RU2786231C1 - 4-(3,4-dibromothiophene carbonyl)-10-(2-ethoxyacetyl)-2,6,8,12-tetraacetyl-2,4,6,8,10,12-hexaazatetracyclo[5,5,0,03,11,05,9]dodecane as an analgesic agent and method for production thereof - Google Patents
4-(3,4-dibromothiophene carbonyl)-10-(2-ethoxyacetyl)-2,6,8,12-tetraacetyl-2,4,6,8,10,12-hexaazatetracyclo[5,5,0,03,11,05,9]dodecane as an analgesic agent and method for production thereof Download PDFInfo
- Publication number
- RU2786231C1 RU2786231C1 RU2021127046A RU2021127046A RU2786231C1 RU 2786231 C1 RU2786231 C1 RU 2786231C1 RU 2021127046 A RU2021127046 A RU 2021127046A RU 2021127046 A RU2021127046 A RU 2021127046A RU 2786231 C1 RU2786231 C1 RU 2786231C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- analgesic
- pain
- hexaazatetracyclo
- tetraacetyl
- dodecane
- Prior art date
Links
- -1 4-(3,4-dibromothiophene carbonyl)-10-(2-ethoxyacetyl)-2,6,8,12-tetraacetyl-2,4,6,8,10,12-hexaazatetracyclo[5,5,0,03,11,05,9]dodecane Chemical compound 0.000 title abstract description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title abstract 2
- 239000000730 antalgic agent Substances 0.000 title description 14
- 230000000202 analgesic Effects 0.000 claims abstract description 61
- SNRUBQQJIBEYMU-UHFFFAOYSA-N Dodecane Chemical compound CCCCCCCCCCCC SNRUBQQJIBEYMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 34
- ZPMWWAIBJJFPPQ-UHFFFAOYSA-N 2-ethoxyacetyl chloride Chemical compound CCOCC(Cl)=O ZPMWWAIBJJFPPQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 claims abstract 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 34
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 24
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 17
- 230000001747 exhibiting Effects 0.000 abstract 1
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 58
- 230000036407 pain Effects 0.000 description 57
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 31
- 229940079593 drugs Drugs 0.000 description 30
- 229960004380 Tramadol Drugs 0.000 description 28
- TVYLLZQTGLZFBW-ZBFHGGJFSA-N Tramadol Chemical compound COC1=CC=CC([C@]2(O)[C@H](CCCC2)CN(C)C)=C1 TVYLLZQTGLZFBW-ZBFHGGJFSA-N 0.000 description 28
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 26
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 230000004044 response Effects 0.000 description 16
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 230000003502 anti-nociceptive Effects 0.000 description 11
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 10
- 230000000875 corresponding Effects 0.000 description 9
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 9
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 8
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 7
- 229940035676 ANALGESICS Drugs 0.000 description 6
- 210000002683 Foot Anatomy 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 6
- 239000000052 vinegar Substances 0.000 description 6
- 238000007906 compression Methods 0.000 description 5
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 5
- IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N DMSO-d6 Chemical compound [2H]C([2H])([2H])S(=O)C([2H])([2H])[2H] IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N 0.000 description 4
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 4
- 230000003187 abdominal Effects 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 229940021182 non-steroidal anti-inflammatory drugs Drugs 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 230000020341 sensory perception of pain Effects 0.000 description 4
- 241000218236 Cannabis Species 0.000 description 3
- 210000003414 Extremities Anatomy 0.000 description 3
- 210000000929 Nociceptors Anatomy 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 108091008022 nociceptors Proteins 0.000 description 3
- 230000011514 reflex Effects 0.000 description 3
- YTPLMLYBLZKORZ-UHFFFAOYSA-N thiophene Chemical compound C=1C=CSC=1 YTPLMLYBLZKORZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 231100000403 acute toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 230000003040 nociceptive Effects 0.000 description 2
- 230000003364 opioid Effects 0.000 description 2
- 230000003389 potentiating Effects 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000002194 synthesizing Effects 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 238000001644 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 210000003489 Abdominal Muscles Anatomy 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 208000000094 Chronic Pain Diseases 0.000 description 1
- 206010015548 Euthanasia Diseases 0.000 description 1
- 206010061188 Haematotoxicity Diseases 0.000 description 1
- 208000004454 Hyperalgesia Diseases 0.000 description 1
- 208000007999 Hyperesthesia Diseases 0.000 description 1
- 238000004566 IR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 210000003141 Lower Extremity Anatomy 0.000 description 1
- 238000000585 Mann–Whitney U test Methods 0.000 description 1
- 210000000412 Mechanoreceptors Anatomy 0.000 description 1
- NTZHVNFZZRZXPJ-UHFFFAOYSA-N N1C2NC3NC4C1NC2NC3N4 Chemical class N1C2NC3NC4C1NC2NC3N4 NTZHVNFZZRZXPJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001170 Nerve Fibers, Unmyelinated Anatomy 0.000 description 1
- 208000001294 Nociceptive Pain Diseases 0.000 description 1
- 229940005483 OPIOID ANALGESICS Drugs 0.000 description 1
- 208000000114 Pain Threshold Diseases 0.000 description 1
- 206010034674 Peritonitis Diseases 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 210000003491 Skin Anatomy 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- 206010043275 Teratogenicity Diseases 0.000 description 1
- 210000003051 Thermoreceptors Anatomy 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 230000001154 acute Effects 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 230000036592 analgesia Effects 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial Effects 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 230000002149 cannabinoid Effects 0.000 description 1
- 229930003827 cannabinoid Natural products 0.000 description 1
- 239000003557 cannabinoid Substances 0.000 description 1
- 238000001460 carbon-13 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000000271 cardiovascular Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000001684 chronic Effects 0.000 description 1
- 230000003749 cleanliness Effects 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 238000000921 elemental analysis Methods 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 1
- 231100000226 haematotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 108091008026 mechanoreceptors Proteins 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000003340 mental Effects 0.000 description 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 230000001465 nonopioid Effects 0.000 description 1
- 239000000014 opioid analgesic Substances 0.000 description 1
- 201000008125 pain agnosia Diseases 0.000 description 1
- 230000037040 pain threshold Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological Effects 0.000 description 1
- 238000003359 percent control normalization Methods 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002980 postoperative Effects 0.000 description 1
- 230000002028 premature Effects 0.000 description 1
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reduced Effects 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating Effects 0.000 description 1
- 231100000486 side effect Toxicity 0.000 description 1
- 230000000392 somatic Effects 0.000 description 1
- 230000003093 somatogenic Effects 0.000 description 1
- 238000010972 statistical evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 231100000211 teratogenicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic Effects 0.000 description 1
- 108091008011 thermoreceptors Proteins 0.000 description 1
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 description 1
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 230000001131 transforming Effects 0.000 description 1
Abstract
Description
Изобретение относится к фармацевтической химии и фармакологии, а именно к новому химическому веществу - 4-(3,4-дибромтиофенкарбонил)-10-(2-этоксиацетил) -2,6,8,12-тетраацетил-2,4,6,8,10,12-гексаазатетрацикло[5,5,0,03,11 ,0 5,9]додекану, обладающему анальгетической активностью:The invention relates to pharmaceutical chemistry and pharmacology, and in particular to a new chemical substance - 4-(3,4-dibromothiophenecarbonyl)-10-(2-ethoxyacetyl) -2,6,8,12-tetraacetyl-2,4,6,8 ,10,12-hexaazatetracyclo[ 5.5.0.0 3.11.0 5.9 ] dodecane, which has analgesic activity:
Анальгетики, способные купировать боли высокой интенсивности и различной этиологии, включая хронические, представляют собой одну из стратегически важнейших категорий лекарственных средств. В настоящее время для терапии боли различного генеза в стационарных и амбулаторных условиях используются в основном два типа препаратов анальгетиков: нестероидные противовоспалительные вещества (НПВС) и опиаты, а также различные их комбинации в схемах мультимодальной терапии [Машковский М.Д. Лекарственные средства: 15-е изд. М: ОО «Издательство Новая Волна». 2008, 1206; Михайлова А.С. Анальгетический арсенал клинициста. Фарматека. 2018, (3): 50-56; Соснов А.В., Садовников С.В., Семченко Ф.М., Руфанов К.А., Тохмахчи В.Н., Соснова А.А., Тюрин И.А. Сильнодействующие ненаркотические анальгетики как направление развития фармацевтики. Разработка и регистрация лекарственных средств. 2016, 14 (1): 196-206; Черняков А.В. Проблема боли и обезболивания в амбулаторной хирургии // Русский Медицинский Журнал. 2016, 2 (14); 927-931; Cawich S.O., Deonarine U., Harding H.E., Dan D., Naraynsingh V., Cannabis and Postoperative Analgesia. Handbook of Cannabis and Related Pathologies. Biology, Pharmacology, Diagnosis, and Treatment. 2017, 450-458]. Основными недостатками НПВС по-прежнему остаются побочные и нежелательные эффекты (гастро-, нефро-, гепато-, гематотоксичность, кардиоваскулярные эффекты, тератогенность и др.), фармакологическая активность, проявляющаяся преимущественно на уровне периферии нервной системы [Колоколов О.В., Ситкали И.В., Колоколова A.M. Ноцицептивная боль в практике невролога: алгоритмы диагностики, адекватность и безопасность терапии // Русский Медицинский Журнал. 2015, 23 (12): 664-667. Машковский М.Д. Лекарственные средства: 15-е изд. М.: ОО «Издательство Новая Волна». 2008, 1206; Михайлова А.С. Анальгетический арсенал клинициста. Фарматека. 2018, (3): 50-56; Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Под ред. Миронова А.Н., Бунатян Н.Д. и др. М., ЗАО «Гриф и К». 2012.; Соснов А.В., Садовников С.В., Семченко Ф.М., Руфанов К.А., Тохмахчи В.Н., Соснова А.А., Тюрин И.А. Сильнодействующие ненаркотические анальгетики как направление развития фармацевтики. Разработка и регистрация лекарственных средств. 2016, 14 (1): 196-206]. Главными недостатками опиатов, лимитирующими их применение в клинике, является формирование физиологической и психической зависимости, приводящей к инвалидизации трудоспособного населения [Палехов А.В., Введенская Е.С Тактика выбора и применения опиоидных анальгетиков для купирования хронической боли // Паллиативная медицина и реабилитация. 2018, (3): 18-24]. Сходные побочные эффекты, выраженные в меньшей степени, характерны и для анальгетиков из класса каннабиоидов [Cawich S.O., Deonarine U., Harding H.E., Dan D., Naraynsingh V., Cannabis and Postoperative Analgesia. Handbook of Cannabis and Related Pathologies. Biology, Pharmacology, Diagnosis, and Treatment. 2017,450-458; Shiels M.S., Chernyavskiy P., Anderson W.F. et al. Trends in premature mortality in the USA by sex, race, and ethnicity from 1999 to 2014: an analysis of death certificate data // The Lancet. 2017, 389 (10073): 1043-1054]. Все вышесказанное обосновывает необходимость разработки новых высокоэффективных малотоксичных анальгетиков, в первую очередь, на основе принципиально новых классов веществ, инновационных молекулярных структур, отличающихся иными, по сравнению с опиатами и НПВС. механизмами антиноцицептивного действия.Analgesics that can relieve pain of high intensity and various etiologies, including chronic ones, represent one of the most strategically important categories of medicines. Currently, for the treatment of pain of various origins in inpatient and outpatient settings, mainly two types of analgesics are used: non-steroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs) and opiates, as well as their various combinations in multimodal therapy regimens [Mashkovsky M.D. Medicines: 15th ed. M: NGO "New Wave Publishing House". 2008, 1206; Mikhailova A.S. Analgesic arsenal of the clinician. Pharmateka. 2018, (3): 50-56; Sosnov A.V., Sadovnikov S.V., Semchenko F.M., Rufanov K.A., Tokhmakhchi V.N., Sosnova A.A., Tyurin I.A. Potent non-narcotic analgesics as a direction in the development of pharmaceuticals. Development and registration of medicines. 2016, 14(1): 196-206; Chernyakov A.V. The problem of pain and anesthesia in outpatient surgery // Russian Medical Journal. 2016, 2 (14); 927-931; Cawich S.O., Deonarine U., Harding H.E., Dan D., Naraynsingh V., Cannabis and Postoperative Analgesia. Handbook of Cannabis and Related Pathologies. Biology, Pharmacology, Diagnosis, and Treatment. 2017, 450-458]. The main disadvantages of NSAIDs are still side and undesirable effects (gastro-, nephro-, hepato-, hematotoxicity, cardiovascular effects, teratogenicity, etc.), pharmacological activity, which manifests itself mainly at the level of the periphery of the nervous system [Kolokolov O.V., Sitkali I.V., Kolokolova A.M. Nociceptive pain in the practice of a neurologist: diagnostic algorithms, adequacy and safety of therapy // Russian Medical Journal. 2015, 23(12): 664-667. Mashkovsky M.D. Medicines: 15th ed. M.: NGO "New Wave Publishing House". 2008, 1206; Mikhailova A.S. Analgesic arsenal of the clinician. Pharmateka. 2018, (3): 50-56; Guidelines for conducting preclinical studies of drugs. Ed. Mironova A.N., Bunatyan N.D. and others. M., CJSC Grif and K. 2012.; Sosnov A.V., Sadovnikov S.V., Semchenko F.M., Rufanov K.A., Tokhmakhchi V.N., Sosnova A.A., Tyurin I.A. Potent non-narcotic analgesics as a direction in the development of pharmaceuticals. Development and registration of medicines. 2016, 14 (1): 196-206]. The main disadvantages of opiates, limiting their use in the clinic, is the formation of physiological and mental dependence, leading to disability of the working population [Palekhov A.V., Vvedenskaya E.S. Tactics for the selection and use of opioid analgesics for the relief of chronic pain // Palliative Medicine and Rehabilitation. 2018, (3): 18-24]. Similar side effects, expressed to a lesser extent, are also characteristic of analgesics from the cannabinoid class [Cawich S.O., Deonarine U., Harding H.E., Dan D., Naraynsingh V., Cannabis and Postoperative Analgesia. Handbook of Cannabis and Related Pathologies. Biology, Pharmacology, Diagnosis, and Treatment. 2017,450-458; Shiels M.S., Chernyavskiy P., Anderson W.F. et al. Trends in premature mortality in the USA by sex, race, and ethnicity from 1999 to 2014: an analysis of death certificate data // The Lancet. 2017, 389 (10073): 1043-1054]. All of the above justifies the need to develop new highly effective low-toxic analgesics, primarily based on fundamentally new classes of substances, innovative molecular structures that differ in comparison with opiates and NSAIDs. mechanisms of antinociceptive action.
Одним из наиболее часто используемых и наиболее близким по техническому результату к предлагаемому средству является Трамадол - анальгетик смешанного механизма действия, включающего в себя опиоидный и неопиоидный компоненты, который выбран в качестве препарата сравнения [Машковский М.Д. Лекарственные средства: 15-е изд. М.: ОО «Издательство Новая Волна». 2008, 1206; Михайлова А.С. Анальгетический арсенал клинициста. Фарматека. 2018, (3): 50-56].One of the most commonly used and closest in technical result to the proposed tool is Tramadol - an analgesic of a mixed mechanism of action, including opioid and non-opioid components, which is selected as the comparison drug [Mashkovsky M.D. Medicines: 15th ed. M.: NGO "New Wave Publishing House". 2008, 1206; Mikhailova A.S. Analgesic arsenal of the clinician. Pharmateka. 2018, (3): 50-56].
Задачей настоящего изобретения является расширение арсенала анальгетических средств с помощью создания новых веществ, обладающих анальгетической активностью и малой токсичностью.The objective of the present invention is to expand the arsenal of analgesics by creating new substances with analgesic activity and low toxicity.
Поставленная задача достигается применением впервые синтезированного вещества 4-(3,4-дибромтиофенкарбонил)-10-(2-этоксиацетил)-2,6,8,12-тетраацетил-2,4,6,8,10,12-гексаазатетрацикло[5,5,0,03,11 ,0 5,9]додекана (I) в качестве анальгетического средства.The task is achieved by using the newly synthesized substance 4-(3,4-dibromothiophenecarbonyl)-10-(2-ethoxyacetyl)-2,6,8,12-tetraacetyl-2,4,6,8,10,12-hexaazatetracyclo[5 .5.0.0 3.11.0 5.9 ]dodecane (I) as an analgesic.
Предлагаемое в качестве изобретения анальгетическое средство впервые синтезировано в Институте проблем химико-энергетических технологий (г.Бийск). Соединение I полностью подтверждено с помощью физико-химических методов анализа (ИК-спектроскопия, элементный анализ, 1Н- и 13С ЯМР-спектроскопия), обладает выраженной анальгетической активностью и относится к 3 классу опасности «малотоксичные средства».The analgesic agent proposed as an invention was first synthesized at the Institute of Problems of Chemical Energy Technologies (Biysk). Compound I has been fully confirmed by physical and chemical methods of analysis (IR spectroscopy, elemental analysis, 1H and 13C NMR spectroscopy), has a pronounced analgesic activity and belongs to the 3rd hazard class "low toxicity".
4-(3,4-Дибромтиофенкарбонил)-2,8,10,12-тетраацетил-2,4,6,8,10,12-гексаазаизовюрцитан обладает анальгетической активностью [Крылова С.Г., Лопатина К.А., Нестерова Ю.В., Поветьева Т.Н., Кульпин П.В., Афанасьева О.Г., Кулагина Д.А., Сафонова Е.А., Зуева Е.П., Суслов Н.И., Сысолятин СВ. Некоторые аспекты исследования центрального механизма антиноцицептивного действия нового анальгетика из класса гексаазаизовюрцитанов // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2020 (12): 739-746], введение в его состав этоксиацетильной группировки приводит к повышению растворимости целевого соединения I (в сравнении с исходным продуктом), что делает его еще более привлекательным в плане практического использования.4-(3,4-Dibromothiophenecarbonyl)-2,8,10,12-tetraacetyl-2,4,6,8,10,12-hexaazaisowurtzitane has analgesic activity [Krylova S.G., Lopatina K.A., Nesterova Yu.V., Povet'eva T.N., Kulpin P.V., Afanas'eva O.G., Kulagina D.A., Safonova E.A., Zueva E.P., Suslov N.I., Sysolyatin SV. Some aspects of the study of the central mechanism of the antinociceptive action of a new analgesic from the class of hexaazaisowurtzitane // Bulletin of experimental biology and medicine. 2020 (12): 739-746], the introduction of an ethoxyacetyl group into its composition leads to an increase in the solubility of the target compound I (in comparison with the starting product), which makes it even more attractive in terms of practical use.
В НИИ фармакологии и регенеративной медицины имени Е.Д. Гольдберга Томского НИМЦ (г.Томск) в результате проведении экспериментальных исследований выявлена выраженная анальгетическая активность данного вещества.At the Research Institute of Pharmacology and Regenerative Medicine named after E.D. Goldberg of the Tomsk NIMC (Tomsk), as a result of experimental studies, a pronounced analgesic activity of this substance was revealed.
Техническим результатом предлагаемого изобретения является новое вещество I, способ его получения, выявление анальгетических свойств вещества I и подтверждение его анальгетического действия. Выявленное свойство вещества I, предлагаемого в качестве анальгетического средства, явным образом не вытекает из уровня техники в данной области и неочевидно для специалиста. Идентичной совокупности признаков не обнаружено при исследовании уровня техники по патентной и научно-медицинской литературе [Толстикова Т.Г., Морозова Е.А., Сысолятин С.В., Калашников А.И., Жукова Ю.И., Сурмачев В.Н. Синтез и биологическая активность производных 2,4,6,8,10,12-гексаазатетрацикло[5,5,0,03,11 ,0 5,9]додекана. Химия в интересах устойчивого развития. 2010, 18: 511-516; Sergey V. Sysolyatin, Alexander I. Kalashnikov, Valeriy V. Malykhin, Irina A. Surmacheva, Gennady V. Sakovich. Reductive Debenzelation of 2,4,6,8,10,12-Hexaazaisowurtzitane/ International Journal of Energetic Materials and Chemical Propulsion.2010, 9 (4): 365; Крылова С.Г., Лопатина K.A., Нестерова Ю.В., Поветьева Т.Н., Кульпин П.В., Афанасьева О.Г., Кулагина Д.А., Сафонова Е.А., Зуева Е.П., Суслов Н.И., Сысолятин С.В. Некоторые аспекты исследования центрального механизма антиноцицептивного действия нового анальгетика из класса гексаазаизовюрцитанов // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2020 (12): 739-746; Kulagina, D.A., Sysolyatin, S.V., Kalashnikov, A.I. et al. Synthesis and Analgesic Activity of 4,10-Bis((±)-5-Benzoyl-2,3-Dihydro-l/?pyrrolo[l,2-fl]Pyrrole-l-Carbonyl)-2,6,8,12-Tetraacetyl-2,4,6,8,10,12-Hexaazatetracyclo [5,5,0,03,11 ,0 5,9]Dodecane. Pharm. Chem. J. 54, 1140-1144 (2021); Tomilova, E., Kurgachev, D., Kulagina, D.. Sergey Sysolyatin, S., Krylova, S., Novikov, D. Development of HPLC-Method for Simultaneous Determination of API and Related Components in Thiowurtzine: A New Non-Narcotic Analgesic. Chromatographia 84, 147-154 (2021)].The technical result of the invention is a new substance I, a method for its preparation, the identification of the analgesic properties of substance I and confirmation of its analgesic effect. The identified property of substance I, proposed as an analgesic agent, does not explicitly follow from the prior art in this field and is not obvious to a specialist. An identical set of features was not found in the study of the state of the art in the patent and medical literature [Tolstikova T.G., Morozova E.A., Sysolyatin S.V., Kalashnikov A.I., Zhukova Yu.I., Surmachev V. N. Synthesis and biological activity of 2,4,6,8,10,12-hexaazatetracyclo[ 5,5,0,0 3,11,0 5,9 ] dodecane derivatives. Chemistry for sustainable development. 2010, 18: 511-516; Sergey V. Sysolyatin, Alexander I. Kalashnikov, Valeriy V. Malykhin, Irina A. Surmacheva, Gennady V. Sakovich. Reductive Debenzelation of 2,4,6,8,10,12-Hexaazaisowurtzitane/ International Journal of Energetic Materials and Chemical Propulsion. 2010, 9 (4): 365; Krylova S.G., Lopatina K.A., Nesterova Yu.V., Povet’eva T.N., Kulpin P.V., Afanas’eva O.G., Kulagina D.A., Safonova E.A., Zueva E.P. , Suslov N.I., Sysolyatin S.V. Some aspects of the study of the central mechanism of the antinociceptive action of a new analgesic from the class of hexaazaisowurtzitane // Bulletin of experimental biology and medicine. 2020(12): 739-746; Kulagina, DA, Sysolyatin, SV, Kalashnikov, AI et al. Synthesis and Analgesic Activity of 4,10-Bis((±)-5-Benzoyl-2,3-Dihydro-l/?pyrrolo[l,2-fl]Pyrrole-l-Carbonyl)-2,6,8,12 -Tetraacetyl-2,4,6,8,10,12-Hexaazatetracyclo [ 5.5.0.0 3.11.0 5.9 ] Dodecane. Pharm. Chem. J. 54, 1140-1144 (2021); Tomilova, E., Kurgachev, D., Kulagina, D.. Sergey Sysolyatin, S., Krylova, S., Novikov, D. Development of HPLC-Method for Simultaneous Determination of API and Related Components in Thiowurtzine: A New Non- Narcotic Analgesic. Chromatographia 84, 147-154 (2021)].
Возможность осуществления заявляемого изобретения подтверждается примером конкретного выполнения способа получения заявленного средства.The possibility of carrying out the claimed invention is confirmed by an example of a specific implementation of the method for obtaining the claimed funds.
Пример 1Example 1
Получение 4-(3,4-дибромтиофенкарбонил)-10-(2-этоксиацетил)-2,6,8,12-тетраацетил-2,4,6,8,10,12-гексаазатетрацикло[5,5,0,03,11 ,0 5,9]додекана 23 г (0,188 моль) хлорангидрида этоксиуксусной кислоты растворяют в 630 мл сухого ацетонитрила. При перемешивании добавляют 56,94 г (0,094 моль) 4-(3,4-дибромтиофенкарбонил)-2,6,8,12-тетраацетил-2,4,6,8,10,12-гексаазатетрацикло[5,5,0,03,11 ,0 5,9]додекана. Суспензию кипятят при перемешивании в течение 5,5 часов, фильтруют и охлаждают. Масса технического продукта 53,61 г (82,7% от теоретического). Продукт перекристаллизовывают из 1448 мл диметилформамида. Масса очищенного вещества 43,96 г (82% от теоретического) в виде бесцветных кристаллов с содержанием основного вещества 98,21% (ВЭЖХ) и температурой плавления 298-300°СPreparation of 4-(3,4-dibromothiophenecarbonyl)-10-(2-ethoxyacetyl)-2,6,8,12-tetraacetyl-2,4,6,8,10,12-hexaazatetracyclo[5.5.0.0 3.11.0 5.9 ] dodecane Dissolve 23 g (0.188 mol) of ethoxyacetic acid chloride in 630 ml of dry acetonitrile. 56.94 g (0.094 mol) of 4-(3,4-dibromothiophenecarbonyl)-2,6,8,12-tetraacetyl-2,4,6,8,10,12-hexaazatetracyclo[5.5.0 .0 3.11 .0 5.9 ] dodecane. The suspension is boiled with stirring for 5.5 hours, filtered and cooled. The mass of the technical product is 53.61 g (82.7% of the theoretical). The product is recrystallized from 1448 ml of dimethylformamide. The mass of the purified substance is 43.96 g (82% of theoretical) in the form of colorless crystals with a basic substance content of 98.21% (HPLC) and a melting point of 298-300 ° C
Брутто-формула: C23H26Br2N6O7S Найдено (%): С 39,99; Н 3,78; N 12,13. Вычислено (%): С 40,02; Н 3,80; Br 23,15; N 12,17; О 16,22; S 4,64.Empirical formula: C 23 H 26 Br 2 N 6 O 7 S Found (%): C 39.99; H 3.78; N 12.13. Calculated (%): C 40.02; H 3.80; Br 23.15; N 12.17; About 16.22; S 4.64.
ИК-спектр, v/см-1: 3105, 3038, 3008, 2979, 2886, 1663, 1403, 1312, 1278, 1169, 1112, 1040, 993, 965, 949, 733, 712, 624.IR spectrum, v/cm -1 : 3105, 3038, 3008, 2979, 2886, 1663, 1403, 1312, 1278, 1169, 1112, 1040, 993, 965, 949, 733, 712, 624.
Спектр ЯМР 1Н (ДМСО-d6, δ, м.д.): 1.10-1.14 (т, 3Н, СН3), 1.95-2.19 (м, 12Н, СН3СО), 2.89 (кв, 2Н, СН2), 3.44-3.49 (с, 2Н, СН2), 4.45-4.68 (м, 2Н, СН), 6.17-7.04 (м, 4Н, СН), 8.15 (с, Н, тиофен)1H NMR spectrum (DMSO-d6, δ, ppm ): 1.10-1.14 (t, 3H, CH 3 ), 1.95-2.19 (m, 12H, CH 3 CO), 2.89 (q, 2H, CH 2 ), 3.44-3.49 (s, 2H, CH 2 ), 4.45-4.68 (m, 2H, CH), 6.17-7.04 (m, 4H, CH), 8.15 (s, H, thiophene)
Спектр ЯМР 13С (ДМСО-d6, δ, м.д.): 15.44 (С, СН3, EtO), 21.56, 22.34 (С, СН3, СН3СО); 62.82, 63.73, 66.08, 71.47, 71.97, 73.67 (С, СН), 66.73 (С, СН2), 68.91 (С, СН2, EtO), 112.72, 114.08, 132.57(С, С тиофен), 128.60 (С, СН тиофен), 162.83 (С, СО тиофен), 167.83,168.13,168.62,169.32, 169.73 (С, СО, СН3СО).13C NMR spectrum (DMSO-d6, δ, ppm): 15.44 (C, CH 3 , EtO), 21.56, 22.34 (C, CH 3 , CH 3 CO); 62.82; 63.73; 66.08; 71.47 ; 71.97 ; , CH thiophene), 162.83 (C, CO thiophene), 167.83,168.13,168.62,169.32, 169.73 (C, CO, CH 3 CO).
Возможность осуществления заявляемого изобретения подтверждается примером конкретного выполнения исследования анальгетической активности 4-(3,4-дибромтиофенкарбонил)-10-(2-этоксиацетил)-2,6,8,12-тетраацетил-2,4,6,8,10,12-гексаазатетрацикло[5,5,0,03,11 ,0 5,9]додекана в сравнении с референс-препаратом Трамадолом, доказывающего, что выявленные признаки решают поставленную задачу.The possibility of carrying out the claimed invention is confirmed by an example of a specific study of the analgesic activity of 4-(3,4-dibromothiophenecarbonyl)-10-(2-ethoxyacetyl)-2,6,8,12-tetraacetyl-2,4,6,8,10,12 -hexaazatetracyclo[5.5.0.0 3.11 .0 5.9 ]dodecane in comparison with the reference drug Tramadol, proving that the identified signs solve the problem.
Пример 2Example 2
Эксперименты были выполнены на 194 аутбредных мышах сток CD1 обоих полов, (7-8 недель, масса 22-27 г) первой категории конвенциональных, полученных из отдела экспериментального биомоделирования НИИФиРМ им. Е.Д. Гольдберга Томского НИМЦ (сертификат здоровья животных). Содержание животных и дизайн экспериментов были одобрены Биоэтическим комитетом НИИФиРМ им. Е.Д. Гольдберга и соответствовали директиве 2010/63/EU Европейского парламента и Совета Европейского союза по охране животных, используемых в научных целях [Директива 2010/63/EU Европейского парламента и Совета Европейского союза по охране животных, используемых в научных целях (пер. с англ.). СП. 2012, 48]; ГОСТ 33044-2014 «Принципы надлежащей лабораторной практики», 01.08.2015.Experiments were performed on 194 outbred CD1 stock mice of both sexes (7-8 weeks, weight 22-27 g) of the first category of conventional, obtained from the Department of Experimental Biomodeling of the Research Institute of Medicine and Medicine. E.D. Goldberg of the Tomsk NIMC (certificate of animal health). The maintenance of the animals and the design of the experiments were approved by the Bioethical Committee of the NIIFiRM. E.D. Goldberg and complied with Directive 2010/63/EU of the European Parliament and of the Council of the European Union on the protection of animals used for scientific purposes [Directive 2010/63/EU of the European Parliament and of the Council of the European Union on the protection of animals used for scientific purposes (translated from English. ). SP. 2012, 48]; GOST 33044-2014 "Principles of Good Laboratory Practice", 01.08.2015.
Каждому животному внутри группы присваивали индивидуальный номер от 1 до 16, помечаемый с помощью меток фукорцином. Мышей распределяли на группы рандомизированно, используя в качестве критерия массу тела, так, чтобы индивидуальное значение массы не отклонялось от среднего значения в пределах одного пола более чем на ±10%. Данные (вес и номер) отобранных животных ранжировали в порядке убывания веса, используя для этого компьютерную программу Excel, имеющую команду SORT.Each animal within the group was assigned an individual number from 1 to 16, labeled with fucorcin. Mice were divided into groups randomly, using body weight as a criterion, so that the individual weight value did not deviate from the mean value within one sex by more than ±10%. The data (weight and number) of the selected animals were ranked in descending order of weight using an Excel computer program with the SORT command.
Статистическая обработка полученных результатов проведена методами вариационной статистики с использованием программного обеспечения Statistica 6.0. Для всех данных подсчитаны среднее значение (X) и стандартная ошибка среднего (т), которые вместе со значением п (количество вариант в группе) представлены в итоговых таблицах. Различие сравниваемых величин считали достоверным в том случае, если вероятность их тождества была меньше 5% (Р<0,05). Используя выборочные коэффициенты асимметрии и эксцесса, оценивали степень приближения закона распределения исследуемого признака к нормальному. В случаях нормального распределения признаков для статистической оценки применяли параметрический t-критерий Стьюдента. При отклонениях распределений признака от нормального вида для независимых выборок использовали непараметрический критерий U-критерий Уилкоксона-Манна-Уитни. Для выявления достоверности различий качественных показателей использовали критерий углового преобразования Фишера [Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Под ред. Миронова А.Н., Бунатян Н.Д. и др. М., ЗАО «Гриф и К». 2012].Statistical processing of the obtained results was carried out by the methods of variation statistics using the Statistica 6.0 software. For all data, the mean value (X) and the standard error of the mean (m) were calculated, which, together with the value of n (the number of options in the group), are presented in the final tables. The difference between the compared values was considered significant if the probability of their identity was less than 5% (P<0.05). Using the sample coefficients of asymmetry and kurtosis, the degree of approximation of the distribution law of the studied trait to the normal one was estimated. In cases of normal distribution of signs, a parametric Student's t-test was used for statistical evaluation. When the distributions of the trait deviated from the normal form for independent samples, the nonparametric Wilcoxon-Mann-Whitney U-test was used. To identify the reliability of differences in qualitative indicators used the criterion of angular transformation of Fisher [Guidelines for conducting preclinical studies of drugs. Ed. Mironova A.N., Bunatyan N.D. and others. M., CJSC Grif and K. 2012].
Определение острой токсичности (I).Definition of acute toxicity (I).
При определении острой токсичности 4-(3,4-дибромтиофенкарбонил)-10-(2-этоксиацетил)-2,6,8,12-тетраацетил-2,4,6,8,10,12-гексаазатетрацикло[5,5,0,03,11 ,0 5,9] додекана (I) вводили 7 аутбредным мышам-самкам и 7 аутбредным мышам-самцам сток CD1 однократно внутрижелудочно в максимальной дозе 2000 мг/кг (в связи с плохой растворимостью в воде 6,25 г/л) в объеме 0,5 мл водно-твинового раствора. В течение 2 недель наблюдения гибели животных не отмечалось, мыши не имели отклонений в состоянии здоровья и поведении, патологические рефлексы не фиксировались. В связи с невозможностью определения LD50 исследуемое вещество (I) отнесено к 3 классу опасности - «малотоксичные средства» в соответствии с ГОСТ 12.1007-76 «Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности» и «Руководством по проведению доклинических исследований лекарственных средств, 2012» [Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Под ред. Миронова А.Н., Бунатян Н.Д. и др. М., ЗАО «Гриф и К». 2012].When determining the acute toxicity of 4-(3,4-dibromothiophenecarbonyl)-10-(2-ethoxyacetyl)-2,6,8,12-tetraacetyl-2,4,6,8,10,12-hexaazatetracyclo[5,5, 0.0 3.11 .0 5.9 ] dodecane (I) was administered to 7 outbred female mice and 7 outbred male mice stock CD1 once intragastrically at a maximum dose of 2000 mg/kg (due to poor solubility in water 6.25 g/l) in a volume of 0.5 ml of a water-tween solution. Within 2 weeks of observation, the death of animals was not observed, the mice had no deviations in the state of health and behavior, and pathological reflexes were not recorded. Due to the impossibility of determining the LD50, the test substance (I) is assigned to the 3rd hazard class - “low-toxic agents” in accordance with GOST 12.1007-76 “Harmful substances. Classification and general safety requirements” and “Guidelines for conducting preclinical trials of medicinal products, 2012” [Guidelines for conducting preclinical trials of medicinal products. Ed. Mironova A.N., Bunatyan N.D. and others. M., CJSC Grif and K. 2012].
Для оценки антиноцицептивной активности в условиях модели «Уксусные корчи», теста «Механической компрессии здоровой лапы» (Rendal-Selitto), теста «Тепловой иммерсии хвоста» [Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Под ред. Миронова А.Н., Бунатян Н.Д. и др. М., ЗАО «Гриф и К». 2012; Barrot М. Tests and models of nociception and pain in rodents. Neuroscience. 2012, 211: 39-50] тестируемое вещество (I) вводили мышам внутрижелудочно через зонд в диапазоне доз 25, 50, 100 и 200 мг/кг однократно ежесуточно и в течение 3 дней. Используемая суточная доза референс-препарата Трамадола для мышей (10 мг/кг, растворитель - вода очищенная) соответствовала среднесуточной дозе для человека (согласно инструкции для применения Трамадола). Животные группы негативного контроля получали растворитель (вода очищенная) в аналогичном режиме и пути введения. Значения массы тела животных использовали для расчета доз тестируемых веществ. Отбор определенного количества тестируемого средства производили в рабочей комнате с бактерицидным рециркулятором, который обеспечивает безопасность процедур и чистоту приготовления тестируемых веществ для введения. Необходимое количество веществ для введений готовилось ответственным за провизорскую работу сотрудником лаборатории. Приготовление доз основывалось на значениях доз и указанном объеме введения. Эвтаназию животных по окончании экспериментов осуществляли кранио-цервикальной дислокацией.To assess antinociceptive activity in the conditions of the "Vinegar writhing" model, the "Mechanical compression of a healthy paw" test (Rendal-Selitto), the "Thermal immersion of the tail" test [Guidelines for conducting preclinical studies of drugs. Ed. Mironova A.N., Bunatyan N.D. and others. M., CJSC Grif and K. 2012; Barrot M. Tests and models of nociception and pain in rodents. neuroscience. 2012, 211: 39-50] the test substance (I) was intragastrically administered to mice through a tube in the dose range of 25, 50, 100 and 200 mg/kg once daily and for 3 days. The used daily dose of the reference drug Tramadol for mice (10 mg/kg, solvent - purified water) corresponded to the average daily dose for humans (according to the instructions for the use of Tramadol). Animals of the negative control group received the solvent (purified water) in a similar mode and route of administration. The body weight values of the animals were used to calculate the doses of the test substances. The selection of a certain amount of the test agent was carried out in a working room with a bactericidal recirculator, which ensures the safety of procedures and the cleanliness of the preparation of test substances for administration. The required amount of substances for injections was prepared by the laboratory employee responsible for pharmaceutical work. The preparation of doses was based on the values of the doses and the indicated volume of administration. Euthanasia of the animals at the end of the experiments was carried out by cranio-cervical dislocation.
Исследование анальгетической активности 4-(3,4-дибромтиофенкарбонил)-10-(2-этоксиацетил)-2,6,8,12-тетраацетил-2,4,6,8,10,12-гексаазатетрацикло[5,5,0,03,11 ,0 5,9] додекана (I) в сравнении с референс-препаратом Трамадолом в тесте «Уксусные корчи» (Abdominal constriction test).Study of the analgesic activity of 4-(3,4-dibromothiophenecarbonyl)-10-(2-ethoxyacetyl)-2,6,8,12-tetraacetyl-2,4,6,8,10,12-hexaazatetracyclo[5,5,0 .0 3.11 .0 5.9 ] dodecane (I) in comparison with the reference drug Tramadol in the test "Vinegar writhing" (Abdominal constriction test).
Тест «Уксусные корчи» (Abdominal constriction test) направлен на исследование острой висцеральной и соматически глубокой боли [Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Под ред. Миронова А.Н., Бунатян Н.Д. и др. М., ЗАО «Гриф и К». 2012; Barrot М. Tests and models of nociception and pain in rodents. Neuroscience. 2012, 211: 39-50]. Специфическую болевую реакцию - «корчи» (характерные движения животных, включающие сокращения брюшных мышц, чередующиеся с их расслаблением, вытягиванием задних конечностей и прогибанием спины) - вызывали внутрибрюшинным введением 0,75% раствора уксусной кислоты (ГОСТ 61-75) мышам в дозе 0,1 мл/10 г массы тела. Анальгезирующий эффект оценивали по способности потенциального лекарственного средства (в течение 15 мин после инъекции) уменьшать (в %) количество «корчей» по сравнению с контрольной группой животных (критерий эффективности - снижение болевой реакции не менее чем на 50%) и латентному времени наступления болевой реакции. В данной серии экспериментов использовали следующие группы аутбредных мышей-самцов сток CD1:The test "Vinegar writhing" (Abdominal constriction test) is aimed at the study of acute visceral and somatic deep pain [Guidelines for conducting preclinical studies of drugs. Ed. Mironova A.N., Bunatyan N.D. and others. M., CJSC Grif and K. 2012; Barrot M. Tests and models of nociception and pain in rodents. neuroscience. 2012, 211: 39-50]. A specific pain reaction - "writhing" (characteristic movements of animals, including contractions of the abdominal muscles, alternating with their relaxation, stretching of the hind limbs and arching of the back) - was induced by intraperitoneal injection of 0.75% acetic acid solution (GOST 61-75) to mice at a dose of 0 .1 ml/10 g of body weight. The analgesic effect was assessed by the ability of a potential drug (within 15 minutes after injection) to reduce (in%) the number of "writhings" compared to the control group of animals (the criterion of effectiveness is a decrease in pain response by at least 50%) and the latent time of onset of pain reactions. The following groups of outbred CD1 stock male mice were used in this series of experiments:
1. Негативный контроль - мышам вводили воду очищенную в объеме 0,2 мл/ 20 г мышь однократно ежесуточно внутрижелудочно через зонд в течение 3 сут и последний раз за 1 ч до внутрибрюшинной инъекции 0,75% раствора уксусной кислоты в объеме 0,1 мл/ 10 г (n=11);1. Negative control - mice were injected with purified water in a volume of 0.2 ml / 20 g mouse once daily intragastrically through a tube for 3 days and the last time 1 hour before intraperitoneal injection of 0.75% acetic acid solution in a volume of 0.1 ml / 10 g (n=11);
2. Позитивный контроль - мышам вводили Трамадол в дозе 10 мг/кг в объеме воды очищенной 0,2 мл/ 20 г мышь однократно внутрижелудочно через зонд в течение 3 сут и последний раз за 1 ч до внутрибрюшинной инъекции 0,75% уксусной кислоты в объеме 0,1 мл/ 10 г(n=9);2. Positive control - mice were injected with Tramadol at a dose of 10 mg / kg in a volume of purified water 0.2 ml / 20 g mouse once intragastrically through a tube for 3 days and the last time 1 hour before intraperitoneal injection of 0.75% acetic acid in volume 0.1 ml/10 g (n=9);
3. Анальгетик - мышам вводили (I) в дозе 25 мг/кг в объеме растворителя 0,2 мл/ 20 г мышь однократно внутрижелудочно через зонд в течение 3 сут и последний раз за 1 ч до внутрибрюшинной инъекции 0,75% раствора уксусной кислоты в объеме 0,1 мл/ 10 г (n=10);3. Analgesic - mice were injected with (I) at a dose of 25 mg/kg in a solvent volume of 0.2 ml/20 g mouse once intragastrically through a tube for 3 days and the last time 1 hour before intraperitoneal injection of 0.75% acetic acid solution in a volume of 0.1 ml/10 g (n=10);
4. Анальгетик - мышам вводили (I) в дозе 50 мг/кг в объеме растворителя 0,2 мл/ 20 г мышь однократно внутрижелудочно через зонд в течение 3 сут и последний раз за 1 ч до внутрибрюшинной инъекции 0,75% раствора уксусной кислоты в объеме 0,1 мл/ 10 г (n=10);4. Analgesic - mice were injected (I) at a dose of 50 mg/kg in a solvent volume of 0.2 ml/20 g mouse once intragastrically through a tube for 3 days and the last time 1 hour before intraperitoneal injection of 0.75% acetic acid solution in a volume of 0.1 ml/10 g (n=10);
5. Анальгетик - мышам вводили (I) в дозе 100 мг/кг в объеме растворителя 0,2 мл/ 20 г мышь однократно внутрижелудочно через зонд в течение 3 сут и последний раз за 1 ч до внутрибрюшинной инъекции 0,75% раствора уксусной кислоты в объеме 0,1 мл/ 10 г (n=10);5. Analgesic - mice were injected with (I) at a dose of 100 mg/kg in a solvent volume of 0.2 ml/20 g mouse once intragastrically through a tube for 3 days and the last time 1 hour before intraperitoneal injection of 0.75% acetic acid solution in a volume of 0.1 ml/10 g (n=10);
6. Анальгетик - мышам вводили (I) в дозе 200 мг/кг в объеме растворителя 0,2 мл/ 20 г мышь однократно внутрижелудочно через зонд в течение 3 сут и последний раз за 1 ч до инъекции 0,75% раствора уксусной кислоты в объеме 0,1 мл/10 г (n=10).6. Analgesic - mice were injected with (I) at a dose of 200 mg/kg in a solvent volume of 0.2 ml/20 g mouse once intragastrically through a tube for 3 days and the last time 1 hour before the injection of a 0.75% solution of acetic acid in volume 0.1 ml/10 g (n=10).
Как видно из таблицы 1, у животных группы негативного контроля фиксировали выраженную болевая реакция в течение 15 мин наблюдения, которая заключалась в развитии уксусных «корчей» (22,6±2,1) при латентном времени их наступления 222,2±17,9 с.As can be seen from Table 1, in animals of the negative control group, a pronounced pain reaction was recorded within 15 minutes of observation, which consisted in the development of vinegar "writhings" (22.6 ± 2.1) with a latent time of their onset of 222.2 ± 17.9 with.
Введение мышам Трамадола однократно в терапевтической дозе 10 мг/кг купировало болевой ответ (22,1%) за счет снижения количества «корчей» в 1,3 раза и статистически значимого повышения латентного времени развития болевой реакции относительно такового показателя группы негативного контроля (таблица 1).A single administration of Tramadol to mice at a therapeutic dose of 10 mg/kg stopped the pain response (22.1%) due to a 1.3-fold decrease in the number of "writhing" and a statistically significant increase in the latent time of pain reaction development relative to that of the negative control group (Table 1 ).
Доза 25 мг/кг оказалась эффективной (33,6%), поскольку выявлено статистически значимое снижение количества «корчей» в 1,5 раза и увеличение латентного времени наступления болевого ответа в 1,4 раза (Р<0,05) (таблица 1).A dose of 25 mg/kg was effective (33.6%), as a statistically significant decrease in the number of "writhing" by 1.5 times and an increase in the latent time of pain response by 1.4 times (P<0.05) were revealed (Table 1 ).
В случае введения (I) в дозе 50 мг/кг отмечалось его обезболивающее действие (35,8%), которое выражалось в снижении количества «корчей» в 1,6 раза (Р<0,05), увеличении латентного времени наступления болевого ответа в 1,6 раза (Р<0,05) по сравнению с соответствующим значением негативного контроля (таблица 1).In the case of the introduction of (I) at a dose of 50 mg/kg, its analgesic effect was noted (35.8%), which was expressed in a decrease in the number of "writhing" by 1.6 times (P<0.05), an increase in the latent time of pain response 1.6 times (P<0.05) compared with the corresponding value of the negative control (table 1).
Последующее увеличение дозы потенциального анальгетика до 100 мг/кг приводило к увеличению антиноцицептивного действия до 57,5%, поскольку все изучаемые показатели оказались статистически значимы по сравнению с соответствующими значениями негативного контроля (таблица 1). Следует отметить преимущественную активность анальгетика по сравнению с Трамадолом по снижению количества «корчей», которое оказалось ниже в 1,8 раза (Р<0,01) соответствующего значения референс-препарата. Повышение дозы анальгетика до 200 мг/кг не способствовало увеличению эффективности, поскольку анальгетическая активность оказалась 53,1% (Р<0,01) при статистически достоверном повышении латентного времени болевого ответа относительно соответствующего значения негативного контроля. Необходимо подчеркнуть, что анальгетик превышал активность Трамадола в 1,7 раза (Р<0,01) по выраженности болевого ответа.A subsequent increase in the dose of a potential analgesic to 100 mg/kg led to an increase in the antinociceptive effect up to 57.5%, since all the studied parameters were statistically significant compared to the corresponding values of the negative control (table 1). It should be noted the predominant activity of the analgesic in comparison with Tramadol in reducing the number of "writhing", which turned out to be 1.8 times lower (P<0.01) than the corresponding value of the reference drug. Increasing the dose of the analgesic to 200 mg/kg did not contribute to an increase in efficacy, since the analgesic activity was 53.1% (P<0.01) with a statistically significant increase in the latent time of the pain response relative to the corresponding value of the negative control. It should be emphasized that the analgesic exceeded the activity of Tramadol by 1.7 times (P<0.01) in terms of the severity of the pain response.
Таким образом, исследуемое вещество 4-(3,4-дибромтиофенкарбонил)-10-(2-этоксиацетил)-2,6,8,12-тетраацетил-2,4,6,8,10,12-гексаазатетрацикло[5,5,0,03,11 ,0 5,9] додекан (I) в тесте «Уксусные корчи» (Abdominal constriction test) проявляет выраженную анальгетическую активность в диапазоне доз 25-200 мг/кг, сравнимую с Трамадолом в дозах 25 и 50 мг/кг, превышающую эффективность референс-препарата в дозах 100 и 200 мг/кг. Снижение болевой реакции более чем на 50% в условиях модели «Уксусных корчей», коррелирующей с клинической ситуацией острого перитонита, свидетельствует о высокой потенциальной возможности новой молекулы в качестве анальгетического средства.Thus, the test substance 4-(3,4-dibromothiophenecarbonyl)-10-(2-ethoxyacetyl)-2,6,8,12-tetraacetyl-2,4,6,8,10,12-hexaazatetracyclo[5,5 ,0.0 3.11 .0 5.9 ] dodecane (I) in the test "Acetic writhing" (Abdominal constriction test) shows a pronounced analgesic activity in the dose range of 25-200 mg/kg, comparable to Tramadol in doses of 25 and 50 mg/kg, exceeding the effectiveness of the reference drug at doses of 100 and 200 mg/kg. The decrease in pain response by more than 50% under the conditions of the "Vinegar writhing" model, which correlates with the clinical situation of acute peritonitis, indicates a high potential of the new molecule as an analgesic agent.
Исследование анальгетической активности 4-(3,4-дибромтиофенкарбонил)-10-(2-этоксиацетил)-2,6,8,12-тетраацетил-2,4,6,8,10,12-гексаазатетрацикло[5,5,0,03,11 ,0 5,9] додекана (I) в сравнении с референс-препаратом Трамадолом в тесте «Механической компрессии лапы» (Randall-Selitto test).Study of the analgesic activity of 4-(3,4-dibromothiophenecarbonyl)-10-(2-ethoxyacetyl)-2,6,8,12-tetraacetyl-2,4,6,8,10,12-hexaazatetracyclo[5,5,0 .0 3.11 .0 5.9 ] of dodecane (I) in comparison with the reference drug Tramadol in the mechanical paw compression test (Randall-Selitto test).
Изучение анальгетической активности молекулы 4-(3,4-дибромтиофенкарбонил)-10-(2-этоксиацетил)-2,6,8,12-тетраацетил-2,4,6,8,10,12-гексаазатетрацикло-[5,5,0,03,11 ,0 5,9]додекан (I) в тесте «Механической компрессии лапы» проводили с помощью анальгезиметра («Ugo Basile», Италия), разработанного для выполнения точного тестирования анальгетиков на нормальной и воспаленной лапе крыс и мышей по методу Рэндалл-Селитто [Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Под ред. Миронова А.Н., Бунатян Н.Д. и др. М., ЗАО «Гриф и К». 2012; Barrot М. Tests and models of nociception and pain in rodents. Neuroscience. 2012, 211: 39-50]. При увеличении давления на конечность последовательно наблюдали: спинальный рефлекс отдергивания конечности, комплекс супраспинальных двигательных реакций животного, направленных на освобождение конечности, и вокализацию. Регистрировали порог возникновения вокализации (вес в граммах), латентное время наступления болевой реакции, число животных без болевой реакции. Критерием анальгетического эффекта считали достоверное уменьшение интенсивности болевых реакций, оцененной в граммах по силе воздействия на здоровую лапу, латентному времени болевой реакции, числу животных без болевой реакции в динамике (через 1 после введения препаратов) после однократного и курсового ежесуточного трехдневного введения.Study of the analgesic activity of the molecule 4-(3,4-dibromothiophenecarbonyl)-10-(2-ethoxyacetyl)-2,6,8,12-tetraacetyl-2,4,6,8,10,12-hexaazatetracyclo-[5,5 ,0.0 3.11 .0 5.9 ]dodecane (I) in the “Mechanical paw compression” test was performed using an analgesimeter (Ugo Basile, Italy), designed to perform accurate testing of analgesics on normal and inflamed rat paws and mice according to the method of Randall-Selitto [Guidelines for conducting preclinical studies of drugs. Ed. Mironova A.N., Bunatyan N.D. and others. M., CJSC Grif and K. 2012; Barrot M. Tests and models of nociception and pain in rodents. neuroscience. 2012, 211: 39-50]. With increasing pressure on the limb, we successively observed: the spinal limb withdrawal reflex, a complex of supraspinal motor reactions of the animal aimed at releasing the limb, and vocalization. The threshold of vocalization occurrence (weight in grams), the latent time of onset of pain reaction, and the number of animals without pain reaction were recorded. The criterion for the analgesic effect was considered to be a significant decrease in the intensity of pain reactions, estimated in grams by the strength of the effect on a healthy paw, the latent time of the pain reaction, the number of animals without pain reaction in dynamics (in 1 after the administration of the drugs) after a single and course daily three-day administration.
В двух сериях экспериментов (1 серия - однократное введение; 2 серия - курсовое введение в течение 3 сут) использовали следующие группы аутбредных мышей-самцов сток CD1:In two series of experiments (series 1 - single injection; series 2 - course administration for 3 days), the following groups of outbred male stock CD1 mice were used:
1. Негативный контроль - мышам вводили воду очищенную в объеме 0,2 мл/ 20 г мышь внутрижелудочно через зонд однократно и ежесуточно в течение трех дней, в первый и последний день эксперимента введение осуществляли за 1 ч до фиксации вокализации, латентного времени болевой реакции, числа животных без болевой реакции (n=11);1. Negative control - mice were injected with purified water in a volume of 0.2 ml / 20 g mouse intragastrically through a tube once and daily for three days, on the first and last day of the experiment, the introduction was carried out 1 hour before the fixation of vocalization, the latent time of the pain reaction, number of animals without pain reaction (n=11);
2. Позитивный контроль - мышам вводили Трамадол в дозе 10 мг/кг в объеме воды очищенной 0,2 мл/ 20 г мышь внутрижелудочно через зонд однократно и ежесуточно в течение трех дней, в первый и последний день эксперимента введение осуществляли за 1 ч до фиксации вокализации, латентного времени болевой реакции, числа животных без болевой реакции (n=11);2. Positive control - mice were injected with Tramadol at a dose of 10 mg / kg in a volume of purified water 0.2 ml / 20 g mouse intragastrically through a tube once and daily for three days, on the first and last day of the experiment, the administration was carried out 1 hour before fixation vocalization, latent time of pain reaction, number of animals without pain reaction (n=11);
3. Анальгетик - мышам вводили (I) в дозе 25 мг/кг в объеме растворителя 0,2 мл/ 20 г мышь внутрижелудочно через зонд однократно и в течение трех дней, в первый и последний день эксперимента введение осуществляли за 1 ч до фиксации вокализации, латентного времени болевой реакции, числа животных без болевой реакции (n=11);3. Analgesic - mice were injected with (I) at a dose of 25 mg/kg in a solvent volume of 0.2 ml/20 g mice intragastrically through a tube once and for three days, on the first and last day of the experiment, the administration was carried out 1 hour before the fixation of vocalization , latent time of pain reaction, number of animals without pain reaction (n=11);
4. Анальгетик - мышам вводили (I) в дозе 50 мг/кг в объеме растворителя 0,2 мл/ 20 г мышь внутрижелудочно через зонд однократно и в течение трех дней, в первый и последний день эксперимента введение осуществляли за 1 ч до фиксации вокализации, латентного времени болевой реакции, числа животных без болевой реакции (n=10);4. Analgesic - mice were injected with (I) at a dose of 50 mg/kg in a solvent volume of 0.2 ml/20 g mouse intragastrically through a tube once and for three days, on the first and last day of the experiment, the administration was carried out 1 hour before the fixation of vocalization , latent time of pain reaction, number of animals without pain reaction (n=10);
5. Анальгетик - мышам вводили (I) в дозе 100 мг/кг в объеме растворителя 0,2 мл/ 20 г мышь внутрижелудочно через зонд однократно и в течение трех дней, в первый и последний день эксперимента введение осуществляли за 1 ч до фиксации вокализации, латентного времени болевой реакции, числа животных без болевой реакции (n=10);5. Analgesic - mice were injected with (I) at a dose of 100 mg/kg in a solvent volume of 0.2 ml/20 g mouse intragastrically through a tube once and for three days, on the first and last day of the experiment, the administration was carried out 1 hour before the fixation of vocalization , latent time of pain reaction, number of animals without pain reaction (n=10);
6. Анальгетик - мышам вводили (I) в дозе 200 мг/кг в объеме растворителя 0,2 мл/ 20 г мышь внутрижелудочно через зонд однократно и в течение трех дней, в первый и последний день эксперимента введение осуществляли за 1 ч до фиксации вокализации, латентного времени болевой реакции, числа животных без болевой реакции (n=10).6. Analgesic - mice were injected with (I) at a dose of 200 mg/kg in a solvent volume of 0.2 ml/20 g mouse intragastrically through a tube once and for three days, on the first and last day of the experiment, the administration was carried out 1 hour before the fixation of vocalization , latent time of pain reaction, number of animals without pain reaction (n=10).
На модели «механической гиперальгезии» по Рэндалл-Селитто величина болевого порога (г) составляла в первые (160,2±27,8) и (284,0±65,7) третьи сутки наблюдения у животных группы негативного контроля (таблица 2). Отмечалось повышение латентного времени наступления болевой реакции от 3,0±0,6 с (1 сут) до 5,6±1,4 с (3 сут) и числа животных с максимальной экспозицией от 0 до 9,1%. Изменение исследуемых показателей негативного контроля характерно для этой экспериментальной модели при повторном тестировании животных.On the model of "mechanical hyperalgesia" according to Randall-Selitto, the pain threshold (g) was on the first (160.2±27.8) and (284.0±65.7) third days of observation in animals of the negative control group (Table 2) . There was an increase in the latent time of onset of pain response from 3.0±0.6 s (1 day) to 5.6±1.4 s (3 days) and the number of animals with maximum exposure from 0 to 9.1%. The change in the studied parameters of the negative control is typical for this experimental model when the animals are retested.
Порог болевой чувствительности референс-препарата Трамадола оказался сопоставим как при однократном, так и при трехкратном введении и статистически значимым относительно соответствующих показателей негативного контроля (таблица 2). Следует отметить увеличение в 1 сут наблюдения показателя времени болевого ответа в 4,1 раза (Р<0,01), числа мышей без болевой реакции - до 70% (Р<0,01) относительно аналогичных значений негативного контроля. Сходная картина фиксировалась в последующем периоде наблюдения в группе Трамадола: латентное время болевого ответа увеличилось в 1,9 раза (Р<0,05) относительно соответствующего значения негативного контроля, а число мышей с максимальной экспозицией оказалось 50% (Р<0,01) против 0% контроля (таблица 2).The threshold of pain sensitivity of the reference drug Tramadol was comparable with both single and triple administration and statistically significant relative to the corresponding indicators of the negative control (table 2). It should be noted an increase in 1 day of observation of the pain response time indicator by 4.1 times (P<0.01), the number of mice without pain reaction - up to 70% (P<0.01) relative to similar values of the negative control. A similar picture was recorded in the subsequent observation period in the Tramadol group: the latent time of pain response increased by 1.9 times (P<0.05) relative to the corresponding value of the negative control, and the number of mice with the maximum exposure was 50% (P<0.01) against 0% control (table 2).
Статистически значимое повышение порога болевого ответа в первый срок наблюдения отмечалось во всех группах применения соединения (I): 25 мг/кг - в 2,9 раза (Р<0,05), 50 мг/кг - в 3,4 раза, 100 мг/кг - 3,1 раза. 200 мг/кг - 3,9 раза по сравнению с аналогичным значением негативного контроля. Кроме того фиксировалось увеличение латентного времени развития болевой реакции во всех исследуемых группах (I): 25 мг/кг -в 3,3 раза (Р<0,01), 50 мг/кг - в 3,8 раза (Р<0,01), 100 мг/кг - в 3,6 раза (Р<0,01), 200 мг/кг -в 4,5 раза (Р<0,01) относительно соответствующего значения группы негативного контроля. При этом число мышей без проявления болевой реакции составило 60% (25 мг/кг, Р<0,01), 50% (50 мг/кг, Р<0,01), 60% (100 мг/кг, Р<0,01), 90% (25 мг/кг, Р<0,01) против 0% негативного контроля (таблица 2). Следует отметить отсутствие статистически значимых различий с аналогичными значениями группы Трамадола, что свидетельствует о сопоставимости обезболивающей активности соединения (I) и анальгетика с опиодным компонентом механизма действия.A statistically significant increase in the threshold of pain response in the first period of observation was noted in all groups of application of compound (I): 25 mg/kg - 2.9 times (P<0.05), 50 mg/kg - 3.4 times, 100 mg/kg - 3.1 times. 200 mg/kg - 3.9 times compared to the same value of the negative control. In addition, an increase in the latent time of pain reaction development was recorded in all the studied groups (I): 25 mg/kg - 3.3 times (P<0.01), 50 mg/kg - 3.8 times (P<0, 01), 100 mg/kg - 3.6 times (P<0.01), 200 mg/kg - 4.5 times (P<0.01) relative to the corresponding value of the negative control group. The number of mice without pain reaction was 60% (25 mg/kg, P<0.01), 50% (50 mg/kg, P<0.01), 60% (100 mg/kg, P<0.01). .01), 90% (25 mg/kg, P<0.01) versus 0% negative control (Table 2). It should be noted that there were no statistically significant differences with similar values of the Tramadol group, which indicates the comparability of the analgesic activity of compound (I) and the analgesic with the opioid component of the mechanism of action.
Курсовое в течение 3 дней ежесуточно введение соединения (I) во всех дозах 25-200 мг/кг per os приводило к статистически значимому проявлению его антиноцицептивного действия, о чем свидетельствуют изученные показатели. Отмечалось увеличение порога болевой чувствительности: 25 мг/кг - в 2,0 раза (Р<0,01), 50 мг/кг - в 2,1 раза (Р<0,01), 100 мг/кг - в 2,4 раза (Р<0,01), 200 мг/кг - в 2,2 раза (Р<0,01) по сравнению с аналогичным значением негативного контроля.Course for 3 days daily introduction of compound (I) in all doses of 25-200 mg/kg per os led to a statistically significant manifestation of its antinociceptive action, as evidenced by the studied parameters. An increase in the threshold of pain sensitivity was noted: 25 mg/kg - 2.0 times (P<0.01), 50 mg/kg - 2.1 times (P<0.01), 100 mg/kg - 2, 4 times (P<0.01), 200 mg/kg - 2.2 times (P<0.01) compared with the same value of the negative control.
Анализ латентного времени развития болевого ответа позволил выявить сходную направленность эффекта, так как показано увеличении этих показателей относительно соответствующего значения негативного контроля во второй период наблюдения: 25 мг/кг - в 1,9 раза (Р<0,01), 50 мг/кг - в 2,1 раза (Р<0,01), 100 мг/кг - в 2,7 раза (Р<0,01), 200 мг/кг - в 2,5 раза (Р<0,01). Фиксировалось число мышей без проявления болевой реакции, которое составило 70% (25 мг/кг, Р<0,01), 80% (50 мг/кг, Р<0,01), 90% (100 мг/кг, Р<0,01), 80% (200 мг/кг, Р<0,01) против 9,1% животных группы негативного контроля. Отсутствовала статистически значимая разница между всеми показателями групп применения соединения (I) в дозах 25, 50 и 200 мг/кг и таковыми значениями группы Трамадола в этот срок наблюдения, за исключением группы введения (I) в дозе 100 мг/кг (таблица 2). Выявлена статистически значимая преимущественная активность соединения (I) в дозе 100 мг/кг по сравнению с Трамадолом, заключающаяся в повышении латентного времени наступления болевой реакции в 1,4 раза (Р<0,05) и увеличении числа мышей с максимальной экспозицией на 40% (Р<0,01).An analysis of the latent time of pain response development revealed a similar direction of the effect, as these indicators were shown to increase relative to the corresponding value of the negative control in the second observation period: 25 mg/kg - 1.9 times (P<0.01), 50 mg/kg - 2.1 times (P<0.01), 100 mg/kg - 2.7 times (P<0.01), 200 mg/kg - 2.5 times (P<0.01). The number of mice without pain reaction was recorded, which was 70% (25 mg/kg, P<0.01), 80% (50 mg/kg, P<0.01), 90% (100 mg/kg, P<0.01). 0.01), 80% (200 mg/kg, P<0.01) vs. 9.1% of animals in the negative control group. There was no statistically significant difference between all indicators of the groups of application of compound (I) at doses of 25, 50 and 200 mg/kg and those of the Tramadol group at this observation period, with the exception of the administration group (I) at a dose of 100 mg/kg (table 2) . A statistically significant preferential activity of compound (I) at a dose of 100 mg/kg compared to Tramadol was revealed, consisting in an increase in the latent time of onset of a pain reaction by 1.4 times (P<0.05) and an increase in the number of mice with a maximum exposure by 40%. (P<0.01).
Таким образом, в результате исследования анальгетической активности вещества (I) в тесте «Механической компрессии здоровой лапы» {Randall-Selitto test) у аутбредных мышей-самцов сток CD1 при однократном и трехдневном применении продемонстрирована выраженная в разной степени антиноцицептивная активность в диапазоне доз 25-200 мг/кг, сравнимая с эффективностью референс-препарата Трамадола. Выявлена статистически значимая преимущественная активность соединения (I) при курсовом введении в дозе 100 мг/кг по сравнению с Трамадолом.Thus, as a result of the study of the analgesic activity of substance (I) in the “Mechanical compression of a healthy paw” test (Randall-Selitto test) in outbred male mice stock CD1 with a single and three-day application, antinociceptive activity, expressed to varying degrees, was demonstrated in the dose range of 25- 200 mg/kg, comparable to the effectiveness of the reference drug Tramadol. Statistically significant preferential activity of compound (I) was revealed at a course administration at a dose of 100 mg/kg compared to Tramadol.
Исследование анальгетической активности 4-(3,4-дибромтиофенкарбонил)-10-(2-этоксиацетил)-2,6,8,12-тетраацетил-2,4,6,8,10,12-гексаазатетрацикло[5,5,0,03,11 ,0 5,9]додекана (I) в сравнении с референс-препаратом Трамадолом в тесте исследования антиноцицептивного действия на модели боли центрального генеза «Тепловой иммерсии хвоста» у аутбредных мышей-самцов CD1.Study of the analgesic activity of 4-(3,4-dibromothiophenecarbonyl)-10-(2-ethoxyacetyl)-2,6,8,12-tetraacetyl-2,4,6,8,10,12-hexaazatetracyclo[5,5,0 , 0 3.11 .0 5.9 ]dodecane (I) in comparison with the reference drug Tramadol in the test of the study of antinociceptive effects on the model of pain of central genesis "Thermal immersion of the tail" in outbred male CD1 mice.
Тест тепловой иммерсии хвоста (tail immersion) основан на спинальном флексорном рефлексе в ответ на погружение хвоста в горячую воду [[Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Под ред. Миронова А.Н., Бунатян Н.Д. и др. М., ЗАО «Гриф и К». 2012; Barrot М. Tests and models of nociception and pain in rodents. Neuroscience. 2012, 211: 39-50]. В условиях этого метода площадь теплового раздражения большая и нагревание кожной поверхности происходит быстрее. В этой связи не происходит активации терморецепторов, а сразу активируются С-волокна полимодальных ноцицепторов, Ad-волокна полимодальных ноцицепторов, полимодальные ноцицепторы и высокопороговые механорецепторы. Болевое раздражение моделировали погружением хвоста в горячую воду температурой 52°С (от 45 до 54°С). Регистрировали латентный период отдергивания хвоста. Как правило, величина латентного периода реакции в контрольной группе находится в диапазоне от 5 до 30 с (чаще всего от 7 до 12 с). Удлинение времени реакции интерпретируется как обезболивающее действие. Во избежание повреждения тканей не нагревали хвост более 30 с. Критерием анальгетического эффекта считали достоверное увеличение латентного периода реакции после введения вещества. При обработке полученных результатов рассчитывали величину максимально возможного эффекта (МВЭ). % МВЭ=ЛП0 - ЛПк/(30 - ЛПк) × 100, где ЛП0 - латентный период ноцицептивной реакции в опытной группе; ЛПк - латентный период ноцицептивной реакции в контрольной группе; 30 с - максимальное время экспозиции для мышей. Одним из критериев, характеризующих анальгетическую активность исследуемого вещества, является количество животных с максимальным проявлением обезболивающего эффекта -экспозицией хвоста в течение 30 с в горячей воде.The tail immersion test is based on the spinal flexor reflex in response to tail immersion in hot water [[Guidelines for conducting preclinical drug studies. Ed. Mironova A.N., Bunatyan N.D. and others. M., CJSC Grif and K. 2012; Barrot M. Tests and models of nociception and pain in rodents. neuroscience. 2012, 211: 39-50]. Under the conditions of this method, the area of thermal irritation is large and the heating of the skin surface occurs faster. In this regard, there is no activation of thermoreceptors, but C-fibers of polymodal nociceptors, Ad-fibers of polymodal nociceptors, polymodal nociceptors and high-threshold mechanoreceptors are immediately activated. Pain stimulation was simulated by immersing the tail in hot water at a temperature of 52°C (from 45 to 54°C). Tail flick latency was recorded. As a rule, the value of the latent period of the reaction in the control group is in the range from 5 to 30 s (most often from 7 to 12 s). The prolongation of the reaction time is interpreted as an analgesic effect. To avoid tissue damage, the tail was not heated for more than 30 s. The criterion for the analgesic effect was considered to be a significant increase in the latent period of the reaction after the administration of the substance. When processing the obtained results, the value of the maximum possible effect (MPE) was calculated. % MVE=LP 0 - LP to /(30 - LP to ) × 100, where LP 0 - latent period of nociceptive reaction in the experimental group; LP to - latent period of nociceptive reaction in the control group; 30 s is the maximum exposure time for mice. One of the criteria characterizing the analgesic activity of the test substance is the number of animals with the maximum manifestation of the analgesic effect - exposure of the tail for 30 s in hot water.
В данной серии экспериментов использовали следующие группы аутбредных мышей-самцов CD1:The following groups of outbred CD1 male mice were used in this series of experiments:
1. Негативный контроль - мышам вводили воду очищенную в объеме 0,2 мл/ 20 г мышь однократно внутрижелудочно через зонд за 1 ч до теплового раздражения хвоста (n=12);1. Negative control - mice were injected with purified water in a volume of 0.2 ml / 20 g mouse once intragastrically through a tube 1 hour before thermal stimulation of the tail (n=12);
2. Позитивный контроль - мышам вводили Трамадол в дозе 10 мг/кг в объеме воды очищенной 0,2 мл/ 20 г мышь однократно внутрижелудочно через зонд за 1 ч до теплового раздражения хвоста (n=10);2. Positive control - mice were injected with Tramadol at a dose of 10 mg/kg in a volume of purified water 0.2 ml/20 g mouse once intragastrically through a tube 1 hour before thermal stimulation of the tail (n=10);
3. Анальгетик - мышам вводили (I) в дозе 25 мг/кг в объеме 0,2 мл/ 20 г мышь водно-твинового раствора однократно внутрижелудочно через зонд за 1 ч до теплового раздражения хвоста (n=10);3. Analgesic - mice were injected with (I) at a dose of 25 mg/kg in a volume of 0.2 ml/20 g mouse water-tween solution once intragastrically through a tube 1 hour before thermal stimulation of the tail (n=10);
4. Анальгетик - мышам вводили (I) в дозе 50 мг/кг в объеме 0,2 мл/ 20 г мышь водно-твинового раствора однократно внутрижелудочно через зонд за 1 ч до теплового раздражения хвоста (n=10);4. Analgesic - mice were injected with (I) at a dose of 50 mg/kg in a volume of 0.2 ml/20 g mouse water-tween solution once intragastrically through a tube 1 hour before thermal stimulation of the tail (n=10);
5. Анальгетик - мышам вводили (I) в дозе 100 мг/кг в объеме 0,2 мл/ 20 г мышь водно-твинового раствора однократно внутрижелудочно через зонд за 1 ч до теплового раздражения хвоста (n=10);5. Analgesic - mice were injected with (I) at a dose of 100 mg/kg in a volume of 0.2 ml/20 g mouse water-tween solution once intragastrically through a tube 1 hour before thermal stimulation of the tail (n=10);
6. Анальгетик - мышам вводили (I) в дозе 200 мг/кг в объеме 0,2/ 20 г мышь водно-твинового раствора однократно внутрижелудочно через зонд за 1 ч до теплового раздражения хвоста (n=10).6. Analgesic - mice were injected with (I) at a dose of 200 mg/kg in a volume of 0.2/20 g mouse water-tween solution once intragastrically through a tube 1 hour before thermal stimulation of the tail (n=10).
Как представлено в таблице 3, латентное время болевого ответа (9,1±1,2 с) у животных группы негативного контроля свидетельствует о воспроизведении данной модели, что позволяет корректно оценить результаты исследования нового анальгетика.As shown in Table 3, the latent time of the pain response (9.1±1.2 s) in the animals of the negative control group indicates the reproduction of this model, which makes it possible to correctly evaluate the results of the study of the new analgesic.
Антиноцицептивное действие Трамадола заключалось в статистически достоверном увеличении латентного времени болевого ответа в 2,1 раза относительно соответствующего значения контроля, при этом максимально выраженный эффект составил 49,8% (таблица 3).The antinociceptive effect of Tramadol consisted in a statistically significant increase in the latent time of the pain response by 2.1 times relative to the corresponding control value, while the most pronounced effect was 49.8% (table 3).
Исследуемое лекарственное средство продемонстрировало выраженное обезболивающее действие при введении во всех дозах (таблица 3). В случае применения дозы 25 мг/кг выявлена максимальная активность (75,6%), превышающая таковой показатель негативного контроля в 2,7 раза (Р<0,01) и Трамадола в 1,3 раза (Р<0,05). Тогда как в результате применения доз 50, 100 и 200 мг/кг значения болевого ответа имели статистически значимую разницу только с результатом негативного контроля, а показатели максимально выраженного эффекта оказались сравнимы и составили 60,8%, 70,3%, 69,9% соответственно против 49,8% группы Трамадола. Кроме того выявлены животные с максимальным проявлением обезболивающего эффекта - экспозицией хвоста в течение 30 с в горячей воде: 25 мг/кг - 30% (Р<0,01), 50 мг/кг - 30% (Р<0,01), 100 мг/кг - 40% (Р<0,01). Следует отметить, что при введении (I) в дозе 100 мг/кг данный показатель оказался статистически достоверно больше по сравнению с аналогичным значением Трамадола (40% против 10%).The study drug showed a pronounced analgesic effect at all doses (table 3). In the case of a dose of 25 mg/kg, the maximum activity (75.6%) was revealed, exceeding that of the negative control by 2.7 times (P<0.01) and Tramadol by 1.3 times (P<0.05). Whereas, as a result of the use of doses of 50, 100 and 200 mg/kg, the pain response values had a statistically significant difference only with the result of the negative control, and the indicators of the most pronounced effect were comparable and amounted to 60.8%, 70.3%, 69.9% respectively against 49.8% of the Tramadol group. In addition, animals were identified with the maximum manifestation of the analgesic effect - exposure of the tail for 30 seconds in hot water: 25 mg/kg - 30% (P<0.01), 50 mg/kg - 30% (P<0.01), 100 mg/kg - 40% (P<0.01). It should be noted that with the introduction of (I) at a dose of 100 mg/kg, this indicator turned out to be statistically significantly higher compared to the same value of Tramadol (40% versus 10%).
Полученные данные свидетельствуют о выраженном антиноцицептивном действии соединения (I) при однократном введении в диапазоне доз 25-200 мг/кг per os в условиях теста термического болевого раздражения «Тепловая иммерсия хвоста». Максимально выраженный эффект во всех дозах превышал пороговый уровень 50%, оказался сравнимым/или превосходил по ряду показателей активность Трамадола.The data obtained indicate a pronounced antinociceptive effect of compound (I) with a single administration in the dose range of 25-200 mg/kg per os under the conditions of the thermal pain stimulation test "Thermal immersion of the tail". The most pronounced effect in all doses exceeded the threshold level of 50%, was comparable / or exceeded the activity of Tramadol in a number of indicators.
Анализ полученных результатов исследования анальгетической активности 4-(3,4-дибромтиофенкарбонил)-10-(2-этоксиацетил)-2,6,8,12-тетраацетил-2,4,6,8,10,12-гексаазатетрацикло[5,5,0,03,11 ,0 5,9]додекана (I) в сравнении с референс-препаратом Трамадолом в тестах соматогенной боли различного генеза «Уксусные корчи» (Abdominal constriction test), «Механической компрессии лапы» (Randall-Selitto test), термического болевого раздражения «Тепловая иммерсия хвоста» (tail immersion) позволяет заключить, что вновь полученное соединение (I) обладает выраженным антиноцицептивным действием даже после однократного применения в диапазоне доз 25-200 мг/кг, сопоставимым и/или превосходящим по ряду показателей активность референс-препарата Трамадола.Analysis of the results of a study of the analgesic activity of 4-(3,4-dibromothiophenecarbonyl)-10-(2-ethoxyacetyl)-2,6,8,12-tetraacetyl-2,4,6,8,10,12-hexaazatetracyclo[5, 5.0.0 3.11 .0 5.9 ]dodecane (I) in comparison with the reference drug Tramadol in the tests of somatogenic pain of various origins "Vinegar writhing" (Abdominal constriction test), "Mechanical compression of the paw" (Randall-Selitto test), thermal pain stimulation "Thermal immersion of the tail" (tail immersion) allows us to conclude that the newly obtained compound (I) has a pronounced antinociceptive effect even after a single application in the dose range of 25-200 mg/kg, comparable and/or superior in a number indicators of the activity of the reference drug Tramadol.
Полученные данные о выраженном обезболивающем действии малотоксичного 4-(3,4-дибромтиофенкарбонил)-10-(2-этоксиацетил)-2,6,8,12-тетраацетил-2,4,6,8,10,12-гексаазатетрацикло[5,5,0,03,11 ,0 5,9]додекана (I) позволяют сделать вывод о перспективности разработки анальгетического средства на основе инновационного соединения для купирования средней и высокой интенсивности болей различного генеза и, с определенной долей вероятности, прогнозировать характер его обезболивающего действия у человека.Obtained data on the pronounced analgesic effect of low-toxic 4-(3,4-dibromothiophenecarbonyl)-10-(2-ethoxyacetyl)-2,6,8,12-tetraacetyl-2,4,6,8,10,12-hexaazatetracyclo[5 ,5,0,0 3,11 ,0 5,9 ]dodecane (I) allow us to conclude that the development of an analgesic agent based on an innovative compound is promising for the relief of moderate and high intensity pain of various origins and, with a certain degree of probability, to predict the nature of its analgesic effect in humans.
Claims (4)
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2786231C1 true RU2786231C1 (en) | 2022-12-19 |
Family
ID=
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2799639C1 (en) * | 2022-12-28 | 2023-07-07 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт проблем химико-энергетических технологий Сибирского отделения Российской академии наук (ИПХЭТ СО РАН) | 4-(3,4-dibromothiophenecarbonyl)-10-isonicotinyl-2,6,8,12-tetraacetyl-2,4,6,8,10,12-hexaazatetra-cyclo[5,5,0,03.11,05.9]dodecane as an analgesic and a method of its obtaining |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB2333292A (en) * | 1988-12-21 | 1999-07-21 | Thiokol Corp | Polycyclic polyamides as precursors for energetic polycyclic polynitramine oxidizers |
| RU2565766C1 (en) * | 2014-11-17 | 2015-10-20 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт фармакологии и регенеративной медицины имени Е.Л. Гольдберга" | 4-(3,4-dibromothiophene carbonyl)-2,6,8,12-tetraacetyl-2,4,6,8,10,12-hexaazatetracyclo[5,5,0,03,11,05,9]dodecane as analgesic agent and method for production thereof |
| RU2736936C1 (en) * | 2020-06-25 | 2020-11-23 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт проблем химико-энергетических технологий Сибирского отделения Российской академии наук (ИПХЭТ СО РАН) | 4,10-di(ethoxyacetyl)-2,6,8,12-tetraacetyl-2,4,6,8,10,12-hexaazatetracyclo[5,5,0,03,11,05,9] dodecane as an analgesic agent and a method for production thereof |
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB2333292A (en) * | 1988-12-21 | 1999-07-21 | Thiokol Corp | Polycyclic polyamides as precursors for energetic polycyclic polynitramine oxidizers |
| RU2565766C1 (en) * | 2014-11-17 | 2015-10-20 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт фармакологии и регенеративной медицины имени Е.Л. Гольдберга" | 4-(3,4-dibromothiophene carbonyl)-2,6,8,12-tetraacetyl-2,4,6,8,10,12-hexaazatetracyclo[5,5,0,03,11,05,9]dodecane as analgesic agent and method for production thereof |
| RU2736936C1 (en) * | 2020-06-25 | 2020-11-23 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт проблем химико-энергетических технологий Сибирского отделения Российской академии наук (ИПХЭТ СО РАН) | 4,10-di(ethoxyacetyl)-2,6,8,12-tetraacetyl-2,4,6,8,10,12-hexaazatetracyclo[5,5,0,03,11,05,9] dodecane as an analgesic agent and a method for production thereof |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Лопатина K.A. и др. Некоторые аспекты фармакокинетики нового анальгетика из класса гексаазаизовюрцитана у крыс. Обзоры по клинической фармакологии и лекарственной терапии, 2019, 17, 4, с.51-56. * |
| Сысолятин С.В. и др. Оптимизация получения тетраацетилгексаазаизовюрцитана. Ползуновский вестник, 2013, 3, с.40-42. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2799639C1 (en) * | 2022-12-28 | 2023-07-07 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт проблем химико-энергетических технологий Сибирского отделения Российской академии наук (ИПХЭТ СО РАН) | 4-(3,4-dibromothiophenecarbonyl)-10-isonicotinyl-2,6,8,12-tetraacetyl-2,4,6,8,10,12-hexaazatetra-cyclo[5,5,0,03.11,05.9]dodecane as an analgesic and a method of its obtaining |
| RU2802003C1 (en) * | 2022-12-28 | 2023-08-22 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт проблем химико-энергетических технологий Сибирского отделения Российской академии наук (ИПХЭТ СО РАН) | 4-(3,4-dibromothiophenecarbonil)-2,6,8,12-tetraacetil-2,4,6,8,10,12-hexaazatetracyclo[5,5,0,03,11,05,9]dodecane derivatives with salicylic acids as analgesics and method for their production |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP6530005B2 (en) | Permanently charged sodium and calcium channel blockers as anti-inflammatory agents | |
| CN103933572B (en) | Treat method, composition and the kit of pain and itch | |
| TWI466668B (en) | Compositions comprising tramadol and celecoxib in the treatment of pain | |
| KR20110044166A (en) | Methods, compositions, and kits for treating pain and pruritis | |
| JP2023500891A (en) | Charged ion channel blockers and methods of use | |
| JP2023500890A (en) | Charged ion channel blockers and methods of use | |
| US20170189428A1 (en) | Dialkyl-phosphinoyl-alkane (Dapa) compounds and compositions for treatment of lower gastrointestinal tract disorders | |
| CN104844513B (en) | The eutectic of C16H25NO2 and former times dry goods | |
| ES2252310T3 (en) | BETA-THIOAMINOACID. | |
| RU2786231C1 (en) | 4-(3,4-dibromothiophene carbonyl)-10-(2-ethoxyacetyl)-2,6,8,12-tetraacetyl-2,4,6,8,10,12-hexaazatetracyclo[5,5,0,03,11,05,9]dodecane as an analgesic agent and method for production thereof | |
| RU2565766C1 (en) | 4-(3,4-dibromothiophene carbonyl)-2,6,8,12-tetraacetyl-2,4,6,8,10,12-hexaazatetracyclo[5,5,0,03,11,05,9]dodecane as analgesic agent and method for production thereof | |
| RU2611623C2 (en) | 4-phenyl pyrrolidinone-2 derivative, nootropic composition thereof, method for producing thereof and method preventive treatment of nervous system disorders | |
| CN115279731A (en) | Charged ion channel blockers and methods of use thereof | |
| RU2769523C1 (en) | 4-(3,4-dibromothyophene carbonyl)-2,6,8,10,12-pentaacetyl-2,4,6,8,10,12 hexaazaisowurtzitane as an analgesic agent and method for its preparation | |
| RU2736936C1 (en) | 4,10-di(ethoxyacetyl)-2,6,8,12-tetraacetyl-2,4,6,8,10,12-hexaazatetracyclo[5,5,0,03,11,05,9] dodecane as an analgesic agent and a method for production thereof | |
| MXPA03002740A (en) | Use of amino acids for treating pain. | |
| RU2808905C1 (en) | 4-(2-etoxyacetyl)-2,6,8,10,12-pentaacetyl-2,4,6,8,10,12-hexaazatetracyclo [5,5,0,03,11,05,9] dodecane as analgetic and method of its obtaining | |
| RU2558148C1 (en) | 4,10-bis((±)-5-benzoyl-2,3-dihydro-1h-pyrrolo[1,2-a]pyrrole-1-carbonyl)-2,6,8,12-tetraacetyl-2,4,6,8,10,12-hexaazatetracyclo[5,5,0,03,11,05,9]dodecane as analgetic means and method of its obtaining | |
| JP6691135B2 (en) | Diarylmethylidene piperidine derivatives and their use as delta opioid receptor agonists | |
| Krylova et al. | Analgesic action of hexaazaisowurtzitane derivative in somatic pain models caused by TRPA1 and TRPV1 Ion channels activation | |
| US20210299071A1 (en) | Substituted benzamides and their use in therapy | |
| AU2018345909A1 (en) | Methods of treating acute or chronic pain | |
| EP3048886B1 (en) | 3, 4-bis-benzylsulfonylbutanenitrile and its pharmaceutical use | |
| JP2013049680A (en) | Use of beta-aminoalcohol in treatment of inflammatory disease and pain | |
| KR20190054559A (en) | Use of carbamate compound for prevention, alleviation or treatment of inflammatory pain or pain caused by inflammatory disease |