RU2767400C2

RU2767400C2 - Probiotic composition for restoring and maintaining a balanced intestinal microflora in children and infants and a method for production thereof

Info

Publication number: RU2767400C2
Application number: RU2018124587A
Authority: RU
Inventors: Владимир Трофимович Ивашкин
Original assignee: Общество С Ограниченной Ответственностью "Валента - Интеллект"
Priority date: 2018-07-05
Filing date: 2018-07-05
Publication date: 2022-03-17
Also published as: RU2018124587A; RU2018124587A3

Abstract

FIELD: pharmaceutics.

SUBSTANCE: invention can be used to restore and maintain a balanced intestinal microflora, as well as to prevent dysbacteriosis in children and infants. Method for preparing a probiotic composition involves separate sowing of cultures of probiotic lactobacilli Lactobacillus rhamnosus and probiotic bifidobacteria Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium longum and Bifidobacterium breve, into liquid medium MRS with subsequent thermostating of said cultures for 24–72 hours at temperature of 37±0.5 °C and with subsequent inoculation with thermostatic cultures of containers with liquid MRS agar and incubation for 48–60 hours at temperature of 37±0.5 °C. Then, said cultures are transferred into a fermenter and grown in a fermenter at temperature of 37±0.5 °C, pH 6.0–7.0 and an excess pressure in the fermenter cavity of 0.025±0.005 MPa, concentration of said cultures, addition of a protective medium, cooling of concentrates and their freeze-drying. Produced dry bacterial masses are combined and mixed with nutraceutically acceptable auxiliary components, followed by mixing until a homogeneous mixture is formed, and encapsulating or tableting said mixture.

EFFECT: obtaining a biologically active additive with minimum economic costs and time expenditures, with preservation of viability and useful properties of probiotic microorganisms included in its composition for a long time.

4 cl, 1 ex, 1 tbl

Description

Область техникиTechnical field

Настоящее изобретение относится к пробиотической композиции (биологически активной добавке) для применения у детей для восстановления и поддержания сбалансированной микрофлоры кишечника, содержащей смесь, включающую три вида пробиотических бифидобактерий и по меньшей мере один вид пробиотических лактобацилл, а также неперевариваемый пребиотический фруктоолигосахарид, способствующий росту и жизнедеятельности указанных пробиотических бифидобактерий и лактобацилл и восстановлению нормальной микрофлоры кишечника у детей и младенцев. Также изобретение относится к способу получения указанной биологически активной добавки (пробиотической композиции), обеспечивающему возможность быстрого и недорогого изготовления биологически активной пищевой добавки, которая может быть успешно использована в питании детей для профилактики дисбактериоза, и позволяет в течение длительного времени сохранить полезные свойства указанных пробиотических микроорганизмов. Биологически активная добавка по изобретению обеспечивает восстановление и поддержание сбалансированной микрофлоры кишечника ребенка и профилактика дисбактериоза, а также расширение ассортимента биологически активных добавок на основе пробиотических бактерий, предназначенных для нормализации микрофлоры кишечника у детей и для профилактики дисбактериоза у детей. Под ребенком в контексте настоящего изобретения понимается ребенок в возрасте от 1 до 5 лет, более предпочтительно, в возрасте от 1,5 до 3 лет.The present invention relates to a probiotic composition (dietary supplement) for use in children to restore and maintain a balanced intestinal microflora, containing a mixture that includes three types of probiotic bifidobacteria and at least one type of probiotic lactobacilli, as well as an indigestible prebiotic fructooligosaccharide that promotes growth and vitality of these probiotic bifidobacteria and lactobacilli and the restoration of normal intestinal microflora in children and infants. The invention also relates to a method for obtaining the specified biologically active additive (probiotic composition), which makes it possible to quickly and inexpensively manufacture a biologically active food additive that can be successfully used in children's nutrition for the prevention of dysbacteriosis, and allows for a long time to preserve the beneficial properties of these probiotic microorganisms . The dietary supplement according to the invention provides for the restoration and maintenance of a balanced intestinal microflora of a child and the prevention of dysbacteriosis, as well as the expansion of the range of biologically active supplements based on probiotic bacteria, intended for the normalization of the intestinal microflora in children and for the prevention of dysbacteriosis in children. By child in the context of the present invention is meant a child between 1 and 5 years of age, more preferably between 1.5 and 3 years of age.

Под термином «пробиотики» здесь и далее понимаются живые микроорганизмы, которые при введении их в организм человека или животного способствуют жизнедеятельности организма хозяина за счет улучшения баланса кишечной микрофлоры (Fuller R., 1989 [1] - см. список ссылок в конце настоящего описания). Термины «пробиотик» и «пробиотический микроорганизм» здесь и далее в рамках настоящей заявки используются в качестве синонимов. Микроорганизм считается пробиотическим, если он остается жизнеспособным в условиях, характерных для пищеварительного тракта (низкий рН в желудке, наличие кислот пищеварительной системы и т.п.), способен прикрепляться к стенкам кишечника, осуществлять метаболизм в кишечнике, технологически применим (подвергается обработке) и демонстрирует клинически подтвержденные и задокументированные оздоравливающие эффекты, и при этом безопасен для потребления человеком (Lee, Y-K, Salmien, S., 1995 [2]).The term "probiotics" hereinafter refers to live microorganisms that, when introduced into the human or animal body, contribute to the life of the host organism by improving the balance of the intestinal microflora (Fuller R., 1989 [1] - see the list of references at the end of this description) . The terms "probiotic" and "probiotic microorganism" are hereinafter used as synonyms in the present application. A microorganism is considered probiotic if it remains viable under the conditions typical of the digestive tract (low pH in the stomach, the presence of digestive system acids, etc.), is able to attach to the walls of the intestine, metabolize in the intestine, is technologically applicable (under processing) and demonstrates clinically proven and documented health effects, while being safe for human consumption (Lee, YK, Salmien, S., 1995 [2]).

Важнейшими для поддержания здоровья человека пробиотическими микроорганизмами являются бифидобактерий и лактобациллы. В литературе неоднократно было показано, что лактобациллы и бифидобактерий, колонизирующие кишечник новорожденного, при рождении стерильный, оказывают важное влияние на здоровье хозяина, играя важную роль в работе пищеварительной системы, в том числе, в усвоении минеральных веществ, в работе иммунной системы (Coxam V., 2007 [3] и Seifert S., Watzl В., 2007 [4]). Первичная контаминация новорожденного пробиотическими микроорганизмами (преимущественно, лактобациллами) происходит через рот, при прохождении новорожденного по родовым путям матери; в литературе показано также, что на формирование микрофлоры кишечника младенца влияет микрофлора кишечника матери.The most important probiotic microorganisms for maintaining human health are bifidobacteria and lactobacilli. It has been repeatedly shown in the literature that lactobacilli and bifidobacteria colonizing the intestines of a newborn, sterile at birth, have an important impact on the health of the host, playing an important role in the digestive system, including the absorption of minerals, in the immune system (Coxam V ., 2007 [3] and Seifert S., Watzl B., 2007 [4]). The primary contamination of the newborn with probiotic microorganisms (mainly lactobacilli) occurs through the mouth, when the newborn passes through the mother's birth canal; the literature also shows that the formation of the intestinal microflora of the infant is influenced by the intestinal microflora of the mother.

В течение примерно первых 3-5 дней жизни новорожденного происходит первичная микробная колонизация кишечника, а бифидобактерий появляются в кишечнике младенца спустя примерно 10 дней после его рождения, поскольку их размножение становится возможным только после того, как в кишечнике сформирована среда, благоприятная для их размножения.During about the first 3-5 days of a newborn's life, primary microbial colonization of the intestine occurs, and bifidobacteria appear in the infant's intestine about 10 days after birth, since their reproduction becomes possible only after an environment favorable for their reproduction has been formed in the intestine.

Показано, что дети, рожденные путем кесарева сечения, имеют существенно меньшее содержание лактобактерий по сравнению с детьми, рожденными естественным путем (Hall М.А., Cole С.В., et al., 1990 [5]; Хавкин А.И., Бельмер С.В. и др., 2006 [6]).It has been shown that children born by caesarean section have a significantly lower content of lactobacilli compared to children born naturally (Hall M.A., Cole S.V., et al., 1990 [5]; Khavkin A.I. , Belmer S.V. et al., 2006 [6]).

У детей, находящихся на естественном (грудном) вскармливании, в микрофлоре кишечника преобладают бифидобактерий. Ряд авторов связывает с этим меньший риск развития инфекционных заболеваний, в том числе, гастроинтестинальных инфекционных заболеваний и/или заболеваний, требующих антибиотикотерапии, у детей, находящихся на естественном вскармливании (Braun ОН., 1981 [7]; Modler H.W., McKellar R.C., Yaguchi М., 1990 [8]; Moreau М.С, Thomassen М., et al., 1986 [9]; Yoshita M., Fujita K., et al., 1991 [10]; Lohner, S,

, D, et al., 2014 [11]). У детей, находящихся на естественном вскармливании, примерно к 2 годам состав микрофлоры кишечника ребенка практически не отличается от состава микрофлоры кишечника взрослого человека (Румянцев А.Г., 2000 [12]). Напротив, у детей, находящихся на искусственном вскармливании, видовое разнообразие микрофлоры кишечника значительно больше; показано, что для микрофлоры кишечника таких детей характерно большее видовое разнообразие бактероидов, клостридий и энтеробактерий (Benno V., Sawada K., Mitsuoka Т., 1984 [13]).In children who are on natural (breast) feeding, bifidobacteria predominate in the intestinal microflora. A number of authors associate this with a lower risk of developing infectious diseases, including gastrointestinal infectious diseases and / or diseases requiring antibiotic therapy, in breastfed children (Braun ON., 1981 [7]; Modler HW, McKellar RC, Yaguchi M., 1990 [8]; Moreau M.C., Thomassen M., et al., 1986 [9]; Yoshita M., Fujita K., et al., 1991 [10]; Lohner, S.

, D, et al., 2014 [11]). In breastfed children, by about 2 years of age, the composition of the intestinal microflora of a child practically does not differ from the composition of the intestinal microflora of an adult (Rumyantsev A.G., 2000 [12]). On the contrary, in artificially fed children, the species diversity of the intestinal microflora is much greater; it has been shown that the intestinal microflora of such children is characterized by a greater species diversity of bacteroids, clostridia and enterobacteria (Benno V., Sawada K., Mitsuoka T., 1984 [13]).

Показано, что различные виды бифидобактерий различаются между собой метаболизмом, активностью ферментов, использованием различных пребиотических олиго- и полисахаридов, композицией клеточной стенки и другими особенностями.It was shown that different types of bifidobacteria differ in metabolism, enzyme activity, use of various prebiotic oligo- and polysaccharides, cell wall composition, and other features.

Для нормального роста и жизнедеятельности пробиотических бактерий, колонизирующих кишечник, необходимы пребиотики. Под термином «пребиотик» здесь и далее понимаются пищевые ингредиенты, которые не перевариваются пищеварительной системой человека и не усваиваются в верхних отделах желудочно-кишечного тракта, однако ферментируются микрофлорой ободочной кишки, избирательно стимулируя рост и жизнедеятельность одного или нескольких пробиотических микроорганизмов - представителей микрофлоры кишечника, благоприятной для нормализации функциональной деятельности толстого кишечника человека и для поддержания здоровья человека (Gibson G.R., Roberfroid М.В., 1995 [14]; Tanaka R., Takayama H., Morotomi M. et al., 1983 [15]).Prebiotics are necessary for the normal growth and vital activity of probiotic bacteria that colonize the intestines. The term "prebiotic" hereinafter refers to food ingredients that are not digested by the human digestive system and are not absorbed in the upper gastrointestinal tract, but are fermented by the microflora of the colon, selectively stimulating the growth and vital activity of one or more probiotic microorganisms - representatives of the intestinal microflora, favorable for the normalization of the functional activity of the human large intestine and for maintaining human health (Gibson GR, Roberfroid M.V., 1995 [14]; Tanaka R., Takayama H., Morotomi M. et al., 1983 [15]).

Как правило, пребиотик представляет собой неперевариваемый углевод или сахарный спирт, не расщепляющийся в верхних отделах пищеварительной системы. Наиболее важными пребиотиками являются низкомолекулярные углеводы, такие как фруктоолигосахариды, галактоолигосахариды, моносахариды, такие как ксилит, сорбит, раффиноза и др., дисахариды, такие как лактулоза, и др. (Ардатская М.Д., 2015 [16]). Показано, что пребиотические олигосахариды стимулируют рост бифидобактерий и лактобактерий в толстом кишечнике (Gibson G.R., 1999 [17]; Gibson G.R., Beatty Е.В., et al., 1995 [18]), препятствуют адгезии патогенных микроорганизмов к стенкам кишечника (Bode L., 2012 [19]), а также уменьшают риск развития рака толстой кишки и воспалительной болезни кишечника, включая болезнь Крона и неспецифический язвенный колит (Geier M.S., Butler R.N., Howarth G.S., 2006 [20]; Hedin С., Whelan K., Lindsay J.О., 2007 [21]).Typically, a prebiotic is a non-digestible carbohydrate or sugar alcohol that is not broken down in the upper digestive system. The most important prebiotics are low molecular weight carbohydrates such as fructooligosaccharides, galactooligosaccharides, monosaccharides such as xylitol, sorbitol, raffinose, etc., disaccharides such as lactulose, etc. (Ardatskaya M.D., 2015 [16]). It has been shown that prebiotic oligosaccharides stimulate the growth of bifidobacteria and lactobacilli in the large intestine (Gibson GR, 1999 [17]; Gibson GR, Beatty E.V., et al., 1995 [18]), prevent the adhesion of pathogenic microorganisms to the intestinal walls (Bode L., 2012 [19]), as well as reduce the risk of developing colon cancer and inflammatory bowel disease, including Crohn's disease and ulcerative colitis (Geier MS, Butler RN, Howarth GS, 2006 [20]; Hedin C., Whelan K ., Lindsay J.O., 2007 [21]).

Из уровня техники известны составы, содержащие комплексы пребиотических олиго- и полисахаридов. Так, в патенте США US 9763466 В2, 19.09.2017 [22] описан пребиотический состав, предназначенный для стимулирования роста пробиотических микроорганизмов, таких как лактобациллы и бифидобактерий, содержащий смесь пребиотических олигосахаридов, причем по меньшей мере 60 масс. % составляют галактоолигосахариды, и полисахаридов, причем по меньшей мере 60 масс. % составляют фруктоолигосахариды, а также композиция для детского питания, содержащая данный состав. Несмотря на достоинства композиции [22], она не учитывает потребности в пребиотиках, характерные для детей, находящихся на частично грудном вскармливании или искусственном вскармливании.The prior art compositions containing complexes of prebiotic oligo - and polysaccharides. So, in US patent US 9763466 B2, 19.09.2017 [22], a prebiotic composition is described, designed to stimulate the growth of probiotic microorganisms, such as lactobacilli and bifidobacteria, containing a mixture of prebiotic oligosaccharides, with at least 60 wt. % are galactooligosaccharides, and polysaccharides, with at least 60 wt. % are fructooligosaccharides, as well as a composition for baby food containing this composition. Despite the advantages of the composition [22], it does not take into account the needs for prebiotics that are typical for children who are partially breastfed or artificially fed.

Обычно дети, находящиеся на грудном вскармливании, получают пребиотические вещества с молоком матери. Показано, что грудное молоко содержит пребиотические олигосахариды, которые служат субстратом для микрофлоры кишечника младенцев (German J.В., Freeman S.L., et al., 2008 [23]). Напротив, дети, находящиеся на искусственном вскармливании или частичном грудном вскармливании, имеют приблизительно от одной десятой до двух третьих от количества бифидобактерий у младенцев, находящихся на грудном вскармливании. Из уровня техники известны различные композиции, содержащие комплекс пробиотиков и пребиотиков, призванные обеспечить формирование у детей, в том числе у детей, особенно у детей, находящихся на искусственном вскармливании или частичном грудном вскармливании, количественного и качественного состава микрофлоры кишечника, максимально соответствующего составу микрофлоры кишечника детей, находящихся на естественном (грудном) вскармливании.Usually, breastfed babies receive prebiotic substances from their mother's milk. It has been shown that breast milk contains prebiotic oligosaccharides, which serve as a substrate for the intestinal microflora of infants (German J.B., Freeman S.L., et al., 2008 [23]). In contrast, formula-fed or partial-breastfed infants have approximately one-tenth to two-thirds the amount of bifidobacteria in breastfed infants. Various compositions are known from the prior art, containing a complex of probiotics and prebiotics, designed to ensure the formation in children, including children, especially in children who are bottle-fed or partially breast-fed, the quantitative and qualitative composition of the intestinal microflora, as much as possible corresponding to the composition of the intestinal microflora breastfed children.

Из уровня техники известен состав для питания детей, находящихся на искусственном вскармливании или частичном грудном вскармливании, содержащий живые бифидобактерий Bifidobacterium breve и смесь по меньшей мере двух неусваиваемых водорастворимых пребиотических углеводов, где первый углевод составляет от 5% до 95% от общего количества углеводов, где по меньшей мере 50 масс. % от общего количества неусваиваемых углеводов составляют дисахариды и эйкозасахариды и где первый и второй углеводы различаются средним числом моносахаридных единиц в углеводной цепи и/или структурой указанных моносахаридных единиц (WO 2005/039319 А2, 06.05.2005 [24]). Состав [24] предназначен для профилактики иммунных расстройств у младенцев, находящихся на искусственном вскармливании или частичном грудном вскармливании, благодаря колонизации пробиотическими бифидобактериями, входящими в указанный состав, кишечника ребенка и их положительной роли в становлении иммунной системы ребенка (ранее показанной в работе Seifert S., Watzl В., 2007 [4]).The prior art composition for feeding children who are formula-fed or partially breast-fed, containing live bifidobacteria Bifidobacterium breve and a mixture of at least two indigestible water-soluble prebiotic carbohydrates, where the first carbohydrate is from 5% to 95% of the total amount of carbohydrates, where at least 50 wt. % of the total amount of indigestible carbohydrates are disaccharides and eicosaccharides, and where the first and second carbohydrates differ in the average number of monosaccharide units in the carbohydrate chain and / or the structure of these monosaccharide units (WO 2005/039319 A2, 06.05.2005 [24]). The composition [24] is intended for the prevention of immune disorders in infants who are formula-fed or partially breastfed, due to the colonization of the intestines of the child with probiotic bifidobacteria included in the specified composition and their positive role in the development of the child's immune system (previously shown in the work of Seifert S. , Watzl V., 2007 [4]).

Несмотря на известность из уровня техники пробиотического состава [24], содержащего пробиотические бифидобактерий и смесь нескольких пребиотических углеводов, по-прежнему остается актуальной задача создания пробиотической композиции (биологически активной добавки), предупреждающей развитие дисбактериоза у конечного потребителя, такого как ребенок, и обеспечивающей восстановление и поддержание сбалансированной микрофлоры кишечника.Despite the well-known probiotic composition [24] containing probiotic bifidobacteria and a mixture of several prebiotic carbohydrates, the problem of creating a probiotic composition (dietary supplement) that prevents the development of dysbacteriosis in the end consumer, such as a child, and ensures recovery and maintaining a balanced intestinal microflora.

Из уровня техники известна предлагаемая в качестве ближайшего аналога настоящего изобретения пробиотическая композиция для перорального применения, предназначенная для нормализации микрофлоры кишечника человека, содержащая по крайней мере один пребиотический полисахарид, отличный от крахмала и целлюлозы, и по крайней мере один пробиотический микроорганизм, выбранный из бифидобактерий одного или нескольких видов рода Bifidobacterium, способных расщеплять указанный длинноцепочечный полисахарид, и, не обязательно, второй пробиотический микроорганизм, неспособный расщеплять инулин, причем указанный второй пробиотический микроорганизм выбран из штамма LMG Р-21381 Lactobacillus acidophilus, штамм LMG Р-21380 Lactobacillus paracasei, штамма LMG Р-21021 Lactobacillus plantarum, штамма LMG P-21019 Lactobacillus pentosus, штамма LMG P-21020 Lactobacillus plantarum, штамма LMG P-21022 Lactobacillus plantarum, штамма LMG P-21023 Lactobacillus plantarum, штамма LMG P-21384 Bifidobacterium animalis subsp. lactis, штамма DSM 16506 Streptococcus thermophilus, штамма DSM 16507 Streptococcus thermophilus, штамма DSM 16603 Bifidobacterium longum, штамма DSM 16604 Bifidobacterium breve, штамма DSM 16605 Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus и штамма DSM 16607 Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus, описанная в публикации международной заявки WO 2007/125558 A1, 08.11.2007 [25].From the prior art proposed as the closest analogue of the present invention, a probiotic composition for oral use, designed to normalize the human intestinal microflora, containing at least one prebiotic polysaccharide other than starch and cellulose, and at least one probiotic microorganism selected from bifidobacteria of one or several species of the genus Bifidobacterium capable of degrading said long chain polysaccharide, and optionally a second probiotic microorganism unable to degrade inulin, said second probiotic microorganism being selected from Lactobacillus acidophilus strain LMG P-21381, LMG P-21380 strain Lactobacillus paracasei, LMG strain P-21021 Lactobacillus plantarum, LMG strain P-21019 Lactobacillus pentosus, LMG strain P-21020 Lactobacillus plantarum, LMG strain P-21022 Lactobacillus plantarum, LMG strain P-21023 Lactobacillus plantarum, LMG strain P-21384 Bifidobacterium animalis subsp. lactis, Streptococcus thermophilus strain DSM 16506, Streptococcus thermophilus strain DSM 16507, Bifidobacterium longum strain DSM 16603, Bifidobacterium breve strain DSM 16604, Lactobacillus rhamnosus strain DSM 16605, Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus and strain DSM 16607 Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus, described in the publication of the international application WO 2007/125558 A1, 08.11.2007 [25].

В более предпочтительном воплощении технического решения [25], пробиотический микроорганизм выбран из Bifidobacterium adolescentis (штамм АТСС 15703), Bifidobacterium bifidum (штамм DSM 20082), Bifidobacterium thermophilum (штамм АТСС 258 66) и Bifidobacterium adolescentis (штамм DSM 17103). Альтернативно, композиция [25] может содержать в качестве второго пробиотического микроорганизма смесь двух или более перечисленных выше пробиотических микроорганизмов. Пребиотический полисахарид, отличный от крахмала и целлюлозы, представляет собой фруктан, галактоманнан, арабиногалактан, арабиноксилан, галактан или смесь указанных полисахаридов. В самом предпочтительном воплощении [25], пребиотический полисахарид представляет собой фруктан, такой как инулин. Композиция [25] может быть выполнена в виде различных форм, пригодных для перорального применения, включая капсулы, гранулы, спрессованные гранулы, растворы и суспензии для приема внутрь, таблетки, саше, порошки, формы с контролируемым высвобождением, формы с кишечнорастворимой оболочкой, формы, полученные лиофилизацией, и т.д. и т.д.In a more preferred embodiment of the technical solution [25], the probiotic microorganism is selected from Bifidobacterium adolescentis (strain ATCC 15703), Bifidobacterium bifidum (strain DSM 20082), Bifidobacterium thermophilum (strain ATCC 258 66) and Bifidobacterium adolescentis (strain DSM 17103). Alternatively, composition [25] may contain, as a second probiotic microorganism, a mixture of two or more of the above probiotic microorganisms. The prebiotic polysaccharide other than starch and cellulose is fructan, galactomannan, arabinogalactan, arabinoxylan, galactan, or a mixture of these polysaccharides. In the most preferred embodiment [25], the prebiotic polysaccharide is a fructan such as inulin. Composition [25] can be presented in various forms suitable for oral administration, including capsules, granules, compressed granules, oral solutions and suspensions, tablets, sachets, powders, controlled release forms, enteric-coated forms, forms, obtained by lyophilization, etc. etc.

Пробиотическую композицию [25] получают традиционными для данной области техники способами, которые выбирают в зависимости от вида соответствующей препаративной формы, в которой выполнена композиция, с использованием традиционных для соответствующей препаративной формы вспомогательных компонентов - носителей, лубрикантов, диспергирующих веществ, антиагрегантов, ароматизирующих добавок, стабилизаторов и так далее.The probiotic composition [25] is obtained by traditional methods for this field of technology, which are selected depending on the type of the corresponding preparative form in which the composition is made, using auxiliary components traditional for the corresponding preparative form - carriers, lubricants, dispersants, antiplatelet agents, flavoring additives, stabilizers and so on.

В одном из наиболее предпочтительных воплощений, композиция [25] содержит от 5 до 90 масс. % пребиотика и от 1 до 15 масс. % инулина. В более предпочтительном воплощении, композиция [25] содержит 5-10 масс. % пробиотического микроорганизма. В качестве пребиотика композиция согласно WO 2007/125558 А1 использует неперевариваемый длинноцепочечный полисахарид, такой как инулин. Наличие в составе композиции инулина избирательно стимулирует рост бифидобактерий и колонизацию ими кишечника человека; одновременно инулин препятствует росту колонизации кишечника патогенными и условно патогенными микроорганизмами и усиливает детоксикационные функции микрофлоры и ее способность поддерживать все виды обмена веществ в организме, особенно углеводный и липидный метаболизм. Образующиеся в процессе микробного метаболизма биологически активные вещества (летучие жирные кислоты, витамины, аминокислоты и др.) используются для выработки энергии и метаболизма кишечника и организма в целом.In one of the most preferred embodiments, the composition [25] contains from 5 to 90 wt. % prebiotic and from 1 to 15 wt. % inulin. In a more preferred embodiment, the composition [25] contains 5-10 wt. % probiotic microorganism. As a prebiotic, the composition according to WO 2007/125558 A1 uses an indigestible long chain polysaccharide such as inulin. The presence of inulin in the composition selectively stimulates the growth of bifidobacteria and their colonization of the human intestine; at the same time, inulin prevents the growth of intestinal colonization by pathogenic and conditionally pathogenic microorganisms and enhances the detoxification functions of the microflora and its ability to support all types of metabolism in the body, especially carbohydrate and lipid metabolism. Biologically active substances formed in the process of microbial metabolism (volatile fatty acids, vitamins, amino acids, etc.) are used for energy production and metabolism of the intestines and the body as a whole.

Несмотря на достоинства композиции [25], ее состав разработан без учета потребностей в пробиотиках и пребиотиках, характерных именно для детского организма. Более того, возможность использования композиции [25] у детей и младенцев, в частности, у младенцев, находящихся на искусственном или частично грудном вскармливании, в принципе не показана. Кроме того, для конкретных препаративных форм пробиотической композиции [25] срок хранения составляет всего лишь 30 дней.Despite the advantages of the composition [25], its composition was developed without taking into account the needs for probiotics and prebiotics, which are typical for a child's body. Moreover, the possibility of using the composition [25] in children and infants, in particular, in infants who are artificially or partially breastfed, is in principle not shown. In addition, for specific formulations of the probiotic composition [25], the shelf life is only 30 days.

Таким образом, остается актуальной задача разработки оптимального состава пробиотической композиции (биологически активной добавки), которая расширяла бы арсенал средств, предназначенных для нормализации количественного и качественного состава микрофлоры кишечника у детей и младенцев, особенно у детей, находящихся или находившихся на искусственном или частично грудном вскармливании.Thus, the task of developing the optimal composition of a probiotic composition (biologically active supplement) remains relevant, which would expand the arsenal of tools designed to normalize the quantitative and qualitative composition of the intestinal microflora in children and infants, especially in children who are or were on artificial or partial breastfeeding. .

Данная задача решена в рамках настоящего изобретения путем создания пробиотической композиции (биологически активной пищевой добавки), предназначенной для нормализации количественного и качественного состава микрофлоры кишечника у детей и младенцев, содержащей сухую бактериальную массу (сухую смесь), включающую три вида пробиотических бифидобактерий, включая Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium longum и Bifidobacterium breve, и по меньшей мере один вид пробиотических лактобацилл, представляющий собой Lactobacillus rhamnosus, а в качестве пребиотика - неперевариваемый пребиотический фруктоолигосахарид, а также нутрицевтически приемлемые вспомогательные компоненты, такие как нутрицевтически приемлемые наполнители, нутрицевтически приемлемые связующие и нутрицевтически приемлемые лубриканты. Предпочтительно (без ограничения), пробиотическая композиция по изобретению выполнена в форме таблетки, содержащей от 0,04 до 0,1 г сухой бактериальной массы и от 0,1 до 0,2 г неперевариваемого пребиотического фруктоолигосахарида. Наиболее предпочтительно, композиция по изобретению выполнена в форме таблетки, содержащей 0,046 г сухой бактериальной массы (бактериальной смеси), включающей вышеуказанные пробиотические бифидобактерий и пробиотические лактобациллы, 0,12 г инулина, 0,132 г микрокристаллической целлюлозы и 0,002 г кальция стеарата, причем 1 грамм указанной сухой бактериальной массы содержит не менее 1×10⁸ КОЕ, более предпочтительно, не менее 1×10⁹ КОЕ каждого из видов Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium longum и Bifidobacterium breve, а также не менее 1×10⁸ КОЕ, более предпочтительно, не менее 1×10⁹ КОЕ пробиотических лактобацилл Lactobacillus rhamnonsus. В качестве микрокристаллической целлюлозы, предпочтительно (без ограничения), используют модифицированную микрокристаллическую целлюлозу фармакопейного качества, например, Prosolv^®, в частности, Prosolv^® SMCC, представляющий собой силикатированную микрокристаллическую целлюлозу, получаемую путем сопроцессинга микрокристаллической целлюлозы (98%) и коллоидного диоксида кремния (2%), выпускаемый JRC Pharma Family (Prosolv^® SMCC: Silicified Macrocrystalline Cellulose (The Original Silicified MCC).This problem is solved within the framework of the present invention by creating a probiotic composition (biologically active food supplement) intended to normalize the quantitative and qualitative composition of the intestinal microflora in children and infants, containing a dry bacterial mass (dry mixture) that includes three types of probiotic bifidobacteria, including Bifidobacterium bifidum , Bifidobacterium longum and Bifidobacterium breve, and at least one species of probiotic lactobacilli, which is Lactobacillus rhamnosus, and as a prebiotic - indigestible prebiotic fructooligosaccharide, as well as nutraceutical acceptable auxiliary components, such as nutraceutical acceptable fillers, nutraceutical acceptable binders and nutraceutical acceptable lubricants . Preferably (without limitation), the probiotic composition of the invention is in the form of a tablet containing 0.04 to 0.1 g of dry bacterial mass and 0.1 to 0.2 g of indigestible prebiotic fructooligosaccharide. Most preferably, the composition according to the invention is in the form of a tablet containing 0.046 g of a dry bacterial mass (bacterial mixture) comprising the above probiotic bifidobacteria and probiotic lactobacilli, 0.12 g of inulin, 0.132 g of microcrystalline cellulose and 0.002 g of calcium stearate, with 1 gram of said dry bacterial mass contains at least 1×10 ⁸ CFU, more preferably at least 1×10 ⁹ CFU of each of the species Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium longum and Bifidobacterium breve, and at least 1×10 ⁸ CFU, more preferably at least 1 ×10 ⁹ CFU probiotic lactobacilli Lactobacillus rhamnonsus. As microcrystalline cellulose, preferably (without limitation), use is made of modified microcrystalline cellulose of pharmacopoeial quality, for example, Prosolv ^® , in particular, Prosolv ^® SMCC, which is a silicified microcrystalline cellulose obtained by co-processing of microcrystalline cellulose (98%) and colloidal silicon dioxide ( 2%) manufactured by JRC Pharma Family ( ^Prosolv® SMCC: Silicified Macrocrystalline Cellulose (The Original Silicified MCC).

«JRC Pharma Family», 13.07.2016 [26]). Благодаря равномерному распределению коллоидного диоксида кремния по поверхности частиц микрокристаллической целлюлозы, Prosolv^® SMCC по сравнению с традиционной микрокристаллической целлюлозой обладает в пять раз большей удельной поверхностью и уровнем шероховатости частиц, что обеспечивает существенно более высокую прессуемость, текучесть, смешиваемость и распадаемость Prosolv^® SMCC по сравнению с традиционной микрокристаллической целлюлозой, а также позволяет существенно повысить дисперсность активных веществ и стабильность порошковой смеси для инкапсулирования. Специалисту при этом понятно, что для осуществления настоящего изобретения может быть использованы и другие разновидности микрокристаллической целлюлозы фармакопейного качества.JRC Pharma Family, July 13, 2016 [26]). Due to the uniform distribution of colloidal silicon dioxide on the surface of microcrystalline cellulose particles, Prosolv ^® SMCC, compared to traditional microcrystalline cellulose, has five times the specific surface area and particle roughness level, which provides significantly higher compressibility, flow, miscibility and disintegration of Prosolv ^® SMCC compared to with traditional microcrystalline cellulose, and also allows you to significantly increase the dispersion of active substances and the stability of the powder mixture for encapsulation. The person skilled in the art will appreciate that other types of pharmacopoeia-grade microcrystalline cellulose can be used to practice the present invention.

Решаемая изобретением задача - создание пробиотической композиции (биологически активной пищевой добавки), предназначенной для использования у детей, включая детей, находящихся или находившихся на искусственном или частично грудном вскармливании, для формирования сбалансированной микрофлоры кишечника и для профилактики дисбактериоза у детей, содержащей жизнеспособные пробиотические бифидобактерий и лактобациллы, а также разработка способа изготовления пробиотической биологически активной добавки, который позволил бы сохранить жизнеспособность и полезные свойства пробиотических бактерий, входящих в состав добавки, как при изготовлении композиции, так и на протяжении всего срока ее хранения. Под сбалансированной (нормальной) микрофлорой кишечника здесь и далее понимается микрофлора кишечника, количественные и качественные характеристики которой максимально приближены к соответствующим характеристикам микрофлоры кишечника здорового ребенка, в частности, здорового ребенка, находящегося на грудном вскармливании.The problem solved by the invention is the creation of a probiotic composition (biologically active food supplement) intended for use in children, including children who are or were artificially or partially breastfed, for the formation of a balanced intestinal microflora and for the prevention of dysbacteriosis in children, containing viable probiotic bifidobacteria and lactobacilli, as well as the development of a method for manufacturing a probiotic dietary supplement, which would preserve the viability and beneficial properties of the probiotic bacteria that make up the supplement, both during the manufacture of the composition and throughout its entire shelf life. A balanced (normal) intestinal microflora hereinafter refers to the intestinal microflora, the quantitative and qualitative characteristics of which are as close as possible to the corresponding characteristics of the intestinal microflora of a healthy child, in particular, a healthy child who is breastfed.

Технический результат изобретения, относящегося к пробиотической композиции, - расширение арсенала средств для восстановления и поддержания сбалансированной микрофлоры кишечника и для профилактики дисбактериоза у детей. Технический результат изобретения, относящегося к способу получения указанной пробиотической композиции, - обеспечение пробиотической композиции, содержащей живые пробиотические бактерии (бифидобактерий и лактобациллы), в которой жизнеспособность и полезные свойства пробиотических бактерий сохранялись бы как при изготовлении композиции, так и при ее хранении на протяжении длительного времени.The technical result of the invention related to the probiotic composition is the expansion of the arsenal of means for restoring and maintaining a balanced intestinal microflora and for the prevention of dysbacteriosis in children. The technical result of the invention related to the method for obtaining the said probiotic composition is the provision of a probiotic composition containing live probiotic bacteria (bifidobacteria and lactobacilli), in which the viability and beneficial properties of probiotic bacteria would be maintained both during the manufacture of the composition and during its storage for a long time. time.

Видовой состав бактериальной массы, входящей в состав биологически активной пищевой добавки по изобретению и включающей лактобациллы и бифидобактерий, позволяет обеспечить у потребителя такой пищевой добавки формирование количественного и качественного профиля микрофлоры кишечника, максимально приближенного к профилю микрофлоры кишечника у детей, в том числе, у детей, находящихся или находившихся на грудном вскармливании.The species composition of the bacterial mass, which is part of the dietary supplement according to the invention and includes lactobacilli and bifidobacteria, allows the consumer of such a food supplement to form a quantitative and qualitative profile of the intestinal microflora, as close as possible to the profile of the intestinal microflora in children, including children who are or have been breastfed.

В предпочтительном воплощении, неперевариваемый пребиотический фруктоолигосахарид представляет собой инулин. В различных предпочтительных воплощениях инулин может представлять собой инулин, получаемый из растительного сырья, в частности (без ограничения), из агавы или топинамбура.In a preferred embodiment, the non-digestible prebiotic fructooligosaccharide is inulin. In various preferred embodiments, the inulin may be plant-derived inulin, such as, but not limited to, agave or Jerusalem artichoke.

В предпочтительном воплощении, биологически активная пищевая добавка содержит нутрицевтически приемлемые вспомогательные вещества. В более предпочтительном воплощении указанные нутрицевтически приемлемые вспомогательные вещества, без ограничения, включают нутрицевтически приемлемое связующее, облегчающее возможность прессования таблетировочной смеси и увеличивающее механическую прочность таблетки, и нутрицевтически приемлемый лубрикант (смазывающее вещество). В более предпочтительном воплощении, в качестве связующего используют микрокристаллическую целлюлозу, а в качестве лубриканта - соль стеариновой кислоты, такую как стеарат кальция или стеарат магния. В наиболее предпочтительном воплощении, используют микрокристаллическую целлюлозу и стеарат кальция фармакопейного качества. Здесь и далее термин «вспомогательный компонент фармакопейного качества» означает соответствие указанного вспомогательного компонента требованиям Европейской фармакопеи (European Pharmacopoeia), Фармакопеи США (United States Pharmacopoeia) или Государственной фармакопеи РФ XIII издания.In a preferred embodiment, the dietary supplement contains nutraceutical acceptable excipients. In a more preferred embodiment, these nutraceutical acceptable excipients, without limitation, include a nutraceutical acceptable binder to facilitate the compression of the tablet mixture and increase the mechanical strength of the tablet, and a nutraceutical acceptable lubricant (lubricant). In a more preferred embodiment, microcrystalline cellulose is used as the binder and a stearic acid salt such as calcium stearate or magnesium stearate is used as the lubricant. In the most preferred embodiment, pharmacopoeia grade microcrystalline cellulose and calcium stearate are used. Hereinafter, the term "auxiliary component of pharmacopoeial quality" means the compliance of the indicated auxiliary component with the requirements of the European Pharmacopoeia (European Pharmacopoeia), US Pharmacopoeia (United States Pharmacopoeia) or the State Pharmacopoeia of the Russian Federation XIII edition.

В предпочтительном воплощении, одна таблетка биологически активной добавки по изобретению содержит от 0,07 до 0,15 г микрокристаллической целлюлозы и от 0,001 до 0,03 г стеарата кальция. В наиболее предпочтительном воплощении, одна таблетка биологически активной добавки по изобретению содержит 0,0 9 г микрокристаллической целлюлозы и 0,01 г стеарата кальция.In a preferred embodiment, one tablet of the dietary supplement of the invention contains 0.07 to 0.15 g of microcrystalline cellulose and 0.001 to 0.03 g of calcium stearate. In the most preferred embodiment, one tablet of the dietary supplement of the invention contains 0.09 g of microcrystalline cellulose and 0.01 g of calcium stearate.

Также изобретение относится к способу изготовления такой биологически активной добавки, где указанный способ включает раздельную подготовку каждой из культур Lactobacillus rhamnonsus, Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium longum и Bifidobacterium breve для ферментации, где указанная подготовка включает в себя раздельное высевание культур Lactobacillus rhamnonsus, Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium longum и Bifidobacterium breve на питательные среды (предпочтительно - на жидкую среду МРС, разлитую по пробиркам), с последующим термостатированием указанных культур в течение 24-72 часов (предпочтительно, при температуре 37±0,5°С) и с последующими засеванием термостатированными культурами емкостей с жидким МРС агаром и инкубированием в течение 48-60 часов при температуре 37±0,5°С, переносом указанных культур в ферментер с последующим выращиванием указанных культур в указанном ферментере, причем указанное выращивание осуществляется при температуре 37±0,5°С и при избыточном давлении в полости ферментера, составляющем 0,025±0,005 МПа, концентрированием указанных культур до заданного объема концентрата, добавлением защитной среды, охлаждением, сублимационной сушкой, где указанную сублимационную сушку осуществляют в течение 30-40 часов при температуре не выше -40°С и давлении не более 30 Па, объединением сухих бактериальных масс, смешиванием с предварительно подготовленными компонентами таблетировочной смеси, включая нутрицевтически приемлемое связующее и нутрицевтически приемлемый лубрикант, и прессование таблетировочной смеси с получением таблеткиThe invention also relates to a method for manufacturing such a biologically active additive, where this method includes separate preparation of each of the cultures of Lactobacillus rhamnonsus, Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium longum and Bifidobacterium breve for fermentation, where this preparation includes separate sowing of cultures of Lactobacillus rhamnonsus, Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium longum and Bifidobacterium breve on nutrient media (preferably on a liquid MPC medium poured into test tubes), followed by thermostatting of these cultures for 24-72 hours (preferably at a temperature of 37 ± 0.5 ° C) and followed by inoculation with thermostated cultures containers with liquid MPC agar and incubation for 48-60 hours at a temperature of 37 ± 0.5 ° C, transfer of these cultures to a fermenter, followed by cultivation of these cultures in the specified fermenter, and said cultivation is carried out at a temperature of 37 ± 0.5 ° C and overpressure in the cavity of the fermenter, which is 0.025 ± 0.005 MPa, by concentrating these cultures to a predetermined volume of concentrate, adding a protective medium, cooling, freeze-drying, where the specified freeze-drying is carried out for 30-40 hours at a temperature not higher than -40 ° C and a pressure not more than 30 Pa, by combining dry bacterial masses, mixing with pre-prepared tablet mixture components, including a nutraceutical acceptable binder and a nutraceutical acceptable lubricant, and compressing the tablet mixture to obtain a tablet

«Предварительная подготовка» вспомогательных компонентов таблетировочной смеси здесь включает в себя помол указанных компонентов на мельнице, например, такой как мельница молотковая ММ-10, и просеивание указанных компонентов через сито. Предпочтительно, для просеивания компонентов смеси используют сито с квадратными ячейками, со стороной квадрата 1 мм."Pre-treatment" of the auxiliary components of the tablet mixture here includes grinding said components in a mill, such as, for example, an MM-10 hammer mill, and sieving said components through a sieve. Preferably, a square mesh sieve with a side of 1 mm square is used to screen the components of the mixture.

«Жидкая среда МРС» здесь представляет собой питательную среду, приготовленную согласно de Man J.D., Rogosa М., Sharpe М.Е., 1960 [27]. Наиболее предпочтительно, термостатирование культур, ферментацию и последующее инкубирование осуществляют при температуре 37±0,5°С. При этом при выборе защитной среды для проведения сублимационной сушки учитывают количественный и качественный состав ее компонентов, необходимых для снижения гибели клеток бифидобактерий и лактобацилл в ходе замораживания и сублимационного высушивания. В качестве защитной среды при проведении сублимационной сушки могут быть использованы, без ограничения, желатин (в частности, 8% желатин), натрий-карбоксиметилцеллюлоза (в частности, 1% натрий-карбоксиметилцеллюлоза), крахмал (в частности, 10% крахмал) и поливинилпирролидон (в частности, 10% поливинилпирролидон), а также среды более сложного состава, например, среды, известные из диссертации Бахтина И.А., 2012 [28]."MPC liquid medium" here is a nutrient medium prepared according to de Man J.D., Rogosa M., Sharpe M.E., 1960 [27]. Most preferably, thermostating cultures, fermentation and subsequent incubation is carried out at a temperature of 37±0.5°C. At the same time, when choosing a protective medium for freeze-drying, the quantitative and qualitative composition of its components is taken into account, which are necessary to reduce the death of bifidobacteria and lactobacilli cells during freezing and freeze-drying. As a protective medium during freeze drying, gelatin (in particular, 8% gelatin), sodium carboxymethyl cellulose (in particular, 1% sodium carboxymethyl cellulose), starch (in particular, 10% starch) and polyvinylpyrrolidone can be used without limitation. (in particular, 10% polyvinylpyrrolidone), as well as media of a more complex composition, for example, media known from the dissertation of Bakhtin I.A., 2012 [28].

Здесь и далее термин «нутрицевтически приемлемый компонент» указывает на совместимость компонента с другими ингредиентами биологически активной пищевой добавки, а также на допустимость использования указанного компонента при изготовлении нутрицевтических композиций и на его безопасность для потребителя пищевой добавки.Hereinafter, the term "nutraceutical acceptable component" indicates the compatibility of the component with other ingredients of a dietary supplement, as well as the acceptability of the use of the specified component in the manufacture of nutraceutical compositions and its safety for the consumer of the nutritional supplement.

Предварительная подготовка компонентов таблетировочной смеси, включая нутрицевтически приемлемое связующее и нутрицевтически приемлемый лубрикант, включает в себя помол указанных компонентов и их последующее просеивание через сито с размером ячейки 1 мм. Помол может осуществляться при помощи любого пригодного для этих целей оборудования, например, при помощи фармацевтической мельницы или молотковой мельницы. Прессование осуществляется путем механического сдавливания определенного количества таблетировочной смеси между двумя пуансонами. Способ согласно изобретению дополнительно может включать стадию обеспыливания полученных таблеток. Также получение таблетки биологически активной добавки по изобретению, по необходимости, может также включать в себя стадию нанесения на таблетку риски или маркировки (например, маркировки, содержащей товарный знак производителя и др.). В этом случае нанесение на таблетку риски или маркировки осуществляют на стадии прессования таблетировочной смеси. Также способ по изобретению дополнительно может включать в себя стадию фасовки таблеток в заводскую упаковку, например, по 10, 20, 30, 40 и т.д. таблеток.Preliminary preparation of the components of the tablet mixture, including a nutraceutical acceptable binder and a nutraceutical acceptable lubricant, includes grinding these components and their subsequent sifting through a sieve with a mesh size of 1 mm. Grinding can be carried out using any equipment suitable for this purpose, for example, using a pharmaceutical mill or a hammer mill. Pressing is carried out by mechanically squeezing a certain amount of tablet mixture between two punches. The method according to the invention may additionally include the step of dedusting the obtained tablets. Also, obtaining a tablet of a dietary supplement according to the invention, if necessary, may also include the step of applying a score or marking to the tablet (for example, marking containing the manufacturer's trademark, etc.). In this case, the drawing on the tablet of risks or markings is carried out at the stage of pressing the tablet mixture. Also, the method according to the invention may additionally include the stage of filling tablets in their original packaging, for example, 10, 20, 30, 40, etc. tablets.

Технический результат предлагаемого способа - сохранение жизнеспособности и полезных свойств пробиотических микроорганизмов, входящих в состав композиции, на протяжении длительного времени.The technical result of the proposed method is the preservation of the viability and beneficial properties of probiotic microorganisms that are part of the composition for a long time.

Нижеприведенный пример приводится исключительно в целях иллюстрации настоящего изобретения, а не в целях ограничения объема притязаний.The following example is provided solely for the purpose of illustrating the present invention and not for the purpose of limiting the scope of the claims.

Пример 1. Получение пробиотической композиции по изобретению. Исследование стабильности пробиотической композиции в условиях ускоренного хранения.Example 1 Preparation of a probiotic composition according to the invention. Study of the stability of the probiotic composition under conditions of accelerated storage.

Исходные культуры пробиотических бифидобактерий Bifidobacterium bifidum, предпочтительно штаммы, выбранные из Bb-06, DSM20239, НА-132, Idcc 4201, JCM7003, KCTC3357, L22, LMG13195, S28a, BKM Ас-2773D, Bifidobacterium longum, предпочтительно штаммы, выбранные из В379М, ВВ46, ВВ536, Bl-05, DSM20219, НА-135, SD5219, BKM AC-2775D, и Bifidobacterium breve, предпочтительно штаммы, выбранные из Bb-03, НА-129, LMG13208, R0070, SD5206, BKM AC-2776D, а также пробиотических лактобацилл Lactobacillus rhamnonsus, предпочтительно штаммы, выбранные из А119, CLR2, GR-1, GG, НА-111, HN001, LB21, Lcr35, Lr-32, R0011, BKM AC-3170D, с чашек Петри пересевают на жидкую среду МРС [26], разлитую по пробиркам, и выращивают в течение 2 суток в термостате при 37°С. Далее культурами из пробирок засевают бутыль объемом 3000 мл, содержащую жидкую среду МРС; выращивание осуществляют при температуре 37°С в течение 48-60 часов, после чего жидкий посевной материал передают на стадию ферментации. Предпочтительно (без ограничения), ферментацию осуществляют в ферментере «Биор-250», предварительно простерилизованном в течение 90 минут при температуре 132±2°С. При этом питательную среду перед высеванием культур стерилизуют глухим паром при температуре 112-115°С. После захолаживания питательной среды в нее раздельно добавляют культуры Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium breve и Lactobacillus rhamnonsus и помещают в ферментер для осуществления ферментации. При этом ферментацию осуществляют при температуре 37±0,5°С и избыточном давлении в полости ферментера, составляющем 0,025±0,005 МПа. После окончания ферментации культуральные жидкости с каждого ферментера поочередно концентрируют на фильтрационной установке до заданного объема концентрата. По окончанию процесса концентрирования концентраты культур Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium breve и Lactobacillus rhamnonsus каждой из культур отдельно сливают в реактор и добавляют защитную среду.Stock cultures of probiotic bifidobacteria Bifidobacterium bifidum, preferably strains selected from Bb-06, DSM20239, HA-132, Idcc 4201, JCM7003, KCTC3357, L22, LMG13195, S28a, BKM Ac-2773D, Bifidobacterium longum, preferably strains selected from B379M, BB46, BB536, Bl-05, DSM20219, HA-135, SD5219, BKM AC-2775D, and Bifidobacterium breve, preferably strains selected from Bb-03, HA-129, LMG13208, R0070, SD5206, BKM AC-2776D, and also probiotic lactobacilli Lactobacillus rhamnonsus, preferably strains selected from A119, CLR2, GR-1, GG, HA-111, HN001, LB21, Lcr35, Lr-32, R0011, BKM AC-3170D, subcultured from Petri dishes onto liquid MPC medium [26], poured into test tubes, and grown for 2 days in a thermostat at 37°C. Next, the cultures from the test tubes are inoculated into a 3000 ml bottle containing the MPC liquid medium; cultivation is carried out at a temperature of 37°C for 48-60 hours, after which the liquid inoculum is transferred to the fermentation stage. Preferably (without limitation), the fermentation is carried out in a Bior-250 fermenter pre-sterilized for 90 minutes at a temperature of 132±2°C. At the same time, the nutrient medium is sterilized with deaf steam at a temperature of 112-115°C before sowing the cultures. After cooling down the culture medium, cultures of Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium breve and Lactobacillus rhamnonsus are separately added to it and placed in a fermenter for fermentation. When this fermentation is carried out at a temperature of 37±0.5°C and excess pressure in the cavity of the fermenter, constituting 0.025±0.005 MPa. After the end of fermentation, the culture liquids from each fermenter are concentrated in turn on a filtration unit to a predetermined volume of concentrate. At the end of the concentration process, the concentrates of the cultures of Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium breve and Lactobacillus rhamnonsus of each of the cultures are separately poured into the reactor and a protective medium is added.

В качестве защитных сред применяются вещества, образующие с водой истинные и коллоидные растворы. Эти среды могут быть разделены на три группы: коллоидные среды животного, растительного и минерального происхождения; среды, содержащие растворимые вещества, такие как углеводы и продукты гидролиза белков - пептоны и аминокислоты и среды сложного состава, в которых коллоидные вещества сочетаются с растворимыми.Substances that form true and colloidal solutions with water are used as protective media. These media can be divided into three groups: colloidal media of animal, vegetable and mineral origin; media containing soluble substances, such as carbohydrates and protein hydrolysis products - peptones and amino acids, and media of complex composition, in which colloidal substances are combined with soluble ones.

Для подготовки защитной среды используют либо сахарозо-желатиновый агар (СЖА) (10% сахарозы, 1,5% желатина, 0,1% агар-агара в дистиллированной воде), либо натуральное снятое молоко, сепарированное три раза, или сухое молоко для бактериологических целей (Difco, США) в концентрации 10%, либо используют иные хорошо известнее защитные среды, такие как среда Стэмпа, содержащая 10% желатина и 0,25-0,5% аскорбиновой кислоты в гидролизате натурального обезжиренного молока или минимальная среда М9 с добавлением 1% тиомочевины, либо 10% сахарозы, 10% мальтозы, 10% лактозы, 1,5% желатина.To prepare the protective medium, either sucrose-gelatin agar (SGA) (10% sucrose, 1.5% gelatin, 0.1% agar-agar in distilled water) or natural skimmed milk separated three times, or milk powder for bacteriological purposes (Difco, USA) at a concentration of 10%, or other well-known protective media are used, such as Stamp's medium containing 10% gelatin and 0.25-0.5% ascorbic acid in the hydrolyzate of natural skimmed milk or the minimum M9 medium with the addition of 1% thiourea, or 10% sucrose, 10% maltose, 10% lactose, 1.5% gelatin.

Защитную среду разливают в стеклянные пробирки (12 мл) по 5 мл; 3 раза стерилизуют текучим паром и проверяют стерильность путем инкубации 3 суток при 37°С Защитные среды хранят при 5°С не более 1 месяца.The protective medium is poured into glass test tubes (12 ml), 5 ml each; Sterilize 3 times with flowing steam and check sterility by incubation for 3 days at 37°C. Protective media are stored at 5°C for no more than 1 month.

Полученный объем технологической жидкости каждой из культур охлаждают до температуры 5°С и разливают в стерильные бутыли, которые затем передают на стадию сублимационной сушки. В процессе сублимационной сушки технологическую жидкость разливают в поддоны из нержавеющей стали с достижением толщины слоя технологической жидкости, содержащей каждую из культур Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium breve и Lactobacillus rhamnonsus, составляющей 10±1 мм. Затем поддоны с разлитой в них технологической жидкостью помещают в камеру установки для сублимационной сушки и осуществляют в течение 30-40 часов сублимационную сушку технологической жидкости при давлении не выше 30 Па, при этом температура на протяжении всего цикла сушки меняется согласно заложенной программе от -30°С до 30°С. Полученные сухие бактериальные массы пробиотических микроорганизмов каждой из культур Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium breve и Lactobacillus rhamnonsus, смешивают с микрокристаллической целлюлозой (предпочтительно, с силикатированной микрокристаллической целлюлозой, такой как Prosolv^® SMCC) для доведения содержания каждой из культур Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium breve и Lactobacillus rhamnonsus до не менее 1±10⁸ КОЕ на 1 грамм смеси. Определение количества жизнеспособных бактерий проводили в соответствии с ОФС.1.7.1.0003.15 "Бифидосодержащие пробиотики".The resulting volume of the process liquid of each of the cultures is cooled to a temperature of 5°C and poured into sterile bottles, which are then transferred to the freeze-drying stage. In the freeze drying process, the process liquid is poured into stainless steel trays to achieve a thickness of the process liquid layer containing each of the cultures of Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium breve and Lactobacillus rhamnonsus, which is 10 ± 1 mm. Then the trays with the process liquid poured into them are placed in the chamber of the installation for freeze-drying and freeze-drying of the process liquid is carried out for 30-40 hours at a pressure not exceeding 30 Pa, while the temperature throughout the entire drying cycle varies according to the programmed program from -30 ° C to 30°C. The obtained dry bacterial masses of probiotic microorganisms of each of the cultures of Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium breve and Lactobacillus rhamnonsus are mixed with microcrystalline cellulose (preferably silicified microcrystalline cellulose such as ^Prosolv® SMCC) to adjust the content of each of the cultures of Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium longum , Bifidobacterium breve and Lactobacillus rhamnonsus up to at least 1±10 ⁸ CFU per 1 gram of the mixture. The determination of the number of viable bacteria was carried out in accordance with GPM.1.7.1.0003.15 "Bifid-containing probiotics".

Полученные смеси пробиотических микроорганизмов Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium breve и Lactobacillus rhamnonsus в суммарном количестве 0,4 6 г на капсулу с микрокристаллической целлюлозой от 0,09 до 0,14 г на капсулу смешивают друг с другом и перемешивают со вспомогательными компонентами, включая инулин 0,12 г на капсулу и стеарат кальция от 0,002 до 0,004 г на капсулу, которые предварительно измельчают и просеивают через сито с размером пор не более 1 мм, в течение по крайней мере 10 минут вплоть до образования однородной смеси и передают на стадию таблетирования. Отбирают навеску таблетировочной смеси (0,3±0,03 г), размещают указанную навеску между верхним и нижним таблетировочными пуансонами таблетировочного пресса РТП-24, осуществляют собственно таблетирование путем механического сдавливания навески между указанными пуансонами, при этом, если необходимо, на таблетки наносят риску и/или маркировку. Изготовленные таким образом таблетки, по необходимости, обеспыливают в вытяжном шкафу, на ситах с ячейкой в виде квадрата со стороной 5 мм. Готовые обеспыленные таблетки упаковывают в блистеры по 20, 30, 60 и т.д. таблеток при помощи любого счетно-фасовочного устройства, используемого в технологии твердых препаративных форм.The resulting mixtures of probiotic microorganisms Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium breve and Lactobacillus rhamnonsus in a total amount of 0.4-6 g per capsule with microcrystalline cellulose from 0.09 to 0.14 g per capsule are mixed with each other and mixed with auxiliary components, including inulin 0.12 g per capsule and calcium stearate from 0.002 to 0.004 g per capsule, which are pre-crushed and sieved through a sieve with a pore size of not more than 1 mm for at least 10 minutes until a homogeneous mixture is formed and transferred to the tabletting stage . A sample of the tablet mixture (0.3 ± 0.03 g) is taken, the indicated sample is placed between the upper and lower tablet punches of the RTP-24 tablet press, tableting is carried out by mechanically squeezing the sample between the indicated punches, while, if necessary, risk and/or labeling. The tablets produced in this way, if necessary, are dedusted in a fume hood, on sieves with a cell in the form of a square with a side of 5 mm. Ready-made dust-free tablets are packed in blisters of 20, 30, 60, etc. tablets using any counting and filling device used in the technology of solid formulations.

Жизнеспособность пробиотических бактерий, входящих в состав композиции по изобретению, а также сохранение полезных свойств композиции, полученной выше, при ее хранении исследуют в условиях ускоренного старения.The viability of the probiotic bacteria included in the composition according to the invention, as well as the preservation of the beneficial properties of the composition obtained above, during storage, is investigated under conditions of accelerated aging.

Метод «ускоренного старения» заключается в выдерживании испытуемой биологически активной добавки при температурах и влажности, превышающих температуру и влажность его хранения в процессе обращения. При повышенных температурах, как правило, ускоряются протекающие в лекарственных средствах физико-химические процессы, приводящие со временем к нежелательным изменениям качества. Таким образом, при повышенной температуре промежуток времени, в течение которого контролируемые показатели качества лекарственного средства сохраняются в допустимых пределах (экспериментальный срок годности), искусственно сокращается в сравнении со сроком годности при температуре хранения. Это позволяет значительно сократить время, необходимое для установления срока годности.The “accelerated aging” method consists in keeping the biologically active additive under test at temperatures and humidity exceeding the temperature and humidity of its storage during circulation. At elevated temperatures, as a rule, the physicochemical processes occurring in medicinal products are accelerated, leading over time to undesirable changes in quality. Thus, at elevated temperatures, the period of time during which the controlled quality indicators of the medicinal product remain within acceptable limits (experimental shelf life) is artificially reduced in comparison with the shelf life at storage temperature. This allows you to significantly reduce the time required to establish the expiration date.

Срок годности (С) при температуре хранения (t_xp) связан с экспериментальным сроком годности (С_Э) при повышенной температуре экспериментального хранения (t_э) следующей зависимостью:Shelf life (C) at storage temperature (t _xp ) is related to the experimental shelf life (C _e ) at an elevated temperature of experimental storage (t _e ) by the following relationship:

С=K-С_э,C \u003d K-C _e ,

где коэффициент соответствия

.where the matching coefficient

.

Температурный коэффициент скорости химической реакции (А) принят равным 2,5. Приведенная зависимость основана на правиле Вант-Гоффа о 2-4-кратном росте скоростей химических реакций при увеличении температуры на 10°С.The temperature coefficient of the chemical reaction rate (A) is taken equal to 2.5. The above dependence is based on the van't Hoff rule about a 2-4-fold increase in the rates of chemical reactions with an increase in temperature by 10°C.

Значение коэффициента соответствия (K) в зависимости от выбранного температурного интервала (t_э-t_xp), равного 25°С, составляет 9,9. Срок экспериментального хранения при выбранном сроке годности 2 года составляет 74 суток. В качестве композиции сравнения выбрана композиция пробиотических бифидобактерий Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium breve и пробиотических лактобацилл Lactobacillus rhamnosus с лактозой.The value of the coefficient of conformity (K) depending on the selected temperature range (t _e -t _xp ), equal to 25°C, is 9.9. The experimental storage period with the selected shelf life of 2 years is 74 days. The composition of probiotic bifidobacteria Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium breve and probiotic lactobacilli Lactobacillus rhamnosus with lactose was chosen as the reference composition.

При этом для пробиотической композиции по изобретению показано, что ее полезные свойства сохраняются в течение по меньшей мере 24 месяцев. При этом композицию необходимо хранить в невскрытой заводской упаковке при температуре не выше 25°С, в защищенном от прямых солнечных лучей месте. Если заводская упаковка уже вскрыта, композицию по изобретению необходимо хранить в плотно закрытом флаконе не более 24 месяцев.Moreover, for the probiotic composition according to the invention, it has been shown that its beneficial properties are maintained for at least 24 months. In this case, the composition must be stored in unopened original packaging at a temperature not exceeding 25°C, in a place protected from direct sunlight. If the original packaging has already been opened, the composition according to the invention must be stored in a tightly closed vial for no more than 24 months.

Предпочтительно, пробиотическую композицию (биологически активную добавку) по изобретению употребляют по 1 таблетке 2 раза в день во время еды на протяжении 14 дней, при этом ребенку потребителю биологически активной добавки дают проглотить ее таблетку, запив небольшим количеством негорячей жидкости, либо растворяют таблетку перед применением в небольшом количестве негорячей жидкости.Preferably, the probiotic composition (dietary supplement) according to the invention is consumed 1 tablet 2 times a day with meals for 14 days, while the child who consumes the dietary supplement is allowed to swallow its tablet with a small amount of non-hot liquid, or the tablet is dissolved before use in a small amount of non-hot liquid.

Таким образом, биологически активная добавка в соответствии с настоящим изобретением обеспечивает расширение ассортимента пробиотических композиций (биологически активных добавок) на основе пробиотических бифидобактерий и лактобацилл, которые могут применяться для восстановления и поддержания сбалансированной микрофлоры кишечника у детей. В свою очередь, способ в соответствии с настоящим изобретением обеспечивает получение указанной биологически активной добавки с минимальными экономическими затратами и затратами времени, с сохранением жизнеспособности и полезных свойств пробиотических микроорганизмов, входящих в ее состав, в течение длительного времени.Thus, the dietary supplement in accordance with the present invention provides an expansion of the range of probiotic compositions (dietary supplements) based on probiotic bifidobacteria and lactobacilli, which can be used to restore and maintain a balanced intestinal microflora in children. In turn, the method in accordance with the present invention provides for the production of the specified biologically active additive with minimal economic and time costs, while maintaining the viability and beneficial properties of the probiotic microorganisms included in its composition for a long time.

Изобретение может быть использовано в медицине, фармакологии, химико-фармацевтической, пищевой промышленностиThe invention can be used in medicine, pharmacology, chemical-pharmaceutical, food industry

СсылкиLinks

1. Fuller R. Probiotics in man and animals. // "Journal of Applied Microbiology", 1989, 66: 365-378.1. Fuller R. Probiotics in man and animals. // "Journal of Applied Microbiology", 1989, 66: 365-378.

2. Lee, Y-K, and Salmien, S. 1995. The coming age of probiotics. // "Trends in Food Science & Technology", 1995, 6: 241-245.2. Lee, Y-K, and Salmien, S. 1995. The coming age of probiotics. // "Trends in Food Science & Technology", 1995, 6: 241-245.

3. Coxam V. Current data with inulin-type fructans and calcium, targeting bone health in adults. // "The Journal of Nutrition", NOV 2007; 137 (11 Suppl): 2527S-2533S.3. Coxam V. Current data with inulin-type fructans and calcium, targeting bone health in adults. // "The Journal of Nutrition", NOV 2007; 137 (11 Suppl): 2527S-2533S.

4. Seifert S., Watzl B. Inulin and oligofructose: review of experimental data on immune modulation. // "The Journal of Nutrition", Nov. 2007; 137 (11 Suppl): 2563S-2567S.4. Seifert S., Watzl B. Inulin and oligofructose: review of experimental data on immune modulation. // "The Journal of Nutrition", Nov. 2007; 137 (11 Suppl): 2563S-2567S.

5. Hall M.A., Cole C.B., et al. Factors influencing the presence of faecal lactobacilli in early infancy. // "Archives of Disease in Childhood", 1990; 65: 185-8.5. Hall M.A., Cole C.B., et al. Factors influencing the presence of faecal lactobacilli in early infancy. // "Archives of Disease in Childhood", 1990; 65:185-8.

6. Хавкин A.M., Бельмер С.В., Волынец Г.В., Жихарева Н.С. Функциональные заболевания пищеварительного тракта у детей. Принципы рациональной терапии. // Справочник педиатра: ежемесячный научно-практический журнал. - 2006. - №2. - С. 17-32.6. Khavkin A.M., Belmer S.V., Volynets G.V., Zhikhareva N.S. Functional diseases of the digestive tract in children. Principles of rational therapy. // Handbook of a pediatrician: monthly scientific and practical journal. - 2006. - No. 2. - S. 17-32.

7. Braun ОН. Effect of consumption of human milk and other formulas on intestinal bacterial flora in infants. - In: Lebenthal B. ed. Gastroenterology and nutrition in infancy. // New York: "Raven Press", 1981: 247-51.7. Braun OH. Effect of consumption of human milk and other formulas on intestinal bacterial flora in infants. - In: Lebenthal B. ed. Gastroenterology and nutrition in infancy. // New York: "Raven Press", 1981: 247-51.

8. Modler H.W., McKellar R.C, Yaguchi M. Bifidobacteria and bifidogenic factors. // "Canadian Institute of Food Science and Technology Journal", 1990; 23: 29-41.8. Modler H.W., McKellar R.C, Yaguchi M. Bifidobacteria and bifidogenic factors. // "Canadian Institute of Food Science and Technology Journal", 1990; 23:29-41.

9. Moreau M.C, Thomassen M., et al. Cinetique d'establissement de la microflore digestive chez le nouveau-ne humain en fonction de la nature du lait. (Establishment of the digestive tract microflora in newborn infants as a function of milk type.). // "Reproduction, Nutrition, Development", 1986; 26: 745-53 (in French).9. Moreau M.C, Thomassen M., et al. Cinetique d'establissement de la microflore digestive chez le nouveau-ne humain en fonction de la nature du lait. (Establishment of the digestive tract microflora in newborn infants as a function of milk type.). // "Reproduction, Nutrition, Development", 1986; 26:745-53 (in French).

10. Yoshita M., Fujita K., et al. Development of the normal intestinal flora and its clinical significance in infants and children. // "Bifidobacteria Microflora", 1991; 10: 11-27.10. Yoshita M., Fujita K., et al. Development of the normal intestinal flora and its clinical significance in infants and children. // "Bifidobacteria Microflora", 1991; 10:11-27.

11. Lohner, S.,

, D., et al. Prebiotics in healthy infants and children for prevention of acute infectious diseases: a systematic review and meta-analysis. // "Nutrition Reviews", Aug. 2014; 72 (8): 523-31.11. Lohner, S.,

, D., et al. Prebiotics in healthy infants and children for prevention of acute infectious diseases: a systematic review and meta-analysis. // "Nutrition Reviews", Aug. 2014; 72(8): 523-31.

12. Benno V. Sawada K, Mitsuoka T. The intestinal microflora of infants: composition of fecal flora in breast-fed and bottle-fed infants. // "Microbiology and Immunology", 1984; 28: 975-86.12. Benno V. Sawada K, Mitsuoka T. The intestinal microflora of infants: composition of fecal flora in breast-fed and bottle-fed infants. // "Microbiology and Immunology", 1984; 28:975-86.

13. Румянцев А.Г. Дисбактериоз как индикатор здоровья и показание к терапии у детей: национальный миф и научная реальность. // "Детская больница", 2000, №1, стр. 75-77.13. Rumyantsev A.G. Dysbacteriosis as an indicator of health and an indication for therapy in children: national myth and scientific reality. // "Children's Hospital", 2000, No. 1, pp. 75-77.

14. Gibson G.R., Roberfroid М.В. Dietary modulation of the human colonic microbiota: introducing the concept of prebiotics. // "The Journal of Nutrition", 1995 Jun; 125(6): 1401-12.14. Gibson G.R., Roberfroid M.V. Dietary modulation of the human colonic microbiota: introducing the concept of prebiotics. // "The Journal of Nutrition", 1995 Jun; 125(6): 1401-12.

15. Tanaka R., Takayama H., Morotomi M., et al. Effect of administration TOS and B. breve 4006 on the human fecal flora. // "Bifidobacteria microflora", 1983; 2: p. 17-24.15. Tanaka R., Takayama H., Morotomi M., et al. Effect of administration TOS and B. breve 4006 on the human fecal flora. // "Bifidobacteria microflora", 1983; 2: p. 17-24.

16. Ардатская М.Д. Пробиотики, пребиотики и метабиотики в коррекции микроэкологических нарушений кишечника. // "Медицинский совет", 2015. - №13 - С. 94-99.16. Ardatskaya M.D. Probiotics, prebiotics and metabiotics in the correction of microecological disorders of the intestine. // "Medical Council", 2015. - No. 13 - S. 94-99.

17. Gibson G.R. Dietary modulation of the human gut microflora using the prebiotics oligofructose and inulin. // "The Journal of Nutrition", 1999; 129 (7) Suppl: 1438S-41S.17Gibson G.R. Dietary modulation of the human gut microflora using the prebiotics oligofructose and inulin. // "The Journal of Nutrition", 1999; 129(7) Suppl: 1438S-41S.

18. Gibson G.R., Beatty E.B., et al. Selective stimulation of bifidobacteria in the human colon by oligofructose and inulin. // "Gastroenterology", 1995; 108: 975-82.18. Gibson G.R., Beatty E.B., et al. Selective stimulation of bifidobacteria in the human colon by oligofructose and inulin. // "Gastroenterology", 1995; 108:975-82.

19. Bode L. Human milk oligosaccharides: Every baby needs a sugar mama. // "Glycobiology", 2012 Sep; 22(9): 1147-1162.19. Bode L. Human milk oligosaccharides: Every baby needs a sugar mama. // "Glycobiology", 2012 Sep; 22(9): 1147-1162.

20. Geier M.S., Butler R.N., Howarth G.S. Probiotics, prebiotics and synbiotics: a role in chemoprevention for colorectal cancer? // "Cancer Biology & Therapy", 2006 Oct; 5 (10): 1265-1269.20. Geier M.S., Butler R.N., Howarth G.S. Probiotics, prebiotics and synbiotics: a role in chemoprevention for colorectal cancer? // "Cancer Biology & Therapy", 2006 Oct; 5(10): 1265-1269.

21. Hedin C, Whelan K., Lindsay J.O. Evidence for the use of probiotics and prebiotics in inflammatory bowel disease: a review of clinical trials. // "The Proceedings of the Nutrition Society", 2007 Aug; 66 (3): 307-315.21. Hedin C, Whelan K., Lindsay J.O. Evidence for the use of probiotics and prebiotics in inflammatory bowel disease: a review of clinical trials. // "The Proceedings of the Nutrition Society", 2007 Aug; 66(3): 307-315.

22. US 9763466 B2 «Carbohydrate mixture», патентообладатель: "N.V. Nutricia" (NL), МПК: A23L 1/29, A61K 31/715, A61K 31/7016, A61K 31/702, A61K 31/733, A23L 29/30, A23L 33/00, A23L 33/10, A23L 33/21, опубликовано: 19.09.2017.22. US 9763466 B2 "Carbohydrate mixture", patent holder: "NV Nutricia" (NL), IPC: A23L 1/29, A61K 31/715, A61K 31/7016, A61K 31/702, A61K 31/733, A23L 29/ 30, A23L 33/00, A23L 33/10, A23L 33/21, published: 09/19/2017.

23. German J.В., Freeman S.L., et al. Human Milk Oligosaccharides: Evolution, Structures and Bioselectivity as Substrates for Intestinal Bacteria. // "

Nutrition workshop series. Paediatric programme", 2008; 62: 205-22.23. German J.B., Freeman S.L., et al. Human Milk Oligosaccharides: Evolution, Structures and Bioselectivity as Substrates for Intestinal Bacteria. // "

nutrition workshop series. Pediatric programme", 2008; 62: 205-22.

24. WO 2005/039319 A2 «SYNBIOTIC COMPOSITION FOR INFANTS», заявитель: "N.V. NUTRICIA" (NL), МПК: A23L 1/29, A23L 1/30, A23L 1/308, A61K 31/702, A61K 31/733, A61K 35/74, опубликовано: 06.05.2005.24. WO 2005/039319 A2 "SYNBIOTIC COMPOSITION FOR INFANTS", applicant: "NV NUTRICIA" (NL), IPC: A23L 1/29, A23L 1/30, A23L 1/308, A61K 31/702, A61K 31/733 , A61K 35/74, published: 05/06/2005.

25. WO 2007/125558 A1 «SYMBIOTIC COMPOSITION COMPRISING NON-DIGESTIBLE POLYSACCHARIDES AND BIFIDOBACTERIA WHICH METABOLIZE THEM AND ITS USES», заявитель: "ANIDRAL S.R.L." (IT), МПК: A23L 1/03, A23L 1/052, A61K 35/74, A23C 9/12, опубликовано: 08.11.2007.25. WO 2007/125558 A1 "SYMBIOTIC COMPOSITION COMPRISING NON-DIGESTIBLE POLYSACCHARIDES AND BIFIDOBACTERIA WHICH METABOLIZE THEM AND ITS USES", Applicant: "ANIDRAL S.R.L." (IT), IPC: A23L 1/03, A23L 1/052, A61K 35/74, A23C 9/12, published: 11/08/2007.

26. Prosolv^® SMCC: Silicified Microcrystalline Cellulose (The Original Silicified MCC). - «JRC Pharma Family», 13.07.2016. Доступно посредством сети Интернет; режим доступа (URL): http://www.jrspharma.com/pharma-wAssets/docs/brochures/PROSOLV-SMCC.pdf.26. ^Prosolv® SMCC: Silicified Microcrystalline Cellulose (The Original Silicified MCC). - "JRC Pharma Family", 07/13/2016. Accessible via the Internet; access mode (URL): http://www.jrspharma.com/pharma-wAssets/docs/brochures/PROSOLV-SMCC.pdf.

27. De Man J.D., Rogosa, M., Sharpe, M.E. A Medium for the Cultivation of Lactobacilli. // "Journal of Applied Bacteriology", 1960; 23, pp. 130-135.27. De Man J.D., Rogosa, M., Sharpe, M.E. A Medium for the Cultivation of Lactobacilli. // "Journal of Applied Bacteriology", 1960; 23, pp. 130-135.

28. Бахтин И.А. Совершенствование процесса сублимационного высушивания лекарственных препаратов. Диссертация на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук. Пермь, 2012. Доступно посредством сети Интернет по адресу (URL): http://www.pfa.ru/files/Bachtin.pdf.28. Bakhtin I.A. Improving the process of sublimation drying of drugs. Dissertation for the degree of Candidate of Pharmaceutical Sciences. Perm, 2012. Available via the Internet at (URL): http://www.pfa.ru/files/Bachtin.pdf.

Claims

1. A method for the manufacture of a probiotic composition, including separate seeding of cultures of probiotic lactobacilli Lactobacillus rhamnosus and probiotic bifidobacteria Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium longum and Bifidobacterium breve in a liquid MPC medium, followed by thermostating these cultures for 24-72 hours at a temperature of 37±0.5°C and followed by inoculation of containers with liquid MPC agar with thermostatic cultures and incubation for 48-60 hours at a temperature of 37 ± 0.5 ° C, transfer of these cultures to a fermenter, followed by cultivation of these cultures in the specified fermenter at a temperature of 37 ± 0.5 ° C, pH 6.0-7.0 and excess pressure in the fermenter cavity of 0.025 ± 0.005 MPa, concentration of these cultures to a predetermined volume of concentrate, addition of a protective medium, cooling of concentrates, freeze-drying of concentrates, combining dry bacterial masses of Lactobacillus rhamnosus cultures, Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium lo ngum and Bifidobacterium breve, mixing with pre-prepared nutraceutical acceptable auxiliary components, including a prebiotic, nutraceutical acceptable binder and nutraceutical acceptable lubricant, followed by mixing until a homogeneous mixture is formed, and encapsulating said mixture or tableting said mixture to obtain a tablet.

2. The method according to p. 1, characterized in that the protective medium is a sucrose-gelatin agar.

3. The method according to p. 1, characterized in that after adding the protective medium, the concentrates are cooled to 5°C.

4. The method according to claim 1, characterized in that it additionally includes the steps of dedusting the tablets or capsules and the step of filling the tablets or capsules.