональные закономерности, адаптация, терапия: диссертация на соискание ученой степени доктора медицинских наук: 14.01.06 / Корнетова Елена Георгиевна. - Томск, 2016. - 447 с.18. Kornetova, E. G. Schizophrenia with a predominance of negative disorders: clinical and constitutional patterns, adaptation, therapy: dissertation for the degree of Doctor of Medical Sciences: 14.01.06 / Kornetova Elena Georgievna. - Tomsk, 2016. - 447 p.
19. Шмуклер, А. Б. Шизофрения / А. Б. Шмуклер. - М.: ГЭОТАР: Медиа. - 2017. - С.176.19. Shmukler, A. B. Schizophrenia / A. B. Shmukler. - M.: GEOTAR: Media. - 2017. - P.176.
Claims (1)
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2788149C1 true RU2788149C1 (en) | 2023-01-17 |
Family
ID=
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU1124930A1 (en) * | 1982-11-26 | 1984-11-23 | Всесоюзный Ордена Трудового Красного Знамени Научно-Исследовательский Институт Общей И Судебной Психиатрии Им.В.П.Сербского | Method of diagnosis of schizophrenia |
| WO2004029293A1 (en) * | 2002-09-27 | 2004-04-08 | Japan Science And Technology Agency | Method of diagnosing integration dysfunction syndrome using blood |
| RU2569741C1 (en) * | 2014-11-28 | 2015-11-27 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт психического здоровья" | Laboratory diagnostic technique for schizotypal disorder |
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SU1124930A1 (en) * | 1982-11-26 | 1984-11-23 | Всесоюзный Ордена Трудового Красного Знамени Научно-Исследовательский Институт Общей И Судебной Психиатрии Им.В.П.Сербского | Method of diagnosis of schizophrenia |
| WO2004029293A1 (en) * | 2002-09-27 | 2004-04-08 | Japan Science And Technology Agency | Method of diagnosing integration dysfunction syndrome using blood |
| RU2569741C1 (en) * | 2014-11-28 | 2015-11-27 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт психического здоровья" | Laboratory diagnostic technique for schizotypal disorder |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Smirnova L. et al. Quantitative differences in the proteomic composition of the blood serum of patients with simple and paranoid schizophrenia. https://bgrssb.icgbio.ru/wp-content/uploads/2020/07/363.pdf. Смирнова Л.П. и др. Результаты поиска биомаркеров шизофрении // Сибирский вестник психиатрии и наркологии. 2018. N 2 (99). С. 33-44. Дмитриева Е.М. и др. Анализ различий в электрофоретическом распределении белков сыворотки крови больных шизофренией и здоровых лиц//Вестн. Уральской мед. акад. науки. -2014. -T. 3, N к49. -C. 209-210. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Babaloo et al. | The role of Th17 cells in patients with relapsing-remitting multiple sclerosis: interleukin-17A and interleukin-17F serum levels | |
| Hagan et al. | Tear fluid biomarkers in ocular and systemic disease: potential use for predictive, preventive and personalised medicine | |
| Peltz et al. | Blood biomarkers of traumatic brain injury and cognitive impairment in older veterans | |
| EP2353004B1 (en) | Diagnosis of multiple sclerosis | |
| O'Connell et al. | Pro-inflammatory cytokine levels are raised in female schizophrenia patients treated with clozapine | |
| US9733261B2 (en) | Methods and compositions for diagnosis and prognosis of stroke or other cerebral injury | |
| Walder et al. | The prognostic significance of the serum biomarker heart-fatty acidic binding protein in comparison with s100b in severe traumatic brain injury | |
| AU2019200241A1 (en) | Specific salivary biomarkers for risk detection, early diagnosis, prognosis and monitoring of alzheimer's and parkinson's diseases | |
| Esnafoglu et al. | Evaluation of serum Neuron-specific enolase, S100B, myelin basic protein and glial fibrilliary acidic protein as brain specific proteins in children with autism spectrum disorder | |
| Díaz-Marsá et al. | Activation of the cholinergic anti-inflammatory system in peripheral blood mononuclear cells from patients with borderline personality disorder | |
| Zhao et al. | High plasma neopterin levels in Chinese children with autism spectrum disorders | |
| Li et al. | Association of serum FAM19A5 with cognitive impairment in vascular dementia | |
| Miao et al. | IL-33 as a novel serum prognostic marker of intracerebral hemorrhage | |
| RU2788149C1 (en) | Proteins dclk1 and ripk1 biomarkers of simple schizophrenia | |
| Malmqvist et al. | Increased peripheral levels of TARC/CCL17 in first episode psychosis patients | |
| Mocali et al. | Altered proteolysis in fibroblasts of Alzheimer patients with predictive implications for subjects at risk of disease | |
| US20120295281A1 (en) | Specific salivary biomarkers for risk detection, early diagnosis, prognosis and monitoring of alzheimer's and parkinson's diseases | |
| Abd-Allah et al. | Thioredoxin level and inflammatory markers in children with autism spectrum disorders | |
| Ma et al. | The prognostic value of leucine-rich α2 glycoprotein 1 in pediatric spinal cord injury | |
| Song et al. | Interleukin-36 alpha levels are elevated in the serum and cerebrospinal fluid of patients with neuromyelitis optica spectrum disorder and correlate with disease activity | |
| Özgeriş et al. | Is serum progranulin level a biomarker in autism and cognitive development disorders? | |
| JP2019530848A (en) | Biomarkers of blood brain barrier dysfunction | |
| US20140057267A1 (en) | Composition and kit for the diagnosis of mild cognitive impairment, which measure an expression level of lipocalin-2, and method for providing information for the diagnosis of mild cognitive impairment | |
| ES2648694B1 (en) | Proinflammatory cytokines as a diagnostic marker in episodic vestibular syndrome. | |
| Kiliç et al. | Serum galectin-3 levels are decreased in schizophrenia |