RU2783659C1 - 2-[5-(4-methoxy)-3-phenyl-5,6-dihydro-4h-[1,2,4,5]tetrazin-1-yl]-benzothiazoles with antiviral activity against coxsackie b3 viruses - Google Patents
2-[5-(4-methoxy)-3-phenyl-5,6-dihydro-4h-[1,2,4,5]tetrazin-1-yl]-benzothiazoles with antiviral activity against coxsackie b3 viruses Download PDFInfo
- Publication number
- RU2783659C1 RU2783659C1 RU2022101582A RU2022101582A RU2783659C1 RU 2783659 C1 RU2783659 C1 RU 2783659C1 RU 2022101582 A RU2022101582 A RU 2022101582A RU 2022101582 A RU2022101582 A RU 2022101582A RU 2783659 C1 RU2783659 C1 RU 2783659C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- tetrazin
- dihydro
- phenyl
- benzothiazoles
- methoxy
- Prior art date
Links
- 230000000840 anti-viral Effects 0.000 title claims abstract description 10
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title claims description 15
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 241000709687 Coxsackievirus Species 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 17
- -1 derivatives of 5,6-dihydro-4H-[1,2,4,5]tetrazin-1-yl-benzothiazoles Chemical class 0.000 description 9
- 230000003078 antioxidant Effects 0.000 description 7
- 210000004027 cells Anatomy 0.000 description 7
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000003501 Vero Cells Anatomy 0.000 description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 5
- 229940079593 drugs Drugs 0.000 description 5
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- 230000002194 synthesizing Effects 0.000 description 5
- 241000709661 Enterovirus Species 0.000 description 4
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 206010014909 Enterovirus infection Diseases 0.000 description 3
- 230000000569 anti-influenza Effects 0.000 description 3
- 230000000111 anti-oxidant Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 230000000120 cytopathologic Effects 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000003612 virological Effects 0.000 description 3
- CDAWCLOXVUBKRW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminophenol Chemical class NC1=CC=CC=C1O CDAWCLOXVUBKRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000000936 Intestines Anatomy 0.000 description 2
- 208000001756 Virus Disease Diseases 0.000 description 2
- 239000002168 alkylating agent Substances 0.000 description 2
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 description 2
- OBESRABRARNZJB-UHFFFAOYSA-N aminomethanesulfonic acid Chemical class NCS(O)(=O)=O OBESRABRARNZJB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic Effects 0.000 description 2
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 201000009910 diseases by infectious agent Diseases 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 2
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N n-heptane Chemical compound CCCCCCC IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 2
- 125000004402 polyphenol group Chemical group 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 2
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 2
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003595 spectral Effects 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 2
- 230000017613 viral reproduction Effects 0.000 description 2
- AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide Chemical compound [Br-].S1C(C)=C(C)N=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- DKSVBVKHUICELN-UHFFFAOYSA-N 3-ethoxy-6-[2-[1-(6-methylpyridazin-3-yl)piperidin-4-yl]ethoxy]-1,2-benzoxazole Chemical compound C=1C=C2C(OCC)=NOC2=CC=1OCCC(CC1)CCN1C1=CC=C(C)N=N1 DKSVBVKHUICELN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NGCMLYZVLNLYTA-UAKXSSHOSA-N 4-amino-1-[(2R,3R,4S,5R)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-5-nitropyrimidin-2-one Chemical compound C1=C([N+]([O-])=O)C(N)=NC(=O)N1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 NGCMLYZVLNLYTA-UAKXSSHOSA-N 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 210000004556 Brain Anatomy 0.000 description 1
- 210000000234 Capsid Anatomy 0.000 description 1
- PUFQVTATUTYEAL-UHFFFAOYSA-N Cinchocaine Chemical compound C1=CC=CC2=NC(OCCCC)=CC(C(=O)NCCN(CC)CC)=C21 PUFQVTATUTYEAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000709675 Coxsackievirus B3 Species 0.000 description 1
- 229940120099 Dibucaine Drugs 0.000 description 1
- HVTICUPFWKNHNG-UHFFFAOYSA-N Ethyl iodide Chemical compound CCI HVTICUPFWKNHNG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002464 Fluoxetine Drugs 0.000 description 1
- 208000006572 Human Influenza Diseases 0.000 description 1
- 206010022000 Influenza Diseases 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 210000004185 Liver Anatomy 0.000 description 1
- 210000002200 Mouth Mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 210000003205 Muscles Anatomy 0.000 description 1
- CYNYIHKIEHGYOZ-UHFFFAOYSA-N N-Propyl bromide Chemical compound CCCBr CYNYIHKIEHGYOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RTHCYVBBDHJXIQ-UHFFFAOYSA-N N-methyl-3-phenyl-3-[4-(trifluoromethyl)phenoxy]propan-1-amine Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(CCNC)OC1=CC=C(C(F)(F)F)C=C1 RTHCYVBBDHJXIQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100019545 PIGZ Human genes 0.000 description 1
- 108060003278 PIGZ Proteins 0.000 description 1
- 206010034133 Pathogen resistance Diseases 0.000 description 1
- 102000035443 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005771 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- KQOXLKOJHVFTRN-UHFFFAOYSA-N Pleconaril Chemical compound O1N=C(C)C=C1CCCOC1=C(C)C=C(C=2N=C(ON=2)C(F)(F)F)C=C1C KQOXLKOJHVFTRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- IWUCXVSUMQZMFG-AFCXAGJDSA-N Ribavirin Chemical compound N1=C(C(=O)N)N=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 IWUCXVSUMQZMFG-AFCXAGJDSA-N 0.000 description 1
- 229960000329 Ribavirin Drugs 0.000 description 1
- 229950007656 Rupintrivir Drugs 0.000 description 1
- 210000002966 Serum Anatomy 0.000 description 1
- 230000036462 Unbound Effects 0.000 description 1
- 229950000953 Vapendavir Drugs 0.000 description 1
- 206010047461 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 150000001350 alkyl halides Chemical class 0.000 description 1
- 230000002225 anti-radical Effects 0.000 description 1
- 239000005441 aurora Substances 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000019522 cellular metabolic process Effects 0.000 description 1
- 229960001747 cinchocaine Drugs 0.000 description 1
- 230000000875 corresponding Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 238000003113 dilution method Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 238000000921 elemental analysis Methods 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- CAYJBRBGZBCZKO-BHGBQCOSSA-N ethyl (E,4S)-4-[[(2R,5S)-2-[(4-fluorophenyl)methyl]-6-methyl-5-[(5-methyl-1,2-oxazole-3-carbonyl)amino]-4-oxoheptanoyl]amino]-5-[(3S)-2-oxopyrrolidin-3-yl]pent-2-enoate Chemical compound C([C@@H](/C=C/C(=O)OCC)NC(=O)[C@@H](CC(=O)[C@@H](NC(=O)C1=NOC(C)=C1)C(C)C)CC=1C=CC(F)=CC=1)[C@@H]1CCNC1=O CAYJBRBGZBCZKO-BHGBQCOSSA-N 0.000 description 1
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008079 hexane Substances 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular Effects 0.000 description 1
- 238000000752 ionisation method Methods 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal Effects 0.000 description 1
- 230000000670 limiting Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000003287 optical Effects 0.000 description 1
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 210000000056 organs Anatomy 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 229960000471 pleconaril Drugs 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective Effects 0.000 description 1
- 239000003642 reactive oxygen metabolite Substances 0.000 description 1
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 231100000816 toxic dose Toxicity 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 238000002211 ultraviolet spectrum Methods 0.000 description 1
Abstract
Description
Область техникиTechnical field
Изобретение относится к органической химии и направлено на создание препаратов для лечения энтеровирусных инфекций (ЭВИ) на основе органических соединений.The invention relates to organic chemistry and is directed to the creation of drugs for the treatment of enterovirus infections (EVI) based on organic compounds.
Уровень техники.The level of technology.
Вирус Коксаки - группа высоко контагиозных энтеровирусов, попадающих в организм человека через слизистую ротовой полости и далее, достигая кишечника, активно размножающихся в кишечнике. В тяжелой форме болезнь может поражать нервную систему, включая головной мозг, а также нарушать работу сердца, влиять на изменения в мышечной ткани этого органа, и негативно сказываться на печени.Coxsackie virus is a group of highly contagious enteroviruses that enter the human body through the oral mucosa and further, reaching the intestine, actively multiplying in the intestine. In severe form, the disease can affect the nervous system, including the brain, as well as disrupt the functioning of the heart, affect changes in the muscle tissue of this organ, and adversely affect the liver.
Ввиду отсутствия зарегистрированных этиотопных препаратов для терапии ЭВИ, поиск противовирусных препаратов нового поколения с улучшенными характеристиками актуален.Due to the lack of registered etiotopic drugs for the treatment of EVI, the search for a new generation of antiviral drugs with improved characteristics is relevant.
Большая часть вирусных инфекций сопровождаются генерацией активных форм кислорода. Поэтому использование антиоксидантов для профилактики и лечения вирусных заболеваний активно изучается [В.В. Зарубаев, А.В. Слита, Н.А. Калинина, А.В. Гаршинина, А.А. Штро, Л.А. Карпинская. Протективная активность интерферона в комбинации с различными антиоксидантами в отношении экспериментальной летальной гриппозной инфекции //РМЖ, 2012, №28, 1416-1420], [R. Sgarbanti, D. Amatore, I. Celestino, M.E. Marcocci, A. Fraternale, M.R. Ciriolo, M. Magnani, R. Saladino, E. Garaci, A.T. Palamara L. Nencioni. Intracellular Redox State as Target for Anti-Influenza Therapy: Are Antioxidants Always Effective? // Curr. Top. Med. Chem. 2014, Vol.14, №22, p. 2529-2541].Most viral infections are accompanied by the generation of reactive oxygen species. Therefore, the use of antioxidants for the prevention and treatment of viral diseases is being actively studied [V.V. Zarubaev, A.V. Slita, N.A. Kalinina, A.V. Garshinina, A.A. Shtro, L.A. Karpinskaya. Protective activity of interferon in combination with various antioxidants against experimental lethal influenza infection // BC, 2012, No. 28, 1416-1420], [R. Sgarbanti, D. Amatore, I. Celestino, M.E. Marcocci, A. Fraternale, M.R. Ciriolo, M. Magnani, R. Saladino, E. Garaci, A.T. Palamara L. Nencioni. Intracellular Redox State as Target for Anti-Influenza Therapy: Are Antioxidants Always Effective? // Curr. top. Med. Chem. 2014, Vol.14, No.22, p. 2529-2541].
Комбинацией противовирусных (противогриппозных) и антиоксидантных свойств обладают, например, производные аминофенолов 1 [О. Shadyro, G. Ksendzova, G. Polozov, V. Sorokin, E. Boreko, O. Savinova, B. Dubovik, N. Bizunok. Synthesis and study of antiviral and anti-radical properties of aminophenol derivatives // Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 2008, Vol.18, p. 2420-2423], 6-нитро-1,2,4-триазолоазины с полифенольными фрагментами 2 [E.N. Ulomskiy, A.V. Ivanova, E.B. Gorbunov, I.L. Esaulkova, A.V. Slita, E.O. Sinegubova, E.K. Voinkov, R.A. Drokin, I.I. Butorin, E.R. Gazizullina, E.L. Gerasimova, V.V. Zarubaev, V.L. Rusinov. Synthesis and biological evaluation of 6-nitro-1,2,4-triazoloazines containing polyphenol fragments possessing antioxidant and antiviral activity // Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 2020, Vol.30, p. 127216] и аминометансульфоновые кислоты 3 [R.E. Khoma, V.O. Gelmboldt, A.A. Ennan, T.L. Gridina, A.S. Fedchuk, V.P. Lozitsky, I.M. Rakipov, A.S. Vladyka. Synthesis and antioxidant and anti-influenza activity of aminomethanesulfonic acids // Pharm. Chem. J., 2019, Vol.53, №5, p. 436]The combination of antiviral (anti-influenza) and antioxidant properties have, for example, derivatives of aminophenols 1 [O. Shadyro, G. Ksendzova, G. Polozov, V. Sorokin, E. Boreko, O. Savinova, B. Dubovik, N. Bizunok. Synthesis and study of antiviral and anti-radical properties of aminophenol derivatives // Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 2008, Vol.18, p. 2420-2423], 6-nitro-1,2,4-triazoloazines with polyphenol fragments 2 [E.N. Ulomskiy, A.V. Ivanova, E.B. Gorbunov, I.L. Esaulkova, A.V. Slita, E.O. Sinegubova, E.K. Voinkov, R.A. Drokin, I.I. Butorin, E.R. Gazizullina, E.L. Gerasimova, V.V. Zarubaev, V.L. Rusinov. Synthesis and biological evaluation of 6-nitro-1,2,4-triazoloazines containing polyphenol fragments possessing antioxidant and antiviral activity // Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 2020, Vol.30, p. 127216] and aminomethanesulfonic acids 3 [R.E. Khoma, V.O. Gelmboldt, A.A. Ennan, T.L. Gridina, A.S. Fedchuk, V.P. Lozitsky, I.M. Rakipov, A.S. Vladyka. Synthesis and antioxidant and anti-influenza activity of aminomethanesulfonic acids // Pharm. Chem. J., 2019, Vol.53, No.5, p. 436]
Однако зарегистрированных препаратов, реализующих противовирусный потенциал в отношении вирусов рода Enterovirus посредством антиоксидантных свойств, в настоящий момент нет. Известно несколько групп малых молекул, активных в отношении энтеровирусов разных групп in vitro и in vivo: вещества, связывающиеся с вирусным капсидом (плеконарил и его производные, пиродавир, вапендавир, покапавир), ингибиторы вирусных протеаз (рупинтривир и его производные), ингибиторы полимеразного комплекса вирусов (рибавирин, 5-нитро-цитидин,флуоксетин, дибукаин). Однако среди тех групп соединений, которые успешно прошли доклинические исследования, ни для одного из препаратов не был показан хороший профиль эффективности и безопасности в выполненных клинических исследованиях. Кроме того, к соединениям, сходным по структуре и механизму действия, вирусы быстро вырабатывают перекрестную резистентность, что существенно ограничивает их применение.However, there are currently no registered drugs that realize the antiviral potential against viruses of the Enterovirus genus through antioxidant properties. Several groups of small molecules are known that are active against enteroviruses of different groups in vitro and in vivo: substances that bind to the viral capsid (pleconaril and its derivatives, pyrodavir, vapendavir, pokapavir), inhibitors of viral proteases (rupintrivir and its derivatives), inhibitors of the polymerase complex viruses (ribavirin, 5-nitrocytidine, fluoxetine, dibucaine). However, among those groups of compounds that have successfully passed preclinical studies, none of the drugs has shown a good efficacy and safety profile in the performed clinical studies. In addition, viruses quickly develop cross-resistance to compounds similar in structure and mechanism of action, which significantly limits their use.
Было установлено, что ряд производных 2-[5-(арил)-6-R-3-фенил-5,6-дигидро-4Н-[1,2,4,5]тетразин-1-ил]-бензотиазолов 4-7 обладают антиоксидантной активностью [Т.Г. Федорченко, Г.Н. Липунова, А.В. Щепочкин, М.С. Валова, А.Н. Цмокалюк, П.А. Слепухин, О.Н. Чупахин. Синтез, спектральные, электрохимические и антиоксидантные свойства 2-[5-(арил)-6-R-3-фенил-5,6-дигидро-4Н-[1,2,4,5]тетразин-1-ил]-бензотиазолов // ЖОрХ, 2020, Т. 56, №1, 52-64]It was found that a number of derivatives of 2-[5-(aryl)-6-R-3-phenyl-5,6-dihydro-4H-[1,2,4,5]tetrazin-1-yl]-benzothiazoles 4- 7 have antioxidant activity [T.G. Fedorchenko, G.N. Lipunova, A.V. Shchepochkin, M.S. Valova, A.N. Tsmokalyuk, P.A. Slepukhin, O.N. Chupakhin. Synthesis, spectral, electrochemical and antioxidant properties of 2-[5-(aryl)-6-R-3-phenyl-5,6-dihydro-4H-[1,2,4,5]tetrazin-1-yl]-benzothiazoles // ZHORH, 2020, T. 56, No. 1, 52-64]
Раскрытие изобретенияDisclosure of invention
Цель настоящего изобретения заключается в создании новых производных 5,6-дигидро-4Н-[1,2,4,5]тетразин-1-ил-бензотиазолов, способных ингибировать репродукцию энтеровирусов.The purpose of the present invention is to create new derivatives of 5,6-dihydro-4H-[1,2,4,5]tetrazin-1-yl-benzothiazoles capable of inhibiting the reproduction of enteroviruses.
Заявленные соединения синтезировали алкилированием 5-(бензотиазол-2-ил)-1-(4-метоксифенил)-3-фенилформазана 8, с последующей циклизацией продуктов алкилирования по описанной ранее методике [Т.Г. Федорченко, Г.Н. Липунова, А.В. Щепочкин, М.С. Валова, А.Н. Цмокалюк, П.А. Слепухин, О.Н. Чупахин. Синтез, спектральные, электрохимические и антиоксидантные свойства 2-[5-(арил)-6-R-3-фенил-5,6-дигидро-4Н-[1,2,4,5]тетразин-1-ил]-бензотиазолов // ЖОрХ, 2020, Т. 56, №1, 52-64]:The claimed compounds were synthesized by alkylation of 5-(benzothiazol-2-yl)-1-(4-methoxyphenyl)-3-phenylformazan 8, followed by cyclization of the alkylation products according to the previously described method [T.G. Fedorchenko, G.N. Lipunova, A.V. Shchepochkin, M.S. Valova, A.N. Tsmokalyuk, P.A. Slepukhin, O.N. Chupakhin. Synthesis, spectral, electrochemical and antioxidant properties of 2-[5-(aryl)-6-R-3-phenyl-5,6-dihydro-4H-[1,2,4,5]tetrazin-1-yl]-benzothiazoles // ZHORH, 2020, V. 56, No. 1, 52-64]:
К суспензии 5-(бензотиазол-2-ил)-1-(4-метоксифенил)-3-фенилформазана 8 (0.309 г, 0.8 ммоль) в 20 мл этанола добавляют 30% водный раствор гидроксида натрия (0.12 мл, 0.9 ммоль). К полученному темно-фиолетовому раствору добавляют соответствующий алкил-галогенид (8.0 ммоль), смесь кипятят 15 минут. Растворитель отгоняют под вакуумом. К реакционной массе добавляют 30 мл гептана, кипятят в течение часа. Гептан отгоняют под вакуумом. Продукт выделяют из реакционной массы колоночной хроматографией на силикагеле (элюент : гексан/хлороформ 2:1).A 30% aqueous sodium hydroxide solution (0.12 ml, 0.9 mmol) was added to a suspension of 5-(benzothiazol-2-yl)-1-(4-methoxyphenyl)-3-phenylformazan 8 (0.309 g, 0.8 mmol) in 20 mL of ethanol. The corresponding alkyl halide (8.0 mmol) was added to the resulting dark purple solution, and the mixture was boiled for 15 minutes. The solvent is distilled off under vacuum. To the reaction mass add 30 ml of heptane, boil for an hour. Heptane is distilled off under vacuum. The product is isolated from the reaction mass by column chromatography on silica gel (eluent: hexane/chloroform 2:1).
Температуры плавления определены с помощью аппарата Stuart SMP3. Контроль за ходом реакций и чистотой полученных продуктов осуществлен методом ТСХ на пластинах Sorbfil ПТСХ-АФ-А-УФ. Колоночная хроматография проведена с использованием силикагеля Kieselgel 60 (размер частиц 0.040-0.063 мм, 230-00 меш). Спектры ЯМР получали на спектрометре Bruker Avance III-500 МГц. ИК-спектры поглощения записывали с помощью приставки DRA на спектрофотометре Spectrum One (Perkin Elmer). УФ спектры зарегистрированы в метаноле на спектрофотометре UV2600 фирмы Shimadzu (Япония). Масс-спектры записаны на приборе Bruker Daltonics maXis impact HD, метод ионизации ESI. Элементный анализ проведен с помощью автоматического элементного анализатора CHNS РЕ 2400, серия II (Perkin Elmer Instruments).Melting points were determined using a Stuart SMP3 apparatus. The reaction progress and the purity of the obtained products were monitored by TLC on Sorbfil PTSKh-AF-A-UF plates. Column chromatography was carried out using silica gel Kieselgel 60 (particle size 0.040-0.063 mm, 230-00 mesh). NMR spectra were obtained on a Bruker Avance III-500 MHz spectrometer. IR absorption spectra were recorded using a DRA attachment on a Spectrum One spectrophotometer (Perkin Elmer). UV spectra were recorded in methanol on a Shimadzu UV2600 spectrophotometer (Japan). Mass spectra were recorded on a Bruker Daltonics maXis impact HD instrument, ESI ionization method. Elemental analysis was carried out using an automatic elemental analyzer CHNS PE 2400, series II (Perkin Elmer Instruments).
Примеры реализации изобретенияExamples of the implementation of the invention
Структурная идентификация продуктов.Structural identification of products.
Пример 1. 2-(5-(4-Метоксифенил)-3-фенил-6-метил-5,6-дигидро-4Н-[1,2,4,5]тетразин-1-ил)-бензтиазол 9Example 1 2-(5-(4-Methoxyphenyl)-3-phenyl-6-methyl-5,6-dihydro-4H-[1,2,4,5]tetrazin-1-yl)-benzothiazole 9
Синтезировали по общей методике, в качестве алкилирующего агента использовали йодэтан. Выход 205 мг (62%). Т.пл. 191°С (МеОН). Спектр ЯМР 1Н, δ, м.д.: 1.49 д (3Н, J 6.9 Гц, СН3), 3.65 с (3Н, ОСН3), 6.20 кв (1Н, J 6.9 Гц, СН), 6.86 д (2Наром., J 9.2 Гц), 7.07 т (1Наром., J 8.1 Гц), 7.16 д(2Наром., J 9.2 Гц), 7.27 т (1Наром., J 8.1 ГЦ), 7.50 д (1Наром., J 8.1 Гц), 7.52-7.58 м (3Наром), 7.74 д (1Наром., J 8.1 Гц) 7.89-7.96 м (2Наром.), 9.56 уш.с (1H, NH). Спектр ЯМР, 13С, δ, м.д.: 16.19, 55.12, 67.60, 114.37, 118.87, 119.49, 121.26, 125.70, 125.86, 128.63, 130.51, 130.68, 131.19, 143.71, 144.26, 152.31, 155.17, 166.03. ИК спектр, v, см-1: 3332, 1595, 1533, 1504, 1444, 1277, 1178, 753, 693. Масс-спектр: найдено, m/z: 416.1535 [М+Н]+. Вычислено для C23H21N5OS, m/z. 415.1567. Рассчитано для C23H21N5OS, %: С, 66.48; Н, 5.09; N, 16.85. Найдено, %: С, 66.46; Н, 5.07; N, 16.83.Synthesized according to the general method, iodoethane was used as the alkylating agent. Yield 205 mg (62%). So pl. 191°C (MeOH). 1H NMR spectrum, δ, ppm : 1.49 d (3H, J 6.9 Hz, CH 3 ), 3.65 s (3H, OCH 3 ), 6.20 q (1H, J 6.9 Hz, CH), 6.86 d (2H arom ., J 9.2 Hz), 7.07 t (1H arom. , J 8.1 Hz), 7.16 d (2H arom. , J 9.2 Hz), 7.27 t (1H arom. , J 8.1 Hz), 7.50 d (1H arom. , J 8.1 Hz), 7.52–7.58 m (3H arom ), 7.74 d (1H arom , J 8.1 Hz) 7.89–7.96 m (2H arom ), 9.56 br.s (1H, NH). SPECTRO, 13 s, Δ, MD: 16.19, 55.12, 67.60, 114.37, 118.87, 119.49, 121.26, 125.70, 125.86, 128.63, 130.51, 130.68, 131.19, 143.71, 144.26, 152.31, 155.17, 166.03. IR spectrum, v, cm -1 : 3332, 1595, 1533, 1504, 1444, 1277, 1178, 753, 693. Mass spectrum: found, m/z: 416.1535 [M+H] + . Calculated for C 23 H 21 N 5 OS, m/z. 415.1567. Calculated for C 23 H 21 N 5 OS, %: C, 66.48; H, 5.09; N, 16.85. Found, %: C, 66.46; H, 5.07; N, 16.83.
Пример 2. 2-(5-(4-Метоксифенил)-3-фенил-6-этил-5,6-дигидро-4Н-[1,2,4,5]тетразин-1-ил)-бензтиазол 10Example 2 2-(5-(4-Methoxyphenyl)-3-phenyl-6-ethyl-5,6-dihydro-4H-[1,2,4,5]tetrazin-1-yl)-benzothiazole 10
Синтезировали по общей методике, в качестве алкилирующего агента использовали бромпропан. Выход 161 мг (47%). Т.пл. 187°С (МеОН). Спектр ЯМР 1Н, δ, м.д.: 1.12 т (3Н, СН3, J 7.8 Гц), 1.67-1.95 м (2Н, СН2), 3.65 с (3Н, ОСН3), 5.92-6.0 м (2Н, СН), 6.86 д (2Наром., J 8.8 Гц), 7.05 т (1Наром., J 7.2 Гц), 7.14 д (2Наром., J 8.8 Гц), 7.25 т (1Наром., J 7.2 Гц), 7.47 д (1Наром., J 8.0 Гц), 7.51-7.59 м (3Наром.), 7.72 д (1Наром., J 8.0 Гц) 7.86-7.95 м (2Наром.), 9.51 уш.с (1H, NH). Спектр ЯМР 13С, δ, м.д.: 9.72, 22.95, 55.11, 72.67, 114.39, 118.79, 119.55, 121.09, 125.89, 128.63, 130.53, 130.67, 131.18, 143.77, 144.66, 152.35, 155.13, 166.17. ИК спектр, v, см-1: 3177, 1596, 1536, 1505, 1446, 1276, 1178, 753, 693. Масс-спектр: найдено, m/z: 430.1700 [М+Н]+. Вычислено для C24H23N5OS, m/z: 429.1623. Рассчитано для C24H23N5OS, %: С, 67.11; Н, 5.40; N, 16.30. Найдено, %: С, 67.08; Н, 5.37; N, 16.29.Synthesized according to the general method, bromopropane was used as the alkylating agent. Yield 161 mg (47%). So pl. 187°C (MeOH). 1H NMR spectrum, δ, ppm : 1.12 t (3H, CH 3 , J 7.8 Hz), 1.67-1.95 m (2H, CH 2 ), 3.65 s (3H, OCH 3 ), 5.92-6.0 m ( 2H, CH), 6.86 d (2H arom , J 8.8 Hz), 7.05 t (1H arom , J 7.2 Hz), 7.14 d (2H arom , J 8.8 Hz), 7.25 t (1H arom , J 7.2 Hz), 7.47 d (1H arom. , J 8.0 Hz), 7.51-7.59 m (3H arom .), 7.72 d (1H arom. , J 8.0 Hz) 7.86-7.95 m (2H arom. ), 9.51 br.s (1H, NH). The spectrum of JAMR 13 s, Δ, MD: 9.72, 22.95, 55.11, 72.67, 114.39, 118.79, 119.55, 121.09, 125.89, 128.63, 130.53, 130.67, 131.18, 143.77, 144.66, 152.35, 155.13, 166.17. IR spectrum, v, cm -1 : 3177, 1596, 1536, 1505, 1446, 1276, 1178, 753, 693. Mass spectrum: found, m/z: 430.1700 [M+H] + . Calculated for C 24 H 23 N 5 OS, m/z: 429.1623. Calculated for C 24 H 23 N 5 OS, %: C, 67.11; H, 5.40; N, 16.30. Found, %: С, 67.08; H, 5.37; N, 16.29.
Пример 3. Оценка цитотоксичности соединенийExample 3 Evaluation of Cytotoxicity of Compounds
Токсичность соединений была изучена в отношении клеток Vero. Клетки сеяли в 96-луночные планшеты и культивировали при 37°С в среде MEM с добавлением 10% сыворотки крупного рогатого скота в атмосфере 5% СО2 (в газопроточном инкубаторе Panasonic 170-AIC) до состояния монослоя. Из исследуемых соединений готовили маточный раствор концентрации 10 мг/мл в диметилсульфоксиде, после чего готовили серию трехкратных разведений препаратов в среде MEM от 1000 до 1 μg/ml. Растворенный препарат вносили в лунки планшетов и инкубировали 1 сутки при 37°С. По истечении этого срока клетки промывали 2 раза по 5 минут фосфатно-солевым буфером, и количество живых клеток оценивали при помощи микротетразолиевого теста (МТТ). С этой целью в лунки планшетов добавляли по 100 мкл раствора (5 мг/мл) 3-(4,5-диметилтиазолил-2) 2,5-дифенилтетразолия бромида (ICN Biochemicals Inc., Aurora, Ohio) на физиологическом растворе. Клетки инкубировали при 37°С в атмосфере 5% СО2 в течение 2 часов и промывали 5 минут фосфатно-солевым буфером. Осадок растворяли в 100 мкл на лунку ДМСО, после чего оптическую плотность в лунках планшетов измеряли на планшетном ридере Thermo Multiskan FC при длине волны 535 нм. По результатам теста для каждого продукта определяли 50% цитотоксическую дозу (СС50), т.е. концентрацию препарата, вызывающую гибель 50% клеток в культуре с использованием программного обеспечения GraphPadPrism6.The toxicity of the compounds was studied against Vero cells. The cells were seeded in 96-well plates and cultured at 37°C in MEM medium with the addition of 10% bovine serum in an atmosphere of 5% CO 2 (in a Panasonic 170-AIC gas-flow incubator) to the state of a monolayer. A stock solution of a concentration of 10 mg/mL in dimethyl sulfoxide was prepared from the studied compounds, after which a series of threefold dilutions of the preparations in the MEM medium from 1000 to 1 μg/mL was prepared. The dissolved preparation was added to the wells of the plates and incubated for 1 day at 37°C. After this period, the cells were washed 2 times for 5 minutes with phosphate-buffered saline, and the number of living cells was assessed using the microtetrazolium test (MTT). For this purpose, 100 μl of a solution (5 mg/ml) of 3-(4,5-dimethylthiazolyl-2) 2,5-diphenyltetrazolium bromide (ICN Biochemicals Inc., Aurora, Ohio) in physiological saline was added to the wells of the plates. Cells were incubated at 37°C in an atmosphere of 5% CO 2 for 2 hours and washed for 5 minutes with phosphate-buffered saline. The precipitate was dissolved in 100 μl per well of DMSO, after which the optical density in the wells of the plates was measured on a Thermo Multiskan FC plate reader at a wavelength of 535 nm. According to the results of the test for each product, a 50% cytotoxic dose (CC 50 ) was determined, i.e. the concentration of the drug that causes the death of 50% of the cells in culture using the GraphPadPrism6 software.
Значения СС50 для соединения 9 и 10 составили 850 мкг/мл и >1000 мкг/мл, соответственно. Полученные данные свидетельствуют о низкой токсичности полученных соединений, поскольку их следует отнести к 4-му из пяти существующих классу опасности (50% токсическая доза от 300 до 2000 мг/кг, или мкг/мл) [Классификация Европейской экономической комиссии ЕЭК ООН), https://unece.org/DAM/trans/danger/publi/ghs/ghs_rev07/Russian/03r_Part3.pdfl.CC 50 values for compounds 9 and 10 were 850 μg/ml and >1000 μg/ml, respectively. The data obtained indicate the low toxicity of the compounds obtained, since they should be assigned to the 4th of the five existing hazard classes (50% toxic dose from 300 to 2000 mg / kg, or μg / ml) [Classification of the UNECE Economic Commission for Europe], https ://unece.org/DAM/trans/danger/publi/ghs/ghs_rev07/Russian/03r_Part3.pdfl.
Пример 4. Оценка противовирусного действияExample 4 Evaluation of antiviral activity
Противовирусную активность соединений изучали в культуре клеток Vero в отношении вируса Коксаки В3. Клетки Vero рассевали на 96-луночные планшеты, как описано в Примере 1. После формирования монослоя в лунки добавляли изучаемые соединения в соответствующих концентрациях (от 100 мкг/мл до 1 мкг/мл), инкубировали 1 час и заражали клетки вирусом Коксаки В3 при множественности заражения 0,01 TCID50 на клетку. Планшеты инкубировали 1 час, несвязавшийся вирус отмывали физиологическим раствором, добавляли свежие растворы соединений в тех же концентрациях и инкубировали планшеты при 37°С в атмосфере 5% СО2 в течение 24 часов. После этого инфекционную активность вирусного потомства в каждой лунке планшета определяли при помощи титрования на клетках Vero методом предельных разведений (титрование по конечной точке). Для этого из вируссодержащей жидкости готовили серию десятикратных разведений, заражали ими клетки Vero, предварительно посеянные в 96-луночные планшеты и инкубировали 72 часа при 37°С в атмосфере 5% СО2. По прошествии этого срока визуально отмечали наличие вирусспецифического цитопатогенного действия (ЦПД) в лунках планшетов. За титр вируса принимали максимальное разведение вируса, приводящее к появлению ЦПД в половине инфицированных лунок. Титр выражали в 50% цитотоксических дозах (TCID50/0,2 мл). На основании полученных данных с использованием программного обеспечения GraphPadPrism6 для каждого соединения рассчитывали значение 50% ингибирующей концентрации (IC50) - концентрации, снижающей титр вируса вдвое по сравнению с контролем, а также индекс селективности - отношение СС50 к IC50, показывающий, насколько избирательно соединение подавляет репродукцию вируса по сравнению с клеточным метаболизмом.The antiviral activity of the compounds was studied in Vero cell culture against the Coxsackie B3 virus. Vero cells were plated on 96-well plates as described in Example 1. After monolayer formation, test compounds were added to the wells at appropriate concentrations (100 μg/ml to 1 μg/ml), incubated for 1 hour, and cells were infected with Coxsackie B3 virus at multiplicity infection 0.01 TCID 50 per cell. The plates were incubated for 1 hour, the unbound virus was washed with saline, fresh solutions of the compounds were added at the same concentrations, and the plates were incubated at 37°C in an atmosphere of 5% CO 2 for 24 hours. Thereafter, the infectivity of the viral progeny in each well of the plate was determined by titration on Vero cells by the limiting dilution method (endpoint titration). To do this, a series of tenfold dilutions was prepared from the virus-containing liquid, Vero cells, previously seeded in 96-well plates, were infected with them and incubated for 72 hours at 37°C in an atmosphere of 5% CO 2 . After this period, the presence of a virus-specific cytopathogenic effect (CPE) in the wells of the plates was visually noted. The virus titer was taken as the maximum dilution of the virus, leading to the appearance of CPE in half of the infected wells. The titer was expressed in 50% cytotoxic doses (TCID 50 /0.2 ml). Based on the data obtained using the software GraphPadPrism6 for each compound, the value of 50% inhibitory concentration (IC 50 ) was calculated - the concentration that reduces the virus titer by half compared to the control, as well as the selectivity index - the ratio of CC 50 to IC 50 showing how selectively the compound inhibits viral reproduction compared to cellular metabolism.
Полученные в результате экспериментов значения IC50 для соединений 9 и 10 составили 10 и 25,8 мкг/мл, соответственно. Таким образом, величины индексов селективности составили 85 и > 38, соответственно. Эти показатели намного превосходят пороговое значение SI=10, на основании которого делается заключение о перспективности того или иного соединения как потенциального противовирусного средства [Smee D., J Virol Methods; 2017:51-56], что убедительно доказывает высокие вирусингибирующие характеристики изученных соединений.The experimentally obtained IC 50 values for compounds 9 and 10 were 10 and 25.8 μg/ml, respectively. Thus, the selectivity indices were 85 and >38, respectively. These indicators far exceed the threshold value SI=10, on the basis of which a conclusion is made about the prospects of a particular compound as a potential antiviral agent [Smee D., J Virol Methods; 2017:51-56], which convincingly proves the high virus-inhibiting characteristics of the studied compounds.
Результаты исследований представлены в таблице 1.The research results are presented in table 1.
Заявляемые соединения (9, 10) проявляют высокую активность в отношении коллекционного штамма вируса Коксаки В3 (Nancy).The claimed compounds (9, 10) show high activity against the collection strain of the Coxsackie virus B3 (Nancy).
Таким образом, заявляемые 2-[5-(4-метоксифенил)-3-фенил-3-метил-5,6-дигидро-4Н-[1,2,4,5]тетразин-1-ил]-бензотиазол (9) 2-[5-(4-метоксифенил)-3-фенил-6-этил-5,6-дигидро-4Н-[1,2,4,5]тетразин-1-ил]-бензотиазол (10) обладают выраженной противовирусной активностью в отношении вируса Коксаки В3, а также низкой цитотоксичностью.Thus, the claimed 2-[5-(4-methoxyphenyl)-3-phenyl-3-methyl-5,6-dihydro-4H-[1,2,4,5]tetrazin-1-yl]-benzothiazole (9 ) 2-[5-(4-methoxyphenyl)-3-phenyl-6-ethyl-5,6-dihydro-4H-[1,2,4,5]tetrazin-1-yl]-benzothiazole (10) have a pronounced antiviral activity against the Coxsackie B3 virus, as well as low cytotoxicity.
Claims (2)
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2783659C1 true RU2783659C1 (en) | 2022-11-15 |
Family
ID=
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5455237A (en) * | 1993-07-21 | 1995-10-03 | Chinoin Gyogyszer Es Vegyeszeti Termekek Gyara Rt. | Acaricidally active tetrazine derivatives |
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5455237A (en) * | 1993-07-21 | 1995-10-03 | Chinoin Gyogyszer Es Vegyeszeti Termekek Gyara Rt. | Acaricidally active tetrazine derivatives |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Федорченко Т.Г. и др., Синтез, спектральные, электрохимические и антиоксидантные свойства 2-[5-(арил)-6-R-3-фенил-5,6-дигидро-4Н-[1,2,4,5]тетразин-1-ил]-бензотиазолов. Журнал органической химии, 2020, том 56, 1, с.52-64. Липунова Г.Н. и др., Новые аспекты химии формазанов. Российский химический журнал, 2016, том LX, 3, с.66-80. Липунова Г.Н. и др., Вердазилы: синтез, свойства, применение. Успехи химии, 2013, том 82, 8, с.701-734. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP3835296A1 (en) | Ketoamide compound and preparation method, pharmaceutical composition, and use thereof | |
| CA1329392C (en) | Imidazole and triazole derivatives and antiviral and radiosensitizing agents comprising same | |
| US9040687B2 (en) | Process for the preparaton of novel porphyrin derivatives and their use as PDT agents and fluorescence probes | |
| JP5809702B2 (en) | NOVEL COMPOUND AND PROCESS FOR PRODUCING THE SAME | |
| JP2018531987A (en) | MALT1 inhibitor and use thereof | |
| JP7043260B2 (en) | A novel dihydroporphyrin e6 derivative and a pharmaceutically acceptable salt thereof, a method for preparing the same and a use thereof. | |
| CN110256313B (en) | Photosensitizer prodrug compound and preparation method and application thereof | |
| JP2018502909A (en) | Methods for making oxathiazine-like compounds | |
| MXPA03008925A (en) | Photosensitiser and method for production thereof. | |
| Silva et al. | Synthesis of cationic β-vinyl substituted meso-tetraphenylporphyrins and their in vitro activity against herpes simplex virus type 1 | |
| CN107216352A (en) | Mitochondrially targeted dihydrogen pyridine derivative and preparation method and application | |
| CN112341493A (en) | Mitochondrial targeting melatonin modified based on triphenylphosphine and preparation method and application thereof | |
| Abid et al. | Synthesis and antiamoebic activity of metronidazole thiosemicarbazone analogues | |
| RU2404987C2 (en) | Antineoplastic compounds and based pharmaceutical compositions | |
| RU2783659C1 (en) | 2-[5-(4-methoxy)-3-phenyl-5,6-dihydro-4h-[1,2,4,5]tetrazin-1-yl]-benzothiazoles with antiviral activity against coxsackie b3 viruses | |
| CN111825624B (en) | Ester-water amphiphilic hypocrellin derivative and preparation method and application thereof | |
| CN116283939A (en) | Antifungal compound with photoresponse activity and application thereof | |
| CN108530335B (en) | Indole compound and preparation method and application thereof | |
| CN108129366B (en) | Antiviral compounds, methods of preparation and uses thereof | |
| RU2312104C1 (en) | 4-methoxy-5-nitro-6-thiocyanopyrimidine possessing fungicide activity and method for its preparing | |
| CN101961331A (en) | Ubiquitin E1 inhibitor and preparation method thereof | |
| EP0272810A2 (en) | Antitumor and antiviral alkaloids | |
| CN109836477B (en) | Phenylalanine derivative containing benzothiadiazine-3-ketone 1, 1-dioxide and preparation method and application thereof | |
| RU2649406C1 (en) | 3-n-substituted bornyl propionates used as marburg virus inhibitors | |
| SU1616519A3 (en) | Method of producing 1,3,4-thiadiazol-2-cyanamide or its pharmaceutically acceptable salts |