RU2783772C1 - Drug of humic nature, which has an immunomodulatory effect - Google Patents
Drug of humic nature, which has an immunomodulatory effect Download PDFInfo
- Publication number
- RU2783772C1 RU2783772C1 RU2022105896A RU2022105896A RU2783772C1 RU 2783772 C1 RU2783772 C1 RU 2783772C1 RU 2022105896 A RU2022105896 A RU 2022105896A RU 2022105896 A RU2022105896 A RU 2022105896A RU 2783772 C1 RU2783772 C1 RU 2783772C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- bog
- humic acids
- peat
- hollow
- molecular weight
- Prior art date
Links
- 230000002519 immonomodulatory Effects 0.000 title claims abstract description 11
- 239000003814 drug Substances 0.000 title description 10
- 229940079593 drugs Drugs 0.000 title description 8
- 239000004021 humic acid Substances 0.000 claims abstract description 44
- 239000003415 peat Substances 0.000 claims abstract description 23
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 7
- FQENQNTWSFEDLI-UHFFFAOYSA-J Tetrasodium pyrophosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O FQENQNTWSFEDLI-UHFFFAOYSA-J 0.000 claims abstract description 4
- 229940048086 sodium pyrophosphate Drugs 0.000 claims abstract description 4
- 235000019818 tetrasodium diphosphate Nutrition 0.000 claims abstract description 4
- 239000001577 tetrasodium phosphonato phosphate Substances 0.000 claims abstract description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 12
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 10
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 abstract description 9
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 abstract description 9
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 abstract description 9
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 abstract description 9
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 abstract description 2
- 238000005020 pharmaceutical industry Methods 0.000 abstract 2
- 229940076144 Interleukin-10 Drugs 0.000 abstract 1
- 229940028885 Interleukin-4 Drugs 0.000 abstract 1
- 210000004027 cells Anatomy 0.000 description 15
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 15
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 13
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 13
- 210000000138 Mast Cells Anatomy 0.000 description 12
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 11
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 10
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 10
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 10
- 229940092253 Ovalbumin Drugs 0.000 description 10
- 210000003743 Erythrocytes Anatomy 0.000 description 9
- 102100016020 IFNG Human genes 0.000 description 9
- 101700086956 IFNG Proteins 0.000 description 9
- 210000002966 Serum Anatomy 0.000 description 9
- 230000001419 dependent Effects 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 8
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 8
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 8
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 6
- 206010053613 Type IV hypersensitivity reaction Diseases 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- 230000005951 type IV hypersensitivity Effects 0.000 description 6
- JPBBNLWRCVBGJS-KCAUTNRHSA-N (4R)-4-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[(2R,3R,4R,5R)-2-acetamido-4-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-5,6-dihydroxy-1-oxohexan-3-yl]oxypropanoyl]amino]propanoyl]amino]-5-amino-5-oxopentanoic acid Chemical compound OC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](C)O[C@H]([C@@H](NC(C)=O)C=O)[C@@H]([C@H](O)CO)O[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1NC(C)=O JPBBNLWRCVBGJS-KCAUTNRHSA-N 0.000 description 5
- 229950001715 glucosaminylmuramyl dipeptide Drugs 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- 210000002683 Foot Anatomy 0.000 description 4
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 4
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 4
- 210000000952 Spleen Anatomy 0.000 description 4
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 4
- 108010001801 Tumor Necrosis Factor-alpha Proteins 0.000 description 4
- 230000001684 chronic Effects 0.000 description 4
- 201000009910 diseases by infectious agent Diseases 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 239000002609 media Substances 0.000 description 4
- 244000045947 parasites Species 0.000 description 4
- 206010002199 Anaphylactic shock Diseases 0.000 description 3
- 208000003455 Anaphylaxis Diseases 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 230000003110 anti-inflammatory Effects 0.000 description 3
- 102000004965 antibodies Human genes 0.000 description 3
- 108090001123 antibodies Proteins 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 102000038129 antigens Human genes 0.000 description 3
- 108091007172 antigens Proteins 0.000 description 3
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 3
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 3
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 3
- 230000002829 reduced Effects 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 2-mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- 229940064005 Antibiotic throat preparations Drugs 0.000 description 2
- 229940083879 Antibiotics FOR TREATMENT OF HEMORRHOIDS AND ANAL FISSURES FOR TOPICAL USE Drugs 0.000 description 2
- 229940042052 Antibiotics for systemic use Drugs 0.000 description 2
- 229940042786 Antitubercular Antibiotics Drugs 0.000 description 2
- 108010062580 Concanavalin A Proteins 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 229940093922 Gynecological Antibiotics Drugs 0.000 description 2
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 2
- 241000283898 Ovis Species 0.000 description 2
- 210000003819 Peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000029662 T-helper 1 type immune response Effects 0.000 description 2
- 229940024982 Topical Antifungal Antibiotics Drugs 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 230000000840 anti-viral Effects 0.000 description 2
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal Effects 0.000 description 2
- 230000001413 cellular Effects 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing Effects 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- LQPNKCGIYXREIT-UHFFFAOYSA-L dipotassium;bicyclo[2.2.1]hept-5-ene-2,3-dicarboxylate Chemical compound [K+].[K+].C1C2C=CC1C(C(=O)[O-])C2C([O-])=O LQPNKCGIYXREIT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 239000003337 fertilizer Substances 0.000 description 2
- 239000002509 fulvic acid Substances 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 2
- 210000002443 helper T lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000002443 hepatoprotective Effects 0.000 description 2
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 229940079866 intestinal antibiotics Drugs 0.000 description 2
- 238000009114 investigational therapy Methods 0.000 description 2
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 2
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 2
- 229940005935 ophthalmologic Antibiotics Drugs 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic Effects 0.000 description 2
- 244000052769 pathogens Species 0.000 description 2
- 230000001575 pathological Effects 0.000 description 2
- 229920001467 poly(styrenesulfonates) Polymers 0.000 description 2
- 229960002796 polystyrene sulfonate Drugs 0.000 description 2
- 239000011970 polystyrene sulfonate Substances 0.000 description 2
- 230000000770 pro-inflamatory Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000000683 Abdominal Cavity Anatomy 0.000 description 1
- 210000003815 Abdominal Wall Anatomy 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K Aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- LKCWBDHBTVXHDL-RMDFUYIESA-N Amikacin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](N)C[C@H]([C@@H]([C@H]1O)O[C@@H]1[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)NC(=O)[C@@H](O)CCN)[C@H]1O[C@H](CN)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O LKCWBDHBTVXHDL-RMDFUYIESA-N 0.000 description 1
- 241000931365 Ampelodesmos mauritanicus Species 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N Ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 206010002198 Anaphylactic reaction Diseases 0.000 description 1
- 210000004369 Blood Anatomy 0.000 description 1
- 210000000988 Bone and Bones Anatomy 0.000 description 1
- 108010074051 C-Reactive Protein Proteins 0.000 description 1
- 102000025380 C-Reactive Protein Human genes 0.000 description 1
- 108009000280 Complement Activation Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N D-Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 229960003722 Doxycycline Drugs 0.000 description 1
- XQTWDDCIUJNLTR-CVHRZJFOSA-N Doxycycline Chemical compound O.O=C1C2=C(O)C=CC=C2[C@H](C)[C@@H]2C1=C(O)[C@]1(O)C(=O)C(C(N)=O)=C(O)[C@@H](N(C)C)[C@@H]1[C@H]2O XQTWDDCIUJNLTR-CVHRZJFOSA-N 0.000 description 1
- 238000001061 Dunnett's test Methods 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 210000000416 Exudates and Transudates Anatomy 0.000 description 1
- 210000002082 Fibula Anatomy 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 description 1
- 229960002743 Glutamine Drugs 0.000 description 1
- 206010018651 Graft versus host disease Diseases 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N HCl Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N HEPES Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 210000000474 Heel Anatomy 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 241000700588 Human alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 1
- 241000701074 Human alphaherpesvirus 2 Species 0.000 description 1
- 241000701024 Human betaherpesvirus 5 Species 0.000 description 1
- -1 IL- 6 Proteins 0.000 description 1
- 210000000987 Immune System Anatomy 0.000 description 1
- 206010021425 Immune system disease Diseases 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 102000003777 Interleukin-1 beta Human genes 0.000 description 1
- 108090000193 Interleukin-1 beta Proteins 0.000 description 1
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 206010067125 Liver injury Diseases 0.000 description 1
- 210000004698 Lymphocytes Anatomy 0.000 description 1
- HJYYPODYNSCCOU-ODRIEIDWSA-N MDL-62769 Chemical compound OC1=C(C(O)=C2C)C3=C(O)C=C1NC(=O)\C(C)=C/C=C/[C@H](C)[C@H](O)[C@@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](OC(C)=O)[C@H](C)[C@@H](OC)\C=C\O[C@@]1(C)OC2=C3C1=O HJYYPODYNSCCOU-ODRIEIDWSA-N 0.000 description 1
- PGSADBUBUOPOJS-UHFFFAOYSA-N Neutral red Chemical compound Cl.C1=C(C)C(N)=CC2=NC3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 PGSADBUBUOPOJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- JQXXHWHPUNPDRT-WLSIYKJHSA-N RIFAMPICIN Chemical compound O([C@](C1=O)(C)O/C=C/[C@@H]([C@H]([C@@H](OC(C)=O)[C@H](C)[C@H](O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)\C=C\C=C(C)/C(=O)NC=2C(O)=C3C([O-])=C4C)C)OC)C4=C1C3=C(O)C=2\C=N\N1CC[NH+](C)CC1 JQXXHWHPUNPDRT-WLSIYKJHSA-N 0.000 description 1
- 239000007759 RPMI Media 1640 Substances 0.000 description 1
- 208000003385 Rhinitis, Allergic, Seasonal Diseases 0.000 description 1
- 241000724205 Rice stripe tenuivirus Species 0.000 description 1
- 229940081190 Rifampin Drugs 0.000 description 1
- 210000003491 Skin Anatomy 0.000 description 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 210000001744 T-Lymphocytes Anatomy 0.000 description 1
- 210000003283 T-Lymphocytes, Helper-Inducer Anatomy 0.000 description 1
- 210000000447 Th1 Cells Anatomy 0.000 description 1
- 210000004241 Th2 Cells Anatomy 0.000 description 1
- 210000002303 Tibia Anatomy 0.000 description 1
- 240000003584 Ziziphus jujuba Species 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004721 adaptive immunity Effects 0.000 description 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- 230000000240 adjuvant Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 238000009098 adjuvant therapy Methods 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 239000005409 aflatoxin Substances 0.000 description 1
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 1
- 230000024126 agglutination involved in conjugation with cellular fusion Effects 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002009 allergen Effects 0.000 description 1
- 201000005794 allergic hypersensitivity disease Diseases 0.000 description 1
- 229960004821 amikacin Drugs 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003293 cardioprotective Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000002485 combustion reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement Effects 0.000 description 1
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000000875 corresponding Effects 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 238000001663 electronic absorption spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000029578 entry into host Effects 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic Effects 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth media Substances 0.000 description 1
- 231100000753 hepatic injury Toxicity 0.000 description 1
- 210000000548 hind-foot Anatomy 0.000 description 1
- 235000012907 honey Nutrition 0.000 description 1
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000041 hydrogen chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N hydrogen chloride Substances Cl.Cl IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009610 hypersensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000000403 immunocorrecting Effects 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002440 industrial waste Substances 0.000 description 1
- 230000002458 infectious Effects 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory Effects 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular Effects 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 230000002147 killing Effects 0.000 description 1
- 238000009533 lab test Methods 0.000 description 1
- 239000003077 lignite Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated Effects 0.000 description 1
- 230000000936 membranestabilizing Effects 0.000 description 1
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 description 1
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N oxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N p-acetaminophenol Chemical compound CC(=O)NC1=CC=C(O)C=C1 RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000001181 parasitic helminthiasis infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000004983 pleiotropic Effects 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- IOLCXVTUBQKXJR-UHFFFAOYSA-M potassium bromide Inorganic materials [K+].[Br-] IOLCXVTUBQKXJR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000003825 pressing Methods 0.000 description 1
- 230000001023 pro-angiogenic Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 1
- 229910052904 quartz Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010453 quartz Substances 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory Effects 0.000 description 1
- 238000005067 remediation Methods 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory Effects 0.000 description 1
- 229960001225 rifampicin Drugs 0.000 description 1
- 229960003292 rifamycin Drugs 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N silicon dioxide Inorganic materials O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 239000004449 solid propellant Substances 0.000 description 1
- 230000003595 spectral Effects 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 101700055183 tbg Proteins 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 description 1
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 description 1
- 230000000699 topical Effects 0.000 description 1
- 230000002588 toxic Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000029069 type 2 immune response Effects 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 1
- 238000003828 vacuum filtration Methods 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological Effects 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
- 238000002689 xenotransplantation Methods 0.000 description 1
Abstract
Description
Изобретение относится к медицине, конкретно к фармакологии, результаты которого могут быть использованы для коррекции нарушений в иммунной системе при патологических состояниях, связанных с недостаточностью Тh2-зависимого иммунного ответа при хронизации инфекций, вызванных внеклеточными бактериями и паразитами.The invention relates to medicine, specifically to pharmacology, the results of which can be used to correct disorders in the immune system in pathological conditions associated with a lack of a Th2-dependent immune response during chronic infections caused by extracellular bacteria and parasites.
Гуминовые вещества - группа природных биополимеров, содержащихся главным образом в объектах растительного происхождения (каустобиолитах) - торфе, буром угле, придонных осадках (сапропелях, пелоидах), состоят на 80-90% из гуминовых и фульвовых кислот. Гуминовые кислоты (ГК) торфа - высокомолекулярные азотсодержащие соединения циклического строения, представляющие собой смесь темноокрашенных органических, высокомолекулярных, в основном ароматических, метоксисодержащих, гидрокси- и оксокарбоновых кислот, объединенных общим типом строения, но имеющих некоторые различия, определяемые их происхождением [1].Humic substances are a group of natural biopolymers contained mainly in objects of plant origin (caustobiolites) - peat, brown coal, bottom sediments (sapropels, peloids), consist of 80-90% of humic and fulvic acids. Humic acids (HA) of peat are high-molecular nitrogen-containing compounds of a cyclic structure, which are a mixture of dark-colored organic, high-molecular, mainly aromatic, methoxy-containing, hydroxy- and oxocarboxylic acids, united by a common type of structure, but having some differences determined by their origin [1].
Вещества гуминовой природы давно и широко применяются во многих отраслях деятельности человека: в промышленности при нефте- и газодобыче, для ремедиации территорий, загрязненных отходами производства, в сельском хозяйстве в качестве ветеринарных препаратов [2] и компонентов органоминеральных удобрений [3].Substances of humic nature have long been widely used in many areas of human activity: in industry in oil and gas production, for the remediation of territories contaminated with industrial waste, in agriculture as veterinary preparations [2] and components of organomineral fertilizers [3].
При изучении фармакологических свойств ГК получены весомые результаты, подтверждающие как их противоопухолевые, гепатопротекторные, ранозаживляющие свойства, так и предполагаемые механизмы действия [4, 5, 6, 7].When studying the pharmacological properties of HA, significant results were obtained confirming both their antitumor, hepatoprotective, wound healing properties, and the proposed mechanisms of action [4, 5, 6, 7].
Гуминовые и фульвовые кислоты используются для повышения сопротивляемости организма человека действию различных неблагоприятных факторов, в том числе, в качестве вспомогательной терапии у ВИЧ-инфицированных пациентов [8]. Показано, что ГК различной этиологии и разных физико-химических характеристик обладают широким спектром плейотропных иммунологических эффектов - оказывают влияние на поляризацию иммунокомпетентных клеток по классическому или альтернативному пути за счет селективной секреции про- и противовоспалительных цитокинов (ИЛ-1β, ИЛ-2, ИЛ-6, ФНО-α и ИФН-γ) [9, 10], обладают противовирусной активностью против вирусов герпеса 1 и 2 типов (HSV1, HSV2), респираторного и цитомегаловируса человека (HCMV, RSV) in vitro [11] и иммунокоррегирующими свойствами на фоне антибактериальной терапии рядом антибиотиков (ампициллин, амикацин, доксициклин, рифампицин, рифамицин), а также способствует значительной локализации воспаления и усилению сосудообразания при ксенотрансплантации [12]. Гуминовые вещества подавляют реакцию гиперчувствительности замедленного типа, реакцию трансплантат против хозяина, снижают контактную гиперчувствительность и отек лапы крыс, уровень С-реактивного белка у пациентов, страдающих остеоартрозом, сенной лихорадкой, а также обладают кардиозащитными и проангиогенными свойствами [13]. При этом ГК не проявляют токсических эффектов в широкой линейке доз у экспериментальных животных при пероральном или накожном применении, а гумат калия безопасен для человека в суточной дозе до 1 г/кг [13, 14].Humic and fulvic acids are used to increase the resistance of the human body to the action of various adverse factors, including as adjuvant therapy in HIV-infected patients [8]. It has been shown that GCs of various etiologies and different physicochemical characteristics have a wide range of pleiotropic immunological effects - they influence the polarization of immunocompetent cells along the classical or alternative pathway due to the selective secretion of pro- and anti-inflammatory cytokines (IL-1β, IL-2, IL- 6, TNF-α and IFN-γ) [9, 10], have antiviral activity against herpesviruses 1 and 2 types (HSV1, HSV2), respiratory and human cytomegalovirus (HCMV, RSV) in vitro [11] and immunocorrective properties on against the background of antibacterial therapy with a number of antibiotics (ampicillin, amikacin, doxycycline, rifampicin, rifamycin), and also contributes to a significant localization of inflammation and increased vasogenesis during xenotransplantation [12]. Humic substances suppress the delayed-type hypersensitivity reaction, graft-versus-host reaction, reduce contact hypersensitivity and paw edema in rats, the level of C-reactive protein in patients suffering from osteoarthritis, hay fever, and also have cardioprotective and proangiogenic properties [13]. At the same time, HAs do not show toxic effects in a wide range of doses in experimental animals when administered orally or cutaneously, and potassium humate is safe for humans at a daily dose of up to 1 g/kg [13, 14].
Известно, что эффективный иммунный ответ зависит от координированного функционирования различных клеток врожденного и/или адаптивного иммунитета, в котором Т-хелперы (CD4) занимают особенное место [15]. Представление о существовании двух подклассов лимфоцитов CD4+ с реципрокными функциями и различным набором секретируемых цитокинов - Т-хелперов 1-го типа (Тh1) и Т-хелперов 2-го типа (Th2) - сформировалось в середине 80-х годов прошлого века [16]. Т-хелперы 1-го и 2-го типов различаются спектром продуцируемых ими цитокинов. Так, Тh1 продуцируют интерферон гамма (ИФН-γ), являющийся маркером этой субпопуляции Т-хелперных клеток, а также интерлейкин 2 (ИЛ-2), фактор некроза опухоли альфа (ФНО-α). Напротив, Th2 вырабатывают ИЛ-4 (маркер Th2 субпопуляции), ИЛ-5, ИЛ-10 и ИЛ-13. Клетки Тh1 играют важную роль в развитии реакций клеточного иммунитета, направленных против вирусных и внутриклеточных патогенов, а также участвуют в реакциях гиперчувствительности замедленного типа. Клетки Th2 обеспечивают реакции гуморального иммунитета, поддерживая пролиферацию и дифференцировку IB-лимфоцитов, элиминацию внеклеточных патогенов, участвуют в развитии аллергических реакций немедленного типа и защищают организм от глистных инвазий [17]. Чрезмерные воспалительные реакции, вызванные активацией Тh1, могут привести к неконтролируемому повреждению тканей, поэтому необходим механизм противодействия этому. Таким образом, вещества способные подавлять чрезмерную активацию ТЫ и регулировать баланс ТЫ (ИФН-γ и ИЛ-2) и Th2 (ИЛ-4 и ИЛ-10) опосредованных цитокинов, представляют значительный интерес в качестве иммуномодулирующих средств для восстановления иммунного гомеостаза организма при различных патологиях, связанных с недостаточностью Тh2-зависимого иммунного ответа (хронические инфекционные заболевания, вызванные внеклеточными бактериями и паразитами).It is known that an effective immune response depends on the coordinated functioning of various cells of innate and/or adaptive immunity, in which T-helpers (CD4) occupy a special place [15]. The idea of the existence of two subclasses of CD4 + lymphocytes with reciprocal functions and a different set of secreted cytokines - T-helper type 1 (Th1) and T-helper type 2 (Th2) - was formed in the mid-1980s [16 ]. T-helpers of the 1st and 2nd types differ in the spectrum of cytokines produced by them. So, Th1 produce interferon gamma (IFN-γ), which is a marker of this subpopulation of T-helper cells, as well as interleukin 2 (IL-2), tumor necrosis factor alpha (TNF-α). In contrast, Th2 produce IL-4 (a marker of the Th2 subpopulation), IL-5, IL-10, and IL-13. Th1 cells play an important role in the development of cellular immune responses against viral and intracellular pathogens, and are also involved in delayed-type hypersensitivity reactions. Th2 cells provide humoral immunity responses, supporting the proliferation and differentiation of IB-lymphocytes, the elimination of extracellular pathogens, are involved in the development of immediate-type allergic reactions, and protect the body from helminthic invasions [17]. Excessive inflammatory responses caused by Th1 activation can lead to uncontrolled tissue damage, so a mechanism to counteract this is needed. Thus, substances capable of suppressing the excessive activation of ThI and regulating the balance of ThI (IFN-γ and IL-2) and Th2 (IL-4 and IL-10) mediated cytokines are of considerable interest as immunomodulatory agents for restoring the body's immune homeostasis under various conditions. pathologies associated with insufficient Th2-dependent immune response (chronic infectious diseases caused by extracellular bacteria and parasites).
Задачей данного изобретения является расширение арсенала иммуномодулирующих средств природного происхождения, обладающих низкой токсичностью и способностью избирательной стимуляции продукции цитокинов Тh2-типа - ИЛ-4 и ИЛ-10 и подавлению выработки цитокинов Тh1-типа - ИФН-γ и ИЛ-2.The objective of this invention is to expand the arsenal of immunomodulatory agents of natural origin with low toxicity and the ability to selectively stimulate the production of Th2-type cytokines - IL-4 and IL-10 and suppress the production of Th1-type cytokines - IFN-γ and IL-2.
Поставленная задача решается путем применения водорастворимых гуминовых кислот, выделенных раствором натрий пирофосфата из верхового сфагново-мочажинного торфа, отобранного с глубины 20-70 см с грядово-мочажинного комплекса олиготрофного болота Бакчарского болотного массива юго-восточных отрогов Васюганского болота в междуречье Иксы и Бакчара, со среднечисленной молекулярной массой 8916,6 Да, среднемассовой молекулярной массой 32652,1 Да, полидисперсностью 5,7 и медианой 16453,9 Да, в качестве средства, обладающего иммуномодулирующим действием.The problem is solved by using water-soluble humic acids isolated with a solution of sodium pyrophosphate from high-moor sphagnum-hollow peat, selected from a depth of 20-70 cm from the ridge-hollow complex of the oligotrophic bog of the Bakchar bog massif of the southeastern spurs of the Vasyugan bog in the interfluve of the Iksa and Bakchar, with number average molecular weight of 8916.6 Da, weight average molecular weight of 32652.1 Da, polydispersity of 5.7 and a median of 16453.9 Da, as an agent with an immunomodulatory effect.
Вышеупомянутые водорастворимые гуминовые кислоты обладают высокой избирательной способностью стимулировать секрецию ИЛ-4, ИЛ-10 и подавлять выработку ИФН-γ и ИЛ-2, для коррекции нарушений системы иммунитета при патологических состояниях, требующих активации Тh2-зависимого типа иммунного ответа, т.е. хронические инфекционные заболевания, вызванные внеклеточными бактериями и паразитами.The above-mentioned water-soluble humic acids have a high selective ability to stimulate the secretion of IL-4, IL-10 and suppress the production of IFN-γ and IL-2, to correct immune system disorders in pathological conditions requiring activation of a Th2-dependent type of immune response, i.e. chronic infectious diseases caused by extracellular bacteria and parasites.
Принципиально новое в предлагаемом авторами изобретении использование для эффективной иммуномодуляции водорастворимых гуминовых кислот, выделенных из верхового сфагново-мочажинного торфа, отобранного с глубины 20-70 см с грядово-мочажинного комплекса олиготрофного болота Бакчарского болотного массива юго-восточных отрогов Васюганского болота в междуречье Иксы и Бакчара, было обнаружено в результате экспериментальных исследований и для специалиста явным образом не вытекает из уровня техники, и описание этого свойства не обнаружено авторами в патентной и научно-медицинской литературе. Таким образом, предлагаемое техническое решение соответствует критериям изобретения, а именно - «новизна», «изобретательский уровень» и «промышленная применимость».Fundamentally new in the proposed invention is the use for effective immunomodulation of water-soluble humic acids isolated from high-moor sphagnum-hollow peat, selected from a depth of 20-70 cm from the ridge-hollow complex of the oligotrophic bog of the Bakchar bog massif of the southeastern spurs of the Vasyugan bog in the interfluve of the Iksa and Bakchar , was found as a result of experimental studies and for a specialist does not explicitly follow from the prior art, and the description of this property was not found by the authors in the patent and medical literature. Thus, the proposed technical solution meets the criteria of the invention, namely, "novelty", "inventive step" and "industrial applicability".
Представительный средний образец торфа, максимально отражающий неоднородность химического состава всей партии анализируемого материала, отбирали буром ТБГ-1 в генетическом центре гряды грядово-мочажинного комплекса олиготрофного болота Бакчарского болотного массива юго-восточных отрогов Васюганского болота в междуречье Иксы и Бакчара Бакчарского района Томской области, из середины однородного по ботаническому составу горизонта с глубины 20-70 см, в летний период (июнь-август) согласно ГОСТ 17644-83 «Торф. Методы отбора проб из залежи и обработки их для лабораторных испытаний». В скважине с указанной глубины каждую пробу (массой не менее 600 г, количество скважин - не менее 50) отбирали только один раз, средняя масса образца торфа составляла более 30 кг (таблица 1).A representative average sample of peat, which maximally reflects the heterogeneity of the chemical composition of the entire batch of the analyzed material, was taken with a TBG-1 drill in the genetic center of the ridge of the ridge-hollow complex of the oligotrophic bog of the Bakcharsky bog massif of the southeastern spurs of the Vasyugan bog in the interfluve of the Iksa and Bakchar, Bakcharsky district, Tomsk region, from the middle of a horizon homogeneous in botanical composition from a depth of 20-70 cm, in summer (June-August) according to GOST 17644-83 “Peat. Methods for sampling from the deposit and processing them for laboratory tests. In the well from the indicated depth, each sample (weighing at least 600 g, the number of wells - at least 50) was taken only once, the average weight of the peat sample was more than 30 kg (table 1).
Полученный образец торфа высушивали при комнатной температуре на воздухе в хорошо проветриваемом помещении, периодически перемешивая, до воздушно-сухого состояния (влажность 15-20%), измельчали в роторно-ножевой мельнице и просеивали через сито с диаметром отверстий 1-3 мм, обрабатывали 0,1 моль/л раствором натрий пирофосфата (Nа4Р2О7;) в массовом соотношении 1:100 в течение 8 часов при постоянном перемешивании в реакторе Р-100 при температуре 25-27°С, отделяли жидкую фазуThe resulting peat sample was dried at room temperature in air in a well-ventilated room, stirring occasionally, to an air-dry state (moisture content 15-20%), ground in a rotary-knife mill and sifted through a sieve with a hole diameter of 1-3 mm, treated with 0 1 mol/l solution of sodium pyrophosphate (Na 4 P 2 O 7 ;) in a mass ratio of 1:100 for 8 hours with constant stirring in the P-100 reactor at a temperature of 25-27°C, the liquid phase was separated
(экстракт гуминовых кислот) от осадка (остатка торфа) фильтрованием при помощи системы вакуумной фильтрации (нутч-фильтр), далее для осаждения гуминовых кислот из экстракта жидкую фазу обрабатывали 10% раствором водород хлорида до рН 1-2, выделившиеся гуминовые кислоты (ГК) разделяли центрифугированием, отмывали холодной водой очищенной на воронке Бюхнера до рН 7 и высушивали при комнатной температуре. Содержание ГК в торфе определяли гравиметрически (таблица 2).(humic acid extract) from the sediment (peat residue) by filtration using a vacuum filtration system (nutsch filter), then, to precipitate humic acids from the extract, the liquid phase was treated with a 10% hydrogen chloride solution to pH 1-2, released humic acids (HA) were separated by centrifugation, washed with cold purified water on a Buchner funnel to pH 7, and dried at room temperature. The HA content in peat was determined gravimetrically (Table 2).
Все образцы представляли собой мелкодисперсный порошок темно-коричневого цвета, растворимый в водной среде. Исследование физико-химических параметров структуры ГК проводили методами: инфракрасной (ИК) и ультрафиолетовой (УФ) спектроскопии. Регистрацию ИК-спектров ГК проводили на ИК - Фурье - спектрометре ФСМ 1201 (ООО «Инфраспек», г. Санкт-Петербург) по методу прессования с КВr в соотношении 1:100 соответственно, в интервале значений частоты от 500 до 4000 см-1. Регистрацию электронных спектров поглощения 0,001% водных растворов ГК проводили на УФ-спектрофотометре Unico 2800 (производство США) в диапазоне длин волн 190-700 нм в кварцевой кювете толщиной 1 см (таблица 3).All samples were a finely dispersed dark brown powder, soluble in an aqueous medium. The physicochemical parameters of the HA structure were studied by the following methods: infrared (IR) and ultraviolet (UV) spectroscopy. The IR spectra of HA were recorded on an FSM 1201 IR Fourier spectrometer (OOO Infraspek, St. Petersburg) using the pressing method with KBr in a ratio of 1:100, respectively, in the frequency range from 500 to 4000 cm -1 . Registration of electronic absorption spectra of 0.001% aqueous solutions of HA was carried out on a Unico 2800 UV spectrophotometer (made in the USA) in the wavelength range of 190-700 nm in a quartz cuvette 1 cm thick (table 3).
Анализ ИК-спектральных характеристик свидетельствует о том, что ГК-1 торфа характеризуются преобладанием ароматических структур над алкильными.An analysis of the IR spectral characteristics indicates that peat HA-1 are characterized by a predominance of aromatic structures over alkyl ones.
Полученные вышеописанным способом гуминовые кислоты были охарактеризованы по физико-химическим параметрам: элементному составу и молекулярному весу.The humic acids obtained by the above method were characterized by physicochemical parameters: elemental composition and molecular weight.
1. Элементный состав ГК определяли методом сожжения на C,H,N - анализаторе «Carlo Erba Strumentazione» модель 1106, содержание кислорода определяли по разности (таблица 4).1. The elemental composition of HA was determined by combustion on a C, H, N - analyzer "Carlo Erba Strumentazione" model 1106, the oxygen content was determined by difference (table 4).
2. Молекулярную массу (таблица 5) определяли методом гель-проникающей хроматографии на приборе Ultimate 3000 (Thermo Scientific, США) с использованием колонки Ultrahydrogel 250, 300×7,8 мм, подвижная фаза - 0,1 М NaNO3, 0,01% NaN3 в воде, скорость потока 1 мл/мин. Детектирование спектрофотометрическое при длине волны 200 нм. Расчет молекулярной массы проводили по калибровочному графику log Mw=f (tR) построенному по стандартам PSS (polystyrene sulfonate) 891 - 976 000 Da (Polymer Standarts Service Service GmbH, Германия).2. The molecular weight (table 5) was determined by gel permeation chromatography on an Ultimate 3000 instrument (Thermo Scientific, USA) using an Ultrahydrogel 250 column, 300 × 7.8 mm, the mobile phase was 0.1 M NaNO 3 , 0.01 % NaN 3 in water, flow rate 1 ml/min. Spectrophotometric detection at a wavelength of 200 nm. The calculation of the molecular weight was carried out according to the calibration graph log M w =f (t R ) built according to the standards PSS (polystyrene sulfonate) 891 - 976000 Da (Polymer Standards Service Service GmbH, Germany).
Иммуномодулирующие свойства гуминовых кислот изучали на линейных мышах C57BL/6 и аутбредных мышах CDI, в качестве источника тучных клеток использовали аутбредных крыс SD [18]. Животные (самцы/самки) в возрасте 8-10 недель были получены из отдела экспериментальных биологических моделей НИИФиРМ им. Е.Д.The immunomodulatory properties of humic acids were studied in C57BL/6 strain mice and outbred CDI mice; outbred SD rats were used as a source of mast cells [18]. Animals (males/females) at the age of 8-10 weeks were obtained from the Department of Experimental Biological Models of the Research Institute of Physiology and Medicine named after N.N. E.D.
Гольдберга Томского НИМЦ. Все процедуры (содержание, введение исследуемых веществ, умерщвление) были проведены в соответствии с ГОСТ 33215-2014 «Правила оборудования помещений и организация процедур при работе с лабораторными животными».Goldberg of the Tomsk NIMC. All procedures (containment, introduction of test substances, killing) were carried out in accordance with GOST 33215-2014 "Rules for equipment of premises and organization of procedures when working with laboratory animals".
Мононуклеары (Мн) выделяли из периферической крови здоровых доноров, наслаивая гепаринизированную кровь (10 ЕД/мл) на жидкость для сепарации клеток «Histopaque-1077» («Sigma-Aldrich», США) с плотностью 1,077 мг/мл, центрифугируя 15 минут при 400 g, собирая клетки, сформировавшие кольцо на градиенте плотности. Далее Мн ресуспендировали в полной культуральной среде (ПКС), состоящей из RPMI-1640 («Sigma», США), 10% ЭТС («Нускопе», США), 20 мМ HEPES («Sigma», США), 0,05 мМ 2-меркаптоэтанола («Sigma», США), 50 мкг/мл гентамицин («Sigma», США), 2 мМ L-глютамин («Sigma», США), оценивали жизнеспособность в тесте с 0,1% трипановым синим (использовали клеточные суспензии с жизнеспособностью не менее 95%). Мононуклеары (2,5-3,0×106 клеток/мл) инкубировали в 96-луночных планшетах при 37°С в атмосфере с 5% СО2 и абсолютной влажности в присутствии ГК-1 (10 мкг/мл); 4 мкг/мл конканавалина А (Кон A, «Sigma», США) или 5 мкг/мл митогена лаконоса (МЛ, «Sigma», США). Через 24 ч от начала культивирования собирали из лунок надосадок и замеряли в нем концентрацию цитокинов твердофазным иммуноферментным методом на автоматическом анализаторе ChemWell®Combo при помощи тест-систем согласно прилагаемым протоколам: цитокины человека ИЛ-4, ИЛ-10, ИЛ-2 и ИФН-γ (АО «Вектор-Бест», Россия).Mononuclear cells (Mn) were isolated from the peripheral blood of healthy donors by layering heparinized blood (10 U/ml) on Histopaque-1077 cell separation liquid (Sigma-Aldrich, USA) with a density of 1.077 mg/ml, centrifuging for 15 minutes at 400 g, collecting cells that formed a ring on the density gradient. Next, Mn was resuspended in complete culture medium (PCM) consisting of RPMI-1640 (Sigma, USA), 10% FTS (Nuscope, USA), 20 mM HEPES (Sigma, USA), 0.05 mM 2-mercaptoethanol (Sigma, USA), 50 μg/ml gentamicin (Sigma, USA), 2 mM L-glutamine (Sigma, USA). cell suspensions with a viability of at least 95%). Mononuclear cells (2.5-3.0×10 6 cells/ml) were incubated in 96-well plates at 37°C in an atmosphere with 5% CO 2 and absolute humidity in the presence of GK-1 (10 μg/ml); 4 µg/ml concanavalin A (Kon A, Sigma, USA) or 5 µg/ml laconos mitogen (ML, Sigma, USA). After 24 hours from the start of cultivation, the supernatant was collected from the wells and the concentration of cytokines in it was measured by the enzyme-linked immunosorbent assay on the ChemWell®Combo automatic analyzer using test systems according to the attached protocols: human cytokines IL-4, IL-10, IL-2 and IFN- γ (JSC Vector-Best, Russia).
Показатели Тh1- и Тh2-иммунного ответа у мышей оценивали по окончании внутрибрюшинного введения ГК-1 в течение 10 дней в дозе 1 мг/кг/сут, в качестве препарата сравнения использовали ликопид (ЗАО «Пептек», Россия) - 2 мг/кг сут в 0,1 мл физиологического раствора (ФР), животным контрольной группы вводили аналогичный объем ФР.The indices of Th1- and Th2-immune response in mice were assessed after the end of intraperitoneal administration of GK-1 for 10 days at a dose of 1 mg/kg/day, licopid (ZAO Peptek, Russia) was used as a reference drug - 2 mg/kg day in 0.1 ml of physiological solution (PS), animals of the control group were injected with the same volume of PS.
Для изучения Тh1-зависимого типа иммунного ответа использовали: определение антителообразующих клеток (АОК) в селезенке и титра специфических гемагглютининов в сыворотке крови, исследование гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) после иммунизации мышей эритроцитами барана.To study the Th1-dependent type of immune response, the following were used: determination of antibody-forming cells (AFC) in the spleen and the titer of specific hemagglutinins in the blood serum, the study of delayed-type hypersensitivity (DTH) after immunization of mice with ram erythrocytes.
Определение АОК в селезенке осуществляли методом Ерне [19]. Исследуемые вещества (ГК-1 и ликопид) вводили мышам 5 суток до иммунизации и 5 суток после. Животных на 5-е сутки после иммунизации эритроцитами барана в дозе 1×108 клеток («ЭКОлаб», Россия) в объеме 0,2 мл ФР умерщвляли, селезенки извлекали, измельчали в стеклянном гомогенизаторе, клеточную взвесь фильтровали через 4-слойный капрон, трижды промывали холодным ФР, ресуспендировали в 4 мл среды 199 («Sigma», США), подсчитывали количество жизнеспособных клеток. В пробирки, нагретые до 50-53°С, вносили 0,9 мл среды культивирования (0,7% агар («Difco», США) в среде 199 («Sigma», США), 0,2 мл 20%-ой взвеси эритроцитов барана, 0,2 мл взвеси спленоцитов и 0,1 мл комплемента (ФГУП «НПО «Микроген», Россия). Смесью заполняли камеру Горяева и условиях 100%) влажности и 37°С инкубировали 2 ч, затем подсчитывали зоны гемолиза при помощи светового микроскопа.Determination of AFC in the spleen was carried out by the Jerne method [19]. The test substances (GK-1 and licopid) were administered to mice 5 days before immunization and 5 days after. Animals on the 5th day after immunization with sheep erythrocytes at a dose of 1×10 8 cells (ECOlab, Russia) in a volume of 0.2 ml of FR were sacrificed, the spleens were removed, crushed in a glass homogenizer, the cell suspension was filtered through a 4-layer nylon, washed three times with cold FR, resuspended in 4 ml of medium 199 (Sigma, USA), the number of viable cells was counted. 0.9 ml of cultivation medium (0.7% agar (Difco, USA) in medium 199 (Sigma, USA), 0.2 ml of 20% suspension of ram erythrocytes, 0.2 ml of splenocyte suspension and 0.1 ml of complement (Federal State Unitary Enterprise NPO Microgen, Russia). using a light microscope.
Определение титра антител в сыворотке крови осуществляли с помощью реакции гемагглютинации (РГА) [20]. Уровень гемагглютининов в сыворотке крови определяли по способности антител, содержащихся в сыворотке крови иммунизированных животных, агглютинировать антиген - эритроциты. Для этого сыворотку крови мышей, полученную на 5-е сутки после иммунизации, инактивировали 30 мин при 56°С, раститровывали в 96-луночном кругло донном планшете по 0,025 мл с шагом 1:2, добавляли 0,025 мл 1% суспензии эритроцитов барана, инкубировали при 37°С 2 часа и оценивали реакцию. За титр принимали последнее разведение исследуемой сыворотки, при котором еще наблюдается агглютинация антигена. Титр выражали величиной log2T.Determination of antibody titer in blood serum was carried out using the hemagglutination test (HHA) [20]. The level of hemagglutinins in blood serum was determined by the ability of antibodies contained in the blood serum of immunized animals to agglutinate the antigen - erythrocytes. To do this, the blood serum of mice obtained on the 5th day after immunization was inactivated for 30 min at 56°C, triturated in a 96-well round bottom plate in 0.025 ml increments of 1:2, 0.025 ml of a 1% suspension of sheep erythrocytes was added, and incubated at 37°C for 2 hours and evaluated the reaction. The titer was taken as the last dilution of the test serum, at which antigen agglutination is still observed. The titer was expressed as log 2 T.
При проведении реакции ГЗТ через 5 дней от начала введения ГК-1 животных иммунизировали внутрибрюшинной инъекцией эритроцитов барана (5×107) в 0,1 мл ФР. На 5-е сутки после иммунизации мышам проводили вторую (разрешающую) инъекцию эритроцитов барана в подушечку задней лапы - «опытная лапа» (108 эритроцитов барана в 0,05 мл изотонического раствора хлорида натрия). В контрлатеральную лапу вводили 0,05 мл ФР («контрольная лапа»). Через 24 часа животных забивали, обе лапы отрезали по выступу кости ниже сочленения мало- и большеберцовой кости и выше пяточного сустава, местную воспалительную реакцию оценивали по разнице массы опытной и контрольной лап.During the HRT reaction, 5 days after the start of GK-1 administration, the animals were immunized by intraperitoneal injection of ram erythrocytes (5×10 7 ) in 0.1 ml of FR. On the 5th day after immunization, the mice underwent a second (allowing) injection of ram erythrocytes into the pad of the hind paw - "experimental paw" (10 8 ram erythrocytes in 0.05 ml of isotonic sodium chloride solution). 0.05 ml of FR (“control paw”) was injected into the contralateral paw. After 24 hours, the animals were sacrificed, both paws were cut off along the protrusion of the bone below the articulation of the fibula and tibia and above the heel joint, the local inflammatory reaction was assessed by the difference in the mass of the experimental and control paws.
Развитие Тh2-зависимого иммунного ответа моделировали у аутбредных мышей CDI трехкратным введением под кожу бедра 100 мкг овальбумина (OVA) и 5 мг гидроокиси алюминия (оба «Sigma», США) в качестве адъюванта в 0,1 мл ФР с интервалом 3 недели [21]. Введение ГК-1 в объеме 0,1 мл на фоне иммунизации OVA начинали проводить за 5 дней до каждого введения OVA и в течение 5 дней после второй иммунизации, всего 15 инъекций. Мышам контрольной группы вводили по 0,1 мл ФР.The development of a Th2-dependent immune response was modeled in outbred CDI mice by three injections of 100 μg of ovalbumin (OVA) and 5 mg of aluminum hydroxide (both Sigma, USA) under the skin of the thigh as an adjuvant in 0.1 ml of FR with an interval of 3 weeks [21 ]. The introduction of GK-1 in a volume of 0.1 ml against the background of OVA immunization began 5 days before each OVA injection and within 5 days after the second immunization, a total of 15 injections. Mice of the control group were injected with 0.1 ml of FR.
Влияние курсового введения ГК-1 на антигензависимую непрямую дегрануляцию интактных тучных клеток (НДТК) исследовали, выделяя тучные клетки из брюшной полости аутбредных крыс-самцов стока SD [22]. Для получения тучных клеток крыс животных подвергали эвтаназии кровопусканием после СО2-камеры, вводили внутрибрюшинно 5-8 мл подогретого до 37°С раствора Тироде без глюкозы, после легкого массажа брюшной стенки в течение 1-1,5 мин делали ножницами разрез по средней линии и собирали экссудат в силиконизированную пробирку. Препараты готовили на обезжиренных предметных стеклах, окрашенных 0,3% спиртовым раствором нейтрального красного и высушенных при комнатной температуре. Смешивали 0,03 мл взвеси тучных клеток, 0,03 мл сыворотки аутбредных мышей CDI, иммунизированных овальбумином (OVA) и получивших курсом ГК-1, и 0,03 мл раствора OVA (дозу препарата подбирали заранее, так чтобы показатель дегрануляции тучных клеток при инкубации с исследуемым веществом не превышал 5%). Далее препараты покрывали покровными стеклами, затем инкубировали 15 мин в термостате при 37°С. Препараты микроскопировали под увеличением х 20.The effect of course administration of GK-1 on antigen-dependent indirect degranulation of intact mast cells (NDTC) was studied by isolating mast cells from the abdominal cavity of outbred SD male rats [22]. To obtain mast cells in rats, animals were euthanized by bloodletting after a CO 2 chamber, 5–8 ml of Tyrode solution warmed to 37°C without glucose was administered intraperitoneally, after a light massage of the abdominal wall for 1–1.5 min, an incision was made with scissors along the midline and collected the exudate in a siliconized tube. Preparations were prepared on defatted glass slides stained with 0.3% alcohol solution of neutral red and dried at room temperature. 0.03 ml of mast cell suspension, 0.03 ml of serum from outbred CDI mice immunized with ovalbumin (OVA) and given a course of GK-1, and 0.03 ml of OVA solution were mixed (the dose of the drug was selected in advance so that the rate of mast cell degranulation at incubation with the test substance did not exceed 5%). Next, the preparations were covered with coverslips, then incubated for 15 min in a thermostat at 37°C. The preparations were microscopically examined at x20 magnification.
Оценку результатов проводили дифференциальным способом учета, подсчитывали показатель дегрануляции тучных клеток (ПДТК) по формуле:The evaluation of the results was carried out by a differential accounting method, the index of mast cell degranulation (MTC) was calculated according to the formula:
где а, b, с, d - количество дегранулированных клеток соответственно степени дегрануляции (слабо выраженной, умеренной, резкой и степени полностью дегранулированных клеток).where a, b, c, d - the number of degranulated cells according to the degree of degranulation (mild, moderate, severe and the degree of completely degranulated cells).
Экспериментальные данные обрабатывали с помощью пакета статистических программ Statistica 8,0, проверяя нормальность распределения с помощью критерия Шапиро-Уилка, вычисляя для каждой выборки среднее арифметическое (X), ошибку среднего арифметического (m), среднее арифметическое отклонение (σ). Сравнение выборочных средних осуществляли по критерию Даннета для сравнения нескольких экспериментальных выборок с одной контрольной.The experimental data were processed using the Statistica 8.0 statistical software package, checking the normality of the distribution using the Shapiro-Wilk test, calculating the arithmetic mean (X), the arithmetic mean error (m), and the arithmetic mean deviation (σ) for each sample. Comparison of sample means was carried out according to the Dunnett test to compare several experimental samples with one control.
Пример 1Example 1
Курсовое введение ГК-1, выделенных из верхового сфагново-мочажинного торфа, отобранного с глубины 20-70 см грядово-мочажинного комплекса торфа олиготрофного болота Бакчарского болотного массива юго-восточных отрогов Васюганского болота в междуречье Иксы и Бакчара Бакчарского района Томской области, мышам линии C57/BL6 на фоне развития Th1-зависимого иммунного ответа, индуцированного введением эритроцитов барана, приводило к подавлению маркерной реакции клеточного Тh1 иммунного ответа - реакции ГЗТ (таблица 6). Величина отека при применении ГК-1 достоверно снижалась относительно контроля и группы мышей с применением ликопида (в 2 и 1,8 раза соответственно).Course introduction of GK-1, isolated from high-moor sphagnum-hollow peat, selected from a depth of 20-70 cm of the ridge-hollow complex of peat of the oligotrophic bog of the Bakcharsky bog massif of the southeastern spurs of the Vasyugan bog in the interfluve of the Iksa and Bakchar, Bakcharsky district, Tomsk region, to mice of the C57 line /BL6 against the background of the development of a Th1-dependent immune response induced by the introduction of ram erythrocytes, led to the suppression of the marker reaction of the cellular Th1 immune response - the DTH reaction (table 6). The magnitude of edema with the use of GK-1 significantly decreased relative to the control and the group of mice with the use of licopid (by 2 and 1.8 times, respectively).
Влияние гуминовых кислот на гуморальное звено Тh1-зависимого иммунного ответа оценивали по количеству АОК и РГА. Выявлено, что курсовое введение ГК-1, выделенных из верхового сфагново-мочажинного торфа, отобранного с глубины 20-70 см грядово-мочажинного комплекса торфа олиготрофного болота Бакчарского болотного массива юго-восточных отрогов Васюганского болота в междуречье Иксы и Бакчара Бакчарского района Томской области, приводило к статистически значимому снижению числа АОК как по сравнению с показателем в контрольной группе мышей (в 3,7 раза), такThe effect of humic acids on the humoral link of the Th1-dependent immune response was assessed by the amount of AFC and RHA. It was revealed that the course introduction of GK-1, isolated from high-moor sphagnum-hollow peat, selected from a depth of 20-70 cm of the ridge-hollow complex of peat of the oligotrophic bog of the Bakcharsky bog massif of the southeastern spurs of the Vasyugan bog in the interfluve of the Iksa and Bakchar of the Bakcharsky district of the Tomsk region, led to a statistically significant decrease in the number of AFCs, both in comparison with the indicator in the control group of mice (by 3.7 times), and
и со значением в группе животных, получавших ликопид (в 8 раз). При этом титр гемагглютининов достоверно снижался у мышей, получавших гуминовые кислоты, относительно показателей контроля и группы препарата сравнения (таблица 6).and with a value in the group of animals treated with licopid (8 times). At the same time, the titer of hemagglutinins significantly decreased in mice treated with humic acids, relative to the control parameters and the reference drug group (table 6).
Пример 2Example 2
Изучали влияние ГК-1, выделенные из верхового сфагново-мочажинного торфа, отобранного с глубины 20-70 см грядово-мочажинного комплекса олиготрофного болота Бакчарского болотного массива юго-восточных отрогов Васюганского болота в междуречье Иксы и Бакчара Бакчарского района Томской области, на показатели Тh2-типа иммунного ответа при проведении анафилактического шока и непрямой дегрануляции тучных клеток мышей CDI, иммунизированных овальбумином. Было показано, что курсовое введение гуминовых кислот (ГК-1) снижало проявления анафилактического шока у мышей, но лишь на 10%, также как и препарат сравнения ликопид (таблица 7).We studied the effect of HA-1, isolated from high-moor sphagnum-hollow peat, taken from a depth of 20-70 cm of the ridge-hollow complex of the oligotrophic bog of the Bakcharsky bog massif of the southeastern spurs of the Vasyugan bog in the interfluve of the Iksa and Bakchar, Bakcharsky district, Tomsk region, on the indicators of Th2- type of immune response during anaphylactic shock and indirect degranulation of mast cells in CDI mice immunized with ovalbumin. It was shown that the course introduction of humic acids (GK-1) reduced the manifestations of anaphylactic shock in mice, but only by 10%, as well as the reference drug licopid (table 7).
При изучении влияния курсового введения гуминовых кислот (ГК-1) на непрямую дегрануляцию тучных клеток аутбредных крыс SD при добавлении к ним сыворотки мышей CDI, иммунизированных овальбумином, было показано, что применение исследуемых ГК-1 достоверно снижало дегрануляцию по сравнению с показателями контроля и группы сравнения с использованием ликопида (таблица 8).When studying the effect of the course administration of humic acids (GK-1) on the indirect degranulation of mast cells in outbred SD rats when they were supplemented with serum from CDI mice immunized with ovalbumin, it was shown that the use of the studied GK-1 significantly reduced degranulation compared to the control and group parameters. comparisons using licopide (table 8).
Это свидетельствует о том, что исследуемые гуминовые кислоты обладают мембраностабилизирующим действием в отношении тучных клеток, тем самым снижая проявления аллергических реакций.This indicates that the studied humic acids have a membrane-stabilizing effect on mast cells, thereby reducing the manifestations of allergic reactions.
Пример 3Example 3
Инкубация мононуклеаров периферической крови здоровых доноров с гуминовыми кислотами (ГК-1) снижала конканавалин А-стимулированную продукцию основных для поляризации Тh1-типа иммунного ответа цитокинов - ИЛ-2 (в 1,2 раза) и ИФН-γ (в 1,4 раза) относительно показателей контроля, причем в случае ИФН-γ это уменьшение было статистически значимо (таблица 9).Incubation of peripheral blood mononuclear cells of healthy donors with humic acids (HA-1) reduced the production of concanavalin A-stimulated production of cytokines, IL-2 (by 1.2 times) and IFN-γ (by 1.4 times), which are the main polarization of the Th1-type immune response. ) relative to control indicators, and in the case of IFN-γ, this decrease was statistically significant (table 9).
Добавление гуминовых кислот к митоген-активированным мононуклеарным клеткам (модель воспаления in vitro) выявило достоверное увеличение продукции Th2- цитокинов - ИЛ-4 (в 2 раза) и ИЛ-10 (в 1,5 раза) относительно соответствующих показателей группы стимулированного контроля (таблица 10).The addition of humic acids to mitogen-activated mononuclear cells (an in vitro inflammation model) revealed a significant increase in the production of Th2-cytokines - IL-4 (2 times) and IL-10 (1.5 times) relative to the corresponding indicators of the stimulated control group (table ten).
Таким образом, экспериментально установлено, что гуминовые кислоты, выделенные из верхового сфагново-мочажинного торфа, отобранного с глубины 20-70 см грядово-мочажинного комплекса олиготрофного болота Бакчарского болотного массива юго-восточных отрогов Васюганского болота в междуречье Иксы и Бакчара Бакчарского района Томской области, со среднечисленной молекулярной массой 8916,6 Да, среднемассовой молекулярной массой 32652,1 Да, полидисперсностью 5,7 и медианой 16453,9 Да, при прямом воздействии снижают продукцию основных цитокинов Тh1-типа иммунного ответа - ИЛ-2 и ИФН-γ и повышают выработку цитокинов Тh2-типа - ИЛ-4 и ИЛ-10 мононуклеарами периферической крови здоровых доноров. Курсовое введение мышам гуминовых кислот, выделенных из верхового сфагново-мочажинного торфа, отобранного с глубины 20-70 см грядово-мочажинного комплекса олиготрофного болота Бакчарского болотного массива юго-восточных отрогов Васюганского болота в междуречье Иксы и Бакчара Бакчарского района Томской области, снижает показатели Тh1-типа иммунного ответа: уменьшение числа антителообразующих клеток в селезенке и титра антител в сыворотке крови в реакции гемагтлютинации, а также снижение реакции гиперчувствительности замедленного типа, характеризующий клеточный тип иммунного ответа. При этом курсовое использование гуминовых кислот (ГК-1) у животных приводит к снижению анафилактического шока и уменьшению дегрануляции тучных клеток после иммунизации мышей овальбумином. Это свидетельствует о том, что гуминовые кислоты (ГК-1) хотя и стимулируют выработку цитокинов Тh2-типа, но не приводят к усилению аллергических реакций. Полученные данные указывают на то, что гуминовые кислоты, выделенные из верхового сфагново-мочажинного торфа, отобранного с глубины 20-70 см грядово-мочажинного комплекса олиготрофного болота Бакчарского болотного массива юго-восточных отрогов Васюганского болота в междуречье Иксы и Бакчара Бакчарского района Томской области, обладают способностью регулировать баланс провоспалительных (ИЛ-2 и ИФН-γ) и противовоспалительных (ИЛ-4 и ИЛ-10) цитокинов и представляют значительный интерес в качестве основы для создания фармакологических регуляторов для восстановления иммунного гомеостаза организма при различных патологиях, связанных с недостаточностью Тh2-зависимого иммунного ответа (хронические инфекционные заболевания, вызванные внеклеточными бактериями и паразитами).Thus, it has been experimentally established that humic acids isolated from high-moor sphagnum-hollow peat, taken from a depth of 20-70 cm of the ridge-hollow complex of the oligotrophic bog of the Bakcharsky bog massif of the southeastern spurs of the Vasyugan bog in the interfluve of the Iksa and Bakchar of the Bakcharsky district of the Tomsk region, with a number average molecular weight of 8916.6 Da, a weight average molecular weight of 32652.1 Da, a polydispersity of 5.7 and a median of 16453.9 Da, with direct exposure, they reduce the production of the main cytokines of the Th1-type immune response - IL-2 and IFN-γ and increase production of Th2-type cytokines - IL-4 and IL-10 by peripheral blood mononuclear cells of healthy donors. The course introduction of humic acids isolated from high-moor sphagnum-hollow peat to mice, taken from a depth of 20-70 cm of the ridge-hollow complex of the oligotrophic bog of the Bakcharsky bog massif of the southeastern spurs of the Vasyugan bog in the interfluve of the Iksa and Bakchar of the Bakcharsky district of the Tomsk region, reduces the Th1- type of immune response: a decrease in the number of antibody-forming cells in the spleen and antibody titer in the blood serum in the hemagglutination reaction, as well as a decrease in the delayed-type hypersensitivity reaction, which characterizes the cellular type of the immune response. At the same time, the course use of humic acids (HA-1) in animals leads to a decrease in anaphylactic shock and a decrease in mast cell degranulation after immunization of mice with ovalbumin. This indicates that humic acids (HA-1), although they stimulate the production of Th2-type cytokines, do not lead to an increase in allergic reactions. The data obtained indicate that humic acids isolated from high-moor sphagnum-hollow peat, taken from a depth of 20-70 cm of the ridge-hollow complex of the oligotrophic bog of the Bakcharsky bog massif of the southeastern spurs of the Vasyugan bog in the interfluve of the Iksa and Bakchar of the Bakcharsky district of the Tomsk region, have the ability to regulate the balance of pro-inflammatory (IL-2 and IFN-γ) and anti-inflammatory (IL-4 and IL-10) cytokines and are of considerable interest as a basis for the creation of pharmacological regulators to restore the body's immune homeostasis in various pathologies associated with Th2 deficiency - dependent immune response (chronic infectious diseases caused by extracellular bacteria and parasites).
Источники информации, принятые во внимание при составлении описанияSources of information taken into account when compiling the description
1. Кухаренко, Т.А. Об определении понятия и классификации гуминовых кислот / Т.А. Кухаренко //Химия твердого топлива. - 1979. - №5. - С. 3-11.1. Kukharenko, T.A. On the definition of the concept and classification of humic acids / T.A. Kukharenko // Solid Fuel Chemistry. - 1979. - No. 5. - S. 3-11.
2. van Rensburg, C.J. In vitro and in vivo assessment of humic acid as an aflatoxin binder in broiler chickens / C.J. van Rensburg [et al.] // Poultry Science - 2006. - Vol. 85. - Is. 9. - P. 1576-1583.2. van Rensburg, C.J. In vitro and in vivo assessment of humic acid as an aflatoxin binder in broiler chickens / C.J. van Rensburg [et al.] // Poultry Science - 2006. - Vol. 85.-Is. 9. - P. 1576-1583.
3. Хричтева, Л.А. Роль гуминовой кислоты в питании высших растений и гуминовые удобрения / Л.А. Хричтева // Труды почвенного института им. В.В. Докучаева, М.: 1951.-Т. 38. - 314 с.3. Khrichteva, L.A. The role of humic acid in the nutrition of higher plants and humic fertilizers / L.A. Khrichteva // Proceedings of the Soil Institute. V.V. Dokuchaeva, M.: 1951.-T. 38. - 314 p.
4. Бузлама, А.В. Анализ фармакологических свойств, механизмов действия и перспектив применения гуминовых веществ в медицине / А.В. Бузлама, Ю.Н. Чернов // Экспер. и клин, фармакол. - 2010. - Т. 73. - №9. - С. 43-48.4. Buzlama, A.V. Analysis of pharmacological properties, mechanisms of action and prospects for the use of humic substances in medicine / A.V. Buzlama, Yu.N. Chernov // Expert. and a wedge, pharmakol. - 2010. - T. 73. - No. 9. - S. 43-48.
5. Белоусов, М.В. Исследование гепатозащитных свойств нативных гуминовых кислот низинного торфа Томской области / М.В. Белоусов [и др.] // Хим.-фарм. журн. -2014. - Т. 48. - №4. - С. 28-31.5. Belousov, M.V. Research of hepatoprotective properties of native humic acids of lowland peat of the Tomsk region / M.V. Belousov [et al.] // Khim.-farm. magazine -2014. - T. 48. - No. 4. - S. 28-31.
6. Vetvicka, V. Prophylactic effects of humic acid-glucan combination against experimental liver injury / V. Vetvicka, J.M. Garcia-Mina, J.C. Yvin // Journal of Intercultural Ethnopharmacology. - 2015. -V. 4. - Is. 3. - P. 249-255.6. Vetvicka, V. Prophylactic effects of humic experimental acid-glucan combination against liver injury / V. Vetvicka, J.M. Garcia-Mina, J.C. Yvin // Journal of Intercultural Ethnopharmacology. - 2015. -V. 4. Is. 3. - P. 249-255.
7. Vetvicka, V. The relative abundance of oxygen alkyl-related groups in aliphatic domains is involved in the main pharmacological-pleiotropic effects of humic acids / V. Vetvicka [et al.] // Journal of Medicinal Food. - 2013. -V. 16. - Is.7. - P. - 625-632.7. Vetvicka, V. The relative abundance of oxygen alkyl-related groups in aliphatic domains is involved in the main pharmacological-pleiotropic effects of humic acids / V. Vetvicka [et al.] // Journal of Medicinal Food. - 2013.-V. 16.-Is.7. - P. - 625-632.
8. Joone, G.K. Investigation of the immunostimulatory properties of oxihumate / G.K. Joone, J. Dekker, C.E.van Rensburg // Z. Naturforsch. C. J. Biosci. - 2003. - Vol.58. - №3-4. -P. 263-267.8. Joone, G.K. Investigation of the immunostimulatory properties of oxihumate / G.K. Joone, J. Dekker, C. E. van Rensburg // Z. Naturforsch. C. J. Biosci. - 2003. - Vol.58. - No. 3-4. -P. 263-267.
9. Inglot, A.D. A. A method to assess the immunomodulating effects of the Tolpa Torf Preparation (TTP) by measuring the hyporeactivity to interferon induction and tumor necrosis factor response / A.D. Inglot, J. Zielinska-Jenczylik, A.Sypula // Archivum Immunologiae et Therapiae Experimentalis. - 1993. -V. 41. - Is. 1. - P. - 87-93.9. Inglot, A.D. A. A method to assess the immunomodulating effects of the Tolpa Torf Preparation (TTP) by measuring the hyporeactivity to interferon induction and tumor necrosis factor response / A.D. Inglot, J. Zielinska-Jenczylik, A. Sypula // Archivum Immunologiae et Therapiae Experimentalis. - 1993.-V. 41.-Is. 1. - P. - 87-93.
10. van Rensburg, C.E. Potassium humate inhibits complement activation and the production of inflammatory cytokines in vitro / C.E. van Rensburg, P.J. Naude // Inflammation. -2009. -Vol. 32. - Is.4. - P. - 270-276.10. van Rensburg, C.E. Potassium humate inhibits complement activation and the production of inflammatory cytokines in vitro / C.E. van Rensburg, P.J. Naude // Inflammation. -2009. -Vol. 32.-Is.4. - P. - 270-276.
11. Cagno, V. In vitro evaluation of the antiviral properties of Shilajit and investigation of its mechanisms of action / V. Cagno [et al.] // Journal of Ethnopharmacology. - 2015. - Vol. 166. - P. 129-134.11. Cagno, V. In vitro evaluation of the antiviral properties of Shilajit and investigation of its mechanisms of action / V. Cagno [et al.] // Journal of Ethnopharmacology. - 2015. - Vol. 166. - P. 129-134.
12. Radomska-Lesniewska, D.M. Angiomodulatory properties of some antibiotics and Tolpa Peat Preparation / D.M. Radomska-Lesniewska, [et al.] // Central-European Journal of Immunology. - 2016. -V. 41. - Is. l. - P. - 19-24.12. Radomska-Lesniewska, D.M. Angiomodulatory properties of some antibiotics and Tolpa Peat Preparation / D.M. Radomska-Lesniewska, [et al.] // Central-European Journal of Immunology. - 2016.-V. 41.-Is. l. - P. - 19-24.
13. van Rensburg C.E. The Antiinflammatory Properties of Humic Substances: A Mini Review / C.E. van Rensburg // Phytother. Res. - 2015. - V. 29. - Is. 6. - P. 791-795.13. van Rensburg C.E. The Antiinflammatory Properties of Humic Substances: A Mini Review / C.E. van Rensburg // Phytother. Res. - 2015. - V. 29. - Is. 6. - P. 791-795.
14. van Rensburg, C.E. Topical application of oxifulvic acid suppresses the cutaneous immune response in mice / C.E. J. Van Rensburg, S. C.K. Malfeld, J. Dekker // Chemotherapy. -2002.-V. 48. - P. 138-143.14. van Rensburg, C.E. Topical application of oxifulvic acid suppresses the cutaneous immune response in mice / C.E. J. Van Rensburg, S.C.K. Malfeld, J. Dekker // Chemotherapy. -2002.-V. 48. - P. 138-143.
15. Luckheeram, R.V. CD4+T cells: differentiation and functions / R.V. Luckheeram, [et al.] // Clin. Dev. Immunol. - 2012. - Vol. 2012. - P. 925135.15. Luckheeram, RV CD4 + T cells: differentiation and functions / RV Luckheeram, [et al.] // Clin. dev. Immunol. - 2012. - Vol. 2012. - P. 925135.
16. Mosmann, T.R. Two types of murine helper T cell clone. I. Definition according to profiles of lymphokine activities and secreted proteins / T.R. Mosmann, [et al.] // J. Immunol. -1986. - Vol.136. - P. 2348-2357.16. Mosmann, T.R. Two types of murine helper T cell clone. I. Definition according to profiles of lymphokine activities and secreted proteins / T.R. Mosmann, [et al.] // J. Immunol. -1986. - Vol.136. - P. 2348-2357.
17. Anthony, R.M. Protective immune mechanisms in helminth infection / R.M. Anthony, [et al] // Nat. Rev. Immunol. - 2007. - Vol.7. - №12. - P. 975-987.17. Anthony, R.M. Protective immune mechanisms in helminth infection / R.M. Anthony, [et al] // Nat. Rev. Immunol. - 2007. - Vol.7. - No. 12. - P. 975-987.
18. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. 4.1. - М.: Гриф и К. 2013. - 944 с. 18. Guidelines for conducting preclinical studies of drugs. 4.1. - M.: Grif and K. 2013. - 944 p.
19. Ierne, N.K. Plaque formation in agar by single antibody production cells / N.K. Ierne, A.A. Nordin // Science. - 1963. - Vol.140. - №3565. - P. 405-408.19. Ierne, N.K. Plaque formation in agar by single antibody production cells / N.K. Ierne, A.A. Nordin // Science. - 1963. - Vol.140. - No. 3565. - P. 405-408.
20. Иммунологические методы / Под ред. Г. Фримеля. - М., Медицина, 1987. - 472 с.20. Immunological methods / Ed. G. Frimel. - M., Medicine, 1987. - 472 p.
21. Вельская, Н.В. Моделирование системной анафилаксии на мышах линии BALb/c / Н.В. Вельская, [и др.] // БИОМЕДИЦИНА. - 2010. - Т. 1. - №1. - С. 37-50.21. Velskaya, N.V. Modeling of systemic anaphylaxis in BALb/c mice / N.V. Velskaya, [et al.] // BIOMEDICINE. - 2010. - Vol. 1. - No. 1. - S. 37-50.
22. Радунская, С.Ф. Тест непрямой дегрануляции тучных клеток крыс для оценки специфической активности неинфекционных аллергенов: Дисс. … канд. мед. наук. - М., 1982.-С. 54-59.22. Radunskaya, S.F. Indirect degranulation test of mast cells in rats to assess the specific activity of non-infectious allergens: Diss. … cand. honey. Sciences. - M., 1982.-S. 54-59.
Claims (1)
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2783772C1 true RU2783772C1 (en) | 2022-11-17 |
Family
ID=
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2662094C1 (en) * | 2017-08-14 | 2018-07-23 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Томский национальный исследовательский медицинский центр Российской академии наук" (Томский НИМЦ) | Agent of humic nature of immunomodulating activity |
| RU2716504C1 (en) * | 2019-06-13 | 2020-03-12 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Томский национальный исследовательский медицинский центр Российской академии наук" (Томский НИМЦ) | Humic substance having immunomodulatory activity |
| RU2734420C1 (en) * | 2019-06-13 | 2020-10-16 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Томский национальный исследовательский медицинский центр Российской академии наук" (Томский НИМЦ) | Agent having immunomodulatory activity |
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2662094C1 (en) * | 2017-08-14 | 2018-07-23 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Томский национальный исследовательский медицинский центр Российской академии наук" (Томский НИМЦ) | Agent of humic nature of immunomodulating activity |
| RU2716504C1 (en) * | 2019-06-13 | 2020-03-12 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Томский национальный исследовательский медицинский центр Российской академии наук" (Томский НИМЦ) | Humic substance having immunomodulatory activity |
| RU2734420C1 (en) * | 2019-06-13 | 2020-10-16 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Томский национальный исследовательский медицинский центр Российской академии наук" (Томский НИМЦ) | Agent having immunomodulatory activity |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ГОСТИЩЕВА М.В. Сравнительная характеристика гуминовых кислот ряда торфов Томской области // Известия Томского политехнического университета. 2007, т. 310. N 2, стр.163-166. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Pujirahayu et al. | Properties and flavonoids content in propolis of some extraction method of raw propolis | |
| KR101363138B1 (en) | Use of parasitic biological agents for diseases prevention and control | |
| EP2068913B1 (en) | Immune modulators, preparations and compositions including immune modulators, tests for evaluating the activity of immune modulators and preparations and compositions including the same, and methods | |
| Rathi et al. | Ameliorative effects of a polyphenolic fraction of Cinnamomum zeylanicum L. bark in animal models of inflammation and arthritis | |
| Seo et al. | Anti-arthritic and analgesic effect of NDI10218, a standardized extract of Terminalia chebula, on arthritis and pain model | |
| KR20130121806A (en) | Pharmaceutical product comprising mite allergen extract(s) and a method for the manufacture thereof | |
| Kalsum et al. | Preliminary studies of the immunomodulator effect of the propolis Trigona spp. extract in a mouse model | |
| RU2783772C1 (en) | Drug of humic nature, which has an immunomodulatory effect | |
| Fachinan et al. | Effectiveness of Antihyperglycemic Effect of Momordica charantia: Implication of T‐Cell Cytokines | |
| RU2662094C1 (en) | Agent of humic nature of immunomodulating activity | |
| Kim et al. | Inhibitory effect on immunoglobulin E production in vivo and in vitro by Siegesbeckia glabrescens | |
| Zhao et al. | Anti-allergic potential of fisetin in a murine model of OVA-induced allergic rhinitis via inhibition of GATA-3 and Th2 cytokines | |
| KR101399925B1 (en) | Process for preparing Vitis vinifera pip extract and pharmaceutical composition for preventing or treating rheumatoid arthritis comprising the same | |
| EP0503208A1 (en) | Procedure for obtaining a natural water-soluble extract from the leaves and/or rhizomes of various immunologically active ferns | |
| RU2716504C1 (en) | Humic substance having immunomodulatory activity | |
| Nurdiana et al. | Efficacy and side effects studies of Bryophyllum pinnatum leaves ethanol extract in pristane-induced SLE BALB/c mice model | |
| JP2005501079A (en) | Herbal compositions for the treatment and therapy of bronchial dyspnea | |
| RU2750098C1 (en) | Product of humic nature with anti-allergic activity | |
| KR100857249B1 (en) | Composition for increasing immune activity comprising hot water extract from capsosiphon fulvescens | |
| Ouattara-Soro et al. | Study of the antiallergic activity of the leaves of moringa oleifera (moringaceae) in the albino mouse mus musculus | |
| EP1126860B1 (en) | Immunomodulatory factors for immunosuppressant and antiallergic treatment | |
| El-Youbi et al. | In vitro immunomodulation effects of the aqueous and protein extracts of Berberis hispanica Boiss and Reut.(Family Berberidaceae) | |
| Umayra et al. | Immunological role of annona muricata (dietary supplement of gravula) against cypermethrin’s toxic effects in female rats | |
| CN115227723B (en) | Preparation method and application of sea cockroach oligomer | |
| Trofimova et al. | Influence of Humic Acids Isolated from Raised Bog Sphagnum Peat on Development of Th1/Th2 Immune Response |