RU2767030C1 - Ac-his-ala-glu-glu-nh2 peptide production method - Google Patents
Ac-his-ala-glu-glu-nh2 peptide production method Download PDFInfo
- Publication number
- RU2767030C1 RU2767030C1 RU2021114233A RU2021114233A RU2767030C1 RU 2767030 C1 RU2767030 C1 RU 2767030C1 RU 2021114233 A RU2021114233 A RU 2021114233A RU 2021114233 A RU2021114233 A RU 2021114233A RU 2767030 C1 RU2767030 C1 RU 2767030C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- glu
- obzl
- ala
- boc
- tetrapeptide
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/10—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using coupling agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/10—Tetrapeptides
- C07K5/1024—Tetrapeptides with the first amino acid being heterocyclic
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к фармакологии, точнее, к способам получения биологически активных веществ, а именно к области химического синтеза пептидов и конкретно касается способа получения тетрапептида Ac-His-Ala-Glu-Glu-NH2 (далее Ac-HAEE-NH2) в растворе. Заявляемый способ может использоваться в фармацевтическом производстве и в экспериментальных исследованиях с целью получения препарата для лечения болезни Альцгеймера (далее БА). The invention relates to pharmacology, more precisely, to methods for obtaining biologically active substances, namely to the field of chemical synthesis of peptides, and specifically relates to a method for obtaining tetrapeptide Ac-His-Ala-Glu-Glu-NH 2 (hereinafter Ac-HAEE-NH 2 ) in solution . The claimed method can be used in pharmaceutical production and in experimental studies in order to obtain a drug for the treatment of Alzheimer's disease (hereinafter AD).
Болезнь Альцгеймера представляет собой тяжелое нейродегенеративное заболевание, приводящее к потере памяти, психическим расстройствам и неизбежной смерти. Болезнь Альцгеймера имеет большое социальное значение, так как в основе ее клинической картины лежит снижение когнитивных функций пациентов до уровня деменции, одним из ключевых проявлений которой является неспособность пациента к повседневной деятельности и самообслуживанию. Вследствие высокой распространённости и особой тяжести болезнь Альцгеймера становится важной медицинской и социально-экономической проблемой современного мира, и ее значение будет неуклонно возрастать по мере старения населения. Согласно отчету «Alzheimer’s Disease International World Alzheimer Report 2018», в 2018 г. в мире насчитывалось 50 млн человек с БА, причём ожидается, что к 2030 году это количество увеличится до 82 млн, а к 2050 году - до 150 млн человек. Общая оценочная мировая стоимость деменции в 2018 году составляла 1 триллион долларов. Эта цифра вырастет до 2 триллионов долларов к 2030 году.Alzheimer's disease is a severe neurodegenerative disease leading to memory loss, mental disorders and inevitable death. Alzheimer's disease is of great social importance, since its clinical picture is based on a decrease in the cognitive functions of patients to the level of dementia, one of the key manifestations of which is the inability of the patient to daily activities and self-care. Due to its high prevalence and particular severity, Alzheimer's disease is becoming an important medical and socio-economic problem of the modern world, and its importance will steadily increase with the aging of the population. According to the Alzheimer’s Disease International World Alzheimer Report 2018, in 2018 there were 50 million people with asthma in the world, and this number is expected to increase to 82 million by 2030, and to 150 million by 2050. The total estimated global cost of dementia in 2018 was $1 trillion. This figure will rise to $2 trillion by 2030.
В настоящее время известен ряд пептидов, предлагаемых в качестве средств для лечения болезни Альцгеймера.There are currently a number of peptides that are proposed as agents for the treatment of Alzheimer's disease.
В частности, пептид формулы HD[pS]GYEVHH, где остаток серина является фосфорилированным (RU 2679080, опубл. 05.02.2019). Данный пептид способен образовывать стабильный цинк-опосредованный межмолекулярный комплекс с металлсвязывающим доменом человеческого бета-амилоида и используется для лечения болезни Альцгеймера.In particular, a peptide of the formula HD[pS]GYEVHH, where the serine residue is phosphorylated (RU 2679080, publ. 05.02.2019). This peptide is able to form a stable zinc-mediated intermolecular complex with the metal-binding domain of human beta-amyloid and is used to treat Alzheimer's disease.
Следует отметить пептиды, предлагаемые для лечения БА и состоящие из последовательности аминокислот Glu-Trp-Asp-Leu-Val-Gly-Ile-Pro-Gly-Lys-Arg-Ser-Glu-Arg-Phe-Tyr-Glu-Cys-Cys-Lys-Glu [RU 2372355, 2009] Ala-Trp-Lys-Val-Leu-Ser-Pro-Gln-Gly-Gly-Gly-Pro-Trp-Asp-Ser-Val-Ala [RU 2558242, 27.07.2015].Of note are the peptides proposed for the treatment of AD and consisting of the amino acid sequence Glu-Trp-Asp-Leu-Val-Gly-Ile-Pro-Gly-Lys-Arg-Ser-Glu-Arg-Phe-Tyr-Glu-Cys-Cys -Lys-Glu [RU 2372355, 2009] Ala-Trp-Lys-Val-Leu-Ser-Pro-Gln-Gly-Gly-Gly-Pro-Trp-Asp-Ser-Val-Ala [RU 2558242, 27.07.2015 ].
В патенте RU 2677296, опубл. 16.01.2019, предложен пептид формулы Ac-Ala-Trp-Lys-Val-Leu-Ser-Pro-Gln-Gly-Gly-Gly-Pro-Trp-Asp-Ser-Val-Ala-NH2, обладающий более длительным терапевтическим действием против болезни Альцгеймера.In the patent RU 2677296, publ. 01/16/2019, a peptide of the formula Ac-Ala-Trp-Lys-Val-Leu-Ser-Pro-Gln-Gly-Gly-Gly-Pro-Trp-Asp-Ser-Val-Ala-NH 2 is proposed, which has a longer therapeutic action against Alzheimer's disease.
Предложено применение пептида общей формулы ацетил-D-Lys-Lys-Arg-Arg-амид, использование которого позволяет достичь устойчивого ноотропного эффекта на скополамин-индуцированной модели болезни Альцгеймера (RU 2678987, опубл. 05.02.2019). The use of a peptide of the general formula acetyl-D-Lys-Lys-Arg-Arg-amide has been proposed, the use of which makes it possible to achieve a stable nootropic effect on the scopolamine-induced model of Alzheimer's disease (RU 2678987, publ. 05.02.2019).
Вышеперечисленные пептиды получают твердофазным синтезом пептидов, предложенным Р. Б. Меррифилдом из университета Рокфеллера (Нобелевская премия 1984 г.). Этот метод основан на сборке пептида на нерастворимой полимерной подложке последовательным присоединением остатков аминокислот с защищенными α-амино- и боковыми группами. В качестве подложки (носителя) обычно используют хлорметилированный (-СH2Cl) или гидроксиметилированный (-CH2OH) полистирол, в котором содержание групп СH2Cl или CH2OH не превышает 1-2%. Использование твердофазного синтеза позволяет исключить стадию активации карбоксильной группы. The above peptides are obtained by solid phase peptide synthesis proposed by R. B. Merrifield of the Rockefeller University (Nobel Prize 1984). This method is based on the assembly of a peptide on an insoluble polymer support by sequential addition of amino acid residues with protected α-amino and side groups. The substrate (carrier) is usually chloromethylated (-CH 2 Cl) or hydroxymethylated (-CH 2 OH) polystyrene, in which the content of CH 2 Cl or CH 2 OH groups does not exceed 1-2%. The use of solid-phase synthesis makes it possible to exclude the stage of activation of the carboxyl group.
В настоящее время известен ряд синтезов пептидов, предлагаемых в качестве средств для лечения болезни Альцгеймера, которые проводят в растворе. Currently, a number of synthesis of peptides proposed as agents for the treatment of Alzheimer's disease are known, which are carried out in solution.
Метод синтеза пептидов в растворе - это построение пептидной цепи путем соединения аминокислот с помощью химических методов, он более удобен для синтеза пептидов до 10 остатков, так как позволяет получать их в больших количествах и большей степени чистоты (Синтез пептидов. Реагенты и методы. А. А Гершкович, В.К. Киберев. - Киев, Наукова думка, 1987). В случае коротких пептидов, которые необходимо получать в больших количествах, классический метод синтеза в растворе является более эффективным и экономичным.The method of synthesis of peptides in solution is the construction of a peptide chain by combining amino acids using chemical methods, it is more convenient for the synthesis of peptides up to 10 residues, as it allows them to be obtained in large quantities and a greater degree of purity (Peptide synthesis. Reagents and methods. A. A Gershkovich, V. K. Kiberev - Kyiv, Naukova Dumka, 1987). In the case of short peptides that need to be produced in large quantities, the classical solution synthesis method is more efficient and economical.
Особенности синтеза пептидов определенного строения являются следствием бифункциональности исходных аминокислот и, следовательно, возможности образования пептидных связей, как между различными, так и между одинаковыми молекулами аминокислот. Для предотвращения разнообразных осложнений при синтезе пептидов необходимо защищать амино- или карбоксильную группу. Защитная группа должна устанавливаться селективно именно по защищаемой группе и удаляться в таких условиях, в которых не будут затрагиваться остальные функциональные группы в составе молекулы пептида. Кроме того, желательно, чтобы защита ставилась и снималась с высоким выходом и селективностью. Например, один из наиболее распространенных защитных групп аминогруппы являются защитные группы уретанового типа, например бензоксикарбонильная или трет-бутоксикарбонильная группа (Химический синтез пептидов. А. А Гершкович, В.К. Киберев. - г. Киев, Наук. думка, 1992).Features of the synthesis of peptides of a certain structure are a consequence of the bifunctionality of the original amino acids and, therefore, the possibility of the formation of peptide bonds, both between different and between identical amino acid molecules. To prevent various complications in the synthesis of peptides, it is necessary to protect the amino or carboxyl group. The protecting group should be installed selectively for the protected group and removed under such conditions that the remaining functional groups in the peptide molecule will not be affected. In addition, it is desirable that the protection is applied and removed with high yield and selectivity. For example, one of the most common amino protecting groups are urethane-type protecting groups, such as benzoxycarbonyl or tert-butoxycarbonyl group (Chemical synthesis of peptides. A. A. Gershkovich, V. K. Kiberev. - Kyiv, Nauk. Dumka, 1992).
В пептидной химии широко используют ступенчатый способ получения пептидов путем наращивания цепи с C-конца исходной аминокислоты с применением активированных производных аминокислот, например пентафторфениловых эфиров (Боданский М., Клаузнер Я.С. Активированные эфиры и стратегия пептидного синтеза. - Химия полипептидов. Под ред. П. Катосояниса. М., «Мир», 1977, с.30-51) или карбодиимидным методом.In peptide chemistry, a stepwise method for obtaining peptides is widely used by extending the chain from the C-terminus of the original amino acid using activated derivatives of amino acids, for example, pentafluorophenyl ethers (Bodansky M., Klausner Y.S. Activated esters and the strategy of peptide synthesis. - Chemistry of polypeptides. Ed. P. Katosoyanis, Moscow, Mir, 1977, pp. 30-51) or by the carbodiimide method.
В патенте РФ № 2119496 (опубл. 27.09.1998) описан способ получения пептидов формулы 1RF patent No. 2119496 (publ. 27.09.1998) describes a method for obtaining peptides of formula 1
методом смешанных ангидридов или карбодиимидным методом. Реакцию конденсации, осуществляемую по методу смешанных ангидридов, предпочтительно проводят с соблюдением "Андерсоновских" условий (G. W. Anderson et al. J. Am. Chem. Soc, 89, 50-12-5017. 1967). Карбоксильную составляющую для образования смешанного ангидрида N-ацилпролина предпочтительно активируют изобутилхлорформиатом. Могут быть использованы также этилхлороформиат и метилхлороформиат.by the mixed anhydride method or by the carbodiimide method. The condensation reaction carried out by the mixed anhydride method is preferably carried out under "Anderson" conditions (G. W. Anderson et al. J. Am. Chem. Soc, 89, 50-12-5017. 1967). The carboxyl moiety is preferably activated with isobutyl chloroformate to form the mixed anhydride of N-acylproline. Ethyl chloroformate and methyl chloroformate can also be used.
Лучшими растворителями являются смесь этилацетата с диметилформамидом, чистый диметилформамид и хлороформ. Лучшими третичными основаниями являются N-метилморфолин, N-этилморфолин и триэтиламин.The best solvents are a mixture of ethyl acetate with dimethylformamide, pure dimethylformamide and chloroform. The best tertiary bases are N-methylmorpholine, N-ethylmorpholine and triethylamine.
Реакцию конденсации, осуществляемую карбодиимидным методом, предпочтительно проводят в присутствии оксибензотриазола (W. Konig, R. Geiger, Chem. Ber. 103, 788-789. 1979). Конденсация по карбодиимидному методу может быть также проведена в присутствии других добавок, таких как паранитрофенол, пентахлорфенол или N-оксисукцинимид.The condensation reaction carried out by the carbodiimide method is preferably carried out in the presence of oxybenzotriazole (W. Konig, R. Geiger, Chem. Ber. 103, 788-789. 1979). The carbodiimide condensation can also be carried out in the presence of other additives such as paranitrophenol, pentachlorophenol or N-hydroxysuccinimide.
Аминогруппу обычно эффективно защищают кислотными группами, например остатками алифатических, ароматических, гетероциклических карбоновых кислот, такими как ацетил, бензоил, пиридинкарбоксил; кислотными группами, производными от угольной кислоты, такими как этоксикарбонил, бензилоксикарбонил, третбутилоксикарбонил; или кислотными группами, производными от сульфокислоты, такой как пара-толуосульфониловая. The amino group is usually effectively protected with acidic groups, for example aliphatic, aromatic, heterocyclic carboxylic acid residues such as acetyl, benzoyl, pyridinecarboxy; acid groups derived from carbonic acid such as ethoxycarbonyl, benzyloxycarbonyl, t-butyloxycarbonyl; or acid groups derived from a sulfonic acid such as p-toluosulfonyl.
Полученные в результате пептиды обладают антиамнестическим, антигипоксическим и анорексигенным действием, проявляют низкую токсичность, способствуют улучшению способности к обучению и памяти.The resulting peptides have antiamnesic, antihypoxic and anorexigenic effects, exhibit low toxicity, and improve learning and memory abilities.
В патенте RU 2557003 описано изобретение, относящееся к гексапептиду формулы Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH2, обладающему нейропротекторной и ноотропной активностью, который получают с помощью классического синтеза, затем очищают и выделяют в гомогенном состоянии. Patent RU 2557003 describes an invention relating to a hexapeptide of the formula Thr-Gly-Glu-Asn-His-Arg-NH 2 , which has neuroprotective and nootropic activity, which is obtained using classical synthesis, then purified and isolated in a homogeneous state.
В патенте RU 2254139 синтез заявляемого средства проводили классическими методами пептидной химии. Для блокирования боковой цепи лизина применяли карбобензилокси (Z) группу, цистеина - тетрагидропиранильную (Thp), a для временной защиты α-N-функций трет-бутилоксикарбонильную (Воc) группы. Однако это изобретение решает задачу получения пептидов, обладающих противоопухолевым действием.In patent RU 2254139, the synthesis of the proposed agent was carried out by classical methods of peptide chemistry. A carbobenzyloxy (Z) group was used to block the side chain of lysine, a tetrahydropyranyl (Thp) group for cysteine, and a tert-butyloxycarbonyl (Boc) group for temporary protection of α-N-functions. However, this invention solves the problem of obtaining peptides with antitumor activity.
В патенте RU № 2141483 предложен синтез дипептидов и псевдодипептидов, содержащих N-аминоацильный заместитель, который осуществляют классическими методами пептидной химии с применением предпочтительно активированных, например, N- оксисукцинимидных эфиров. Наилучший вариант заключается в применении пентафторфениловых эфиров, как наиболее активных из известных. В качестве активированных производных дикарбоновых кислот применяют, как правило, их циклические внутренние ангидриды.RU patent No. 2141483 proposes the synthesis of dipeptides and pseudodipeptides containing an N-aminoacyl substituent, which is carried out by classical methods of peptide chemistry using preferably activated, for example, N-hydroxysuccinimide esters. The best option is to use pentafluorophenyl ethers, as the most active known. As activated derivatives of dicarboxylic acids, as a rule, their cyclic internal anhydrides are used.
α-Аминогруппу карбоксильного компонента защищают различными обычно применяемыми группами, предпочтительно трет-бутилоксикарбонильной (Boc-) или бензилоксикарбонильной (Z-) защитами.The α-amino group of the carboxyl component is protected by various commonly used groups, preferably tert-butyloxycarbonyl (Boc-) or benzyloxycarbonyl (Z-) protection.
α-Карбоксильную функцию глутаминовой кислоты защищают предпочтительно бензильной (Bzl-) группой.The α-carboxylic function of glutamic acid is preferably protected by a benzyl (Bzl-) group.
Карбоксильная группа аминокомпонента - гистидина в соединениях общей формулы (I) находится в виде метилового эфира или остается незамещенной.The carboxyl group of the amino component - histidine in the compounds of general formula (I) is in the form of a methyl ester or remains unsubstituted.
Однако полученные соединения обладают свойствами модуляторов системы цитохрома Р-420, метаболизма арахидоновой кислоты, гормонов коры надпочечников, активности макрофагов, а также антиоксидантным, противоастматическим, антигипоксическим, противовирусным, липидрегулирующим, антиметастатическим, сахаропонижающим, адаптогенным и другими видами терапевтического действия.However, the obtained compounds have the properties of modulators of the cytochrome P-420 system, metabolism of arachidonic acid, hormones of the adrenal cortex, macrophage activity, as well as antioxidant, anti-asthma, antihypoxic, antiviral, lipid-regulating, antimetastatic, sugar-lowering, adaptogenic and other types of therapeutic action.
Еще один способ получения пептидов общей формулы: X-Pro-Gly-Pro, где X=Phe-, Arg-, Lys-Pro-Arg-, Glu-His-Phe-, обладающих антикоагулянтно-фибринолитической, антитромбоцитарной и антитромботической активностью описан в патенте RU № 2286166. Синтез указанных пептидов осуществляли методами классической пептидной химии в растворе. Another way to obtain peptides of the general formula: X-Pro-Gly-Pro, where X=Phe-, Arg-, Lys-Pro-Arg-, Glu-His-Phe-, having anticoagulant-fibrinolytic, antiplatelet and antithrombotic activity is described in patent RU No. 2286166. The synthesis of these peptides was carried out by methods of classical peptide chemistry in solution.
Из патента RU № 2588143, опубл. 27.06.2016, известно изобретение, которое относится к пептидному соединению Ra-R1-R2-R3-R4-Rb (I) или Ra-R4-R3-R2-R1-Rb (II), где Ra представляет собой N-концевую первичную аминную группу аминокислоты R1 или R4, либо свободную, либо замещенную аминозащитной группой, Rb представляет собой гидроксильную группу C-концевой карбоксильной группы аминокислоты R1 или R4, либо свободную, либо замещенную гидроксизащитной группой, и R1-R2-R3-R4 или R4-R3-R2-R1 представляют собой HADD, KADD, DDAK, RADD, DDAR, KAED, DEAK, RAED, DEAR, HADE, EDAH, KADE, EDAK, RADE, EDAR, HAEE, EEAH, KAEE, EEAK, RAEE и EEAR. Данные пептидные соединения применяются для связывания с β-амилоидными пептидами и ингибирования полимеризации их в виде амилоидных бляшек, а также в качестве лекарственного средства или для подготовки или определения препаратов с целью лечения нейродегенеративных заболеваний, в частности болезни Альцгеймера. Причем, предпочтительно пептидное соединение, соответственно данному изобретению, выбрано из соединений с формулой (I) или (II), где R1-R2-R3-R4 или R4-R3-R2-R1, представлено одним из двух тетрапептидов HAEE и RADD. Наиболее предпочтительные пептидные соединения соответствуют формулам Ac-RADD-NH2 и Ac-HAEE-NH2, последний иначе обозначаемый также как Ac-His-Ala-Glu-Glu-NH2.From the patent RU No. 2588143, publ. 06/27/2016, an invention is known that relates to the peptide compound Ra-R1-R2-R3-R4-Rb (I) or Ra-R4-R3-R2-R1-Rb (II), where Ra is the N-terminal primary the amino group of the amino acid R1 or R4, either free or substituted with an amino protecting group, Rb is the hydroxyl group of the C-terminal carboxyl group of the amino acid R1 or R4, either free or substituted with a hydroxy protecting group, and R1-R2-R3-R4 or R4-R3 -R2-R1 are HADD, KADD, DDAK, RADD, DDAR, KAED, DEAK, RAED, DEAR, HADE, EDAH, KADE, EDAK, RADE, EDAR, HAEE, EEAH, KAEE, EEAK, RAEE and EEAR. These peptide compounds are useful for binding to β-amyloid peptides and inhibiting their polymerization as amyloid plaques, as well as as a drug or for the preparation or definition of drugs for the treatment of neurodegenerative diseases, in particular Alzheimer's disease. Moreover, preferably the peptide compound according to this invention is selected from compounds with formula (I) or (II), where R1-R2-R3-R4 or R4-R3-R2-R1 is represented by one of the two tetrapeptides HAEE and RADD. The most preferred peptide compounds correspond to the formulas Ac-RADD-NH 2 and Ac-HAEE-NH 2 , the latter also referred to as Ac-His-Ala-Glu-Glu-NH 2 .
В настоящее время пептид HAEE является одним из самых эффективных антиамилодных препаратов в мире (Goyal D., Shuaib S., Mann S., and Goyal B. Rationally Designed Peptides and Peptidomimetics as Inhibitors of Amyloid-β (Aβ) Aggregation: Potential Therapeutics of Alzheimer’s Disease. ACS Combinatorial Science. 2017, 19, 55-80.). Молекулярный механизм антиамилоидного действия тетрапептида HAEE хорошо установлен (Козин С.А., Барыкин Е.П., Митькевич В.А., Макаров А.А. Антиамилоидная терапия болезни Альцгеймера: современное состояние и перспективы. Биохимия. 2018, 83, 1331-1342). Было найдено, что синтетический пептид HAEE специфически связывается с металл-связывающим доменом 1-16 Aβ по участку 11-14, блокирует цинк-индуцированную димеризацию домена и замедляет агрегацию полноразмерного Aβ in vitro (Tsvetkov P.O., Cheglakov I.B., Ovsepyan A.A., Mediannikov O.Y., Morozov A.O., Telegin G.B., and Kozin S.A. Peripherally Applied Synthetic Tetrapeptides HAEE and RADD Slow Down the Development of Cerebral beta-Amyloidosis in AbetaPP/PS1 Transgenic Mice. J Alzheimers Dis. 2015, 46, 849-853). Результаты другого исследования позволяют предположить что тетрапептид Ac-HAEE-NH2 является потенциальным терапевтическим средством для лечения α4β2 nAChR-зависимой холинергической дисфункции при болезни Альцгеймера (Barykin E. P., Garifulina A. I., Tolstova A. P. et al. Tetrapeptide Ac-HAEE-NH2 Protects α4β2 nAChRfrom Inhibition by Aβ. Int. J. Mol. Sci. 2020, 21, 6272).Currently, the HAEE peptide is one of the most effective anti-amyloid drugs in the world (Goyal D., Shuaib S., Mann S., and Goyal B. Rationally Designed Peptides and Peptidomimetics as Inhibitors of Amyloid-β (Aβ) Aggregation: Potential Therapeutics of Alzheimer's Disease ACS Combinatorial Science 2017, 19, 55-80. The molecular mechanism of the anti-amyloid action of the HAEE tetrapeptide is well established (Kozin S.A., Barykin E.P., Mitkevich V.A., Makarov A.A. Anti-amyloid therapy for Alzheimer's disease: current state and prospects. Biochemistry. 2018, 83, 1331- 1342). It was found that the synthetic HAEE peptide specifically binds to the Aβ metal-binding domain 1-16 at region 11-14, blocks zinc-induced domain dimerization, and slows down the aggregation of the full-length Aβ in vitro (Tsvetkov PO, Cheglakov IB, Ovsepyan AA, Mediannikov OY, Morozov AO, Telegin GB, and Kozin SA Peripherally Applied Synthetic Tetrapeptides HAEE and RADD Slow Down the Development of Cerebral beta-Amyloidosis in AbetaPP/PS1 Transgenic Mice J Alzheimers Dis 2015, 46, 849-853). The results of another study suggest that tetrapeptide Ac-HAEE-NH 2 is a potential therapeutic agent for the treatment of α4β2 nAChR-dependent cholinergic dysfunction in Alzheimer's disease (Barykin EP, Garifulina AI, Tolstova AP et al. Tetrapeptide Ac-HAEE-NH2 Protects α4β2 nAChR from Inhibition by Aβ. Int. J. Mol. Sci. 2020, 21, 6272).
В патенте RU 2709539, опубл. 18.12.2019, заявлена фармацевтическая композиция, обеспечивающая эффективную доставку тетрапептида Ac-HAEE-NH2 используемого в качестве лекарственной субстанции, через гематоэнцефалический барьер (ГЭБ) для лечения нейродегенеративных заболеваний, включая болезнь Альцгеймера. Авторами изобретения показано, что указанная композиция позволяет значительно улучшить фармакокинетические характеристики и увеличить биодоступность лекарственной субстанции HAEE, что может значительно усилить терапевтический эффект от ее применения за счёт предупреждения образования амилоидных бляшек путем полимеризации или агрегации β-амилоидных пептидов.In the patent RU 2709539, publ. On December 18, 2019, a pharmaceutical composition is claimed that provides effective delivery of the tetrapeptide Ac-HAEE-NH 2 used as a drug substance through the blood-brain barrier (BBB) for the treatment of neurodegenerative diseases, including Alzheimer's disease. The authors of the invention showed that this composition can significantly improve the pharmacokinetic characteristics and increase the bioavailability of the HAEE drug substance, which can significantly enhance the therapeutic effect of its use by preventing the formation of amyloid plaques by polymerization or aggregation of β-amyloid peptides.
Однако способ получения тетрапептида Ac-His-Ala-Glu-Glu-NH2 в научно-технической и патентной литературе не описан. However, the method for obtaining tetrapeptide Ac-His-Ala-Glu-Glu-NH 2 is not described in the scientific and technical and patent literature.
Задачей настоящего изобретения является разработка способа получения тетрапептида Ac-His-Ala-Glu-Glu-NH2, пригодного для дальнейшего использования в фармацевтическом производстве.The objective of the present invention is to develop a method for obtaining tetrapeptide Ac-His-Ala-Glu-Glu-NH 2 suitable for further use in pharmaceutical production.
Технический результат - реализация поставленной задачи и получение тетрапептида Ac-His-Ala-Glu-Glu-NH2 высокой чистоты за счет использования предложенного способа. EFFECT: implementation of the set task and obtaining high purity Ac-His-Ala-Glu-Glu-NH 2 tetrapeptide by using the proposed method.
Задача решается путем синтеза тетрапептида Ac-His-Ala-Glu-Glu-NH2 методом пептидного синтеза в растворе последовательным наращиванием цепи с С-конца молекулы с использованием стратегии максимальной защиты функциональных групп. The problem is solved by synthesizing the tetrapeptide Ac-His-Ala-Glu-Glu-NH 2 by peptide synthesis in solution by successive chain extension from the C-terminus of the molecule using the strategy of maximum protection of functional groups.
Тетрапептид Ac-His-Ala-Glu-Glu-NH2 получают, исходя из амида гамма-бензилового эфира глутаминовой кислоты с помощью метода активированных эфиров и карбодиимидного метода, используя трет-бутилоксикарбонил- и тритилзащищённые аминокислоты, деблокирование защитных групп проводят растворами хлористого водорода в диоксане, трифторуксусной кислоты в хлористом метилене, 90%-ной уксусной кислотой, окончательное деблокирование - гидрированием на палладиевом катализаторе. Tetrapeptide Ac-His-Ala-Glu-Glu-NH 2 is obtained starting from the amide of gamma-benzyl ester of glutamic acid using the method of activated esters and the carbodiimide method, using tert-butyloxycarbonyl- and trityl-protected amino acids, the deblocking of the protective groups is carried out with solutions of hydrogen chloride in dioxane, trifluoroacetic acid in methylene chloride, 90% acetic acid, final release - hydrogenation on a palladium catalyst.
Сущность изобретения заключается в том, что тетрапептид Ac-His-Ala-Glu-Glu-NH2 получают в результате 10-стадийного синтеза в растворе, включающем следующие последовательные стадии многоступенчатого синтеза пептида:The essence of the invention lies in the fact that the tetrapeptide Ac-His-Ala-Glu-Glu-NH 2 is obtained as a result of a 10-stage synthesis in a solution, including the following successive stages of a multi-stage synthesis of the peptide:
1) получение Boc-Glu(OBzl)-OPfp из Boc-Glu(OBzl)-OH с использованием дициклогексилкарбодиимида в качестве конденсирующего агента;1) obtaining Boc-Glu(OBzl)-OPfp from Boc-Glu(OBzl)-OH using dicyclohexylcarbodiimide as a condensing agent;
2) амминолиз водным раствором аммиака с получением Boc-Glu(OBzl)-NH2;2) amminolysis with an aqueous solution of ammonia to obtain Boc-Glu(OBzl)-NH 2 ;
3) удаление третбутилкарбоксильной группы хлористым водородом в диоксане;3) removal of the tert-butylcarboxylic group with hydrogen chloride in dioxane;
4) получение дипептида Boc-Glu(OBzl)-Glu(OBzl)-NH2 конденсацией H-Glu(OBzl)NH2 • HCl с Boc-Glu(OBzl)-OH с использованием дициклогексилкарбодиимида;4) obtaining dipeptide Boc-Glu(OBzl)-Glu(OBzl)-NH 2 by condensation of H-Glu(OBzl)NH 2 • HCl with Boc-Glu(OBzl)-OH using dicyclohexylcarbodiimide;
5) удаление третбутилкарбоксильной группы раствором трифторуксусной кислоты в хлористом метилене;5) removal of the tert-butylcarboxylic group with a solution of trifluoroacetic acid in methylene chloride;
6) получение Boc-Ala-Glu(OBzl)-Glu(OBzl)-NH2 конденсацией с Boc-Ala-OH с использованием дициклогексилкарбодиимида;6) obtaining Boc-Ala-Glu(OBzl)-Glu(OBzl)-NH 2 by condensation with Boc-Ala-OH using dicyclohexylcarbodiimide;
7) удаление третбутилкарбоксильной группы хлористым водородом в диоксане;7) removal of the tert-butylcarboxylic group with hydrogen chloride in dioxane;
8) получение Ac-His(Trt)-Ala-Glu(OBzl)-Glu(OBzl)-NH2 конденсацией с Ac-His(Trt)-OH, с использованием дициклогексилкарбодиимида;8) obtaining Ac-His(Trt)-Ala-Glu(OBzl)-Glu(OBzl)-NH 2 by condensation with Ac-His(Trt)-OH using dicyclohexylcarbodiimide;
9) удаление тритильной защиты гистидина 90%-ным водным раствором уксусной кислоты, с последующей очисткой полученного продукта реакции с помощью препаративной высокоэффективной хроматографии;9) removal of the trityl protection of histidine with 90% aqueous acetic acid, followed by purification of the resulting reaction product using preparative high performance chromatography;
10) удаление бензильной защиты с карбоксильных групп глутаминовых кислот гидрированием на палладиевом катализаторе, приводящее к целевому тетрапептиду Ac-His-Ala-Glu-Glu-NH2.10) removal of benzyl protection from carboxyl groups of glutamic acids by hydrogenation on a palladium catalyst, resulting in the target tetrapeptide Ac-His-Ala-Glu-Glu-NH 2 .
Структуру и чистоту полупродуктов и целевого продукта подтверждают данными ЯМР 1H спектроскопии, масс-спектрометрии и высокоэффективной жидкостной хроматографии.The structure and purity of the intermediates and the target product is confirmed by 1H NMR spectroscopy, mass spectrometry and high performance liquid chromatography.
Используемые в описании изобретения сокращения обозначают:The abbreviations used in the description of the invention mean:
Ala - аланин;Ala - alanine;
Glu - глутаминовая кислота;Glu - glutamic acid;
His - гистамин;His - histamine;
AcOH - уксусная кислота;AcOH - acetic acid;
Ac - ацетил;Ac - acetyl;
Trt - тритил;Trt - trityl;
Вос - трет-бутилоксикарбонильная группа;Boc - tert-butyloxycarbonyl group;
Bzl - бензил;Bzl - benzyl;
HOBt - 1-N-гидроксибензотриазол;HOBt - 1-N-hydroxybenzotriazole;
DCC, - N,N′-дициклогексилкарбодиимид;DCC, N,N'-dicyclohexylcarbodiimide;
NMM - N-метилморфолин;NMM - N-methylmorpholine;
PfpOH - пентафторфенол;PfpOH - pentafluorophenol;
TFA - трифторуксусная кислота;TFA - trifluoroacetic acid;
DMF - диметилформамид.DMF - dimethylformamide.
Химическая схема получения Ac-His-Ala-Glu-Glu-NH2 Chemical scheme for obtaining Ac-His-Ala-Glu-Glu-NH 2
Пример синтеза тетрапептида Ac-His-Ala-Glu-Glu-NH2 An example of the synthesis of the tetrapeptide Ac-His-Ala-Glu-Glu-NH 2
Стадия 1. Получение Boc-Glu(OBzl)-OPfp (соединение 2) из Boc-Glu(OBzl)-OH (соединение 1) с использованием дициклогексилкарбодиимида в качестве конденсирующего агента.Step 1: Preparation of Boc-Glu(OBzl)-OPfp (compound 2) from Boc-Glu(OBzl)-OH (compound 1) using dicyclohexylcarbodiimide as a condensing agent.
Растворяют 87.7 г (0.26 моль) Boc-Glu(OBzl)-OH (соединение 1) и 51.5 г пентафторфенола (0.28 моль) в 750 мл этилацетата при комнатной температуре. Полученный раствор охлаждают до 5°C и при этой температуре прикапывают раствор 57.7 г дициклогексилкарбодиимида (0.28 моль) в 150 мл этилацетата. Реакционную массу отогревают до комнатной температуры и перемешивают 3 ч до окончания реакции. Выпавший осадок дициклогексилмочевины отфильтровывают, а этилацетат отгоняют в вакууме на роторном испарителе досуха при 40°C и давлении 10-12 мм рт.ст. Остаток затирают с 300 мл гексана, фильтруют и сушат на воздухе до постоянного веса. Получают 124.2 г (94.9%) белого мелкокристаллического соединения 2. Содержание основного вещества 97.2% (ВЭЖХ). ESMS, m/z (I%): 526.13 [M+Na]+ (100), 1029.26 [2M+Na]+ (7.3).Dissolve 87.7 g (0.26 mol) of Boc-Glu(OBzl)-OH (compound 1) and 51.5 g of pentafluorophenol (0.28 mol) in 750 ml of ethyl acetate at room temperature. The resulting solution is cooled to 5°C and at this temperature a solution of 57.7 g of dicyclohexylcarbodiimide (0.28 mol) in 150 ml of ethyl acetate is added dropwise. The reaction mass is warmed to room temperature and stirred for 3 h until the end of the reaction. The precipitation of dicyclohexylurea is filtered off, and ethyl acetate is distilled off in vacuum on a rotary evaporator to dryness at 40°C and a pressure of 10-12 mm Hg. The residue is triturated with 300 ml of hexane, filtered and air dried to constant weight. 124.2 g (94.9%) of a white, finely crystalline compound 2 are obtained. The content of the main substance is 97.2% (HPLC). ESMS, m/z (I%): 526.13 [M+Na]+ (100), 1029.26 [2M+Na]+ (7.3).
Стадия 2. Амминолиз водным раствором аммиака с получением Boc-Glu(OBzl)-NH2 (соединение 3).Step 2: Amminolysis with aqueous ammonia to give Boc-Glu(OBzl)-NH 2 (compound 3).
Растворяют 100.7 г (0.20 моль) Boc-Glu(OBzl)-OPfp (соединение 2, полученное на стадии 1) в 750 мл диоксана при комнатной температуре. Полученный раствор охлаждают до 10°C и при этой температуре приливают 30 мл водного 25% раствора аммиака. Реакционную массу перемешивают 2 ч при комнатной температуре до окончания реакции. Диоксан отгоняют в вакууме на роторном испарителе при 40°C, и давлении10-12 мм рт.ст. К остатку добавляют 1 л диэтилового эфира и полученный раствор последовательно промывают: 2×125 мл 5% раствором бикарбоната натрия, 2×125 мл воды и 2×125 мл насыщенным водным раствором хлористого натрия. Органическую фазу сушат сульфатом натрия, после чего упаривают в вакууме досуха при 40°C и давлении 10-12 мм рт.ст. Получают 61.6 г (91.5%) белого кристаллического соединения 3. Содержание основного вещества Boc-Glu(OBzl)-NH2 93.1% (ВЭЖХ). Вещество содержит примерно 5-7% пентафторфенола, который отделяется на следующей стадии. ESMS, m/z (I%): 359.16 [M+Na]+ (26.7), 695.33 [2M+Na]+ (100).Dissolve 100.7 g (0.20 mol) of Boc-Glu(OBzl)-OPfp (compound 2 obtained in step 1) in 750 ml of dioxane at room temperature. The resulting solution is cooled to 10°C and at this temperature poured 30 ml of an aqueous 25% ammonia solution. The reaction mass is stirred for 2 h at room temperature until the end of the reaction. Dioxane is distilled off in a vacuum on a rotary evaporator at 40°C and a pressure of 10-12 mm Hg. 1 L of diethyl ether was added to the residue and the resulting solution was washed successively with 2×125 ml of 5% sodium bicarbonate solution, 2×125 ml of water and 2×125 ml of saturated aqueous sodium chloride solution. The organic phase is dried with sodium sulfate and then evaporated to dryness in vacuo at 40°C and a pressure of 10-12 mmHg. 61.6 g (91.5%) of white crystalline compound 3 are obtained. The content of the main substance Boc-Glu(OBzl)-NH2 93.1% (HPLC). The substance contains approximately 5-7% pentafluorophenol, which is separated in the next step. ESMS, m/z (I%): 359.16 [M+Na]+ (26.7), 695.33 [2M+Na]+ (100).
Стадия 3. Удаление трет-бутилкарбонильной группы хлористым водородом в диоксане с получением H-Glu(OBzl)-NH2 • HCl (соединение 4). Step 3: Removal of the tert-butylcarbonyl group with hydrogen chloride in dioxane to give H-Glu(OBzl)-NH 2 • HCl (compound 4).
Растворяют 60.0 г (0.18 моль) Boc-Glu(OBzl)-NH2 (соединение 3, полученное на стадии 2) в 150 мл диоксана при комнатной температуре. К полученному раствору приливают 300 мл 20% раствора хлористого водорода в диоксане. Перемешивают реакционную массу в течение 3 часов. Добавляют 500 мл диэтилового эфира для более полного выпадения продукта реакции. Выпавшее соединение 4 отфильтровывают, промывают на фильтре 150 мл диэтилового эфира и сушат на воздухе до постоянного веса. Получают 40.7 г (82.9%) белого кристаллического соединения 4. Содержание основного вещества H-Glu(OBzl)-NH2⋅HCl 98.1% (ВЭЖХ). ESMS, m/z (I%): 237.12 [M+H]+ (20.2), 259.11 [M+Na]+ (28.5), 473.24 [2M+H]+ (81.9), 495.22 [2M+Na]+ (100). Спектр ЯМР 1H (d6-DMSO, δ, м.д.): 2.00-2.10 (m, 2H), 2.51-2.56 (m, 2H), 3.79 (t, J=6.14 Hz, 2H), 5.10 (s, 1H), 7.29-7.42 (m, 5H).Dissolve 60.0 g (0.18 mol) of Boc-Glu(OBzl)-NH 2 (compound 3 obtained in step 2) in 150 ml of dioxane at room temperature. To the resulting solution is added 300 ml of a 20% solution of hydrogen chloride in dioxane. Stir the reaction mass for 3 hours. Add 500 ml of diethyl ether for a more complete precipitation of the reaction product. The precipitated compound 4 was filtered off, washed on the filter with 150 ml of diethyl ether, and dried in air to constant weight. 40.7 g (82.9%) of a white crystalline compound 4 is obtained. The content of the main substance H-Glu(OBzl)-NH 2 ⋅HCl 98.1% (HPLC). ESMS, m/z (I%): 237.12 [M+H]+ (20.2), 259.11 [M+Na]+ (28.5), 473.24 [2M+H]+ (81.9), 495.22 [2M+Na]+ (one hundred). 1H NMR spectrum (d6-DMSO, δ, ppm): 2.00-2.10 (m, 2H), 2.51-2.56 (m, 2H), 3.79 (t, J=6.14 Hz, 2H), 5.10 (s, 1H), 7.29-7.42 (m, 5H).
Стадия 4. Получение Boc-Glu(OBzl)-Glu(OBzl)-NH2 (соединение 5) конденсацией H-Glu(OBzl)NH2⋅HCl (сооединение 4) с Boc-Glu(OBzl)-OH (соединение 1) с использованием дициклогексилкарбодиимида.Step 4 Preparation of Boc-Glu(OBzl)-Glu(OBzl)-NH 2 (compound 5) by condensation of H-Glu(OBzl)NH 2 ⋅HCl (compound 4) with Boc-Glu(OBzl)-OH (compound 1) using dicyclohexylcarbodiimide.
Растворяют 14.30 г (42.4 ммоль) Boc-Glu(OBzl)-OH (соединение 1), 10.91 г (40 ммоль) H-Glu(OBzl)NH2⋅HCl (сооединение 4), 6.13 г (40 ммоль) моногидрата 1-N-гидроксибензтриазола и 4.45 г (44 ммоль) N-метилморфолина в 100 мл диметилформамида при комнатной температуре. Реакционную массу охлаждают до 5°C и при этой температуре прикапывают раствор 9.08 г дициклогексилкарбодиимида (44 ммоль) в 20 мл диметилформамида. Реакционную массу перемешивают 12 часов при комнатной температуре до окончания реакции (контроль по ВЭЖХ). Выпавший осадок дициклогексилмочевины отфильтровывают, а фильтрат разбавляют 500 мл этилацетата и последовательно промывают: 2×100 мл 5%-ным раствором лимонной кислоты, 2×50 мл воды, 2×50 мл 5%-ным раствором бикарбоната натрия, 50 мл воды и 50 мл насыщенного водного раствора хлористого натрия. Органическую фазу упаривают в вакууме досуха при 40°C, и давлении 10-12 мм рт.ст. Получают 21.27 г (97.2%) белого порошка соединения 5. Содержание основного вещества Boc-Glu(OBzl)-Glu(OBzl)-NH2 97.6% (ВЭЖХ). ESMS, m/z (I%): 556.27 [M+H]+ (100), 578.25 [M+Na]+ (4.3), 1133.51 [2M+Na]+ (3.9). Спектр ЯМР 1H (CDCl3, δ, м.д.): 1.43 (s, 9H), 1.89-2.04 (m, 2H), 2.08-2.26 (m, 2H), 2.40-2.61 (m, 4H), 4.06-4.17 (m, 1H), 4.48 (td, J1=8.13 Hz, J2=5.15 Hz, 1H), 5.12 (s, 4H), 5.43 (br d, J=7.13 Hz, 1H), 5.51-5.75 (m, 1H), 6.60 (br s, 1H), 7.23 (br d, J=7.93 Hz, 1H), 7.28-7.43 (m, 10H).Dissolve 14.30 g (42.4 mmol) Boc-Glu(OBzl)-OH (compound 1), 10.91 g (40 mmol) H-Glu(OBzl)NH 2 ⋅HCl (compound 4), 6.13 g (40 mmol) monohydrate 1- N-hydroxybenztriazole and 4.45 g (44 mmol) of N-methylmorpholine in 100 ml of dimethylformamide at room temperature. The reaction mass is cooled to 5°C and at this temperature a solution of 9.08 g of dicyclohexylcarbodiimide (44 mmol) in 20 ml of dimethylformamide is added dropwise. The reaction mass is stirred for 12 hours at room temperature until the end of the reaction (control by HPLC). The precipitated dicyclohexylurea is filtered off, and the filtrate is diluted with 500 ml of ethyl acetate and washed successively: 2×100 ml of 5% citric acid solution, 2×50 ml of water, 2×50 ml of 5% sodium bicarbonate solution, 50 ml of water and 50 ml of saturated aqueous sodium chloride solution. The organic phase is evaporated in vacuum to dryness at 40°C and a pressure of 10-12 mm Hg. 21.27 g (97.2%) of a white powder of compound 5 are obtained. Content of the main substance Boc-Glu(OBzl)-Glu(OBzl)-NH2 97.6% (HPLC). ESMS, m/z (I%): 556.27 [M+H]+ (100), 578.25 [M+Na]+ (4.3), 1133.51 [2M+Na]+ (3.9). 1H NMR spectrum (CDCl3, δ, ppm): 1.43 (s, 9H), 1.89-2.04 (m, 2H), 2.08-2.26 (m, 2H), 2.40-2.61 (m, 4H), 4.06- 4.17 (m, 1H), 4.48 (td, J1=8.13 Hz, J2=5.15 Hz, 1H), 5.12 (s, 4H), 5.43 (br d, J=7.13 Hz, 1H), 5.51-5.75 (m, 1H), 6.60 (br s, 1H), 7.23 (br d, J=7.93 Hz, 1H), 7.28-7.43 (m, 10H).
Стадия 5. Удаление трет-бутилкарбонильной группы раствором трифторуксусной кислоты в хлористом метилене с получением H-Glu(OBzl)-Glu(OBzl)-NH2⋅TFA (соединение 6).Step 5. Removal of the tert-butylcarbonyl group with a solution of trifluoroacetic acid in methylene chloride to give H-Glu(OBzl)-Glu(OBzl)-NH 2 ⋅TFA (compound 6).
Суспендируют 20.0 г (36.0 ммоль) Boc-Glu(OBzl)-Glu(OBzl)-NH2 (соединение 5 полученное на стадии 4) в 75 мл хлористого метилена. К полученной суспензии приливают 45 мл трифторуксусной кислоты и перемешивают реакционную массу 1 час при комнатной температуре до окончания реакции (контроль по ВЭЖХ). Растворители удаляют в вакууме при 40°C и 10-12 мм рт.ст, а маслообразный остаток растирают с диэтиловым эфиром: 3×100 мл и сушат в вакууме. Получают 19.62 г (95.7%) маслообразного соединения 6. Содержание основного вещества 96.2% (ВЭЖХ). ESMS, m/z (I%): 456.21 [M+H]+ (100).Suspend 20.0 g (36.0 mmol) of Boc-Glu(OBzl)-Glu(OBzl)-NH 2 (compound 5 obtained in step 4) in 75 ml of methylene chloride. To the resulting suspension is added 45 ml of trifluoroacetic acid and the reaction mass is stirred for 1 hour at room temperature until the end of the reaction (control by HPLC). The solvents are removed in vacuo at 40°C and 10-12 mm Hg, and the oily residue is triturated with diethyl ether: 3×100 ml and dried in vacuo. 19.62 g (95.7%) of an oily compound 6 are obtained. The content of the main substance is 96.2% (HPLC). ESMS, m/z (I%): 456.21 [M+H]+ (100).
Стадия 6. Получение Boc-Ala-Glu(OBzl)-Glu(OBzl)-NH2 (соединение 8) конденсацией H-Glu(OBzl)-Glu(OBzl)-NH2⋅TFA (соединение 6) с Boc-Ala-OH (соединение 7) с использованием дициклогексилкарбодиимида.Step 6. Preparation of Boc-Ala-Glu(OBzl)-Glu(OBzl)-NH 2 (compound 8) by condensation of H-Glu(OBzl)-Glu(OBzl)-NH 2 ⋅TFA (compound 6) with Boc-Ala- OH (compound 7) using dicyclohexylcarbodiimide.
Растворяют 11.00 г (19.3 ммоль) H-Glu(OBzl)-Glu(OBzl)-NH2⋅TFA (соединение 6, полученное на стадии 5) 4.75 г (25.1 ммоль) Boc-Ala-OH (соединение 7), 3.25 г (21.2 ммоль) моногидрата N-гидроксибензтриазола и 2.33 г (23 ммоль) N-метилморфолина в 50 мл диметилформамида при комнатной температуре. Реакционную массу охлаждают до 0°C и при этой температуре прикапывают раствор 4.97 г (24.1 ммоль) дициклогексилкарбодиимида в 10 мл диметилформамида. Отогревают до комнатной температуры и перемешивают 12 часов до окончания реакции (контроль по ВЭЖХ). Выпавший осадок дициклогексилмочевины отфильтровывают, фильтрат разбавляют 200 мл этилацетата и последовательно промывают: 2×50 мл 5%-ным раствором лимонной кислоты, 2×25 мл воды, 2×25 мл 5%-ным раствором бикарбоната натрия, 25 мл воды и 25 мл насыщенного водного раствора хлористого натрия. Органическую фазу упаривают в вакууме досуха при 40°C и давлении 10-12 мм рт.ст. Остаток затирают в 50 мл серного эфира, фильтруют и сушат на воздухе до постоянного веса. Получают 9.13 г (75.5%) белого порошка вещества 8. Содержание основного вещества 96.8% (ВЭЖХ). ESMS, m/z (I%): 627.30 [M+H]+ (100). Спектр ЯМР 1H (CDCl3, δ, м.д.): 1.28 (d, J=7.13 Hz, 3H), 1.40 (s, 9H), 1.99-2.08 (m, 2H), 2.13-2.20 (m, 1H), 2.26-2.35 (m, 1H), 2.43-2.57 (m, 4H), 4.04-4.13 (m, 1H), 4.33-4.42 (m, 1H), 4.51 (td, J1=8.42 Hz, J2=4.95 Hz, 1H), 5.07-5.14 (m, 4H), 5.19 (br d, J=4.76 Hz, 1H), 5.66 (br s, 1H), 6.88 (br s, 1H), 7.30-7.36 (m, 10H), 7.52 (br d, J=8.32 Hz, 1H), 7.75 (br s, 1H).Dissolve 11.00 g (19.3 mmol) H-Glu(OBzl)-Glu(OBzl)-NH 2 ⋅TFA (compound 6 obtained in step 5) 4.75 g (25.1 mmol) Boc-Ala-OH (compound 7), 3.25 g (21.2 mmol) N-hydroxybenztriazole monohydrate and 2.33 g (23 mmol) N-methylmorpholine in 50 ml dimethylformamide at room temperature. The reaction mass is cooled to 0°C and at this temperature a solution of 4.97 g (24.1 mmol) of dicyclohexylcarbodiimide in 10 ml of dimethylformamide is added dropwise. Warmed to room temperature and stirred for 12 hours until the end of the reaction (control by HPLC). The precipitation of dicyclohexylurea is filtered off, the filtrate is diluted with 200 ml of ethyl acetate and washed successively: 2×50 ml of 5% citric acid solution, 2×25 ml of water, 2×25 ml of 5% sodium bicarbonate solution, 25 ml of water and 25 ml saturated aqueous sodium chloride solution. The organic phase is evaporated in vacuum to dryness at 40°C and a pressure of 10-12 mm Hg. The residue is triturated in 50 ml of sulfuric ether, filtered and dried in air to constant weight. 9.13 g (75.5%) of a white powder of substance 8 are obtained. The content of the main substance is 96.8% (HPLC). ESMS, m/z (I%): 627.30 [M+H]+ (100). 1H NMR spectrum (CDCl 3 , δ, ppm): 1.28 (d, J=7.13 Hz, 3H), 1.40 (s, 9H), 1.99-2.08 (m, 2H), 2.13-2.20 (m, 1H ), 2.26-2.35 (m, 1H), 2.43-2.57 (m, 4H), 4.04-4.13 (m, 1H), 4.33-4.42 (m, 1H), 4.51 (td, J1=8.42 Hz, J2=4.95 Hz, 1H), 5.07-5.14 (m, 4H), 5.19 (br d, J=4.76 Hz, 1H), 5.66 (br s, 1H), 6.88 (br s, 1H), 7.30-7.36 (m, 10H ), 7.52 (br d, J=8.32 Hz, 1H), 7.75 (br s, 1H).
Стадия 7. Удаление трет-бутилкарбонильной группы хлористым водородом в диоксане с получением H-Ala-Glu(OBzl)-Glu(OBzl)-NH2⋅HCl (соединение 9). Step 7. Removal of the tert-butylcarbonyl group with hydrogen chloride in dioxane to give H-Ala-Glu(OBzl)-Glu(OBzl)-NH 2 ⋅HCl (compound 9).
Суспендируют 11.0 г (17.55 ммоль) Boc-Ala-Glu(OBzl)-Glu(OBzl)-NH2 (соединение 8, полученное на стадии 6) в 20 мл диоксана при комнатной температуре. При перемешивании нагревают полученную суспензию до 50°C и после полного растворения соединения 8 раствор охлаждают до комнатной температуры. К полученному раствору приливают 30 мл 20%-ного раствора хлористого водорода в диоксане. Перемешивают реакционную массу 2 ч до окончания реакции (контроль по ВЭЖХ), после чего приливают 30 мл серного эфира. Декантируют жидкую фазу с выпавшего масла и последовательно затирают его с 30 мл серного эфира, 30 мл этилацетата и затем с 30 мл серного эфира. Полученные кристаллы отфильтровывают, промывают на фильтре 20 мл серного эфира и сушат на воздухе до постоянного веса. Получают 9.50 г (96.1%) белого порошка соединения 9. Содержание основного вещества 94.2% (ВЭЖХ). ESMS, m/z (I%): 527.25 [M+H]+ (100), 549.23 [M+Na]+ (1.8), 1053.49 [2M+H]+ (6.9). Спектр ЯМР 1H (d6-DMSO, δ, м.д.): 1.37 (d, J=6.89 Hz, 3H), 1.79-1.93 (m, 2H), 1.97-2.08 (m, 2H), 2.38 (br t, J=7.88 Hz, 2H), 2.41-2.49 (m, 2H), 3.91 (q, J=6.56 Hz, 1H), 4.21-4.28 (m, 1H), 4.31-4.39 (m, 1H), 5.08 (s, 2H), 5.09 (s, 2H), 6.99 (br s, 1H), 7.29-7.38 (m, 10H), 8.04 (br d, J=7.55 Hz, 1H), 8.11-8.54 (m, 2H), 8.70 (br d, J=7.55 Hz, 1H).Suspend 11.0 g (17.55 mmol) of Boc-Ala-Glu(OBzl)-Glu(OBzl)-NH 2 (compound 8 obtained in step 6) in 20 ml of dioxane at room temperature. With stirring, the resulting suspension is heated to 50°C, and after complete dissolution of compound 8, the solution is cooled to room temperature. To the resulting solution is added 30 ml of a 20% solution of hydrogen chloride in dioxane. The reaction mass is stirred for 2 h until the end of the reaction (control by HPLC), after which 30 ml of sulfuric ether are added. Decant the liquid phase from the precipitated oil and rub it successively with 30 ml of sulfuric ether, 30 ml of ethyl acetate and then with 30 ml of sulfuric ether. The resulting crystals are filtered off, washed on the filter with 20 ml of sulfuric ether, and dried in air to constant weight. 9.50 g (96.1%) of a white powder of compound 9 are obtained. The content of the main substance is 94.2% (HPLC). ESMS, m/z (I%): 527.25 [M+H]+ (100), 549.23 [M+Na]+ (1.8), 1053.49 [2M+H]+ (6.9). 1H NMR spectrum (d6-DMSO, δ, ppm): 1.37 (d, J=6.89 Hz, 3H), 1.79-1.93 (m, 2H), 1.97-2.08 (m, 2H), 2.38 (br t , J=7.88 Hz, 2H), 2.41-2.49 (m, 2H), 3.91 (q, J=6.56 Hz, 1H), 4.21-4.28 (m, 1H), 4.31-4.39 (m, 1H), 5.08 ( s, 2H), 5.09 (s, 2H), 6.99 (br s, 1H), 7.29-7.38 (m, 10H), 8.04 (br d, J=7.55 Hz, 1H), 8.11-8.54 (m, 2H) , 8.70 (br d, J=7.55 Hz, 1H).
Стадия 8. Получение Ac-His(Trt)-Ala-Glu(OBzl)-Glu(OBzl)-NH2 (соединение 12) конденсацией соединения 9 с Ac-His(Trt)-OH (соединение 11) с использованием дициклогексилкарбодиимида включает две стадии: Stage 8. Preparation of Ac-His(Trt)-Ala-Glu(OBzl)-Glu(OBzl)-NH 2 (compound 12) by condensation of compound 9 with Ac-His(Trt)-OH (compound 11) using dicyclohexylcarbodiimide involves two stages:
а) получение Ac-His(Trt)-OH (соединение 11).a) obtaining Ac-His(Trt)-OH (compound 11).
Суспендируют 19.72 г (0.10 моль) Ac-His-OH (соединение 10) в 75 мл диметилформамида. Полученную суспензию охлаждают до 5°C и при этой температуре прикапывают 16.58 г (0.11 моль) триэтилхлорсилана. Реакционную массу отогревают до комнатной температуры и перемешивают до полного растворения в течение 30-40 мин. К полученному раствору присыпают 30.67 г (0.11 моль) тритилхлорида и при перемешивании прикапывают 11.13 г (0.11 моль) N-метилморфолина, поддерживая температуру не выше 45°C. Перемешивают реакционную массу 12 часов до окончания реакции (контроль по ВЭЖХ) и выливают её в 300 мл 5%-ного водного раствора лимонной кислоты. Выпавшие кристаллы последовательно промывают на фильтре: 2×100 мл гексана, 2×200 мл воды, 2×100 мл смеси гексан/диэтиловый эфир в соотношении 1:1 и сушат на воздухе до постоянного веса. Получают 40.60 г (92.3%) белого кристаллического вещества соединения 11. Содержание основного вещества 95.4% (ВЭЖХ). Полученый продукт содержит ~ 4-5% трифенилкарбинола, который не мешает дальнейшим реакциям и отделяется на следующей стадии. ESMS, m/z (I%): 440.20 [M+H]+ (100).Suspend 19.72 g (0.10 mol) of Ac-His-OH (compound 10) in 75 ml of dimethylformamide. The resulting suspension is cooled to 5°C and 16.58 g (0.11 mol) of triethylchlorosilane are added dropwise at this temperature. The reaction mass is warmed to room temperature and stirred until complete dissolution for 30-40 minutes. 30.67 g (0.11 mol) of trityl chloride are sprinkled to the resulting solution, and 11.13 g (0.11 mol) of N-methylmorpholine are added dropwise with stirring, maintaining the temperature not higher than 45°C. Stir the reaction mass for 12 hours until the end of the reaction (control by HPLC) and pour it into 300 ml of a 5% aqueous solution of citric acid. The precipitated crystals are successively washed on the filter with 2×100 ml of hexane, 2×200 ml of water, 2×100 ml of a mixture of hexane/diethyl ether in a ratio of 1:1 and dried in air to constant weight. 40.60 g (92.3%) of a white crystalline substance of compound 11 are obtained. The content of the main substance is 95.4% (HPLC). The resulting product contains ~ 4-5% triphenylcarbinol, which does not interfere with further reactions and is separated in the next stage. ESMS, m/z (I%): 440.20 [M+H]+ (100).
б) Конденсация Ac-His(Trt)-OH (соединение 11) с H-Ala-Glu(OBzl)-Glu(OBzl)-NH2⋅HCl (соединение 9)b) Condensation of Ac-His(Trt)-OH (compound 11) with H-Ala-Glu(OBzl)-Glu(OBzl)-NH 2 ⋅HCl (compound 9)
Растворяют 6.07 г (13.8 ммоль) Ac-His(Trt)-OH (соединение 11, полученное на стадии 8 а), 6.76 г (12.0 ммоль) H-Ala-Glu(OBzl)-Glu(OBzl)-NH2⋅HCl (соединение 9, полученное на стадии 7), 2.39 г (15.6 ммоль) моногидрата N-гидроксибензтриазола и 1.49 г (14.8 ммоль) N-метилморфолина в 280 мл диметилформамида при комнатной температуре. Реакционную массу охлаждают до 0°C и прикапывают раствор 2.97 г (14.4 ммоль) дициклогексилкарбодиимида в 20 мл диметилформамида. После окончания прибавления перемешивают реакционную массу 1 час при 0°C, отогревают до комнатной температуры, перемешивают ещё 12 часов до окончания реакции (контроль по ВЭЖХ) и выливают в 800 мл 5%-ного раствора бикарбоната натрия. Выпавшие кристаллы отфильтровывают, последовательно промывают на фильтре: 80 мл воды, 80 мл 5%-ного раствора лимонной кислоты, 80 мл воды и сушат на воздухе до постоянного веса. Получают 10.42 г (91.6%) белого кристаллического вещества 12. Содержание основного вещества 95.0% (ВЭЖХ). ESMS, m/z (I%): 948.50 [M+H]+ (100).Dissolve 6.07 g (13.8 mmol) Ac-His(Trt)-OH (compound 11 obtained in step 8 a), 6.76 g (12.0 mmol) H-Ala-Glu(OBzl)-Glu(OBzl)-NH 2 ⋅HCl (compound 9 obtained in step 7), 2.39 g (15.6 mmol) of N-hydroxybenztriazole monohydrate and 1.49 g (14.8 mmol) of N-methylmorpholine in 280 ml of dimethylformamide at room temperature. The reaction mass is cooled to 0°C and a solution of 2.97 g (14.4 mmol) of dicyclohexylcarbodiimide in 20 ml of dimethylformamide is added dropwise. After the end of the addition, the reaction mass is stirred for 1 hour at 0°C, warmed to room temperature, stirred for another 12 hours until the end of the reaction (HPLC control) and poured into 800 ml of 5% sodium bicarbonate solution. The precipitated crystals are filtered off, washed successively on the filter: 80 ml of water, 80 ml of a 5% citric acid solution, 80 ml of water, and dried in air to constant weight. 10.42 g (91.6%) of a white crystalline substance 12 are obtained. The content of the main substance is 95.0% (HPLC). ESMS, m/z (I%): 948.50 [M+H]+ (100).
Стадия 9. Удаление тритильной защиты гистидина 90%-ным водным раствором уксусной кислоты с получением Ac-His-Ala-Glu(OBzl)-Glu(OBzl)-NH2 (соединение 13). Step 9. Removal of the trityl protection of histidine with 90% aqueous acetic acid to give Ac-His-Ala-Glu(OBzl)-Glu(OBzl)-NH 2 (compound 13).
Растворяют 10.0 г (10.5 ммоль) Ac-His(Trt)-Ala-Glu(OBzl)-Glu(OBzl)-NH2 (соединение 12) в смеси 40 мл уксусной кислоты и 4 мл воды при комнатной температуре. Полученный раствор нагревают до 60°C и перемешивают при этой температуре 3 часа до окончания реакции (контроль по ВЭЖХ). Реакционную массу охлаждают до комнатной температуры, после чего фильтруют от остатков дициклогексилмочевины. К фильтрату добавляют 400 мл диэтилового эфира и декантируют органическую фазу с осадка. Осадок растирают 2 раза с 40 мл диэтилового эфира, фильтруют и сушат на воздухе до постоянного веса. Получают 6.96 г (93.9%) белого порошка 13. Содержание основного вещества 82.7% (ВЭЖХ). Dissolve 10.0 g (10.5 mmol) Ac-His(Trt)-Ala-Glu(OBzl)-Glu(OBzl)-NH 2 (compound 12) in a mixture of 40 ml of acetic acid and 4 ml of water at room temperature. The resulting solution is heated to 60°C and stirred at this temperature for 3 hours until the end of the reaction (control by HPLC). The reaction mass is cooled to room temperature, after which it is filtered from the remnants of dicyclohexylurea. 400 ml of diethyl ether are added to the filtrate and the organic phase is decanted from the precipitate. The precipitate is triturated twice with 40 ml of diethyl ether, filtered and dried in air to constant weight. 6.96 g (93.9%) of white powder 13 are obtained. The content of the main substance is 82.7% (HPLC).
Полученное вещество очищают с использованием обращённо-фазной препаративной ВЭЖХ. Окончательно получают 3.84 г (51.8%) чистого 13. Содержание основного вещества 99.5% (ВЭЖХ). ESMS, m/z (I%): 706.32 [M+H]+ (100). Спектр ЯМР 1H (d6-DMSO, δ, м.д.): 1.23 (d, J=7.13 Hz, 3H), 1.75-1.90 (m, 5H), 1.94-2.06 (m, 2H), 2.32-2.45 (m, 4H), 2.88-2.96 (m, 1H), 3.04 (dd, J1=15.26 Hz, J2=5.75 Hz, 1H), 4.19-4.32 (m, 3H), 4.53-4.62 (m, 1H), 5.08 (s, 2H), 5.08-5.10 (m, 2H), 7.03 (br s, 1H), 7.25-7.42 (m, 11H), 7.76 (d, J=7.93 Hz, 1H), 8.05 (d, J=8.32 Hz, 1H), 8.10 (d, J=6.34 Hz, 1H), 8.12-8.17 (m, 1H), 8.89 (d, J=1.19 Hz, 1H).The material obtained is purified using reverse phase preparative HPLC. Finally, 3.84 g (51.8%) of pure 13 is obtained. The content of the main substance is 99.5% (HPLC). ESMS, m/z (I%): 706.32 [M+H]+ (100). 1H NMR spectrum (d6-DMSO, δ, ppm): 1.23 (d, J=7.13 Hz, 3H), 1.75-1.90 (m, 5H), 1.94-2.06 (m, 2H), 2.32-2.45 ( m, 4H), 2.88-2.96 (m, 1H), 3.04 (dd, J1=15.26 Hz, J2=5.75 Hz, 1H), 4.19-4.32 (m, 3H), 4.53-4.62 (m, 1H), 5.08 (s, 2H), 5.08-5.10 (m, 2H), 7.03 (br s, 1H), 7.25-7.42 (m, 11H), 7.76 (d, J=7.93 Hz, 1H), 8.05 (d, J= 8.32 Hz, 1H), 8.10 (d, J=6.34 Hz, 1H), 8.12-8.17 (m, 1H), 8.89 (d, J=1.19 Hz, 1H).
Стадия 10. Удаление бензильной защиты с карбоксильных групп глутаминовых кислот с получением тетрапептида Ac-His-Ala-Glu-Glu-NH2 (соединение 14). Step 10. Removal of the benzyl protection from the carboxyl groups of glutamic acids to obtain the tetrapeptide Ac-His-Ala-Glu-Glu-NH 2 (compound 14).
Растворяют 2.50 г (3.54 ммоль) Ac-His-Ala-Glu(OBzl)-Glu(OBzl)-NH2 (соединение 13) в 12 мл уксусной кислоты. К полученному раствору добавляют 0.70 г 20%-ной влажной гидроокиси палладия в качестве катализатора и реакционную массу гидрируют, пропуская ток водорода в течение 12 ч при комнатной температуре до окончания реакции (контроль с помощью ВЭЖХ). Отделяют катализатор фильтрованием. Фильтрат выливают в 100 мл диэтилового эфира, выпавшее вещество отфильтровывают, промывают 2 раза по 50 мл диэтиловым эфиром и сушат на воздухе до постоянного веса. Полученный порошок растворяют в 80 мл воды и лиофилизируют. Получают 1.58 г (84.9%) тетрапептида Ac-His-Ala-Glu-Glu-NH2 (соединение 14) в виде белого порошка. Содержание основного вещества 99.4% (ВЭЖХ). ESMS, m/z (I%): 526.23 [M+H]+ (100), 1051.44 [2M+H]+ (5.6). Спектр ЯМР 1H (D2O, δ, м.д.): 1.45 (d, J=7.09 Hz, 3H), 2.01-2.13 (m, 5H), 2.16-2.27 (m, 2H), 2.48-2.59 (m, 3H), 3.17-3.25 (m, 1H), 3.30-3.38 (m, 1H), 4.36-4.48 (m, 4H), 7.38 (s, 1H), 8.69 (s, 1H).Dissolve 2.50 g (3.54 mmol) Ac-His-Ala-Glu(OBzl)-Glu(OBzl)-NH 2 (compound 13) in 12 ml of acetic acid. To the resulting solution was added 0.70 g of 20% wet palladium hydroxide as a catalyst, and the reaction mass was hydrogenated by passing a stream of hydrogen for 12 h at room temperature until the reaction was complete (control by HPLC). Separate the catalyst by filtration. The filtrate was poured into 100 ml of diethyl ether, the precipitated substance was filtered off, washed with 2 times 50 ml of diethyl ether, and dried in air to constant weight. The resulting powder is dissolved in 80 ml of water and lyophilized. 1.58 g (84.9%) of tetrapeptide Ac-His-Ala-Glu-Glu-NH2 (compound 14) is obtained as a white powder. The content of the main substance is 99.4% (HPLC). ESMS, m/z (I%): 526.23 [M+H]+ (100), 1051.44 [2M+H]+ (5.6). 1H NMR spectrum (D2O, δ, ppm): 1.45 (d, J=7.09 Hz, 3H), 2.01-2.13 (m, 5H), 2.16-2.27 (m, 2H), 2.48-2.59 (m, 3H), 3.17-3.25 (m, 1H), 3.30-3.38 (m, 1H), 4.36-4.48 (m, 4H), 7.38 (s, 1H), 8.69 (s, 1H).
Таким образом, технический результат - разработанный оптимальный способ синтеза тетрапептида Ac-His-Ala-Glu-Glu-NH2 высокой чистоты, который может быть масштабирован для фармацевтического производства, достигнут.Thus, the technical result - the developed optimal method for the synthesis of high purity Ac-His-Ala-Glu-Glu-NH 2 tetrapeptide, which can be scaled up for pharmaceutical production, has been achieved.
Структура и чистота полупродуктов и целевого продукта подтверждены данными ЯМР 1H спектроскопии, масс-спектрометрии и высокоэффективной жидкостной хроматографией.The structure and purity of the intermediates and the target product were confirmed by 1H NMR spectroscopy, mass spectrometry, and high performance liquid chromatography.
Claims (11)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2021114233A RU2767030C1 (en) | 2021-05-20 | 2021-05-20 | Ac-his-ala-glu-glu-nh2 peptide production method |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2021114233A RU2767030C1 (en) | 2021-05-20 | 2021-05-20 | Ac-his-ala-glu-glu-nh2 peptide production method |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2767030C1 true RU2767030C1 (en) | 2022-03-16 |
Family
ID=80736981
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2021114233A RU2767030C1 (en) | 2021-05-20 | 2021-05-20 | Ac-his-ala-glu-glu-nh2 peptide production method |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2767030C1 (en) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2784326C1 (en) * | 2022-07-15 | 2022-11-23 | Общество с ограниченной ответственностью "ЛАЙФМИССИЯ" | Sodium salt of haee peptide for the treatment of neurodegenerative diseases |
| WO2024014980A1 (en) * | 2022-07-15 | 2024-01-18 | Общество с ограниченной ответственностью "ЛАЙФМИССИЯ" | Potassium salt of haee peptide for treating neurodegenerative diseases |
| WO2024014981A1 (en) * | 2022-07-15 | 2024-01-18 | Общество с ограниченной ответственностью "ЛАЙФМИССИЯ" | Sodium salt of haee peptide for treating neurodegenerative diseases |
| WO2024014984A1 (en) * | 2022-07-15 | 2024-01-18 | Общество с ограниченной ответственностью "ЛАЙФМИССИЯ" | Ammonium salt of haee peptide for treating neurodegenerative diseases |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2141483C1 (en) * | 1997-07-04 | 1999-11-20 | Небольсин Владимир Евгеньевич | Peptide derivatives or their pharmaceutically acceptable salts, method of their synthesis, use and pharmaceutical composition |
| RU2588143C2 (en) * | 2010-10-27 | 2016-06-27 | Кимонелла Венчерс Лтд | Peptide compound, useful for inhibiting formation of amyloid plaques |
| RU2709539C1 (en) * | 2019-08-15 | 2019-12-18 | Акционерное общество "Опытно-Экспериментальный завод "ВладМиВа" | Pharmaceutical composition based on haee peptide for treating neurodegenerative diseases |
-
2021
- 2021-05-20 RU RU2021114233A patent/RU2767030C1/en active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2141483C1 (en) * | 1997-07-04 | 1999-11-20 | Небольсин Владимир Евгеньевич | Peptide derivatives or their pharmaceutically acceptable salts, method of their synthesis, use and pharmaceutical composition |
| RU2588143C2 (en) * | 2010-10-27 | 2016-06-27 | Кимонелла Венчерс Лтд | Peptide compound, useful for inhibiting formation of amyloid plaques |
| RU2709539C1 (en) * | 2019-08-15 | 2019-12-18 | Акционерное общество "Опытно-Экспериментальный завод "ВладМиВа" | Pharmaceutical composition based on haee peptide for treating neurodegenerative diseases |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Peter Gockel et al, "Difunctional Dipeptides Containing Cysteine or Histidine: Solution Behavior and Zinc Complextion", Chemische Berichte, 1996, vol. 129, No 10, p. 1243 - 1249, doi.org/10.1002/cber.19961291016. * |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2784326C1 (en) * | 2022-07-15 | 2022-11-23 | Общество с ограниченной ответственностью "ЛАЙФМИССИЯ" | Sodium salt of haee peptide for the treatment of neurodegenerative diseases |
| RU2784249C1 (en) * | 2022-07-15 | 2022-11-23 | Общество с ограниченной ответственностью "ЛАЙФМИССИЯ" | Ammonium salt of haee peptide for the treatment of neurodegenerative diseases |
| RU2784425C1 (en) * | 2022-07-15 | 2022-11-24 | Общество с ограниченной ответственностью "ЛАЙФМИССИЯ" | Potassium salt of haee peptide for the treatment of neurodegenerative diseases |
| WO2024014980A1 (en) * | 2022-07-15 | 2024-01-18 | Общество с ограниченной ответственностью "ЛАЙФМИССИЯ" | Potassium salt of haee peptide for treating neurodegenerative diseases |
| WO2024014981A1 (en) * | 2022-07-15 | 2024-01-18 | Общество с ограниченной ответственностью "ЛАЙФМИССИЯ" | Sodium salt of haee peptide for treating neurodegenerative diseases |
| WO2024014984A1 (en) * | 2022-07-15 | 2024-01-18 | Общество с ограниченной ответственностью "ЛАЙФМИССИЯ" | Ammonium salt of haee peptide for treating neurodegenerative diseases |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2767030C1 (en) | Ac-his-ala-glu-glu-nh2 peptide production method | |
| CA2515975C (en) | Peptide derivatives having .beta.-secretase inhibitory activity | |
| EP2407478A1 (en) | New cyclotetrapeptides with pro-angiogenic properties | |
| WO2006067091A1 (en) | Myd88 homodimerization inhibitors | |
| KR101238133B1 (en) | Processes for preparing eptifibatide and pertinent intermediate compounds | |
| JPH0832720B2 (en) | Tuftsin analogs, process for their preparation and pharmaceutical compositions | |
| JP4694504B2 (en) | New proteasome modulator | |
| Jacobsen et al. | Synthesis of cyclic peptide analogues of the 3 10 helical Pro138-Gly144 segment of human aquaporin-4 by olefin metathesis | |
| Shao et al. | Synthesis and structure revision of symplocin A | |
| CZ280726B6 (en) | Pentapeptidic precursors of biologically active cyclic dipeptides | |
| RU2394836C2 (en) | Peptide having neurotropic activity | |
| CA3173952A1 (en) | Prodrugs of mitochondria-targeting oligopeptides | |
| Karigiannis et al. | Facile Preparation of the 1-Hydroxybenzotriazolyl Ester of/V-Tritylpyroglutamic Acid and its Application to the Synthesis of TRH,[D-His2] TRH and Analogues Incorporating eis-and tra/? s-4-Hydroxy-L-proline | |
| CA1284550C (en) | Retro-inverso analogs of the bradykinin potentiating peptide bpp*in5a*xx | |
| US7999068B2 (en) | Process for the preparation of bicyclic peptide compounds | |
| Ryakhovsky et al. | Study of intramolecular aminolysis in peptides containing N-alkylamino acids at position 2 | |
| Winiecka et al. | New potential renin inhibitors with dipeptide replacements in the molecule | |
| JPS62501212A (en) | Derivatives of substance P and its fragments | |
| CA2015053A1 (en) | Retro-inverse, one- or more-bond bearing analogues of thymopentin, a method for synthesizing the same and their employment for the preparation of pharmaceutical | |
| SU1095588A1 (en) | Cyclic analog of enkephalin displaying analgetic effect | |
| WO2021148594A1 (en) | Chemical synthesis of the peptidic part of bioactive natural products | |
| RU2175973C1 (en) | Method of synthesis of tetradecapeptide | |
| RU2303602C2 (en) | Method for tripeptide production | |
| Besser et al. | Synthesis of differentially protected N‐acylated reduced pseudodipeptides as building units for backbone cyclic peptides | |
| JP2024505609A (en) | Compounds for the treatment of partial progeria |