RU2776241C2

RU2776241C2 - Лечение и ингибирование воспалительных заболеваний легких у пациентов с аллелями риска в генах, кодирующих il33 и il1rl1

Info

Publication number: RU2776241C2
Application number: RU2019136253A
Authority: RU
Inventors: Шэннон БРУС; Шейн МАККАРТИ; Арис БАРАС; Фредерик ДЬЮИ; Омри ГОТТСМАН
Original assignee: Ридженерон Фармасьютикалз, Инк.
Priority date: 2017-04-13
Filing date: 2018-03-20
Publication date: 2022-07-15

Abstract

Изобретение относится к биотехнологии, в частности способам для лечения или ингибирования эозинофильной астмы, эозинофильной ХОБЛ, эозинофильного СПАХ и полипов носовой полости у субъекта, имеющего один или большее количество аллелей риска в интронном варианте rs1420101 IL1RL1, в варианте rs1342326 IL33, в обоих или в их вариантах в неравновесном сцеплении. 5 н. и 67 з.п. ф-лы, 9 ил., 9 табл., 2 пр.

Description

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Данное изобретение относится в целом к области точной медицины. Более конкретно, изобретение относится к выявлению аллелей риска в генах, кодирующих IL33 и IL1RL1, причем указанные аллели риска могут быть использованы для разделения/стратификации пациентов с воспалительными заболеваниями легких как имеющих высокий риск развития одного или большего количества таких патологий и их эозинофильных подгрупп.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

В описании цитируются различные публикации, включая патенты, опубликованные заявки, регистрационные номера, технические статьи и научные статьи. Каждая из таких цитируемых публикаций включена в данный документ посредством ссылки в полном объеме и для всех целей.

Астма и хроническая обструктивная болезнь легких (ХОБЛ) являются широко распространенными обструктивными заболеваниями легких с существенной неудовлетворенной клинической потребностью и значительным диагностическим совпадением, и существует растущий интерес к пересечению данных патологий, называемому синдромом перекрывающихся астмы-ХОБЛ (СПАХ). Это уже давняя дискуссия о том, имеют ли эти два заболевания общую этиологию (так называемая «голландская гипотеза») или имеют независимые механистические причины (так называемая «британская гипотеза»). Несмотря на недавний прогресс в выяснении генетического вклада в общий совокупный риск заболеваний, включая обструктивные болезни легких, нет точных генетических данных, связывающих астму с ХОБЛ.

Полногеномные исследования ассоциаций (ПГИА) выявили общие генетические варианты интерлейкина-33 (IL33) и/или IL1RL1, которые связаны с астмой. IL33, провоспалительный цитокин и член семейства цитокинов интерлейкина-1 (IL-1), экспрессируется в подгруппах клеток в барьерных тканях, включая эпителий легкого. IL33 передает сигналы через гетеродимерный рецепторный комплекс, состоящий из IL33-специфического рецептора IL1RL1 (также известного как ST2 или IL33R) и корецептора IL-1RAcP, общего для нескольких рецепторов семейства IL-1.

В поврежденных тканях ранее изолированный IL33 пассивно высвобождается во внеклеточный компартмент некротическими клетками и функционирует как эндогенный «сигнал опасности» (алармин), который активирует воспалительные и восстановительные пути. Сигаретный дым индуцирует экспрессию IL33 в эпителиальных клетках легких у мышей, а экспрессия IL33 повышается в эпителии бронхов как у пациентов с астмой, так и у пациентов с ХОБЛ. При состояниях заболевания, в которых воспалительный инфильтрат и воспалительные цитокины уже присутствуют, пул IL33-чувствительных клеток увеличивается, и передача сигналов IL33 дополнительно усиливает иммунные ответы, что приводит к патологическому воспалению и преувеличенным иммунным реакциям, потенциально способствуя развитию хронических воспалительных заболеваний, таких как ХОБЛ.

Существует также синдром пересечения астмы и ХОБЛ (СПАХ), характеризующийся симптомами, общими как для астмы, так и для ХОБЛ. Тем не менее, клинические трудности остаются в способности диагностировать СПАХ, учитывая трудности в отделении астмы от ХОБЛ из-за общих перекрывающихся признаков.

Проблемы с лечением астмы, ХОБЛ и СПАХ также остаются, при этом резистентность к кортикостероидам (стандарт медицинской помощи) довольно распространена. Кроме того, другие виды лечения, такие как терапия IL-5, неэффективны для эозинофильных подгрупп астмы и ХОБЛ.

Соответственно, в данной области техники остается необходимость различать астму, ХОБЛ и СПАХ, а также более точно идентифицировать пациентов, которые имеют эозинофильные подгруппы данных нарушений. Правильный диагноз может лучше направить терапевтический режим и улучшить результаты лечения пациента.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В первом аспекте изобретения, способ лечения или ингибирования эозинофильной астмы включает в себя введение антагониста IL33 или введение антагониста IL33 и антагониста IL-4R субъекту, имеющему один или большее количество аллелей риска, связанных с эозинофильной астмой, в интронном варианте rs1420101 IL1RL1 (SEQ ID NO: 357) или его варианте в неравновесном сцеплении, в варианте rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358) или его варианте в неравновесном сцеплении, или как в интронном варианте rs1420101 IL1RL1 (SEQ ID NO: 357) или его варианте в неравновесном сцеплении, так и в варианте rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358) или его варианте в неравновесном сцеплении. Введение антагониста IL-33 и/или антагониста IL-4R является таковым, что эозинофильная астма лечится или ингибируется у субъекта.

В втором аспекте изобретения, способ лечения или ингибирования эозинофильной хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ) включает в себя введение антагониста IL33 или введение антагониста IL33 и антагониста IL-4R субъекту, имеющему один или большее количество аллелей риска, связанных с эозинофильной ХОБЛ, в интронном варианте rs1420101 IL1RL1 (SEQ ID NO: 357) или его варианте в неравновесном сцеплении, в варианте rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358) или его варианте в неравновесном сцеплении, или как в интронном варианте rs1420101 IL1RL1 (SEQ ID NO: 357) или его варианте в неравновесном сцеплении, так и в варианте rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358) или его варианте в неравновесном сцеплении. Введение антагониста IL33 и/или антагониста IL-4R является таковым, что эозинофильная ХОБЛ лечится или ингибируется у субъекта.

В третьем аспекте изобретения, предложен способ лечения или ингибирования синдрома перекрывающихся эозинофильных астмы-хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ) (СПАХ), включающий в себя введение антагониста IL33 или введение антагониста IL33 и антагониста IL-4R субъекту, имеющему один или большее количество аллелей риска, связанных с эозинофильной астмой, в интронном варианте rs1420101 IL1RL1 (SEQ ID NO: 357) или его варианте в неравновесном сцеплении, в варианте rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358) или его варианте в неравновесном сцеплении, или как в интронном варианте rs1420101 IL1RL1 (SEQ ID NO: 357) или его варианте в неравновесном сцеплении, так и в варианте rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358) или его варианте в неравновесном сцеплении. Введение антагониста IL-33 и/или антагониста IL-4R является таковым, что эозинофильная ХОБЛ лечится или ингибируется у субъекта.

В четвертом аспекте изобретения, способ лечения или ингибирования полипов носовой полости включает в себя введение антагониста IL33 или введение антагониста IL33 и антагониста IL-4R субъекту, имеющему один или большее количество аллелей риска, связанных с полипами носовой полости, в интронном варианте rs1420101 IL1RL1 (SEQ ID NO: 357) или его варианте в неравновесном сцеплении, в варианте rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358) или его варианте в неравновесном сцеплении, или как в интронном варианте rs1420101 IL1RL1 (SEQ ID NO: 357) или его варианте в неравновесном сцеплении, так и в варианте rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358) или его варианте в неравновесном сцеплении. Введение антагониста IL33 и/или антагониста IL-4R является таковым, что полипы носовой полости лечатся или ингибируются у субъекта.

В пятом аспекте изобретения, способ оценки риска развития эозинофильной астмы, эозинофильной хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ) или синдрома перекрывающихся эозинофильных астмы-ХОБЛ (СПАХ) включает в себя стадии:

(A) обнаружение одного или большего количества аллелей риска, связанных с эозинофильной астмой, эозинофильной ХОБЛ или эозинофильным СПАХ в интронном варианте rs1420101 IL1RL1 (SEQ ID NO: 357) или его варианте в неравновесном сцеплении, в варианте rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358) или его варианте в неравновесном сцеплении, или как в интронном варианте rs1420101 IL1RL1 (SEQ ID NO: 357) или его варианте в неравновесном сцеплении, так и в варианте rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358) или его варианте в неравновесном сцеплении в образце, полученном из субъекта;

(B) (i) присваивание балла 1 риска субъекту, когда у субъекта имеется аллель риска в интронном варианте rs1420101 IL1RL1 (SEQ ID NO: 357) или его варианте в неравновесном сцеплении в одном из гомологов хромосомы 2, или аллель риска в варианте rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358) или его варианте в неравновесном сцеплении в одном из гомологов хромосомы 9,

(B) (ii) присваивание балла 2 риска субъекту, когда у субъекта имеется аллель риска в интронном варианте rs1420101 IL1RL1 (SEQ ID NO: 357) или его варианте в неравновесном сцеплении в обоих гомологах хромосомы 2, когда у субъекта имеется аллель риска в варианте rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358) или его варианте в неравновесном сцеплении в обоих гомологах хромосомы 9, или когда у субъекта имеется аллель риска в интронном варианте rs1420101 IL1RL1 (SEQ ID NO: 357) или его варианте в неравновесном сцеплении в одном из гомологов хромосомы 2 и аллель риска в варианте rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358) или его варианте в неравновесном сцеплении в одном из гомологов хромосомы 9,

(B) (iii) присваивание балла 3 риска субъекту, когда у субъекта имеется аллель риска в интронном варианте rs1420101 IL1RL1 (SEQ ID NO: 357) или его варианте в неравновесном сцеплении в обоих гомологах хромосомы 2 и аллель риска в варианте rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358) или его варианте в неравновесном сцепление в одном из гомологов хромосомы 9, или когда у субъекта имеется аллель риска в интронном варианте rs1420101 IL1RL1 (SEQ ID NO: 357) или его варианте в неравновесном сцеплении в одном из гомологов хромосомы 2 и аллель риска в варианте rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358) или его варианте в неравновесном сцепление в обоих гомологах хромосомы 9, или

(B) (iv) присваивание балла 4 риска субъекту, когда у субъекта имеется аллель риска в интронном варианте rs1420101 IL1RL1 (SEQ ID NO: 357) или его варианте в неравновесном сцеплении в обоих гомологах хромосомы 2 и аллель риска в варианте rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358) или его варианте в неравновесном сцеплении в обоих гомологах хромосомы 9; и

(C) определение категории риска развития эозинофильной астмы, эозинофильной ХОБЛ или эозинофильного СПАХ у субъекта, причем балл 1 риска указывает на то, что субъект подвержен риску развития высокоэозинофильной подгруппы эозинофильной астмы, высокоэозинофильной подгруппы эозинофильной ХОБЛ или высокоэозинофильной подгрупы эозинофильного СПАХ, балл 2 риска указывает на то, что субъект подвержен повышенному риску развития высокоэозинофильной подгруппы эозинофильной астмы, высокоэозинофильнй подгруппы эозинофильной ХОБЛ или высокоэозинофильной подгруппы эозинофильного СПАХ, балл 3 риска указывает, что субъекта подвержен высокому риску развития высокоэозинофильной подгруппы эозинофильной астмы, высокоэозинофильной подгруппы эозинофильной ХОБЛ или высокоэозинофильной подгрупы эозинофильного СПАХ, а балл 4 риска указывает на то, что субъект подвержен очень высокому риску развития высокоэозинофильной подгруппы эозинофильной астмы, высокоэозинофильной подгруппы эозинофильной ХОБЛ или высокоэозинофильной подгрупы эозинофильного СПАХ. Способ может дополнительно включать в себя лечение или ингибирование одного или большего количества из: эозинофильной астмы, эозинофильной ХОБЛ или эозинофильного СПАХ, включая их высокоэозинофильные подгруппы, у субъекта путем введения субъекту антагониста IL33 или антагониста IL33 и антагониста IL-4R.

В шестом аспекте изобретения, антагонист IL33 или комбинация антагониста IL33 и антагониста IL-4R предназначены для применения в лечении или ингибировании или в производстве лекарственного средства для лечения или ингибирования любого из: эозинофильной астмы, эозинофильной хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ), синдрома перекрывающихся эозинофильных астмы-хронической обструктивной болезни легких (СПАХ), высокоэозинофильной эозинофильной астмы, высокоэозинофильной эозинофильной ХОБЛ, высокоэозинофильного эозинофильного СПАХ, или полипов носовой полости, когда пациент с таковыми имеет один или большее количество аллелей риска, связанных с эозинофильной астмой, эозинофильной ХОБЛ или эозинофильным СПАХ в интронном варианте rs1420101 IL1RL1 (SEQ ID NO: 357) или его варианте в неравновесном сцеплении, в варианте rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358) или его варианте в неравновесном сцеплении, или как в интронном варианте rs1420101 IL1RL1 (SEQ ID NO: 357) или его варианте в неравновесном сцеплении, так и в варианте rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358) или его варианте в неравновесном сцеплении.

В соответствии с любым из данных аспектов, субъект может иметь по меньшей мере один аллель риска, связанный с эозинофильной астмой, в интронном варианте rs1420101 IL1RL1 (SEQ ID NO: 357) или его варианте в неравновесном сцеплении, может иметь два аллеля риска, связанных с эозинофильной астмой, в интронном варианте rs1420101 IL1RL1 (SEQ ID NO: 357) или его варианте в неравновесном сцеплении, может иметь по меньшей мере один аллель риска, связанный с эозинофильной астмой, в варианте rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358) или его варианте в неравновесном сцеплении, или может иметь два аллеля риска, связанных с эозинофильной астмой, в варианте rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358) или его варианте в неравновесном сцеплении, и может дополнительно иметь по меньшей мере один аллель риска, связанный с эозинофильной астмой, в варианте rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358) или его варианте в неравновесном сцеплении, и/или, может дополнительно иметь два аллеля риска, связанных с эозинофильной астмой, в варианте rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358) или его варианте в неравновесном сцеплении.

В соответствии с любым из данных аспектов, способ может включать в себя или может использоваться для введения антагониста IL33 субъекту, или способ может включать в себя или может использоваться для введения антагониста IL33 и антагониста IL-4R субъекту. Антагонист IL33 может содержать ловушку IL33 или антитело, которое специфически связывается с IL33. Антагонист IL-4R может содержать антитело, которое специфически связывается с IL-4R.

В соответствии с любым из данных аспектов, ловушка IL33 может содержать первый связывающий IL33 домен, содержащий связывающую IL33 часть IL1RL1, и второй связывающий IL33 домен, содержащий внеклеточную часть IL-1RAcP. В соответствии с любым из данных аспектов, антитело или его антиген-связывающий фрагмент, который специфически связывается с IL33, может содержать домены H1, H2 и H3 SEQ ID NO: 274 и домены L1, L2 и L3 SEQ ID NO: 282. В соответствии с любым из данных аспектов, антитело или его антиген-связывающий фрагмент, который специфически связывается с IL-4R, может содержать домены H1, H2 и H3 SEQ ID NO: 337 и домены L1, L2 и L3 SEQ ID NO: 338.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

На Фиг. 1 (панели A, B, C и D) продемонстрированы четыре иллюстративные компоновки отдельных компонентов антагонистов IL33 относительно друг друга. На панели A продемонстрирована компоновка, в которой первый IL33-связывающий домен (D1) присоединен к N-концу первого мультимеризирующего домена (M1), а второй IL33-связывающий домен (D2) присоединен к N-концу второго мультимеризующего домена (M2). D1 продемонстрирован в виде белого прямоугольника, а D2 - в виде черного прямоугольника, что указывает на то, что D1 и D2 получены из разных белков, связывающих IL33. На панели В продемонстрирована компоновка, в которой первый IL33-связывающий домен (D1) присоединен к N-концу первого мультимеризирующего домена (M1), а второй IL33-связывающий домен (D2) присоединен к С-концу второго мультимеризующего домена (M2). D1 продемонстрирован в виде белого прямоугольника, а D2 - в виде черного прямоугольника, что указывает на то, что D1 и D2 получены из разных белков, связывающих IL33. На панелях C и D продемонстрированы компоновки, содержащие четыре IL33-связывающих домена, D1, D2, D3 и D4. В данных компоновках D3-D1-M1 и D4-D2-M2 присоединены тандемно, причем D3 присоединен к N-концу D1, а D1 присоединен к N-концу M1; и D4 присоединен к N-концу D2, а D2 присоединен к N-концу M2. На панели C, D3 и D4 идентичны или по существу идентичны друг другу, а D1 и D2 идентичны или по существу идентичны друг другу. На панели D, D1 и D4 идентичны или по существу идентичны друг другу, а D3 и D2 идентичны или по существу идентичны друг другу.

На Фиг. 2 (панели A, B, C и D) продемонстрированы связи между rs1420101 (IL1RL1, также известный как ST2), s1342326 (IL33) и rs146597587 (IL33-pLoF) и (панель A) количеством эозинофилов, (панель B) log₁₀ количеством эозинофилов. Также продемонстрированы связи между общей нагрузкой аллелей риска rs1420101 и rs1342326 и количеством эозинофилов (Панель C), log₁₀ количеством эозинофилов (Панель D). Размеры эффекта и р-значения для количества эозинофилов и log₁₀ количества эозинофилов были рассчитаны с использованием линейной регрессии с поправкой на возраст, возраст², пол, статус курения и основные компоненты происхождения. P-значения и величины эффекта/отношение шансов были оценены для индивидуальных показателей; в каждом случае сравнение проводилось с индивидами с аллелями нулевого риска. Кроме того, продемонстрированы р-значения общих аллельных эффектов.

На Фиг. 3 (панели A, B и C) продемонстрированы связи между rs1420101 (IL1RL1, также известный как ST2), s1342326 (IL33) и rs146597587 (IL33-pLoF) и астмой (панель A), подгруппой высокоэозинофильной астмы (панель B), и подгруппой низкоэозинофильной астмы (панель С). Отношения шансов для болезни были расчитаны с использованием линейной регрессии с поправкой на возраст, возраст², пол, статус курения и основные компоненты происхождения.

На Фиг. 4 (панели A, B и C) продемонстрированы связи между rs1420101 (IL1RL1, также известный как ST2), s1342326 (IL33) и rs146597587 (IL33-pLoF) и ХОБЛ (панель A), подгруппой высокоэозинофильной ХОБЛ (панель B), и подгруппой низкоэозинофильной ХОБЛ (панель С). Отношения шансов для болезни были расчитаны с использованием линейной регрессии с поправкой на возраст, возраст², пол, статус курения и основные компоненты происхождения.

На Фиг. 5 (панели A, B и C) продемонстрированы связи между rs1420101 (IL1RL1, также известный как ST2), s1342326 (IL33) и rs146597587 (IL33-pLoF) и СПАХ (панель A), подгруппой высокоэозинофильного СПАХ (панель B), и подгруппой низкоэозинофильного СПАХ (панель С). Отношения шансов для болезни были расчитаны с использованием линейной регрессии с поправкой на возраст, возраст², пол, статус курения и основные компоненты происхождения.

На Фиг. 6 (панели A, B и C) продемонстрированы связи генетического показателя (общая нагрузка аллелей риска rs1420101 и rs1342326) и астмы (панель A), ХОБЛ (панель B), и СПАХ (панель С). P-значения отношения шансов были оценены для отдельных показателей; в каждом случае сравнение проводилось с индивидами с аллелями нулевого риска. Кроме того, продемонстрированы р-значения анализа общей тенденции.

На Фиг. 7 (панели A, B и C) продемонстрированы связи генетического показателя (общая нагрузка аллелей риска rs1420101 и rs1342326) и высоко- и низкоэозинофильной астмы (панель A), высоко- и низкоэозинофильной ХОБЛ (панель B), и высоко- и низкоэозинофильного СПАХ (панель С). P-значения отношения шансов были оценены для отдельных показателей; в каждом случае сравнение проводилось с индивидами с аллелями нулевого риска. Кроме того, продемонстрированы р-значения анализа общей тенденции.

На Фиг. 8 (панели A, B, C и D) продемонстрированы клинические характеристики участников исследования, стратифицированных по реагенту захвата VCRome (панель A) и xGEN (панель B), и платформе чипа OMNI (панель C) и GSA (панель D).

На Фиг. 9 (панели A и B) продемонстрированы связи между rs1420101 (IL1RL1, также известный как ST2), s1342326 (IL33), rs146597587 (IL33-pLoF), а также генетическим показателем (общая нагрузка аллелей риска rs1420101 и s1342326) и аллергическим ринитом (панель A), полипами носовой полости (панель B). Отношения шансов для болезни были расчитаны с использованием линейной регрессии с поправкой на возраст, возраст², пол, статус курения и основные компоненты происхождения. Чтобы проанализировать нагрузку распространенных вариантов риска, были оценены p-значения и отношения шансов для каждого отдельного показателя; в каждом случае сравнение проводилось с индивидами с аллелями нулевого риска. Кроме того, продемонстрированы р-значения анализа общей тенденции.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Различные термины, относящиеся к аспектам изобретения, используются в описании и формуле изобретения. Такие термины должны иметь свое обычное значение в данной области техники, если не указано иное. Другие специально определенные термины должны истолковываться таким образом, чтобы соответствовать определению, приведенному в данном документе.

Используемые в данном документе формы единственного числа существительных включают в себя также формы существительных в их множественном числе, если прямо не указано иное.

Термины «субъект» и «пациент» используются взаимозаменяемо и включают в себя любое животное. Млекопитающие являются предпочтительными, включая домашних животных (например, кошка, собака) и сельскохозяйственных млекопитающих (например, свинья, лошадь, корова), а также грызунов, включая мышей, кроликов и крыс, морских свинок и других грызунов. Приматы, отличные от человека, более предпочтительны, а люди очень предпочтительны.

Термин «выделенный» означает изъятый и/или преобразованный из естественной среды человеком.

«Аллель риска» включает в себя альтернативные полиморфизмы в определенной позиции, которые связаны с риском развития заболевания, нарушения или патологии.

«Неравновесное сцепление» относится к неслучайной связи аллелей в двух или большем количестве локусов.

В соответствии с изобретением наблюдалось, что однонуклеотидные полиморфизмы в rs1420101 IL1R1 (SEQ ID NO: 357) и rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358) связаны с повышенным риском развития астмы, а также с высокоэозинофильными подгруппами астмы, ХОБЛ и СПАХ. Кроме того, было отмечено, что индивиды, несущие большую нагрузку таких аллелей риска по обеим локусам, имеют сопутствующий больший риск заболевания, а гетерозиготные носители редких вариантов pLOF в IL33 имели более низкое среднее количество эозинофилов в течение жизни и склонности, отражающие снижение риска астмы, также как и склонности, отражающие снижение риска высокоэозинофильных подгрупп астмы, ХОБЛ и СПАХ. Считается, что до этого не было обнаружено связи между генетическими вариантами пути IL33 и ХОБЛ, и, дополнительно считается, что не было никаких сообщений о генетических связях между астмой и ХОБЛ, или о генетических связях между путем IL33 и риском возникновения высокоэозинофильных подгрупп астмы, ХОБЛ и СПАХ. Кроме того, было отмечено, что однонуклеотидные полиморфизмы в rs1420101 IL1R1 и rs1342326 IL33, рассматриваемые по отдельности и в совокупности, связаны с повышенным риском возникновения полипов в носовой полости и аллергического ринита. Эти данные указывают на роль блокады интерлейкина-33 в лечении высокоэозинофильных форм обструктивных заболеваний легких, таких как астма, ХОБЛ и СПАХ, а также других заболеваний верхних дыхательных путей, таких как полипы носовой полости и их высокоэозинофильные подгруппы. Соответственно, в изобретение раскрыты способы идентификации риска, диагностики, лечения и ингибирования астмы, ХОБЛ и СПАХ, особенно их высокоэозинофильных подгруп.

В первом аспекте, изобретение раскрывает способы оценки риска развития воспалительного заболевания легких. Воспалительное заболевание легких может быть одним или большим количеством из астмы, ХОБЛ, СПАХ или полипов носовой полости. Астма может быть эозинофильной астмой или высокоэозинофильной эозинофильной астмой. ХОБЛ может быть эозинофильной ХОБЛ или высокоэозинофильной эозинофильной ХОБЛ. СПАХ может быть эозинофильным СПАХ или высокоэозинофильным эозинофильным СПАХ. В целом, как правило, способы включают в себя обнаружение одного или большего количества аллелей риска, связанных с риском развития таких воспалительных заболеваний легких.

В некоторых вариантах осуществления, способ включает в себя обнаружение одного или большего количества аллелей риска, связанных с эозинофильной астмой, эозинофильной ХОБЛ или эозинофильным СПАХ или полипами в носовой полости, в интронном варианте rs1420101 IL1RL1 (SEQ ID NO: 357) или его варианте в неравновесном сцеплении, в варианте rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358) или его варианте в неравновесном сцеплении, или как в интронном варианте rs1420101 IL1RL1 (SEQ ID NO: 357) или его варианте в неравновесном сцеплении, так и в варианте rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358) или его варианте в неравновесном сцеплении в образце, полученном из субъекта, присваивая балл 1 риска субъекту, когда у субъекта имеется аллель риска в интронном варианте rs1420101 IL1RL1 (SEQ ID NO: 357) или его варианте в неравновесном сцеплении в одном из гомологов хромосомы 2, или аллель риска в варианте rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358) или его варианте в неравновесном сцеплении в одном из гомологов хромосомы 9, присваивая балл 2 риска субъекту, когда у субъекта имеется аллель риска в интронном варианте rs1420101 IL1RL1 (SEQ ID NO: 357) или его варианте в неравновесном сцеплении в обоих гомологах хромосомы 2, когда у субъекта имеется аллель риска в варианте rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358) или его варианте в неравновесном сцепление в обоих гомологах хромосомы 9, или когда у субъекта имеется аллель риска в интронном варианте rs1420101 IL1RL1 (SEQ ID NO: 357) или его варианте в неравновесном сцеплении в одном из гомологов хромосомы 2 и аллель риска в варианте rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358) или его варианте в неравновесном сцеплении в одном из гомологов хромосомы 9, присваивая балл 3 риска субъекту, когда у субъекта имеется аллель риска в интронном варианте rs1420101 IL1RL1 (SEQ ID NO: 357) или его варианте в неравновесном сцеплении в обоих гомологах хромосомы 2 и аллель риска в варианте rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358) или его варианте в неравновесном сцеплении в одном из гомологов хромосомы 9, или когда у субъекта имеется аллель риска в интронном варианте rs1420101 IL1RL1 (SEQ ID NO: 357) или его варианте в неравновесном сцеплении в одном из гомологов хромосомы 2 и аллель риска в варианте rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358) или его варианте в неравновесном сцеплении в обоих гомологах хромосомы 9, или присваивая балл 4 риска субъекту, когда у субъекта имеется аллель риска в интронном варианте rs1420101 IL1RL1 (SEQ ID NO: 357) или его варианте в неравновесном сцеплении в обоих гомологах хромосомы 2 и аллель риска в варианте rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358) или его варианте в неравновесном сцеплении в обоих гомологах хромосомы 9; и

В некоторых вариантах осуществления, аллель риска в варианте rs1342326 IL33 содержит однонуклеотидный полиморфизм (ОНП). В некоторых подробных вариантах осуществления, вариант IL33 содержит ОНП 9:6190076:A:C (Геном человека GRCh38). Вариант rs1342326 содержит следующую нуклеотидную последовательность: CCAATCTTTTCTCATGAAGACACCA[G/T]CATGACCTCTTATTCTTA

TTTATAT (SEQ ID NO: 358).

В некоторых вариантах осуществления, аллель риска в варианте rs1420101 IL1RL1 содержит ОНП. В некоторых подробных вариантах осуществления, вариант IL1RL1 содержит ОНП 2:102341256:C:T (Геном человека GRCh38). Вариант rs1342326 содержит следующую нуклеотидную последовательность: TATACCATCACAAAGCCTCTCATTA[A/G]ACTTTGAATCCAATGAGTATTACTA (SEQ ID NO: 357).

Обнаружение может быть в соответствии с любой подходящей методикой. Аллели риска могут быть обнаружены, например, путем секвенирования, генотипирования, условной оценки, исследования с помощью комплементарных нуклеотидных зондов.

Способы могут дополнительно включать в себя определение категории риска развития у субъекта эозинофильной астмы, эозинофильной ХОБЛ или эозинофильного СПАХ, причем балл 1 риска указывает на то, что субъект подвержен риску развития высокоэозинофильной подгруппы эозинофильной астмы, высокоэозинофильной подгруппы эозинофильной ХОБЛ или высокоэозинофильной подгрупы эозинофильного СПАХ, балл 2 риска указывает на то, что субъект подвержен повышенному риску развития высокоэозинофильной подгруппы эозинофильной астмы, высокоэозинофильнй подгруппы эозинофильной ХОБЛ или высокоэозинофильной подгруппы эозинофильного СПАХ, балл 3 риска указывает, что субъекта подвержен высокому риску развития высокоэозинофильной подгруппы эозинофильной астмы, высокоэозинофильной подгруппы эозинофильной ХОБЛ или высокоэозинофильной подгрупы эозинофильного СПАХ, а балл 4 риска указывает на то, что субъект подвержен очень высокому риску развития высокоэозинофильной подгруппы эозинофильной астмы, высокоэозинофильной подгруппы эозинофильной ХОБЛ или высокоэозинофильной подгрупы эозинофильного СПАХ. В данной шкале повышенный риск больше, чем риск, но меньше, чем высокий риск, а очень высокий риск больше, чем высокий риск. Таким образом, с точки зрения риска развития заболевания у пациента, риск < повышенный риск < высокий риск < очень высокий риск, или балл 1 риска < балл 2 риска < балл 3 риска < балл 4 риска.

Способы могут дополнительно включать в себя получение образца из субъекта. В целом, как правило, образец может содержать любой образец, в котором могут быть обнаружены аллели риска. Образец может содержать образец ткани или мокроту. Образец ткани может включать в себя периферическую кровь, ткань дыхательных путей или легких.

Способы могут дополнительно включать в себя идентификацию субъекта в качестве кандидата для лечения антагонистом IL33 или комбинацией антагониста IL33 и антагониста IL-4R. На основании определения категории риска субъекта в виде балла 1 риска, балла 2 риска, балла 3 риска или балла 4 риска, субъект может получить пользу от терапевтического режима, который ингибирует эозинофильную астму, эозинофильную ХОБЛ, эозинофильный СПАХ, или их высокоэозинофильные подгруппы, или полипы носовой полости. Ингибирующая схема лечения может включать в себя корректировку типа, дозы, частоты дозирования и т. д. для антагониста IL-33, а также наличие или отсутствие комбинирования с антагонистом IL-4R и, если таковое имеется, типа, дозы и частоты введения, и т. д. для антагониста IL-4R, например, в зависимости от уровня риска.

Способы могут дополнительно включать в себя определение повышенных уровней эозинофилов в крови или мокроте, выделенных из субъекта. Повышенные уровни представляют собой такие уровни, которые считаются более высокими чем нормальные уровни или более высокие чем уровни, которые обычно наблюдаются у субъектов, которые имеют неэозинофильную подгруппу астмы, ХОБЛ или СПАХ. Способы могут дополнительно включать в себя выделение крови или мокроты из субъекта для данной цели.

Способы могут дополнительно включать в себя введение субъекту антагониста IL33 или введение антагониста IL33 и антагониста IL-4R. Такое введение может соответствовать количеству, эффективному для ингибирования эозинофильной астмы, эозинофильной ХОБЛ или эозинофильного ПСАХ, или их высокоэозинофильной подгруппы. В некоторых вариантах осуществления, антагонист IL33 может содержать ловушку IL33. В некоторых вариантах осуществления, антагонист IL33 может содержать антитело, которое специфически связывается с IL33, или его антиген-связывающий фрагмент. Подходящие антагонисты IL33 описаны в данном документе. В некоторых вариантах осуществления, антагонист IL-4R может содержать антитело, которое специфически связывается с IL-4R, или его антиген-связывающий фрагмент. Подходящие антагонисты IL-4R описаны в данном документе.

В втором аспекте, изобретение относится к способам лечения или ингибирования эозинофильной астмы у субъекта, нуждающегося в этом. Эозинофильная астма может быть низкоэозинофильной подгруппой эозинофильной астмы или может быть высокойэозинофильной подгруппой эозинофильной астмы.

В некоторых вариантах осуществления, способы включают в себя введение антагониста IL33 или введение антагониста IL33 и антагониста IL-4R субъекту, имеющему один или большее количество аллелей риска, связанных с эозинофильной астмой, в интронном варианте rs1420101 IL1RL1 (SEQ ID NO: 357) или его варианте в неравновесном сцеплении, в варианте rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358) или его варианте в неравновесном сцеплении, или как в интронном варианте rs1420101 IL1RL1 (SEQ ID NO: 357) или его варианте в неравновесном сцеплении, так и в варианте rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358) или его варианте в неравновесном сцеплении, так что эозинофильная астма лечится или ингибируется у субъекта.

В некоторых вариантах осуществления, антагонист IL33 может содержать ловушку IL33. В некоторых вариантах осуществления, антагонист IL33 может содержать антитело, которое специфически связывается с IL33, или его антиген-связывающий фрагмент. Подходящие антагонисты IL33 описаны в данном документе. В некоторых вариантах осуществления, антагонист IL-4R может содержать антитело, которое специфически связывается с IL-4R, или его антиген-связывающий фрагмент. Подходящие антагонисты IL-4R описаны в данном документе.

В третьем аспекте, изобретение относится к способам лечения или ингибирования эозинофильной ХОБЛ у субъекта, нуждающегося в этом. Эозинофильная ХОБЛ может представлять собой низкоэозинофильную подгруппу эозинофильной ХОБЛ или может представлять собой высокоэозинофильную подгруппу эозинофильной ХОБЛ.

В некоторых вариантах осуществления, способы включают в себя введение антагониста IL33 или введение антагониста IL33 и антагониста IL-4R субъекту, имеющему один или большее количество аллелей риска, связанных с эозинофильной ХОБЛ, в интронном варианте rs1420101 IL1RL1 (SEQ ID NO: 357) или его варианте в неравновесном сцеплении, в варианте rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358) или его варианте в неравновесном сцеплении, или как в интронном варианте rs1420101 IL1RL1 (SEQ ID NO: 357) или его варианте в неравновесном сцеплении, так и в варианте rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358) или его варианте в неравновесном сцеплении, так что эозинофильная ХОБЛ лечится или ингибируется у субъекта.

В четвертом аспекте, изобретение относится к способам лечения или ингибирования эозинофильного СПАХ у субъекта, нуждающегося в этом. Эозинофильный СПАХ может представлять собой низкоэозинофильную подгруппу эозинофильного СПАХ или может представлять собой высокоэозинофильную подгруппу эозинофильного СПАХ.

В некоторых вариантах осуществления, способы включают в себя введение антагониста IL33 или введение антагониста IL33 и антагониста IL-4R субъекту, имеющему один или большее количество аллелей риска, связанных с эозинофильным СПАХ, в интронном варианте rs1420101 IL1RL1 (SEQ ID NO: 357) или его варианте в неравновесном сцеплении, в варианте rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358) или его варианте в неравновесном сцеплении, или как в интронном варианте rs1420101 IL1RL1 (SEQ ID NO: 357) или его варианте в неравновесном сцеплении, так и в варианте rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358) или его варианте в неравновесном сцеплении, так что эозинофильный СПАХ лечится или ингибируется у субъекта.

В любом из способов, описанных или приведенных в качестве примера в данном документе, антагонист IL33 можно вводить как часть схемы лечения. Антагонист IL33 может содержать любой агент, который ингибирует взаимодействие IL33 с одним или большим количество его партнеров по связыванию и, таким образом, ингибирует опосредованную IL33 передачу сигналов. Например, антагонист IL33 может связываться и/или взаимодействовать с IL33 или с рецептором IL33, называемым «подавителем онкогенности» (он же ST2), или с ко-рецепторным вспомогательным белком рецептора интерлейкина-1 (IL-1RAcP) IL33 или с комплексом любого из следующего: IL33/ST2 или ST2/IL-1RAcP.

Неограничивающие примеры категорий антагонистов IL33 включают в себя низкомолекулярные ингибиторы IL33, или антагонисты рецептора, или нуклеиновые кислоты, которые гибридизируются в жестких условиях с нуклеотидными последовательностями, кодирующими либо IL33, либо рецептор или ко-рецептор IL33 (например, короткие интерферирующие РНК (киРНК (siRNA)) или регулярно расположенные группами короткие палиндромные повторы РНК, (РРГКПП-РНК (CRISPR-RNA) или ррРНК (crRNA)), включая одиночные направляющие РНК (онРНК (sgRNA)), имеющие последовательность ррРНК и траррРНК (tracrRNA). Другие антагонисты IL33 включают в себя белки, содержащие лиганд-связывающую часть рецептора IL33 (например, ST2), IL33-связывающие каркасные молекулы (например, DARPin, белки с повторами HEAT, белки с повторами ARM, белки с повторами тетратрикопептида, каркасные конструкции на основе фибронектина и другие каркасы на основе встречающихся в природе белков с повторами, и анти-IL33 аптамеры или их части.

В предпочтительных вариантах осуществления, антагонист IL33 содержит антитело, которое специфически связывается с человеческим IL33 (антитела к IL33) или его антиген-связывающие фрагменты. Идентификаторы аминокислотных последовательностей для типичных анти-IL33 антител для использования в способах, описанных в данном документе, продемонстрированы в Таблице 1. Анти-IL33 антитела могут содержать любое антитело, описанное в патенте США №9453072, который включен посредством ссылки в полном объеме.

Таблица 1. Идентификаторы аминокислотных последовательностей антител к IL33

	SEQ ID NO:
Обозначение антитела	HCVR	HCDR1	HCDR2	HCDR3	LCVR	LCDR1	LCDR2	LCDR3
H1M9559N	2	4	6	8	10	12	14	16
H1M9566N	18	20	22	24	26	28	30	32
H1M9568N	34	36	38	40	42	44	46	48
H4H9629P	50	52	54	56	58	60	62	64
H4H9633P	66	68	70	72	74	76	78	80
H4H9640P	82	84	86	88	90	92	94	96
H4H9659P	98	100	102	104	106	108	110	112
H4H9660P	114	116	118	120	122	124	126	128
H4H9662P	130	132	134	136	138	140	142	144
H4H9663P	146	148	150	152	154	156	158	160
H4H9664P	162	164	166	168	170	172	174	176
H4H9665P	178	180	182	184	186	188	190	192
H4H9666P	194	196	198	200	202	204	206	208
H4H9667P	210	212	214	216	218	220	222	224
H4H9670P	226	228	230	232	234	236	238	240
H4H9671P	242	244	246	248	250	252	254	256
H4H9672P	258	260	262	264	266	268	270	272
H4H9675P	274	276	278	280	282	284	286	288
H4H9676P	290	292	294	296	298	300	302	304
H1M9565N	308	310	312	314	316	318	320	322

В некоторых вариантах осуществления, антагонист IL33 содержит анти-IL33 антитело или его антиген-связывающий фрагмент, содержащий вариабельную область тяжелой цепи (HCVR), вариабельную область легкой цепи (LCVR) и/или определяющие комплементарность области (CDR) с аминокислотными последовательностями анти-IL33-антител, как указано в патенте США №9453072 и в Таблице 1 в данном документе. В некоторых вариантах осуществления, антагонист IL33 содержит определяющие комплементарность области тяжелой цепи (CDR; например, H1, H2, H3) вариабельной области тяжелой цепи, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 274, и CDR легкой цепи (например, L1, L2, L3) вариабельной области легкой цепи, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 282. В некоторых вариантах осуществления, H1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 276, H2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 278 и H3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 280. В некоторых вариантах осуществления, L1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 284, L2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 286 и L3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 288. В еще других вариантах осуществления, анти-IL33 антитело или его антиген-связывающий фрагмент содержит HCVR, содержащую SEQ ID NO: 274, и LCVR, содержащую SEQ ID NO: 282.

В некоторых вариантах осуществления, антитела к IL33 или их антиген-связывающие фрагменты содержат три CDR тяжелой цепи (HCDR1, HCDR2 и HCDR3), содержащиеся в аминокислотной последовательности вариабельной области тяжелой цепи (HCVR), выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 242, 258, 274, 290 и 308; и содержат три CDR легкой цепи (LCDR1, LCDR2 и LCDR3), содержащиеся в аминокислотной последовательности вариабельной области легкой цепи (LCVR), выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218, 234, 250, 266, 282, 298 и 316.

В некоторых вариантах осуществления, анти-IL33 антитела или их антиген-связывающие фрагменты содержат пару последовательностей HCVR и LCVR (HCVR/LCVR) с SEQ ID NO: 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/74, 82/90, 98/106, 114/122, 130/138, 146/154, 162/170, 178/186, 194/202, 210/218, 226/234, 242/250, 258/266, 274/282, 290/298 или 308/316.

В некоторых вариантах осуществления, анти-IL33 антитела или их антиген-связывающие фрагменты содержат домен CDR1 тяжелой цепи (HCDR1), имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 4, 20, 36, 52, 68, 84, 100, 116, 132, 148, 164, 180, 196, 212 228, 244, 260, 276, 292 и 310, или по существу их похожую последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности; домен CDR2 тяжелой цепи (HCDR2), имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 6, 22, 38, 54, 70, 86, 102, 118, 134, 150, 166, 182, 198, 214, 230, 246, 262, 278, 294 и 312, или по существу их похожую последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности; домен CDR1 легкой цепи (LCDR1), имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 12, 28, 44, 60, 76, 92, 108, 124, 140, 156, 172, 188, 204, 220, 236, 252, 268, 284, 300 и 318, или по существу их похожую последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности; и домен CDR2 легкой цепи (LCDR2), имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 14, 30, 46, 62, 78, 94, 110, 126, 142, 158, 174, 190, 206, 222, 238, 254, 270, 286, 302 и 320, или по существу их похожую последовательность, имеющую по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичности последовательности.

В некоторых предпочтительных вариантах осуществления, анти-IL33 антитела или их антиген-связывающие фрагменты содержат домены HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3 соответственно, имеющие аминокислотные последовательности, выбранные из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 4-6-8-12-14-16 (например H1M9559N); 20-22-24-28-30-32 (например H1M9566N); 36-38-40-44-46-48 (например H1M9568N); 52-54-56-60-62-64 (например H4H9629P); 68-70-72-76-78-80 (например H4H9633P); 84-86-88-92-94-96 (например H4H9640P); 100-102-104-108-110-112 (например H4H9659P); 116-118-120-124-126-128 (например H4H9660P); 132-134-136-140-142-144 (например H4H9662P); 148-150-152-156-158-160 (например H4H9663P); 164-166-168-172-174-176 (например H4H9664P); 180-182-184-188-190-192 (например H4H9665P); 196-198-200-204-206-208 (например H4H9666P); 212-214-216-220-222-224 (например H4H9667P); 228-230-232-236-238-240 (например H4H9670P); 244-246-248-252-254-256 (например H4H9671P); 260-262-264-268-270-272 (например H4H9672P); 276-278-280-284-286-288 (например H4H9675P); 292-294-296-300-302-304 (например, H4H9676P); и 310-312-314-318-320-322 (H1M9565N).

В некоторых вариантах осуществления, анти-IL33 антитела или их антиген-связывающие фрагменты содержат домены CDR тяжелой и легкой цепи, содержащиеся в последовательностях вариабельной области тяжелой и легкой цепи (HCVR/LCVR) с SEQ ID NO: 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/74, 82/90, 98/106, 114/122, 130/138, 146/154, 162/170, 178/186, 194/202, 210/218, 226/234, 242/250, 258/266, 274/282, 290/298, или 308/316. Границы CDR могут соответствовать определению согласно Кабату, определению согласно Чотиа или определению согласно AbM.

Другие анти-IL33 антитела и их антиген-связывающие фрагменты, которые могут быть использованы в способах, описанных в данном документе, раскрыты в европейской публикации № EP 1725261, PCT публикации № WO 2011/031600, WO 2015/099175, WO 2015/106080 (ANB020), WO 2016/077381, WO 2016/077366 или WO 2016/156440, патенте США №8187596 и публикации США №2016/0168242, каждый из которых включен в данный документ посредством ссылки в полном объеме.

В альтернативных предпочтительных вариантах осуществления, антагонист IL33 содержит ловушку IL33. Ловушки IL33 содержат по меньшей мере один связывающий IL33 домен, который содержит связывающую IL33 часть рецепторного белка IL33, обозначенную ST2. В некоторых вариантах осуществления, ловушка IL33 дополнительно содержит внеклеточную часть ко-рецептора IL33, обозначенного как вспомогательный белок рецептора IL-1, или как IL-1RAcP. Ловушка IL33 может также содержать по меньшей мере один мультимеризирующий компонент, который функционирует для соединения различных компонентов ловушки друг с другом. Различные компоненты ловушек IL33 описаны ниже и продемонстрированы на Фиг. 1. Ловушки IL33 могут содержать любую ловушку, описанную в публикации США №2014/0271642 и РСТ публикации № WO 2014/152195, каждый из которых включен в данный документ посредством ссылки в полном объеме.

Ловушка IL33 может содержать первый связывающий IL33 домен (D1), присоединенный к мультимеризирующему домену (M). В некоторых вариантах осуществления, ловушка IL33 содержит второй связывающий IL33 домен (D2), присоединенный к D1 и/или М. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления, D1 содержит связывающую IL33 часть белка ST2. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления, D2 содержит внеклеточную часть белка IL-1RAcP.

Отдельные компоненты ловушек IL33 могут располагаться относительно друг друга различными способами, что приводит к формированию функциональных молекул-антагонистов, способных связывать IL33. Например, D1 и/или D2 могут быть присоединены к N-концу M. В некоторых вариантах осуществления, D1 и/или D2 присоединены к С-концу М. В других вариантах осуществления, D1 присоединен к N-концу D2, а D2 присоединен к N-концу М, что приводит к линейному слиянию, от N- до С-конца, молекулы-антагониста, представленной формулой D1-D2-M. Другие ориентации отдельных компонентов раскрыты в другом месте в данном документе в Фиг. 1.

Ловушки IL33 содержат по меньшей мере один связывающий IL33 домен (иногда определяемый в данном документе обозначением «D» или «D1», «D2» и т.д.). В некоторых вариантах осуществления, связывающий IL33 домен содержит связывающую IL33 часть белка ST2. IL33-связывающая часть белка ST2 может содержать или состоять из всего или части внеклеточного домена белка ST2. В предпочтительных вариантах осуществления, белок ST2 представляет собой белок ST2 человека, включая белок ST2 с аминокислотами 1-556 номера доступа NP_057316.3 (SEQ ID NO: 352). В некоторых альтернативных вариантах осуществления, белок ST2 содержит белок ST2 из вида не относящегося к человеку (например, мышиный ST2, ST2 примата, отличного от человека, и т. д.). Предпочтительная IL33-связывающая часть белка ST2 представлена в данном документе как аминокислотная последовательность SEQ ID NO: 328 (соответствует внеклеточному домену человеческого ST2 [K19-S328 из NCBI, номер доступа NP_057316.3]). Другие примеры IL33-связывающей части белка ST2 представлены в данном документе как аминокислотная последовательность SEQ ID NO: 329 (соответствует внеклеточному домену мыши ST2 [S27-R332 из NCBI, номер доступа P14719]).

В некоторых вариантах осуществления, IL33-связывающий домен ловушки содержит внеклеточную часть белка IL-1RAcP. В некоторых вариантах осуществления, белок IL-1RAcP содержит белок IL-1RAcP человека, включая белок IL-1RAcP, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 353. В некоторых альтернативных вариантах осуществления, белок IL-1RAcP содержит белок IL-1RAcP из отличающегося от человека вида (например, мышиный IL-1RAcP, IL-1RAcP приматов, отличных от человека, и т. д.). Иллюстративная внеклеточная часть белка IL-1RAcP представлена в данном документе как аминокислотная последовательность SEQ ID NO: 330 (соответствующая внеклеточному домену человеческого IL-1RAcP [S21-E359 из NCBI, номер доступа Q9NPH3]). Другой пример внеклеточной части белка IL-1RAcP представлен в данном документе как аминокислотная последовательность SEQ ID NO: 331 (соответствующая внеклеточному домену мышиного IL-1RAcP [S21-E359 из NCBI, номер доступа Q61730]).

Неограничивающие примеры ловушек IL33 для применения в способах приведены в Таблице 2 и включают в себя ловушки IL33, обозначенные как «hST2-hFc», «hST2-mFc», «hST2-hIL1RAcP-mFc», «hST2-hIL1RAcP-hFc» и « mST2-mIL1RAcP-mFc». Они соответствуют SEQ ID NO: 323, 324, 325, 326 и 327 соответственно. Ловушки на основе рецептора IL33 могут содержать аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере примерно на 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентична любой из таковых приведенных в данном документе иллюстративных ловушек на основе рецепторов IL33 (например, SEQ ID NO: 323, 324, 325, 326 и 327). Ловушки IL33 могут содержать компоненты D1 и/или D2, имеющие аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентична любой из приведенных в данном документе иллюстративных аминокислотных последовательностей компонента IL33-связывающего домена (например, SEQ ID NO: 328, 329, 330 и 331).

Были сконструированы пять различных иллюстративных ловушек IL33. Первый антагонист IL33 (hST2-hFc, SEQ ID NO: 323) содержит растворимую внеклеточную область человеческого ST2 (SEQ ID NO: 328), слитую на своем C-конце с N-концом Fc-области человеческого IgG1 (SEQ ID NO: 332). Второй антагонист IL33 (hST2-mFc, SEQ ID NO: 324) состоит из растворимой внеклеточной области человеческого ST2 (SEQ ID NO: 328), слитой на своем C-конце с N-концом Fc-области мышиного IgG2a (SEQ ID NO: 333). Третий антагонист IL33 (hST2-hIL1RAcP-mFc, SEQ ID NO: 325) состоит из линейного гибрида, имеющего человеческий ST2 (SEQ ID NO: 328) на его N-конце, за которым следует внеклеточная область человеческого IL-1RAcP (SEQ ID NO: 330), за которой следует Fc мышиного IgG2a (SEQ ID NO: 333) на его С-конце. Четвертый антагонист IL33 (mST2-mIL1RAcP-mFc, SEQ ID NO: 326) состоит из линейного гибрида, имеющего мышиный ST2 (SEQ ID NO: 329) на его N-конце, за которым следует внеклеточная область мышиного IL-1RAcP (SEQ ID NO: 331), за которой следует Fc мышиного IgG2a (SEQ ID NO: 333) на его С-конце. Пятый антагонист IL33 (hST2-hIL1RAcP-hFc, SEQ ID NO: 327) состоит из линейного гибрида, имеющего ST2 человека SEQ ID NO: 328 на его N-конце, за которым следует внеклеточная область человеческого IL-1RAcP (SEQ ID NO: 330), за которой следует человеческий Fc IgG1 (SEQ ID NO: 332) на его С-конце. Смотрите Таблицу 2.

Таблица 2. Краткое представление антагонистов IL33 и составных частей

Антагонист IL33	Аминокислотная последовательность полной молекулы антагониста	Компонент D1	Компонент D2	Компонент М
hST2-hFc	SEQ ID NO:323	внеклеточная человеческого ST2 (SEQ ID NO:328)	Отсутствует	Fc человеческого IgG1 (SEQ ID NO:332)
hST2-mFc	SEQ ID NO:324	внеклеточная человеческого ST2 (SEQ ID NO:328)	Отсутствует	Fc мышиного IgG2a (SEQ ID NO:333)
hST2-hIL1RAcP-mFc	SEQ ID NO:325	внеклеточная человеческого ST2 (SEQ ID NO:328)	внеклеточная человеческого IL-1RAcP (SEQ ID NO:330)	Fc мышиного IgG2a (SEQ ID NO:333)
mST2-mIL1RAcP-mFc	SEQ ID NO:326	внеклеточная мышиного ST2 (SEQ ID NO:329)	внеклеточная мышиного IL-1RAcP (SEQ ID NO:331)	Fc мышиного IgG2a (SEQ ID NO:333)
hST2-hIL1RAcP-hFc	SEQ ID NO: 327	внеклеточная человеческого ST2 (SEQ ID NO:328)	внеклеточная человеческого IL-1RAcP (SEQ ID NO:330)	Fc человеческого IgG1 (SEQ ID NO: 332)

Ловушки IL33 могут содержать по меньшей мере один мультимеризирующий домен (иногда упоминаемый в данном документе под аббревиатурой «М», «М1», «М2» и т. д.). В общих чертах, мультимеризующий домен(ы) функционирует для соединения различных компонентов антагонистов IL33 (например, IL33-связывающего домена (доменов)) друг с другом. Мультимеризующий домен может содержать любую макромолекулу, которая обладает способностью связываться (ковалентно или нековалентно) с второй макромолекулой с такой же или сходной структурой или строением. Например, мультимеризующий домен может содержать полипептид, содержащий домен СН3 иммуноглобулина. Неограничивающим примером мультимеризирующего домена является Fc-часть иммуноглобулина, например, Fc-домен IgG, выбранного из изотипов IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4, а также любого аллотипа в каждой группе изотипов.

Неограничивающие иллюстративные мультимеризирующие домены, которые могут быть использованы в ловушках IL33, включают в себя Fc человеческого IgG1 (SEQ ID NO: 332) или Fc мышиного IgG2a (SEQ ID NO: 333). Ловушки IL33 могут содержать компоненты М, имеющие аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере примерно на 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентична любой из приведенных в данном документе иллюстративных аминокислотных последовательностей компонента М (например, SEQ ID NO: 332 или 333).

В некоторых вариантах осуществления, ловушки IL33 содержат два мультимеризуемых домена, M1 и M2, причем M1 и M2 идентичны друг другу. Например, M1 может представлять собой домен Fc, имеющий конкретную аминокислотную последовательность, а M2 представляет собой домен Fc с той же аминокислотной последовательностью, что и у M1. Отдельные компоненты антагонистов IL33 (например, D1, D2, M и т.д.) могут быть расположены относительно друг друга различными способами. Неограничивающие примеры всех вышеупомянутых расположений, включая пример ловушки IL33, содержащей два мультимеризующихся домена (M1 и M2) и четыре связывающих IL33 домена (D1, D2, D3 и D4) схематически проиллюстрированы на Фиг. 1.

Отдельные компоненты ловушек IL33 (например, D1, D2, M1, M2 и т. д.) могут быть соединены друг с другом напрямую (например, D1 и/или D2 могут быть напрямую присоединены к M и т.д.); альтернативно, отдельные компоненты могут быть соединены друг с другом через линкерный компонент (например, D1 и/или D2 могут быть присоединены к М посредством линкера, ориентированного между отдельными компонентами; D1 может быть присоединен к D2 посредством линкера и т.д.).

Полипептиды, которые связывают IL33 и/или его рецептор (ST2 и/или RAcP IL-1) и блокируют взаимодействие лиганд-рецептор, рассматриваются как антагонисты IL33 и раскрыты в публикации PCT № WO 2014/152195, которая включена посредством ссылки в полном объеме. Биологические характеристики ловушек IL33 описаны в публикации США №2014/0271642, которая полностью включена в данный документ посредством ссылки в полном объеме.

Другие агенты, которые могут действовать как антагонисты IL33 и которые могут быть использованы в способах, включают в себя иммуноадгезины, пептиды и растворимый ST2 или их производные; антитела против рецептора IL33 (например, анти-ST2 антитела, например, AMG-282 (Amgen) или STLM15 (Janssen)) или любое из анти-ST2 антител, описанных в публикациях PCT № WO 2012/113813, № WO 2013/173761 и № WO 2013/165894, а также патентах США №8444987 и №7452980, каждый из которых включен в данный документ посредством ссылки в полном объеме. Другие антагонисты IL33 включают в себя белки ST2-Fc, такие как описанные в публикациях PCT № WO 2013/173761 и № WO 2013/165894, каждая из которых включена в данный документ посредством ссылки в полном объеме.

В любом из способов, описанных или приведенных в качестве примера в данном документе, антагонист IL-4R может быть введен как часть схемы лечения. Антагонист IL-4R предпочтительно вводят в комбинации с антагонистом IL33, хотя антагонист IL-4R не нужно вводить одновременно с антагонистом IL33. Антагонист IL-4R может содержать любой агент, который связывается или взаимодействует с IL-4Rα или лигандом IL-4R, и ингибирует или ослабляет нормальную биологическую сигнальную функцию рецептора IL-4 типа 1 и/или типа 2. IL-4R может содержать аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 347 или ее биологически активный фрагмент. Рецептор IL-4 типа 1 представляет собой димерный рецептор, содержащий цепь IL-4Rα и цепь γc. Рецептор IL-4 типа 2 представляет собой димерный рецептор, содержащий цепь IL-4Rα и цепь IL-13Rα1. Рецепторы IL-4 типа 1 взаимодействуют с и стимулируются IL-4, тогда как рецепторы IL-4 типа 2 взаимодействуют с и стимулируются как IL-4, так и IL-13. Таким образом, антагонисты IL-4R, применяемые в способах, могут функционировать, блокируя передачу сигналов, опосредованную IL-4, передачу сигналов, опосредованную, IL-13 или передачу сигналов, опосредованную как IL-4, так и IL-13. Таким образом, антагонисты IL-4R могут ингибировать или предотвращать взаимодействие IL-4 и/или IL-13 с рецептором типа 1 или типа 2.

Неограничивающие примеры категорий антагонистов IL-4R включают в себя низкомолекулярные антагонисты IL-4R, ингибиторы экспрессии или активности IL-4R на основе нуклеиновых кислот (например, киРНК или антисмысловые), молекулы на основе пептидов, которые специфически взаимодействуют с IL-4R (например, пептитела), «рецепторные тела» (например, сконструированные молекулы, содержащие лиганд-связывающий домен компонента IL-4R), IL-4R-связывающие каркасные молекулы (например, DARPin, белки с повторами HEAT, белки с повторами ARM, белки с повторами тетратрикопептида, каркасные конструкции на основе фибронектина и другие каркасы на основе встречающихся в природе белков с повторами, и анти-IL-4R аптамеры или их части.

В предпочтительных вариантах осуществления, антагонист IL-4R содержит антитело, которое специфически связывается с человеческим IL-4R. Антитела обычно упоминаются в данном документе в соответствии с следующей номенклатурой: Префикс Fc (например, «H1M» или «H4H»), за которым следует числовой идентификатор (например, «9559», «9566» или «9629», как показано в Таблице 1), за которым следует суффикс «P» или «N». Согласно данной номенклатуре, антитело может упоминаться в данном документе, например, как «H1M9559N», «H1M9566N», «H4H9629P» и т. д. Префиксы H1M и H4H в обозначениях антител, используемых в данном документе, указывают конкретный изотип Fc-области антитела. Например, антитело «H1M» имеет Fc мышиного IgG1, тогда как антитело «H4H» имеет Fc человеческого IgG4. Антитело, имеющее конкретный изотип Fc, может быть превращено в антитело с другим изотипом Fc (например, антитело с Fc мышиного IgG1 может быть превращено в антитело с человеческого IgG4 и т. д.), но в любом случае вариабельные домены (включая CDR), которые обозначены числовыми идентификаторами, показанными в Таблице 1, останутся такими же, а свойства связывания, как ожидается, будут идентичными или практически одинаковыми, независимо от природы Fc.

В предпочтительных вариантах осуществления, анти-IL-4R антитело представляет собой дупилумаб. Смотрите патенты США №7605237, №7608693 и №9290574, которые включены посредством ссылки.

Человеческие анти-IL-4R антитела могут быть получены, как описано в патенте США №7608693. Одно иллюстративное антитело к IL-4R представляет собой мышиное антитело, специфичное к мышиному IL-4R, и имеет следующие аминокислотные последовательности: вариабельную область тяжелой цепи (HCVR), содержащую SEQ ID NO: 335, и вариабельный домен легкой цепи (LCVR), содержащий SEQ ID NO: 336. Человеческое анти-IL-4R антитело, называемое дупилумабом, специфически связывается с человеческим IL-4Rα и содержит вариабельную область тяжелой цепи (HCVR), содержащую SEQ ID NO: 337, и вариабельную область легкой цепи (LCVR), содержащую SEQ ID NO: 338, определяющую комплементарность область 1 тяжелой цепи (HCDR1), содержащую SEQ ID NO: 339, HCDR2, содержащую SEQ ID NO: 340, HCDR3, содержащую SEQ ID NO: 341, определяющую комплементарность область 1 легкой цепи (LCDR1), содержащую SEQ ID NO: 342, LCDR2, содержащую SEQ ID NO: 343, и LCDR3, содержащую SEQ ID NO: 344. Полноразмерная тяжелая цепь дупилумаба продемонстрирована как SEQ ID NO: 345, а полноразмерная легкая цепь продемонстрирована как SEQ ID NO: 346.

В некоторых вариантах осуществления, антагонист IL-4R содержит анти-IL-4Rα антитело или его антиген-связывающий фрагмент, содержащий вариабельную область тяжелой цепи (HCVR), вариабельную область легкой цепи (LCVR) и/или определяющие комплементарность области (CDR), содержащие любую из аминокислотных последовательностей анти-IL-4R антител, как указано в патенте США №7605237 и №7608693. В некоторых вариантах осуществления, антагонист IL-4R содержит анти-IL-4R антитело, имеющее характеристики связывания исходного антитела, называемого в данном документе дупилумабом (патент США №7605237 и патент США №7608693). В некоторых вариантах осуществления, анти-IL-4Rα антитело или его антиген-связывающий фрагмент содержит определяющие комплементарность области тяжелой цепи (HCDR) вариабельной области тяжелой цепи (HCVR), содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 337, и определяющие комплементарность области легкой цепи (LCDR) вариабельной области легкой цепи (LCVR), содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 338. В некоторых вариантах осуществления, анти-IL-4Rα антитело или его антиген-связывающий фрагмент содержит три HCDR (HCDR1, HCDR2 и HCDR3) и три LCDR (LCDR1, LCDR2 и LCDR3), причем HCDR1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 339; HCDR2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 340; HCDR3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 341; LCDR1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 342; LCDR2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 343; и LCDR3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 344. В еще других вариантах осуществления, анти-IL-4R антитело или его антиген-связывающий фрагмент содержит HCVR, содержащий SEQ ID NO: 337, и LCVR, содержащий SEQ ID NO: 338. В еще других вариантах осуществления, анти-IL-4R антитело или его антиген-связывающий фрагмент содержит HCVR, содержащий SEQ ID NO: 335, и LCVR, содержащий SEQ ID NO: 336. В некоторых вариантах осуществления, анти-IL-4R антитело или его антиген-связывающий фрагмент содержит аминокислотную последовательность тяжелой цепи (HC), как указано в SEQ ID NO: 345, и аминокислотную последовательность легкой цепи (LC), как указано в SEQ ID NO: 346.

В некоторых вариантах осуществления, антитело к IL-4R или его антиген-связывающий фрагмент содержит определяющие комплементарность области тяжелой цепи (HCDR) вариабельной области тяжелой цепи (HCVR), содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 335 или SEQ ID NO: 337, и определяющие комплементарность области легкой цепи (LCDR) вариабельной области легкой цепи (LCVR), содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 336 или SEQ ID NO: 338.

В некоторых вариантах осуществления, антитело к IL-4R или его антиген-связывающий фрагмент содержит три HCDR (HCDR1, HCDR2 и HCDR3) и три LCDR (LCDR1, LCDR2 и LCDR3), причем HCDR1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 339, HCDR2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 340; HCDR3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 341; LCDR1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 342; LCDR2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 343; и LCDR3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 344.

В некоторых вариантах осуществления, антитело к IL-4R или его антиген-связывающий фрагмент для применения в способах согласно данному изобретению содержит HCVR, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 335 или SEQ ID NO: 337, и LCVR, содержащую аминокислоту последовательность SEQ ID NO: 336 или SEQ ID NO: 338.

В некоторых вариантах осуществления, антитело к IL-4R или его антиген-связывающий фрагмент для применения в способах согласно данному изобретению содержит пару аминокислотных последовательностей HCVR/LCVR SEQ ID NO: 335/336 или SEQ ID NO: 337/338.

Другие анти-IL-4Rα антитела включают в себя, например, антитело, упоминаемое и известное в данной области техники как AMG317 (Corren et al., 2010, Am J Respir Crit Care Med., 181(8):788-796), или MEDI 9314, или любое из анти-IL-4Rα антител, как указано в любом из патентов США №7186809, №7605237, №7638606, №8092804, №8679487 или №8877189.

Антитела к IL-4Rα и IL33 могут иметь рН-зависимые характеристики связывания. Например, анти-IL-4Rα антитело или анти-IL33 антитело может проявлять сниженное связывание с IL-4Rα или с IL33, соответственно, при кислотном pH по сравнению с нейтральным pH. В альтернативном варианте, анти-IL-4Rα антитело или анти-IL33 антитело может проявлять усиленное связывание с его антигеном при кислотном pH по сравнению с нейтральным pH. «Кислотный рН» включает в себя значения рН меньшие чем около 6,2, например, около 6,0, 5,95, 5,9, 5,85, 5,8, 5,75, 5,7, 5,65, 5,6, 5,55, 5,5, 5,45, 5,4, 5,35, 5,3, 5,25, 5,2, 5,15, 5,1, 5,05, 5,0 или меньше. «Нейтральный рН» включает в себя рН от около 7,0 до около 7,4, а также около 7,0, 7,05, 7,1, 7,15, 7,2, 7,25, 7,3, 7,35 и 7,4.

В другом аспекте, антагонист IL33 применяется отдельно или в комбинации с антагонистом IL-4R для лечения или ингибирования воспалительной патологии легких. Антагонист IL33 или комбинация могут быть использованы для лечения или ингибирования одного или большего количества из астмы, ХОБЛ или СПАХ. Антагонист IL33 или комбинация могут быть использованы для лечения или ингибирования полипов носовой полости. Комбинация может быть использована для лечения или ингибирования одного или большего количества из эозинофильной астмы, эозинофильной ХОБЛ или эозинофильного СПАХ. Антагонист IL33 или комбинация могут быть использованы для лечения или ингибирования одного или большего количества из высокоэозинофильной подгруппы эозинофильной астмы, эозинофильной ХОБЛ или эозинофильного СПАХ. Комбинация демонстрирует повышенную эффективность по сравнению с лечением или ингибированием, получаемым, когда каждое антитело применяется отдельно в качестве монотерапии.

В некоторых вариантах осуществления, антагонист IL33 или комбинация антагониста IL33 и антагониста IL-4R применяются в производстве лекарственного средства для лечения или ингибирования любого из: эозинофильной астмы, эозинофильной хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ), синдрома перекрывающихся эозинофильных астмы-хронической обструктивной болезни легких (СПАХ), высокоэозинофильной эозинофильной астмы, высокоэозинофильной эозинофильной ХОБЛ, высокоэозинофильного эозинофильного СПАХ или полипов носовой полости. В предпочтительных вариантах осуществления, антагонист IL33 или комбинация применяются в производстве лекарственного средства для лечения или ингибирования любого из: эозинофильной астмы, эозинофильной ХОБЛ, эозинофильного СПАХ, высокоэозинофильной эозинофильной астмы, высокоэозинофильной эозинофильной ХОБЛ, высокоэозинофильного эозинофильного СПАХ, или полипов носовой полости, когда пациент с таковыми имеет один или большее количество аллелей риска, связанных с эозинофильной астмой, эозинофильной ХОБЛ или эозинофильным СПАХ в интронном варианте rs1420101 IL1RL1 (SEQ ID NO: 357) или его варианте в неравновесном сцеплении, в варианте rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358) или его варианте в неравновесном сцеплении, или как в интронном варианте rs1420101 IL1RL1 (SEQ ID NO: 357) или его варианте в неравновесном сцеплении, так и в варианте rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358) или его варианте в неравновесном сцеплении.

В соответствии с таким применением антагонист IL33 может содержать ловушку IL33. Ловушка IL33 может содержать первый связывающий IL33 домен, содержащий связывающую IL33 часть IL1RL1, и второй связывающий IL33 домен, содержащий внеклеточную часть IL-1RAcP. Антагонист IL33 может в альтернативном варианте содержать антитело или его антиген-связывающий фрагмент, который специфически связывается с IL33. Антитело или его антиген-связывающий фрагмент, который специфически связывается с IL33, может содержать домены H1, H2 и H3 SEQ ID NO: 274 и домены L1, L2 и L3 SEQ ID NO: 282. Антагонист IL-4R может содержать антитело или его антиген-связывающий фрагмент, который специфически связывается с IL-4R. Антитело или его антиген-связывающий фрагмент, который специфически связывается с IL-4R, может содержать домены H1, H2 и H3 SEQ ID NO: 337 и домены L1, L2 и L3 SEQ ID NO: 338.

Следующие примеры предоставлены для более подробного описания изобретения. Они предназначены для иллюстрации, а не для ограничения изобретения.

Пример 1

Анти-IL33 антитело, анти-IL-4R антитело и их комбинация в модели хронического фиброза, вызванного клещами домашней пыли, и тяжелого воспаления легких

Хронические воспалительные заболевания дыхательных путей являются следствием повторяющихся эпизодов воспаления дыхательных путей, главным образом из-за многократного воздействия аллергенов или других патогенов. У людей такие хронические повреждения вызывают широкий спектр патологий, которые включают в себя легочную инфильтрацию иммунными клетками, повышенную выработку цитокинов, выработку слизи и отложение коллагена. Данное увеличение уровня воспалительных цитокинов и инфильтратов иммунных клеток, сопровождающееся интенсивным ремоделированием дыхательных путей, приводит к сужению дыхательных путей, гиперреактивности к вдыхаемым триггерам, таким как аллергены или патогены, обструкции дыхательных путей и потере функции легких.

Чтобы определить эффект анти-IL33 ингибирования в соответствующей модели in vivo, было проведено исследование фиброза, индуцированного экстрактом клеща домашней пыли (HDM) и тяжелого воспаления и ремоделирования легких, на мышах, которые были гомозиготными по экспрессии человеческого IL33 вместо мышиного IL33 (мыши HumIn IL33). Смотрите публикации США №2015/0320021 и №2015/0320022. Хроническое воздействие экстракта HDM вызывает сильное воспаление легких, что приводит к значительному клеточному инфильтрату, экспрессии цитокинов и ремоделированию. В данной модели сравнивали эффективность анти-IL33 антитела, антитела к мышиному IL-4Rα или их комбинации. Антитело к мышиному IL-4Rα, применяемое в данном исследовании, обозначено M1M1875N и содержит пару аминокислотных последовательностей HCVR/LCVR SEQ ID NO: 335/336. Анти-IL33 антитело, применяемое в данном исследовании, обозначено H4H9675P и содержит пару аминокислотных последовательностей HCVR/LCVR SEQ ID NO: 274/282.

Мышам HumIn IL33 вводили интраназально либо 50 мкг экстракта клеща домашней пыли (HDM; Greer, #XPB70D3A2.5), разведенного в 20 мкл 1X фосфатного-солевого буфера (ФСБ), либо 20 мкл 1X ФСБ в течение 3 дней в неделю в течение 15 недель. Второй контрольной группе мышей HumIn IL33 вводили 50 мкг экстракта HDM, разведенного в 20 мкл 1X ФСБ, в течение 3 дней в неделю в течение 11 недель для оценки тяжести заболевания в начале лечения антителами. Четырем группам мышей, подвергнутых воздействию HDM, инъецировали подкожно 25 мг/кг либо анти-IL33 антитела H4H9675P, либо антитела к мышиному IL-4Rα M1M1875N, комбинацию обоих антител или изотипное контрольное антитело, начиная с 11-ой недели воздействия HDM и затем дважды в неделю до конца воздействия HDM (4 недели лечения антителами). На 108-й день исследования всех мышей умерщвляли и собирали легкие. Протокол экспериментального дозирования и лечения для групп мышей продемонстрирован в Таблице 3.

Таблица 3. Протокол экспериментального дозирования и лечения для групп мышей

Группа	Мыши	Агент интраназального воздействия	Продолжительность интраназального воздействия	Антитело
1	мыши HumIn IL33	1X ФСБ	15 недель	Нет
2	мыши HumIn IL33	50 мкг HDM і 20 мкл 1X ФСБ	11 недель	Нет
3	мыши HumIn IL33	50 мкг HDM і 20 мкл 1X ФСБ	15 недель	Нет
4	мыши HumIn IL33	50 мкг HDM і 20 мкл 1X ФСБ	15 недель	Контрольное изотипное антитело
5	мыши HumIn IL33	50 мкг HDM і 20 мкл 1X ФСБ	15 недель	Анти-IL33 антитело (H4H9675P)
6	мыши HumIn IL33	50 мкг HDM і 20 мкл 1X ФСБ	15 недель	Анти-IL-4Rα антитело (M1M1875N)
7	мыши HumIn IL33	50 мкг HDM і 20 мкл 1X ФСБ	15 недель	Анти-IL33 (H4H9675P) антитело + Анти-IL-4Rα (M1M1875N) антитело

Сбор легких для анализа цитокинов. Повышенные уровни ключевых медиаторов в легких, таких как прототипные цитокины типа 2 IL-4, IL-5 и IL-13, а также цитокины, более характерные для иммунных ответов типа 1, такие как IL-1β или ФНОα, вовлечены в развитие заболеваний легких у человека. Уровни данных воспалительных цитокинов в легких были измерены в исследовании.

После обескровливания удаляли краниальные и средние доли правого легкого каждой мыши и помещали в пробирки, содержащие раствор реагента для экстракции тканевого белка (1X T-PER реагент; Pierce, кат. №78510) с добавлением 1X смеси Halt ингибиторов протеаз (Thermo Scientific, кат. №87786). Все дальнейшие стадии были выполнены на льду. Объем реагента T-PER (содержащий смесь ингибиторов протеаз) корректировали для каждого образца для соответствия соотношению 1:7 (масса/объем) ткани к T-PER. Образцы легких механически разрушали с использованием TissueLyser II (Qiagen кат. №85300). Полученные лизаты центрифугировали до осаждения клеточных остатков. Супернатанты, содержащие растворимые белковые экстракты, переносили в свежие пробирки и хранили при 4°С до дальнейшего анализа.

Содержание совокупного белка в белковых экстрактах легкого измеряли с использованием анализа Брэдфорда. Для анализа 10 мкл разведенных образцов экстрактов высевали в 96-луночные плашки в двух повторностях и смешивали с 200 мкл 1X реагента красителя (Biorad, кат. №500-0006). Серийные разведения бычьего сывороточного альбумина (БСА; Sigma, кат. № A7979), начиная с 700 мкг/мл в 1X реагенте T-Per, использовали в качестве стандарта для определения концентрации белка в экстрактах. После 5-минутной инкубации при комнатной температуре измеряли поглощение при 595 нм на устройстве для считывания плашек - Molecular Devices SPECTRAMAX® M5. Анализ данных для определения общего содержания белка в экстракте легкого на основе стандарта в виде БСА проводили с использованием программного обеспечения GraphPad Prism™.

Концентрации цитокинов в белковых экстрактах легкого измеряли с использованием набора (мышиного) для многофакторного иммуноанализа - Proinflammatory Panel 1 (MesoScale Discovery, кат. № K15048G-2), и специального 6-плексного набора для иммуноанализа мыши - MULTI-SPOT® (MesoScale Discovery, кат. № K152A41-4), согласно инструкции производителя. Вкратце, 50 мкл/лунка калибровочных стандартов и образцов (разведенных в Разбавителе 41) добавляли в плашки, предварительно покрытые антителами захвата, и инкубировали при комнатной температуре при встряхивании при 700 об/мин в течение 2 часов. Затем плашки 3 раза промывали 1X ФСБ, содержащим 0,05% (масса/объем) поверхностно-активного вещества TWEEN®-20, с последующим добавлением 25мкл раствора детектирующего антитела, разбавленного в Разбавителе 45. После 2-часовой инкубации при комнатной температуре при встряхивании плашку промывали 3 раза и в каждую лунку добавляли 150мкл 2Х буфера для считывания. Электрохемилюминесценция была немедленно считана на приборе MSD Spector. Анализ данных проводился с использованием программного обеспечения GraphPad Prism.

Каждую концентрацию цитокинов в экстрактах совокупного белка легких у всех мышей в каждой группе нормализовали к содержанию совокупного белка в экстрактах, измеренному с помощью анализа Брэдфорда, и выражали для каждой группы как среднее значение пг цитокина на мг совокупного белка легкого (пг/мг белок легкого, ±СО), как показано в Таблице 4.

Анализ цитокинов легких. Как показано в Таблице 4, уровни цитокинов и хемокинов IL-4, IL-5, IL-6, IL-1β и MCP-1, высвобождаемых в легких мышей HumIn IL33, получавших HDM в течение 15 недель, с лечением или без лечения с помощью контрольного изотипного антитела были значительно выше, чем у мышей HumIn IL33, подвергнутых воздействию только 1X ФСБ. Аналогично, была тенденция к увеличению высвобождения цитокинов IL-13 и ФНОα в легких мышей HumIn IL33, получавших HDM в течение 15 недель. Напротив, было значительное снижение уровней IL-6, IL-13 и MCP-1 в легких мышей HumIn IL33, получавших комбинацию антител анти-IL33 и анти-мышиный IL-4Rα в течение последних четырех недель хронического воздействия HDM по сравнению с мышами HumIn IL33, которым вводили HDM с контрольным изотипным антителом в течение данного периода времени. В течение последних четырех недель хронического воздействия HDM наблюдалась тенденция к снижению уровней IL-4, IL-5, IL-1β и ФНОα в легких у мышей HumIn IL33, получавших комбинацию антител анти-IL33 и анти-мышиный IL-4Rα, по сравнению с мышами HumIn IL33, которым вводили HDM с контрольным изотипным антителом в течение данного периода времени. Эффекты воздействия на цитокины легких, наблюдаемые с комбинацией антител анти-IL33 и анти-мышиный IL-4Rα, были более значительными, чем лечение только отдельными антителами.

Таблица 4. Концентрация цитокинов в белковых экстрактах легкого

Экспериментальная группа	Среднее значение [IL-4] в белковых экстрактах легкого (пг/мг белка легкого) (±СО)	Среднее значение [IL-5] в белковых экстрактах легкого (пг/мг белка легкого) (±СО)	Среднее значение [IL-13] в белковых экстрактах легкого (пг/мг белка легкого) (±СО)	Среднее значение [IL-6] в белковых экстрактах легкого (пг/мг белка легкого) (±СО)	Среднее значение [IL-1β] в белковых экстрактах легкого (пг/мг белка легкого) (±СО)	Среднее значение [ФНОα] в белковых экстрактах легкого (пг/мг белка легкого) (±СО)	Среднее значение [MCP-1] в белковых экстрактах легкого (пг/мг белка легкого) (±СО)
1. Воздействие 1X ФСБ (n=5)	0,13 (±0,17)	0,80 (±1,41)	НО	4,75 (±3,39)	1,97 (±1,67)	2,86 (±1,01)	4,12 (±1,12)
2. Воздействие HDM в течение 11 недель (n=4)	5,71 (±3,76) *	7,31 (±3,67)	0,20 (±0,03)	293,1 (±139,3) *	181,8 (±131,0) *	17,39 (±8,90)	43,06 (±24,21)
3. Воздействие HDM в течение 15 недель (n=4)	2,70 (±1,71)	5,13 (±3,20)	0,19 (±0,03)	308,3 (±390,1)	51,79 (±16,97)	15,38 (±8,11)	105,6 (±106,5) *
4. Воздействие HDM в течение 15 недель+ контрольное изотипное антитело (n=4)	5,46 (±3,38) **	7,00 (±4,50) *	0,22 (±0,02)	395,0 (±270,1) **	162,3 (±166,5) **	19,57 (±14,81)	141,7 (±126,3) **
5. Воздействие HDM в течение 15 недель + анти-IL33 антитело (n=5)	1,15 (±1,38)	1,93 (±1,90)	0,20 (±0,02)	136,8 (±164,1)	122,9 (±194,1)	17,05 (±4,48) *	16,64 (±6,40)
6. Воздействие HDM в течение 15 недель + анти-мышиный IL-4Rα антитело (n=5)	2,88 (±2,43)	13,13 (±12,81) **	0,16 (±0,03)	18,24 (±12,43)	26,73 (±20,94)	7,85 (±4,89)	11,63 (±8,69)
7. Воздействие HDM в течение 15 недель + антитела анти-IL33+ анти-мышиный IL-4Rα (n=5)	0,47 (±0,13)	0,73 (±0,37)	0,10 (±0,05) ^††	7,46 (±2,52) ^†	3,722 (±1,59)	3,07 (±1,34)	4,62 (±1,27) ^††

Примечание: Показана статистическая значимость, определенная однофакторным дисперсионным анализом Крускала-Уоллиса с многофакторным сравнительным ретроспективным критерием Данна (*= p<0,05, **= p<0,01, по сравнению с группами 1: Мыши HumIn IL33, воздействие солевым буфером; ^†p<0,05, ^††p<0,01, по сравнению с группой 4: Мыши HumIn IL33, воздействие HDM в течение 15 недель+контрольное изотипное антитело). НО: Не определено.

Сбор легких для анализа экспрессии генов. После обескровливания у каждой мыши удаляли добавочную долю правого легкого, помещали в пробирки, содержащие 400 мкл RNAlater (Ambion, кат. № AM7020), и хранили при -20°C до обработки. Ткани гомогенизировали в тризоле (TRizol), и хлороформ использовали для разделения фаз. Водную фазу, содержащую совокупную РНК, очищали с использованием набора MagMAX™-96 для выделения совокупной РНК для микрочипов (Ambion by Life Technologies, кат. № AM1839) в соответствии с инструкциями производителя. Геномная ДНК была удалена с помощью буфера MagMAX™Turbo™DNase и TURBO DNase из набора MagMAX, приведенного выше. мРНК (вплоть до 2,5 мкг) был обратно транскрибирована в кДНК с использованием SuperScript® VILO™ Master Mix (Invitrogen by Life Technologies, кат. №11755500). кДНК разводили до 2 нг/мкл, и 10 нг кДНК амплифицировали с помощью TaqMan® Gene Expression Master Mix (Applied Biosystems by Life Technologies, кат. №4369542) и соответствующих зондов (Life Technologies; мышиный B2m: Mm00437762_m1; мышиный Il4: Mm00445259_m1; мышиный Il5: Mm00439646_m1; мышиный Il13: Mm00434204_m1; мышиный Il9: Mm00434305_m1; мышиный Il6: Mm00446190_m1; мышиный Ccl2: Mm00441242_m1; мышиный Ccl11: Mm00441238_m1; мышиный Ccl24: Mm00444701_m1; мышиный Tnf: Mm00443258_m1; мышиный Tgfb1: Mm01178820_m1; мышиный Il1rl1: Mm00516117_m1; мышиный Il13ra2: Mm00515166_m1; мышиный Col15a1: Mm00456584_m1; мышиный Col24a1: Mm01323744_m1;) применяя ABI 7900HT Sequence Detection System (Applied Biosystems). B2m был использован в качестве внутреннего генного контроля для нормализации любых различий вводной кДНК. Контрольной группой, использованной для нормализации всех образцов, было среднее образцов группы 1 («Воздействие 1X ФСБ»). Экспрессия каждого гена была нормализована к экспрессии B2m в том же образце и выражена относительно его нормализованной экспрессии в контрольной группе (среднее значение±среднеквадратичное отклонение), как показано в Таблице 5.

Анализ экспрессии генов в легких. Как показано в Таблице 5, уровни экспрессии генов цитокинов, хемокинов и коллагена Il4, Il13, Il6, Ccl2, Tgfb1, Il13ra2 и Col24a1 в легких мышей HumIn IL33, получавших HDM в течение 15 недель, с обработкой или без обработки контрольным изотипным антителом, были значительно увеличены по сравнению с мышами HumIn IL33, которых подвергали воздействию только 1X ФСБ. Сходным образом наблюдалась тенденция к увеличению экспрессии генов Il5, Il9, Ccl11, Ccl24, Tnf, Il1rl1 и Col15a1 в легких мышей HumIn IL33, получавших HDM в течение 15 недель.

Напротив, наблюдалось значительное снижение уровней экспрессии Il6, Ccl2, Ccl11 и Ccl24 в легких мышей HumIn IL33, получавших комбинацию антител анти-IL33 и анти-мышиный IL-4Rα в течение последних четырех недель хронического воздействия HDM, по сравнению с мышами HumIn IL33, которым вводили HDM с контрольным изотипным антителом в течение данного периода времени. В течение последних четырех недель хронического воздействия HDM наблюдалась тенденция к снижению уровней экспрессии Il4, Il5, Il13, Il9, Tnf, Tgfb1, Il1rl1, Il13ra2, Col15a1 и Col24a1 у мышей, получавших комбинацию антител анти-IL33 и анти-мышиный IL-4Rα, по сравнению с мышами HumIn IL33, которым вводили HDM с контрольным изотипным антителом в течение данного периода времени. Эффекты на экспрессию генов, наблюдаемые с комбинацией антител анти-IL33 и анти-мышиный IL-4Rα, были более значительными, чем при обработке каждым антителом по отдельности.

Таблица 5. Экспрессия генов (TaqMan) в легких мыши.

Экспериментальная группа	Среднее значение относительной экспрессии Il4 в легких (±СО)	Среднее значение относительной экспрессии Il5 в легких (±СО)	Среднее значение относительной экспрессии Il13 в легких (±СО)	Среднее значение относительной экспрессии Il9 в легких (±СО)	Среднее значение относительной экспрессии Il6 в легких (±СО)	Среднее значение относительной экспрессии Ccl2 в легких (±СО)	Среднее значение относительной экспрессии Ccl11 в легких (±СО)	Среднее значение относительной экспрессии Ccl24 в легких (±СО)
1. Воздействие 1X ФСБ (n=5)	1,03 (±0,28)	1,54 (±1,61)	4,51 (±7,59)	15,91 (±34,81)	1,25 (±1,09)	1,20 (±0,93)	1,24 (±1,07)	1,05 (±0,33)
2. Воздействие HDM в течение 11 недель (n=4)	12,78 (±8,45) *	7,13 (±3,49)	114,1 (±68,3) *	38,66 (±30,04)	9,12 (±1,65)	18,86 (±8,40)	13,36 (±5,05)	15,44 (±12,02)
3. Воздействие HDM в течение 15 недель (n=4)	6,27 (±3,39)	4,20 (±1,51)	58,05 (±31,61)	30,63 (±20,54)	8,92 (±4,55)	22,61 (±13,37) *	8,65 (±3,20)	4,58 (±1,91)
4. Воздействие HDM в течение 15 недель+контрольное изотипное антитело (n=4)	10,98 (±5,46) *	5,50 (±3,16)	92,51 (±75,96) *	19,51 (±10,29)	13,80 (±6,98) **	24,53 (±9,13) **	12,14 (±7,82)	12,41 (±8,73)
5. Воздействие HDM в течение 15 недель + анти-IL33 антитело (n=5)	2,80 (±3,11)	1,74 (±1,11)	12,91 (±12,93)	0,00 (±0,00)	3,87 (±3,00)	5,20 (±2,44)	6,21 (±3,55)	1,45 (±2,09)
6. Воздействие HDM в течение 15 недель + анти-мышиный IL-4Rα антитело (n=5)	1,87 (±1,03)	7,98 (±6,52)	69,56 (±66,86) *	63,50 (±92,04)	2,77 (±1,39)	2,97 (±1,86)	1,00 (±0,18)	0,44 (±0,34)
7. Воздействие HDM в течение 15 недель + антитела анти-IL33+анти-мышиный IL-4Rα (n=5)	1,37 (±0,35)	1,56 (±0,97)	9,34 (±3,10)	0,57 (±1,27)	1,04 (±0,31) ^††	1,08 (±0,24) ^††	0,72 (±0,28) ^†	0,15 (±0,10) ^††

Таблица 5. Продолжение: Экспрессия генов (TaqMan) в легких мыши.

Экспериментальная группа	Среднее значение относительной экспрессии Tnf в легких (±СО)	Среднее значение относительной экспрессии Tgfb1 в легких (±СО)	Среднее значение относительной экспрессии Il1rl1 в легких (±СО)	Среднее значение относительной экспрессии Il13ra2 в легких (±СО)	Среднее значение относительной экспрессии Col15a1 в легких (±СО)	Среднее значение относительной экспрессии Col24a1 в легких (±СО)
1. Воздействие 1X ФСБ (n=5)	1,02 (±0,24)	1,00 (±0,11)	1,11 (±0,58)	1,59 (±1,96)	1,00 (±0,10)	1,02 (±0,16)
2. Воздействие HDM в течение 11 недель (n=4)	1,45 (±0,41)	1,40 (±0,27)	3,03 (±0,88) *	48,43 (±34,21)	2,75 (±0,96)	24,55 (±7,97) **
3. Воздействие HDM в течение 15 недель (n=4)	1,58 (±0,43)	1,32 (±0,33)	2,53 (±0,79) *	32,07 (±13,45)	3,00 (±1,22)	17,25 (±5,29) *
4. Воздействие HDM в течение 15 недель+контрольное изотипное антитело (n=4)	1,59 (±0,78)	1,37 (±0,12) *	3,45 (±1,48) *	52,02 (±40,63)	3,80 (±0,96) *	23,58 (±6,18) ***
5. Воздействие HDM в течение 15 недель + анти-IL33 антитело (n=5)	1,38 (±0,27)	1,22 (±0,24)	0,99 (±0,47)	13,54 (±12,25)	1,64 (±0,30)	10,58 (±5,42)
6. Воздействие HDM в течение 15 недель + анти-мышиный IL-4Rα антитело (n=5)	1,00 (±0,25)	1,13 (±0,20)	3,38 (±1,97)	1,89 (±0,59)	1,24 (±0,28)	7,08 (±4,56)
7. Воздействие HDM в течение 15 недель + антитела анти-IL33+анти-мышиный IL-4Rα (n=5)	0,68 (±0,08)	1,09 (±0,12)	1,12 (±0,57)	1,89 (±0,27)	0,74 (±0,21) ^††	1,76 (±0,15) ^†

Примечание: Показана статистическая значимость, определенная однофакторным дисперсионным анализом Крускала-Уоллиса с многофакторным сравнительным тестом Данна (*= p<0,05, **= p<0,01, ***= p<0,01, по сравнению с группами 1: мыши HumIn IL33, воздействие солевым буфером; p<0,05, p<0,01, по сравнению с группой 3: мыши HumIn IL33, воздействие HDM в течение 15 недель; ^†p<0,05, ^††p<0,01, по сравнению с группой 4: Мыши HumIn IL33, воздействие HDM в течение 15 недель+контрольное изотипное антитело).

Сбор легких для анализа клеточного инфильтрата легких. Легочная инфильтрация иммунными клетками наблюдается при множестве воспалительных заболеваниях дыхательных путей, включая астму и ХОБЛ. Нейтрофильное воспаление легких связывают с пониженной функцией легких и тяжелым ремоделированием тканей у пациентов с астмой. Эозинофильное воспаление легких является признаком воспаления 2-го типа, обычно наблюдаемого при атопических заболеваниях. У людей высокие соотношения CD4/CD8 наблюдаются у пациентов с гранулематозными заболеваниями легких и другими хроническими воспалительными патологиями. Проточная цитометрия была использована в исследовании для определения уровня клеточной инфильтрации в легких у мышей, подвергшихся воздействию HDM.

После обескровливания хвостовую долю правого легкого каждой мыши извлекали, нарезали кубиками размером примерно от 2 до 3 мм и затем помещали в пробирку, содержащую раствор 20 мкг/мл ДНКазы (Roche, кат. №10104159001) и 0,7 Ед/мл Liberase TH (Roche, кат. №05401151001), разбавленной в сбалансированном солевом растворе Хэнка (HBSS) (Gibco, кат. №14025), который инкубировали на водяной бане при 37°C в течение 20 минут и встряхивали каждые 5 минут. Реакцию останавливали добавлением этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТК, Gibco, кат. №15575) в конечной концентрации 10 мМ. Каждое легкое впоследствии диссоциировали с использованием диссоциатора gentleMACS (Miltenyi Biotec, кат. №130-095-937), затем фильтровали через фильтр 70 мкм и центрифугировали. Полученный осадок легкого ресуспендировали в 1 мл 1X буфера для лизиса эритроцитов (Sigma, кат. № R7757) для удаления эритроцитов. После инкубации в течение 3 минут при комнатной температуре добавляли 3 мл 1X DMEM для дезактивации буфера для лизиса эритроцитов. Затем клеточные суспензии центрифугировали и полученные клеточные осадки ресуспендировали в 5 мл буфера MACS (рабочий буфер AutoMACS; Miltenyi Biotec, кат. №130-091-221). Ресуспендированные образцы фильтровали через фильтр 70 мкм и 1×10⁶ клеток/лунка высевали в 96-луночную плашку с V-образным дном. Затем клетки центрифугировали и осадки промывали в 1X ФСБ. После второго центрифугирования клеточные осадки ресуспендировали в 100 мкл LIVE/DEAD Fixable Blue Dead Cell Stain (Life Technologies, кат. № L23105), разведенного 1:500 в 1X ФСБ для определения жизнеспособности клеток, и инкубировали в течение 20 минут при комнатной температуре с защитой от света. После одной промывки в 1X ФСБ клетки инкубировали в растворе буфера MACS, содержащем 10 мкг/мл очищенного крысиного анти-мышиного CD16/CD32 Fc-блока (Clone: 2.4G2; BD Biosciences, кат. №553142), в течение 10 минут при 4 °C. Затем клетки инкубировали в подходящей 2x смеси антител (описано в Таблице 6), разведенной в буфере MACS, в течение 30 минут при 4°C с защитой от попадания света. После инкубации антител клетки дважды промывали в буфере MACS, ресуспендировали в BD CytoFix (BD Biosciences, кат. №554655) и затем инкубировали в течение 15 минут при 4°C с защитой от попадания света. Затем клетки промывали, ресуспендировали в буфере MACS, и затем переносили в пробирки BD FACS (BD Biosciences, кат. №352235) для анализа клеточных инфильтратов методом проточной цитометрии.

Т-лимфоциты CD4 и CD8 определяли как клетки, которые были живы, CD45⁺, SSC^Lo, FSC^Lo, CD3⁺, CD19^-, CD4⁺, CD8^-и живы, CD45⁺, SSC^Lo, FSC^Lo, CD3⁺, CD19^-, CD4^-, CD8⁺ соответственно. Активированные CD4 Т-лимфоциты определяли как клетки, которые были живы, CD45⁺, SSC^Lo, FSC^Lo, CD3⁺, CD19^-, CD4⁺, CD8^-, и CD69⁺. Активированные CD8 Т-лимфоциты определяли как клетки, которые были живы, CD45⁺, SSC^Lo, FSC^Lo, CD3⁺, CD19^-, CD4^-, CD8⁺, и CD69⁺. Активированные В-лимфоциты определяли как клетки, которые были живы, CD45⁺, SSC^Lo, FSC^Lo, CD3^-, CD19⁺, и CD69⁺. ST2+ CD4+ T лимфоциты определяли как клетки, которые были живы, CD45⁺, SSC^Lo, FSC^Lo, CD3+, CD19-, ST2+ и CD4⁺. Эозинофилы определяли как живые, CD45⁺, GR1^-, CD11c^lo, SiglecF^hi. Альвеолярные макрофаги определяли как живые, CD45⁺, GR1^-, CD11c^Hi, SiglecF^hi. Данные для активированных клеток выражены в виде частоты активированных клеток (CD69⁺) в исходной популяции (CD4, ±СО). Данные для ST2+ CD4+ T-лимфоцитов выражаются как частота T-лимфоцитов (определяются как клетки, которые были живы, CD45⁺, SSC^Lo, FSC^Lo, CD3+ и CD19-). Данные для эозинофилов и альвеолярных макрофагов выражены в виде частоты живых клеток. Соотношение CD4/CD8 T-лимфоцитов рассчитывается как отношение частоты CD4 T-лимфоцитов к частоте CD8 T-лимфоцитов в живой популяции. Все данные приведены в Таблице 7.

Таблица 6. Антитела, используемые для анализа проточной цитометрией

Антитело	Флюорохром	Производитель	Номер по каталогу	Конечное разведение
CD45.2	PerCP-Cy5.5	eBioscience	45-0454	1/800
Siglec-F	BV 421	BD	562681	1/200
F4/80	APC	eBioscience	17-4801-82	1/200
Ly6G	BUV395	BD	563978	1/200
Ly6C	PE-Cy7	BD	560593	1/100
CD11c	PE	eBioscience	12-0114-82	1/200
CD11b	FITC	eBioscience	53-0112-82	1/200
CD19	BV650	BD	562701	1/400
CD3	PE-Cy7	BD	552774	1/200
CD4	BV421	BioLegend	100438	1/200
CD8	BUV 395	BD	563786	1/400
NKp46 (CD335)	FITC	eBioscience	11-3351	1/800
CD69	PE	eBioscience	12-0691	1/200
CD25	BV510	BioLegend	102042	1/200
ST2	APC	BioLegend	145306	1/200

Анализ клеточного инифильтрата легких. Как показано в Таблице 7, частоты эозинофилов, активированных B-лимфоцитов, активированных CD8-клеток, ST2+Cd4+T-лимфоцитов и CD4/CD8 T-лимфоцитов в легких у мышей HumIn IL33, получающих HDM в течение 15 недель, с лечением контрольным изотипным антителом или без него, были значительно выше, чем у мышей HumIn IL33, которых подвергали воздействию только 1X ФСБ. Аналогично, была тенденция к увеличению частоты активированных CD4 Т-лимфоцитов в легких у мышей HumIn IL33, получавших HDM в течение 15 недель. Наблюдалась тенденция к уменьшению частоты альвеолярных макрофагов, обнаруживаемых проточной цитометрией в легких у мышей HumIn IL33, получавших HDM в течение 15 недель, при обработке контрольным изотипным антителом или без него. Частота альвеолярных макрофагов была значительно увеличена в легких у мышей HumIn IL33, получавших комбинацию антител анти-IL33 и анти-мышиный IL-4Rα в течение последних четырех недель хронического воздействия HDM, по сравнению с мышами HumIn IL33, которым вводили HDM с контрольным изотипным антителом в течение данного периода времени. Точно так же наблюдалась тенденция к снижению частоты эозинофилов, активированных CD4 и CD8 T-лимфоцитов, активированных B-лимфоцитов, ST2+ CD4+ T-лимфоцитов, а также соотношения CD4/CD8 T-лимфоцитов в легких мышей, получавших комбинацию антител анти-IL33 и анти-мышиный IL-4Rα в течение последних четырех недель хронического воздействия HDM, по сравнению с мышами HumIn IL33, которым вводили HDM с контрольным изотипным антителом в течение данного периода времени. Влияние на частоту эозинофилов, альвеолярных макрофагов, активированных CD8 T-лимфоцитов, ST2+ CD4+ T-лимфоцитов и соотношение CD4/CD8 в легких, наблюдаемые для комбинации антител анти-IL33 и анти-мышиный IL-4Rα, демонстрирует тенденцию к большей эффективности, чем лечение каждым антителом по отдельности.

Таблица 7. Частота клеточного инфильтрата легких по данным проточной цитометрии

Экспериментальная группа	Средняя частота эозинофилов в живой популяции (±СО)	Средняя частота альвеолярных макрофагов в живой популяции (±СО)	Среднее соотношение CD4/CD8 Т-лимфоцитов (±СО)	Средняя частота активированных клеток в популяции CD4 Т-лимфоцитов (±СО)	Средняя частота активированных клеток в популяции CD8 Т-лимфоцитов (±СО)	Средняя частота активированных клеток в популяции В-лимфоцитов (±СО)	Средняя частота ST2+ CD4+ клеток в популяции Т-лимфоцитов (±СО)
1. Воздействие 1X ФСБ (n=5)	1,45 (±0,92)	5,05 (±1,64)	3,00 (±1,48)	13,12 (±9,89)	3,26 (±1,64)	0,39 (±1,17)	3,25 (±4,15)
2. Воздействие HDM в течение 11 недель (n=4)	17,08 (±3,94) *	2,34 (±0,93)	6,42 (±2,71)	49,95 (±8,76)	9,58 (±7,44)	4,67 (±1,47) **	32,60 (±12,23)
3. Воздействие HDM в течение 15 недель (n=4)	15,40 (±3,99) *	4,92 (±1,55)	6,95 (±0,71) **	58,53 (±5,76)	15,68 (±3,03) *	3,70 (±1,44) *	37,33 (±8,98) *
4. Воздействие HDM в течение 15 недель+контрольное изотипное антитело (n=4)	15,00 (±3,35) *	2,33 (±1,60)	7,49 (±1,28) *	57,75 (±7,64)	14,59 (±3,82)	3,90 (±1,48) *	37,96 (±16,71) *
5. Воздействие HDM в течение 15 недель + анти-IL33 антитело (n=5)	8,51 (±7,52)	7,44 (±4,18)	4,03 (±1,28)	48,22 (±5,66)	13,86 (±5,21)	1,72 (±0,72)	19,24 (±5,72)
6. Воздействие HDM в течение 15 недель + анти-мышиный IL-4Rα антитело (n=5)	12,30 (±7,83)	9,93 (±5,18)	5,56 (±2,22)	53,42 (±6,52)	13,11 (±6,26)	2,14 (±1,23)	35,01 (±9,83) *
7. Воздействие HDM в течение 15 недель + антитела анти-IL33+анти-мышиный IL-4Rα (n=5)	3,78 (±1,60)	14,64 (±3,86) ^†	2,96 (±0,93)	42,52 (±9,79)	7,90 (±1,30)	1,74 (±0,91)	11,78 (±3,73)

Примечание: Показана статистическая значимость, определенная однофакторным дисперсионным анализом Крускала-Уоллиса с многофакторным сравнительным ретроспективным критерием Данна (*= p<0,05, **= p<0,01, по сравнению с группами 1: Мыши HumIn IL33, воздействие солевым буфером; ^†p<0,05, по сравнению с группой 4: Мыши HumIn IL33, воздействие HDM в течение 15 недель+контрольное изотипное антитело).

Сбор легкого для количественной оценки гистопатологии. Характер воспаления, наблюдаемый в этой модели, сопровождается широко распространенными и серьезными структурными изменениями в легких, подвергшихся воздействию HDM, с признаками метаплазии бокаловидных клеток, увеличением субэпителиального отложения коллагена и значительным уплотнением легких. Данные патологии являются известными признаками воспалительных заболеваний дыхательных путей человека, которые способствуют снижению функции легких и гиперреактивности дыхательных путей.

После обескровливания левые легкие удаляли и помещали в чашки, содержащие 3 мл раствора 4% (масса/объем) параформальдегида (Boston Bioproducts, кат. № BM-155) в 1X забуференном фосфатом солевом растворе, и хранили при комнатной температуре в течение 3 дней. Образцы легких затем промокали досуха и переносили в пробирки, содержащие 70% этанол, для гистологического анализа. Образцы были отправлены в Histoserv, Inc (Джермантаун, Мэриленд) для заливки парафином, подготовки срезов и окрашивания по Шиффу (PAS) или гематоксилином и эозином (H&E).

Количественная оценка метаплазии бокаловидных клеток. Метаплазия бокаловидных клеток и гиперсекреция слизи являются отличительными признаками многих заболеваний легких, включая астму, хроническую обструктивную болезнь легких и муковисцидоз. Чрезмерное образование слизи приводит к обструкции дыхательных путей и влияет на несколько важных параметров, таких как функция легких, связанное со здоровьем качество жизни, обострения, госпитализации и смертность людей. PAS-положительные бокаловидные клетки и общие эпителиальные клетки были подсчитаны в миллиметровом отрезке первичного бронха. Метаплазия бокаловидных клеток выражается в виде частоты PAS-положительных клеток в миллиметре эпителия бронхов (%,±СО), как показано в Таблице 8.

Количественная оценка уплотнения легких. Уплотнение легких включает в себя накопление твердого или жидкого вещества в альвеолярном пространстве. Уплотнение легких представляет собой сложный измеряемый параметр, который, вероятно, отражает комбинацию клеточного инфильтрата, гиперплазии и образования слизи, который используется в данном документ для измерения совокупной патологии. Доля площади легких, занимаемая кристаллическими телами, определялась количественно на пентахромно окрашенных по Мовату парафиновых срезах легкого, с использованием программного обеспечения ImageJ (NIH, Bethesda, MD). Используя функцию анализа частиц, измеряли общую площадь легких в разрезе, а также уплотненную площадь в разрезе. Доля уплотненной площади легких определяется отношением обоих измерений, как показано в Таблице 8.

Количественная оценка субэпителиального фиброза. Субэпителиальный фиброз включает в себя избыток отложения интерстициального коллагена под легочным эпителием. Сообщалось, что увеличение субэпителиального фиброза специфически связано с астмой у людей. В данной модели субэпителиальный фиброз измеряли на трихром окрашенных по Массону парафиновых срезах легкого с использованием программного обеспечения HaLo (Indica Labs, NM). С помощью инструмента для определения толщины несколько раз измеряли толщину коллагенового слоя под эпителием бронхов с интервалами примерно 30 мкм, на миллиметре первичного бронха. Субэпителиальный фиброз выражается как средняя толщина слоя коллагена под эпителием (мкм, ±СО), как показано в Таблице 8.

Анализ гистопатологии легких. Как показано в Таблице 9, наблюдалась тенденция к увеличению метаплазии бокаловидных клеток в легких мышей HumIn IL33, получавших HDM в течение 15 недель, с обработкой контрольным изотипным антителом или без нее, по сравнению с мышами HumIn IL33, которым вводили только 1X ФСБ. Точно так же наблюдалось значительное увеличение уплотнения легких, а также толщины субэпителиального коллагена у мышей HumIn IL33, получавших HDM в течение 15 недель.

Напротив, наблюдалась тенденция к снижению метаплазии бокаловидных клеток и толщины субэпителиального коллагена, а также к значительному снижению уплотнения легких у мышей HumIn IL33, получавших комбинацию антител анти-IL33 и анти-мышиный IL-4Rα в течение последних четырех недель хронического воздействия HDM, по сравнению с мышами HumIn IL33, которым вводили HDM с контрольным изотипным антителом в течение данного периода времени. Эффекты на метаплазию бокаловидных клеток, уплотнение легких и толщину субэпителиального коллагена, наблюдаемые для комбинации антител анти-IL33 и анти-мышиный IL-4Rα, продемонстрировали тенденцию к большей эффективности, чем при обработке каждым антителом по отдельности.

Таблица 8. Количественная оценка гистопатологии в легких мыши

Экспериментальная группа	Среднее значение метаплазии бокаловидных клеток (% PAS-положительные клетки) (±СО)	Среднее значение уплотнения легких (% ±СО)	Среднее значение толщины субэпителиального коллагена (мкм) (±СО)
1. Воздействие 1X ФСБ (n=5)	32,94 (±43,61)	6,97 (±3,72)	25,90 (±4,00)
2. Воздействие HDM в течение 11 недель (n=4)	59,98 (±39,01)	70,70 (±12,94)	81,76 (±25,37)*
3. Воздействие HDM в течение 15 недель (n=4)	92,15 (±10,16)	83,21 (±3,65)**	82,12 (±23,04)*
4. Воздействие HDM в течение 15 недель+контрольное изотипное антитело (n=4)	81,60 (±17,56)	84,16 (±5,85)**	63,11 (±11,87)
5. Воздействие HDM в течение 15 недель+анти-IL33 антитело (n=5)	39,22 (±18,93)	58,82 (±18,26)	70,99 (±23,85)
6. Воздействие HDM в течение 15 недель+анти-мышиный IL-4Rα антитело (n=5)	79,82 (±25,02)	57,79 (±18,72)	57,62 (±15,34)
7. Воздействие HDM в течение 15 недель+антитела анти-IL33+анти-мышиный IL-4Rα (n=5)	19,69 (±8,80)	35,01 (±20,68)	48,19 (±18,58)

Примечание: Показана статистическая значимость, определенная однофакторным дисперсионным анализом Крускала-Уоллиса с многофакторным сравнительным ретроспективным критерием Данна (**= p<0,01, по сравнению с группами 1: мыши HumIn IL33, воздействие солевым буфером).

Сбор сыворотки для измерения уровней IgE и HDM-специфического IgG1. Для определения общей концентрации IgE в образцах сыворотки для каждой мыши использовали набор сэндвич-ИФА OPTEIA (BD Biosciences, кат. №555248) в соответствии с инструкциями производителя. Образцы сыворотки разбавляли и инкубировали с захватывающим антителом против IgE, которым были покрыты 96-луночные плашки. Общий IgE определяли с помощью биотинилированного вторичного анти-мышиного IgE антитела. В качестве стандарта использовали мышиный IgE, меченный очищенной пероксидазой хрена (HRP). Хромаген 3,3',5,5'-тетраметилбензидин (TMB) (набор реагентов субстрата BD OPTEIA, BD, кат. №555214) использовали для определения активности HRP. Затем добавляли стоп-раствор 1 М серной кислоты и измеряли поглощение при 450 нм на считывателе плашек Molecular Devices SpectraMax M5. Анализ данных проводился с использованием программного обеспечения Prism™. Средние количества циркулирующих IgE в сыворотке для каждой экспериментальной группы выражены в нг/мл (±СО), как показано в Таблице 9.

Для определения специфичных для HDM уровней lgG1 в образцах сыворотки от каждой мыши использовали ИФА. Плашки, покрытые HDM (Greer, кат. № XPB70D3A2.5), инкубировали с серийно разведенными образцами мышиной сыворотки с последующей инкубацией с анти-мышиный IgG1-HRP конъюгированным антителом крысы (BD Biosciences, кат. №559626). Все образцы были подготовлены с использованием раствора TMB и проанализированы, как описано выше. Относительные уровни циркулирующего lgG1 в сыворотке были представлены в виде единиц титра (единицы титра были рассчитаны путем умножения измеренного OD на коэффициент разбавления, необходимый для достижения OD450, который был выше фонового значения в два раза). Средние уровни циркулирующего HDM-специфического lgG1 в сыворотке для каждой экспериментальной группы выражены в виде титра х 10⁶ (±СО), как показано в Таблице 9.

Анализ уровней циркулирующих IgE и HDM-специфического IgG1. Как показано в Таблице 9, наблюдалось значительное повышение уровней циркулирующего IgE в сыворотке мышей HumIn IL33, получавших HDM в течение 15 недель, с обработкой контрольным изотипным антителом или без нее, у мышей HumIn IL33, подвергавшихся воздействию только 1X ФСБ. Аналогично, была тенденция к увеличению уровня циркулирующего HDM-специфического IgG1 в сыворотке мышей HumIn IL33, получавших HDM в течение 15 недель. Напротив, наблюдалось значительное снижение уровней IgE в кровотоке и тенденция к снижению уровней HDM-специфического IgG1 в сыворотке мышей HumIn IL33, получавших комбинацию антител анти-IL33 и анти-мышиный IL-4Rα в течение последних четырех недель хронического воздействия HDM, по сравнению с мышами HumIn IL33, которым вводили HDM с контрольным изотипным антителом.

Таблица 9. Уровни циркулирующих IgE и HDM-специфического IgG1 в мышиной сыворотке.

Экспериментальная группа	Средние уровни циркулирующего IgE (мкг/мл) (±СО)	Средние уровни циркулирующего HDM-специфического IgG1 (титр × 10⁶) (±СО)
1. Воздействие 1X ФСБ (n=5)	2,16 (±2,02)	НО
2. Воздействие HDM в течение 11 недель (n=4)	50,16 (±8,35)	1,18 (±0,15)
3. Воздействие HDM в течение 15 недель (n=4)	131,38 (±106,84) *	1,88 (±0,81)
4. Воздействие HDM в течение 15 недель+контрольное изотипное антитело (n=4)	193,07 (±78,96) ***	1,62 (±0,62)
5. Воздействие HDM в течение 15 недель+анти-IL33 антитело (n=5)	45,74 (±45,74)	1,76 (±0,98)
6. Воздействие HDM в течение 15 недель+анти-мышиный IL-4Rα антитело (n=5)	11,12 (±8,65)	0,99 (±0,56)
7. Воздействие HDM в течение 15 недель+антитела анти-IL33+анти-мышиный IL-4Rα (n=5)	6,45 (±5,79) ^†	0,75 (±0,30)

Примечание: Показана статистическая значимость, определенная однофакторным дисперсионным анализом Крускала-Уоллиса с многофакторным сравнительным тестом Данна (*= p<0,05, **= p<0,01, ***= p<0,001, по сравнению с группами 1: Мыши HumIn IL33, воздействие солевым буфером; ^†p<0,05, по сравнению с группой 4: Мыши HumIn IL33, воздействие HDM в течение 15 недель+контрольное изотипное антитело). НО: Не определено.

Комбинация лечения H4H9675P и анти-mIL-4Rα, начатого в контексте тяжелого смешанного воспаления, улучшает все измеренные параметры воспаления, снижая большинство до базовых уровней. Кроме того, аддитивные эффекты наблюдаются для некоторых наиболее опасных измеряемых параметров, включая общую патологию легких, метаплазию бокаловидных клеток, клеточную инфильтрацию легких и уровни цитокинов. Следовательно, одновременная блокировка обоих путей обладает потенциалом влиять на множество медиаторов воспаления в контексте тяжелого смешанного воспаления и патологии ткани, и нормализовать множество параметров до исходного уровня.

Пример 2

Генетические варианты IL33 и его рецепторов связаны как с эозинофильной астмой, так и с ХОБЛ.

В этом Примере взаимосвязь между ранее идентифицированными вариантами риска астмы в IL33 и IL1RL1 с риском астмы, ХОБЛ и СПАХ была исследована в самой большой совокупности таких случаев, собранной когда-либо, в которых генетические данные связаны с электронными медицинскими записями. Была изучена важность данных вариантов для эозинофильных подгрупп астмы, ХОБЛ и СПАХ, а также для связанных заболеваний верхних дыхательных путей, таких как полипы носовой полости. Кроме того, была оценена связь между предсказанными вариантами потери функции (pLOF - predicted loss-of-function) в IL1RL1 и IL33, и этими заболеваниями.

Органы контроля исследований генетики человека. Исследования генетики человека проводились в рамках исследования DiscovEHR Центра генетики Regeneron (RGC) и системы здравоохранения Geisinger (GHS).

Участники DiscovEHR и определения заболеваний. На момент проведения данного исследования, исследование DiscovEHR охватывало 92323 взрослых человека, которые были включены в Инициативу общественного здравоохранения MyCode® GHS. Для этого исследования 86004 и 83339 человек европейского происхождения имели для анализа данные по фенотипу, а также секвенированию экзома и генотипу, соответственно. Участники были набраны из амбулаторных клиник первичной помощи и специализированных клиник. Количества эозинофилов и коды диагностированных заболеваний (Международная классификация болезней, девятая редакция [ICD-9]) были получены из ЭМК (электронная медицинская карта), которые охватывали в среднем 14 лет клинической помощи. Задокументированные в ЭМК средние количества эозинофилов были получены из полных анализов крови после удаления вероятно ложных значений, которые были >3 стандартных отклонения от медианного значения внутри показателей отдельного индивида. Статус дела присваивался на основе кодов ICD-9, если был выполнен хотя бы один из следующих критериев: (1) запись диагностического кода в проблемном списке; или (2) код диагноза при приеме, введенный для двух отдельных клинических приемов в разные календарные дни. Индивидам приписывали один или большее количество из трех классификационных случаев (астма, ХОБЛ и СПАХ) на основе диагностических кодов ICD-9.

Контрольные пациенты для всех анализов бинарных признаков были определены как индивиды без единого диагностического кода ICD-9 астмы или ХОБЛ.

Секвенирование и генотипирование. Были выполнены пробоподготовка и секвенирование всего экзома. Вкратце, захват экзома производился с использованием зондов NimbleGen (Roche, SeqCap VCRome) или зондов Integrated DNA Technologies (IDT, панель xGEN Exome Research) с дополнительной информацией в соответствии с рекомендуемым протоколом соответствующего производителя. Захваченную ДНК амплифицировали с помощью ПЦР и количественно определяли с помощью количественной РВ-ПЦР (Kapa Biosystems). Объединенные образцы секвенировали с использованием секвенирования спаренных концов 75 п.н. на секвенаторах Illumina v4 HiSeq 2500 или HiSeq X до глубины покрытия, достаточной для обеспечения более чем 20-кратной глубины считывания гаплоидного набора более чем на 85% целевых оснований в 96% образцов (примерно 80-кратное среднее значение глубины чтения целевых оснований гаплоидного набора). Необработанные данные последовательностей из каждого прогона Illumina HiSeq 2500 были загружены на платформу DNAnexus для выравнивания считанных последовательностей и идентификации вариантов. Необработанные данные последовательностей были преобразованы из файлов BCL в образец-специфичные FASTQ-файлы, которые были выровнены с эталонной сборкой человека GRCh38 с BWA-mem. Варианты единичных нуклеотидов (ВЕН) и варианты вставки/делеции (indel) последовательностей были идентифицированы с использованием Genome Analysis Toolkit. Образцы с показателем генотипа меньше чем 10% были исключены. Для окончательного анализа экзомные данные были доступны для 59082 и 29504 индивидов с европейской родословной, полученные с использованием наборов зондов VCRome xGEN, соответственно.

Аликвоты ДНК были генотипированы с использованием Human OmniExpress Exome Beadchip или Global Screening Array (Illumina Corp.). Для окончательного анализа данные из чипов были доступны для 56239 и 28500 инивидов европейского происхождения, которые были проанализированы на Omni и GSA BeadChips соответственно.

Дизайн исследования и статистический анализ. Данные OMNI и GSA Chip использовались для оценки двух ранее идентифицированных вариантов риска астмы (IL33 (rs1342326) и IL1RL1 (rs1420101)) для обнаружения связи с обструктивными заболеваниями легких, другими заболеваниями дыхательных путей и количеством циркулирующих эозинофилов. Эти варианты были протестированы на связь с заболеванием в аддитивной модели с использованием логистической регрессии в PLINK или R, включая возраст, возраст², пол, статус курения и первые четыре основных компонента происхождения в качестве ковариат. Медианные ЭМК-задокументированные количества эозинофилов были лог-трансформированы и проанализированы на связь с генотипами в рамках аддитивной генетической модели с использованием линейных (PLINK, R) моделей, контролирующих те же самые ковариаты, как указано выше. Все значения р соответствуют аддитивным генетическим моделям. Итоговые статистические данные анализа на обеих платформах были объединены метаанализом.

В соответствии с той же статистической схемой экзомные данные использовались для выявления связей между вариантами pLOF, агрегированными в IL1RL1 или IL33, и исходами заболевания легких и количеством эозинофилов. Для каждого гена индивидам приписывали 0, если они не несут какого-либо pLOF, и 1, если они были гетерозиготными носителями по меньшей мере одного pLOF; в данном исследовании не было обнаружено гомозиготных носителей pLOF для IL1RL1 или IL33. Итоговые статистические данные анализа на обеих платформах были объединены метаанализом.

Показатель генетического риска, отражающий сумму аллелей риска для двух независимых вариантов (IL33 (rs1342326) и IL1RL1 (rs1420101)), также использовался в качестве предсказателя исходов обструктивного заболевания легких и количества эозинофилов с использованием моделей логистической и линейной регрессии и тех же ковариат, описанных выше. Индивиды, у которых отсутствовали данные по генотипу для одного или обоих вариантов, были исключены. Эффекты обладания одним, двумя, тремя или четырьмя аллелями риска определялись раздельно по отношению к индивидам, не являющимся носителями аллеля риска ни в одном из вариантов. Тенденции между увеличением показателя и увеличением количества эозинофилов или риском заболевания были проверены с использованием линейной регрессии и критерия Кохрана-Армитиджа, соответственно.

Все статистические анализы были выполнены с использованием программного обеспечения PLINK (v1.90p) или R версии 3.2.1.

Подтверждение ранее выявленных вариантов риска развития астмы по IL33 и IL1RL1 с использованием количества эозинофилов DiscovEHR и астмы, определенной по ЭМК. Клинические характеристики участников MyCode® в исследовании DiscovEHR описаны в Фиг. 8. Среди 86004 пациентов с европейским происхождением, экзом которых был секвенирован в данном исследовании, у 13267 (15,4%) пациентов была диагностирована астма, у 9783 (11,4%) пациентов - ХОБЛ, и у 2993 (3,4%) пациентов - астма и ХОБЛ (называется в данном документе синдромом перекрывающихся астмы-ХОБЛ, или СПАХ). Среди 83339 пациентов европейского происхождения с имеющимися данными Chip для данного исследования, у 12832 (15,4%) пациентов была диагностирована астма, у 9536 (11,4%) пациентов - ХОБЛ, и у 2909 (3,5%) пациентов - СПАХ.

Первое большое ПГИА для астмы идентифицировало интронный вариант IL1RL1 (rs1420101), который был связан как с астмой, так и с количеством циркулирующих эозинофилов, а последующее ПГИА идентифицировало вышерасположенный вариант IL33 (rs1342326), который был связан с астмой. В данном исследовании была подтверждена связь rs1420101 (IL1RL1) и rs1342326 (IL33) с астмой (метааллельное отношение шансов (OR_allelic)) (95% доверительный интервал) 1,07 (1,04-1,11), P=8,2×10^-7 и Meta-OR_allelic 1,09 (1,05-1,16), P=6,0×10^-6, соответственно) (Фиг. 3).

Кроме того, оба варианта были связаны с медианным количеством циркулирующих эозинофилов в течение жизни (n=66,776 индивидов) (Meta-beta=0,0066 (0,0054-0,0079) эозин/мл, P=2,0×10^-23 и Meta-beta=0,0061 (0,0045-0,0078) эозин/мл, P=2,0×10^-13, соответственно.

Связи IL33 и IL1RL1 с астмой специфичны для эозинофильной подгруппы. Эозинофильная астма признана важной подгруппой астмы и, по-видимому, связана с повышенной тяжестью астмы и нечувствительностью к стероидам, а также с разной чувствительностью к биологической терапии. Подтвердив ранее описанные связи между вариантами IL33 и IL1RL1 и количеством эозинофилов, а также астмой, независимо оцениваемыми как отдельные фенотипы, в следующем исследовании было оценено, связаны ли эти риски специфической связью с эозинофильной подгруппой астмы, и, следовательно, связи в подгруппе пациентов с астмой, стратифицировали по высокому (>200 эозин/мкл) и низкому (≤200 эозин/мкл) медианному количеству эозинофилов в течение жизни (Фиг 3). Оба варианта: IL33 (rs1342326) и IL1RL1 (rs1420101) были достоверно связаны только с подгруппой эозинофильной астмы (для IL33 метаалельное отношение шансов составило 1,12 (1,06-1,18) в группе с высоким уровнем эозинофилов по сравнению с 1,04 (0,98-1,09) в группе с низким уровнем эозинофилов; для IL1RL1 аллельное отношение шансов составило 1,07 (1,04-1,1) в группе с высоким уровнем эозинофилов по сравнению с 1,02 (0,98-1,06) в группе с низким уровнем эозинофилов (Фиг. 3).

Новые связи между вариантами риска астмы в IL33 и IL1RL1 и повышенным риском ХОБЛ и СПАХ, особенно в эозинофильных подгруппах. В дополнение к вышеуказанным связям с эозинофильной астмой, было также обнаружено, что варианты IL33 (rs1342326) и IL1RL1 (rs1420101) предположительно или с минимальной достоверностью связаны с ХОБЛ (Фиг. 4, для IL33, Meta OR_allelic=1,04 (0,99-1,09), P=8,9×10^-2, и для IL1RL1, Meta-OR_allelic=1,04 (1-1,07), P=3,9×10^-2) и СПАХ (Фиг. 5 для IL33, Meta OR_allelic 1,08 (1,0-1,16), P=3,8×10^-2, и для IL1RL1, 1,06 (1,0-1,12), P=4,8×10^-2).

Как и в случае с астмой, эозинофильные подгруппы ХОБЛ и СПАХ связаны с более тяжелым заболеванием. Чтобы определить, были ли связи между IL33 и IL1RL1 и ХОБЛ и ACOS также специфичными для эозинофильных подгрупп, как это наблюдалось при астме, связи между IL33 (rs1342326) и IL1RL1 (rs1420101) в подгруппах ХОБЛ и СПАХ стратифицировали по высокому (>200 эозин/мкл) и низкому (≤200 эозин/мкл) медианному значению количества эозинофилов в течение жизни (Фиг. 4 и 5). Оба варианта были предположительно связаны с ХОБЛ и СПАХ только в подгруппах заболеваний, характеризующихся высоким уровнем циркулирующих эозинофилов.

Более высокая нагрузка с аллелями, повышающими риск, в сигнальном пути IL33 приводит к большему увеличению риска возникновения астмы, ХОБЛ и СПАХ. Поскольку IL33 и IL1RL1 являются частью одного и того же сигнального комплекса, и поскольку данные варианты демонстрируют заметную зависимость от дозы аллеля в своих ассоциациях риска при индивидуальном анализе, был составлен двухфакторный генетический показатель риска путем суммирования количества аллелей риска по IL33 (rs1342326) и IL1RL1 (rs1420101) (каждому индивиду приписывали балл в диапазоне от 0 до 4), и была проверена связь между показателем и количеством эозинофилов и риском развития астмы, ХОБЛ и СПАХ. Группы индивидов, являющихся носителями каждого балла генетического риска, сравнивали с группой с аллелями нулевого риска. В анализах тенденции, увеличения балла генетического риска было достоверно связано с увеличением количества эозинофилов (Фиг. 2, P=1×10^-39) и увеличением риска астмы (Фиг. 6, P=3,27×10^-12), ХОБЛ (Фиг. 6, P=6,65×10^-3), и СПАХ (P=4,3×10^-3). Наибольшие эффекты (превышающие номинальную значимость) наблюдались у пациентов с тремя аллелями риска (Фиг. 2, для количества эозинофилов, Meta beta=0,0071 (0,0057-0,0085) эозин/мл, P=8,8×10^-24; для астмы (Фиг. 6), Meta OR=1,28 (1,17-1,41), P=6,99×10^-8; для ХОБЛ (Фиг. 6), OR=1,17 (1,04-1,31), P=9,35×10^-3); и для СПАХ (Фиг. 6), OR=1,23 (1,03-1,48), P=2,49×10^-2 (Фиг. 2). Немногие индивиды имели 4 аллеля риска, и, следовательно, оценки размера эффекта имели широкие доверительные интервалы.

Также была оценена связь между показателем двух вариантов и подгруппами пациентов с высоким и низким уровнем эозинофилов (Фиг. 7). В трендовых анализах данный показатель достоверно ассоциировался с подгруппами астмы с высоким уровнем эозинофилов (P=1,37×10^-15), ХОБЛ (P=3,9×10^-8), и СПАХ (P=1,8×10^-5), но не с подгруппами астмы, ХОБЛ или СПАХ с низким уровнем эозинофилов (P>0,05 для каждой болезни). Наибольшие специфические эффекты, связанные показателем, наблюдались у пациентов с тремя аллелями риска (для высоко-эозинофильной астмы, Meta-OR=1,61 (1,42-1,84), P=6,33×10^-13; для высоко-эозинофильной ХОБЛ, Meta-OR=1,53 (1,31-1,79), P=4,76×10^-8); и для высоко-эозинофильного СПАХ, OR=1,7 (1,34-2,14), P=1×10^-5. Как отмечалось ранее, было относительно немного индивидов, несущих 4 аллеля риска, и соответствующие оценки величины эффекта имели широкие доверительные интервалы.

Предсказанные варианты потери функции (pLOF) для IL33 связаны с уменьшением количества циркулирующих эозинофилов и риском обструктивного заболевания легких. В анализе варианта pLOF rs146597587 IL33, инактивация IL33 связана с уменьшением количества эозинофилов (Meta-Beta=-0,02 (-0,03-0,0092,P=7,3×10^-5) но незначительно с уменьшенным риском эозинофильной астмы, ХОБЛ и СПАХ (OR=0,82 (0,63-1,07), P=0,15, OR=0,99 (0,74-1,33), P=0,94, и OR=0,93 (0,56-1,53), P=0,76, соответственно) (Фиг. 7). Варианты pLOF IL1RL1 не были связаны с риском обструктивного заболевания легких.

Анализ варианта rs1420101 IL1RL1 и варианта rs1342326 IL33 с другими заболеваниями дыхательных путей. Единая теория дыхательных путей утверждает, что астма может встречаться с другими заболеваниями дыхательных путей из-за общих механизмов. Поэтому были проверены другие ЭМК-задокументированные заболевания дыхательных путей на связь с rs1420101 и rs1342326 (Фиг. 9). Вариант rs1342326 IL33 и вариант rs1420101 IL1RL1 был связан с повышенным риском аллергического ринита (Meta-OR 1,04 (1,01-1,08), P=0,02; Meta-OR 1,04 (1,01-1,06), P=2,4×10^-3), а также с увеличенным риском полипов носовой полости (Meta-OR 1,48 (1,28-1,72), P=1,2×10^-7, Meta-OR 1,17 (1,04-1,33), P=1,2×10^-2). Кроме того, нагрузка этих распространенных вариантов риска также значительно увеличивала риск аллергического ринита и полипов носовой полости (P=1,45×10^-4, P=2,48×10^-7). Эти результаты согласуются с предыдущим сообщением, в котором говорится о вовлеченности генетических вариаций IL33 в риск полипов носовой полости.

Резюме. Считается, что IL33 вовлечен в барьерную защиту в эпителиальных тканях, включая эпителий легкого, и вовлечен в патогенез астмы. Два варианта, описанные в этом примере, IL33 (rs1342326) и IL1RL1 (rs1420101), были ранее ассоциированы с астмой в нескольких исследованиях. Эти воспроизводимые и независимые связи (IL33 расположен на хромосоме 9; IL1RL1 расположен на хромосоме 2) с лигандом (IL33) и его специфическим рецептором (IL1R1) предполагают наличие роли сигналинга IL33 в риске астмы.

Текущее исследование значительно расширяет эти предыдущие выводы. Проведя секвенирование и генотипирование всего экзома у более чем 83000 взрослых участников исследования DiscovEHR, были подтверждены связи между IL33 и IL1RL1 и количеством эозинофилов, а также астмой, независимо оцененные как отдельные фенотипы. Кроме того, была продемонстрирована наводящая связь между вариантами IL33 и IL1RL1, и повышенным риском ХОБЛ и СПАХ - предлагая генетическую связь, поддерживающую вероятность общего механизма этиологии между всеми тремя этими наиболее распространенными заболеваниями легких. Также были продемонстрированы связи этих вариантов с полипами носовой полости и аллергическим ринитом. Кроме того, было обнаружено, что у индивидов, несущих большую нагрузку таких аллелей риска в обоих локусах, наблюдался больший эффект в отношении риска заболевания. Кроме того, гетерозиготные носители редких вариантов pLOF в IL33 имели более низкое среднее количество эозинофилов в течение жизни и тенденции, отражающие снижение риска астмы на 20%. Считается, что эти данные предоставляют генетические доказательства, связывающие путь IL33 с астмой и, возможно, с ХОБЛ, через серию аллелей, которая включает в себя как повышающие риск общие аллели, так и уменьшающие риск редкие аллели pLOF.

Считается, что до данного исследования ранее не было найдено связи между генетическими вариантами в пути IL33 и ХОБЛ. Точно так же считается, что ранее не было генетических данных, связывающих какой-либо путь с риском эозинофильных подгрупп астмы, ХОБЛ и СПАХ. Результаты данного Примера предполагают связь между усиленным сигналингом IL33 и повышенным риском эозинофильных подгрупп астмы и ХОБЛ, и численно выраженные связи повышенного риска, наблюдаемые для пациентов с СПАХ предполагают, что эта сущность на пересечении данных патологий действительно может иметь особые признаки. Помимо предоставления объединяющей генетической и механистической связи между эозинофильными подгруппами ранее четко обозначенных обструктивных заболеваний легких, данные также подтверждают принципы «единой теории дыхательных путей», которая утверждает, что эозинофильные заболевания легких могут представлять собой связанное множество заболеваний верхних дыхательных путей. В данном отношении был отмечен заметно повышенный риск для варианта IL33 при аллергическом рините и полипах носовой полости.

Хотя и не являющиеся статистически значимыми, протективные ассщциациис вариантами pLOF IL33, описанными в данном Примере, согласуются с недавним исследованием, которое продемонстрировало, что редкий вариант потери функции по IL33 был защитным при астме, подтверждая возможность того, что ингибирование сигналинга IL33 может быть важной терапевтической стратегией при обструктивных заболеваниях легких. Данные, в частности, предполагают роль блокады интерлейкина-33 в эозинофильных формах обструктивных заболеваний легких, таких как астма и ХОБЛ, а также в эозинофильных заболеваниях верхних дыхательных путей, таких как аллергический ринит и полипы носовой полости.

Кроме того, недавний прогресс в области биопрепаратов для лечения тяжелой и стероид-устойчивой астмы, по-видимому, отличает эозинофильную болезнь. Множественная терапия, нацеленная на интерлейкин-5 и интерлейкин-13, по-видимому, приносит пользу только эозинофильной подгруппе пациентов, страдающих астмой, тогда как антитело (дупилумаб), которое блокирует пути как интерлейкина-4, так и интерлейкина-13, имеет в численном отношении большие преимущества у пациентов с эозинофилией, но также, по-видимому, имеет значительную активность в низкоэозинофильной подгруппе. Данные терапии также могут помочь при полипах носовой полости и аллергическом рините. В соответствии с этими ранее описанными различиями в ответах пациентов с эозинофильной астмой на биопрепараты, данные этого примера показывают, что блокада интерлейкина-33 может быть наилучшей для эозинофильных подгрупп астмы, СПАХ и ХОБЛ.

Хотя данное исследование имеет определенные ограничения, оно, тем не менее, представляет собой реальную клиническую практику, и в этой популяции генетические вариации IL33 и IL1RL1 связаны с повышенным риском диагностики как астмы, так и ХОБЛ. Для целей персонализированного лечения пациентов, возможно менее важной является постановка диагноза астмы, ХОБЛ или СПАХ, чем идентификация механистической патологии, которая встречается у конкретного пациента или группы пациентов, и эти данные предполагают, что подгруппы пациентов с астмой, ХОБЛ и СПАХ могут частично быть результатом избыточной активности IL33. Смягчением различных ограничений этих данных является замечательная согласованность результатов с использованием генетических вариантов двух разных генов в рамках одного и того же пути - параллельные результаты были получены для вариантов по гену IL33, а также для его рецептора. Для вариантов обоих генов были обнаружены согласованные ассоциации риска в множестве связанных ЭМК-определенных заболеваниях, а также в этих заболеваниях неоднократно отмечались согласованные результаты, специфичные для эозинофильных подгрупп данных заболеваний. Еще один убедительный аспект данных включает в себя согласованную и значительную аллельную зависимость большинства ассоциаций риска, а также дополнительную статистическую мощность, полученную в результате анализа риска с двух-вариантным параметром. Наконец, результаты с обратной зависимостью с вариантами pLOF IL33 также являются поддерживающими.

Эти данные предполагают, что генетическая изменчивость, которая усиливает сигналинг IL33, способствует увеличению риска эозинофильных форм астмы, ХОБЛ и СПАХ, и что генетические варианты pLOF в IL33 могут способствовать снижению риска данных заболеваний; риск заболеваний верхних дыхательных путей, таких как полипы носовой полости, также, по-видимому, связан с сигналингом IL33. Индивиды, являющиеся носителями генетических вариантов, которые усиливают сигналинг IL33, могут представлять собой благоприятную возможность для точной медицины, так как те конкретные пациенты, страдающие астмой и ХОБЛ, могут извлечь наибольшую пользу из терапевтической блокады IL33. Данные также указывают на возможность того, что пациенты, страдающие эозинофильным заболеванием дыхательных путей, независимо от подгруппы и варианта статуса, могут извлечь выгоду из ингибирования IL33.

Раскрытие изобретения не ограничено вариантами осуществления, описанными и приведенными в качестве примера выше, но допускает изменение и модификацию в пределах объема прилагаемой формулы изобретения. Заявка США №15/827357, поданная 30 ноября 2017 года, включена в данный документ посредством ссылки в полном объеме для всех целей.

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> Regeneron Pharmaceuticals, Inc.

<120> ЛЕЧЕНИЕ И ИНГИБИРОВАНИЕ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ЛЁГКИХ У ПАЦИЕНТОВ

С АЛЛЕЛЯМИ РИСКА В ГЕНАХ, КОДИРУЮЩИХ IL33 И IL1RL1

<130> 189238.01102 (3022)

<150> US 62/485,077

<151> 2017-04-13

<160> 358

<170> FastSEQ для Windows Версия 4.0

<210> 1

<211> 366

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 1

caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt agttatggca tgcattgggt ccgccaggct 120

ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg atggaagaaa taaatactat 180

acagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240

ctgcaaatgg acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagagagg 300

tatatcagca gctattatgg ggggttcgac ccctggggcc agggagccct ggtcaccgtc 360

tcctca 366

<210> 2

<211> 122

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 2

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Arg Asn Lys Tyr Tyr Thr Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Arg Tyr Ile Ser Ser Tyr Tyr Gly Gly Phe Asp Pro Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Ala Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 3

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 3

ggattcacct tcagtagtta tggc 24

<210> 4

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 4

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly

1 5

<210> 5

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 5

atatggtatg atggaagaaa taaa 24

<210> 6

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 6

Ile Trp Tyr Asp Gly Arg Asn Lys

1 5

<210> 7

<211> 45

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 7

gcgagagaga ggtatatcag cagctattat ggggggttcg acccc 45

<210> 8

<211> 15

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 8

Ala Arg Glu Arg Tyr Ile Ser Ser Tyr Tyr Gly Gly Phe Asp Pro

1 5 10 15

<210> 9

<211> 321

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 9

gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60

atcacttgtc gggcgagtca gggtattagt agttggttag cctggtatca gcagaaacca 120

gggaaagccc ctaaggtcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180

aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240

gaagattttg caacttacta ttgtcaacag gctaacagtt tcccattcac tttcggccct 300

gggaccaaac tggatatcaa g 321

<210> 10

<211> 107

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 10

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Leu Asp Ile Lys

100 105

<210> 11

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 11

cagggtatta gtagttgg 18

<210> 12

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 12

Gln Gly Ile Ser Ser Trp

1 5

<210> 13

<211> 9

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 13

gctgcatcc 9

<210> 14

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 14

Ala Ala Ser

1

<210> 15

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 15

caacaggcta acagtttccc attcact 27

<210> 16

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 16

Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Phe Thr

1 5

<210> 17

<211> 357

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 17

gaggtgcagc tgttggagtc tgggggagac ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt caccttcagc agctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120

ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagtt attagtggta gtggaagtag cacagactac 180

gcagactccg tgaagggccg gttcaccatt tccagagaca attccaggga cacgctgcat 240

ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaaacgttc 300

tactacttct acggtttgga cgtctggggc caagggacca cggtcaccgt ctcctca 357

<210> 18

<211> 119

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 18

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Val Ile Ser Gly Ser Gly Ser Ser Thr Asp Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg Asp Thr Leu His

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Thr Phe Tyr Tyr Phe Tyr Gly Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 19

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 19

ggattcacct tcagcagcta tgcc 24

<210> 20

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 20

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala

1 5

<210> 21

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 21

attagtggta gtggaagtag caca 24

<210> 22

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 22

Ile Ser Gly Ser Gly Ser Ser Thr

1 5

<210> 23

<211> 36

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 23

gcgaaaacgt tctactactt ctacggtttg gacgtc 36

<210> 24

<211> 12

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 24

Ala Lys Thr Phe Tyr Tyr Phe Tyr Gly Leu Asp Val

1 5 10

<210> 25

<211> 321

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 25

gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctttaagaga cagagtcacc 60

atcacttgcc gggcgagtca gggcattagc aattatttag cctggtatca gcagaaacca 120

gggaaagttc ctaaggtcct aatctatgct gcatccactt tgcaatcagg ggtcccatct 180

cggttcagtg gcagtggatc tgggacagtt ttcactctca ccatcagcag cctgcagact 240

gaagatgttg caacttatta ctgtcaaaag tatagcagtg ccccattcac tttcggccct 300

gggaccaaag tggatatcaa a 321

<210> 26

<211> 107

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 26

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Arg

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Val Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Val Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Thr

65 70 75 80

Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Lys Tyr Ser Ser Ala Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys

100 105

<210> 27

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 27

cagggcatta gcaattat 18

<210> 28

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 28

Gln Gly Ile Ser Asn Tyr

1 5

<210> 29

<211> 9

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 29

gctgcatcc 9

<210> 30

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 30

Ala Ala Ser

1

<210> 31

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 31

caaaagtata gcagtgcccc attcact 27

<210> 32

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 32

Gln Lys Tyr Ser Ser Ala Pro Phe Thr

1 5

<210> 33

<211> 351

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 33

caggtgcttc tggtacagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggccac agtgaaggtc 60

tcctgcaagg cttctggatc cactttcacc ggctactata tgcactgggt gcgacaggcc 120

cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcaacccta acaatggtgg cacaaactat 180

gcacagaagt ttcagggcag ggtcaccatg accagggaca cgtccatcag cacagcctac 240

atggaattga gcaggctgag atctgacgac acggccgtat attactgtgc gagagagttg 300

cggtataact ggaagtcctg gggccaggga accctggtca ccgtctcctc a 351

<210> 34

<211> 117

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 34

Gln Val Leu Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Thr Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Ser Thr Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Leu Arg Tyr Asn Trp Lys Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 35

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 35

ggatccactt tcaccggcta ctat 24

<210> 36

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 36

Gly Ser Thr Phe Thr Gly Tyr Tyr

1 5

<210> 37

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 37

atcaacccta acaatggtgg caca 24

<210> 38

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 38

Ile Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr

1 5

<210> 39

<211> 30

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 39

gcgagagagt tgcggtataa ctggaagtcc 30

<210> 40

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 40

Ala Arg Glu Leu Arg Tyr Asn Trp Lys Ser

1 5 10

<210> 41

<211> 324

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 41

gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagtcacc 60

ctctcctgca gggccagtca gagtgttggc aggccctact tagcctggta ccaacagata 120

cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tgacatccca 180

gacaggttca gtggcaatgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag tagactggag 240

cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatgata attcccctta tacttttggc 300

caggggacca ggctggagat caaa 324

<210> 42

<211> 108

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 42

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Val Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Gly Arg Pro

20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Asp Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Asn Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asp Asn Ser Pro

85 90 95

Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 43

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 43

cagagtgttg gcaggcccta c 21

<210> 44

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 44

Gln Ser Val Gly Arg Pro Tyr

1 5

<210> 45

<211> 9

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 45

ggtgcatcc 9

<210> 46

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 46

Gly Ala Ser

1

<210> 47

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 47

cagcagtatg ataattcccc ttatact 27

<210> 48

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 48

Gln Gln Tyr Asp Asn Ser Pro Tyr Thr

1 5

<210> 49

<211> 366

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 49

gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacaac ctggggggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt cacctttaga agctttgcca tgagctgggt ccgccaggct 120

ccagggaagg ggctggaatt ggtctcagat ctcaggacta gtggtggtag tacatactac 180

gcagactccg tgaagggccg gctcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240

ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaaagccac 300

tatagcacca gctggttcgg gggctttgac tactggggcc agggaaccct ggtcactgtc 360

tcctca 366

<210> 50

<211> 122

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 50

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Phe

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Val

35 40 45

Ser Asp Leu Arg Thr Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Ser His Tyr Ser Thr Ser Trp Phe Gly Gly Phe Asp Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 51

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 51

ggattcacct ttagaagctt tgcc 24

<210> 52

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 52

Gly Phe Thr Phe Arg Ser Phe Ala

1 5

<210> 53

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 53

ctcaggacta gtggtggtag taca 24

<210> 54

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 54

Leu Arg Thr Ser Gly Gly Ser Thr

1 5

<210> 55

<211> 45

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 55

gcgaaaagcc actatagcac cagctggttc gggggctttg actac 45

<210> 56

<211> 15

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 56

Ala Lys Ser His Tyr Ser Thr Ser Trp Phe Gly Gly Phe Asp Tyr

1 5 10 15

<210> 57

<211> 321

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 57

gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgctt ctgtaggaga cagagtcacc 60

atcacttgtc gggcgagtca gggttttagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120

gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180

aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcaccaa cctgcagcct 240

gaagattttg caacttacta ttgtcaacag gctaacagtt tccctctcac tttcggcgga 300

gggaccaagg tggagatcaa a 321

<210> 58

<211> 107

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 58

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Phe Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Asn Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 59

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 59

cagggtttta gcagctgg 18

<210> 60

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 60

Gln Gly Phe Ser Ser Trp

1 5

<210> 61

<211> 9

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 61

gctgcatcc 9

<210> 62

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 62

Ala Ala Ser

1

<210> 63

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 63

caacaggcta acagtttccc tctcact 27

<210> 64

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 64

Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 65

<211> 366

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 65

gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt cacgtttagc agctatgtca tgagctgggt ccgccaggct 120

ccagggaagg ggctggagtg ggtctcaagt attagtggta atggtggtag cacaaactac 180

gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgttt 240

ctggaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaatcactg 300

ggaactacca cgactttttt ggggtttgac tattggggcc agggaaccct ggtcaccgtc 360

tcctca 366

<210> 66

<211> 122

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 66

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Val Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Gly Asn Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe

65 70 75 80

Leu Glu Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Ser Leu Gly Thr Thr Thr Thr Phe Leu Gly Phe Asp Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 67

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 67

ggattcacgt ttagcagcta tgtc 24

<210> 68

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 68

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Val

1 5

<210> 69

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 69

attagtggta atggtggtag caca 24

<210> 70

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 70

Ile Ser Gly Asn Gly Gly Ser Thr

1 5

<210> 71

<211> 45

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 71

gcgaaatcac tgggaactac cacgactttt ttggggtttg actat 45

<210> 72

<211> 15

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 72

Ala Lys Ser Leu Gly Thr Thr Thr Thr Phe Leu Gly Phe Asp Tyr

1 5 10 15

<210> 73

<211> 321

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 73

gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60

atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120

gggaaagccc ctaaactcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180

aggttcagcg gcagtggatc tgggacatat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240

gaagattttg caacttacta ttgtcaacag gctaacagtt tccctctcac tttcggcgga 300

gggaccaagg tggagatcaa a 321

<210> 74

<211> 107

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 74

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Tyr Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 75

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 75

cagggtatta gcagctgg 18

<210> 76

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 76

Gln Gly Ile Ser Ser Trp

1 5

<210> 77

<211> 9

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 77

gctgcatcc 9

<210> 78

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 78

Ala Ala Ser

1

<210> 79

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 79

caacaggcta acagtttccc tctcact 27

<210> 80

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 80

Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 81

<211> 363

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 81

caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60

acctgcactg tctctggtgg ctccatcagt agttattact ggagctggat ccggcagccc 120

ccagggaagg gactggagtt gattgggtat atttattaca gtgggagcac caattataac 180

ccctccctca agagtcgagt caccatatct gtagacacgt ccaagaacca cttctccctg 240

aagctgagct ctgtgaccgc tgcggacacg gccgtatatt actgtgcgag atcccagtat 300

accagtagtt ggtacggttc ttttgatatc tggggccaag ggacaatggt caccgtctct 360

tca 363

<210> 82

<211> 121

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 82

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr

20 25 30

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Leu Ile

35 40 45

Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn His Phe Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Ser Gln Tyr Thr Ser Ser Trp Tyr Gly Ser Phe Asp Ile Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 83

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 83

ggtggctcca tcagtagtta ttac 24

<210> 84

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 84

Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr Tyr

1 5

<210> 85

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 85

atttattaca gtgggagcac c 21

<210> 86

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 86

Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr

1 5

<210> 87

<211> 45

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 87

gcgagatccc agtataccag tagttggtac ggttcttttg atatc 45

<210> 88

<211> 15

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 88

Ala Arg Ser Gln Tyr Thr Ser Ser Trp Tyr Gly Ser Phe Asp Ile

1 5 10 15

<210> 89

<211> 321

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 89

gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60

atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc acctggttag cctggtttca gcagaaacca 120

gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccactt tacaaggtgg ggtcccatca 180

aggttcagcg gcagtggatc tgggccagaa ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240

gaagattttg caacttacta ttgtcaacag gctaacagtt tcccgtggac gttcggccaa 300

gggaccaagg tggaaatcaa a 321

<210> 90

<211> 107

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 90

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Thr Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Gly Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Pro Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 91

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 91

cagggtatta gcacctgg 18

<210> 92

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 92

Gln Gly Ile Ser Thr Trp

1 5

<210> 93

<211> 9

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 93

gctgcatcc 9

<210> 94

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 94

Ala Ala Ser

1

<210> 95

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 95

caacaggcta acagtttccc gtggacg 27

<210> 96

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 96

Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Trp Thr

1 5

<210> 97

<211> 366

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 97

caggttcagc tggtgcagtc tggagctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60

tcctgcaagg cctctggtta cacctttaac agctatggta tcagctgggt gcgacaggcc 120

cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcagctccc acaatggtaa cagtcactat 180

gtacagaagt tccagggcag agtctccatg accacagaca catccacgag tacagcctac 240

atggaactga ggagccttag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagacactcg 300

tataccacca gctggtacgg gggttttgac tattggggcc agggaaccct ggtcaccgtc 360

tcctca 366

<210> 98

<211> 122

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 98

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Asn Ser Tyr

20 25 30

Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Ser Ser His Asn Gly Asn Ser His Tyr Val Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Ser Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg His Ser Tyr Thr Thr Ser Trp Tyr Gly Gly Phe Asp Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 99

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 99

ggttacacct ttaacagcta tggt 24

<210> 100

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 100

Gly Tyr Thr Phe Asn Ser Tyr Gly

1 5

<210> 101

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 101

atcagctccc acaatggtaa cagt 24

<210> 102

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 102

Ile Ser Ser His Asn Gly Asn Ser

1 5

<210> 103

<211> 45

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 103

gcgagacact cgtataccac cagctggtac gggggttttg actat 45

<210> 104

<211> 15

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 104

Ala Arg His Ser Tyr Thr Thr Ser Trp Tyr Gly Gly Phe Asp Tyr

1 5 10 15

<210> 105

<211> 321

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 105

gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60

atcacttgtc gggcgagtca gggttttagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120

gggaaagccc ctcagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180

aggttcagcg gcagtggatc tgggtcagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240

gaagattttg caacttacta ttgtcaacag gctaacagtt tccctctcac tttcggcgga 300

gggaccaagg tggagatcaa a 321

<210> 106

<211> 107

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 106

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Phe Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Gln Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Ser Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 107

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 107

cagggtttta gcagctgg 18

<210> 108

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 108

Gln Gly Phe Ser Ser Trp

1 5

<210> 109

<211> 9

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 109

gctgcatcc 9

<210> 110

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 110

Ala Ala Ser

1

<210> 111

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 111

caacaggcta acagtttccc tctcact 27

<210> 112

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 112

Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 113

<211> 366

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 113

gaggtgcagc tggtggagtc cgggggaggc ttggttcagc cgggggggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggaat caccttgagc agctatggca tgagctgggt ccgccaggct 120

ccagggaagg gactggagtg ggtcgcatcc atttttggta gtggtggtgg cccatactac 180

gcagactccg tgaagggccg gttcaccatg tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240

ttgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attattgtgc gaaagatcga 300

tacagtggga gctactacgg aggttttgac tactggggcc ggggaaccct ggtcaccgtc 360

tcctca 366

<210> 114

<211> 122

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 114

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Thr Leu Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Ser Ile Phe Gly Ser Gly Gly Gly Pro Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Met Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Asp Arg Tyr Ser Gly Ser Tyr Tyr Gly Gly Phe Asp Tyr Trp

100 105 110

Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 115

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 115

ggaatcacct tgagcagcta tggc 24

<210> 116

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 116

Gly Ile Thr Leu Ser Ser Tyr Gly

1 5

<210> 117

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 117

atttttggta gtggtggtgg ccca 24

<210> 118

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 118

Ile Phe Gly Ser Gly Gly Gly Pro

1 5

<210> 119

<211> 45

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 119

gcgaaagatc gatacagtgg gagctactac ggaggttttg actac 45

<210> 120

<211> 15

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 120

Ala Lys Asp Arg Tyr Ser Gly Ser Tyr Tyr Gly Gly Phe Asp Tyr

1 5 10 15

<210> 121

<211> 321

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 121

gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60

atcacttgtc gggcgagtca gggtattacc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120

gggaaagccc ctacactcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaactgg ggtcccatca 180

aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240

gaacattttg caacttacta ttgtcaacag gctaacagtt tccctcctac tttcggcgga 300

gggaccaagg tggagatcaa a 321

<210> 122

<211> 107

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 122

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Thr Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Thr Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu His Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Pro

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 123

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 123

cagggtatta ccagctgg 18

<210> 124

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 124

Gln Gly Ile Thr Ser Trp

1 5

<210> 125

<211> 9

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 125

gctgcatcc 9

<210> 126

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 126

Ala Ala Ser

1

<210> 127

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 127

caacaggcta acagtttccc tcctact 27

<210> 128

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 128

Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Pro Thr

1 5

<210> 129

<211> 366

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 129

gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctaagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agttatgcct tgacctgggt ccgccaggct 120

ccagggaagg ggctggagtg ggtctctttt attagtggta gtggtggtag gccattctac 180

gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa catgctgtat 240

ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccatat attactgtgc gaagtccctg 300

tataccacca gctggtacgg ggggttcgac tcctggggcc agggaaccct ggtcaccgtc 360

tcctca 366

<210> 130

<211> 122

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 130

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Leu Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Phe Ile Ser Gly Ser Gly Gly Arg Pro Phe Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Met Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Ser Leu Tyr Thr Thr Ser Trp Tyr Gly Gly Phe Asp Ser Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 131

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 131

ggattcacct ttagcagtta tgcc 24

<210> 132

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 132

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala

1 5

<210> 133

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 133

attagtggta gtggtggtag gcca 24

<210> 134

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 134

Ile Ser Gly Ser Gly Gly Arg Pro

1 5

<210> 135

<211> 45

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 135

gcgaagtccc tgtataccac cagctggtac ggggggttcg actcc 45

<210> 136

<211> 15

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 136

Ala Lys Ser Leu Tyr Thr Thr Ser Trp Tyr Gly Gly Phe Asp Ser

1 5 10 15

<210> 137

<211> 321

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 137

gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60

atcacttgtc gggcgagtca gggtgtcgtc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120

gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180

aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240

gaagattttg caacttatta ttgtcaacag tctaacagtt tccctttcac tctcggccct 300

gggaccaaag tggatatcaa a 321

<210> 138

<211> 107

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 138

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Val Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn Ser Phe Pro Phe

85 90 95

Thr Leu Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys

100 105

<210> 139

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 139

cagggtgtcg tcagctgg 18

<210> 140

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 140

Gln Gly Val Val Ser Trp

1 5

<210> 141

<211> 9

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 141

gctgcatcc 9

<210> 142

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 142

Ala Ala Ser

1

<210> 143

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 143

caacagtcta acagtttccc tttc 24

<210> 144

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 144

Gln Gln Ser Asn Ser Phe Pro Phe

1 5

<210> 145

<211> 366

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 145

caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgaa gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60

tcctgcaagg cttctggata caccttcacc ggccactata tgtactggat gcgacaggcc 120

cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcaacccta acagtggtgg cacaaactat 180

gcacagaagt ttcaggacag ggtcaccatg accagggaca cgtccatcag cacagcctac 240

atggagctga gcaggctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagagggaga 300

tatggcagta gctggtacgg ggggtttgag tactggggcc agggaaccct ggtcaccgtc 360

tcctca 366

<210> 146

<211> 122

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 146

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly His

20 25 30

Tyr Met Tyr Trp Met Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Asp Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Arg Tyr Gly Ser Ser Trp Tyr Gly Gly Phe Glu Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 147

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 147

ggatacacct tcaccggcca ctat 24

<210> 148

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 148

Gly Tyr Thr Phe Thr Gly His Tyr

1 5

<210> 149

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 149

atcaacccta acagtggtgg caca 24

<210> 150

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 150

Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr

1 5

<210> 151

<211> 45

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 151

gcgagaggga gatatggcag tagctggtac ggggggtttg agtac 45

<210> 152

<211> 15

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 152

Ala Arg Gly Arg Tyr Gly Ser Ser Trp Tyr Gly Gly Phe Glu Tyr

1 5 10 15

<210> 153

<211> 321

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 153

gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgttggaga cagagtcacc 60

atcacttgtc gggcgagtca gggtattacc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120

gggaaagccc ctaacctcct gatctatgct gcagccagtt tacaaagtgg ggtcccatca 180

aggttcagcg gcagtggatc tgggacggat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240

gaagacttta caacttacta ttgtcaacag gcttacagtc tccctctcac tttcggcgga 300

gggaccaagg tggagatcaa a 321

<210> 154

<211> 107

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 154

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Thr Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ala Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Thr Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Tyr Ser Leu Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 155

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 155

cagggtatta ccagctgg 18

<210> 156

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 156

Gln Gly Ile Thr Ser Trp

1 5

<210> 157

<211> 9

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 157

gctgcagcc 9

<210> 158

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 158

Ala Ala Ala

1

<210> 159

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 159

caacaggctt acagtctccc tctcact 27

<210> 160

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 160

Gln Gln Ala Tyr Ser Leu Pro Leu Thr

1 5

<210> 161

<211> 366

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 161

caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatggct tgcactgggt ccgccagtct 120

ccaggcaagg ggctggaatg ggtggcactt atatcatatg acggaagtaa taaatactat 180

gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240

ctgcaaatga acagcctgag acctgaggac acggctggat atttctgtgc gaaatcccta 300

tatacaacca gctggtacgg gggctttgac tattggggcc agggaaccct ggtcaccgtc 360

tcctca 366

<210> 162

<211> 122

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 162

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Leu His Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Leu Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Gly Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Lys Ser Leu Tyr Thr Thr Ser Trp Tyr Gly Gly Phe Asp Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 163

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 163

ggattcacct tcagtagcta tggc 24

<210> 164

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 164

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly

1 5

<210> 165

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 165

atatcatatg acggaagtaa taaa 24

<210> 166

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 166

Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys

1 5

<210> 167

<211> 45

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 167

gcgaaatccc tatatacaac cagctggtac gggggctttg actat 45

<210> 168

<211> 15

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 168

Ala Lys Ser Leu Tyr Thr Thr Ser Trp Tyr Gly Gly Phe Asp Tyr

1 5 10 15

<210> 169

<211> 321

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 169

gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60

atcacttgtc gggcgagtca gggtattaga agctggttag cctggtatca gcaaaaacca 120

gggaaagccc ctaacctcct gatctatgct gcgtccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180

aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240

gaagattttg caacttacta ttgtcaacag gctaacagtt tccctcccac tttcggccct 300

gggaccaaag tggatatcaa a 321

<210> 170

<211> 107

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 170

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Asn Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Pro

85 90 95

Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys

100 105

<210> 171

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 171

cagggtatta gaagctgg 18

<210> 172

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 172

Gln Gly Ile Arg Ser Trp

1 5

<210> 173

<211> 9

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 173

gctgcgtcc 9

<210> 174

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 174

Ala Ala Ser

1

<210> 175

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 175

caacaggcta acagtttccc tcccact 27

<210> 176

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 176

Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Pro Thr

1 5

<210> 177

<211> 366

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 177

gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctgggtt caccttcagc aactatgcca tgacctgggt ccgccaggct 120

ccagggaagg ggctggagtg ggtctcaact atcagtggca gtggtgataa cacatactac 180

gcagactccg tgcagggccg gttcaccatc tccagaggcc attccaagaa cacgctgtat 240

ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaacctacg 300

tatagcagaa gctggtacgg tgcttttgat ttctggggcc aagggacaat ggtcaccgtc 360

tcttca 366

<210> 178

<211> 122

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 178

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr

20 25 30

Ala Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Thr Ile Ser Gly Ser Gly Asp Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Gln Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Gly His Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Pro Thr Tyr Ser Arg Ser Trp Tyr Gly Ala Phe Asp Phe Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 179

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 179

gggttcacct tcagcaacta tgcc 24

<210> 180

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 180

Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ala

1 5

<210> 181

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 181

atcagtggca gtggtgataa caca 24

<210> 182

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 182

Ile Ser Gly Ser Gly Asp Asn Thr

1 5

<210> 183

<211> 45

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 183

gcgaaaccta cgtatagcag aagctggtac ggtgcttttg atttc 45

<210> 184

<211> 15

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 184

Ala Lys Pro Thr Tyr Ser Arg Ser Trp Tyr Gly Ala Phe Asp Phe

1 5 10 15

<210> 185

<211> 321

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 185

gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60

atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaaccg 120

gggaaagccc ctcaactcct gatctatgct gcatccagat tgcaaagtgg ggtcccatca 180

aggttctggg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240

gaagattttg caacttacta ttgtcaacag gctaacaatt tcccattcac tttcggccct 300

gggaccaaag tggatatcaa a 321

<210> 186

<211> 107

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 186

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Gln Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Arg Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Trp Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Asn Phe Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys

100 105

<210> 187

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 187

cagggtatta gcagctgg 18

<210> 188

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 188

Gln Gly Ile Ser Ser Trp

1 5

<210> 189

<211> 9

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 189

gctgcatcc 9

<210> 190

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 190

Ala Ala Ser

1

<210> 191

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 191

caacaggcta acaatttccc attcact 27

<210> 192

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 192

Gln Gln Ala Asn Asn Phe Pro Phe Thr

1 5

<210> 193

<211> 366

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 193

caggttcagc tggtgcagtc tggagctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60

tcctgcaagg cttctggtta cacctttacc agttatggta tcagctgggt gcgacaggcc 120

cctggacaag gccttgagtg gatgggatgg atccgcgctt acaatggtta cacaaactat 180

gcacagaagt ttcagggcag agtcaccatg accacagaca catccacgaa caccgcctac 240

atggagctga ggaccctgaa ttctgacgat acggccgttt attactgtgc gagagatcga 300

tatagtggga gcttccacgg taactttgac tactggggcc agggaaccct ggtcaccgtc 360

tcctca 366

<210> 194

<211> 122

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 194

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Arg Ala Tyr Asn Gly Tyr Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Thr Leu Asn Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Arg Tyr Ser Gly Ser Phe His Gly Asn Phe Asp Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 195

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 195

ggttacacct ttaccagtta tggt 24

<210> 196

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 196

Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Gly

1 5

<210> 197

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 197

atccgcgctt acaatggtta caca 24

<210> 198

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 198

Ile Arg Ala Tyr Asn Gly Tyr Thr

1 5

<210> 199

<211> 45

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 199

gcgagagatc gatatagtgg gagcttccac ggtaactttg actac 45

<210> 200

<211> 15

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 200

Ala Arg Asp Arg Tyr Ser Gly Ser Phe His Gly Asn Phe Asp Tyr

1 5 10 15

<210> 201

<211> 321

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 201

gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcgt ctgtaggaga cagagtgacc 60

atcacttgtc gggcgagtca gggtattttc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120

gggaaagccc ctaaggtcct aatctatgct gcatccaatt tggaaagtgg ggtcccatca 180

aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240

gaagattttg caacttacta ttgtcaacag gctaacagtt taccgctcac tttcggcgga 300

gggaccaagg tggagatcaa a 321

<210> 202

<211> 107

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 202

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Phe Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Leu Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 203

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 203

cagggtattt tcagctgg 18

<210> 204

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 204

Gln Gly Ile Phe Ser Trp

1 5

<210> 205

<211> 9

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 205

gctgcatcc 9

<210> 206

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 206

Ala Ala Ser

1

<210> 207

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 207

caacaggcta acagtttacc gctcact 27

<210> 208

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 208

Gln Gln Ala Asn Ser Leu Pro Leu Thr

1 5

<210> 209

<211> 366

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 209

gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt acctattcta tgcactgggt ccgccaggct 120

ccagggaagg gactggaata tgtttcaact attaataata atggggatac cacatattat 180

gcagactctg tgaagggcag attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240

cttcaactgg gcagcctgag acctgaggac atggctgtgt attactgtgc gagacagacg 300

tataccagca gctggtacgg ggggttcgac tcctggggcc agggaaccct ggtcaccgtc 360

tcctca 366

<210> 210

<211> 122

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 210

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr

20 25 30

Ser Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val

35 40 45

Ser Thr Ile Asn Asn Asn Gly Asp Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Leu Gly Ser Leu Arg Pro Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gln Thr Tyr Thr Ser Ser Trp Tyr Gly Gly Phe Asp Ser Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 211

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 211

ggattcacct tcagtaccta ttct 24

<210> 212

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 212

Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr Ser

1 5

<210> 213

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 213

attaataata atggggatac caca 24

<210> 214

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 214

Ile Asn Asn Asn Gly Asp Thr Thr

1 5

<210> 215

<211> 45

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 215

gcgagacaga cgtataccag cagctggtac ggggggttcg actcc 45

<210> 216

<211> 15

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 216

Ala Arg Gln Thr Tyr Thr Ser Ser Trp Tyr Gly Gly Phe Asp Ser

1 5 10 15

<210> 217

<211> 321

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 217

gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggcga cagagtcacc 60

atcacttgtc gggcgagtca gggtattacc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120

gggaaagccc ctaaactcct gatctatgct gcatccaatt tgcaaagtgg ggtcccatca 180

aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcaccag cctgcagcct 240

gaggattttg caacttacta ttgtcaacag gctaacagtc tcccattcac tttcggccct 300

gggaccaaag tggatatcaa a 321

<210> 218

<211> 107

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 218

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Thr Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Leu Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys

100 105

<210> 219

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 219

cagggtatta ccagctgg 18

<210> 220

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 220

Gln Gly Ile Thr Ser Trp

1 5

<210> 221

<211> 9

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 221

gctgcatcc 9

<210> 222

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 222

Ala Ala Ser

1

<210> 223

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 223

caacaggcta acagtctccc attcact 27

<210> 224

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 224

Gln Gln Ala Asn Ser Leu Pro Phe Thr

1 5

<210> 225

<211> 366

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 225

gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt cacccttagc agctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120

ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtggcag cacatactac 180

gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa ctcgctgtat 240

ctgcaattga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaagacgctg 300

tatactacca gctggtacgg gggcttccag cactggggcc agggcaccct ggtcactgtc 360

tcctca 366

<210> 226

<211> 122

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 226

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Thr Leu Tyr Thr Thr Ser Trp Tyr Gly Gly Phe Gln His Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 227

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 227

ggattcaccc ttagcagcta tgcc 24

<210> 228

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 228

Gly Phe Thr Leu Ser Ser Tyr Ala

1 5

<210> 229

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 229

attagtggta gtggtggcag caca 24

<210> 230

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 230

Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr

1 5

<210> 231

<211> 45

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 231

gcgaagacgc tgtatactac cagctggtac gggggcttcc agcac 45

<210> 232

<211> 15

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 232

Ala Lys Thr Leu Tyr Thr Thr Ser Trp Tyr Gly Gly Phe Gln His

1 5 10 15

<210> 233

<211> 321

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 233

gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctataggaga cagagtcacc 60

atcacttgtc gggcgagtca gggaatcagc agttggttag cctggtatca gcagaaacca 120

gggaaagtcc ctaagctcct gatctatgct gcgtcctctt tgcaaagtgg gttcccatca 180

aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagtag cctgcagccc 240

gaagattttg caacttacta ttgtcaacag actcacagtt tcccgtggac ggtcggccaa 300

gggaccaagg tggaaatcaa a 321

<210> 234

<211> 107

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 234

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Ile Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Phe Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr His Ser Phe Pro Trp

85 90 95

Thr Val Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 235

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 235

cagggaatca gcagttgg 18

<210> 236

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 236

Gln Gly Ile Ser Ser Trp

1 5

<210> 237

<211> 9

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 237

gctgcgtcc 9

<210> 238

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 238

Ala Ala Ser

1

<210> 239

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 239

caacagactc acagtttccc gtgg 24

<210> 240

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 240

Gln Gln Thr His Ser Phe Pro Trp

1 5

<210> 241

<211> 366

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 241

gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt cacccttagg agctatttca tgacctgggt ccgccaggtt 120

ccagggaagg ggctggaggg ggtctcagct attagtggca ttagtggtgg cacatactac 180

acagactccg ttaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgttt 240

ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat atttctgtgc gagaacggtg 300

tatagtagta gttactacgg gggcttccag cactggggcc agggcaccct ggtcaccgtc 360

tcctca 366

<210> 242

<211> 122

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 242

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Arg Ser Tyr

20 25 30

Phe Met Thr Trp Val Arg Gln Val Pro Gly Lys Gly Leu Glu Gly Val

35 40 45

Ser Ala Ile Ser Gly Ile Ser Gly Gly Thr Tyr Tyr Thr Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Thr Val Tyr Ser Ser Ser Tyr Tyr Gly Gly Phe Gln His Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 243

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 243

ggattcaccc ttaggagcta tttc 24

<210> 244

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 244

Gly Phe Thr Leu Arg Ser Tyr Phe

1 5

<210> 245

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 245

attagtggca ttagtggtgg caca 24

<210> 246

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 246

Ile Ser Gly Ile Ser Gly Gly Thr

1 5

<210> 247

<211> 45

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 247

gcgagaacgg tgtatagtag tagttactac gggggcttcc agcac 45

<210> 248

<211> 15

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 248

Ala Arg Thr Val Tyr Ser Ser Ser Tyr Tyr Gly Gly Phe Gln His

1 5 10 15

<210> 249

<211> 321

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 249

gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgtat ctgtaggaga cagagtcacc 60

atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agttggttag cctggtatca gcagaaacca 120

gggaaagccc ctaagctcct gatctatgtt gcatccagtt tacaaagtgg ggtcccatca 180

aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240

gaagattttg caacttacta ttgtcaacag actaacagtt tccctctcac tttcggcgga 300

gggaccaagg tggagatcaa a 321

<210> 250

<211> 107

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 250

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Val Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Val Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Asn Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 251

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 251

cagggtatta gcagttgg 18

<210> 252

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 252

Gln Gly Ile Ser Ser Trp

1 5

<210> 253

<211> 9

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 253

gttgcatcc 9

<210> 254

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 254

Val Ala Ser

1

<210> 255

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 255

caacagacta acagtttccc tctcact 27

<210> 256

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 256

Gln Gln Thr Asn Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 257

<211> 366

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 257

gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggatt cacccttagg agttatgtca tgtactgggt ccgccagggt 120

ccagggaagg ggctggaggg ggtctcaggt attagtggca gtagtggtgg cacatactac 180

acagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgttt 240

ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat atttctgtgc gagatcggtg 300

tatagtacca cctggtacgg gggcttccag cactggggcc agggcaccct ggtcaccgtc 360

tcctca 366

<210> 258

<211> 122

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 258

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Arg Ser Tyr

20 25 30

Val Met Tyr Trp Val Arg Gln Gly Pro Gly Lys Gly Leu Glu Gly Val

35 40 45

Ser Gly Ile Ser Gly Ser Ser Gly Gly Thr Tyr Tyr Thr Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Val Tyr Ser Thr Thr Trp Tyr Gly Gly Phe Gln His Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 259

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 259

ggattcaccc ttaggagtta tgtc 24

<210> 260

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 260

Gly Phe Thr Leu Arg Ser Tyr Val

1 5

<210> 261

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 261

attagtggca gtagtggtgg caca 24

<210> 262

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 262

Ile Ser Gly Ser Ser Gly Gly Thr

1 5

<210> 263

<211> 45

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 263

gcgagatcgg tgtatagtac cacctggtac gggggcttcc agcac 45

<210> 264

<211> 15

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 264

Ala Arg Ser Val Tyr Ser Thr Thr Trp Tyr Gly Gly Phe Gln His

1 5 10 15

<210> 265

<211> 321

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 265

gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgtat ctgtgggaga cagagtcacc 60

atcacttgtc gggcgagtca ggttattagc agttggttag cctggtatca gctgaaacca 120

gggaaagccc ctaaactcct gatctatgct gcatccagtt tacaaagtgg ggtcccatca 180

aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcgg cctgcagcct 240

gaagattttg cagtttacta ttgtcaacag actaacagtt tccctctcac tttcggcgga 300

gggaccaagg tggagatcaa a 321

<210> 266

<211> 107

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 266

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Val Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Val Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Leu Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Asn Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 267

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 267

caggttatta gcagttgg 18

<210> 268

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 268

Gln Val Ile Ser Ser Trp

1 5

<210> 269

<211> 9

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 269

gctgcatcc 9

<210> 270

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 270

Ala Ala Ser

1

<210> 271

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 271

caacagacta acagtttccc tctcact 27

<210> 272

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 272

Gln Gln Thr Asn Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 273

<211> 366

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 273

gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaaac ttggaacagc ctggggggtc ccttagactc 60

tcctgtacag cctctggatt cacctttagc agatctgcca tgaactgggt ccgccgggct 120

ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagga attagtggta gtggtggtcg aacatactac 180

gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa tacgctatat 240

ctgcaaatga acagcctgag cgccgaggac acggccgcat attactgtgc gaaagattcg 300

tatactacca gttggtacgg aggtatggac gtctggggcc acgggaccac ggtcaccgtc 360

tcctca 366

<210> 274

<211> 122

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 274

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asn Leu Glu Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Ser

20 25 30

Ala Met Asn Trp Val Arg Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Ser Gly Ser Gly Gly Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Ser Ala Glu Asp Thr Ala Ala Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Asp Ser Tyr Thr Thr Ser Trp Tyr Gly Gly Met Asp Val Trp

100 105 110

Gly His Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 275

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 275

ggattcacct ttagcagatc tgcc 24

<210> 276

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 276

Gly Phe Thr Phe Ser Arg Ser Ala

1 5

<210> 277

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 277

attagtggta gtggtggtcg aaca 24

<210> 278

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 278

Ile Ser Gly Ser Gly Gly Arg Thr

1 5

<210> 279

<211> 45

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 279

gcgaaagatt cgtatactac cagttggtac ggaggtatgg acgtc 45

<210> 280

<211> 15

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 280

Ala Lys Asp Ser Tyr Thr Thr Ser Trp Tyr Gly Gly Met Asp Val

1 5 10 15

<210> 281

<211> 321

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 281

gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60

atcacttgtc gggcgagtca gggtattttc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120

ggaaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcttccagtt tacaaagtgg ggtcccatca 180

agattcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240

gaggattttg caatttacta ttgtcaacag gctaacagtg tcccgatcac cttcggccaa 300

gggacacgac tggagattaa a 321

<210> 282

<211> 107

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 282

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Phe Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Ile Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Val Pro Ile

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 283

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 283

cagggtattt tcagctgg 18

<210> 284

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 284

Gln Gly Ile Phe Ser Trp

1 5

<210> 285

<211> 9

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 285

gctgcttcc 9

<210> 286

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 286

Ala Ala Ser

1

<210> 287

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 287

caacaggcta acagtgtccc gatcacc 27

<210> 288

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 288

Gln Gln Ala Asn Ser Val Pro Ile Thr

1 5

<210> 289

<211> 366

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 289

gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60

tcctgttcag cctctggatt cacctttagc agctatgcca tgaactgggt ccgccaggct 120

ccagggaagg ggctggagtg ggtcaccgct attagtggca gtggtggtgg cacatactac 180

gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa ctcgctgttt 240

ctgcaattga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gaaacaaacg 300

tataccagca gctggtacgg tggctttgat atctggggcc aggggacaat ggtcaccgtc 360

tcttca 366

<210> 290

<211> 122

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 290

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Thr Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Gly Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ser Leu Phe

65 70 75 80

Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Gln Thr Tyr Thr Ser Ser Trp Tyr Gly Gly Phe Asp Ile Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 291

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 291

ggattcacct ttagcagcta tgcc 24

<210> 292

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 292

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala

1 5

<210> 293

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 293

attagtggca gtggtggtgg caca 24

<210> 294

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 294

Ile Ser Gly Ser Gly Gly Gly Thr

1 5

<210> 295

<211> 45

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 295

gcgaaacaaa cgtataccag cagctggtac ggtggctttg atatc 45

<210> 296

<211> 15

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 296

Ala Lys Gln Thr Tyr Thr Ser Ser Trp Tyr Gly Gly Phe Asp Ile

1 5 10 15

<210> 297

<211> 321

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 297

gacatccaga tgacccagtc gccatcttcc gtgtccgcgt ctgtaggaga cagagtcacc 60

atcacttgtc gggcgagtca gggttttagt tcctggttag cctggtatca gcagatacca 120

gggaaagccc ccaagctcct gatctatgct gcatcaaggt tgcaaagtgg ggtcccatcc 180

aggttccgcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240

gaggattttg caacttacta ttgtcaacag gctaacagtt tcccgctcac tttcggcgga 300

gggaccaagg tggagatcaa a 321

<210> 298

<211> 107

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 298

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Phe Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Arg Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Arg Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 299

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 299

cagggtttta gttcctgg 18

<210> 300

<211> 6

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 300

Gln Gly Phe Ser Ser Trp

1 5

<210> 301

<211> 9

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 301

gctgcatca 9

<210> 302

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 302

Ala Ala Ser

1

<210> 303

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 303

caacaggcta acagtttccc gctcact 27

<210> 304

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 304

Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Leu Thr

1 5

<210> 305

<211> 167

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 305

Ser Ile Thr Gly Ile Ser Pro Ile Thr Glu Ser Leu Ala Ser Leu Ser

1 5 10 15

Thr Tyr Asn Asp Gln Ser Ile Thr Phe Ala Leu Glu Asp Glu Ser Tyr

20 25 30

Glu Ile Tyr Val Glu Asp Leu Lys Lys Asp Lys Lys Lys Asp Lys Val

35 40 45

Leu Leu Ser Tyr Tyr Glu Ser Gln His Pro Ser Ser Glu Ser Gly Asp

50 55 60

Gly Val Asp Gly Lys Met Leu Met Val Thr Leu Ser Pro Thr Lys Asp

65 70 75 80

Phe Trp Leu Gln Ala Asn Asn Lys Glu His Ser Val Glu Leu His Lys

85 90 95

Cys Glu Lys Pro Leu Pro Asp Gln Ala Phe Phe Val Leu His Asn Arg

100 105 110

Ser Phe Asn Cys Val Ser Phe Glu Cys Lys Thr Asp Pro Gly Val Phe

115 120 125

Ile Gly Val Lys Asp Asn His Leu Ala Leu Ile Lys Val Asp Tyr Ser

130 135 140

Glu Asn Leu Gly Ser Glu Asn Ile Leu Phe Lys Leu Ser Glu Ile Leu

145 150 155 160

Glu His His His His His His

165

<210> 306

<211> 167

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 306

Ser Ile Thr Gly Ile Ser Pro Ile Thr Glu Ser Leu Ala Ser Leu Ser

1 5 10 15

Thr Tyr Asn Asp Gln Ser Ile Thr Phe Ala Leu Glu Asp Glu Ser Tyr

20 25 30

Glu Ile Tyr Val Glu Asp Leu Lys Lys Asp Lys Lys Lys Asp Lys Val

35 40 45

Leu Leu Ser Tyr Tyr Glu Ser Gln His Pro Ser Ser Glu Ser Gly Asp

50 55 60

Gly Val Asp Gly Lys Met Leu Met Val Thr Leu Ser Pro Thr Lys Asp

65 70 75 80

Phe Trp Leu Gln Ala Asn Asn Lys Glu His Ser Val Glu Leu His Lys

85 90 95

Cys Glu Lys Pro Leu Pro Asp Gln Ala Phe Phe Val Leu His Asn Arg

100 105 110

Ser Phe Asn Cys Val Ser Phe Glu Cys Lys Thr Asp Pro Gly Val Phe

115 120 125

Ile Gly Val Lys Asp Asn His Leu Ala Leu Ile Lys Val Asp Tyr Ser

130 135 140

Glu Asn Leu Gly Ser Glu Asn Ile Leu Phe Lys Leu Ser Glu Ile Leu

145 150 155 160

Glu His His His His His His

165

<210> 307

<211> 354

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 307

caggtcacct tgaaggagtc tggtcctgtg ctggtgaaac ccacagagag cctcacgctg 60

acctgctccg tctctggatt ctcactcagt aatgttagaa tgggtgtgag ctggatccgt 120

cagtccccag ggaaggccct ggagtggctt gcacacattt tttcgaatga cgaaaaatcc 180

tacaccacat ctctgaagac caggctcacc atctccaagg acacctccag aagccaggtg 240

gtccttacca tgaccgacat ggaccctggg gacacagcca catattactg tgcacggata 300

cggaatttgg cctttaatta ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctca 354

<210> 308

<211> 118

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 308

Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Thr Glu

1 5 10 15

Ser Leu Thr Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Asn Val

20 25 30

Arg Met Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Ser Pro Gly Lys Ala Leu Glu

35 40 45

Trp Leu Ala His Ile Phe Ser Asn Asp Glu Lys Ser Tyr Thr Thr Ser

50 55 60

Leu Lys Thr Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Arg Ser Gln Val

65 70 75 80

Val Leu Thr Met Thr Asp Met Asp Pro Gly Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr

85 90 95

Cys Ala Arg Ile Arg Asn Leu Ala Phe Asn Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 309

<211> 30

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 309

ggattctcac tcagtaatgt tagaatgggt 30

<210> 310

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 310

Gly Phe Ser Leu Ser Asn Val Arg Met Gly

1 5 10

<210> 311

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 311

attttttcga atgacgaaaa a 21

<210> 312

<211> 7

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 312

Ile Phe Ser Asn Asp Glu Lys

1 5

<210> 313

<211> 30

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 313

gcacggatac ggaatttggc ctttaattac 30

<210> 314

<211> 10

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 314

Ala Arg Ile Arg Asn Leu Ala Phe Asn Tyr

1 5 10

<210> 315

<211> 339

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 315

gacttcgtga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60

atcaactgca agtccagcca gagtgtgtta cacaggtcca gcaataagaa ctacttagct 120

tggtatcagc agaagccagg acagcctcct aacctgctca tttactgggc atctacccgg 180

gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240

atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcagcaata ttatggtact 300

ctatttactt tcggccctgg gaccaaagtg gatatcaaa 339

<210> 316

<211> 113

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 316

Asp Phe Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu His Arg

20 25 30

Ser Ser Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Asn Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln

85 90 95

Tyr Tyr Gly Thr Leu Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile

100 105 110

Lys

<210> 317

<211> 36

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 317

cagagtgtgt tacacaggtc cagcaataag aactac 36

<210> 318

<211> 12

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 318

Gln Ser Val Leu His Arg Ser Ser Asn Lys Asn Tyr

1 5 10

<210> 319

<211> 9

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 319

tgggcatct 9

<210> 320

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 320

Trp Ala Ser

1

<210> 321

<211> 27

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 321

cagcaatatt atggtactct atttact 27

<210> 322

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<400> 322

Gln Gln Tyr Tyr Gly Thr Leu Phe Thr

1 5

<210> 323

<211> 537

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hST2-hFc

<400> 323

Lys Phe Ser Lys Gln Ser Trp Gly Leu Glu Asn Glu Ala Leu Ile Val

1 5 10 15

Arg Cys Pro Arg Gln Gly Lys Pro Ser Tyr Thr Val Asp Trp Tyr Tyr

20 25 30

Ser Gln Thr Asn Lys Ser Ile Pro Thr Gln Glu Arg Asn Arg Val Phe

35 40 45

Ala Ser Gly Gln Leu Leu Lys Phe Leu Pro Ala Ala Val Ala Asp Ser

50 55 60

Gly Ile Tyr Thr Cys Ile Val Arg Ser Pro Thr Phe Asn Arg Thr Gly

65 70 75 80

Tyr Ala Asn Val Thr Ile Tyr Lys Lys Gln Ser Asp Cys Asn Val Pro

85 90 95

Asp Tyr Leu Met Tyr Ser Thr Val Ser Gly Ser Glu Lys Asn Ser Lys

100 105 110

Ile Tyr Cys Pro Thr Ile Asp Leu Tyr Asn Trp Thr Ala Pro Leu Glu

115 120 125

Trp Phe Lys Asn Cys Gln Ala Leu Gln Gly Ser Arg Tyr Arg Ala His

130 135 140

Lys Ser Phe Leu Val Ile Asp Asn Val Met Thr Glu Asp Ala Gly Asp

145 150 155 160

Tyr Thr Cys Lys Phe Ile His Asn Glu Asn Gly Ala Asn Tyr Ser Val

165 170 175

Thr Ala Thr Arg Ser Phe Thr Val Lys Asp Glu Gln Gly Phe Ser Leu

180 185 190

Phe Pro Val Ile Gly Ala Pro Ala Gln Asn Glu Ile Lys Glu Val Glu

195 200 205

Ile Gly Lys Asn Ala Asn Leu Thr Cys Ser Ala Cys Phe Gly Lys Gly

210 215 220

Thr Gln Phe Leu Ala Ala Val Leu Trp Gln Leu Asn Gly Thr Lys Ile

225 230 235 240

Thr Asp Phe Gly Glu Pro Arg Ile Gln Gln Glu Glu Gly Gln Asn Gln

245 250 255

Ser Phe Ser Asn Gly Leu Ala Cys Leu Asp Met Val Leu Arg Ile Ala

260 265 270

Asp Val Lys Glu Glu Asp Leu Leu Leu Gln Tyr Asp Cys Leu Ala Leu

275 280 285

Asn Leu His Gly Leu Arg Arg His Thr Val Arg Leu Ser Arg Lys Asn

290 295 300

Pro Ile Asp His His Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

305 310 315 320

Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

325 330 335

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

340 345 350

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr

355 360 365

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

370 375 380

Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

385 390 395 400

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

405 410 415

Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

420 425 430

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu

435 440 445

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

450 455 460

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

465 470 475 480

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

485 490 495

Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val

500 505 510

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

515 520 525

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

530 535

<210> 324

<211> 543

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hST2-mFc

<400> 324

Lys Phe Ser Lys Gln Ser Trp Gly Leu Glu Asn Glu Ala Leu Ile Val

1 5 10 15

Arg Cys Pro Arg Gln Gly Lys Pro Ser Tyr Thr Val Asp Trp Tyr Tyr

20 25 30

Ser Gln Thr Asn Lys Ser Ile Pro Thr Gln Glu Arg Asn Arg Val Phe

35 40 45

Ala Ser Gly Gln Leu Leu Lys Phe Leu Pro Ala Ala Val Ala Asp Ser

50 55 60

Gly Ile Tyr Thr Cys Ile Val Arg Ser Pro Thr Phe Asn Arg Thr Gly

65 70 75 80

Tyr Ala Asn Val Thr Ile Tyr Lys Lys Gln Ser Asp Cys Asn Val Pro

85 90 95

Asp Tyr Leu Met Tyr Ser Thr Val Ser Gly Ser Glu Lys Asn Ser Lys

100 105 110

Ile Tyr Cys Pro Thr Ile Asp Leu Tyr Asn Trp Thr Ala Pro Leu Glu

115 120 125

Trp Phe Lys Asn Cys Gln Ala Leu Gln Gly Ser Arg Tyr Arg Ala His

130 135 140

Lys Ser Phe Leu Val Ile Asp Asn Val Met Thr Glu Asp Ala Gly Asp

145 150 155 160

Tyr Thr Cys Lys Phe Ile His Asn Glu Asn Gly Ala Asn Tyr Ser Val

165 170 175

Thr Ala Thr Arg Ser Phe Thr Val Lys Asp Glu Gln Gly Phe Ser Leu

180 185 190

Phe Pro Val Ile Gly Ala Pro Ala Gln Asn Glu Ile Lys Glu Val Glu

195 200 205

Ile Gly Lys Asn Ala Asn Leu Thr Cys Ser Ala Cys Phe Gly Lys Gly

210 215 220

Thr Gln Phe Leu Ala Ala Val Leu Trp Gln Leu Asn Gly Thr Lys Ile

225 230 235 240

Thr Asp Phe Gly Glu Pro Arg Ile Gln Gln Glu Glu Gly Gln Asn Gln

245 250 255

Ser Phe Ser Asn Gly Leu Ala Cys Leu Asp Met Val Leu Arg Ile Ala

260 265 270

Asp Val Lys Glu Glu Asp Leu Leu Leu Gln Tyr Asp Cys Leu Ala Leu

275 280 285

Asn Leu His Gly Leu Arg Arg His Thr Val Arg Leu Ser Arg Lys Asn

290 295 300

Pro Ile Asp His His Ser Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys

305 310 315 320

Pro Pro Cys Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val

325 330 335

Phe Ile Phe Pro Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser

340 345 350

Pro Ile Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp

355 360 365

Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln

370 375 380

Thr Gln Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val Val Ser

385 390 395 400

Ala Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys

405 410 415

Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile

420 425 430

Ser Lys Pro Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro

435 440 445

Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu Thr Cys Met

450 455 460

Val Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn

465 470 475 480

Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser

485 490 495

Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn

500 505 510

Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu

515 520 525

His Asn His His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly Lys

530 535 540

<210> 325

<211> 884

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hST2-hIL1RAcP-mFc

<400> 325

Lys Phe Ser Lys Gln Ser Trp Gly Leu Glu Asn Glu Ala Leu Ile Val

1 5 10 15

Arg Cys Pro Arg Gln Gly Lys Pro Ser Tyr Thr Val Asp Trp Tyr Tyr

20 25 30

Ser Gln Thr Asn Lys Ser Ile Pro Thr Gln Glu Arg Asn Arg Val Phe

35 40 45

Ala Ser Gly Gln Leu Leu Lys Phe Leu Pro Ala Ala Val Ala Asp Ser

50 55 60

Gly Ile Tyr Thr Cys Ile Val Arg Ser Pro Thr Phe Asn Arg Thr Gly

65 70 75 80

Tyr Ala Asn Val Thr Ile Tyr Lys Lys Gln Ser Asp Cys Asn Val Pro

85 90 95

Asp Tyr Leu Met Tyr Ser Thr Val Ser Gly Ser Glu Lys Asn Ser Lys

100 105 110

Ile Tyr Cys Pro Thr Ile Asp Leu Tyr Asn Trp Thr Ala Pro Leu Glu

115 120 125

Trp Phe Lys Asn Cys Gln Ala Leu Gln Gly Ser Arg Tyr Arg Ala His

130 135 140

Lys Ser Phe Leu Val Ile Asp Asn Val Met Thr Glu Asp Ala Gly Asp

145 150 155 160

Tyr Thr Cys Lys Phe Ile His Asn Glu Asn Gly Ala Asn Tyr Ser Val

165 170 175

Thr Ala Thr Arg Ser Phe Thr Val Lys Asp Glu Gln Gly Phe Ser Leu

180 185 190

Phe Pro Val Ile Gly Ala Pro Ala Gln Asn Glu Ile Lys Glu Val Glu

195 200 205

Ile Gly Lys Asn Ala Asn Leu Thr Cys Ser Ala Cys Phe Gly Lys Gly

210 215 220

Thr Gln Phe Leu Ala Ala Val Leu Trp Gln Leu Asn Gly Thr Lys Ile

225 230 235 240

Thr Asp Phe Gly Glu Pro Arg Ile Gln Gln Glu Glu Gly Gln Asn Gln

245 250 255

Ser Phe Ser Asn Gly Leu Ala Cys Leu Asp Met Val Leu Arg Ile Ala

260 265 270

Asp Val Lys Glu Glu Asp Leu Leu Leu Gln Tyr Asp Cys Leu Ala Leu

275 280 285

Asn Leu His Gly Leu Arg Arg His Thr Val Arg Leu Ser Arg Lys Asn

290 295 300

Pro Ile Asp His His Ser Ser Glu Arg Cys Asp Asp Trp Gly Leu Asp

305 310 315 320

Thr Met Arg Gln Ile Gln Val Phe Glu Asp Glu Pro Ala Arg Ile Lys

325 330 335

Cys Pro Leu Phe Glu His Phe Leu Lys Phe Asn Tyr Ser Thr Ala His

340 345 350

Ser Ala Gly Leu Thr Leu Ile Trp Tyr Trp Thr Arg Gln Asp Arg Asp

355 360 365

Leu Glu Glu Pro Ile Asn Phe Arg Leu Pro Glu Asn Arg Ile Ser Lys

370 375 380

Glu Lys Asp Val Leu Trp Phe Arg Pro Thr Leu Leu Asn Asp Thr Gly

385 390 395 400

Asn Tyr Thr Cys Met Leu Arg Asn Thr Thr Tyr Cys Ser Lys Val Ala

405 410 415

Phe Pro Leu Glu Val Val Gln Lys Asp Ser Cys Phe Asn Ser Pro Met

420 425 430

Lys Leu Pro Val His Lys Leu Tyr Ile Glu Tyr Gly Ile Gln Arg Ile

435 440 445

Thr Cys Pro Asn Val Asp Gly Tyr Phe Pro Ser Ser Val Lys Pro Thr

450 455 460

Ile Thr Trp Tyr Met Gly Cys Tyr Lys Ile Gln Asn Phe Asn Asn Val

465 470 475 480

Ile Pro Glu Gly Met Asn Leu Ser Phe Leu Ile Ala Leu Ile Ser Asn

485 490 495

Asn Gly Asn Tyr Thr Cys Val Val Thr Tyr Pro Glu Asn Gly Arg Thr

500 505 510

Phe His Leu Thr Arg Thr Leu Thr Val Lys Val Val Gly Ser Pro Lys

515 520 525

Asn Ala Val Pro Pro Val Ile His Ser Pro Asn Asp His Val Val Tyr

530 535 540

Glu Lys Glu Pro Gly Glu Glu Leu Leu Ile Pro Cys Thr Val Tyr Phe

545 550 555 560

Ser Phe Leu Met Asp Ser Arg Asn Glu Val Trp Trp Thr Ile Asp Gly

565 570 575

Lys Lys Pro Asp Asp Ile Thr Ile Asp Val Thr Ile Asn Glu Ser Ile

580 585 590

Ser His Ser Arg Thr Glu Asp Glu Thr Arg Thr Gln Ile Leu Ser Ile

595 600 605

Lys Lys Val Thr Ser Glu Asp Leu Lys Arg Ser Tyr Val Cys His Ala

610 615 620

Arg Ser Ala Lys Gly Glu Val Ala Lys Ala Ala Lys Val Lys Gln Lys

625 630 635 640

Val Pro Ala Pro Arg Tyr Thr Val Glu Ser Gly Glu Pro Arg Gly Pro

645 650 655

Thr Ile Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Leu

660 665 670

Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu

675 680 685

Met Ile Ser Leu Ser Pro Ile Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser

690 695 700

Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu

705 710 715 720

Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr

725 730 735

Leu Arg Val Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser

740 745 750

Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro

755 760 765

Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gln

770 775 780

Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys Lys Gln Val

785 790 795 800

Thr Leu Thr Cys Met Val Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val

805 810 815

Glu Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu

820 825 830

Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg

835 840 845

Val Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val

850 855 860

Val His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg

865 870 875 880

Thr Pro Gly Lys

<210> 326

<211> 880

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> mST2-mIL1RAcP-mFc

<400> 326

Ser Lys Ser Ser Trp Gly Leu Glu Asn Glu Ala Leu Ile Val Arg Cys

1 5 10 15

Pro Gln Arg Gly Arg Ser Thr Tyr Pro Val Glu Trp Tyr Tyr Ser Asp

20 25 30

Thr Asn Glu Ser Ile Pro Thr Gln Lys Arg Asn Arg Ile Phe Val Ser

35 40 45

Arg Asp Arg Leu Lys Phe Leu Pro Ala Arg Val Glu Asp Ser Gly Ile

50 55 60

Tyr Ala Cys Val Ile Arg Ser Pro Asn Leu Asn Lys Thr Gly Tyr Leu

65 70 75 80

Asn Val Thr Ile His Lys Lys Pro Pro Ser Cys Asn Ile Pro Asp Tyr

85 90 95

Leu Met Tyr Ser Thr Val Arg Gly Ser Asp Lys Asn Phe Lys Ile Thr

100 105 110

Cys Pro Thr Ile Asp Leu Tyr Asn Trp Thr Ala Pro Val Gln Trp Phe

115 120 125

Lys Asn Cys Lys Ala Leu Gln Glu Pro Arg Phe Arg Ala His Arg Ser

130 135 140

Tyr Leu Phe Ile Asp Asn Val Thr His Asp Asp Glu Gly Asp Tyr Thr

145 150 155 160

Cys Gln Phe Thr His Ala Glu Asn Gly Thr Asn Tyr Ile Val Thr Ala

165 170 175

Thr Arg Ser Phe Thr Val Glu Glu Lys Gly Phe Ser Met Phe Pro Val

180 185 190

Ile Thr Asn Pro Pro Tyr Asn His Thr Met Glu Val Glu Ile Gly Lys

195 200 205

Pro Ala Ser Ile Ala Cys Ser Ala Cys Phe Gly Lys Gly Ser His Phe

210 215 220

Leu Ala Asp Val Leu Trp Gln Ile Asn Lys Thr Val Val Gly Asn Phe

225 230 235 240

Gly Glu Ala Arg Ile Gln Glu Glu Glu Gly Arg Asn Glu Ser Ser Ser

245 250 255

Asn Asp Met Asp Cys Leu Thr Ser Val Leu Arg Ile Thr Gly Val Thr

260 265 270

Glu Lys Asp Leu Ser Leu Glu Tyr Asp Cys Leu Ala Leu Asn Leu His

275 280 285

Gly Met Ile Arg His Thr Ile Arg Leu Arg Arg Lys Gln Pro Ile Asp

290 295 300

His Arg Ser Glu Arg Cys Asp Asp Trp Gly Leu Asp Thr Met Arg Gln

305 310 315 320

Ile Gln Val Phe Glu Asp Glu Pro Ala Arg Ile Lys Cys Pro Leu Phe

325 330 335

Glu His Phe Leu Lys Tyr Asn Tyr Ser Thr Ala His Ser Ser Gly Leu

340 345 350

Thr Leu Ile Trp Tyr Trp Thr Arg Gln Asp Arg Asp Leu Glu Glu Pro

355 360 365

Ile Asn Phe Arg Leu Pro Glu Asn Arg Ile Ser Lys Glu Lys Asp Val

370 375 380

Leu Trp Phe Arg Pro Thr Leu Leu Asn Asp Thr Gly Asn Tyr Thr Cys

385 390 395 400

Met Leu Arg Asn Thr Thr Tyr Cys Ser Lys Val Ala Phe Pro Leu Glu

405 410 415

Val Val Gln Lys Asp Ser Cys Phe Asn Ser Ala Met Arg Phe Pro Val

420 425 430

His Lys Met Tyr Ile Glu His Gly Ile His Lys Ile Thr Cys Pro Asn

435 440 445

Val Asp Gly Tyr Phe Pro Ser Ser Val Lys Pro Ser Val Thr Trp Tyr

450 455 460

Lys Gly Cys Thr Glu Ile Val Asp Phe His Asn Val Leu Pro Glu Gly

465 470 475 480

Met Asn Leu Ser Phe Phe Ile Pro Leu Val Ser Asn Asn Gly Asn Tyr

485 490 495

Thr Cys Val Val Thr Tyr Pro Glu Asn Gly Arg Leu Phe His Leu Thr

500 505 510

Arg Thr Val Thr Val Lys Val Val Gly Ser Pro Lys Asp Ala Leu Pro

515 520 525

Pro Gln Ile Tyr Ser Pro Asn Asp Arg Val Val Tyr Glu Lys Glu Pro

530 535 540

Gly Glu Glu Leu Val Ile Pro Cys Lys Val Tyr Phe Ser Phe Ile Met

545 550 555 560

Asp Ser His Asn Glu Val Trp Trp Thr Ile Asp Gly Lys Lys Pro Asp

565 570 575

Asp Val Thr Val Asp Ile Thr Ile Asn Glu Ser Val Ser Tyr Ser Ser

580 585 590

Thr Glu Asp Glu Thr Arg Thr Gln Ile Leu Ser Ile Lys Lys Val Thr

595 600 605

Pro Glu Asp Leu Arg Arg Asn Tyr Val Cys His Ala Arg Asn Thr Lys

610 615 620

Gly Glu Ala Glu Gln Ala Ala Lys Val Lys Gln Lys Val Ile Pro Pro

625 630 635 640

Arg Tyr Thr Val Glu Ser Gly Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro

645 650 655

Cys Pro Pro Cys Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro Ser

660 665 670

Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu

675 680 685

Ser Pro Ile Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro

690 695 700

Asp Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala

705 710 715 720

Gln Thr Gln Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val Val

725 730 735

Ser Ala Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe

740 745 750

Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg Thr

755 760 765

Ile Ser Lys Pro Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu

770 775 780

Pro Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu Thr Cys

785 790 795 800

Met Val Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn

805 810 815

Asn Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp

820 825 830

Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys

835 840 845

Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly

850 855 860

Leu His Asn His His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly Lys

865 870 875 880

<210> 327

<211> 876

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hST2-hL1RAcP-hFc

<400> 327

Lys Phe Ser Lys Gln Ser Trp Gly Leu Glu Asn Glu Ala Leu Ile Val

1 5 10 15

Arg Cys Pro Arg Gln Gly Lys Pro Ser Tyr Thr Val Asp Trp Tyr Tyr

20 25 30

Ser Gln Thr Asn Lys Ser Ile Pro Thr Gln Glu Arg Asn Arg Val Phe

35 40 45

Ala Ser Gly Gln Leu Leu Lys Phe Leu Pro Ala Ala Val Ala Asp Ser

50 55 60

Gly Ile Tyr Thr Cys Ile Val Arg Ser Pro Thr Phe Asn Arg Thr Gly

65 70 75 80

Tyr Ala Asn Val Thr Ile Tyr Lys Lys Gln Ser Asp Cys Asn Val Pro

85 90 95

Asp Tyr Leu Met Tyr Ser Thr Val Ser Gly Ser Glu Lys Asn Ser Lys

100 105 110

Ile Tyr Cys Pro Thr Ile Asp Leu Tyr Asn Trp Thr Ala Pro Leu Glu

115 120 125

Trp Phe Lys Asn Cys Gln Ala Leu Gln Gly Ser Arg Tyr Arg Ala His

130 135 140

Lys Ser Phe Leu Val Ile Asp Asn Val Met Thr Glu Asp Ala Gly Asp

145 150 155 160

Tyr Thr Cys Lys Phe Ile His Asn Glu Asn Gly Ala Asn Tyr Ser Val

165 170 175

Thr Ala Thr Arg Ser Phe Thr Val Lys Asp Glu Gln Gly Phe Ser Leu

180 185 190

Phe Pro Val Ile Gly Ala Pro Ala Gln Asn Glu Ile Lys Glu Val Glu

195 200 205

Ile Gly Lys Asn Ala Asn Leu Thr Cys Ser Ala Cys Phe Gly Lys Gly

210 215 220

Thr Gln Phe Leu Ala Ala Val Leu Trp Gln Leu Asn Gly Thr Lys Ile

225 230 235 240

Thr Asp Phe Gly Glu Pro Arg Ile Gln Gln Glu Glu Gly Gln Asn Gln

245 250 255

Ser Phe Ser Asn Gly Leu Ala Cys Leu Asp Met Val Leu Arg Ile Ala

260 265 270

Asp Val Lys Glu Glu Asp Leu Leu Leu Gln Tyr Asp Cys Leu Ala Leu

275 280 285

Asn Leu His Gly Leu Arg Arg His Thr Val Arg Leu Ser Arg Lys Asn

290 295 300

Pro Ile Asp His His Ser Ser Glu Arg Cys Asp Asp Trp Gly Leu Asp

305 310 315 320

Thr Met Arg Gln Ile Gln Val Phe Glu Asp Glu Pro Ala Arg Ile Lys

325 330 335

Cys Pro Leu Phe Glu His Phe Leu Lys Phe Asn Tyr Ser Thr Ala His

340 345 350

Ser Ala Gly Leu Thr Leu Ile Trp Tyr Trp Thr Arg Gln Asp Arg Asp

355 360 365

Leu Glu Glu Pro Ile Asn Phe Arg Leu Pro Glu Asn Arg Ile Ser Lys

370 375 380

Glu Lys Asp Val Leu Trp Phe Arg Pro Thr Leu Leu Asn Asp Thr Gly

385 390 395 400

Asn Tyr Thr Cys Met Leu Arg Asn Thr Thr Tyr Cys Ser Lys Val Ala

405 410 415

Phe Pro Leu Glu Val Val Gln Lys Asp Ser Cys Phe Asn Ser Pro Met

420 425 430

Lys Leu Pro Val His Lys Leu Tyr Ile Glu Tyr Gly Ile Gln Arg Ile

435 440 445

Thr Cys Pro Asn Val Asp Gly Tyr Phe Pro Ser Ser Val Lys Pro Thr

450 455 460

Ile Thr Trp Tyr Met Gly Cys Tyr Lys Ile Gln Asn Phe Asn Asn Val

465 470 475 480

Ile Pro Glu Gly Met Asn Leu Ser Phe Leu Ile Ala Leu Ile Ser Asn

485 490 495

Asn Gly Asn Tyr Thr Cys Val Val Thr Tyr Pro Glu Asn Gly Arg Thr

500 505 510

Phe His Leu Thr Arg Thr Leu Thr Val Lys Val Val Gly Ser Pro Lys

515 520 525

Asn Ala Val Pro Pro Val Ile His Ser Pro Asn Asp His Val Val Tyr

530 535 540

Glu Lys Glu Pro Gly Glu Glu Leu Leu Ile Pro Cys Thr Val Tyr Phe

545 550 555 560

Ser Phe Leu Met Asp Ser Arg Asn Glu Val Trp Trp Thr Ile Asp Gly

565 570 575

Lys Lys Pro Asp Asp Ile Thr Ile Asp Val Thr Ile Asn Glu Ser Ile

580 585 590

Ser His Ser Arg Thr Glu Asp Glu Thr Arg Thr Gln Ile Leu Ser Ile

595 600 605

Lys Lys Val Thr Ser Glu Asp Leu Lys Arg Ser Tyr Val Cys His Ala

610 615 620

Arg Ser Ala Lys Gly Glu Val Ala Lys Ala Ala Lys Val Lys Gln Lys

625 630 635 640

Val Pro Ala Pro Arg Tyr Thr Val Glu Asp Lys Thr His Thr Cys Pro

645 650 655

Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe

660 665 670

Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val

675 680 685

Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe

690 695 700

Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro

705 710 715 720

Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr

725 730 735

Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

740 745 750

Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

755 760 765

Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg

770 775 780

Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly

785 790 795 800

Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro

805 810 815

Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser

820 825 830

Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln

835 840 845

Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

850 855 860

Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

865 870 875

<210> 328

<211> 310

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> внеклеточный домен ST2 человека

<400> 328

Lys Phe Ser Lys Gln Ser Trp Gly Leu Glu Asn Glu Ala Leu Ile Val

1 5 10 15

Arg Cys Pro Arg Gln Gly Lys Pro Ser Tyr Thr Val Asp Trp Tyr Tyr

20 25 30

Ser Gln Thr Asn Lys Ser Ile Pro Thr Gln Glu Arg Asn Arg Val Phe

35 40 45

Ala Ser Gly Gln Leu Leu Lys Phe Leu Pro Ala Ala Val Ala Asp Ser

50 55 60

Gly Ile Tyr Thr Cys Ile Val Arg Ser Pro Thr Phe Asn Arg Thr Gly

65 70 75 80

Tyr Ala Asn Val Thr Ile Tyr Lys Lys Gln Ser Asp Cys Asn Val Pro

85 90 95

Asp Tyr Leu Met Tyr Ser Thr Val Ser Gly Ser Glu Lys Asn Ser Lys

100 105 110

Ile Tyr Cys Pro Thr Ile Asp Leu Tyr Asn Trp Thr Ala Pro Leu Glu

115 120 125

Trp Phe Lys Asn Cys Gln Ala Leu Gln Gly Ser Arg Tyr Arg Ala His

130 135 140

Lys Ser Phe Leu Val Ile Asp Asn Val Met Thr Glu Asp Ala Gly Asp

145 150 155 160

Tyr Thr Cys Lys Phe Ile His Asn Glu Asn Gly Ala Asn Tyr Ser Val

165 170 175

Thr Ala Thr Arg Ser Phe Thr Val Lys Asp Glu Gln Gly Phe Ser Leu

180 185 190

Phe Pro Val Ile Gly Ala Pro Ala Gln Asn Glu Ile Lys Glu Val Glu

195 200 205

Ile Gly Lys Asn Ala Asn Leu Thr Cys Ser Ala Cys Phe Gly Lys Gly

210 215 220

Thr Gln Phe Leu Ala Ala Val Leu Trp Gln Leu Asn Gly Thr Lys Ile

225 230 235 240

Thr Asp Phe Gly Glu Pro Arg Ile Gln Gln Glu Glu Gly Gln Asn Gln

245 250 255

Ser Phe Ser Asn Gly Leu Ala Cys Leu Asp Met Val Leu Arg Ile Ala

260 265 270

Asp Val Lys Glu Glu Asp Leu Leu Leu Gln Tyr Asp Cys Leu Ala Leu

275 280 285

Asn Leu His Gly Leu Arg Arg His Thr Val Arg Leu Ser Arg Lys Asn

290 295 300

Pro Ile Asp His His Ser

305 310

<210> 329

<211> 306

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> внеклеточный домен ST2 мыши

<400> 329

Ser Lys Ser Ser Trp Gly Leu Glu Asn Glu Ala Leu Ile Val Arg Cys

1 5 10 15

Pro Gln Arg Gly Arg Ser Thr Tyr Pro Val Glu Trp Tyr Tyr Ser Asp

20 25 30

Thr Asn Glu Ser Ile Pro Thr Gln Lys Arg Asn Arg Ile Phe Val Ser

35 40 45

Arg Asp Arg Leu Lys Phe Leu Pro Ala Arg Val Glu Asp Ser Gly Ile

50 55 60

Tyr Ala Cys Val Ile Arg Ser Pro Asn Leu Asn Lys Thr Gly Tyr Leu

65 70 75 80

Asn Val Thr Ile His Lys Lys Pro Pro Ser Cys Asn Ile Pro Asp Tyr

85 90 95

Leu Met Tyr Ser Thr Val Arg Gly Ser Asp Lys Asn Phe Lys Ile Thr

100 105 110

Cys Pro Thr Ile Asp Leu Tyr Asn Trp Thr Ala Pro Val Gln Trp Phe

115 120 125

Lys Asn Cys Lys Ala Leu Gln Glu Pro Arg Phe Arg Ala His Arg Ser

130 135 140

Tyr Leu Phe Ile Asp Asn Val Thr His Asp Asp Glu Gly Asp Tyr Thr

145 150 155 160

Cys Gln Phe Thr His Ala Glu Asn Gly Thr Asn Tyr Ile Val Thr Ala

165 170 175

Thr Arg Ser Phe Thr Val Glu Glu Lys Gly Phe Ser Met Phe Pro Val

180 185 190

Ile Thr Asn Pro Pro Tyr Asn His Thr Met Glu Val Glu Ile Gly Lys

195 200 205

Pro Ala Ser Ile Ala Cys Ser Ala Cys Phe Gly Lys Gly Ser His Phe

210 215 220

Leu Ala Asp Val Leu Trp Gln Ile Asn Lys Thr Val Val Gly Asn Phe

225 230 235 240

Gly Glu Ala Arg Ile Gln Glu Glu Glu Gly Arg Asn Glu Ser Ser Ser

245 250 255

Asn Asp Met Asp Cys Leu Thr Ser Val Leu Arg Ile Thr Gly Val Thr

260 265 270

Glu Lys Asp Leu Ser Leu Glu Tyr Asp Cys Leu Ala Leu Asn Leu His

275 280 285

Gly Met Ile Arg His Thr Ile Arg Leu Arg Arg Lys Gln Pro Ile Asp

290 295 300

His Arg

305

<210> 330

<211> 339

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> внеклеточный домен IL1RAcP человека

<400> 330

Ser Glu Arg Cys Asp Asp Trp Gly Leu Asp Thr Met Arg Gln Ile Gln

1 5 10 15

Val Phe Glu Asp Glu Pro Ala Arg Ile Lys Cys Pro Leu Phe Glu His

20 25 30

Phe Leu Lys Phe Asn Tyr Ser Thr Ala His Ser Ala Gly Leu Thr Leu

35 40 45

Ile Trp Tyr Trp Thr Arg Gln Asp Arg Asp Leu Glu Glu Pro Ile Asn

50 55 60

Phe Arg Leu Pro Glu Asn Arg Ile Ser Lys Glu Lys Asp Val Leu Trp

65 70 75 80

Phe Arg Pro Thr Leu Leu Asn Asp Thr Gly Asn Tyr Thr Cys Met Leu

85 90 95

Arg Asn Thr Thr Tyr Cys Ser Lys Val Ala Phe Pro Leu Glu Val Val

100 105 110

Gln Lys Asp Ser Cys Phe Asn Ser Pro Met Lys Leu Pro Val His Lys

115 120 125

Leu Tyr Ile Glu Tyr Gly Ile Gln Arg Ile Thr Cys Pro Asn Val Asp

130 135 140

Gly Tyr Phe Pro Ser Ser Val Lys Pro Thr Ile Thr Trp Tyr Met Gly

145 150 155 160

Cys Tyr Lys Ile Gln Asn Phe Asn Asn Val Ile Pro Glu Gly Met Asn

165 170 175

Leu Ser Phe Leu Ile Ala Leu Ile Ser Asn Asn Gly Asn Tyr Thr Cys

180 185 190

Val Val Thr Tyr Pro Glu Asn Gly Arg Thr Phe His Leu Thr Arg Thr

195 200 205

Leu Thr Val Lys Val Val Gly Ser Pro Lys Asn Ala Val Pro Pro Val

210 215 220

Ile His Ser Pro Asn Asp His Val Val Tyr Glu Lys Glu Pro Gly Glu

225 230 235 240

Glu Leu Leu Ile Pro Cys Thr Val Tyr Phe Ser Phe Leu Met Asp Ser

245 250 255

Arg Asn Glu Val Trp Trp Thr Ile Asp Gly Lys Lys Pro Asp Asp Ile

260 265 270

Thr Ile Asp Val Thr Ile Asn Glu Ser Ile Ser His Ser Arg Thr Glu

275 280 285

Asp Glu Thr Arg Thr Gln Ile Leu Ser Ile Lys Lys Val Thr Ser Glu

290 295 300

Asp Leu Lys Arg Ser Tyr Val Cys His Ala Arg Ser Ala Lys Gly Glu

305 310 315 320

Val Ala Lys Ala Ala Lys Val Lys Gln Lys Val Pro Ala Pro Arg Tyr

325 330 335

Thr Val Glu

<210> 331

<211> 339

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> внеклеточный домен IL1RAcP мыши

<400> 331

Ser Glu Arg Cys Asp Asp Trp Gly Leu Asp Thr Met Arg Gln Ile Gln

1 5 10 15

Val Phe Glu Asp Glu Pro Ala Arg Ile Lys Cys Pro Leu Phe Glu His

20 25 30

Phe Leu Lys Tyr Asn Tyr Ser Thr Ala His Ser Ser Gly Leu Thr Leu

35 40 45

Ile Trp Tyr Trp Thr Arg Gln Asp Arg Asp Leu Glu Glu Pro Ile Asn

50 55 60

Phe Arg Leu Pro Glu Asn Arg Ile Ser Lys Glu Lys Asp Val Leu Trp

65 70 75 80

Phe Arg Pro Thr Leu Leu Asn Asp Thr Gly Asn Tyr Thr Cys Met Leu

85 90 95

Arg Asn Thr Thr Tyr Cys Ser Lys Val Ala Phe Pro Leu Glu Val Val

100 105 110

Gln Lys Asp Ser Cys Phe Asn Ser Ala Met Arg Phe Pro Val His Lys

115 120 125

Met Tyr Ile Glu His Gly Ile His Lys Ile Thr Cys Pro Asn Val Asp

130 135 140

Gly Tyr Phe Pro Ser Ser Val Lys Pro Ser Val Thr Trp Tyr Lys Gly

145 150 155 160

Cys Thr Glu Ile Val Asp Phe His Asn Val Leu Pro Glu Gly Met Asn

165 170 175

Leu Ser Phe Phe Ile Pro Leu Val Ser Asn Asn Gly Asn Tyr Thr Cys

180 185 190

Val Val Thr Tyr Pro Glu Asn Gly Arg Leu Phe His Leu Thr Arg Thr

195 200 205

Val Thr Val Lys Val Val Gly Ser Pro Lys Asp Ala Leu Pro Pro Gln

210 215 220

Ile Tyr Ser Pro Asn Asp Arg Val Val Tyr Glu Lys Glu Pro Gly Glu

225 230 235 240

Glu Leu Val Ile Pro Cys Lys Val Tyr Phe Ser Phe Ile Met Asp Ser

245 250 255

His Asn Glu Val Trp Trp Thr Ile Asp Gly Lys Lys Pro Asp Asp Val

260 265 270

Thr Val Asp Ile Thr Ile Asn Glu Ser Val Ser Tyr Ser Ser Thr Glu

275 280 285

Asp Glu Thr Arg Thr Gln Ile Leu Ser Ile Lys Lys Val Thr Pro Glu

290 295 300

Asp Leu Arg Arg Asn Tyr Val Cys His Ala Arg Asn Thr Lys Gly Glu

305 310 315 320

Ala Glu Gln Ala Ala Lys Val Lys Gln Lys Val Ile Pro Pro Arg Tyr

325 330 335

Thr Val Glu

<210> 332

<211> 227

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Fc IgG1 человека

<400> 332

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly

1 5 10 15

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

20 25 30

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His

35 40 45

Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

50 55 60

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr

65 70 75 80

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

85 90 95

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile

100 105 110

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val

115 120 125

Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser

130 135 140

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

145 150 155 160

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

165 170 175

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val

180 185 190

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

195 200 205

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

210 215 220

Pro Gly Lys

225

<210> 333

<211> 233

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Fc IgG2a мыши

<400> 333

Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys Pro

1 5 10 15

Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys

20 25 30

Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser Pro Ile Val Thr Cys Val

35 40 45

Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp Phe

50 55 60

Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg Glu

65 70 75 80

Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln His

85 90 95

Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys

100 105 110

Asp Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly Ser

115 120 125

Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu Met

130 135 140

Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu Thr Cys Met Val Thr Asp Phe Met Pro

145 150 155 160

Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu Asn

165 170 175

Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met

180 185 190

Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser

195 200 205

Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Thr

210 215 220

Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly Lys

225 230

<210> 334

<211> 167

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> M.fascicularis IL-33-6His

<400> 334

Ser Ile Thr Gly Ile Ser Pro Ile Thr Glu Ser Leu Ala Ser Leu Ser

1 5 10 15

Thr Tyr Asn Asp Gln Ser Ile Thr Phe Ala Leu Glu Asp Glu Ser Tyr

20 25 30

Glu Ile Tyr Val Glu Asp Leu Lys Lys Asp Lys Lys Lys Asp Lys Val

35 40 45

Leu Leu Ser Tyr Tyr Glu Ser Gln His Pro Ser Ser Glu Ser Gly Asp

50 55 60

Gly Val Asp Gly Lys Met Leu Met Val Thr Leu Ser Pro Thr Lys Asp

65 70 75 80

Phe Trp Leu Gln Ala Asn Asn Lys Glu His Ser Val Glu Leu His Lys

85 90 95

Cys Glu Lys Pro Leu Pro Asp Gln Ala Phe Phe Val Leu His Asn Arg

100 105 110

Ser Phe Asn Cys Val Ser Phe Glu Cys Lys Thr Asp Pro Gly Val Phe

115 120 125

Ile Gly Val Lys Asp Asn His Leu Ala Leu Ile Lys Val Asp Tyr Ser

130 135 140

Glu Asn Leu Gly Ser Glu Asn Ile Leu Phe Lys Leu Ser Glu Ile Leu

145 150 155 160

Glu His His His His His His

165

<210> 335

<211> 117

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> мышиная HCVR сурогатного Ат IL-4R

<400> 335

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Arg Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Asn Ile His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Tyr Ile Tyr Pro Asn Asn Gly Asp Asn Gly Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Arg Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Asp Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Arg Leu Arg Tyr Phe Asp Val Trp Gly Thr Gly Thr Thr

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 336

<211> 111

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> мышиная LCVR сурогатного Ат IL-4R

<400> 336

Asn Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr

20 25 30

Gly His Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45

Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Leu Asp

65 70 75 80

Pro Val Glu Ala Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn

85 90 95

Glu Asp Pro Pro Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 337

<211> 124

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCVR дупилумаба

<400> 337

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Glu Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asp Tyr

20 25 30

Ala Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Asp Arg Leu Ser Ile Thr Ile Arg Pro Arg Tyr Tyr Gly Leu

100 105 110

Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser

115 120

<210> 338

<211> 112

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> LCVR дупилумаба

<400> 338

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser

20 25 30

Ile Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Ser Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Phe Tyr Tyr Cys Met Gln Ala

85 90 95

Leu Gln Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 339

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCDR1 дупилумаба

<400> 339

Gly Phe Thr Phe Arg Asp Tyr Ala

1 5

<210> 340

<211> 8

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCDR2 дупилумаба

<400> 340

Ile Ser Gly Ser Gly Gly Asn Thr

1 5

<210> 341

<211> 18

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HCDR3 дупилумаба

<400> 341

Ala Lys Asp Arg Leu Ser Ile Thr Ile Arg Pro Arg Tyr Tyr Gly Leu

1 5 10 15

Asp Val

<210> 342

<211> 11

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> LCDR1 дупилумаба

<400> 342

Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Ile Gly Tyr Asn Tyr

1 5 10

<210> 343

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> LCDR2 дупилумаба

<400> 343

Leu Gly Ser

1

<210> 344

<211> 9

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> LCDR3 дупилумаба

<400> 344

Met Gln Ala Leu Gln Thr Pro Tyr Thr

1 5

<210> 345

<211> 451

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Тяжелая цепь дупилумаба

<400> 345

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Glu Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asp Tyr

20 25 30

Ala Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Asp Arg Leu Ser Ile Thr Ile Arg Pro Arg Tyr Tyr Gly Leu

100 105 110

Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr

115 120 125

Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser

130 135 140

Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu

145 150 155 160

Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His

165 170 175

Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser

180 185 190

Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys

195 200 205

Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu

210 215 220

Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu

225 230 235 240

Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu

245 250 255

Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser

260 265 270

Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu

275 280 285

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr

290 295 300

Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn

305 310 315 320

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser

325 330 335

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln

340 345 350

Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val

355 360 365

Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val

370 375 380

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro

385 390 395 400

Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr

405 410 415

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val

420 425 430

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu

435 440 445

Ser Leu Gly

450

<210> 346

<211> 219

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Легкая цепь дупилумаба

<400> 346

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser

20 25 30

Ile Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Ser Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Phe Tyr Tyr Cys Met Gln Ala

85 90 95

Leu Gln Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

115 120 125

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

130 135 140

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

145 150 155 160

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

165 170 175

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

180 185 190

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

195 200 205

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 347

<211> 207

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> IL-4Ralpha человека

<400> 347

Met Lys Val Leu Gln Glu Pro Thr Cys Val Ser Asp Tyr Met Ser Ile

1 5 10 15

Ser Thr Cys Glu Trp Lys Met Asn Gly Pro Thr Asn Cys Ser Thr Glu

20 25 30

Leu Arg Leu Leu Tyr Gln Leu Val Phe Leu Leu Ser Glu Ala His Thr

35 40 45

Cys Ile Pro Glu Asn Asn Gly Gly Ala Gly Cys Val Cys His Leu Leu

50 55 60

Met Asp Asp Val Val Ser Ala Asp Asn Tyr Thr Leu Asp Leu Trp Ala

65 70 75 80

Gly Gln Gln Leu Leu Trp Lys Gly Ser Phe Lys Pro Ser Glu His Val

85 90 95

Lys Pro Arg Ala Pro Gly Asn Leu Thr Val His Thr Asn Val Ser Asp

100 105 110

Thr Leu Leu Leu Thr Trp Ser Asn Pro Tyr Pro Pro Asp Asn Tyr Leu

115 120 125

Tyr Asn His Leu Thr Tyr Ala Val Asn Ile Trp Ser Glu Asn Asp Pro

130 135 140

Ala Asp Phe Arg Ile Tyr Asn Val Thr Tyr Leu Glu Pro Ser Leu Arg

145 150 155 160

Ile Ala Ala Ser Thr Leu Lys Ser Gly Ile Ser Tyr Arg Ala Arg Val

165 170 175

Arg Ala Trp Ala Gln Cys Tyr Asn Thr Thr Trp Ser Glu Trp Ser Pro

180 185 190

Ser Thr Lys Trp His Asn Ser Tyr Arg Glu Pro Phe Glu Gln His

195 200 205

<210> 348

<211> 270

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hIL33_O95760 (до протеолитической обработки)

<400> 348

Met Lys Pro Lys Met Lys Tyr Ser Thr Asn Lys Ile Ser Thr Ala Lys

1 5 10 15

Trp Lys Asn Thr Ala Ser Lys Ala Leu Cys Phe Lys Leu Gly Lys Ser

20 25 30

Gln Gln Lys Ala Lys Glu Val Cys Pro Met Tyr Phe Met Lys Leu Arg

35 40 45

Ser Gly Leu Met Ile Lys Lys Glu Ala Cys Tyr Phe Arg Arg Glu Thr

50 55 60

Thr Lys Arg Pro Ser Leu Lys Thr Gly Arg Lys His Lys Arg His Leu

65 70 75 80

Val Leu Ala Ala Cys Gln Gln Gln Ser Thr Val Glu Cys Phe Ala Phe

85 90 95

Gly Ile Ser Gly Val Gln Lys Tyr Thr Arg Ala Leu His Asp Ser Ser

100 105 110

Ile Thr Gly Ile Ser Pro Ile Thr Glu Tyr Leu Ala Ser Leu Ser Thr

115 120 125

Tyr Asn Asp Gln Ser Ile Thr Phe Ala Leu Glu Asp Glu Ser Tyr Glu

130 135 140

Ile Tyr Val Glu Asp Leu Lys Lys Asp Glu Lys Lys Asp Lys Val Leu

145 150 155 160

Leu Ser Tyr Tyr Glu Ser Gln His Pro Ser Asn Glu Ser Gly Asp Gly

165 170 175

Val Asp Gly Lys Met Leu Met Val Thr Leu Ser Pro Thr Lys Asp Phe

180 185 190

Trp Leu His Ala Asn Asn Lys Glu His Ser Val Glu Leu His Lys Cys

195 200 205

Glu Lys Pro Leu Pro Asp Gln Ala Phe Phe Val Leu His Asn Met His

210 215 220

Ser Asn Cys Val Ser Phe Glu Cys Lys Thr Asp Pro Gly Val Phe Ile

225 230 235 240

Gly Val Lys Asp Asn His Leu Ala Leu Ile Lys Val Asp Ser Ser Glu

245 250 255

Asn Leu Cys Thr Glu Asn Ile Leu Phe Lys Leu Ser Glu Thr

260 265 270

<210> 349

<211> 159

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> hIL33_mature_PEPTIDE (после протеолитической

обработки)

<400> 349

Ser Ile Thr Gly Ile Ser Pro Ile Thr Glu Tyr Leu Ala Ser Leu Ser

1 5 10 15

Thr Tyr Asn Asp Gln Ser Ile Thr Phe Ala Leu Glu Asp Glu Ser Tyr

20 25 30

Glu Ile Tyr Val Glu Asp Leu Lys Lys Asp Glu Lys Lys Asp Lys Val

35 40 45

Leu Leu Ser Tyr Tyr Glu Ser Gln His Pro Ser Asn Glu Ser Gly Asp

50 55 60

Gly Val Asp Gly Lys Met Leu Met Val Thr Leu Ser Pro Thr Lys Asp

65 70 75 80

Phe Trp Leu His Ala Asn Asn Lys Glu His Ser Val Glu Leu His Lys

85 90 95

Cys Glu Lys Pro Leu Pro Asp Gln Ala Phe Phe Val Leu His Asn Met

100 105 110

His Ser Asn Cys Val Ser Phe Glu Cys Lys Thr Asp Pro Gly Val Phe

115 120 125

Ile Gly Val Lys Asp Asn His Leu Ala Leu Ile Lys Val Asp Ser Ser

130 135 140

Glu Asn Leu Cys Thr Glu Asn Ile Leu Phe Lys Leu Ser Glu Thr

145 150 155

<210> 350

<211> 12

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Aминокислотные остатки 1-12 SEQ ID NO: 349; также

соответствуют остаткам 112-123 SEQ ID NO: 348

(Uniprot O95760)

<400> 350

Ser Ile Thr Gly Ile Ser Pro Ile Thr Glu Tyr Leu

1 5 10

<210> 351

<211> 87

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Aминокислотные остатки 50-94 SEQ ID NO: 349; также

соответствуют остаткам 161-205 SEQ ID NO: 348

(Uniprot O95760)

<400> 351

Ile Thr Glu Tyr Leu Ala Ser Leu Ser Thr Tyr Asn Asp Gln Ser Ile

1 5 10 15

Thr Phe Ala Leu Glu Asp Glu Ser Tyr Glu Ile Tyr Val Glu Asp Leu

20 25 30

Lys Lys Asp Glu Lys Lys Asp Lys Val Leu Leu Ser Tyr Tyr Glu Ser

35 40 45

Gln His Pro Ser Asn Glu Ser Gly Asp Gly Val Asp Gly Lys Met Leu

50 55 60

Met Val Thr Leu Ser Pro Thr Lys Asp Phe Trp Leu His Ala Asn Asn

65 70 75 80

Lys Glu His Ser Val Glu Leu

85

<210> 352

<211> 556

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ST2 человека (Смотрите номер доступа ГенБанка NP_057316)

<400> 352

Met Gly Phe Trp Ile Leu Ala Ile Leu Thr Ile Leu Met Tyr Ser Thr

1 5 10 15

Ala Ala Lys Phe Ser Lys Gln Ser Trp Gly Leu Glu Asn Glu Ala Leu

20 25 30

Ile Val Arg Cys Pro Arg Gln Gly Lys Pro Ser Tyr Thr Val Asp Trp

35 40 45

Tyr Tyr Ser Gln Thr Asn Lys Ser Ile Pro Thr Gln Glu Arg Asn Arg

50 55 60

Val Phe Ala Ser Gly Gln Leu Leu Lys Phe Leu Pro Ala Ala Val Ala

65 70 75 80

Asp Ser Gly Ile Tyr Thr Cys Ile Val Arg Ser Pro Thr Phe Asn Arg

85 90 95

Thr Gly Tyr Ala Asn Val Thr Ile Tyr Lys Lys Gln Ser Asp Cys Asn

100 105 110

Val Pro Asp Tyr Leu Met Tyr Ser Thr Val Ser Gly Ser Glu Lys Asn

115 120 125

Ser Lys Ile Tyr Cys Pro Thr Ile Asp Leu Tyr Asn Trp Thr Ala Pro

130 135 140

Leu Glu Trp Phe Lys Asn Cys Gln Ala Leu Gln Gly Ser Arg Tyr Arg

145 150 155 160

Ala His Lys Ser Phe Leu Val Ile Asp Asn Val Met Thr Glu Asp Ala

165 170 175

Gly Asp Tyr Thr Cys Lys Phe Ile His Asn Glu Asn Gly Ala Asn Tyr

180 185 190

Ser Val Thr Ala Thr Arg Ser Phe Thr Val Lys Asp Glu Gln Gly Phe

195 200 205

Ser Leu Phe Pro Val Ile Gly Ala Pro Ala Gln Asn Glu Ile Lys Glu

210 215 220

Val Glu Ile Gly Lys Asn Ala Asn Leu Thr Cys Ser Ala Cys Phe Gly

225 230 235 240

Lys Gly Thr Gln Phe Leu Ala Ala Val Leu Trp Gln Leu Asn Gly Thr

245 250 255

Lys Ile Thr Asp Phe Gly Glu Pro Arg Ile Gln Gln Glu Glu Gly Gln

260 265 270

Asn Gln Ser Phe Ser Asn Gly Leu Ala Cys Leu Asp Met Val Leu Arg

275 280 285

Ile Ala Asp Val Lys Glu Glu Asp Leu Leu Leu Gln Tyr Asp Cys Leu

290 295 300

Ala Leu Asn Leu His Gly Leu Arg Arg His Thr Val Arg Leu Ser Arg

305 310 315 320

Lys Asn Pro Ile Asp His His Ser Ile Tyr Cys Ile Ile Ala Val Cys

325 330 335

Ser Val Phe Leu Met Leu Ile Asn Val Leu Val Ile Ile Leu Lys Met

340 345 350

Phe Trp Ile Glu Ala Thr Leu Leu Trp Arg Asp Ile Ala Lys Pro Tyr

355 360 365

Lys Thr Arg Asn Asp Gly Lys Leu Tyr Asp Ala Tyr Val Val Tyr Pro

370 375 380

Arg Asn Tyr Lys Ser Ser Thr Asp Gly Ala Ser Arg Val Glu His Phe

385 390 395 400

Val His Gln Ile Leu Pro Asp Val Leu Glu Asn Lys Cys Gly Tyr Thr

405 410 415

Leu Cys Ile Tyr Gly Arg Asp Met Leu Pro Gly Glu Asp Val Val Thr

420 425 430

Ala Val Glu Thr Asn Ile Arg Lys Ser Arg Arg His Ile Phe Ile Leu

435 440 445

Thr Pro Gln Ile Thr His Asn Lys Glu Phe Ala Tyr Glu Gln Glu Val

450 455 460

Ala Leu His Cys Ala Leu Ile Gln Asn Asp Ala Lys Val Ile Leu Ile

465 470 475 480

Glu Met Glu Ala Leu Ser Glu Leu Asp Met Leu Gln Ala Glu Ala Leu

485 490 495

Gln Asp Ser Leu Gln His Leu Met Lys Val Gln Gly Thr Ile Lys Trp

500 505 510

Arg Glu Asp His Ile Ala Asn Lys Arg Ser Leu Asn Ser Lys Phe Trp

515 520 525

Lys His Val Arg Tyr Gln Met Pro Val Pro Ser Lys Ile Pro Arg Lys

530 535 540

Ala Ser Ser Leu Thr Pro Leu Ala Ala Gln Lys Gln

545 550 555

<210> 353

<211> 570

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> IL-1RAcP человека (Смотрите номер доступа ГенБанка

Q9NPH3)

<400> 353

Met Thr Leu Leu Trp Cys Val Val Ser Leu Tyr Phe Tyr Gly Ile Leu

1 5 10 15

Gln Ser Asp Ala Ser Glu Arg Cys Asp Asp Trp Gly Leu Asp Thr Met

20 25 30

Arg Gln Ile Gln Val Phe Glu Asp Glu Pro Ala Arg Ile Lys Cys Pro

35 40 45

Leu Phe Glu His Phe Leu Lys Phe Asn Tyr Ser Thr Ala His Ser Ala

50 55 60

Gly Leu Thr Leu Ile Trp Tyr Trp Thr Arg Gln Asp Arg Asp Leu Glu

65 70 75 80

Glu Pro Ile Asn Phe Arg Leu Pro Glu Asn Arg Ile Ser Lys Glu Lys

85 90 95

Asp Val Leu Trp Phe Arg Pro Thr Leu Leu Asn Asp Thr Gly Asn Tyr

100 105 110

Thr Cys Met Leu Arg Asn Thr Thr Tyr Cys Ser Lys Val Ala Phe Pro

115 120 125

Leu Glu Val Val Gln Lys Asp Ser Cys Phe Asn Ser Pro Met Lys Leu

130 135 140

Pro Val His Lys Leu Tyr Ile Glu Tyr Gly Ile Gln Arg Ile Thr Cys

145 150 155 160

Pro Asn Val Asp Gly Tyr Phe Pro Ser Ser Val Lys Pro Thr Ile Thr

165 170 175

Trp Tyr Met Gly Cys Tyr Lys Ile Gln Asn Phe Asn Asn Val Ile Pro

180 185 190

Glu Gly Met Asn Leu Ser Phe Leu Ile Ala Leu Ile Ser Asn Asn Gly

195 200 205

Asn Tyr Thr Cys Val Val Thr Tyr Pro Glu Asn Gly Arg Thr Phe His

210 215 220

Leu Thr Arg Thr Leu Thr Val Lys Val Val Gly Ser Pro Lys Asn Ala

225 230 235 240

Val Pro Pro Val Ile His Ser Pro Asn Asp His Val Val Tyr Glu Lys

245 250 255

Glu Pro Gly Glu Glu Leu Leu Ile Pro Cys Thr Val Tyr Phe Ser Phe

260 265 270

Leu Met Asp Ser Arg Asn Glu Val Trp Trp Thr Ile Asp Gly Lys Lys

275 280 285

Pro Asp Asp Ile Thr Ile Asp Val Thr Ile Asn Glu Ser Ile Ser His

290 295 300

Ser Arg Thr Glu Asp Glu Thr Arg Thr Gln Ile Leu Ser Ile Lys Lys

305 310 315 320

Val Thr Ser Glu Asp Leu Lys Arg Ser Tyr Val Cys His Ala Arg Ser

325 330 335

Ala Lys Gly Glu Val Ala Lys Ala Ala Lys Val Lys Gln Lys Val Pro

340 345 350

Ala Pro Arg Tyr Thr Val Glu Leu Ala Cys Gly Phe Gly Ala Thr Val

355 360 365

Leu Leu Val Val Ile Leu Ile Val Val Tyr His Val Tyr Trp Leu Glu

370 375 380

Met Val Leu Phe Tyr Arg Ala His Phe Gly Thr Asp Glu Thr Ile Leu

385 390 395 400

Asp Gly Lys Glu Tyr Asp Ile Tyr Val Ser Tyr Ala Arg Asn Ala Glu

405 410 415

Glu Glu Glu Phe Val Leu Leu Thr Leu Arg Gly Val Leu Glu Asn Glu

420 425 430

Phe Gly Tyr Lys Leu Cys Ile Phe Asp Arg Asp Ser Leu Pro Gly Gly

435 440 445

Ile Val Thr Asp Glu Thr Leu Ser Phe Ile Gln Lys Ser Arg Arg Leu

450 455 460

Leu Val Val Leu Ser Pro Asn Tyr Val Leu Gln Gly Thr Gln Ala Leu

465 470 475 480

Leu Glu Leu Lys Ala Gly Leu Glu Asn Met Ala Ser Arg Gly Asn Ile

485 490 495

Asn Val Ile Leu Val Gln Tyr Lys Ala Val Lys Glu Thr Lys Val Lys

500 505 510

Glu Leu Lys Arg Ala Lys Thr Val Leu Thr Val Ile Lys Trp Lys Gly

515 520 525

Glu Lys Ser Lys Tyr Pro Gln Gly Arg Phe Trp Lys Gln Leu Gln Val

530 535 540

Ala Met Pro Val Lys Lys Ser Pro Arg Arg Ser Ser Ser Asp Glu Gln

545 550 555 560

Gly Leu Ser Tyr Ser Ser Leu Lys Asn Val

565 570

<210> 354

<211> 449

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> HC H4H9675P

<400> 354

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asn Leu Glu Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Ser

20 25 30

Ala Met Asn Trp Val Arg Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Ser Gly Ser Gly Gly Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Ser Ala Glu Asp Thr Ala Ala Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Asp Ser Tyr Thr Thr Ser Trp Tyr Gly Gly Met Asp Val Trp

100 105 110

Gly His Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro

115 120 125

Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr

130 135 140

Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr

145 150 155 160

Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro

165 170 175

Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr

180 185 190

Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp

195 200 205

His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr

210 215 220

Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro

225 230 235 240

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp

260 265 270

Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

275 280 285

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val

290 295 300

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

305 310 315 320

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys

325 330 335

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

340 345 350

Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr

355 360 365

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

370 375 380

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu

385 390 395 400

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys

405 410 415

Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

420 425 430

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly

435 440 445

Lys

<210> 355

<211> 214

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> LC H4H9675P

<400> 355

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Phe Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Ile Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Val Pro Ile

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 356

<211> 166

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> IL-33 человека с гекса-HIS тэгом (аминокислоты 112-270

номера доступа O95760 ГенБанка)

<400> 356

Met Ser Ile Thr Gly Ile Ser Pro Ile Thr Glu Tyr Leu Ala Ser Leu

1 5 10 15

Ser Thr Tyr Asn Asp Gln Ser Ile Thr Phe Ala Leu Glu Asp Glu Ser

20 25 30

Tyr Glu Ile Tyr Val Glu Asp Leu Lys Lys Asp Glu Lys Lys Asp Lys

35 40 45

Val Leu Leu Ser Tyr Tyr Glu Ser Gln His Pro Ser Asn Glu Ser Gly

50 55 60

Asp Gly Val Asp Gly Lys Met Leu Met Val Thr Leu Ser Pro Thr Lys

65 70 75 80

Asp Phe Trp Leu His Ala Asn Asn Lys Glu His Ser Val Glu Leu His

85 90 95

Lys Cys Glu Lys Pro Leu Pro Asp Gln Ala Phe Phe Val Leu His Asn

100 105 110

Met His Ser Asn Cys Val Ser Phe Glu Cys Lys Thr Asp Pro Gly Val

115 120 125

Phe Ile Gly Val Lys Asp Asn His Leu Ala Leu Ile Lys Val Asp Ser

130 135 140

Ser Glu Asn Leu Cys Thr Glu Asn Ile Leu Phe Lys Leu Ser Glu Thr

145 150 155 160

His His His His His His

165

<210> 357

<211> 51

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<220>

<221> n это g или a

<222> (26) .. (26)

<400> 357

tataccatca caaagcctct cattanactt tgaatccaat gagtattact a 51

<210> 358

<211> 51

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетическая

<220>

<221> n это g или t

<222> (26) .. (26)

<400> 358

ccaatctttt ctcatgaaga caccancatg acctcttatt cttatttata t 51

<---

Claims

1. Способ оценки уровня риска развития эозинофильной астмы, аллергического ринита или синдрома перекрывающихся эозинофильных астмы-хронической обструктивной болезни легких (СПАХ), включающий в себя:

(A) обнаружение аллелей риска, связанных с эозинофильной астмой, аллергическим ринитом или эозинофильным СПАХ, где аллели риска содержат интронный вариант rs1420101 IL1RL1 (SEQ ID NO: 357), вариант rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358) или как интронный вариант rs1420101 IL1RL1 (SEQ ID NO: 357), так и вариант rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358) в образце, полученном из субъекта;

(B)(i) присваивание балла 1 риска субъекту, когда у субъекта имеется интронный вариант rs1420101 IL1RL1 (SEQ ID NO: 357) в одном из гомологов хромосомы 2 или вариант rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358) в одном из гомологов хромосомы 9,

(B)(ii) присваивание балла 2 риска субъекту, когда у субъекта имеется интронный вариант rs1420101 IL1RL1 (SEQ ID NO: 357) в обоих гомологах хромосомы 2, когда у субъекта имеется вариант rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358) в обоих гомологах хромосомы 9 или когда у субъекта имеется интронный вариант rs1420101 IL1RL1 (SEQ ID NO: 357) в одном из гомологов хромосомы 2 и вариант rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358) в одном из гомологов хромосомы 9,

(B)(iii) присваивание балла 3 риска субъекту, когда у субъекта имеется интронный вариант rs1420101 IL1RL1 (SEQ ID NO: 357) в обоих гомологах хромосомы 2 и вариант rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358) в одном из гомологов хромосомы 9 или когда у субъекта имеется интронный вариант rs1420101 IL1RL1 (SEQ ID NO: 357) в одном из гомологов хромосомы 2 и вариант rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358) в обоих гомологах хромосомы 9, или

(B)(iv) присваивание балла 4 риска субъекту, когда у субъекта имеется интронный вариант rs1420101 IL1RL1 (SEQ ID NO: 357) в обоих гомологах хромосомы 2 и вариант rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358) в обоих гомологах хромосомы 9; и

(C) определение категории риска развития у субъекта эозинофильной астмы, аллергического ринита или эозинофильного СПАХ, причем балл 1 риска указывает на то, что субъект подвержен риску развития высокоэозинофильной подгруппы эозинофильной астмы, высокоэозинофильной подгруппы аллергического ринита или высокоэозинофильной подгруппы эозинофильного СПАХ, балл 2 риска указывает на то, что субъект подвержен повышенному риску развития высокоэозинофильной подгруппы эозинофильной астмы, высокоэозинофильной подгруппы аллергического ринита или высокоэозинофильной подгруппы эозинофильного СПАХ, балл 3 риска указывает, что субъект подвержен высокому риску развития высокоэозинофильной подгруппы эозинофильной астмы, высокоэозинофильной подгруппы аллергического ринита или высокоэозинофильной подгруппы эозинофильного СПАХ, а балл 4 риска указывает на то, что субъект подвержен очень высокому риску развития высокоэозинофильной подгруппы эозинофильной астмы, высокоэозинофильной подгруппы аллергического ринита или высокоэозинофильной подгруппы эозинофильного СПАХ.

2. Способ по п. 1, дополнительно включающий в себя идентификацию субъекта в качестве кандидата для лечения антагонистом IL33 или комбинацией антагониста IL33 и антагониста IL-4R, где антагонист IL33 или комбинация антагониста IL33 и антагониста IL-4R вводятся в количестве, эффективном для лечения или ингибирования высокоэозинофильной подгруппы эозинофильной астмы, высокоэозинофильной подгруппы аллергического ринита или высокоэозинофильной подгруппы эозинофильного СПАХ.

3. Способ по п. 1 или 2, дополнительно включающий в себя введение антагониста IL33 или введение антагониста IL33 и антагониста IL-4R субъекту.

4. Способ по п. 3, отличающийся тем, что указанный способ включает в себя введение антагониста IL-33 субъекту.

5. Способ по п. 3, отличающийся тем, что указанный способ включает в себя введение антагониста IL-33 и антагониста IL-4R субъекту.

6. Способ по любому из пп. 2-5, отличающийся тем, что антагонист IL33 содержит ловушку для IL33.

7. Способ по п. 6, отличающийся тем, что ловушка IL33 содержит первый связывающий IL33 домен, содержащий связывающую IL33 часть IL1RL1, и второй связывающий IL33 домен, содержащий внеклеточную часть IL-1RAcP.

8. Способ по любому из пп. 2-5, отличающийся тем, что антагонист IL33 содержит антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, который специфически связывается с IL33.

9. Способ по п. 8, отличающийся тем, что антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, который специфически связывается с IL33, содержит домены H1, H2 и H3 SEQ ID NO: 274 и домены L1, L2 и L3 SEQ ID NO: 282.

10. Способ по любому из пп. 2, 3 или 5-9, отличающийся тем, что антагонист IL-4R содержит антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, который специфически связывается с IL-4R.

11. Способ по п. 10, отличающийся тем, что антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, который специфически связывается с IL-4R, содержит домены H1, H2 и H3 SEQ ID NO: 337 и домены L1, L2 и L3 SEQ ID NO: 338.

12. Способ по любому из пп. 1-11, дополнительно включающий в себя обнаружение повышенных уровней эозинофилов в образце крови или мокроты, полученном из субъекта.

13. Способ лечения или ингибирования астмы, включающий в себя введение антагониста IL33 или введение антагониста IL33 и антагониста IL-4R субъекту, имеющему аллели риска, связанные с астмой, где аллели риска содержат интронный вариант rs1420101 IL1RL1 (SEQ ID NO: 357), вариант rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358) или как интронный вариант rs1420101 IL1RL1 (SEQ ID NO: 357), так и вариант rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358), так что астма лечится или ингибируется у субъекта.

14. Способ по п. 13, отличающийся тем, что субъект имеет по меньшей мере один аллель риска, связанный с астмой, в дополнение к интронному варианту rs1420101 IL1RL1 (SEQ ID NO: 357).

15. Способ по п. 13 или 14, отличающийся тем, что субъект имеет два аллеля риска, связанных с астмой, в дополнение к интронному варианту rs1420101 IL1RL1 (SEQ ID NO: 357).

16. Способ по п. 13, отличающийся тем, что субъект имеет по меньшей мере один аллель риска, связанный с астмой, в дополнение к варианту rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358).

17. Способ по п. 13 или 16, отличающийся тем, что субъект имеет два аллеля риска, связанных с астмой, в дополнение к варианту rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358).

18. Способ по п. 14 или 15, отличающийся тем, что субъект дополнительно имеет по меньшей мере один аллель риска, связанный с астмой, в дополнение к варианту rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358).

19. Способ по любому из пп. 14, 15 или 18, отличающийся тем, что субъект дополнительно имеет два аллеля риска, связанных с астмой, в дополнение к варианту rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358).

20. Способ по любому из пп. 13-19, отличающийся тем, что указанный способ включает в себя введение субъекту антагониста IL-33.

21. Способ по любому из пп. 13-19, отличающийся тем, что указанный способ включает в себя введение субъекту антагониста IL-33 и антагониста IL-4R.

22. Способ по любому из пп. 13-21, отличающийся тем, что антагонист IL33 содержит ловушку для IL33.

23. Способ по п. 22, отличающийся тем, что ловушка IL33 содержит первый связывающий IL33 домен, содержащий связывающую IL33 часть IL1RL1, и второй связывающий IL33 домен, содержащий внеклеточную часть IL-1RAcP.

24. Способ по любому из пп. 13-21, отличающийся тем, что антагонист IL33 содержит антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, который специфически связывается с IL33.

25. Способ по п. 24, отличающийся тем, что антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, который специфически связывается с IL33, содержит домены H1, H2 и H3 SEQ ID NO: 274 и домены L1, L2 и L3 SEQ ID NO: 282.

26. Способ по любому из пп. 13-19 или 21-25, отличающийся тем, что антагонист IL-4R содержит антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, который специфически связывается с IL-4R.

27. Способ по п. 26, отличающийся тем, что антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, который специфически связывается с IL-4R, содержит домены H1, H2 и H3 SEQ ID NO: 337 и домены L1, L2 и L3 SEQ ID NO: 338.

28. Способ лечения или ингибирования аллергического ринита, включающий в себя введение антагониста IL33 или введение антагониста IL33 и антагониста IL-4R субъекту, имеющему аллели риска, связанные с аллергическим ринитом, где аллели риска содержат интронный вариант rs1420101 IL1RL1 (SEQ ID NO: 357), вариант rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358) или как интронный вариант rs1420101 IL1RL1 (SEQ ID NO: 357), так и вариант rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358), так что аллергический ринит лечится или ингибируется у субъекта.

29. Способ по п. 28, отличающийся тем, что субъект имеет по меньшей мере один аллель риска, связанный с аллергическим ринитом, в дополнение к интронному варианту rs1420101 IL1RL1 (SEQ ID NO: 357).

30. Способ по п. 28 или 29, отличающийся тем, что субъект имеет два аллеля риска, связанных с аллергическим ринитом, в дополнение к интронному варианту rs1420101 IL1RL1 (SEQ ID NO: 357).

31. Способ по п. 28, отличающийся тем, что субъект имеет по меньшей мере один аллель риска, связанный с аллергическим ринитом, в дополнение к варианту rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358).

32. Способ по п. 28 или 31, отличающийся тем, что субъект имеет два аллеля риска, связанных с аллергическим ринитом, в дополнение к варианту rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358).

33. Способ по п. 29 или 31, отличающийся тем, что субъект дополнительно имеет по меньшей мере один аллель риска, связанный с аллергическим ринитом, в дополнение к варианту rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358).

34. Способ по любому из пп. 29, 30 или 33, отличающийся тем, что субъект дополнительно имеет два аллеля риска, связанных с аллергическим ринитом, в дополнение к варианту rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358).

35. Способ по любому из пп. 28-34, отличающийся тем, что указанный способ включает в себя введение субъекту антагониста IL-33.

36. Способ по любому из пп. 28-34, отличающийся тем, что указанный способ включает в себя введение субъекту антагониста IL-33 и антагониста IL-4R.

37. Способ по любому из пп. 28-36, отличающийся тем, что антагонист IL33 содержит ловушку для IL33.

38. Способ по п. 37, отличающийся тем, что ловушка IL33 содержит первый связывающий IL33 домен, содержащий связывающую IL33 часть IL1RL1, и второй связывающий IL33 домен, содержащий внеклеточную часть IL-1RAcP.

39. Способ по любому из пп. 28-36, отличающийся тем, что антагонист IL33 содержит антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, который специфически связывается с IL33.

40. Способ по п. 39, отличающийся тем, что антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, который специфически связывается с IL33, содержит домены H1, H2 и H3 SEQ ID NO: 274 и домены L1, L2 и L3 SEQ ID NO: 282.

41. Способ по любому из пп. 28-34 или 36-40, отличающийся тем, что антагонист IL-4R содержит антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, который специфически связывается с IL-4R.

42. Способ по п. 41, отличающийся тем, что антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, который специфически связывается с IL-4R, содержит домены H1, H2 и H3 SEQ ID NO: 337 и домены L1, L2 и L3 SEQ ID NO: 338.

43. Способ лечения или ингибирования синдрома перекрывающихся астмы-хронической обструктивной болезни легких (СПАХ), включающий в себя введение антагониста IL33 или введение антагониста IL33 и антагониста IL-4R субъекту, имеющему аллели риска, связанные с астмой, где аллели риска содержат интронный вариант rs1420101 IL1RL1 (SEQ ID NO: 357), вариант rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358) или как интронный вариант rs1420101 IL1RL1 (SEQ ID NO: 357), так и вариант rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358), так что СПАХ лечится или ингибируется у субъекта.

44. Способ лечения по п. 43, отличающийся тем, что субъект имеет по меньшей мере один аллель риска, связанный с СПАХ, в дополнение к интронному варианту rs1420101 IL1RL1 (SEQ ID NO: 357).

45. Способ лечения по п. 43 или 44, отличающийся тем, что субъект имеет два аллеля риска, связанных с СПАХ, в дополнение к интронному варианту rs1420101 IL1RL1 (SEQ ID NO: 357).

46. Способ лечения по п. 43, отличающийся тем, что субъект имеет по меньшей мере один аллель риска, связанный с СПАХ, в дополнение к варианту rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358).

47. Способ лечения по п. 43 или 46, отличающийся тем, что субъект имеет два аллеля риска, связанных с СПАХ, в дополнение к варианту rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358).

48. Способ лечения по п. 44 или 45, отличающийся тем, что субъект дополнительно имеет по меньшей мере один аллель риска, связанный с СПАХ, в дополнение к варианту rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358).

49. Способ лечения по любому из пп. 44, 45 или 48, отличающийся тем, что субъект дополнительно имеет два аллеля риска, связанных с СПАХ, в дополнение к варианту rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358).

50. Способ по любому из пп. 43-49, отличающийся тем, что указанный способ включает в себя введение субъекту антагониста IL-33.

51. Способ по любому из пп. 43-49, отличающийся тем, что указанный способ включает в себя введение субъекту антагониста IL-33 и антагониста IL-4R.

52. Способ по любому из пп. 43-51, отличающийся тем, что антагонист IL33 содержит ловушку для IL33.

53. Способ по п. 52, отличающийся тем, что ловушка IL33 содержит первый связывающий IL33 домен, содержащий связывающую IL33 часть IL1RL1, и второй связывающий IL33 домен, содержащий внеклеточную часть IL-1RAcP.

54. Способ по любому из пп. 43-51, отличающийся тем, что антагонист IL33 содержит антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, который специфически связывается с IL33.

55. Способ по п. 54, отличающийся тем, что антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, который специфически связывается с IL33, содержит домены H1, H2 и H3 SEQ ID NO: 274 и домены L1, L2 и L3 SEQ ID NO: 282.

56. Способ по любому из пп. 43-49 или 51-55, отличающийся тем, что антагонист IL-4R содержит антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, который специфически связывается с IL-4R.

57. Способ по п. 56, отличающийся тем, что антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, который специфически связывается с IL-4R, содержит домены H1, H2 и H3 SEQ ID NO: 337 и домены L1, L2 и L3 SEQ ID NO: 338.

58. Применение антагониста IL33 или комбинации антагониста IL33 и антагониста IL-4R для лечения или ингибирования любого из: астмы, аллергического ринита, синдрома перекрывающихся астмы-хронической обструктивной болезни легких (СПАХ), высокоэозинофильной эозинофильной астмы, высокоэозинофильного аллергического ринита, высокоэозинофильного эозинофильного СПАХ или полипов носовой полости, когда пациент, нуждающийся в таком лечении или ингибировании, имеет аллели риска, связанные с астмой, аллергическим ринитом или эозинофильным СПАХ, где аллели риска содержат интронный вариант rs1420101 IL1RL1 (SEQ ID NO: 357), вариант rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358) или как интронный вариант rs1420101 IL1RL1 (SEQ ID NO: 357), так и вариант rs1342326 IL33 (SEQ ID NO: 358).

59. Применение по п. 58 для лечения или ингибирования эозинофильной астмы.

60. Применение по п. 58 для лечения или ингибирования аллергического ринита.

61. Применение по п. 58 для лечения или ингибирования эозинофильного СПАХ.

62. Применение по п. 58 для лечения или ингибирования высокоэозинофильной эозинофильной астмы.

63. Применение по п. 58 для лечения или ингибирования высокоэозинофильного аллергического ринита.

64. Применение по п. 58 для лечения или ингибирования высокоэозинофильного эозинофильного СПАХ.

65. Применение по п. 58 для лечения или ингибирования полипов носовой полости.

66. Применение по любому из пп. 58-65, отличающееся тем, что антагонист IL33 содержит ловушку IL33.

67. Применение по п. 66, отличающееся тем, что ловушка IL33 содержит первый связывающий IL33 домен, содержащий связывающую IL33 часть IL1RL1, и второй связывающий IL33 домен, содержащий внеклеточную часть IL-1RAcP.

68. Применение по любому из пп. 58-65, отличающееся тем, что антагонист IL33 содержит антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, который специфически связывается с IL33.

69. Применение по п. 68, отличающееся тем, что антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит домены H1, H2 и H3 SEQ ID NO: 274 и домены L1, L2 и L3 SEQ ID NO: 282.

70. Применение по любому из пп. 58-69, отличающееся тем, что антагонист IL-4R содержит антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, который специфически связывается с IL-4R.

71. Применение по п. 70, отличающееся тем, что антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, который специфически связывается с IL-4R, содержит домены H1, H2 и H3 SEQ ID NO: 337 и домены L1, L2 и L3 SEQ ID NO: 338.

72. Способ по любому из пп. 13-27 и 43-57, где астма представляет собой эозинофильную астму.