RU2781985C1 - Method for determining the sensitivity of bacteria to antiseptics in solution - Google Patents
Method for determining the sensitivity of bacteria to antiseptics in solution Download PDFInfo
- Publication number
- RU2781985C1 RU2781985C1 RU2021139913A RU2021139913A RU2781985C1 RU 2781985 C1 RU2781985 C1 RU 2781985C1 RU 2021139913 A RU2021139913 A RU 2021139913A RU 2021139913 A RU2021139913 A RU 2021139913A RU 2781985 C1 RU2781985 C1 RU 2781985C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- antiseptic
- sensitivity
- microorganism
- suspension
- antiseptics
- Prior art date
Links
- 230000002421 anti-septic Effects 0.000 title claims abstract description 81
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 title claims abstract description 36
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 title claims abstract description 12
- 229940064004 Antiseptic throat preparations Drugs 0.000 title claims description 37
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 68
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 39
- 210000003491 Skin Anatomy 0.000 claims abstract description 30
- 230000000813 microbial Effects 0.000 claims abstract description 24
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 23
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims abstract description 20
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 claims abstract description 13
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims abstract description 12
- 230000001580 bacterial Effects 0.000 claims abstract description 11
- 239000012568 clinical material Substances 0.000 claims abstract description 5
- 230000000249 desinfective Effects 0.000 claims description 21
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 16
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 15
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 13
- 229940079593 drugs Drugs 0.000 claims description 12
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 8
- 238000005429 turbidity Methods 0.000 claims description 7
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 5
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 5
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 claims 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 15
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 8
- 238000010790 dilution Methods 0.000 abstract description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 7
- 230000000845 anti-microbial Effects 0.000 description 14
- 230000003115 biocidal Effects 0.000 description 13
- 239000000645 desinfectant Substances 0.000 description 8
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 7
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 6
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 6
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 6
- 229940064005 Antibiotic throat preparations Drugs 0.000 description 5
- 229940083879 Antibiotics FOR TREATMENT OF HEMORRHOIDS AND ANAL FISSURES FOR TOPICAL USE Drugs 0.000 description 5
- 229940042052 Antibiotics for systemic use Drugs 0.000 description 5
- 229940042786 Antitubercular Antibiotics Drugs 0.000 description 5
- 229940093922 Gynecological Antibiotics Drugs 0.000 description 5
- 229940024982 Topical Antifungal Antibiotics Drugs 0.000 description 5
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 5
- 229940079866 intestinal antibiotics Drugs 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- 229940005935 ophthalmologic Antibiotics Drugs 0.000 description 5
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 4
- 239000003139 biocide Substances 0.000 description 4
- 230000005591 charge neutralization Effects 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 201000009910 diseases by infectious agent Diseases 0.000 description 4
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 230000001264 neutralization Effects 0.000 description 4
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- 230000000875 corresponding Effects 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 230000002906 microbiologic Effects 0.000 description 3
- 206010053759 Growth retardation Diseases 0.000 description 2
- 206010034133 Pathogen resistance Diseases 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 230000000844 anti-bacterial Effects 0.000 description 2
- 230000003616 anti-epidemic Effects 0.000 description 2
- 229940027983 antiseptics and disinfectants Quaternary ammonium compounds Drugs 0.000 description 2
- 239000000560 biocompatible material Substances 0.000 description 2
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 2
- 231100000001 growth retardation Toxicity 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic Effects 0.000 description 2
- 244000052769 pathogens Species 0.000 description 2
- KFSLWBXXFJQRDL-UHFFFAOYSA-N peracetic acid Chemical compound CC(=O)OO KFSLWBXXFJQRDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 150000003856 quaternary ammonium compounds Chemical class 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory Effects 0.000 description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 2
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-N sulfonic acid Chemical compound OS(O)=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- JGFDZZLUDWMUQH-UHFFFAOYSA-N Didecyl-Dimethyl-Ammonium Chemical compound CCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCCCCCCCC JGFDZZLUDWMUQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RUPBZQFQVRMKDG-UHFFFAOYSA-M Didecyldimethylammonium chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCCCCCCCC RUPBZQFQVRMKDG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 210000004400 Mucous Membrane Anatomy 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L Sodium thiosulphate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=S AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 230000002567 autonomic Effects 0.000 description 1
- 239000003899 bactericide agent Substances 0.000 description 1
- 239000003124 biologic agent Substances 0.000 description 1
- 239000003181 biological factor Substances 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000003093 cationic surfactant Substances 0.000 description 1
- 230000002490 cerebral Effects 0.000 description 1
- 125000003636 chemical group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 238000010192 crystallographic characterization Methods 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 229960004670 didecyldimethylammonium chloride Drugs 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 description 1
- 238000005470 impregnation Methods 0.000 description 1
- 230000002458 infectious Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 239000000644 isotonic solution Substances 0.000 description 1
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing Effects 0.000 description 1
- CBENFWSGALASAD-UHFFFAOYSA-N ozone Chemical compound [O-][O+]=O CBENFWSGALASAD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral Effects 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- -1 polyhexamethylene guanidine hydrochloride Polymers 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 238000011158 quantitative evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 244000005714 skin microbiome Species 0.000 description 1
- 235000019345 sodium thiosulphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000028016 temperature homeostasis Effects 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
Abstract
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к бактериологии, эпидемиологии, дезинфектологии, и может быть использовано для изучения чувствительности бактерий к антисептическим средствам с различными действующими веществами.The invention relates to medicine, namely to bacteriology, epidemiology, disinfectology, and can be used to study the sensitivity of bacteria to antiseptics with various active ingredients.
Накопленный за десятилетия опыт работы с антимикробными препаратами позволяет достоверно утверждать, что к любому из них рано или поздно микроорганизм приобретет устойчивость. В настоящее время значительные силы научного сообщества брошены на изучение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам. Однако согласно актуальным научным данным проблему резистентности бактерий к антимикробным препаратам необходимо рассматривать комплексно, в том числе и с вниманием к её отдельным составляющим, а именно к исследованию чувствительности-резистентности возбудителей инфекций к антисептикам, традиционно используемых для обработки кожного покрова и слизистых.The experience accumulated over decades in working with antimicrobial drugs allows us to reliably state that sooner or later the microorganism will become resistant to any of them. Currently, significant forces of the scientific community are thrown into the study of the sensitivity of microorganisms to antibiotics. However, according to current scientific data, the problem of bacterial resistance to antimicrobial drugs should be considered comprehensively, including with attention to its individual components, namely, to the study of the sensitivity-resistance of infectious agents to antiseptics traditionally used to treat the skin and mucous membranes.
Нарастающее количество сообщений о фактах выделения антибиотикорезистентных штаммов микроорганизмов, необоснованная стратегия и тактика применения антибиотиков, неэффективность или невозможность применения антибиотиков для коморбидных пациентов в целом, необходимость применения местной антимикробной терапии - все эти факторы способствуют поиску, в том числе эффективного местного антимикробного лечения, профилактики. Проблема резистентности микроорганизмов к антисептикам серьезно ослабляет позиции данной терапии и профилактики в лечебно-диагностическом процессе. Проявления нечувствительности бактерий к данным бактериоцидам снижает эффективность проводимых противоэпидемических мероприятий. В отечественной и зарубежной медицинской литературе последних лет неоднократно описывались случаи недостаточной эффективности противоэпидемических мероприятий, связанные с формированием устойчивости микроорганизмов к дезинфектантам и антисептикам, что способствует поддержанию высокого уровня заболеваемости инфекциями, связанными с оказанием медицинской помощи (ИСМП).The growing number of reports of the isolation of antibiotic-resistant strains of microorganisms, the unreasonable strategy and tactics of using antibiotics, the ineffectiveness or impossibility of using antibiotics for comorbid patients in general, the need for local antimicrobial therapy - all these factors contribute to the search, including effective local antimicrobial treatment, prevention. The problem of resistance of microorganisms to antiseptics seriously weakens the position of this therapy and prevention in the treatment and diagnostic process. Manifestations of insensitivity of bacteria to these bacteriocides reduces the effectiveness of ongoing anti-epidemic measures. In recent years, domestic and foreign medical literature has repeatedly described cases of insufficient effectiveness of anti-epidemic measures associated with the formation of resistance of microorganisms to disinfectants and antiseptics, which contributes to maintaining a high incidence of healthcare-associated infections (HCAI).
В принятой Правительством РФ «Стратегии предупреждения распространения антимикробной резистентности в РФ на период до 2030 года» в рамках ограничения распространения антимикробной устойчивости четко сформулированы такие цели и задачи как, совершенствование мер по предупреждению и ограничению распространения и циркуляции возбудителей с антимикробной резистентностью; обеспечение системного мониторинга распространения антимикробной резистентности. Федеральный закон от 30 декабря 2020 г. N 492-ФЗ "О биологической безопасности в Российской Федерации" относит распространение резистентности, как способности патогенов противостоять воздействию лекарственных, химических и (или) биологических средств, к основным биологическим угрозам. Меры по предупреждению и преодолению резистентности включены в комплекс мер, направленных на защиту населения и охрану окружающей среды от воздействия опасных биологических факторов, на предотвращение биологических угроз (опасностей), создание и развитие системы мониторинга биологических рисков.In the “Strategy for preventing the spread of antimicrobial resistance in the Russian Federation for the period until 2030”, adopted by the Government of the Russian Federation, as part of limiting the spread of antimicrobial resistance, such goals and objectives are clearly formulated as improving measures to prevent and limit the spread and circulation of pathogens with antimicrobial resistance; ensuring systematic monitoring of the spread of antimicrobial resistance. Federal Law No. 492-FZ of December 30, 2020 "On Biological Safety in the Russian Federation" classifies the spread of resistance, as the ability of pathogens to resist the effects of medicinal, chemical and (or) biological agents, to the main biological threats. Measures to prevent and overcome resistance are included in a set of measures aimed at protecting the population and protecting the environment from the effects of dangerous biological factors, preventing biological threats (hazards), creating and developing a system for monitoring biological risks.
Реализация поставленных задач в полной мере может быть осуществима только в условиях полноценного методического сопровождения проблемного вопроса устойчивости микроорганизмов к антисептикам. А именно при наличии единой унифицированной методики детекции чувствительности к данным биоцидам.The implementation of the tasks set can be fully implemented only in the conditions of full methodological support of the problematic issue of resistance of microorganisms to antiseptics. Namely, in the presence of a single unified method for detecting sensitivity to these biocides.
Стандартизация методики определения чувствительности-резистентности к антисептикам складывается из следующих компонентов [1], позволяющих нивелировать действие случайных и систематических ошибок:Standardization of the methodology for determining sensitivity-resistance to antiseptics consists of the following components [1], which allow leveling the effect of random and systematic errors:
1) проведение этапа нейтрализации резидуального эффекта биоцидного препарата;1) carrying out the stage of neutralizing the residual effect of the biocidal preparation;
2) продолжительность in vitro взаимодействия испытуемого штамма и биоцидного препарата;2) the duration of the in vitro interaction between the test strain and the biocidal preparation;
3) плотность микробной суспензии;3) density of microbial suspension;
4) условия in vitro взаимодействия испытуемого штамма и биоцидного препарата;4) in vitro conditions of interaction between the test strain and the biocidal preparation;
5) шаг разведения биоцидного препарата и необходимое количество повторений определений.5) the dilution step of the biocidal preparation and the required number of repetitions of the determinations.
На федеральном уровне нет унифицированных методик, оценивающих именно чувствительность микроорганизмов к кожным антисептикам. Наиболее распространенными являются способы, в которых оценивается эффективность антисептического средства. Так в Руководстве 4.2.2643-10 [2] предлагается в лабораторных условиях проводить оценку эффективности различных групп антисептиков методом смыва с кожи рук, которые были искусственно контаминированы тест-микроорганизмами. В практических условиях медицинской организации рекомендуется оценивать эффективность обеззараживающего действия антисептиков, предназначенных для гигиенической обработки, для обработки рук хирургов, операционного и инъекционного полей методом смыва с кожи рук в отношении естественной микрофлоры. Подобный подход крайне неудобен для рутинной деятельности, так как создает определенные эпидемиологические риски для персонала при искусственной контаминации тест-микроорганизмами.At the federal level, there are no unified methods that assess the sensitivity of microorganisms to skin antiseptics. The most common are methods in which the effectiveness of an antiseptic agent is evaluated. Thus, in Guideline 4.2.2643-10 [2] it is proposed to evaluate the effectiveness of various groups of antiseptics in the laboratory by washing off the skin of hands that were artificially contaminated with test microorganisms. In practical conditions, a medical organization is recommended to evaluate the effectiveness of the disinfecting effect of antiseptics intended for hygienic treatment for treating the hands of surgeons, operating and injection fields by washing off the skin of the hands in relation to the natural microflora. Such an approach is extremely inconvenient for routine activities, as it creates certain epidemiological risks for personnel in case of artificial contamination with test microorganisms.
Для научно-практической деятельности разработано множество авторских методик, имеющих свои недостатки для рутинного применения в медицинских организациях. Например, способ, описанный в Методических рекомендация РФ 1100/25-0-17 «Определение чувствительности микроорганизмов к дезинфектантам и антисептикам методом диффузии в агар с использованием дисков» [3]. Принцип методики основывается на применении бумажных дисков, пропитанных различными антимикробными средствами (антибиотики, растворы дезинфицирующих или антисептических средств). Суть методики заключается в изучении зон задержки роста суточной культуры микроорганизма. Этапы методик коротко: в чашку Петри вливают мясопептонный агар с взвесью суточной культуры исследуемых микроорганизмов, на поверхность которой помещают бумажные диски, пропитанные биоцидными средствами. После инкубации в термостате производят учет результатов по размеру зоны задержки роста: штамм считают устойчивым при отсутствии зоны задержки роста; умеренно устойчивым - зона 5-6 мм; чувствительным - зона более 6 мм. Недостатки метода: отсутствие этапа нейтрализации не позволяет определить минимальную бактерицидную концентрацию; предложенные критерии для оценки чувствительности - устойчивости штаммов микроорганизмов неудобны, относительны и не валидированы; пропитка бумажных дисков является не валидированным трудо- и времязатратным действием в медицинской организации; в продаже отсутствуют заводские пропитанные дезинфектантами и антисептиками бумажные диски; некоторыми формами выпуска антисептиков (например, гелями) трудно пропитать бумажные диски.For scientific and practical activities, a lot of author's methods have been developed, which have their drawbacks for routine use in medical organizations. For example, the method described in the Guidelines RF 1100/25-0-17 "Determination of the sensitivity of microorganisms to disinfectants and antiseptics by diffusion into agar using discs" [3]. The principle of the technique is based on the use of paper discs impregnated with various antimicrobial agents (antibiotics, solutions of disinfectants or antiseptics). The essence of the technique is to study the zones of growth inhibition of the daily culture of the microorganism. The stages of the methods are short: meat-peptone agar is poured into a Petri dish with a suspension of a daily culture of the studied microorganisms, on the surface of which paper discs impregnated with biocidal agents are placed. After incubation in a thermostat, the results are recorded according to the size of the growth retardation zone: the strain is considered stable in the absence of a growth retardation zone; moderately stable - zone 5-6 mm; sensitive - zone more than 6 mm. Disadvantages of the method: the absence of a neutralization stage does not allow determining the minimum bactericidal concentration; the proposed criteria for assessing the sensitivity - resistance of strains of microorganisms are inconvenient, relative and not validated; impregnation of paper discs is an unvalidated labor- and time-consuming action in a medical organization; there are no factory-made paper disks impregnated with disinfectants and antiseptics; some forms of release of antiseptics (for example, gels) are difficult to impregnate paper discs.
Другим примером авторской методики является способ определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным веществам [4], суть которого заключается в том, что чувствительность невыделенных и неидентифицированных микроорганизмов, содержащихся в биологическом материале, изучают в плотной богатой питательной среде с введенным в нее тестируемым антимикробном веществом. Исследуемое антимикробное вещество вводят в питательную среду до начала культивирования микроорганизмов в концентрации, близкой к максимально достижимой в месте забора биологического материала. Оценку чувствительности микроорганизмов к антимикробному веществу осуществляют после появления видимого роста микроорганизмов в контрольном посеве. Недостатки метода: отсутствует этап нейтрализации; продолжительность in vitro взаимодействия испытуемого штамма и биоцидного препарата определяется скоростью роста микроорганизма; данный метод не позволяется дать полноценную микробиологическую характеристику госпитальному штамму микроорганизма, тем самых отсутствует полноценная реализация микробиологического мониторинга.Another example of the author's technique is a method for determining the sensitivity of microorganisms to antimicrobial substances [4], the essence of which is that the sensitivity of unisolated and unidentified microorganisms contained in biological material is studied in a dense rich nutrient medium with the tested antimicrobial substance introduced into it. The investigated antimicrobial substance is introduced into the nutrient medium before the cultivation of microorganisms in a concentration close to the maximum achievable at the site of biological material sampling. The assessment of the sensitivity of microorganisms to the antimicrobial substance is carried out after the appearance of visible growth of microorganisms in the control crop. Disadvantages of the method: there is no neutralization stage; the duration of the in vitro interaction between the test strain and the biocidal preparation is determined by the growth rate of the microorganism; This method is not allowed to give a full-fledged microbiological characterization of a hospital strain of a microorganism, thereby there is no full-fledged implementation of microbiological monitoring.
Известен способ определения чувствительности микроорганизмов к дезинфицирующему средству (варианты) [5]. В способе предусматривается следующее: взвесь микроорганизмов заданной мутности смешивают в пробирке с дезинфицирующим средством или в случае нанесения на поверхность полученной взвеси, дают этой поверхности подсохнуть и наносят дезинфицирующее средство. Добавив дезинфицирующее средство, проводят экспозицию полученной смеси в течение времени, известного для данного дезинфицирующего средства. После этого, добавляют в пробирку или наносят на поверхность нейтрализатор дезинфицирующего средства. Затем, высевают полученную взвесь на твердую питательную среду, а в случае нанесения на поверхность, предварительно проводят экспозицию, после которой смывают полученную смесь с поверхности тампоном и проводят посев полученной смеси при помощи тампона на твердую питательную среду. О чувствительности микроорганизмов к дезинфицирующему средству судят по росту микроорганизмов на питательной среде, проводя подсчет выросших колоний с количественной градацией полученного результата.A known method for determining the sensitivity of microorganisms to a disinfectant (options) [5]. The method provides for the following: a suspension of microorganisms of a given turbidity is mixed in a test tube with a disinfectant or, in the case of application to the surface of the resulting suspension, the surface is allowed to dry and a disinfectant is applied. After adding a disinfectant, the resulting mixture is exposed for a time known for this disinfectant. After that, a disinfectant neutralizer is added to the test tube or applied to the surface. Then, the resulting suspension is sown on a solid nutrient medium, and in the case of application to the surface, exposure is preliminarily carried out, after which the resulting mixture is washed off the surface with a swab and the resulting mixture is sown with a swab on a solid nutrient medium. The sensitivity of microorganisms to a disinfectant is judged by the growth of microorganisms on a nutrient medium, counting the grown colonies with a quantitative gradation of the result.
Недостаток способа [5], наиболее близкого к заявляемому по технической сущности, достигаемому результату и выбранному в качестве прототипа для настоящего изобретения, в реализации задачи определения чувствительности бактерий к антисептикам состоит в следующем: не учитываются внешние условия применения кожных антисептиков, т.е. в методике отсутствует моделирование практических температурных условий использования антисептика - дезинфицирующее средство смешивается с бактериальной взвесью при комнатной температуре, а не при температуре кожного покрова человека, что может искажать результаты проведения эксперимента, так как есть несоответствие практических и лабораторных условий взаимодействия микроорганизма и препарата.The disadvantage of the method [5], which is closest to the claimed technical essence, the achieved result and selected as a prototype for the present invention, in the implementation of the task of determining the sensitivity of bacteria to antiseptics is as follows: the external conditions for the use of skin antiseptics are not taken into account, i.e. the methodology does not simulate the practical temperature conditions for using an antiseptic - the disinfectant is mixed with a bacterial suspension at room temperature, and not at the temperature of the human skin, which can distort the results of the experiment, since there is a discrepancy between the practical and laboratory conditions for the interaction of the microorganism and the drug.
Указанный недостаток значительно снижает эффективность способа.This drawback significantly reduces the effectiveness of the method.
Кожные антисептики имеют достаточно ограниченную область применения - различные участки кожного покрова человека. Бактерицидный эффект данных биоцидов реализуется непосредственно на кожном покрове человека, то есть в том числе в условиях определенной температуры. По литературным данным известно, что средневзвешенная температура кожного покрова человека составляет 32±1,0°С [6]. Температурные характеристики кожи человека - основной поверхности взаимодействия антисептического средства с кожной микрофлорой - важно учитывать при разработке методик определения чувствительности бактерий к антисептикам в контексте создания оптимальных условий in vitro взаимодействия испытуемого штамма и биоцидного препарата.Skin antiseptics have a rather limited scope - various parts of the human skin. The bactericidal effect of these biocides is realized directly on the human skin, that is, including at a certain temperature. According to the literature data, it is known that the average weighted temperature of the human skin is 32±1.0°C [6]. The temperature characteristics of human skin - the main surface of the interaction of an antiseptic agent with skin microflora - is important to take into account when developing methods for determining the sensitivity of bacteria to antiseptics in the context of creating optimal conditions for in vitro interaction between the test strain and the biocide preparation.
Задачи заявляемого решения - усовершенствование способа для определения чувствительности бактерий к антисептикам, своевременной идентификации микроорганизмов резистентных к антисептику с последующей его ротацией.The objectives of the proposed solution is to improve the method for determining the sensitivity of bacteria to antiseptics, the timely identification of microorganisms resistant to antiseptics, followed by its rotation.
Технический результат, достигаемый при использовании предлагаемого способа - расширение арсенала технических средств, используемых микробиологической лабораторией для определения чувствительности бактерий к антисептическим средствам в растворе, повышение точности определения за счет создания условий, моделирующих условия реального применения кожного антисептика.The technical result achieved by using the proposed method is the expansion of the arsenal of technical means used by the microbiological laboratory to determine the sensitivity of bacteria to antiseptics in solution, increasing the accuracy of the determination by creating conditions that simulate the conditions for the actual use of a skin antiseptic.
Технический результат, достигается тем, что в растворе готовят взвесь культуры микроорганизма, выделенного и идентифицированного из клинического материала пациента или из окружающей среды, по стандарту мутности 0,5 единиц МакФарланда; методом последовательных десятикратных разведений стерильным изотоническим раствором хлорида натрия доводят микробную взвесь до разведения 1,5×105; в стеклянную пробирку вносят 0,1 мл микробной взвеси, затем пробирку со взвесью ставят в водяную баню-термостат, при температуре 32°С в пробирку со взвесью вносят 0,9 мл антисептического средства, перемешивают несколько секунд, пробирку со смесью оставляют в водяной бане-термостате при температуре 32°С; время нахождения пробирки в водяной бане-термостате зависит от времени, указанном производителем препарата в инструкции, как время втирания антисептика в кожу рук медицинского персонала, кожу пациента до полного высыхания (обычно это время составляет не менее 30 сек), по истечении времени экспозиции антисептика в пробирку вносят 0,5 мл нейтрализатора и перемешивают встряхиванием, высевают на твердую питательную среду (МПА) 0,1 мл смеси, инкубируют в термостате при температуре 37°С 18-24 ч, для антисептиков класса А (для обработки кожи операционного поля пациента) и класса Б - в случае роста 1 и более колоний делают вывод об устойчивости исследуемой культуры микроорганизма к тестируемому антисептику, при отсутствии роста бактерий - о чувствительности микроорганизма к антисептику; для антисептиков класса А (для обработки кожи инъекционного поля пациента) и класса В - в случае роста 51 и более колоний делают вывод об устойчивости исследуемой культуры микроорганизма к тестируемому антисептику, при росте 50 и менее колоний - о чувствительности микроорганизма к антисептику.The technical result is achieved by preparing a suspension of a culture of a microorganism, isolated and identified from the patient's clinical material or from the environment, according to a turbidity standard of 0.5 McFarland units; by the method of successive tenfold dilutions with a sterile isotonic solution of sodium chloride, the microbial suspension is brought to a dilution of 1.5×10 5 ; 0.1 ml of a microbial suspension is added to a glass test tube, then the test tube with a suspension is placed in a thermostatic water bath, at a temperature of 32 ° C, 0.9 ml of an antiseptic agent is added to the test tube with a suspension, mixed for several seconds, the test tube with the mixture is left in a water bath - thermostat at 32°C; the time the test tube is in the water bath-thermostat depends on the time specified by the manufacturer of the drug in the instructions, as the time of rubbing the antiseptic into the skin of the hands of medical personnel, the patient's skin until completely dry (usually this time is at least 30 seconds), after the exposure time of the antiseptic in 0.5 ml of the neutralizer is added to the test tube and mixed by shaking, 0.1 ml of the mixture is sown on a solid nutrient medium (MPA), incubated in a thermostat at a temperature of 37 ° C for 18-24 hours, for class A antiseptics (for treating the skin of the patient's surgical field) and class B - in the case of growth of 1 or more colonies, a conclusion is made about the resistance of the studied microorganism culture to the tested antiseptic, in the absence of bacterial growth - about the sensitivity of the microorganism to the antiseptic; for antiseptics of class A (for treating the skin of the patient's injection field) and class B - in the case of growth of 51 or more colonies, a conclusion is made about the resistance of the studied microorganism culture to the tested antiseptic, with a growth of 50 or less colonies - about the sensitivity of the microorganism to the antiseptic.
Способ осуществляют следующим образом:The method is carried out as follows:
Выполняют выделение и идентификацию микроорганизма из клинического материала или из смыва с объекта внешней среды. Готовят бактериальную взвесь из культуры изучаемого микроорганизма, выращенной на плотной питательной среде при температуре 37°С в течение 18-24 часов, путем смыва 0,9% стерильным изотоническим раствором хлорида натрия. Бактериальную взвесь доводят до мутности, соответствующей концентрации 1,5×108 клеток/мл, что соответствует 0,5 единицам МакФарланда (измерение денситометром согласно данным фирмы-изготовителя стандартов МакФарланда bioMerieux). Методом последовательных десятикратных разведений стерильным изотоническим раствором хлорида натрия доводят микробную взвесь до разведения 1,5×105. В стеклянную пробирку вносят 0,1 мл микробной взвеси, затем пробирку со взвесью ставят в водяную баню-термостат, где установлена температура 32°С. Тестируемое антисептическое средство перед проведением эксперимента не переливают из заводской упаковки, не разбавляют. В пробирку со взвесью вносят 0,9 мл антисептика, перемешивают несколько секунд, пробирку со смесью оставляют в водяной бане-термостате при температуре 32°С на время, указанное производителем препарата в инструкции, как время втирания антисептика в кожу рук до полного высыхания (обычно это время составляет не менее 30 сек), по истечении времени экспозиции антисептика в пробирку вносят 0,5 мл нейтрализатора и перемешивают встряхиванием. Согласно действующему Руководству 4.2.2643-10 [2] для нейтрализации антимикробного действия дезинфицирующих средств из различных химических групп применяют следующие нейтрализаторы: для средств из группы окислителей (галоидсодержащие, окислители, средства, содержащие надуксусную кислоту, озон) - 0,5-1% растворы тиосульфата натрия; - для альдегид- и фенолсодержащих средств - воду; универсальный нейтрализатор, содержащий твин-80 - 3%, сапонин - 3%, гистидин - 0,1% и цистеин - 0,1%; - для катионных поверхностно-активных веществ - 0,1-1,0% растворы сульфонола или 0,5-1,0% растворы сульфонола с 10% обезжиренного молока. The isolation and identification of a microorganism from a clinical material or from a wash from an environmental object is performed. A bacterial suspension is prepared from a culture of the studied microorganism grown on a dense nutrient medium at a temperature of 37°C for 18-24 hours by washing with a 0.9% sterile isotonic sodium chloride solution. The bacterial suspension is brought to a turbidity corresponding to a concentration of 1.5×10 8 cells/ml, which corresponds to 0.5 McFarland units (densitometer measurement according to the manufacturer of McFarland standards bioMerieux). By the method of successive tenfold dilutions with a sterile isotonic sodium chloride solution, the microbial suspension is adjusted to a dilution of 1.5×10 5 . 0.1 ml of microbial suspension is added to a glass test tube, then the test tube with the suspension is placed in a thermostatic water bath, where the temperature is set to 32°C. The tested antiseptic before the experiment is not poured from the original packaging, not diluted. 0.9 ml of an antiseptic is added to the test tube with a suspension, mixed for several seconds, the test tube with the mixture is left in a thermostatic water bath at a temperature of 32 ° C for the time indicated by the manufacturer of the preparation in the instructions, as the time for rubbing the antiseptic into the skin of the hands until completely dry (usually this time is at least 30 seconds), after the exposure time of the antiseptic, 0.5 ml of the neutralizer is added to the test tube and mixed by shaking. According to the current Guideline 4.2.2643-10 [2], the following neutralizers are used to neutralize the antimicrobial action of disinfectants from various chemical groups: for agents from the group of oxidizing agents (halogen-containing, oxidizing agents, agents containing peracetic acid, ozone) - 0.5-1% solutions of sodium thiosulfate; - for aldehyde- and phenol-containing products - water; universal neutralizer containing tween-80 - 3%, saponin - 3%, histidine - 0.1% and cysteine - 0.1%; - for cationic surfactants - 0.1-1.0% sulfonic acid solutions or 0.5-1.0% sulfonic acid solutions with 10% skimmed milk.
После экспозиции нейтрализатора 0,1 мл смеси высевают на твердую питательную среду (мясо-пептонный агар), инкубируют в термостате при температуре 37°С 18-24 ч.After exposure of the neutralizer, 0.1 ml of the mixture is sown on a solid nutrient medium (meat-peptone agar), incubated in a thermostat at a temperature of 37°C for 18-24 hours.
После заданного времени инкубации подсчитывают выросшие колонии и дифференцировано в зависимости от класса антисептика (согласно МУ 3.5.1.3674-20. 3.5.1.) [7] делают вывод об устойчивости исследуемой культуры микроорганизма к тестируемому антисептику:After a predetermined incubation time, grown colonies are counted and differentiated depending on the class of antiseptic (according to MU 3.5.1.3674-20. 3.5.1.) [7], a conclusion is made about the resistance of the studied microorganism culture to the tested antiseptic:
- для антисептиков класса А: тестируемый препарат предназначен для обработки кожи операционного поля пациента) - в случае роста 1 и более колоний делают вывод об устойчивости исследуемой культуры микроорганизма к тестируемому антисептику, при отсутствии роста бактерий - о чувствительности микроорганизма к антисептику; тестируемый препарат предназначен для обработки кожи инъекционного поля пациента - в случае роста 51 и более колоний делают вывод об устойчивости исследуемой культуры микроорганизма к тестируемому антисептику, при росте 50 и менее колоний - о чувствительности микроорганизма к антисептику;- for class A antiseptics: the test preparation is intended for treating the skin of the patient's surgical field) - in the case of growth of 1 or more colonies, a conclusion is made about the resistance of the studied microorganism culture to the tested antiseptic, in the absence of bacterial growth - about the sensitivity of the microorganism to the antiseptic; the test preparation is intended for treating the skin of the patient's injection field - in the case of growth of 51 or more colonies, a conclusion is made about the resistance of the studied culture of the microorganism to the tested antiseptic, with the growth of 50 or less colonies, the sensitivity of the microorganism to the antiseptic;
- для антисептиков класса Б (для обработки рук хирургов и других медицинских работников, участвующих в выполнении оперативных и иных инвазивных вмешательств) - в случае роста 1 и более колоний делается вывод об устойчивости исследуемой культуры микроорганизма к тестируемому антисептику, при отсутствии роста бактерий - о чувствительности микроорганизма к антисептику;- for class B antiseptics (for treating the hands of surgeons and other medical workers involved in performing surgical and other invasive interventions) - in case of growth of 1 or more colonies, a conclusion is made about the resistance of the studied microorganism culture to the tested antiseptic, in the absence of bacterial growth - about sensitivity microorganism to antiseptic;
- для антисептиков класса В (для гигиенической обработки кожных покровов) - в случае роста 51 и более колоний делается вывод об устойчивости исследуемой культуры микроорганизма к тестируемому антисептику, при росте 50 и менее колоний - о чувствительности микроорганизма к антисептику.- for antiseptics of class B (for hygienic treatment of the skin) - in case of growth of 51 or more colonies, a conclusion is made about the resistance of the studied microorganism culture to the tested antiseptic, with the growth of 50 or less colonies - about the sensitivity of the microorganism to the antiseptic.
Параллельно с проведением опыта ставят контроли: In parallel with the experiment, controls are set:
1) Контроль жизнеспособности микроорганизма;1) Monitoring the viability of the microorganism;
2) Контроль антисептика без добавления культуры;2) Antiseptic control without adding culture;
3) Контроль полноты нейтрализации антисептика.3) Control of completeness of antiseptic neutralization.
Необходимость использования определенных количественных отличительных интерпретационных признаков в предлагаемом способе обеспечивает возможность количественной оценки чувствительности и возможность использования дифференцированных критериев, соответствующих современной нормативно-методической базе [7]. Количественные критерии оценки обоснованы следующими проведенными авторами расчетами.The need to use certain quantitative distinctive interpretative features in the proposed method provides the possibility of quantitative assessment of sensitivity and the possibility of using differentiated criteria that correspond to the modern regulatory and methodological framework [7]. Quantitative evaluation criteria are substantiated by the following calculations carried out by the authors.
Готовится взвесь микроорганизмов 0,5 единиц по стандарту мутности МакФарланда (это значит, что в 1 мл взвеси содержится 1,5×108 микробных клеток). Методом последовательных десятикратных разведений стерильным изотоническим раствором хлорида натрия доводят микробную взвесь до разведения 1,5×105. Микробную взвесь объемом 0,1 мл смешивают с 0,9 мл антисептического средства (таким образом, общий объем смеси составляет 1 мл и содержит 1,5×104 микробных клеток). Добавляется 0,5 мл нейтрализатора (таким образом, общий объем смеси составляет уже 1,5 мл и содержит 1,5×104 микробных клеток). Из полученной смеси объемом 1,5 мл берется 0,1 мл (для высева на питательную среду). В этом объеме (0,1 мл) содержится в 15 раз меньше микробных клеток, чем в 1,5 мл (т.е. 0,1×104 - это количество высевается на питательную среду).A microbial suspension of 0.5 McFarland turbidity units is prepared (this means that 1 ml of the suspension contains 1.5×10 8 microbial cells). By the method of successive tenfold dilutions with a sterile isotonic sodium chloride solution, the microbial suspension is adjusted to a dilution of 1.5×10 5 . A microbial suspension with a volume of 0.1 ml is mixed with 0.9 ml of an antiseptic agent (thus, the total volume of the mixture is 1 ml and contains 1.5×10 4 microbial cells). 0.5 ml of the neutralizer is added (thus the total volume of the mixture is already 1.5 ml and contains 1.5×10 4 microbial cells). From the resulting mixture with a volume of 1.5 ml, 0.1 ml is taken (for inoculation on a nutrient medium). This volume (0.1 ml) contains 15 times less microbial cells than 1.5 ml (ie 0.1×10 4 - this amount is sown on a nutrient medium).
Согласно МУ 3.5.1.3674-20. 3.5.1. Дезинфектология. Обеззараживание рук медицинских работников и кожных покровов пациентов при оказании медицинской помощи. Методические указания (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 14.12.2020) [7] антисептики класса А для обработки операционного поля обеспечивают снижение общей микробной обсемененности не менее чем на 100%, антисептики класса А для обработки кожи инъекционного поля пациента обеспечивают снижение общей микробной обсемененности не менее чем на 95%; антисептики класса Б обеспечивают снижение общей микробной обсемененности не менее чем на 100%; антисептики класса В обеспечивают снижение общей микробной обсемененности не менее чем на 95%. Таким образом для определенных классов антисептиков допускается рост не более чем 5% микроорганизмов. В разрабатываемом способе было рассчитано количество микроорганизмов, допустимых к росту при взаимодействии с антисептическим средством.According to MU 3.5.1.3674-20. 3.5.1. Disinfectology. Disinfection of the hands of medical workers and the skin of patients in the provision of medical care. Guidelines (approved by the Chief State Sanitary Doctor of the Russian Federation on December 14, 2020) [7] Class A antiseptics for treating the surgical field provide a reduction in total microbial contamination by at least 100%, class A antiseptics for treating the skin of the patient's injection field provide a reduction in overall microbial contamination not less than 95%; class B antiseptics provide a reduction in the total microbial contamination by at least 100%; Class B antiseptics provide a reduction in overall microbial contamination by at least 95%. Thus, for certain classes of antiseptics, growth of no more than 5% of microorganisms is allowed. In the developed method, the number of microorganisms allowed for growth when interacting with an antiseptic was calculated.
В 0,1 мл смеси, высеваемой на питательную среду, содержится 0,1×104 микроорганизмов (100%), допустим рост не более 5% общего количество микроорганизмов, т.е. 50 КОЕ. Таким образом допускается рост не более 50 КОЕ микроорганизма. При таком количестве выросших микроорганизмов дается вывод о чувствительности бактерий к тестируемому антисептику. При росте 51 КОЕ и более делается вывод о резистентности микроорганизма к тестируемому антисептику.In 0.1 ml of the mixture, sown on a nutrient medium, contains 0.1×10 4 microorganisms (100%), let's say growth is not more than 5% of the total number of microorganisms, i.e. 50 CFU. Thus, the growth of no more than 50 CFU of the microorganism is allowed. With such a number of grown microorganisms, a conclusion is made about the sensitivity of bacteria to the tested antiseptic. With an increase of 51 CFU or more, a conclusion is made about the resistance of the microorganism to the tested antiseptic.
Кратность постановки эксперимента должна быть не менее трех (при условии получения однотипных результатов). При необходимости статистической обработки - не менее восьми.The multiplicity of the experiment should be at least three (subject to obtaining the same type of results). If necessary, statistical processing - at least eight.
Приводим экспериментально-лабораторные примеры использования предложенного способа.We present experimental and laboratory examples of the use of the proposed method.
Пример 1. В эксперименте использовался тест-штамм S.aureus №906 с известными фенотипическими свойствами. Тестируемый антисептик композиционный препарат, содержащий четвертичные аммониевые соединения (ЧАС) и амины [N,N-бис-(3-аминопропил) додециламин-0,17%, алкилдиметилбензиламмоний хлорид-0,25%, N,N-дидецил-N,N-диметиламмоний хлорид-0,2%]. Согласно инструкции производителя тестируемый антисептик можно применять для всех видов обработки кожного покрова, поэтому препарат можно отнести к универсальному. Оценка производилась по наиболее эпидемиологически важному назначению препарата (обработка операционного поля пациента), относящего препарат к классу А [7].Example 1. The test strain S. aureus No. 906 with known phenotypic properties was used in the experiment. The test antiseptic is a composite preparation containing quaternary ammonium compounds (QAC) and amines [N,N-bis-(3-aminopropyl) dodecylamine-0.17%, alkyldimethylbenzylammonium chloride-0.25%, N,N-didecyl-N,N -dimethylammonium chloride-0.2%]. According to the manufacturer's instructions, the tested antiseptic can be used for all types of skin treatment, so the drug can be classified as universal. The assessment was made according to the most epidemiologically important prescription of the drug (treatment of the surgical field of the patient), which classifies the drug as class A [7].
Была приготовлена бактериальная взвесь из культуры изучаемого микроорганизма, выращенной на плотной питательной среде при температуре 37°С в течение 18 часов, путем смыва 0,9% стерильным изотоническим раствором хлорида натрия. Бактериальная взвесь доведена до мутности, соответствующей концентрации 1,5×108 клеток/мл, что соответствует 0,5 единицам МакФарланда (измерение денситометром согласно данным фирмы-изготовителя стандартов Мак-Фарланда bioMerieux). Методом последовательных десятикратных разведений стерильным изотоническим раствором хлорида натрия микробная взвесь доведена до разведения 1,5×105. В стеклянную пробирку внесли 0,1 мл микробной взвеси, затем пробирку со взвесью поставили на водяную баню-термостат, где установлена температура 32°С; в пробирку со взвесью внесли 0,9 мл антисептического средства, перемешали несколько секунд, пробирку со смесью оставили в водяной бане-термостате при температуре 32С°; время экспозиции составляло 2 мин. По истечении времени к смеси добавили 0,5 мл универсального нейтрализатора, пробирку со смесью встряхнули, перемешали. После экспозиции нейтрализатора 0,1 мл смеси высевали на твердую питательную среду (мясо-пептонный агар), инкубировали в термостате при температуре 37°С 24 ч.A bacterial suspension was prepared from a culture of the studied microorganism, grown on a dense nutrient medium at a temperature of 37°C for 18 hours, by washing with a 0.9% sterile isotonic sodium chloride solution. The bacterial suspension is brought to a turbidity corresponding to a concentration of 1.5×10 8 cells/ml, which corresponds to 0.5 McFarland units (measurement with a densitometer according to the manufacturer of McFarland standards bioMerieux). By the method of successive tenfold dilutions with a sterile isotonic sodium chloride solution, the microbial suspension was brought to a dilution of 1.5×10 5 . 0.1 ml of a microbial suspension was added to a glass test tube, then the test tube with the suspension was placed in a thermostatic water bath, where the temperature was set to 32°C; 0.9 ml of an antiseptic agent was added to the test tube with a suspension, mixed for several seconds, the test tube with the mixture was left in a thermostatic water bath at a temperature of 32 ° C; the exposure time was 2 min. After the time has elapsed, 0.5 ml of a universal neutralizer was added to the mixture, the test tube with the mixture was shaken and mixed. After exposure of the neutralizer, 0.1 ml of the mixture was sown on a solid nutrient medium (meat-peptone agar), incubated in a thermostat at a temperature of 37°C for 24 h.
По истечении времени инкубации производился подсчет выросших колоний. В данном эксперименте на твердой питательной среде выросло 0 колоний, что для выбранного класса препарата можно трактовать как отсутствие резистентности (полная чувствительность) у S.aureus №906 к тестируемому препарату.After the incubation time, the grown colonies were counted. In this experiment, 0 colonies grew on a solid nutrient medium, which for the selected drug class can be interpreted as the absence of resistance (full sensitivity) in S. aureus No. 906 to the test drug.
Пример 2. От пациента с инфекцией, связанной с оказанием медицинской помощи (нагноение место выхода периферического венозного катетера), был взят клинический материал - раневое отделяемое), в лабораторных условиях произошло выделение, идентификация, изучение фенотипических свойств клинического штамма, а именно был выделен Pseudomonas aeruginosa, проявлявший свойства полирезистентности к антибиотикам Тестируемый антисептик содержит в своем составе в качестве действующих веществ полигексаметиленгуанидин гидрохлорид (0,40±0,04%) и дидецилдиметиламмоний хлорид (0,20±0,02%) .Example 2. From a patient with an infection associated with the provision of medical care (suppuration of the exit site of a peripheral venous catheter), clinical material was taken - wound discharge), in the laboratory there was an isolation, identification, study of the phenotypic properties of the clinical strain, namely, Pseudomonas was isolated aeruginosa , which showed the properties of multi-resistance to antibiotics. The tested antiseptic contains polyhexamethylene guanidine hydrochloride (0.40±0.04%) and didecyldimethylammonium chloride (0.20±0.02%) as active ingredients.
В данном случае тестирование антисептика происходило с целью поиска факторов передачи возбудителя гнойно-септической инфекции пациенту в условиях оказания медицинской помощи и условий, способствующих возникновению данной инфекции. Тестируемый антисептический препарат применялся медицинским персоналом для гигиенической обработки рук при работе с внутривенным катетером, т.е. отнесен к классу В[7].In this case, the testing of the antiseptic was carried out in order to search for the factors of transmission of the causative agent of purulent-septic infection to the patient in the conditions of medical care and conditions conducive to the occurrence of this infection. The tested antiseptic preparation was used by medical personnel for hygienic treatment of hands when working with an intravenous catheter, i.e. assigned to class B[7].
Культура микроорганизма, выращенная на плотной питательной среде в течение 24 часов до эксперимента, смывалась стерильным изотоническим раствором хлорида натрия. Бактериальная суспензия микроорганизма доводилась до мутности, соответствующей 0,5 единицам МакФарланда, методом последовательных десятикратных разведений доведена до разведения 1,5×105. В стеклянную пробирку внесли 0,1 мл микробной взвеси, затем пробирку со взвесью поставили на водяную баню-термостат, где установлена температура 32°С; в пробирку со взвесь внесли 0,9 мл антисептического средства, перемешали несколько секунд, пробирку со смесью оставили в водяной бане-термостате при температуре 32°С; время экспозиции 30 сек. По истечении времени к смеси было добавлено 0,5 мл универсального нейтрализатора, пробирку со смесью встряхнули, перемешали. После экспозиции нейтрализатора 0,1 мл смеси высевали на твердую питательную среду (мясо-пептонный агар), инкубировали в термостате при температуре 37°С 24 ч.The culture of the microorganism, grown on solid nutrient medium for 24 hours before the experiment, was washed off with a sterile isotonic sodium chloride solution. The bacterial suspension of the microorganism was brought to a turbidity corresponding to 0.5 McFarland units, by the method of successive tenfold dilutions brought to a dilution of 1.5×10 5 . 0.1 ml of a microbial suspension was added to a glass test tube, then the test tube with the suspension was placed in a thermostatic water bath, where the temperature was set to 32°C; 0.9 ml of an antiseptic agent was added to the test tube with a suspension, mixed for several seconds, the test tube with the mixture was left in a thermostatic water bath at a temperature of 32 ° C; exposure time 30 sec. After the time had elapsed, 0.5 ml of a universal neutralizer was added to the mixture, the test tube with the mixture was shaken and mixed. After exposure of the neutralizer, 0.1 ml of the mixture was sown on a solid nutrient medium (meat-peptone agar), incubated in a thermostat at a temperature of 37°C for 24 h.
По истечении времени инкубации произвели учет результатов. За время инкубации на твердой питательной среде выросло 68 КОЕ P.aeruginosa. Согласно критериям оценки для антисептиков класса В был сделан результат о нечувствительности данного микроорганизма к тестируемому антисептику.After the incubation time, the results were recorded. During incubation on solid nutrient medium, 68 CFU of P.aeruginosa grew . According to the evaluation criteria for class B antiseptics, a result was made on the insensitivity of this microorganism to the tested antiseptic.
Проведенные экспериментально-лабораторные исследования позволяют говорить о следующих преимуществах заявляемого изобретения:The conducted experimental laboratory studies allow us to speak about the following advantages of the claimed invention:
1) преимуществом заявленного способа является сам методологический подход, исключающий контаминацию рук исследователя микробной флорой, как предлагается в других методах, что существенно повышает эпидемиологическую безопасность проводимого эксперимента;1) the advantage of the claimed method is the methodological approach itself, which excludes the contamination of the researcher's hands with microbial flora, as proposed in other methods, which significantly increases the epidemiological safety of the experiment;
2) строгий количественный подход в объемах вносимых реактивов и учете результатов позволяет нивелировать долю случайной ошибки в исследовании и стандартизовать условия эксперимента;2) a strict quantitative approach in terms of the volumes of reagents introduced and taking into account the results makes it possible to level the proportion of random error in the study and standardize the experimental conditions;
3) возможность проводить исследования с несколькими антисептическими препаратами, так как в практических условиях медицинской организации зачастую используется несколько средств даже в рамках одного подразделения;3) the ability to conduct research with several antiseptic preparations, since in the practical conditions of a medical organization, several agents are often used even within the same unit;
4) в способе предусмотрен этап нейтрализации, позволяющий моделировать строгие условия эксперимента и изучать эффект от воздействия антисептика (снижение обсемененности) за определенное время (заявленное производителем препарата);4) the method provides for a neutralization stage, which allows simulating the strict conditions of the experiment and studying the effect of the antiseptic (decrease in contamination) for a certain time (declared by the manufacturer of the drug);
5) данный способ прост для исполнения в рутинной практике и экономичен;5) this method is easy to perform in routine practice and economical;
6) градация полученных результатов по классу тестируемого препарата позволяет дифференцировано подходить к интерпретации и выводам о чувствительности микроорганизмов к антисептикам.6) the gradation of the results obtained by the class of the tested drug allows a differentiated approach to the interpretation and conclusions about the sensitivity of microorganisms to antiseptics.
Способ определения чувствительности бактерий к антисептическим средствам в растворе, отличается наличием возможности исследовать свойства микроорганизмов к антисептическим препаратам без нанесения микробной взвеси на руки исследователя, при этом моделируются температурные условия, близкие к параметрам кожного покрова человека; возможностью стандартизации параметров проведения эксперимента; возможностью изучать любые штаммы микроорганизмов (стандартные тест-штаммы и госпитальные штаммы); возможностью интерпретировать полученный результат основываясь на современной нормативной базе.The method for determining the sensitivity of bacteria to antiseptic agents in solution is characterized by the possibility to study the properties of microorganisms to antiseptic preparations without applying a microbial suspension to the researcher's hands, while simulating temperature conditions close to the parameters of the human skin; the possibility of standardizing the parameters of the experiment; the ability to study any strains of microorganisms (standard test strains and hospital strains); the ability to interpret the result based on the modern regulatory framework.
Литература:Literature:
1. Методологические проблемы определения чувствительности микроорганизмов к дезинфектантам и антисептикам / Косякова К.Г. // Клинико-лабораторный консилиум. - 2014. - № 1 (48). - С. 67-70.1. Methodological problems of determining the sensitivity of microorganisms to disinfectants and antiseptics / Kosyakova K.G. // Clinical and laboratory consultation. - 2014. - No. 1 (48). - S. 67-70.
2. РУКОВОДСТВО Р 4.2.2643-10 Дезинфектология. Методы лабораторных исследований и испытаний дезинфекционных средств для оценки их эффективности и безопасности.2. GUIDE R 4.2.2643-10 Disinfectology. Methods for laboratory research and testing of disinfectants to assess their effectiveness and safety.
3. Определение чувствительности микроорганизмов к дезинфектантам и антисептикам методом диффузии в агар с использованием дисков. МР 1100/25-0-17. Сост. Н.В. Зубчонок, Е.С. Ясная [и др.], утв. МЗ РФ от 10.01.2000 г.3. Determination of the sensitivity of microorganisms to disinfectants and antiseptics by diffusion into agar using discs. MP 1100/25-0-17. Comp. N.V. Zubchonok, E.S. Yasnaya [and others], approved. Ministry of Health of the Russian Federation dated 10.01.2000
4. Способ определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным веществам. Тец В.В., Тец Г.В. Патент на изобретение RU 2505813 C1, 27.01.2014. Заявка № 2012147280/15 от 06.11.2012.4. Method for determining the sensitivity of microorganisms to antimicrobial substances. Tets V.V., Tets G.V. Patent for invention RU 2505813 C1, 01/27/2014. Application No. 2012147280/15 dated 11/06/2012.
5. Способ определения чувствительности микроорганизмов к дезинфицирующему средству (варианты). Шкарин В.В., Ковалишена О.В., Благонравова А.С., Ермольева С.А., Воробьева О.Н., Алексеева И.Г., Усачева С.Ю. Патент на изобретение RU 2378363 C1, 10.01.2010. Заявка № 2008123115/13 от 10.06.2008.5. Method for determining the sensitivity of microorganisms to a disinfectant (versions). Shkarin V.V., Kovalishena O.V., Blagonravova A.S., Ermolyeva S.A., Vorobieva O.N., Alekseeva I.G., Usacheva S.Yu. Patent for invention RU 2378363 C1, 01/10/2010. Application No. 2008123115/13 dated 06/10/2008.
6. Gaifutdinov R.T., Ismagilov М.F., Khasanova D.R. Physiological mechanisms of thermoregulation, their disorders in cerebral autonomic dysregulation // Neurology Bulletin. - 1999. - Vol. XXXI. - N. 1-4. - P. 63-76. doi: 10.17816/nb80949.6. Gaifutdinov R.T., Ismagilov M.F., Khasanova D.R. Physiological mechanisms of thermoregulation, their disorders in cerebral autonomic dysregulation // Neurology Bulletin. - 1999. - Vol. XXXI. - N. 1-4. - P. 63-76. doi: 10.17816/nb80949.
7. МУ 3.5.1.3674-20. 3.5.1. Дезинфектология. Обеззараживание рук медицинских работников и кожных покровов пациентов при оказании медицинской помощи. Методические указания (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 14.12.2020).7. MU 3.5.1.3674-20. 3.5.1. Disinfectology. Disinfection of the hands of medical workers and the skin of patients in the provision of medical care. Guidelines (approved by the Chief State Sanitary Doctor of the Russian Federation on December 14, 2020).
Claims (1)
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2781985C1 true RU2781985C1 (en) | 2022-10-21 |
Family
ID=
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2818369C1 (en) * | 2023-09-22 | 2024-05-02 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Самарский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method for assessing lactobacillus viability preservation under effect of various antiseptic concentrations |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2378363C1 (en) * | 2008-06-10 | 2010-01-10 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Нижегородская государственная медицинская академия Росздрава" (ГОУ ВПО "НИЖГМА РОСЗДРАВА") | Method for determining microorganism sensitivity to disinfectant (versions) |
| RU2505813C1 (en) * | 2012-11-06 | 2014-01-27 | Виктор Вениаминович Тец | Method for determining microorganism sensitivity to antimicrobial substances |
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2378363C1 (en) * | 2008-06-10 | 2010-01-10 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Нижегородская государственная медицинская академия Росздрава" (ГОУ ВПО "НИЖГМА РОСЗДРАВА") | Method for determining microorganism sensitivity to disinfectant (versions) |
| RU2505813C1 (en) * | 2012-11-06 | 2014-01-27 | Виктор Вениаминович Тец | Method for determining microorganism sensitivity to antimicrobial substances |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ШИРОКОВА И.Ю. и др. "Оценка чувствительности госпитальных штаммов микроорганизмов к противомикробным препаратам местного действия"; Медицинский альманах, 2020, N 3(64), с.57-63. ШКАРИН В.В. и др. "Способ определения чувствительности бактерий к дезинфицирующим средствам при мониторинге устойчивости к антимикробным препаратам в медицинских организациях", Федеральные клинические рекомендации, 2015, М., 27 с. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2818369C1 (en) * | 2023-09-22 | 2024-05-02 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Самарский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Method for assessing lactobacillus viability preservation under effect of various antiseptic concentrations |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Reybrouck | The testing of disinfectants | |
| Fox et al. | Assessing the risk of resistance to cationic biocides incorporating realism-based and biophysical approaches | |
| Walter et al. | In vivo assessment of antimicrobial-treated textiles on skin microflora | |
| RU2378363C1 (en) | Method for determining microorganism sensitivity to disinfectant (versions) | |
| Tomasino | Development and assessment of disinfectant efficacy test methods for regulatory purposes | |
| López-Gigosos et al. | Evaluation of antimicrobial persistent activity of alcohol-based hand antiseptics against bacterial contamination | |
| Ebrahimi et al. | Effects of benzalkonium chloride on planktonic growth and biofilm formation by animal bacterial pathogens | |
| Wilson et al. | Comparison of three preoperative skin preparation techniques in ponies | |
| Tyski et al. | Application of normative documents for determination of biocidal activity of disinfectants and antiseptics dedicated to the medical area: a narrative review | |
| Wutzler et al. | Virucidal and chlamydicidal activities of eye drops with povidone-iodine liposome complex | |
| Reichel et al. | Pitfalls in efficacy testing–how important is the validation of neutralization of chlorhexidine digluconate? | |
| Laustsen et al. | Effect of correctly using alcohol-based hand rub in a clinical setting | |
| RU2781985C1 (en) | Method for determining the sensitivity of bacteria to antiseptics in solution | |
| Herruzo-Cabrera et al. | A new alcohol solution (N-duopropenide) for hygienic (or routine) hand disinfection is more useful than classic handwashing: in vitro and in vivo studies in burn and other intensive care units | |
| Chinedu et al. | Comparative studies of the efficacy of some disinfectants on human pathogens | |
| Chojecka et al. | Neutralization efficiency of alcohol based products used for rapid hand disinfection | |
| Moslehifard et al. | Efficacy of disinfection of dental stone casts: Virkon versus sodium hypochlorite | |
| Duan et al. | Properties of an enzyme-based low-level iodine disinfectant | |
| RU2650760C1 (en) | Method for determining sensitivity of microorganisms to disinfectants | |
| Mocherniuk et al. | Identification of the bioaerosol microbiota in veterinary clinics as the key to preventing nosocomial infection | |
| RU2785461C1 (en) | Express method for determining the sensitivity of gram-negative bacteria to bacteriophages | |
| RU2122865C1 (en) | Method of treatment medicinal stuff hands, suppurative wounds, injection and operative fields and sterilization of medicinal tool | |
| Yakubu et al. | Common sources of pre-, peri-and post surgical site infections (SSI) in dogs during clinical students’ surgical practice | |
| CN107737131A (en) | A kind of skin and mucosa damages antibacterial disinfectant and preparation method | |
| Abdullatef et al. | The Bacterial Contamination of the Operating lounges in Hospitals of Al-Diwaniyah Province with the Two types of Intestinal E. coli and St. aureus Cutaneous. |