RU2782891C2 - Способ оценки качества рогового слоя клеточных моделей кожи человека - Google Patents
Способ оценки качества рогового слоя клеточных моделей кожи человека Download PDFInfo
- Publication number
- RU2782891C2 RU2782891C2 RU2017144057A RU2017144057A RU2782891C2 RU 2782891 C2 RU2782891 C2 RU 2782891C2 RU 2017144057 A RU2017144057 A RU 2017144057A RU 2017144057 A RU2017144057 A RU 2017144057A RU 2782891 C2 RU2782891 C2 RU 2782891C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- teer
- hscm
- quality
- indicator
- range
- Prior art date
Links
- 210000004927 Skin cells Anatomy 0.000 title abstract description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 25
- 210000000434 stratum corneum Anatomy 0.000 claims description 28
- 210000003491 Skin Anatomy 0.000 claims description 8
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 claims description 6
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 3
- 230000001105 regulatory Effects 0.000 claims 1
- 210000004027 cells Anatomy 0.000 abstract description 13
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 abstract description 9
- 230000035899 viability Effects 0.000 abstract description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 8
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 210000002615 Epidermis Anatomy 0.000 description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 5
- 210000002510 Keratinocytes Anatomy 0.000 description 4
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 4
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 4
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 3
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 2
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 2
- 230000000254 damaging Effects 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N iso-propanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003287 optical Effects 0.000 description 2
- 210000001519 tissues Anatomy 0.000 description 2
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 210000004207 Dermis Anatomy 0.000 description 1
- 231100000948 EpiDerm Skin Irritation Test Toxicity 0.000 description 1
- 231100000949 EpiSkin SIT Toxicity 0.000 description 1
- 210000000981 Epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 210000001723 Extracellular Space Anatomy 0.000 description 1
- 210000004940 Nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 206010034972 Photosensitivity reaction Diseases 0.000 description 1
- 231100000950 SkinEthic RHE Toxicity 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 229960005188 collagen Drugs 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 229940079593 drugs Drugs 0.000 description 1
- -1 drugs) Chemical class 0.000 description 1
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 231100000058 in vitro skin irritation / corrosion testing Toxicity 0.000 description 1
- 238000009533 lab test Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 210000000056 organs Anatomy 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000018 phototoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000001303 quality assessment method Methods 0.000 description 1
- 238000009781 safety test method Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 231100000041 toxicology testing Toxicity 0.000 description 1
Abstract
Изобретение относится к медицине, в частности к способу оценки качества рогового слоя клеточных моделей кожи человека (КМКЧ). Способ по настоящему изобретению включает экспериментальное определение диапазона нормативных значений величины электрического сопротивления для данного типа КМКЧ (конкретного вида продукции), измеренного методом TEER, и последующую тотальную оценку всех КМКЧ в составе производственных партий этого диапазона. В случае, если показатель TEER контролируемого образца КМКЧ соответствует установленному нормативному диапазону, образец считают качественным. В случае, если показатель TEER контролируемого образца выходит за пределы нормативного диапазона, образец отбраковывают. Для экспериментального определения диапазона нормативных значений величины электрического сопротивления для данного типа КМКЧ с качественным роговым слоем используется партия готовых КМКЧ в количестве, достаточном для получения статистически достоверных данных. Во всех КМКЧ партии измеряется электрическое сопротивление методом TEER. Затем для этих же КМКЧ оценивают значение технического параметра, характеризующего устойчивость рогового слоя к воздействию контрольного вещества (показатель ET50/IC50). Количественные данные, полученные в результате этих двух экспериментов (метод TEER и метод оценки жизнеспособности клеток в составе КМКЧ по показателю ET50/IC50), сопоставляют. Выбирают те ККТС (величины электрического сопротивления), в отношении которых выполнено требование по достижению нормативного показателя ET50/IC50. Значения TEER для этих ККТС также считают нормальными. В результате формируется диапазон числовых значений, характеризирующих величину электрического сопротивления КМКЧ с качественным роговым слоем. Этот диапазон далее используют как нормативный для данного продукта. Качество других партий продукта оценивают только методом TERR тотально, во всех образцах партии. Осуществление изобретения позволяет упростить процедуры контроля качества КМКЧ и повысить точность за счет тотального неинвазивного контроля качества всех образцов КМКЧ в партии без потери их функциональной пригодности. 1 з.п. ф-лы, 2 табл., 1 пр.
Description
Изобретение относится к медицине, сфере исследований и испытаний безопасности химической продукции, фармакологических препаратов и косметической продукции для здоровья человека, в частности, к лабораторной технике, и может быть использовано для оценки качества объекта таких испытаний - клеточных моделей кожи человека, определяющего возможность получения точных количественных результатов.
Отдельные виды продукции: химические вещества, лекарственные препараты и косметические средства считаются потенциально опасными для здоровья человека. В РФ и в мире при выводе на рынок новых видов такой продукции или их ввозе в страну в обязательном порядке требуется проведение лабораторных испытаний, устанавливающих степень их опасности (безопасности) для здоровья человека. При этом широкое распространение в получили, так называемые, альтернативные методы проведения исследований и испытаний (in vitro), предполагающие использование в качестве объекта клеточных культур или биоинженерных конструкций, имитирующих отдельные ткани и органы человека.
В частности, для оценки наличия/отсутствия у тестируемой продукции свойства вызывать раздражение/повреждение кожных покровов, изучения параметров трансдермального транспорта химических соединений (включая лекарственные средства), а также оценки потребительских свойств косметической продукции широко используются стандартизованные клеточные модели кожи человека (КМКЧ) [1, 2]. Такие как продукты EpiSkin™, EpiDerm™, SkinEthic™ RHE и VitroSkin®. Для их получения используют нормальные кератиноциты человека, выращенные по специальным протоколам на мембранных вставках для культуральных планшетов типа transwell, имеющие стандартизованное (постоянное) многослойное строение: сразу над мембраной располагаются несколько слоев ядросодержащих клеток, на поверхности которых имеется не менее 5 слоев роговых чешуек. Таким образом воссоздаются барьерные функции кожи, которые должны препятствовать прохождению исследуемых веществ через роговой слой эпидермиса в подлежащие слои кожи. Принцип использования КМКЧ заключается в следующем. В случае, если тестируемое вещество способно нарушать роговой слой КМКЧ (обладает повреждающим действием на кожу), оно получает возможность оказать воздействие на нижерасположенные ядросодержащие клетки КМКЧ, что приводит к снижению их жизнеспособности. Чем выше способность вещества повреждать роговой слой, тем в большей степени окажется сниженной жизнеспособность ядросодержащих клеток КМКЧ. В свою очередь, показатели жизнеспособности этих клеток могут быть измерены количественно, например, методом МТТ. При исследовании процессов трансдермального транспорта веществ через кожу также необходимо присутствие в структуре КМКЧ стандартизованного стабильного по структуре рогового слоя.
Таким образом, уникальные характеристики КМКЧ, обуславливающие возможность использования КМКЧ в качестве измерительной тест-системы, определяет именно роговой слой. К нему выдвигаются жесткие требования: он должен быть максимально стандартизован в различных образцах (партиях) готовой продукции, обладать одинаковой сопротивляемостью к однотипным повреждениям. При этом основной технической характеристикой КМКЧ является показатель устойчивости рогового слоя к воздействию контрольного вещества, обладающего способностью его разрушать (например, Тритона Х-100, додецилсульфата натрия или эквивалентов). Данный параметр оценивается количественно с помощью контрольного цитотоксического вещества на основании показателей: ЕТ50 (время, за которое жизнеспособность клеток КМКЧ снижается на 50% при воздействии определенной концентрации контрольного вещества, в часах) или IC50 (концентрация контрольного вещества, при нанесении которой на поверхность КМКЧ на определенное время происходит снижение жизнеспособности клеток на 50%, в мкг/мл). Необходимо, чтобы все КМКЧ в партии соответствовали этому нормативному показателю.
Настоящее изобретение касается оценки качества рогового слоя КМКЧ.
Известен способ оценки качества рогового слоя КМКЧ с коммерческим названием EpiSkin™, получаемой на основе нормальных кератиноцитов человека, культивированных на коллагеновой матрице. Способ подразумевает выборочный контроль партии продукта: о качестве всей партии судят по результатам технических испытаний отдельных образцов. Случайным образом отобранные для контроля качества образцы продукции оцениваются на основании гистологического исследования: анализируется общее строение КМКЧ, наличие ядер в клетках базального слоя, наличие роговых чешуек, размеры межклеточного пространства, степень адгезии базального слоя КСКЧ к подложке, толщина слоя ядросодержащих клеток, толщина рогового слоя. Каждый критерий оценивается в баллах, от 0 до 4. Максимально возможный результат бальной оценки при этом - 28, а минимально допустимый - 19. Также исследуется воспроизводимость ответа выбранных случайным образом образцов КМКЧ (из партии продукта) на воздействие контрольного вещества - додецилсульфата натрия (ДСН). Используется показатель IC50. Он определяется на основании МТТ теста, который проводится после 18-часового контакта поверхности КМКЧ клеток с ДСН. Нормативное значение данного показателя при оценке качества продукта EpiSkin™ составляет IC50≥1 мг/мл [3].
Недостатком данного способа является то, что контролируется качество выборочных образцов продукта из партии, таким образом нельзя исключить брак (ненадлежащее качество) КМКЧ в партии, не выбранных для случайного исследования. Кроме того, используемые для контроля качества образцы КМКЧ после проведения исследования теряют свою функциональную пригодность.
Ближайшим аналогом заявленного способа контроля является способ контроля качества продукта EpiDerm™. Данная КМКЧ производится на основе эпидермальных кератиноцитов человека и нормальных дермальных фибробластов человека, полученных от единого донора. Таким образом, продукт имитирует два слоя кожи: эпидермис и дерму. Для контроля качества продукта используется контрольное вещество - 1% раствор тритона Х-100. Как и в предыдущем случае, используется выборочный контроль партии продукта - о качестве всех продуктов в партии судят по результатам испытаний отдельных образцов. Контрольное вещество наносят на поверхность КМКЧ с целью определения времени воздействия, необходимого для снижения жизнеспособности ткани на 50% (определяется с использованием метода МТТ) [4]. Нормативное значение показателя находится в диапазоне от 4.77 до 8.72 часов.
Данный способ имеет те же недостатки, что и у способа, описанного ранее: не исключает появления в серии отдельных некачественных ККТС; используемые для контроля качества образцы КМКЧ после проведения исследования становятся непригодными.
Проблемой, на решение которой направлено изобретение, является оценка качества рогового слоя КМКЧ.
Технический результат - упрощение процедуры контроля качества КМКЧ и повышение точности за счет тотального неинвазивного контроля качества всех образцов КМКЧ в партии без потери их функциональной пригодности.
В результате собственных исследований было установлено, что надежным параметром, характеризующим качество и сохранность рогового слоя КМКЧ, является его электрическое сопротивление. Известно, что клеточные модели эпителиальных тканей, в том числе, и эпидермиса человека с неповрежденным роговым слоем, обладают определенным электрическим сопротивлением за счет формирования плотных межклеточных контактов. Для его определения используют метод измерения трансэпителиального электрического сопротивления (transepithelial electrical resistance, TEER) [5]. Важно, что этот показатель снижается в случае деструкции рогового слоя. При этом чем более выражена деструкция рогового слоя и межклеточных контактов в ККТС, тем меньше величина TEER.
Заявленный способ оценки качества рогового слоя КМКЧ заключается в следующем.
Контролю качества подвергаются все КМКЧ в производственной партии.
Способ может осуществлять только в отношении продуктов, в число характеристик которых входят количественные показатели оценки сопротивляемости рогового слоя КМКЧ к контрольному веществу (для продукта известно значение нормативного показателя ЕТ50 или IC50).
Первоначально для продукта экспериментально устанавливается нормативное значение показателя TEER. Для этого используется партия готовых КМКЧ в количестве, достаточном для получения статистически достоверных данных.
Сначала во всех КМКЧ партии измеряется электрическое сопротивление методом TEER.
Измерения электрического сопротивления КМКЧ проводят с помощью прибора EVOM (World Precision Instruments, Inc., США) или аналогичных приборов следующим образом:
1) включают прибор для измерения трансэпителиального сопротивления (TEER) EVOM (World Precision Instruments, Inc., США);
2) заменяют питательную среду в базальном отсеке мембраной вставки с КМКЧ;
3) в апикальный отсек мембранной вставки добавляют 100 мкл полной питательной среды;
4) помещают электроды в апикальный и базальный отсеки мембранной вставки;
5) измеряют базовый уровень сопротивления (TEER) мембранной вставки, свободной от клеток (контроль);
6) измеряют уровень сопротивления (TEER) мембранной вставки с КМКЧ (опыт);
7) переводят полученные значения TEER в Ом*см2 по формуле: [измеренное значение (опыт-контроль)]*S (площадь роста клеток) = [измеренное значение] Ом*см2;
Для каждой КМКЧ измерение проводят трехкратно. Результаты измерений для каждого КМКЧ записывают (фиксируют).
Затем, также для всех КМКЧ, в отношении которых ранее была измерена величина показателя электрического сопротивления методом TEER, оценивают значение технического параметра, характеризующего устойчивость рогового слоя к воздействию контрольного вещества (показатель ET50/IC50).
Количественные данные, полученные в результате этих двух экспериментов (метод TEER и метод оценки жизнеспособности клеток в составе КМКЧ по показателю ET50/IC50) сопоставляют. Выбирают те ККТС, в отношении которых выполнено требование по достижению нормативного показателя ET50/IC50. Значения TEER для этих ККТС также считают нормальными. В результате формируется диапазон числовых значений, характеризирующих величину электрического сопротивления КМКЧ с качественным роговым слоем. Этот диапазон далее используют как нормативный для данного продукта. Качество других партий продукта оценивают только методом TEER тотально, во всех образцах партии. В случае, если показатель TEER контролируемого образца соответствует ранее установленному нормативному показателю, образец считают качественным. В случае, если показатель TEER контролируемого образца выходит за пределы нормативного диапазона, образец отбраковывают.
Пример конкретного выполнения
В соответствии с заявленным способом, была проведена оценка качества рогового слоя продукта «VitroSkin», представляющего собой КМКЧ, полученную на основе нормальных кератиноцитов человека. Нормативный технический параметр, характеризующий сопротивляемость рогового слоя данной КМКЧ воздействию контрольного вещества (раствор ДСН, воздействие в течение 18 ч), в соответствии с паспортом на продукт составляет IC50≥1 мг/мл. Оценку качества КМКЧ «VitroSkin» проводили на производственном участке компании-производителя - ООО НПО «ВитроЛаб» (Новосибирск).
В соответствии с заявленным способом, сначала установили нормативный диапазон для величины электрического сопротивления КМКЧ. Для этого использовали партию из 5 готовых тест-систем «VitroSkin» в формате 24-луночных планшета, каждый из которых содержал по 12 мембранных вставок с КМКЧ. Таким образом, всего было исследовано 60 КМКЧ.
Измерение величины электрического сопротивления ККТС проводили как описано выше. Результаты измерений представлены таблице №1.
Примечание: номер объекта испытаний обозначает номер планшета и номер ККТС в составе планшета в формате Х-Х.
Величина электрического сопротивления ККТС в составе объектов испытаний составила от 2700 до 9000 Ом*см2.
Затем, в соответствии с заявленным способом, в этих же КМКЧ было оценено соответствие нормативному показателю IC50≥1 мг/мл для раствора ДСН при нанесении на 18 часов.
Исследование проводили следующим образом. В качестве контрольного вещества использовали раствора ДСН в концентрации 1 мг/мл. Время инкубации составило 18 часов. В соответствии с паспортом на продукцию, роговой слой КМКЧ считается качественным, если жизнеспособность клеток КМКЧ в этих условиях снижается не более, чем на 50%.
Оценку жизнеспособности клеток КМКЧ проводили методом МТТ:
1) по истечении срока воздействия отбирают из лунок питательную среду, промывают КМКЧ фосфатным солевым буфером (ФСБ) и переносят их в лунки планшета, в которые предварительно добавлено 200 мкл 0,5 мг/мл раствора МТТ в ФСБ.
2) Инкубируют КМКЧ в течение 3 часов в CO2-инкубаторе при t=37°С, 5% CO2.
3) Отбирают среду, промывают 200 мкл ФБС и добавляют в каждую лунку 200 мкл изопропилового спирта.
4) После двух часов инкубации при комнатной температуре в темноте измеряют оптическую плотность растворов на длине волны 520 нм (за вычетом фонового поглощения на длине волны 655 нм) с помощью планшетного спектрофотометра iMark (BioRad).
5) Жизнеспособность определяют по формуле:
(ОП опытных лунок - ОП среды / ОП контрольных лунок - ОП среды)×100%, где ОП - оптическая плотность.
Результаты испытаний приведены в таблице 2.
Таким образом, тотальная оценка образцов КМКЧ «VitroSkin» нормативному показателю IC50, позволила установить, что 2 образца КМКЧ в составе производственной партии из 60 КМКЧ, имели роговой слой ненадлежащего качества: устойчивость рогового слоя к повреждающему действию контрольного вещества ТС была ниже нормативного значения (составила 31 и 40% соответственно, при нормативном показателе 50% и выше).
Далее, согласно заявленному способу, для всех исследованных образцов КМКЧ «VitroSkin» сопоставили величины параметров, характеризующих электрическое сопротивление КМКЧ (таблица 1) и сопротивляемость рогового слоя КМКЧ контрольному веществу по показателю IC50 (таблица 2) и пришли к выводу, что нормативная величина параметра «величина электрического сопротивления КМКЧ «VitroSkin» составляет 4000 Ом*см2 и выше.
Используя этот нормативный диапазон, далее проводили тотальную проверку качества КМКЧ «VitroSkin» в производственных партиях. Способ позволял осуществлять выбраковку КМКЧ с роговым слоем ненадлежащего качества, в результате чего в состав готового продукта включались образцы КМКЧ надлежащего качества.
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
1 Netzlaff F., Lehr С.М., Wertz P.W., Schaefer U.F. The human epidermis models EpiSkin, SkinEthic and EpiDerm: an evaluation of morphology and their suitability for testing phototoxicity, irritancy, corrosivity, and substance transport. Eur. J. Pharm. Biopharm. 2005; 60(2): 167-78.
2 OECD, 2013a. OECD Guideline for the Testing of Chemicals (No. 431.): In Vitro Skin Corrosion: Reconstructed Human Epidermis (Rhe) Test Method, OECD, Paris.
3 Qiu J., Zhong L., Zhou M., Chen D., Huang X., Chen J., Chen M., Ni H., Cai Z. Establishment and characterization of a reconstructed Chinese human epidermis model. Int. J. Cosm. Sci. 2016; 38: 60-67.
4 
H., Hayden P., Klausner M., Kubilus J., Sheasgreen J. An In Vitro Skin Irritation Test (SIT) using the EpiDerm Reconstructed Human Epidermal (RHE) Model. J Vis Exp. 2009; (29): 1366.
5 Guth К., 
M., Fabian E., Landsiedel R., van Ravenzwaay B. Suitability of skin integrity tests for dermal absorption studies in vitro. Toxicol. In Vitro. 2015; 29(1): 113-23.
Claims (5)
1. Способ оценки качества рогового слоя клеточных моделей кожи человека (КМКЧ), включающий определение величины электрического сопротивления КМКЧ методом TEER, перевод полученных значений величины сопротивления методом TEER в Ом⋅см2 и последующую оценку соответствия величины данного параметра нормативному значению, которое устанавливают экспериментально на основании предварительно проведенного сопоставления величин, характеризующих степень сопротивляемости рогового слоя КМКЧ в партии продукта воздействию контрольного вещества по показателю ЕТ50 или IC50 и величины электрического сопротивления КМКЧ, измеренного методом TEER, отличающийся тем, что нормативными считают показатели тех TEER, для которых выполнено требование по достижению нормативного показателя ET50 или показателя IC50;
- если показатель TEER контролируемого образца КМКЧ соответствует ранее установленному нормативному диапазону, образец считают качественным;
- если показатель TEER контролируемого образца КМКЧ выходит за пределы нормативного диапазона, образец отбраковывают;
способ осуществляют только в отношении продуктов, в число характеристик которых входят количественные показатели оценки сопротивляемости рогового слоя КМКЧ воздействию контрольного вещества ЕТ50 или IC50.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что качество партий продукта оценивают по показателю TEER тотально, во всех образцах КМКЧ в составе данной партии.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017144057A RU2782891C2 (ru) | 2017-12-15 | Способ оценки качества рогового слоя клеточных моделей кожи человека |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017144057A RU2782891C2 (ru) | 2017-12-15 | Способ оценки качества рогового слоя клеточных моделей кожи человека |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2017144057A RU2017144057A (ru) | 2019-06-17 |
| RU2782891C2 true RU2782891C2 (ru) | 2022-11-07 |
Family
ID=
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2087128C1 (ru) * | 1993-01-29 | 1997-08-20 | Мусин Рамиль Фаритович | Устройство для измерения электрических свойств рогового слоя эпидермиса |
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2087128C1 (ru) * | 1993-01-29 | 1997-08-20 | Мусин Рамиль Фаритович | Устройство для измерения электрических свойств рогового слоя эпидермиса |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| FRANK. A. ALEXANDER et al., Automated transepithelial electrical resistance measurements of the EpiDerm reconstructed human epidermis model. 2016 38th Annual International Conference of the IEEE Engineering in Medicine and Biology Society (EMBC), 2016, pp. 469-472. CHEN S., et al., Transepithelial electrical resistance (TEER): a functional parameter to monitor the quality of oviduct epithelial cells cultured on filter supports. Histochem Cell Biol, 2015, 144, 509-515. FRANK NETZLAFF et al., The human epidermis models EpiSkin&αχιρχ;, SkinEthic&αχιρχ; and EpiDerm&αχιρχ;: An evaluation of morphology and their suitability for testing phototoxicity, irritancy, corrosivity, and substance transport. European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics, 2005, V.60, I.2, p.167-178. SPIELMANN HORST et al., The ECVAM International Validation Study on in Vitro Tests for Acute Skin Irritation: Report on the Validity of the EPISKIN and EpiDerm Assays and on the Skin Integrity Function Test. Altern * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Gefen et al. | Strain-time cell-death threshold for skeletal muscle in a tissue-engineered model system for deep tissue injury | |
| Zelickson et al. | Epidermal dendritic cells: A quantitative study | |
| Loo et al. | Effects of hydrogen peroxide in a keratinocyte-fibroblast co-culture model of wound healing | |
| Buhé et al. | Pathophysiological study of sensitive skin | |
| Akinduro et al. | Constitutive autophagy and nucleophagy during epidermal differentiation | |
| Boelsma et al. | Characterization and comparison of reconstructed skin models: morphological and immunohistochemical evaluation. | |
| Ayehunie et al. | Organotypic human vaginal-ectocervical tissue model for irritation studies of spermicides, microbicides, and feminine-care products | |
| US11892447B2 (en) | Method for evaluating the effects of dehydration on children's skin | |
| Prignano et al. | Ultrastructural and functional alterations of mitochondria in perilesional vitiligo skin | |
| Faller et al. | Reconstructed skin kits: reproducibility of cutaneous irritancy testing | |
| CN112067764A (zh) | 一种评价化妆品对皮肤炎症舒缓或修复功效的方法 | |
| US11365397B2 (en) | Methods for screening personal care products | |
| Kocsis et al. | Characterization and ex vivo evaluation of excised skin samples as substitutes for human dermal barrier in pharmaceutical and dermatological studies | |
| CN106460031B (zh) | 评价皮肤干燥的状态的方法 | |
| KR20210034733A (ko) | 동물실험 대체를 위한 3차원 인공 조직 및 모니터링 세포의 공동배양 시스템 및 이의 제조방법 | |
| RU2782891C2 (ru) | Способ оценки качества рогового слоя клеточных моделей кожи человека | |
| Zoio et al. | Open-source human skin model with an in vivo-like barrier for drug testing | |
| Douglas et al. | Visualization of cellular aggregates cultured on a three dimensional collagen sponge matrix | |
| Medina et al. | Assessment of the phototoxic potential of compounds and finished topical products using a human reconstructed epidermis | |
| CN104685357A (zh) | 作为表皮成熟标记的表面各向同性 | |
| Quilliam et al. | Some effects of preganglionic nerve stimulation on synaptic vesicle populations in the rat superior cervical ganglion | |
| Díez-Sales et al. | Alternative Methods to Animal Testing in Safety Evaluation of Cosmetic Products | |
| JP2015024968A (ja) | 化粧料の選択方法 | |
| CN106868089B (zh) | 一种利用皮肤成纤维细胞钾离子通道评价抗衰老功效的方法 | |
| Schaefer et al. | Hearts during ischemia with or without HTK-protection analysed by dielectric spectroscopy |