RU2783492C1 - Method for immunodiagnostics of tuberculosis in patients with chronic kidney disease - Google Patents
Method for immunodiagnostics of tuberculosis in patients with chronic kidney disease Download PDFInfo
- Publication number
- RU2783492C1 RU2783492C1 RU2022103009A RU2022103009A RU2783492C1 RU 2783492 C1 RU2783492 C1 RU 2783492C1 RU 2022103009 A RU2022103009 A RU 2022103009A RU 2022103009 A RU2022103009 A RU 2022103009A RU 2783492 C1 RU2783492 C1 RU 2783492C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- test
- skin
- reaction
- tuberculosis
- patients
- Prior art date
Links
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 title claims abstract description 37
- 206010038444 Renal failure chronic Diseases 0.000 title claims abstract description 16
- 201000000522 chronic kidney disease Diseases 0.000 title claims abstract description 16
- 210000003491 Skin Anatomy 0.000 claims abstract description 35
- 206010020565 Hyperaemia Diseases 0.000 claims abstract description 18
- 230000002009 allergen Effects 0.000 claims abstract description 15
- 229960001005 tuberculin Drugs 0.000 claims abstract description 15
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 claims abstract description 12
- 210000000245 Forearm Anatomy 0.000 claims abstract description 6
- 206010033733 Papule Diseases 0.000 claims abstract description 6
- 208000008313 Contusions Diseases 0.000 claims abstract description 5
- 206010011968 Decreased immune responsiveness Diseases 0.000 claims abstract description 5
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 claims abstract description 4
- 206010025226 Lymphangitis Diseases 0.000 claims abstract description 4
- 201000003265 lymphadenitis Diseases 0.000 claims abstract description 4
- 238000001631 haemodialysis Methods 0.000 claims abstract description 3
- 230000000268 renotropic Effects 0.000 claims abstract description 3
- 238000009256 replacement therapy Methods 0.000 claims abstract description 3
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 claims abstract description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 43
- 206010003226 Arteriovenous fistula Diseases 0.000 claims description 3
- 230000001186 cumulative Effects 0.000 claims description 3
- 230000000322 hemodialysis Effects 0.000 claims description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 12
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 3
- 206010016717 Fistula Diseases 0.000 abstract 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 230000003890 fistula Effects 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 17
- 102000038129 antigens Human genes 0.000 description 17
- 108091007172 antigens Proteins 0.000 description 17
- 102100016020 IFNG Human genes 0.000 description 11
- 101700086956 IFNG Proteins 0.000 description 10
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 8
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- 241000187479 Mycobacterium tuberculosis Species 0.000 description 5
- 229940010383 Mycobacterium tuberculosis Drugs 0.000 description 5
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 5
- 201000009910 diseases by infectious agent Diseases 0.000 description 4
- 101700053622 esxA Proteins 0.000 description 4
- 238000009636 ATP test Methods 0.000 description 3
- ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-N Adenosine triphosphate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 210000002381 Plasma Anatomy 0.000 description 3
- 102000004965 antibodies Human genes 0.000 description 3
- 108090001123 antibodies Proteins 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 3
- 231100000601 Intoxication Toxicity 0.000 description 2
- 208000005374 Poisoning Diseases 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000035987 intoxication Effects 0.000 description 2
- 231100000566 intoxication Toxicity 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 210000000056 organs Anatomy 0.000 description 2
- 230000000241 respiratory Effects 0.000 description 2
- 210000004369 Blood Anatomy 0.000 description 1
- 210000000601 Blood Cells Anatomy 0.000 description 1
- 102200030106 COL24A1 A61V Human genes 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N D-sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 1
- 229940088597 Hormone Drugs 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 210000004072 Lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000003819 Peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 229920000903 Polyhydroxyalkanoate Polymers 0.000 description 1
- 206010038683 Respiratory disease Diseases 0.000 description 1
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108010001801 Tumor Necrosis Factor-alpha Proteins 0.000 description 1
- 239000002160 alpha blocker Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004027 cells Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000001684 chronic Effects 0.000 description 1
- 238000007374 clinical diagnostic method Methods 0.000 description 1
- 230000001085 cytostatic Effects 0.000 description 1
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 101700052182 esxB Proteins 0.000 description 1
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000002458 infectious Effects 0.000 description 1
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000003287 optical Effects 0.000 description 1
- 229920002469 poly(p-dioxane) polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
Abstract
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к фтизиатрии, и может быть использовано для комплексной иммунодиагностики туберкулеза у пациентов с хронической болезнью почек (ХБП) в терминальной стадии.The invention relates to medicine, namely to phthisiology, and can be used for complex immunodiagnosis of tuberculosis in patients with chronic kidney disease (CKD) in the terminal stage.
Известен способ диагностики туберкулеза [RU 2395092, С2, G01N 33/53, 20.10.2010], основанный на проведении иммунохроматографического анализа, при котором на мембранной тест-полоске формируются комплексы, в состав которых входят молекулы антигена или антигенов Mycobacterium tuberculosis, специфичные к ним антитела, содержащиеся в тестируемой жидкой пробе, и частицы коллоидного золота, связывание которых в аналитической зоне тест-полоски регистрируется визуально или с помощью оптического детектора, при этом, для достижения более интенсивного окрашивания аналитической зоны тест-полоски и достоверной регистрации результатов анализа молекулы антигена или антигенов Mycobacterium tuberculosis иммобилизуются как в аналитической зоне тест-полоски, так и на поверхности коллоидной частицы, вследствие чего при контакте тест-полоски с жидкой пробой и последующем движении реагентов по мембранам тест-полоски в аналитической зоне происходит формирование регистрируемых комплексов, состоящих из иммобилизованных на мембране молекул антигена или антигенов, содержащихся в пробе антител, к антигену или антигенам Mycobacterium tuberculosis и конъюгата антигена или антигенов Mycobacterium tuberculosis с частицами коллоидного золота.A known method for the diagnosis of tuberculosis [RU 2395092, C2, G01N 33/53, 20.10.2010], based on the immunochromatographic analysis, in which complexes are formed on the membrane test strip, which include molecules of the antigen or antigens of Mycobacterium tuberculosis, specific to them antibodies contained in the test liquid sample, and particles of colloidal gold, the binding of which in the analytical zone of the test strip is recorded visually or using an optical detector, while, in order to achieve more intense staining of the analytical zone of the test strip and reliable registration of the results of the analysis of the antigen molecule, or antigens of Mycobacterium tuberculosis are immobilized both in the analytical zone of the test strip and on the surface of the colloidal particle, as a result of which, upon contact of the test strip with a liquid sample and subsequent movement of the reagents along the membranes of the test strip, the formation of registered complexes consisting of immobility occurs in the analytical zone. molecules of the antigen or antigens contained in the antibody sample to the antigen or antigens of Mycobacterium tuberculosis and the conjugate of the antigen or antigens of Mycobacterium tuberculosis with particles of colloidal gold, called on the membrane.
Недостатком способа является относительно низкая достоверность диагностики.The disadvantage of this method is the relatively low reliability of diagnosis.
Наиболее близким по технической сущности к предложенному является способ диагностики туберкулеза и неспецифической патологии органов дыхания у детей и подростков [RU 2633339, С2, А61В 10/00, 11.10.2017], согласно которому проводят туберкулиновую пробу Манту с 2 ТЕ ППД-Л на одной руке пациента, через 72 часа определяют реакцию на туберкулиновую пробу Манту с 2 ТЕ ППД и фиксируют или отрицательную реакцию при отсутствии инфильтрата и гиперемии, или сомнительную реакцию при инфильтрате диаметром 2-4 мм или только гиперемии любого размера, или положительную реакцию при наличии инфильтрата диаметром 5 мм и более, или резко положительную реакцию при инфильтрате диаметром 17 мм и более у детей и подростков и 21 мм и более у взрослых, а также при появлении везикулы, лимфангита или регионарного лимфаденита независимо от размера инфильтрата, отличающийся тем, что одновременно с туберкулиновой пробой Манту с 2 ТЕ ППД-Л на другой руке пациента проводят кожную пробу с аллергеном туберкулезным рекомбинантным Диаскинтест, и через 72 часа одновременно с определением реакции на туберкулиновую пробу Манту с 2 ТЕ ППД-Л определяют реакцию на кожную пробу с аллергеном туберкулезным рекомбинантным Диаскинтест, и фиксируют или отрицательную реакцию при отсутствии следа или точечного следа или синяка до 2 мм, или сомнительную реакцию при гиперемии любого размера, или положительную реакцию при наличии папулы любого размера, а затем проводят совокупную оценку результатов реакции на пробу Манту с 2 ТЕ ППД-Л и результатов реакции на кожную пробу с аллергеном туберкулезным рекомбинантным Диаскинтест, при которой у пациентов при отрицательных результатах по обоим тестам диагностируют или отсутствие инфицирования микобактериями туберкулеза, или как результат применения гормонов, цитостатиков, блокаторов ФНО-α, или иммунокомпрометированное заболевание, или инфекционную анергию, обусловленную тяжелой формой туберкулеза, при положительном результате реакции на пробу Манту с 2 ТЕ ППД-Л и отрицательном результате реакции на кожную пробу с аллергеном туберкулезным рекомбинантным Диаскинтест диагностируют нетуберкулезное заболевание органов дыхания и отсутствие анергии, а при наличии положительных результатов реакции обоих тестов диагностируют активный туберкулез.The closest in technical essence to the proposed one is a method for diagnosing tuberculosis and nonspecific pathology of the respiratory organs in children and adolescents [RU 2633339, C2, A61V 10/00, 10/11/2017], according to which a Mantoux tuberculin test is performed with 2 TU PPD-L on one the patient’s hand, after 72 hours, the reaction to the Mantoux tuberculin test with 2 TU PPD is determined and either a negative reaction is recorded in the absence of infiltrate and hyperemia, or a doubtful reaction with an infiltrate with a diameter of 2-4 mm, or only hyperemia of any size, or a positive reaction in the presence of an infiltrate with a diameter 5 mm or more, or a sharply positive reaction with an infiltrate with a diameter of 17 mm or more in children and adolescents and 21 mm or more in adults, as well as with the appearance of vesicles, lymphangitis or regional lymphadenitis, regardless of the size of the infiltrate, characterized in that simultaneously with tuberculin Mantoux test with 2 TU PPD-L on the other hand of the patient, a skin test is performed with the allergen tuberculosis river binant Diaskintest, and after 72 hours, simultaneously with the determination of the reaction to the Mantoux tuberculin test with 2 TU PPD-L, the reaction to the skin test with the allergen tuberculosis recombinant Diaskintest is determined, and either a negative reaction is recorded in the absence of a trace or a dotted trace or a bruise up to 2 mm, or a doubtful reaction with hyperemia of any size, or a positive reaction in the presence of a papule of any size, and then a cumulative assessment of the results of the reaction to the Mantoux test with 2 TU PPD-L and the results of the reaction to the skin test with the allergen tuberculosis recombinant Diaskintest, in which patients with negative the results of both tests diagnose either the absence of infection with Mycobacterium tuberculosis, or as a result of the use of hormones, cytostatics, TNF-α blockers, or an immunocompromised disease, or an infectious anergy caused by a severe form of tuberculosis, with a positive reaction to the Mantoux test with 2 TU PPD-L and negative As a result of the reaction to a skin test with the recombinant tuberculosis allergen Diaskintest, a non-tuberculous respiratory disease and the absence of anergy are diagnosed, and if both tests are positive, active tuberculosis is diagnosed.
Недостатком способа является относительно узкая область применения и вызванная этим относительно низкая чувствительность и достоверность диагностики при наличии у пациентов хронических заболеваний, например, ХБП.The disadvantage of this method is the relatively narrow scope and the resulting relatively low sensitivity and reliability of diagnosis in patients with chronic diseases, such as CKD.
Задачей, которая решается в изобретении, является разработка способа иммунодиагностики туберкулеза у пациентов с хронической болезнью почек (ХБП) в терминальной стадии, обладающего высокой чувствительностью и достоверностью.The problem solved in the invention is the development of a method for immunodiagnosis of tuberculosis in patients with chronic kidney disease (CKD) in the terminal stage, which has high sensitivity and reliability.
Требуемый технический результат заключается в расширении области применения и повышении чувствительности и достоверности диагностики.The required technical result is to expand the scope and increase the sensitivity and reliability of diagnosis.
Поставленная задача решается, а требуемый технический результат достигается тем, что, в способе, заключающемся в том, что, проводят туберкулиновую пробу Манту с 2 ТЕ ППД-Л, согласно изобретению, дополнительно проводят пробу с АТР, причем, обе пробы проводят одномоментно.The problem is solved, and the required technical result is achieved by the fact that, in the method, which consists in carrying out the Mantoux tuberculin test with 2 TU PPD-L, according to the invention, an additional test with ATP is carried out, moreover, both tests are carried out simultaneously.
Предложенный способ осуществляется следующим образом.The proposed method is carried out as follows.
Пациентам с хронической болезнью почек (ХБП) в терминальной стадии проводят туберкулиновую пробу Манту с 2 ТЕ ППД-Л и через 72 часа определяют реакцию на туберкулиновую пробу Манту с 2 ТЕ ППД-Л и фиксируют или отрицательную реакцию при отсутствии инфильтрата и гиперемии, или сомнительную реакцию при инфильтрате диаметром 2-4 мм или только гиперемии любого размера, или положительную реакцию при наличии инфильтрата диаметром 5 мм и более, или резко положительную реакцию при инфильтрате диаметром 21 мм и более, а также при появлении везикулы, лимфангита или регионарного лимфаденита независимо от размера инфильтрата; одновременно в день поставновки пробы Манту с 2 ТЕ ППД-Л на другом участке кожи (можно использовать участок кожи на внутренней поверхности средней трети предплечья обеих рук, участок кожи на внутренней поверхности средней трети предплечья одной руки и участок кожи на передней поверхности бедра при наличии артериовенозной фистулы у пациентов, получающих заместительную почечную терапию гемодиализом) проводят кожную пробу с аллергеном туберкулезным рекомбинантным Диаскинтест, и через 72 часа одновременно с определением реакции на туберкулиновую пробу Манту с 2 ТЕ ППД-Л определяют реакцию на кожную пробу с аллергеном туберкулезным рекомбинантным Диаскинтест, и фиксируют или отрицательную реакцию при отсутствии следа или точечного следа или синяка до 2 мм, или сомнительную реакцию при гиперемии любого размера, или положительную реакцию при наличии папулы любого размера, а затем проводят совокупную оценку результатов реакции на пробу Манту с 2 ТЕ ППД-Л и результатов реакции на кожную пробу с аллергеном туберкулезным рекомбинантным Диаскинтест, при которой при которой у пациентов при отрицательных результатах по обоим тестам диагностируют анергию, чаще всего обусловленную иммунодефицитным состоянием, при наличии положительной реакции на хотя бы одну из проб у пациента диагностируют активный туберкулез.Patients with chronic kidney disease (CKD) in the terminal stage undergo a tuberculin Mantoux test with 2 TU PPD-L and after 72 hours determine the reaction to the tuberculin Mantoux test with 2 TU PPD-L and fix either a negative reaction in the absence of infiltration and hyperemia, or a doubtful a reaction with an infiltrate with a diameter of 2-4 mm or only hyperemia of any size, or a positive reaction with an infiltrate with a diameter of 5 mm or more, or a sharply positive reaction with an infiltrate with a diameter of 21 mm or more, as well as with the appearance of vesicles, lymphangitis or regional lymphadenitis, regardless of the size of the infiltrate; simultaneously on the day of the Mantoux test with 2 TU PPD-L on another area of the skin (you can use a skin area on the inner surface of the middle third of the forearm of both hands, a skin area on the inner surface of the middle third of the forearm of one hand and a skin area on the anterior surface of the thigh in the presence of arteriovenous fistulas in patients receiving renal replacement therapy with hemodialysis), a skin test with the recombinant tuberculosis allergen Diaskintest is performed, and after 72 hours, simultaneously with the determination of the reaction to the Mantoux tuberculin test with 2 TU PPD-L, the reaction to the skin test with the recombinant tuberculosis allergen Diaskintest is determined and recorded or a negative reaction in the absence of a trace or a pinpoint mark or a bruise up to 2 mm, or a questionable reaction in case of hyperemia of any size, or a positive reaction in the presence of a papule of any size, and then a cumulative assessment of the results of the Mantoux test with 2 TU PPD-L and the results skin test reactions recombinant tuberculosis allergen Diaskintest, in which patients with negative results in both tests are diagnosed with anergy, most often due to an immunodeficiency state, in the presence of a positive reaction to at least one of the samples, the patient is diagnosed with active tuberculosis.
Для доказательства высокой чувствительности и достоверности предложенного способа были проведены комплексные исследования.Comprehensive studies were carried out to prove the high sensitivity and reliability of the proposed method.
В исследованиях участвовали 42 больных ХБП в терминальной стадии в период с 2011 по 2021 г.г. по поводу впервые выявленных изменений в легких и/или интоксикационного синдрома неясного генеза.The study involved 42 patients with end-stage CKD from 2011 to 2021. about newly diagnosed changes in the lungs and / or intoxication syndrome of unknown origin.
Целью исследований являлось: определить диагностическую ценность комплексного подхода к иммунодиагностике туберкулеза ОД у больных ХБП в терминальной стадии.The aim of the research was: to determine the diagnostic value of an integrated approach to the immunodiagnosis of OD tuberculosis in patients with CKD in the terminal stage.
Методы исследования.Research methods.
Всем 42 больным были выполнены 4 иммунологических теста одномоментно (проба Манту с 2 ТЕ ППД-Л, проба с ATP, Т-SPOT® ТВ, QuantiFERON®TB Gold In-Tube). Кожные пробы были поставлены после забора цельной периферической крови согласно протоколу.All 42 patients underwent 4 simultaneous immunological tests (Mantoux test with 2 TU PPD-L, ATP test, T-SPOT® TV, QuantiFERON®TB Gold In-Tube). Skin tests were performed after sampling of whole peripheral blood according to the protocol.
Результат пробы Манту с 2 ТЕ ППД-Л через 72 часа оценивал врач, регистрируя в медицинских документах наличие инфильтрата или гиперемии.The result of the Mantoux test with 2 TU PPD-L after 72 hours was evaluated by the doctor, registering the presence of infiltration or hyperemia in medical documents.
Реакцию считали:The reaction was considered:
- отрицательной при полном отсутствии инфильтрата (папулы) или гиперемии или при наличии только уколочной реакции (0-1 мм);- negative in the complete absence of infiltration (papules) or hyperemia, or in the presence of only a prick reaction (0-1 mm);
- сомнительной при инфильтрате размером 2-4 мм или только гиперемии любого размера без инфильтрата;- doubtful with an infiltrate of 2-4 mm in size or only hyperemia of any size without infiltration;
- положительной при наличии инфильтрата диаметром 5 мм и более.- positive in the presence of an infiltrate with a diameter of 5 mm or more.
Результат пробы с АТР через 72 часа оценивал врач, регистрируя в медицинских документах наличие инфильтрата или гиперемии.The result of the ATP test after 72 hours was evaluated by the doctor, registering the presence of infiltration or hyperemia in medical documents.
Реакция учитывалась как:The response was taken into account as:
- отрицательная - при полном отсутствии инфильтрата и гиперемии или при наличии «уколочной реакции» до 2-3 мм (возможно в виде «синячка»);- negative - in the complete absence of infiltration and hyperemia or in the presence of a "prick reaction" up to 2-3 mm (possibly in the form of a "bruise");
- сомнительная - при наличии гиперемии любого размера без инфильтрата;- doubtful - in the presence of hyperemia of any size without infiltrate;
- положительная - при наличии инфильтрата (папулы) любого размера.- positive - in the presence of infiltrate (papules) of any size.
Для исследования Т-SPOT® ТВ использовались наборы Оксфорд (Оксфорд Иммунотек Лтд). Исследования проводили в соответствии с рекомендациями производителя. Мононуклеарные клетки периферической крови были изолированы из цельной крови пациентов путем разделения на градиенте плотности фиколла, и подсчитаны. Стандартное количество клеток (2.5×105) было добавлено в каждые 4 лунки 8 луночного стрипа, содержащие для каждого образца отрицательный контроль, ESAT-6 антиген, CFP10 антиген и положительный контроль ФГА. После инкубации лунки были промыты и проявлены с использованием вторичных конъюгированных антител, связывающихся с секретированным интерфероном-γ. Для визуализации был использован субстрат, образующий темные не растворимые преципитаты. Окрашенные пятна подсчитывали вручную.Oxford kits (Oxford Immunotech Ltd.) were used to study T-SPOT® TV. The studies were carried out in accordance with the manufacturer's recommendations. Peripheral blood mononuclear cells were isolated from patients' whole blood by ficoll density gradient separation and counted. A standard number of cells (2.5×10 5 ) was added to every 4 wells of an 8 well strip containing, for each sample, a negative control, ESAT-6 antigen, CFP10 antigen and a PHA positive control. After incubation, the wells were washed and developed using secondary conjugated antibodies that bind to secreted interferon-γ. For visualization, a substrate was used that forms dark insoluble precipitates. Colored spots were counted manually.
За отрицательный результат принимали такой, при котором количество пятен в лунках с антигенами ESAT-6 и CFP10 не превышало 5 с учетом количества пятен в отрицательном контроле. Положительным считался результат, при котором количество пятен в лунках с антигенами ESAT-6 и CFP10 превышало 8, с учетом количества пятен в отрицательном контроле. Если количество пятен было от 5 до 8, то результат интерпретировался как сомнительный. Недостоверными признавались результаты, когда количество пятен в отрицательном контроле превышало 10 или было менее 20 в лунке положительного контроля.A negative result was one in which the number of spots in the wells with ESAT-6 and CFP10 antigens did not exceed 5, taking into account the number of spots in the negative control. A result was considered positive if the number of spots in the wells with ESAT-6 and CFP10 antigens exceeded 8, taking into account the number of spots in the negative control. If the number of spots was between 5 and 8, then the result was interpreted as doubtful. Results were considered invalid when the number of spots in the negative control exceeded 10 or was less than 20 in the positive control well.
Тест «QuantiFERON®TB Gold In-Tube» проводили в лаборатории биотехнологии. В основе теста «QuantiFERON®TB Gold In-Tube» лежит определение уровня продукции IFN-γ клетками периферической крови в ответ на стимуляцию антигенами, специфичными только для Mtb (ESAT-6, CFP-10 и ТВ7.7) посредством иммуноферментного анализа (ИФА).The QuantiFERON®TB Gold In-Tube test was performed in a biotechnology laboratory. The QuantiFERON®TB Gold In-Tube test is based on the determination of the level of production of IFN-γ by peripheral blood cells in response to stimulation with antigens specific for Mtb only (ESAT-6, CFP-10 and TB7.7) using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). ).
Образцы периферической крови отбирали по 1 мл в три пробирки: пробирка без антигена («NIL», отрицательный контроль); пробирка с антигенами Mtb («AG»); пробирка с митогеном («MIT», положительный контроль). Все образцы инкубировали в термостате в течение 24 часов при t=37°C. По окончании инкубации проводили центрифугирование на скорости 3500 об/мин в течение 15 минут и отделяли плазму. Плазму замораживали и хранили при t=-20°С до постановки теста. Перед постановкой реакции образцы плазмы и реагенты доводили до комнатной температуры в течение часа. Метод ИФА выполняли согласно рекомендации производителя (Cellestis Ltd, Австралия). Концентрацию IFN-γ (МЕ/мл) определяли с использованием спектрофотометра Sunrise™ и программного обеспечения Magellan™ (Tecan Group Ltd., Швейцария). Расчет полученных результатов производили в рекомендованном программном обеспечении «QuantiFERON-ТВ Gold Analysis Software)) (Cellestis Ltd, Австралия). В ходе постановки определяли концентрацию IFN-γ в пробах «NIL», «AG» и «MIT» («IFN-γNIL», «IFN-γAG» и «IFN-γMIT», соответственно). Результат теста определяли по формуле: значение концентрации IFN-γ в пробе «AG» («IFN-γAG») минус значение концентрации IFN-γ в пробе «NIL)) («IFN-γAG-NIL»). Если полученная разница была ≥0.35 МЕ/мл и 25% от значения в пробе «NIL)), то результат теста считали положительным.Peripheral blood samples were taken at 1 ml in three tubes: tube without antigen ("NIL", negative control); tube with Mtb antigens ("AG"); test tube with mitogen ("MIT", positive control). All samples were incubated in a thermostat for 24 hours at t=37°C. At the end of the incubation, centrifugation was performed at a speed of 3500 rpm for 15 minutes and the plasma was separated. The plasma was frozen and stored at t=-20°C until the test. Before setting up the reaction, plasma samples and reagents were brought to room temperature for an hour. The ELISA method was performed according to the manufacturer's recommendation (Cellestis Ltd, Australia). IFN-γ concentration (IU/mL) was determined using a Sunrise™ spectrophotometer and Magellan™ software (Tecan Group Ltd., Switzerland). The results obtained were calculated using the recommended QuantiFERON-TV Gold Analysis Software (Cellestis Ltd, Australia). During the setting, the concentration of IFN-γ was determined in the samples "NIL", "AG" and "MIT"("IFN-γ NIL ", "IFN-γ AG " and "IFN-γ MIT ", respectively). The test result was determined by the formula: the value of the concentration of IFN-γ in the sample "AG"("IFN-γ AG ") minus the value of the concentration of IFN-γ in the sample "NIL)) ("IFN-γ AG-NIL "). If the obtained difference was ≥0.35 IU/ml and 25% of the value in the "NIL" sample), then the test result was considered positive.
После завершения анализа результаты экспортировали в программу Microsoft Office Excel (Microsoft, США).After completion of the analysis, the results were exported to Microsoft Office Excel (Microsoft, USA).
Для статистической обработки результатов использовали программы «MS Excel)), «GraphPad)) (GraphPad Software Inc., США) и «MedCalo) (MedCalc Software Inc., Бельгия). Для сравнения относительных показателей использовали непараметрический критерий Фишера, различия считались достоверными при значении р<0,05.For statistical processing of the results, MS Excel)), GraphPad) (GraphPad Software Inc., USA) and MedCalo (MedCalc Software Inc., Belgium) programs were used. To compare relative indicators, a non-parametric Fisher test was used, differences were considered significant at p<0.05.
У всех обследованных 42 больных были установлен диагнозы вне зависимости от полученных результатов иммунологических тестов. Больные с туберкулезной инфекцией обозначены как 1-я группа (25 чел.), среди которых 1а группа - больные с активным туберкулезом (12 чел.), а 16 группа - больные с остаточными посттуберкулезными изменениями ОД (13 чел.). Во 2-ю группу вошли больные, у которых не было выявлено признаков туберкулезной инфекции: 2а группа - больные с заболеваниями ОД нетуберкулезной этиологии (13 чел.), 2б группа - больные с поствоспалительными изменениями ОД (4 чел.).In all 42 patients examined, diagnoses were established, regardless of the results of immunological tests. Patients with tuberculosis infection are designated as group 1 (25 people), among which group 1a - patients with active tuberculosis (12 people), and group 16 - patients with residual post-tuberculous changes in OD (13 people). Group 2 included patients who did not show signs of tuberculosis infection: group 2a - patients with OD diseases of non-tuberculous etiology (13 people), group 2b - patients with post-inflammatory changes in OD (4 people).
Учитывая, технологию выполнения тестов и их особенности, было сделано предположение, что следует рассмотреть комплекс иммунологических тестов, который позволит выделить среди больных ТХБП с впервые выявленными изменениями в органах дыхания и/или с интоксикационным синдромом неясного генеза группу лиц, нуждающихся в дальнейшем обследовании для исключения туберкулезной инфекции.Taking into account the technology of performing tests and their features, it was suggested that a set of immunological tests should be considered, which would make it possible to distinguish among patients with CKD with newly diagnosed changes in the respiratory organs and / or with an intoxication syndrome of unknown origin, a group of people who need further examination to exclude tuberculosis infection.
С целью выявления оптимального набора тестов проведен анализ числа больных ТХБП с положительными результатами иммунологических тестов при одномоментном их исполнении по группам без конкретизации вида иммунологического исследования (таблица 1).In order to identify the optimal set of tests, an analysis was made of the number of patients with CKD with positive results of immunological tests when they were performed simultaneously by groups without specifying the type of immunological study (Table 1).
Из данных таблицы 1, видно, что количество больных ТХБП с активным туберкулезом, у которых был положительный результат одного, 2-х, 3-х или 4-х иммунологических тестов одномоментно невелико - 25%,8,3%, 8,3% и 33,3% соответственно. При индивидуализированном подходе, когда учитывался положительны результат хотя бы одного любого из тестов итоговая чувствительность в отношении выявления активного туберкулеза такого комплексного подхода достигла 75% с высоким значение статистической значимости (р=0,001). Однако при анализе вида иммунологических исследований было обнаружено, что отсутствовали больные, у которых при наличии отрицательного результата QuantiFERON®TB Gold In-Tube был положительный результат любого другого теста.From the data in Table 1, it can be seen that the number of patients with TCLD with active tuberculosis who had a positive result of one, 2, 3 or 4 immunological tests at the same time is small - 25%, 8.3%, 8.3% and 33.3% respectively. With an individualized approach, when the positive result of at least one of any of the tests was taken into account, the final sensitivity in relation to the detection of active tuberculosis of such an integrated approach reached 75% with a high value of statistical significance (p = 0.001). However, when analyzing the type of immunoassay, it was found that there were no patients who had a negative QuantiFERON®TB Gold In-Tube result and had a positive result on any other test.
В связи с данным явлением подобный анализ проведен по результатам 3-х тестов (T-SPOT.TB в сочетании с кожными туберкулиновыми пробами) при одномоментном их исполнении без учета результатов теста QuantiFERON®TB Gold In-Tube, чтобы оценить возможности этих тестов в отсутствии теста QuantiFERON®TB Gold In-Tube (таблица 2).In connection with this phenomenon, a similar analysis was carried out on the results of 3 tests (T-SPOT.TB in combination with tuberculin skin tests) performed simultaneously without taking into account the results of the QuantiFERON®TB Gold In-Tube test in order to assess the capabilities of these tests in the absence of QuantiFERON®TB Gold In-Tube test (Table 2).
Как следует из данных таблицы 2, чувствительность такого комплекса иммунологических исследований (проба Манту с 2 ТЕ ППД-Л, проба с АТР, T-SPOT.TB) в отношении активного туберкулеза ОД оказалась не выше определенной ранее чувствительности при постановке только пробы Манту с 2 ТЕ ППД-Л или только теста T-SPOT.TB - 50%.As follows from the data in Table 2, the sensitivity of such a complex of immunological studies (Mantoux test with 2 TU PPD-L, test with ATP, T-SPOT.TB) in relation to active OD tuberculosis was not higher than the sensitivity previously determined when only the Mantoux test with 2 TE PPD-L or only T-SPOT.TB test - 50%.
Выполнен подобный анализ результатов кожных проб при их одномоментном исполнении без учета результатов лабораторных иммунологических тестов. Результаты данного анализа представлены в таблице 3.A similar analysis of the results of skin tests was performed during their simultaneous execution without taking into account the results of laboratory immunological tests. The results of this analysis are presented in table 3.
Как видно из данных таблицы 3, чувствительность комплекса кожных проб в отношении активного туберкулеза оказалась выше (58,3%) чем, ранее полученная чувствительность каждой из проб по отдельности (43,8%-42,9% и 37,5%-28,6% для пробы Манту с 2 ТЕ ППД-Л и пробы с АТР соответственно).As can be seen from the data in Table 3, the sensitivity of the skin test complex against active tuberculosis turned out to be higher (58.3%) than the previously obtained sensitivity of each of the samples separately (43.8% -42.9% and 37.5% -28 .6% for the Mantoux test with 2 TU PPD-L and the ATP test, respectively).
Таким образом, учитывая чувствительность комплекса кожных тестов (пробы Манту с 2 ТЕ ППД-Л и пробы с АТР) - 58,3% и с учетом их высокой специфичности (100%), целесообразно применение обеих проб одномоментно при отсутствии возможности выполнения теста QuantiFERON®TB Gold In-Tube в диагностике туберкулеза у данной категории иммунодефицитных больных.Thus, taking into account the sensitivity of the complex of skin tests (Mantoux test with 2 TU PPD-L and the test with ATP) - 58.3% and taking into account their high specificity (100%), it is advisable to use both tests at the same time in the absence of the possibility of performing the QuantiFERON® test TB Gold In-Tube in the diagnosis of tuberculosis in this category of immunodeficient patients.
В соответствии с проведенными исследованиями подтверждено достижение требуемого технического результата, который заключается в расширении области применения и повышении чувствительности и достоверности диагностики. При этом, специальной подготовки к выполнению кожных проб не требуется, а при их выполнении необходимо убедиться в отсутствии в области постановки тестов артериовенозной фистулы, венозных катетеров и других вариантов сосудистого доступа у больных ХБП в терминальной стадии с целью недопущения осложнений.In accordance with the studies carried out, the achievement of the required technical result was confirmed, which is to expand the scope and increase the sensitivity and reliability of diagnostics. At the same time, special preparation for performing skin tests is not required, and when performing them, it is necessary to make sure that there is no arteriovenous fistula, venous catheters and other options for vascular access in the area of testing in patients with end-stage CKD in order to prevent complications.
Claims (2)
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2783492C1 true RU2783492C1 (en) | 2022-11-14 |
Family
ID=
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2175444C1 (en) * | 2000-07-03 | 2001-10-27 | Стогова Наталья Аполлоновна | Method for diagnosing the cases of tuberculous pleurisy |
| RU2473090C2 (en) * | 2010-12-21 | 2013-01-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт фтизиопульмонологии" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (ФГБУ "СПбНИИФ" Минздравсоцразвития России) | Diagnostic technique for tuberculosis of intramammary lymph nodes of bronchopulmonary group in children |
| RU2633339C1 (en) * | 2016-07-13 | 2017-10-11 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Центральный научно-исследовательский институт туберкулеза" | Method for differential diagnostics of tuberculosis and nonspecific pathology of respiratory organs in children and adolescents |
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2175444C1 (en) * | 2000-07-03 | 2001-10-27 | Стогова Наталья Аполлоновна | Method for diagnosing the cases of tuberculous pleurisy |
| RU2473090C2 (en) * | 2010-12-21 | 2013-01-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт фтизиопульмонологии" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (ФГБУ "СПбНИИФ" Минздравсоцразвития России) | Diagnostic technique for tuberculosis of intramammary lymph nodes of bronchopulmonary group in children |
| RU2633339C1 (en) * | 2016-07-13 | 2017-10-11 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Центральный научно-исследовательский институт туберкулеза" | Method for differential diagnostics of tuberculosis and nonspecific pathology of respiratory organs in children and adolescents |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Гордеева О. М. и др., Применение иммунологических методов в комплексной диагностике туберкулеза у больных хронической болезнью почек в терминальной стадии. Вестник ЦНИИТ, 2019, специальный выпуск N 1, с. 55-56. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3969722B2 (en) | Candida detection | |
| Stefano et al. | Non-invasive tests for the diagnosis of helicobacter pylori: state of the art | |
| JP3551678B2 (en) | Method and kit for measuring hemoglobin A1c | |
| CN112379096B (en) | Application of exosome membrane protein as colon cancer diagnosis marker and colon cancer early diagnosis kit | |
| US20080227208A1 (en) | Devices and Methods for Detection of Occult Blood | |
| De Klerk et al. | Comparative evaluation of the enzyme-linked immunosorbent assay in the laboratory diagnosis of brucellosis | |
| Barrett et al. | Enzyme-linked immunosorbent assay for detection of Salmonella typhi Vi antigen in urine from typhoid patients | |
| KR20180093179A (en) | Rapid kit for diagnosing asthma or allergic disease | |
| RU2783492C1 (en) | Method for immunodiagnostics of tuberculosis in patients with chronic kidney disease | |
| JP4419020B2 (en) | Method for detecting Mycobacterium tuberculosis antigen in body fluid | |
| KR102172016B1 (en) | A method for detection of CYFRA21-1 Autoantibody-Antigen complex , CYFRA21-1 antigen and Lung Cancer diagnosis kit by using ratio of these markers | |
| Matossian et al. | Serologic evidence of the postoperative persistence of hydatid cysts in man | |
| RU181920U1 (en) | IMMUNOCHIP FOR TREPONEM-SPECIFIC SEROLOGICAL DIAGNOSTICS OF SYPHILIS | |
| WO2018210395A1 (en) | Lateral flow chromatographic assay for tuberculosis (tb) | |
| RU2018844C1 (en) | Method for diagnostics anemia at children | |
| JP3569577B2 (en) | Kit for differential diagnosis of kidney and urinary tract diseases | |
| CN111551741B (en) | Use of mycobacterium tuberculosis proteins in the preparation of a product for diagnosing tuberculosis latency infected persons and/or active tuberculosis | |
| KR102277871B1 (en) | The collection method of diagnosis information of Parkinson's disease by assessment of the α-synuclein oligomers in the urine and the kit | |
| Xu et al. | Detection of heart-type fatty acid binding protein in serum by a rapid quantitative time-resolved fluorescence immunochromatographic assay | |
| US11493521B2 (en) | Kit for tracking and diagnosing degree of progressive chronic hepatitis and liver fibrosis by measuring asialo (alpha)1-acid glycoprotein as hepatocellular injury marker and use thereof | |
| RU2794855C1 (en) | Method for diagnosing tuberculosis | |
| KR102351951B1 (en) | Method for detecting mycobacterium tuberculosis | |
| JPH07294530A (en) | Detection of antibody in body fluids against pathogn | |
| RU2024874C1 (en) | Method for diagnosing echinococcosis | |
| CN111551742B (en) | Use of mycobacterium tuberculosis proteins in the preparation of a product for diagnosing tuberculosis latency infected persons and/or active tuberculosis |