RU2759906C1 - Метод диагностики вирусов и вирусных инфекций - Google Patents
Метод диагностики вирусов и вирусных инфекций Download PDFInfo
- Publication number
- RU2759906C1 RU2759906C1 RU2021107072A RU2021107072A RU2759906C1 RU 2759906 C1 RU2759906 C1 RU 2759906C1 RU 2021107072 A RU2021107072 A RU 2021107072A RU 2021107072 A RU2021107072 A RU 2021107072A RU 2759906 C1 RU2759906 C1 RU 2759906C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- virus
- viruses
- labeled
- label
- radiocarbon
- Prior art date
Links
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title claims abstract description 37
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 36
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 title claims abstract description 6
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 title claims abstract description 6
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims abstract description 21
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims abstract description 20
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 claims abstract description 13
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims abstract description 9
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 claims abstract description 6
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims abstract description 5
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims abstract description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims abstract description 4
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 claims abstract description 4
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims abstract description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 3
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 claims description 10
- 238000003763 carbonization Methods 0.000 claims description 6
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 abstract description 4
- 238000010000 carbonizing Methods 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Chemical compound CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 17
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 11
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 10
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 10
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 9
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 9
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 7
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 7
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 241000712431 Influenza A virus Species 0.000 description 5
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 4
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 4
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 4
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 4
- 238000004627 transmission electron microscopy Methods 0.000 description 4
- 239000004971 Cross linker Substances 0.000 description 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000005348 Neuraminidase Human genes 0.000 description 3
- 108010006232 Neuraminidase Proteins 0.000 description 3
- 238000004760 accelerator mass spectrometry Methods 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 3
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 3
- 230000003067 hemagglutinative effect Effects 0.000 description 3
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 3
- 238000009434 installation Methods 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 3
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- -1 polyethylene fragment Polymers 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 229910052713 technetium Inorganic materials 0.000 description 3
- GKLVYJBZJHMRIY-UHFFFAOYSA-N technetium atom Chemical compound [Tc] GKLVYJBZJHMRIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 2
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 2
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 2
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 2
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 2
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 2
- 102400000368 Surface protein Human genes 0.000 description 2
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 2
- 208000037797 influenza A Diseases 0.000 description 2
- 208000037801 influenza A (H1N1) Diseases 0.000 description 2
- 229960003971 influenza vaccine Drugs 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000006408 oxalic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 2
- 150000003141 primary amines Chemical class 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 201000010740 swine influenza Diseases 0.000 description 2
- 210000003437 trachea Anatomy 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 2
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 1
- 206010010741 Conjunctivitis Diseases 0.000 description 1
- 241000590002 Helicobacter pylori Species 0.000 description 1
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001500351 Influenzavirus A Species 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010029260 Neuroblastoma Diseases 0.000 description 1
- 206010033799 Paralysis Diseases 0.000 description 1
- 208000007542 Paresis Diseases 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 208000004756 Respiratory Insufficiency Diseases 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 238000003917 TEM image Methods 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-NJFSPNSNSA-N UREA C 14 Chemical compound N[14C](N)=O XSQUKJJJFZCRTK-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 108010003205 Vasoactive Intestinal Peptide Proteins 0.000 description 1
- 102400000015 Vasoactive intestinal peptide Human genes 0.000 description 1
- 108010003533 Viral Envelope Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036528 appetite Effects 0.000 description 1
- 235000019789 appetite Nutrition 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 239000012752 auxiliary agent Substances 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 238000010531 catalytic reduction reaction Methods 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000002485 combustion reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 210000000613 ear canal Anatomy 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 239000010439 graphite Substances 0.000 description 1
- 229910002804 graphite Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000005087 graphitization Methods 0.000 description 1
- 231100001261 hazardous Toxicity 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 1
- 229940037467 helicobacter pylori Drugs 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 230000002631 hypothermal effect Effects 0.000 description 1
- 230000001524 infective effect Effects 0.000 description 1
- VBUWHHLIZKOSMS-RIWXPGAOSA-N invicorp Chemical group C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 VBUWHHLIZKOSMS-RIWXPGAOSA-N 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000003771 laboratory diagnosis Methods 0.000 description 1
- 210000002429 large intestine Anatomy 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 231100000225 lethality Toxicity 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 239000006199 nebulizer Substances 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 238000009206 nuclear medicine Methods 0.000 description 1
- 244000309459 oncolytic virus Species 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 239000002985 plastic film Substances 0.000 description 1
- 229920006255 plastic film Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 201000004193 respiratory failure Diseases 0.000 description 1
- 229910052702 rhenium Inorganic materials 0.000 description 1
- WUAPFZMCVAUBPE-UHFFFAOYSA-N rhenium atom Chemical compound [Re] WUAPFZMCVAUBPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- FQENQNTWSFEDLI-UHFFFAOYSA-J sodium diphosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O FQENQNTWSFEDLI-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 229940048086 sodium pyrophosphate Drugs 0.000 description 1
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 235000019818 tetrasodium diphosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001577 tetrasodium phosphonato phosphate Substances 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 229950000184 urea c 14 Drugs 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
- G01N15/06—Investigating concentration of particle suspensions
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
- G01N30/72—Mass spectrometers
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Virology (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ диагностики вирусов и вирусных инфекций in vitro и in vivo. Способ включает применение ускорительной масс-спектрометрии, при этом количественный подсчет вируса проводят по количеству радиоуглеродной метки на оболочке вирусов, где метку вносят без разрушения вирионов. Пробы для УМС-анализа готовят из меченой вируссодержащей жидкости с известной массовой концентрацией путем добавления вируссодержащей жидкости к углероду, не содержащему радиоактивный14С, зауглероживания полученной смеси и определения содержания метки в одной вирусной частице. Изобретение обеспечивает подсчет сверхнизкого количества вирионов в вируссодержащей жидкости и определение числа проникших вирусных частиц в любые ткани, инфицированных мечеными вирусами. 4 ил., 3 табл., 3 пр.
Description
Изобретение относится к медицинской биотехнологии, а именно к методам определения вирусных инфекций в вирусологии для выявления и количественного определения вирусов. Кроме того, изобретение относится к способам и наборам для получения, внесения метки и применения радиодиагностических реагентов и пептидов для количественного анализа.
Методика внесения радиоактивных меток ранее применялась для пептидов при диагностике различных онкологий (аденокарциномы человека, рака груди, нейробластом, рака желудка, меланомы, опухолевых клеточных линий) (RU 2171117 С2, A61K 51/08, 2001), позволяя определять опухолевые клетки in vivo путем радиоотображения. Известны следующие радионуклиды, пригодные для радиоотображения: 14С, 32Р, 67Ga, 99mTc, 111In, 123I, 125I, 169Yb, 186Re, 188Re.
В радиосцинтиграфии используется метод радиойодирования, а для более качественного отображения достаточно широко применяют технеций (RU 2122431, A61K 47/48, 1998; US N5225180, A61K 51/08, 1993). Так, радиоактивный метод с применением 125I использовали в генной инженерии при определении антител класса IgM к корантигену вируса гепатита В (SU 1642399, G01N 33/53, 1991). Однако методы получения радиойодированных пептидов в промышленных масштабах имеют свои недостатки, среди которых дороговизна и ограниченность запасов.
Хотя 99mTc является предпочтительным радионуклидом для сцинтиграфического радиоотображения по сравнению с радиойодированием, тем не менее данный метод не использовался широко, поскольку не подходит для мечения белков, имеющих размер молекулы менее, чем 10 тыс. дальтонов (Lamberts SW, Bakker WH, Reubi JC, et al. Receptors on tumors studied with radionuclide scintigraphy. J Nucl Med. 1991; 32: 1189-1191). Из недостатков также можно отметить, что ни одно из приведенных описаний не раскрывает информации, как именно были получены меченные технецием белки - раскрывается только информация о «вазоактивном кишечном пептиде, ковалентно связанном с хелатирующей составляющей технеция или рения» (186Re, 188Re).
Радиоактивный фосфор (32Р) предлагается к выявлению фрагментов генома вируса инфекционного некроза поджелудочной железы. Недостатком данного способа авторы отмечают возможность ложноположительных результатов и высокую специфичность, нарастающую в случае измененного генотипа (RU 2508547, G01N 33/50, 2013).
Недостатком вышеописанных способов регистрации биологических объектов с помощью метки является необходимость использования опасных для здоровья человека доз радионуклидов для достоверной регистрации меченых соединений методом радиоотображения или сцинтиллятором. Более того, данные радионуклиды, введенные в живые организмы, нельзя рассматривать как нейтральные для организмов ввиду высокой радиоактивности.
В связи с этим авторами предлагается использование сверхчувствительного метода регистрации радионуклидов, в частности радиоуглерода, - ускорительной масс-спектрометрии, имеющей непревзойденную чувствительность: регистрируется один атом 14С среди 1015 атомов 12С. Способ регистрации изотопа методом УМС - поштучный подсчет ядер 14С - позволяет уменьшить вносимую дозу радиоактивного препарата до нейтральной для биологического объекта и не оказывать существенного воздействия на его жизнедеятельность.
Радиоуглерод (14С) описан в использовании для определения заражения желудочно-кишечного тракта Helicobacter pylori. Пациенту дают выпить препарат мочевины “Уреакапс, 14С", содержащий радиоактивный нуклид 14С. У инфицированных Helicobacter pylori под воздействием бактериального фермента уреазы происходит превращение мочевины в аммиак с высвобождением радиоактивномеченого углекислого газа, впоследствии регистрируемом в выдохе пациента (Balon H.R., Roff Е., Freitas J.E., Gates V., Dworkin H.J. Society of Nuclear Medicine Procedure Guideline for C-14 Urea Breath Test. J Nucl Med. 1998 Nov; 39(11): 2012-2014). Данный метод прост в применении и тестировании пациентов, но в последнее время редко применим в виду радиофобии и заменен на тест со 13С, который не связан с радиационными рисками. Однако в данном случае радиоуглеродная метка не вносится в микроорганизм, а находится в веществе, которое входит в цикл его жизнедеятельности, то есть данный метод не является прямым способом определения концентрации бактерий в желудке.
Обогащение изотопом 14С вируссодержащей жидкости (ВСЖ), предложенное нами, применяется впервые. Как и другие методы использования радиоактивной метки применение 14С требует соблюдения специальных мер безопасности и лицензирования лаборатории. Однако сильной стороной данного метода диагностики является возможность проведения подсчета сверхнизкого количества вирионов в ВСЖ, а также определение числа проникших вирусных частиц в любые ткани, инфицированных мечеными вирусами. Благодаря данному методу становится возможным углубленное изучение вирус-клеточного взаимодействия in vitro и in vivo, что особенно важно при низких концентрациях вирусов, а также исследование механизма развития высоколетальной инфекции. Разработка нового метода диагностики с использованием ускорительной масс-спектрометрии проведена на примере вирус-клеточного взаимодействия вируса гриппа А с введенной меткой радиоуглерода 14С.
Предлагается метод диагностики вирусных инфекций с применением ускорительной масс-спектрометрии, при котором количественный подсчет вируса проводится по количеству радиоуглеродной метки на оболочке вирусов, причем метка вносится без разрушения вирионов.
В качестве модельной системы использовали вирус гриппа А. Меченые вирусные частицы титровали в клетках собачьей почки Madin-Darby (MDCK) и проводили реакцию гемагглютинации (РГА). Результаты показали, что титр вируса до и после внесения метки 14С остался неизменным. Просвечивающая электронная микроскопия (ПЭМ) выявила структурную целостность мембран вирионов. Таким образом, данный метод может быть применен в медицинской биотехнологии, а именно как метод определения вирусных инфекций в вирусологии, например, для выявления и идентификации вируса гриппа А, определения специфичности онколитических вирусов и др. Изучение вирус-клеточного взаимодействия на примере обогащенного изотопом 14С вируса гриппа позволяет определить сверхнизкие количества проникших вирусных частиц, способных вызвать заболевание в органах экспериментально инфицированных млекопитающих. Кроме того, данный метод применим при анализе других вирусов и пептидов, содержащих на своей поверхности белки с СООН-группами в исследованиях in vitro и in vivo.
Сущность изобретения иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1.
Для внесения радиоактивной метки на поверхность вируса гриппа необходима активация карбоксильной группы белка, для чего был использован водорастворимый кросс-линкер - карбодиимид (англ. 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide, EDC, EDAC или EDCI).
Связывание аминогруппы меченной 14С мочевины с карбоксильными группами белков на поверхности вируса гриппа в водной среде проводили по механизму, представленному на Фиг. 1.
Связывание углерода карбоксильной группы, расположенной на поверхностном белке вируса гриппа, с азотом первичного амина (на примере мочевины, меченной 14С, радиоуглерод обозначен как С*) протекает через активацию карбоксильной группы белка кросс-линкером EDC (1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide). Результатом реакции белковых групп и мочевины в присутствии EDC является амидная связь между белком и мочевиной и образование побочного продукта из EDC в виде изомочевины.
До внесения 14С предварительно было определено количество присутствующих на поверхности вируса гриппа A (H1N1)pdm09 (штамм A/Tomsk/273MA3/2010(H1N1pdm09) (Пат. РФ 2605317) (MA-CD1) карбоксильных групп и рассчитана концентрация вирусных частиц в пробе. Расчет количества карбоксильных групп, содержащихся на всех вирусных частицах в объеме 1 мл штамма MA-CD1 выполнили на основании общепринятых данных из литературы (Фридман Э.А., Коликов В.М. Некоторые биологические и физико-химические принципы получения убитых гриппозных вакцин // В кн.: Убитая гриппозная вакцина. Л., 1976 г. Т. 47. С. 49-53) и вычисления значения гемагглютинирующей единицы (ГАЕ):
1) на поверхности одного гемагглютинина вируса гриппа А субтипа H1 может быть расположено до 103 аминокислотных остатков, содержащих карбоксильные группы, в антигенных сайтах (наиболее вариабельные эпитопы, взаимодействующие с антителами);
2) на поверхности одной нейраминидазы вируса гриппа А субтипа H1 имеется до 25 эпитопов;
3) на вирионах сферической структуры располагается примерно 500 шипов НА и 100 шипов NA;
4) 1000 ГАЕ/мл обеспечивается (2-4) × 1010 шт/мл вирусных частиц;
5) для штамма MA-CD1 это значение составило 640 ГАЕ/мл, значит, физический титр вируса гриппа равен
и дает значение в диапазоне (128-256)×108 шт/мл.
6) Из расчета 128×108 шт/мл активных вирусных частиц определено число карбоксильных групп по нижней границе:
128×108 шт/мл × (500 гемагглютининов на поверхности 1 шт вирусной частицы × 103 аминокислоты на поверхности 1 шт НА + 100 нейраминидаз на поверхности 1 шт вирусной частицы × 25 аминокислот на поверхности 1 шт NA) = 6912×1011 ед.
7) И из расчета 256×108 шт/мл активных вирусных частиц определено число карбоксильных групп по верхней границе:
256×108 шт/мл × (500 гемагглютининов на поверхности 1 шт вирусной частицы × 103 аминокислоты на поверхности 1 шт НА + 100 нейраминидаз на поверхности 1 шт вирусной частицы × 25 аминокислот на поверхности 1 шт NA)=13824×1011 ед.
Таким образом, определен диапазон концентрации карбоксильных групп на эпитопах вирусных частиц: от 6912×1011 ед. до 13824×1011 ед. в 1 мл ВСЖ при 640 ГАЕ/мл.
Для проведения работ по определению концентрации вируса в ВСЖ был наработан вирусный пул. Для этого использовали вируссодержащий биологический материал штамма MA-CD1. Готовили его десятикратные разведения (1-10) на стерильном физиологическом растворе. Затем каждое разведение оценивали по продукции гемагглютинина в реакции гемагглютинации (РГА) и 50% инфекционному титру на MDCK. Отобранный образец с наибольшими показателями использовали для наработки пулов на 3-х культуральных флаконах по 30 мл объема каждый. Общий пул получали путем объединения ВСЖ из трех культуральных флаконов, зараженных одинаковым разведением вируса. Вируссодержащий раствор хранили при -70°C.
Перед нанесением радиоактивной метки на вирионы требовалось очищение ВСЖ от остатков культуры клеток MDCK и других биомолекул, которые могут содержать карбоксильные группы. Для этого мы использовали простой и быстрый вариант очистки, разработанный для бактериофагов. Супернатант ВСЖ последовательно 3 раза подвергли стерилизующей фильтрации через мембранные фильтры Millipor с диаметром пор 0,22 мкм. Полистирольные тубусы объемом на 15 мл (Greiner Bio-One International, Австралия) заполняли суспензией (14 мл на пробирку) и центрифугировали при 38000 g при 4°C в течение 1 ч на ультрацентрифуге Beckman Scientific Inc TL-100 Benchtop. Для удаления побочных белков всю надосадочную жидкость сливали и добавляли к осажденному вирусу 14 мл фосфатно-солевого буфера (ФСБ, рН 7,4). Затем энергично перемешивали и снова центрифугировали с той же скоростью и продолжительностью, что и выше. Данная процедура была повторена два раза. После второй стадии центрифугирования надосадочную жидкость сливали и добавляли к осажденному вирусу 2 мл ФСБ (рН 7,4), суспендировали и фасовали по 1 мл на пробирку, замораживали на -70°C для хранения. Этот метод обеспечивает высококачественную очистку вируса гриппа, но приводит к снижению его титра (с 640 ГАЕ/мл до 320 ГАЕ/мл в нашем образце), поскольку некоторые вирионы могут остаться на поверхности мембранных фильтров Millipor. Таким образом, после процедуры ультрацентрифугирования количество вирионов в ВСЖ составило 320 ГАЕ/мл, что соответствует (64-128) × 108 шт/мл вирионов, содержащих 1014 - 1015 шт - СООН групп на эпитопах.
Затем к 1 мл ВСЖ добавили 0,5 мг/мл EDC и выдержали при комнатной температуре в течение 1 ч. После в раствор добавили препарат «Уреакапс 14С», содержащий меченую мочевину с радиоактивностью 37 кБк и вспомогательное вещество натрия пирофосфат, и инкубировали при 4°C в течение 16 ч. Затем применяли двойное ультрацентрифугирование (60 мин, 38000 g, 4°C), раствор слили, к осадку добавили 1 мл ФСБ и получили ВСЖ*.
Для анализа содержания радиоуглерода в вирусах методом ускорительной масс-спектрометрии (УМС) приготовили пробы следующим образом: 10 мкл раствора ВСЖ*, предварительно разбавленного в 100 раз (10 мкл ВСЖ* + 990 мкл ФСБ), прикапали к навескам мелкозернистого плотного графита (МПГ), не содержащего радиоактивного 14С (Таблица 1). Затем пробы подвергли процедуре зауглероживания, которую проводили на абсорбционно-каталитической установке, включающей стадии сжигания, сорбции углекислого газа на селективном сорбенте, десорбции и каталитического восстановления CO2 водородом (РФ 2638820, G01N 33/60, 2017). После завершения процесса зауглероживания порошок, содержащий 1 мг углерода, прессовали в таблетки и направляли на УМС-анализ. Процедуре графитизации, помимо исследовательских образцов, подвергали также стандартные образцы: щавелевой кислоты (OxI) и сахарозы (ANU). Относительное содержание радиоуглерода 14С/13С в исследовательских образцах нормировали на содержание 14С/13С в стандартах, получая отношения 14С обр./14С фон. Определение содержания радиоуглерода проводили на Уникальной научной установке «Ускорительный масс-спектрометр ИЯФ СО РАН» (УНУ «УМС ИЯФ СО РАН»).
УМС-анализ показал, что в 10 мкл ВСЖ* 1,6*1010 NC*ONH2-групп, значит, в 1 мл ВСЖ* количество меченых NC*ONH2-групп составляет 1,6*1012 шт.
Если в 1 мл содержится (1,28-2,56)*1010 штук вирусов и (6,9-14)*1014 штук карбоксильных групп, то метка вносится на (0,1-0,3)% групп.
На Фиг. 2 представлен снимок просвечивающей электронной микроскопии вирус содержащей жидкости, меченной радиоуглеродом.
Пример 2.
Все работы с животными одобрены Комитетом по биомедицинской этике при ФИЦ ФТМ.
Мышей линии BALB/c 6-8-недельных (масса тела 18-20 г) (питомник ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор») анестезировали диэтиловым эфиром (2-4% во вдыхаемой смеси) и инфицировали интраназально 104 TCID50 (50% tissue culture infective dose) вируса MA-CD1, меченным 14C, в 50 мкл ФСБ.
Ежедневно в течение 8 суток проводили наблюдение за инфицированными мышами, оценивали поведение (активность, наличие аппетита), внешний вид животного, качество шерстного покрова, упитанность, наличие специфических клинических проявлений болезни (конъюнктивиты, выраженная дыхательная недостаточность, нервные проявления (парезы, параличи).
При отсутствии летальности среди экспериментально инфицированных лабораторных мышей определяли патологическое влияние вируса гриппа MA-CD1, меченного 14С, на организм экспериментальных животных по изменению массы и температуре тела животных опытных групп. Для этого получали данные о массе тела каждого животного ежедневно в течение всего срока наблюдения. Показатель изменения массы тела вычисляли как среднее арифметическое массы тела всех мышей в группе. Измерение температуры тела производили в ушном канале при помощи инфракрасного электронного термометра «DIGITAL VETERINARY THERMOMETER AccuVet.» (Mesure technology Co., LTD.) и выражали в градусах Цельсия (°C).
На 1-е, 2-е и 3-й сутки после инфицирования по три мыши умерщвляли путем декапитации. Для вирусологического и УМС анализов брали легкие, трахею, сердце, печень, головной мозг, почку, тонкую кишку, толстую кишку. Инфекционные титры вируса гриппа определяли титрованием 10%-го гомогената в культуре клеток MDCK, а также с помощью определения гемагглютинирующей единицы (ГАЕ) в 1 мл ВСЖ в реакции гемагглютинации (РГА) (Manual for the laboratory diagnosis and virological surveillance of influenza. WHO Global Influenza Surveillance Network, 2011. 153p). Для УМС-анализа образцы биологических тканей сушили и подвергали зауглероживанию по Примеру 1.
ВСЖ*, меченную 14С, также анализировали с помощью просвечивающей электронной микроскопии.
В результате инфицирования мышей линии BALB/c вирусом гриппа A/H1N1pdm09, меченным 14С, отмечались признаки гриппозного заболевания в виде снижения массы тела и гипотермии (Фиг. 3, 4).
Результаты определения инфекционного титра вируса, гемагглютинирующей активности, а также физического титра методом УМС, в органах лабораторных мышей представлены в Таблице 2.
Методом УМС меченые вирусы обнаруживаются во всех исследованных органах, наибольшая концентрация наблюдается в легких и трахее. Стоит отметить, что во всех органах, за исключением легких, наблюдается увеличение концентрации меченых вирусов на вторые сутки после инфицирования, после чего концентрация падает.
Физический титр с помощью просвечивающей электронной микроскопии измерить не удалось, т.к. количество вирусных частиц было ниже детектируемого уровня, что, в свою очередь, подчеркивает высокую точность анализа с помощью УМС.
Пример 3.
Внесение радиоуглерода на оболочку вируса гриппа A/H1N1pdm09 проводили по Примеру 1. После чего провели определение титра вируса по Примеру 1 (1,5⋅1012 шт/мл) и определили концентрацию радиоуглерода в ВСЖ*. Из результатов УМС-анализа следует, что в 10 мкл ВСЖ* находится 1,5*1010 NC*ONH2-групп, что соответствует содержанию радиоуглеродной метки в (0,2-0,4)% карбоксильных групп, или 100-200 меченых карбоксильных групп на один вирион. Затем провели аэрозольные эксперименты по осаждению вируса из ВСЖ* на фрагмент полиэтиленовой пленки площадью 1 см2. Для этого тестируемый образец был помещен в герметичную камеру, в которую поступал аэрозоль, идущий затем на счетчик частиц. Аэрозоль генерировали пропусканием потока очищенного воздуха со скоростью 28.3 л/мин через форсунку, содержащую раствор меченого вируса. Приблизительно 10 мл меченого вируса гриппа А было распылено с помощью пневматического распылителя в течение 60 мин. Определялся средний размер частиц аэрозоля и концентрация аэрозоля в потоке, идущем через камеру с образцами. С помощью счетчика частиц было определено, что средний размер изучаемых частиц аэрозоля составил 180 нм в связи с наличием в буферном растворе солей, а концентрация аэрозоля в потоке, идущем через камеру с образцами - около 105 см-3. Через 50 дней после аэрозольных испытаний и хранения в закрытом флаконе на воздухе при комнатной температуре фрагмент полиэтилена был отправлен на зауглероживание с последующим определением содержания радиоуглерода методом ускорительной масс-спектрометрии (УМС). Зауглероживание образцов осуществляли на абсорбционно-каталитической установке по Примеру 1.
Для оценки содержания 14С на пленке полиэтилена на УМС был отправлен фрагмент пленки, не подвергшийся аэрозольной экспозиции, а также фрагмент пленки после 60-минутных аэрозольных испытаний в камере (Таблица 3).
Таким образом, по данным УМС-анализа на образце полиэтилена площадью 1 см2 через 50 дней находилось 7⋅106 меченых NC*ONH2-групп, что соответствует около 35-70 тысячам вирионов.
Фиг. 1. Схема связывания углерода карбоксильной группы, расположенной на поверхностном белке вируса гриппа, с азотом первичного амина (на примере мочевины, меченной 14С, радиоуглерод обозначен как С*) через активацию карбоксильной группы белка кросс-линкером EDC.
Фиг. 2. Снимок ПЭМ вируса гриппа A (H1N1)pdm09 (штамм A/Tomsk/273MA3/2010(H1N1pdm09), меченного радиоуглеродом.
Фиг. 3. Снижение массы тела у экспериментальных животных, инфицированных вирусом гриппа A/H1N1pdm09, меченным 14С.
Фиг. 4. Изменение температуры тела у экспериментальных животных, после инфицирования вирусом гриппа A/H1N1pdm09, меченным 14С.
Claims (1)
- Способ диагностики вирусов и вирусных инфекций in vitro и in vivo, включающий применение ускорительной масс-спектрометрии (УМС), где количественный подсчет вируса проводят по количеству радиоуглеродной метки на оболочке вирусов, а метку вносят без разрушения вирионов, отличающийся тем, что пробы для УМС-анализа готовят из меченой вируссодержащей жидкости с известной массовой концентрацией путем добавления вируссодержащей жидкости к углероду, не содержащему радиоактивный 14С, с последующей процедурой зауглероживания полученной смеси, далее определяют содержание метки в одной вирусной частице.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2021107072A RU2759906C1 (ru) | 2021-03-16 | 2021-03-16 | Метод диагностики вирусов и вирусных инфекций |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2021107072A RU2759906C1 (ru) | 2021-03-16 | 2021-03-16 | Метод диагностики вирусов и вирусных инфекций |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2759906C1 true RU2759906C1 (ru) | 2021-11-18 |
Family
ID=78607525
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2021107072A RU2759906C1 (ru) | 2021-03-16 | 2021-03-16 | Метод диагностики вирусов и вирусных инфекций |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2759906C1 (ru) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2351932C2 (ru) * | 2006-08-18 | 2009-04-10 | Александр Иванович Арчаков | Способ регистрации и идентификации макромолекул при помощи сопряженной системы на основе сканирующей пробной микроскопии и масс-спектрометрии |
| RU2619179C1 (ru) * | 2016-03-24 | 2017-05-12 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Уфимский научно-исследовательский институт медицины труда и экологии человека" | Способ оценки вирусной обсемененности воздуха |
-
2021
- 2021-03-16 RU RU2021107072A patent/RU2759906C1/ru active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2351932C2 (ru) * | 2006-08-18 | 2009-04-10 | Александр Иванович Арчаков | Способ регистрации и идентификации макромолекул при помощи сопряженной системы на основе сканирующей пробной микроскопии и масс-спектрометрии |
| RU2619179C1 (ru) * | 2016-03-24 | 2017-05-12 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Уфимский научно-исследовательский институт медицины труда и экологии человека" | Способ оценки вирусной обсемененности воздуха |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| BALON H.R. et al, Society of Nuclear Medicine Procedure Guideline for C-14 Urea Breath Test // Nucl Med. 1998 Nov, 39(11), p.2012-2014. * |
| ПРОКОПЬЕВА Е.А. и др., Разработка нового метода диагностики вирус-клеточного взаимодействия с помощью ускорительной масс-спектрометрии // Электронный научный журнал "Современные проблемы науки и образования", N 1, 17.01.2019. doi: 10.17513/spno.28463. * |
| ПРОКОПЬЕВА Е.А. и др., Разработка нового метода диагностики вирус-клеточного взаимодействия с помощью ускорительной масс-спектрометрии // Электронный научный журнал "Современные проблемы науки и образования", N 1, 17.01.2019. doi: 10.17513/spno.28463. BALON H.R. et al, Society of Nuclear Medicine Procedure Guideline for C-14 Urea Breath Test // Nucl Med. 1998 Nov, 39(11), p.2012-2014. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Faruqu et al. | Membrane radiolabelling of exosomes for comparative biodistribution analysis in immunocompetent and immunodeficient mice-a novel and universal approach | |
| Tuttle et al. | Design, assembly, and validation of a nose-only inhalation exposure system for studies of aerosolized viable influenza H5N1 virus in ferrets | |
| Couch et al. | Aerosol-induced adenoviral illness resembling the naturally occurring illness in military recruits | |
| WO2017052419A1 (ru) | Способ полисигнальной активации апоптоза клеток злокачественных солидных опухолей | |
| Couch et al. | The minimal infectious dose of adenovirus type 4; the case for natural transmission by viral aerosol. | |
| Holl et al. | Virus-lipid interactions: II. The mechanism of adsorption of lipophilic viruses to water-insoluble polar lipids | |
| RU2759906C1 (ru) | Метод диагностики вирусов и вирусных инфекций | |
| CN109142725A (zh) | 一种甲型通用及h7n9亚型流感病毒胶体金联合检测试纸的制备方法 | |
| CN114195868A (zh) | 放射性核素标记的病毒受体结合域及其制备方法与应用 | |
| CN113769121B (zh) | 针对冠状病毒或流感病毒引发疾病的放射性治疗药物及其制备方法 | |
| CN112851763B (zh) | 一种新型冠状病毒主蛋白酶的亲和肽m1及其应用 | |
| US20140212916A1 (en) | Rapid test for detection of infection and therapeutic response | |
| US20100297604A1 (en) | Methods and reagents for virus isolation and detection | |
| CN105891469B (zh) | 一种三疣梭子蟹呼肠孤病毒检测试纸条及其制备方法 | |
| CN106771121A (zh) | 一种口蹄疫病毒胶体金试纸条、病原快速检测试剂盒及其制备方法 | |
| Möller et al. | A generator for the production of radiolabelled ultrafine carbonaceous particles for deposition and clearance studies in the respiratory tract | |
| Blanc-Béguin et al. | Fully automated 68Ga-labeling and purification of macroaggregated albumin particles for lung perfusion PET imaging | |
| CN116036318A (zh) | 一种靶向pd-l1的spect分子影像探针及其制备方法与应用 | |
| CN105884867B (zh) | 18f标记的亲合体类化合物及其制备方法与应用 | |
| Crocker et al. | Electron microscopic counting of elementary bodies of the virus of meningo-pneumonitis | |
| CN113004376A (zh) | 一种用于冠状病毒感染活体显像的分子探针及制备方法 | |
| JP2008531670A (ja) | 放射性同位体で標識された生物学的組成物、および加速器質量分析法におけるその使用 | |
| Pan et al. | In vivo SPECT imaging of an 131I-labeled PM 2.5 mimic substitute | |
| TW391868B (en) | A new style ventilation apparatus of kr-81m gas for lung scintigraphy | |
| Yang et al. | Standard Radio-Iodine Labeling Protocols Impaired the Functional Integrity of Mesenchymal Stem/Stromal Cell Exosomes |