RU2776898C1 - Method for producing myricitrin from the bark of eastern black walnut, exhibiting neurotropic activity - Google Patents
Method for producing myricitrin from the bark of eastern black walnut, exhibiting neurotropic activity Download PDFInfo
- Publication number
- RU2776898C1 RU2776898C1 RU2021111793A RU2021111793A RU2776898C1 RU 2776898 C1 RU2776898 C1 RU 2776898C1 RU 2021111793 A RU2021111793 A RU 2021111793A RU 2021111793 A RU2021111793 A RU 2021111793A RU 2776898 C1 RU2776898 C1 RU 2776898C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- myricitrin
- ethyl alcohol
- bark
- black walnut
- producing
- Prior art date
Links
- DCYOADKBABEMIQ-FLCVNNLFSA-N Myricitrin Natural products O([C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O1)C1=C(c2cc(O)c(O)c(O)c2)Oc2c(c(O)cc(O)c2)C1=O DCYOADKBABEMIQ-FLCVNNLFSA-N 0.000 title claims abstract description 30
- DCYOADKBABEMIQ-OWMUPTOHSA-N myricitrin Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O[C@H]1OC1=C(C=2C=C(O)C(O)=C(O)C=2)OC2=CC(O)=CC(O)=C2C1=O DCYOADKBABEMIQ-OWMUPTOHSA-N 0.000 title claims abstract description 29
- 240000008304 Juglans nigra Species 0.000 title claims abstract description 15
- 235000013740 Juglans nigra Nutrition 0.000 title claims abstract description 15
- 230000002276 neurotropic Effects 0.000 title claims abstract description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title abstract description 8
- 230000001747 exhibiting Effects 0.000 title abstract 3
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 26
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 24
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 claims abstract description 23
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims abstract description 16
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 14
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 14
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 14
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims abstract description 10
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims abstract description 7
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims abstract description 7
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 claims abstract description 6
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims abstract description 6
- 238000002803 maceration Methods 0.000 claims abstract description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 claims abstract description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims abstract description 3
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 claims description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 abstract description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 5
- 238000005039 chemical industry Methods 0.000 abstract description 2
- 238000005020 pharmaceutical industry Methods 0.000 abstract description 2
- 239000010413 mother solution Substances 0.000 abstract 1
- IKMDFBPHZNJCSN-UHFFFAOYSA-N myricetin Chemical compound C=1C(O)=CC(O)=C(C(C=2O)=O)C=1OC=2C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 IKMDFBPHZNJCSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 235000007743 myricetin Nutrition 0.000 description 9
- 229940116852 myricetin Drugs 0.000 description 9
- PNNNRSAQSRJVSB-BXKVDMCESA-N Rhamnose Chemical compound C[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-BXKVDMCESA-N 0.000 description 6
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 5
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 5
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 5
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- VSCWAEJMTAWNJL-UHFFFAOYSA-K Aluminium chloride Chemical compound Cl[Al](Cl)Cl VSCWAEJMTAWNJL-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 229940079593 drugs Drugs 0.000 description 4
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 4
- 239000000727 fraction Substances 0.000 description 4
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 240000002195 Polygonum aviculare Species 0.000 description 3
- 235000006386 Polygonum aviculare Nutrition 0.000 description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N acetic acid ethyl ester Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 description 3
- 150000002215 flavonoids Chemical class 0.000 description 3
- 229930003935 flavonoids Natural products 0.000 description 3
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 241000334161 Cercis chinensis Species 0.000 description 2
- 241000201281 Limonium gmelinii Species 0.000 description 2
- 238000001460 carbon-13 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 2
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011068 load Methods 0.000 description 2
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 2
- 230000037023 motor activity Effects 0.000 description 2
- 230000000324 neuroprotective Effects 0.000 description 2
- 238000004262 preparative liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000003595 spectral Effects 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- TZYRSLHNPKPEFV-UHFFFAOYSA-N 2-Ethyl-1-butanol Chemical compound CCC(CC)CO TZYRSLHNPKPEFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010002855 Anxiety Diseases 0.000 description 1
- 206010057666 Anxiety disease Diseases 0.000 description 1
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N Boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N HCl Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000758789 Juglans Species 0.000 description 1
- 235000009496 Juglans regia Nutrition 0.000 description 1
- 241000201282 Limonium Species 0.000 description 1
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000003712 anti-aging Effects 0.000 description 1
- 230000003064 anti-oxidating Effects 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant Effects 0.000 description 1
- 230000036506 anxiety Effects 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 239000002034 butanolic fraction Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- 239000008079 hexane Substances 0.000 description 1
- 238000002114 high-resolution electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000000399 hydroalcoholic extract Substances 0.000 description 1
- 229910000041 hydrogen chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 1
- 239000011528 polyamide (building material) Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 1
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 1
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002211 ultraviolet spectrum Methods 0.000 description 1
- 235000020234 walnut Nutrition 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 230000037303 wrinkles Effects 0.000 description 1
Images
Abstract
Description
Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, в частности, к производству лекарственных средств в виде субстанций и индивидуальных биологически активных соединений и касается способа получения мирицитрина (3-О-α-L-рамнопиранозид мирицетина) из коры ореха черного (Juglans nigra L.), обладающего нейротропной активностью и используемого для лечения тревожных состояний.The invention relates to the chemical and pharmaceutical industry, in particular, to the production of drugs in the form of substances and individual biologically active compounds and relates to a method for producing myricitrin (3-O-α-L-myricetin rhamnopyranoside) from black walnut bark (Juglans nigra L.) , which has neurotropic activity and is used to treat anxiety.
В настоящее время в мировой и отечественной практике широко применяют плоды и листья ореха черного и ореха грецкого, однако перспективным видом лекарственного растительного сырья является кора ореха черного ввиду достаточно богатого химического состава (1).At present, fruits and leaves of black walnut and walnut are widely used in world and domestic practice, however, black walnut bark is a promising type of medicinal plant material due to its rather rich chemical composition (1).
Известен способ выделения мирицитрина (3-О-α-L-рамнопиранозида мирицетина) в виде суммарного экстракта из листьев и побегов багрянника китайского (Cercis chinensis Bunge) (2). Согласно данной методики проводят: измельчение пробы сырья (1 кг) листьев и побегов багрянника китайского, 2-стадийное экстрагирование при комнатной температуре 60% этиловым спиртом, получение водной суспензии с последующей трехкратной экстракцией гексаном, этилацетатом и бутанолом, насыщенным водой. Далее для последующего выделения с бутанольной фракцией выполняли YMC-гель колоночную хроматографию (размер колонки: 5 × 30 см, движущаяся фаза: метанол: вода (0:1→1:0), препаративную ВЭЖХ [движущаяся фаза: метанол: вода (3:7), скорость тока: 61 мл / мин, УФ: 254 нм], в результате чего было получено соединение (9 мг), имеющее относительное время удерживания 26 минут. Данное соединение является 3-О-α-L-рамнопиранозидом мирицетина (2).A known method of isolation of myricitrin (3-O-α-L-rhamnopyranoside myricetin) in the form of a total extract from the leaves and shoots of Chinese purple (Cercis chinensis Bunge) (2). According to this technique, the following is carried out: grinding a raw material sample (1 kg) of leaves and shoots of Chinese purple, 2-stage extraction at room temperature with 60% ethyl alcohol, obtaining an aqueous suspension, followed by three extractions with hexane, ethyl acetate and butanol saturated with water. Next, for subsequent isolation with the butanol fraction, YMC gel column chromatography (column size: 5×30 cm, moving phase: methanol: water (0:1→1:0), preparative HPLC [moving phase: methanol: water (3:3): 7), flow rate: 61 ml/min, UV: 254 nm], whereby a compound (9 mg) having a relative retention time of 26 minutes was obtained. ).
Данный метод выделяется в качестве аналога. Недостатками данного аналога являются низкий выход целевого вещества - мирицитрина (3-О-α-L-рамнопиранозида мирицетина) (0,009%), многостадийность хроматографической очистки с использование различных сорбентов и элюента, представляющего собой смесь сложных систем растворителей.This method stands out as an analogue. The disadvantages of this analogue are the low yield of the target substance - myricitrin (3-O-α-L-rhamnopyranoside myricetin) (0.009%), multi-stage chromatographic purification using various sorbents and eluent, which is a mixture of complex solvent systems.
Также существует способ получения растительной субстанции, содержащей мирицитрин из корней кермека Гмелина (Limonium gmelinii Mill.) в качестве средства, обладающего нейропротективной активностью. Сухой экстракт выделяют из корней растения вида L. gmelinii их экстракцией 50%-ным раствором этилового спирта при комнатной температуре (22-25°С), при соотношении сырье-экстрагент, равном 1:6, и временем двукратной экстракции, каждая из которых проводится в течение 24 часов. Экстракты концентрируют в вакууме досуха при 40-60°С (3).There is also a method for obtaining a plant substance containing myricitrin from the roots of Kermek Gmelin (Limonium gmelinii Mill.) as an agent with neuroprotective activity. A dry extract is isolated from the roots of a plant of the species L. gmelinii by their extraction with a 50% solution of ethyl alcohol at room temperature (22-25 ° C), with a raw material-extractant ratio of 1:6, and a two-fold extraction time, each of which is carried out in 24 hours. The extracts are concentrated in vacuo to dryness at 40-60°C (3).
Указанный метод также выделяется в качестве аналога. Недостатками представленного аналога являются отсутствие указаний на выход целевого соединения, а также выделение мирицитрина (3-О-α-L-рамнопиранозида мирицетина) в виде растительной субстанции, являющейся суммарным экстрактом.This method also stands out as an analogue. The disadvantages of the presented analogue are the lack of indications of the yield of the target compound, as well as the isolation of myricitrin (3-O-α-L-rhamnopyranoside myricetin) in the form of a plant substance, which is a total extract.
Кроме того, известен способ получения мирицитрина из травы горца птичьего (Polygonum aviculare L.) в виде суммы флавоноидов. 5,0 кг сырья трехкратно экстрагировали 90% этиловым спиртом при кипячении с обратным холодильником в течение 3 часов. После упаривания этилового спирта под вакуумом, концентрированный экстракт суспендировали в воде и затем подвергали колоночной хроматографии на полиамиде со смесями Н2О - этиловый спирт в качестве элюентов с получением четырех фракций. Сумму флавоноидов из травы горца птичьего получали во фракции, элюированной 60%-ным этиловым спиртом (фракция II). Стандарт мирицитрина были выделен из фракции II полупрепаративной жидкостной хроматографией, структура была идентифицирована на основе спектральных данных (1Н-ЯМР, 13С-ЯМР и масс-спектр) и сравнением с литературными значениями. Анализ показал, что чистота соединения составляет>98%. Выход в данном методе неизвестен (4).In addition, a method is known for obtaining myricitrin from the herb knotweed bird (Polygonum aviculare L.) in the form of a sum of flavonoids. 5.0 kg of raw material was extracted three times with 90% ethyl alcohol while boiling under reflux for 3 hours. After evaporating the ethyl alcohol under vacuum, the concentrated extract was suspended in water and then subjected to polyamide column chromatography with H 2 O - ethanol mixtures as eluents to give four fractions. The sum of flavonoids from the herb Knotweed was obtained in the fraction eluted with 60% ethanol (fraction II). Myricitrin standard was isolated from fraction II by semi-preparative liquid chromatography, the structure was identified based on spectral data ( 1 H-NMR, 13 C-NMR and mass spectrum) and comparison with literature values. Analysis showed that the purity of the compound was >98%. The output in this method is unknown (4).
Вышеуказанный метод взят нами в качестве прототипа. Недостатками указанного прототипа являются отсутствие указаний на выход целевого соединения, выделение мирицитрина (3-О-α-L-рамнопиранозида мирицетина) в виде суммы флавоноидов, а также многостадийность хроматографических операций.The above method is taken by us as a prototype. The disadvantages of this prototype are the lack of indications of the output of the target compound, the selection of myricitrin (3-O-α-L-rhamnopyranoside myricetin) in the form of a sum of flavonoids, as well as multi-stage chromatographic operations.
Таким образом, целью изобретения является создание способа получения мирицитрина из коры ореха черного, обладающего нейротропной активностью.Thus, the aim of the invention is to create a method for producing myricitrin from black walnut bark, which has neurotropic activity.
Технический результат достигается тем, что извлечение получают из коры ореха черного с помощью 70% этилового спирта в соотношении «сырье-экстрагент» 1:5 с применением метода дробной мацерации, целевое вещество элюируют смесью хлороформ-этиловый спирт 96% в соотношении 60:40; дальнейшую очистку целевого вещества осуществляют перекристаллизацией из водного спирта с выходом мирицитрина 1,7% и степенью чистоты 99,5%, обладающего нейротропной активностью.The technical result is achieved by the fact that the extract is obtained from the bark of black walnut with 70% ethyl alcohol in the ratio of "raw material-extractant" 1:5 using the method of fractional maceration, the target substance is eluted with a mixture of chloroform-ethyl alcohol 96% in a ratio of 60:40; further purification of the target substance is carried out by recrystallization from aqueous alcohol with a yield of myricitrin of 1.7% and a degree of purity of 99.5%, which has neurotropic activity.
Способ реализуется следующим образом.The method is implemented as follows.
Измельченное воздушно-сухое сырье коры ореха черного (100,0 г) экстрагируют 70% этиловым спиртом в соотношении 1:5 до полного истощения сырья методом дробной мацерации. Полученное объединенное водно-спиртовое извлечение упаривают на роторной вакуумной установке до густого экстракта, который затем смешивают с 70 г силикагеля L 40/100, высушивают и вносят на колонку (8 × 10 см), заполненную силикагелем в виде взвеси в хлороформе. Хроматографическую колонку промывают хороформом (0,5 л) и смесью хлороформ - этиловый спирт 96% в соотношении 60:40 (6,5 л). Целевое вещество элюируют смесью хлороформ - этиловый спирт в соотношении 60:40 (1 л). Контроль за разделением веществ осуществляют методом тонкослойной хроматографии в системе растворителей: хлороформ - этиловый спирт 96% - вода (26:16:3). Элюаты, содержащие мирицитрин объединяют и упаривают до 5 мл, получая осадок. Полученный осадок после отделения от маточного раствора представляет собой готовый продукт (мирицитрин) с выходом 1,7%, имеющий степень чистоты 99,5%.The crushed air-dry raw material of black walnut bark (100.0 g) is extracted with 70% ethyl alcohol in a ratio of 1:5 until the complete depletion of the raw material by fractional maceration. The resulting combined hydroalcoholic extract is evaporated on a rotary vacuum unit to a thick extract, which is then mixed with 70 g of L 40/100 silica gel, dried, and applied to a column (8 × 10 cm) filled with silica gel as a suspension in chloroform. The chromatographic column was washed with choroform (0.5 l) and a mixture of chloroform - ethyl alcohol 96% in a ratio of 60:40 (6.5 l). The target substance is eluted with a mixture of chloroform - ethyl alcohol in a ratio of 60:40 (1 l). Control over the separation of substances is carried out by thin layer chromatography in the solvent system: chloroform - ethyl alcohol 96% - water (26:16:3). The eluates containing myricitrin are combined and evaporated to 5 ml to give a precipitate. The resulting precipitate after separation from the mother liquor is the finished product (myricitrin) with a yield of 1.7%, having a purity of 99.5%.
Предлагаемый способ поясняется следующим примером.The proposed method is illustrated by the following example.
Пример 1.Example 1
Измельченное воздушно-сухое сырье коры ореха черного (100,0 г) экстрагируют 70% этиловым спиртом в соотношении 1:5 до полного истощения сырья методом дробной мацерации. Полученное объединенное водно-спиртовое извлечение упаривают на роторной вакуумной установке до густого экстракта, который затем смешивают с 70 г силикагеля L 40/100, высушивают и вносят на колонку (8×10 см), заполненную силикагелем в виде взвеси в хлороформе. Хроматографическую колонку промывают хороформом (0,5 л) и смесью хлороформ - этиловый спирт 96% в соотношении 60:40 (6,5 л). Целевое вещество элюируют смесью хлороформ - этиловый спирт 96% в соотношении 60:40 (1 л). Контроль за разделением веществ осуществляют хроматографированием на пластинках "Сорбфил ПТСХ-АФ-А-УФ-254" в системе растворителей: хлороформ - этиловый спирт 96% - вода (26:16:3). Элюаты, содержащие мирицитрин объединяют и упаривают до 5 мл, получая осадок. Образовавшийся осадок (мирицитрин) отделяют от маточного раствора. Получают 1,7 г целевого вещества с выходом 1,7% от массы воздушно-сухого сырья и степенью чистоты 99,5%.The crushed air-dry raw material of black walnut bark (100.0 g) is extracted with 70% ethyl alcohol in a ratio of 1:5 until the complete depletion of the raw material by fractional maceration. The resulting combined water-alcohol extract is evaporated on a rotary vacuum unit to a thick extract, which is then mixed with 70 g of silica gel L 40/100, dried and applied to a column (8 × 10 cm) filled with silica gel in the form of a suspension in chloroform. The chromatographic column was washed with choroform (0.5 l) and a mixture of chloroform - ethyl alcohol 96% in a ratio of 60:40 (6.5 l). The target substance is eluted with a mixture of chloroform - ethyl alcohol 96% in a ratio of 60:40 (1 l). Control over the separation of substances is carried out by chromatography on plates "Sorbfil PTSH-AF-A-UF-254" in the solvent system: chloroform - ethyl alcohol 96% - water (26:16:3). The eluates containing myricitrin are combined and evaporated to 5 ml to give a precipitate. The resulting precipitate (myricitrin) is separated from the mother liquor. Receive 1.7 g of the target substance with a yield of 1.7% by weight of air-dry raw material and a degree of purity of 99.5%.
Химическая структура мирицитрина (3-О-α-L-рамнопиранозида мирицетина) представлена в Приложении 1 на фигуре 1.The chemical structure of myricitrin (3-O-α-L-rhamnopyranoside myricetin) is presented in Appendix 1 in Figure 1.
Спектральные и физико-химические свойства 3-О-α-L-рамнопиранозида мирицетина. Светло-желтый кристаллический порошок состава С21Н20О12 с т.пл. 194-197 С; УФ- спектр: λmax Et0H - 212, 260, 358; + NaOAc 268, 366; + NaOAc + Н3ВО3 260, 382; +AlCl3 278, 416; +AlCl3 + HCl 270, 406.Spectral and physicochemical properties of 3-O-α-L-rhamnopyranoside myricetin. Light yellow crystalline powder composition C 21 H 20 O 12 with so pl. 194-197 C; UV spectrum: λ max Et0H - 212, 260, 358; + NaOAc 268, 366; + NaOAc + H3BO3 260, 382; +AlCl3 278, 416; +AlCl3 + HCl 270, 406.
1H-ЯМР-спектр (300 МГц, DMSO-d6, δ, м.д., J/Гц): 12.68 (1Н, с, 5-ОН-группа), 9.23 (2Н, уш. с, 7-ОН-группа и 4'-ОН-группа), 6.88 (2Н, с, Н-2' и Н-6'), 6.36 (1H, д, 2.5 Гц, Н-8), 6.19 (1H, д, 2.5 Гц, Н-6), 5.20 (1H, д, 1.5 Гц, Н-1'' рамнозы), 3.1-5.0 (м, 4Н рамнозы), 0.84 (3H, д, 6 Гц, СН3 рамнозы). 1 H-NMR spectrum (300 MHz, DMSO-d 6 , δ, ppm, J/Hz): 12.68 (1H, s, 5-OH group), 9.23 (2H, br. s, 7- OH group and 4'-OH group), 6.88 (2H, s, H-2' and H-6'), 6.36 (1H, d, 2.5 Hz, H-8), 6.19 (1H, d, 2.5 Hz, H-6), 5.20 (1H, d, 1.5 Hz, H-1'' rhamnose), 3.1-5.0 (m, 4H rhamnose), 0.84 (3H, d, 6 Hz, CH 3 rhamnose).
13С-ЯМР спектр (126,76 МГц, ДМСО-d6, δС, м.д.): С-4 (177.85), С-7 (164.24), С-5 (161.37), С-4' (157.57), С-9 (156.49), С-2 и С-3 (145.83), С-3' и), С-5' (145.83), С-1' (119.70, C-2' и С-6' (108.00), С-10 (104.12), С-1'' рамнозы (102.00), С-8 (98.41), С-6 (94.30), С-2'(П6.21), С-3''(71.03), С-5'' (70.62), С-4'' (70.47), С-2'' (70.08), С-6'' (СН3) (17.57). 13 C-NMR spectrum (126.76 MHz, DMSO-d 6 , δ C , ppm): C-4 (177.85), C-7 (164.24), C-5 (161.37), C-4' (157.57), C-9 (156.49), C-2 and C-3 (145.83), C-3' and C-5' (145.83), C-1' (119.70, C-2' and C -6' (108.00), C-10 (104.12), C-1'' rhamnose (102.00), C-8 (98.41), C-6 (94.30), C-2'(P6.21), C- 3''(71.03), С-5'' (70.62), С-4'' (70.47), С-2'' (70.08), С-6'' (CH 3 ) (17.57).
Масс-спектр (HR-ESI-MS, 180°С, m/z): m/z 465.1016 [М+Н]+, m/z 487.0830 [M+Na]+, m/z 503.0560 [М+K]+.Mass spectrum (HR-ESI-MS, 180°C, m/z): m/z 465.1016 [M+H] + , m/z 487.0830 [M+Na] + , m/z 503.0560 [M+K] + .
3-О-α-L-рамнопиранозид мирицетина, полученный разработанным способом, исследовали на наличие нейтротропной активности.Myricetin 3-O-α-L-rhamnopyranoside obtained by the developed method was examined for the presence of neurotropic activity.
Исследования нейтротропной активности проводили на белых беспородных крысах обоего пола массой 200-220 г. Животные содержались в условиях вивария на обычном рационе при свободном доступе к воде. Крысы были разделены на 2 группы: контрольную и опытную. Каждая группа состояла из десяти животных. Исследуемый препарат (полученный мирицитрин) вводили внутрижелудочно через зонд в дозе 5 мг/кг. Контролем служила вода очищенная. Препарат вводили однократно на фоне аналогичной водной нагрузки, через 1 час после введения препарата проводили эксперимент (3). Исследование нейтротропной активности проводили с использованием теста Порсолта (4). При этом в течение пяти минут фиксировали индивидуальное время активных попыток животных выбраться из воды. Полученные данные обрабатывали статистически по критерию Манна-Уитни. Результаты исследования влияния на двигательную активность крыс в методике теста Просолта представлены в таблице 1 Приложения 2.Studies of neutrotropic activity were carried out on outbred rats of both sexes weighing 200-220 g. The animals were kept under vivarium conditions on a normal diet with free access to water. Rats were divided into 2 groups: control and experimental. Each group consisted of ten animals. The study drug (obtained myricitrin) was administered intragastrically through a tube at a dose of 5 mg/kg. Purified water served as control. The drug was administered once against the background of a similar water load, an experiment was carried out 1 hour after the drug administration (3). Neutrotropic activity was studied using the Porsolt test (4). At the same time, the individual time of active attempts of animals to get out of the water was recorded for five minutes. The data obtained were processed statistically according to the Mann-Whitney test. The results of the study of the effect on the motor activity of rats in the Prosolt test method are presented in Table 1 of Appendix 2.
Исходя из полученных результатов можно сделать вывод, что 3-О-α-L-рамнопиранозид мирицетина в дозе 5 мг/кг при однократном внутрижелудочном введении способствовал понижению двигательной активности животных в опытной группе на 46% по отношению к водному контролю.Based on the results obtained, it can be concluded that myricetin 3-O-α-L-rhamnopyranoside at a dose of 5 mg/kg with a single intragastric administration contributed to a decrease in the motor activity of animals in the experimental group by 46% compared to the water control.
Таким образом, предлагаемый способ получения мирицитрина (3-О-α-L-рамнопиранозид мирицетина) из коры ореха черного методом колоночной хроматографии разработан впервые для данного вида сырья и обладает следующими преимуществами:Thus, the proposed method for producing myricitrin (3-O-α-L-myricetin rhamnopyranoside) from black walnut bark by column chromatography was developed for the first time for this type of raw material and has the following advantages:
1. Разработанный способ позволяет получать высокий выход вещества мирицитрина (3-О-α-L-рамнопиранозид мирицетина) - 1,7% вместо 0,009% у аналога (2), то есть в 140 раз выше по сравнению с аналогом. В аналоге (3) и прототипе (4) отсутствуют указания на выход указанного соединения.1. The developed method allows to obtain a high yield of myricitrin substance (3-O-α-L-rhamnopyranoside myricetin) - 1.7% instead of 0.009% for analogue (2), that is, 140 times higher compared to analogue. In analogue (3) and prototype (4) there is no indication of the output of the specified connection.
2. В представленном прототипе (4) полученная растительная субстанция представляет собой сумму веществ. В данном источнике не указаны способы разделения и отдельного получения мирицитрина (3-О-α-L-рамнопиранозида мирицетина) высокой степени чистоты.2. In the presented prototype (4) the resulting plant substance is the sum of the substances. This source does not indicate methods for separating and separately obtaining myricitrin (3-O-α-L-rhamnopyranoside myricetin) of high purity.
3. Разработанный способ менее трудоемок, поскольку включает однократную хроматографическую очистку: на силикагеле с использование элюента, представляющего собой смесь двух растворителей (хлороформ и этиловый спирт), вместо трехкратной хроматографической очистки в прототипе с использованием различных методов (колоночная хроматография и полупрепаративная жидкостная хроматография), сорбентов и элюента, представляющего собой смесь сложных систем растворителей (4).3. The developed method is less laborious, since it includes a single chromatographic purification: on silica gel using an eluent that is a mixture of two solvents (chloroform and ethyl alcohol), instead of a triple chromatographic purification in the prototype using various methods (column chromatography and semi-preparative liquid chromatography), sorbents and eluent, which is a mixture of complex solvent systems (4).
4. Целевой продукт мирицитрин (3-О-α-L-рамнопиранозид мирицетина), полученный разработанным способом, обладает нейтротропной активностью.4. The target product myricitrin (3-O-α-L-rhamnopyranoside myricetin), obtained by the developed method, has a neutrotropic activity.
ИСТОЧНИКИ ИНФОРМАЦИИ:SOURCES OF INFORMATION:
1. Куркин В.А. Фармакогнозия: Учебник для студентов фармац. вузов - Изд. 4-е, перераб. и доп. - Самара: ООО «Офорт», ФГБОУ ВО СамГМУ Минздрава России. 2019. - 1278 с. 1. Kurkin V.A. Pharmacognosy: A textbook for students of pharmacy. universities - Ed. 4th, revised. and additional - Samara: Ofort LLC, Samara State Medical University of the Ministry of Health of Russia. 2019. - 1278 p.
2. Na Min Kyun, Yoo Jae-Kuk, Lee Chan Bog, Kim Jin Pyo, Lim Gon Hyeok, Min Dong I. Extract of Cercis chinensis having anti-oxidant activity and anti-aging activity, and cosmetical composition containing the extract for anti-oxidation, skin-aging protection and wrinkle improvement. Patent №US 20080187610, A61K 36/48; application 15.02.2008; publication 07.08.2008. 30 p.2. Na Min Kyun, Yoo Jae-Kuk, Lee Chan Bog, Kim Jin Pyo, Lim Gon Hyeok, Min Dong I. Extract of Cercis chinensis having anti-oxidant activity and anti-aging activity, and cosmetical composition containing the extract for anti -oxidation, skin-aging protection and wrinkle improvement. Patent No. US 20080187610, A61K 36/48; application February 15, 2008; publication 07.08.2008. 30p.
3. Nurkenov T.T., Askarova S.N., Zhussupova G.E., Olzhayev F.S., Tsoy A.K., Umbayev B.A., Shalakhmetova T.M. Plant substance extracted from Siberian statice roots and having neuroprotective activity. Patent №WO/2020/197370, A61K 36/185; application 02.03.2020; publication 01.10.2020. 21 p.3. Nurkenov T.T., Askarova S.N., Zhussupova G.E., Olzhayev F.S., Tsoy A.K., Umbayev B.A., Shalakhmetova T.M. Plant substance extracted from Siberian statice roots and having neuroprotective activity. Patent No. WO/2020/197370, A61K 36/185; application 03/02/2020; publication 01.10.2020. 21p.
4. Xu F., Guan H., Li G. et al. LC Method for analysis of three flavonols in rat plasma and urine after oral administration of Polygonum aviculare extract. Chroma, 2009; 69: 1251. https://doi.org/10.1365/s10337-009-1088-x.4. Xu F., Guan H., Li G. et al. LC Method for analysis of three flavonols in rat plasma and urine after oral administration of Polygonum aviculare extract. Chroma, 2009; 69: 1251. https://doi.org/10.1365/s10337-009-1088-x.
5. Зайцева E.H., Зайцев A.P., Дубищев A.B. Устройство для введения водной нагрузки лабораторным животным. Патент на ПМ 115651 Рос. Федерация. №2011138631/13; заявл. 20.09.11; опубл. 10.05.12, Бюл. №13. 2 с. Хабриев Р.У.5. Zaitseva E.H., Zaitsev A.P., Dubischev A.V. Device for introducing water load to laboratory animals. Patent for PM 115651 Ros. Federation. No. 2011138631/13; dec. 09/20/11; publ. 10.05.12, Bull. No. 13. 2 s. Khabriev R.U.
6. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / под ред. Р.У. Хабриева. - 2-е изд., перераб. и доп. М.: ОАО Издательство «Медицина», 2005. - 832 с.6. Guide to the experimental (preclinical) study of new pharmacological substances / ed. RU. Khabrieva. - 2nd ed., revised. and additional M.: JSC Publishing House "Medicine", 2005. - 832 p.
Claims (1)
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2776898C1 true RU2776898C1 (en) | 2022-07-28 |
Family
ID=
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1750808B1 (en) * | 2004-05-18 | 2011-02-09 | Bright Future Pharmaceutical Laboratories Limited | Myricitrin compounds for treating sleeping disorders |
| EA201500407A1 (en) * | 2014-12-25 | 2015-11-30 | Азербайджанский Медицинский Университет | METHOD OF OBTAINING FLAVONOIDS THAT HAVE BIOLOGICAL ACTIVITY |
| WO2020197370A2 (en) * | 2019-03-06 | 2020-10-01 | Туленды Тулешевич НУРКЕНОВ | Use of a plant substance extracted from siberian statice roots as an agent having neuroprotective activity |
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1750808B1 (en) * | 2004-05-18 | 2011-02-09 | Bright Future Pharmaceutical Laboratories Limited | Myricitrin compounds for treating sleeping disorders |
| EA201500407A1 (en) * | 2014-12-25 | 2015-11-30 | Азербайджанский Медицинский Университет | METHOD OF OBTAINING FLAVONOIDS THAT HAVE BIOLOGICAL ACTIVITY |
| WO2020197370A2 (en) * | 2019-03-06 | 2020-10-01 | Туленды Тулешевич НУРКЕНОВ | Use of a plant substance extracted from siberian statice roots as an agent having neuroprotective activity |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| XU F. et al. LC Method for analysis of three flavonols in rat plasma and urine after oral administration of Polygonum aviculare extract. Chroma, 2009; 69: 1251. https://doi.org/10.1365/s10337-009-1088-x. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN110511255B (en) | Novel iridoid glycoside compound and preparation method and application thereof | |
| KR20080016269A (en) | Manufacturing process of high purity honokiol, magnolol and extract | |
| KR102404533B1 (en) | How to isolate 18 ingredients from traditional herbal medicine compositions | |
| CN101899082B (en) | Triterpenoid saponin compound, application and preparation method | |
| Musa et al. | In silico study, protein kinase inhibition and antiproliferative potential of flavonoids isolated from Bassia eriophora (Schrad.) growing in KSA | |
| CN109879919A (en) | A method of three kinds of flavonoid glycosides of separation preparation from semen ziziphi spinosae | |
| KR101080648B1 (en) | A method for isolating and producing highly-concentrated Eupatilin and Jaceosidine from the extract of Artemisia species by using Centrifugal Partition Chromatography | |
| AU2007266668B2 (en) | Treatment of erectile dysfunction and libido enhancement | |
| CN111018877B (en) | Sesquiterpene derivative in elecampane inula root, preparation method and application thereof | |
| RU2776898C1 (en) | Method for producing myricitrin from the bark of eastern black walnut, exhibiting neurotropic activity | |
| CN101190259A (en) | Southern magnolia total lactone extract and preparation method and application thereof | |
| CN108484428A (en) | A kind of amides compound in matrimony vine and amides compound component and preparation method thereof | |
| CN109180632B (en) | A method for preparing compound separated from radix Tripterygii Wilfordii | |
| US11147848B2 (en) | Extracts and isolated compounds from Cakile arabica for treatment of ulcer | |
| Peng et al. | A comparative study of chromatographic methods for separating chemical compounds from Spiranthes australis (R. Brown) Lindl roots | |
| RU2677284C1 (en) | Method of obtaining substance with diuretic and antidepressant activity | |
| RU2739191C1 (en) | Method for producing spiraeoside having antidepressant activity | |
| CN105777839B (en) | A kind of antitumoral compounds, its extracting method and its application | |
| WO2012061954A1 (en) | Preparative method and use of zingiberensis saponin extracted from dioscorea zingiberensis with antitumor activity | |
| RU2804299C1 (en) | Method of obtaining oreganol a, having nephrotropic and neurotropic activity | |
| CN114957272B (en) | Chromane dimer and preparation method and application thereof | |
| CN113999245B (en) | Natural compound with anti-pancreatic cancer activity and separation method and application thereof | |
| CN113698380B (en) | Lignan compound and preparation method and application thereof | |
| CN108530505A (en) | A kind of flavonoid glycoside compound and its preparation method and application | |
| CN112876366B (en) | Broom-like isoesterasum, preparation method and application thereof, and pharmaceutical composition |