RU2757137C1 - Method for producing a growth medium containing a nanofiltrate of curd whey intended for cultivation of probiotic cultures - Google Patents

Method for producing a growth medium containing a nanofiltrate of curd whey intended for cultivation of probiotic cultures Download PDF

Info

Publication number
RU2757137C1
RU2757137C1 RU2020118509A RU2020118509A RU2757137C1 RU 2757137 C1 RU2757137 C1 RU 2757137C1 RU 2020118509 A RU2020118509 A RU 2020118509A RU 2020118509 A RU2020118509 A RU 2020118509A RU 2757137 C1 RU2757137 C1 RU 2757137C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
medium
nanofiltrate
growth medium
curd whey
agar
Prior art date
Application number
RU2020118509A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Татьяна Валентиновна Новикова
Юлия Александровна Воеводина
Светлана Викторовна Шестакова
Татьяна Павловна Рыжакина
Владимир Борисович Шевчук
Евгения Александровна Фиалкова
Анна Ивановна Гнездилова
Юлия Владимировна Виноградова
Андрей Алексеевич Кузин
Original Assignee
федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Вологодская государственная молочнохозяйственная академия имени Н.В. Верещагина» (ФГБОУ ВО Вологодская ГМХА)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Вологодская государственная молочнохозяйственная академия имени Н.В. Верещагина» (ФГБОУ ВО Вологодская ГМХА) filed Critical федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Вологодская государственная молочнохозяйственная академия имени Н.В. Верещагина» (ФГБОУ ВО Вологодская ГМХА)
Priority to RU2020118509A priority Critical patent/RU2757137C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2757137C1 publication Critical patent/RU2757137C1/en

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20Bacteria; Culture media therefor

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

FIELD: biotechnology.
SUBSTANCE: proposed is a method for producing a growth medium for growing cultures of the Bifidobacterium genus, including use of 120 ml of soy hydrolysate, 1 g of peptone, a curd whey nanofiltrate in a concentration of 3% of the total volume of the nutrient medium, and microbiological agar-agar at a concentration of 0.2% in the finished medium providing gelation of the medium.
EFFECT: invention expands the range of nutrient media for optimal accumulation and preservation of the microbial mass of bifidobacteria in a viable state.
1 cl, 3 ex

Description

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии и биотехнологии, в частности, к способам получения ростовой среды для пробиотических (лакто- и бифидобактерий) бактерий и может быть использовано для производства лечебно-профилактических и лечебных препаратов.The invention relates to veterinary microbiology and biotechnology, in particular, to methods for producing a growth medium for probiotic (lacto- and bifidobacteria) bacteria and can be used for the production of therapeutic and prophylactic and therapeutic drugs.

В настоящее время в Российской Федерации идет активная разработка и внедрение безопасных, эффективных пробиотических препаратов при выращивании сельскохозяйственных животных и получении продукции животноводства. Пробиотики, нормализуя микрофлору кишечника животных, подавляют развитие кишечной палочки и гнилостных бактерий. Продукты жизнедеятельности молочнокислых бактерий благотворно влияют на секреторную деятельность желудочно-кишечного тракта, возбуждают аппетит, повышают усвояемость корма.Currently, the Russian Federation is actively developing and introducing safe, effective probiotic preparations for raising farm animals and obtaining livestock products. Probiotics, normalizing the intestinal microflora of animals, inhibit the development of E. coli and putrefactive bacteria. The waste products of lactic acid bacteria have a beneficial effect on the secretory activity of the gastrointestinal tract, stimulate appetite, and increase the digestibility of feed.

Важное значение имеет среда, на которой культивируют бактерии. Она должна быть достаточно бюджетной для производства, иметь низкую стоимость, включать белковые основы и специфические стимулирующие компоненты, соответствующие потребностям бактерий.The environment in which bacteria is cultivated is important. It should be budgetary enough for production, have a low cost, include protein bases and specific stimulating components that meet the needs of bacteria.

Изобретение позволяет получить питательную среду обеспечивающую накопительный рост, длительное хранение при поддержании определённой массы жизнеспособных микроорганизмов, без утраты их пробиотических свойств и не требовать особенных условий хранения.The invention makes it possible to obtain a nutrient medium providing accumulative growth, long-term storage while maintaining a certain mass of viable microorganisms, without losing their probiotic properties and not requiring special storage conditions.

Широко известна кукурузно-лактозная среда (КЛС) для культивирования бифидобактерий и молочнокислых бактерий (ТУ 10-02-02-789-192-95). Однако КЛС не содержит гидролизованных белковых компонентов, что не обеспечивает при культивировании длительных сроков сохранности конечного продукта. Кроме того, она обладает высокой стоимостью.The corn-lactose medium (CLS) is widely known for the cultivation of bifidobacteria and lactic acid bacteria (TU 10-02-02-789-192-95). However, CLS does not contain hydrolyzed protein components, which does not ensure long-term storage of the final product during cultivation. In addition, it has a high cost.

Известен способ получения среды для выращивания пробиотических микроорганизмов на основе печеночного настоя. Для его приготовления к 1000 мл дистиллированной воды добавляют пептон, хлористый натрий, глюкозу, дрожжевой экстракт и печеночный настой. Смесь нагревают до кипения. После охлаждения фильтруют через ватно-марлевый фильтр и устанавливают рН - 6,8. Среду стерилизуют автоклавированием при 1 атм 30 минут. Среда имеет соломенный цвет с серо-белым осадком, легко разбивающимся при встряхивании (ТУ 9337-001-00668554-03 «Бифидобактерин», изготовляемый в Вологодском филиале ФГБНУ ВИЭВ). Недостатком известного способа получения ростовой среды является высокая себестоимость препарата. Использование компонентов животного происхождения при производстве биологических препаратов в ряде стран ограничено, в связи с эпизоотической ситуацией. Также в продуктах животноводства могут содержаться антибиотики, что отрицательно влияет на культивирование микроорганизмов.A known method of producing a medium for growing probiotic microorganisms based on hepatic infusion. For its preparation, peptone, sodium chloride, glucose, yeast extract and liver infusion are added to 1000 ml of distilled water. The mixture is heated to boiling. After cooling, it is filtered through a cotton-gauze filter and the pH is adjusted to 6.8. The medium is sterilized by autoclaving at 1 ATM for 30 minutes. The medium has a straw color with a gray-white precipitate that easily breaks down when shaken (TU 9337-001-00668554-03 "Bifidobacterin", manufactured at the Vologda branch of the FGBNU VIEV). The disadvantage of the known method of obtaining a growth medium is the high cost of the drug. The use of components of animal origin in the production of biological products in a number of countries is limited due to the epizootic situation. Also, livestock products may contain antibiotics, which negatively affects the cultivation of microorganisms.

Известна также питательная среда для накопления биомассы бактерий на основе молочной сыворотки (RU 2326939). Среда хотя и дает высокую скорость роста, не имеет достаточного количества питательных веществ (белков, пептидов, аминокислот) для длительной сохранности микробных клеток, что очень важно для препаратов-пробиотиков. Дополнительным эффектом высоких ростовых показателей является повышение титруемой кислотности, негативно отражающееся на органолептических свойствах продукта и сохранности микроорганизмов.Also known is a nutrient medium for the accumulation of bacterial biomass based on whey (RU 2326939). Although the environment provides a high growth rate, it does not have a sufficient amount of nutrients (proteins, peptides, amino acids) for the long-term preservation of microbial cells, which is very important for probiotic preparations. An additional effect of high growth rates is an increase in titratable acidity, which negatively affects the organoleptic properties of the product and the safety of microorganisms.

Известен способ приготовления гидролизатной среды с использованием в качестве белковой основы смеси компонентов животного и растительного происхождения (Биологически активная добавка к пище и способ ее приготовления, RU 2207019).A known method of preparing a hydrolyzate medium using a mixture of components of animal and plant origin as a protein base (Biologically active food additive and method of its preparation, RU 2207019).

Известен способ предусматривающий приготовление питательной среды для производства бактериальной закваски на основе ферментативного гидролизата белкового компонента с использованием соевого молока. Недостатком данного способа – многокомпонентность, сложность и длительность приготовления, ограниченный срок хранения – заявленный периода хранения закваски 30 суток (Патент РФ №2169472, МКП А23С9/12, А61К35/74.опубликовано 27.06.2001).The known method provides for the preparation of a nutrient medium for the production of a bacterial starter culture based on an enzymatic hydrolyzate of the protein component using soy milk. The disadvantage of this method is the multicomponent nature, complexity and duration of preparation, limited shelf life - the declared storage period of the starter culture is 30 days (RF Patent No. 2169472, MKP A23S9 / 12, A61K35 / 74, published on 27.06.2001).

Известен способ культивирования бифидобактерий на питательной среде включающей, мас. %: лактопептон (5,0-7,0), цистеин солянокислый (0,001-0,005), дрожжевой автолизат (2,0-4,0), обрат молока (основа) - остальное (RU 2326940 С1). Недостатком описанной среды является нестабильность культивирования бактерий из-за несбалансированности по минеральному составу (отсутствуют минеральные компоненты).A known method of cultivating bifidobacteria on a nutrient medium including, by weight. %: lactopeptone (5.0-7.0), cysteine hydrochloric acid (0.001-0.005), yeast autolysate (2.0-4.0), milk return (base) - the rest (RU 2326940 C1). The disadvantage of the described environment is the instability of the cultivation of bacteria due to imbalance in the mineral composition (there are no mineral components).

Известен способ культивирования бифидобактерий в питательной среде, содержащей гидролизат гороха, отвар листьев и стеблей люцерны, кукурузный экстракт, Д(-)-лактозу, натрий фосфорнокислый однозамещенный, сульфат железа семиводный, цистеин и осветленную творожную сыворотку (RU 2644679).A known method of cultivating bifidobacteria in a nutrient medium containing pea hydrolyzate, decoction of alfalfa leaves and stems, corn extract, D (-) - lactose, sodium phosphate monosubstituted, ferrous sulfate, cysteine and clarified curd whey (RU 2644679).

Известен способ получения питательной среды для культивирования лактобактерий, включающей отвар капусты, глюкозу и в качестве дополнительных источников питания гидролизат крови убойных животных, дрожжевой аутолизат и молочную сыворотку (RU 2551960). Недостатком является специфичность ингредиентов (необходимость использования свежей крови животных) и сложный процесс кислотного гидролиза последней.A known method of obtaining a nutrient medium for the cultivation of lactobacilli, including a decoction of cabbage, glucose and, as additional food sources, a blood hydrolyzate of slaughter animals, yeast autolysate and whey (RU 2551960). The disadvantage is the specificity of the ingredients (the need to use fresh animal blood) and the complex process of acid hydrolysis of the latter.

Известен способ получения кормового соево-кукурузного субстрата, предназначенного для выращивания пробиотических культур. Способ предусматривает использование измельченных бобов сои и зерна кукурузы для получения выварочного бульона и питательного субстрата для выращивания пробиотических культур (RU 2685886 C 1).A known method of obtaining fodder soybean-corn substrate intended for growing probiotic crops. The method involves the use of crushed soybeans and corn grains to obtain a boiled broth and a nutrient substrate for growing probiotic cultures (RU 2685886 C 1).

Наиболее близким по технической сущности, выбранным в качестве прототипа, является «Способ приготовления питательной среды для выращивания пробиотических культур». Способ предусматривает получение соевого гидролизата из расчета 24 – 28 граммов сухого соевого молока на 1 л воды. Гидролиз проводится под воздействием фермента пепсина в течение 48 часов, обеспечивая полный гидролиз белков. Гидролизат подвергают фильтрации и стерилизации, с последующим добавлением пептона, глюкозы и воды в заданном соотношении компонентов с получением питательной среды. Питательную среду фильтруют, устанавливают рН в пределах 6,8 – 7,0 и стилизуют при заданных параметрах (RU 2646163 C1). Среда позволяет в течение короткого времени получить большую массу микроорганизмов. Недостатком данного способа получения является ограниченность среды по питательным компонентам. Интенсивный рост микроорганизмов приводит к быстрому истощению питательных ресурсов среды и ее закислению, что негативно сказывается на сохранении жизнеспособности пробиотических микроорганизмов. Кроме, того в жидкой питательной среде происходит быстрое осаждение микробной массы, приводящее к пространственной ограниченности, снижению контакта клеток со средой, нарушению обменных процессов.The closest in technical essence, selected as a prototype, is "Method for preparing a nutrient medium for growing probiotic cultures." The method provides for the production of soy hydrolyzate at the rate of 24 - 28 grams of dry soy milk per 1 liter of water. Hydrolysis is carried out under the influence of the enzyme pepsin for 48 hours, ensuring complete hydrolysis of proteins. The hydrolyzate is subjected to filtration and sterilization, followed by the addition of peptone, glucose and water in a predetermined ratio of components to obtain a nutrient medium. The culture medium is filtered, the pH is adjusted within the range of 6.8 - 7.0, and stylized at the given parameters (RU 2646163 C1). The medium makes it possible to obtain a large mass of microorganisms in a short time. The disadvantage of this method of obtaining is the limited environment for nutrient components. The intensive growth of microorganisms leads to a rapid depletion of the nutrient resources of the environment and its acidification, which negatively affects the preservation of the viability of probiotic microorganisms. In addition, in a liquid nutrient medium, a rapid deposition of the microbial mass occurs, leading to spatial limitation, a decrease in the contact of cells with the environment, and a violation of metabolic processes.

Целью наших исследований была разработка новой питательной среды для выращивания пробиотических культур (бифидобактерий), обеспечивающей оптимальное накопление и сохранение микробной массы в жизнеспособном состоянии, простой в производстве.The aim of our research was to develop a new nutrient medium for growing probiotic cultures (bifidobacteria), providing optimal accumulation and preservation of microbial mass in a viable state, easy to produce.

Наша задача решается тем, что на стадии приготовления ростовой среды в воду, помимо соевого гидролизата и пептона, вносится нанофильтрат творожной сыворотки, содержащий лактулозу в массовой доле 70% в сухом веществе. Технология производства нанофильтрата творожной сыворотки защищена патентом RU 2617940 (владелец  ФГБОУ ВО Вологодская ГМХА) (RU)). Нанофильтрат вносится в количестве 3% от объёма подготавливаемой питательной среды. Лактулоза обладает одним из самых высоких пребиотических индексов, кроме того попадая в организм она не расщепляется в верхних отделах желудочно-кишечного тракта, переходит в толстый кишечник, выполняя роль пребиотика. Продукт растительного гидролиза обеспечивает полноценный белковый состав питательной среды, а лактулоза служит источником углеводов.Our task is solved by the fact that at the stage of preparation of the growth medium, in addition to soy hydrolyzate and peptone, a nanofiltrate of curd whey is added to the water, containing lactulose in a mass fraction of 70% in dry matter. The technology for the production of curd whey nanofiltrate is protected by the patent RU 2617940 (owner of the Vologda State Medical Academy of Fine Arts) (RU)). Nanofiltrate is introduced in the amount of 3% of the volume of the prepared nutrient medium. Lactulose has one of the highest prebiotic indices, in addition, when it enters the body, it is not broken down in the upper gastrointestinal tract, passes into the large intestine, acting as a prebiotic. The product of plant hydrolysis provides a complete protein composition of the nutrient medium, and lactulose serves as a source of carbohydrates.

Кроме того в ростовую среду вносится агар-агар в количестве, обеспечивающем его содержание в объёме подготавливаемой среды 0,2%, что обеспечивает равномерное распределение микробной массы в процессе роста по объему среды.In addition, agar-agar is added to the growth medium in an amount that ensures its content in the volume of the prepared medium of 0.2%, which ensures a uniform distribution of the microbial mass during the growth process over the volume of the medium.

Таким образом, заявляемый способ соответствует критерию «новизна».Thus, the proposed method meets the criterion of "novelty".

Анализ патентной и научно-технической информации показал отсутствие аналогичных способов экстренной профилактики иерсиниозов животных. При анализе известных решений в области ветеринарии признаки, отличающие заявляемое решение от прототипа, не выявлены. Это позволяет сделать вывод о его соответствии критерию «существенные отличия».Analysis of patent and scientific and technical information showed the absence of similar methods of emergency prevention of animal yersiniosis. When analyzing the known solutions in the field of veterinary medicine, the signs that distinguish the proposed solution from the prototype were not identified. This allows us to conclude that it meets the criterion of "significant differences".

Пример 1. Приготовление питательной среды в оптимальных параметрах.Example 1. Preparation of a nutrient medium in optimal parameters.

Сухое соевое молоко в количестве 28 г размешивают в одном литре воды подогретой до 45-50°С, постоянно помешивая до получения однородной жидкости. После охлаждения смеси до 37ºС в неё вносят фермент и помещают в термостат. Через 48 часов гидролизат фильтруют и автоклавируют при 1 атм в течение часа. Далее готовят ростовую среду. Для ее приготовления к фильтрованной воды добавляют 1 г пептона, 120 мл соевого гидролизата, 30 мл нанофильтрата творожной сыворотки и 2 г агар-агара микробиологического. Смесь нагревают до кипения. После охлаждения фильтруют через бумажный фильтр и устанавливают рН - 6,8 – 7,0. Среду стерилизуют автоклавированием при 1 атм 30 минут. Среда готова для использования. В ростовую среду вносят посевной материал, приготовленный на чистых культурах Bifidobacterium thermophilum тп-87 из расчёта соотношения посевного материала и ростовой среды - 1:20. В серии посевов получена конечная концентрация 1,3×107 КОЕ/г. Лактулоза в оптимальной концентрации обеспечивает высокую ростовую продуктивность пробиотической культуры. Проверка жизнеспособности микробных клеток через 3 месяца показала рост до 9 разведения 1,4×109 КОЕ/г.Dry soy milk in an amount of 28 g is stirred in one liter of water heated to 45-50 ° C, stirring constantly until a homogeneous liquid is obtained. After cooling the mixture to 37 ° C, the enzyme is introduced into it and placed in a thermostat. After 48 hours, the hydrolyzate is filtered and autoclaved at 1 ATM for an hour. Next, a growth medium is prepared. For its preparation, 1 g of peptone, 120 ml of soy hydrolyzate, 30 ml of curd whey nanofiltrate and 2 g of microbiological agar-agar are added to the filtered water. The mixture is heated to boiling. After cooling, it is filtered through a paper filter and the pH is adjusted to 6.8 to 7.0. The medium is sterilized by autoclaving at 1 ATM for 30 minutes. The environment is ready for use. The inoculum prepared on pure cultures of Bifidobacterium thermophilum TP-87 is introduced into the growth medium at the rate of the ratio of inoculum and growth medium - 1:20. In a series of crops, a final concentration of 1.3 × 10 7 CFU / g was obtained. Lactulose in optimal concentration provides high growth productivity of the probiotic culture. Checking the viability of microbial cells after 3 months showed an increase to 9 dilutions of 1.4 × 10 9 CFU / g.

Пример 2. Приготовление притягательной среды с внесением увеличенного количества нанофильтрата творожной сыворотки - 50 г.Example 2. Preparation of an attractive environment with the introduction of an increased amount of curd whey nanofiltrate - 50 g.

Сухое соевое молоко в количестве 28 г размешивают в одном литре воды подогретой до 45-50°С, постоянно помешивая до получения однородной жидкости. После охлаждения смеси до 37ºС в неё вносят фермент и помещают в термостат. Через 48 часов гидролизат фильтруют и автоклавируют при 1 атм в течение часа. Далее готовят ростовую среду. Для ее приготовления к фильтрованной воды добавляют 1 г пептона, 120 мл соевого гидролизата, 50 мл нанофильтрата творожной сыворотки и 2 г агар-агара микробиологического. Смесь нагревают до кипения. После охлаждения фильтруют через бумажный фильтр и устанавливают рН - 6,8 – 7,0. Среду стерилизуют автоклавированием при 1 атм 30 минут. Среда готова для использования. В ростовую среду вносят посевной материал, приготовленный на чистых культурах Bifidobacterium thermophilum тп-87 из расчёта соотношения посевного материала и ростовой среды - 1:20. В серии посевов получена конечная концентрация 2,5×104 КОЕ/г. Лактулоза в больших количествах оказывает угнетающее действие на рост пробиотической культуры.Dry soy milk in an amount of 28 g is stirred in one liter of water heated to 45-50 ° C, stirring constantly until a homogeneous liquid is obtained. After cooling the mixture to 37 ° C, the enzyme is introduced into it and placed in a thermostat. After 48 hours, the hydrolyzate is filtered and autoclaved at 1 ATM for an hour. Next, a growth medium is prepared. For its preparation, 1 g of peptone, 120 ml of soy hydrolyzate, 50 ml of curd whey nanofiltrate and 2 g of microbiological agar-agar are added to the filtered water. The mixture is heated to boiling. After cooling, it is filtered through a paper filter and the pH is adjusted to 6.8 to 7.0. The medium is sterilized by autoclaving at 1 ATM for 30 minutes. The environment is ready for use. The inoculum prepared on pure cultures of Bifidobacterium thermophilum TP-87 is introduced into the growth medium at the rate of the ratio of inoculum and growth medium - 1:20. In a series of inoculations, a final concentration of 2.5 × 10 4 CFU / g was obtained. Lactulose in large quantities has a depressing effect on the growth of probiotic culture.

Пример 3. Приготовление питательной среды без внесения агар-агара микробиологическогоExample 3. Preparation of a nutrient medium without adding microbiological agar-agar

Сухое соевое молоко в количестве 28 г размешивают в одном литре воды подогретой до 45-50°С, постоянно помешивая до получения однородной жидкости. После охлаждения смеси до 37ºС в неё вносят фермент и помещают в термостат. Через 48 часов гидролизат фильтруют и автоклавируют при 1 атм в течение часа. Далее готовят ростовую среду. Для ее приготовления к фильтрованной воды добавляют 1 г пептона, 120 мл соевого гидролизата, 30 мл нанофильтрата творожной сыворотки. Смесь нагревают до кипения. После охлаждения фильтруют через бумажный фильтр и устанавливают рН 6,8–7,0. Среду стерилизуют автоклавированием при 1 атм 30 минут. Среда готова для использования. В ростовую среду вносят посевной материал, приготовленный на чистых культурах Bifidobacterium thermophilum тп-87 из расчёта соотношения посевного материала и ростовой среды - 1:20. В серии посевов получена конечная концентрация 2,5×109 КОЕ/г. Проверка жизнеспособности микробных клеток через 3 месяца показала рост до 5 разведения 3,2×105 КОЕ/г. Таким образом, агаризация среды приводила к замедлению скорости накопления микробной массы, но способствовала их более длительной сохранности.Dry soy milk in an amount of 28 g is stirred in one liter of water heated to 45-50 ° C, stirring constantly until a homogeneous liquid is obtained. After cooling the mixture to 37 ° C, the enzyme is introduced into it and placed in a thermostat. After 48 hours, the hydrolyzate is filtered and autoclaved at 1 ATM for an hour. Next, a growth medium is prepared. For its preparation, 1 g of peptone, 120 ml of soy hydrolyzate, 30 ml of nanofiltrate of curd whey are added to filtered water. The mixture is heated to boiling. After cooling, it is filtered through a paper filter and the pH is adjusted to 6.8–7.0. The medium is sterilized by autoclaving at 1 ATM for 30 minutes. The environment is ready for use. The inoculum prepared on pure cultures of Bifidobacterium thermophilum TP-87 is introduced into the growth medium at the rate of the ratio of inoculum and growth medium - 1:20. In a series of inoculations, a final concentration of 2.5 × 10 9 CFU / g was obtained. Checking the viability of microbial cells after 3 months showed an increase to 5 dilutions of 3.2 × 10 5 CFU / g. Thus, agarization of the medium slowed down the rate of accumulation of microbial mass, but contributed to their longer preservation.

Claims (1)

Способ производства ростовой среды, предназначенной для выращивания культур рода Bifidobacterium, включающий использование на 1000 мл фильтрованной воды 120 мл соевого гидролизата, 1 г пептона и отличающийся от аналогов тем, что содержит нанофильтрат творожной сыворотки в концентрации 3% от общего объема питательной среды и микробиологический агар-агар в концентрации 0,2% в готовой среде, обеспечивающей гелезирование среды.A method for the production of a growth medium intended for growing cultures of the genus Bifidobacterium, including the use of 120 ml of soy hydrolyzate, 1 g of peptone per 1000 ml of filtered water, and differs from analogues in that it contains nanofiltrate of curd whey at a concentration of 3% of the total volume of the nutrient medium and microbiological agar - agar in a concentration of 0.2% in a ready-made medium that provides gelation of the medium.
RU2020118509A 2020-06-04 2020-06-04 Method for producing a growth medium containing a nanofiltrate of curd whey intended for cultivation of probiotic cultures RU2757137C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2020118509A RU2757137C1 (en) 2020-06-04 2020-06-04 Method for producing a growth medium containing a nanofiltrate of curd whey intended for cultivation of probiotic cultures

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2020118509A RU2757137C1 (en) 2020-06-04 2020-06-04 Method for producing a growth medium containing a nanofiltrate of curd whey intended for cultivation of probiotic cultures

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2757137C1 true RU2757137C1 (en) 2021-10-11

Family

ID=78286520

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2020118509A RU2757137C1 (en) 2020-06-04 2020-06-04 Method for producing a growth medium containing a nanofiltrate of curd whey intended for cultivation of probiotic cultures

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2757137C1 (en)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2087532C1 (en) * 1994-06-15 1997-08-20 Акционерное общество "Русский йогурт" Nutrient medium for bifidobacterium biomass accumulation
RU2540022C2 (en) * 2013-05-06 2015-01-27 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Восточно-Сибирский государственный университет технологий и управления" Method of obtaining bacterial concentrate of bifidobacteria in liquid form
RU2646163C1 (en) * 2016-10-14 2018-03-01 Федеральное государственное бюджетное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии имени Я.Р. Коваленко Method of preparing the nutrient medium for growing the probiotic crops

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2087532C1 (en) * 1994-06-15 1997-08-20 Акционерное общество "Русский йогурт" Nutrient medium for bifidobacterium biomass accumulation
RU2540022C2 (en) * 2013-05-06 2015-01-27 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Восточно-Сибирский государственный университет технологий и управления" Method of obtaining bacterial concentrate of bifidobacteria in liquid form
RU2646163C1 (en) * 2016-10-14 2018-03-01 Федеральное государственное бюджетное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии имени Я.Р. Коваленко Method of preparing the nutrient medium for growing the probiotic crops

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ШОХАЛОВА В.Н. и др. "Деминерализация и нейтрализация творожной сыворотки в процессе нанофильтрации".//Молочный вестник, 2016, N 1(2), I кв., с.98-104. *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP5517215B2 (en) Fermentation and culture method, plant fermented extract, plant fermented extract powder and blended plant fermented extract
CN101278702B (en) Novel microbial feed additive and method of producing the same
RU2412612C1 (en) Method for production of "ferm km" probiotic fodder additive for domestic animals and birds
CN101098957A (en) Method of producing lactic acid bacterium having antiallergic effect
CN103283972A (en) A solid fermentation method for producing the probiotic agent of live Clostridium butyricum
CN109563473A (en) Lactobacillus salivarius CJLS1511, the method added composition containing the animal feed of the bacterium or dead cell and produce dead cell
CN107043724B (en) Bacillus licheniformis and separation method and application thereof
CN105859839A (en) Biological active peptide for promoting growth of piglet and preparation method and application thereof
RU2646163C1 (en) Method of preparing the nutrient medium for growing the probiotic crops
RU2757137C1 (en) Method for producing a growth medium containing a nanofiltrate of curd whey intended for cultivation of probiotic cultures
Popov et al. Overview of metabiotics and probiotic cultures during fermentation of molasses
CN107058181B (en) Bacillus subtilis and separation method and application thereof
RU2366448C2 (en) Method for making preparation used for treatment of radiation injuries in animals and treatment method of radiation injuries in animals
CN108464509B (en) Application of novel lactobacillus fermentum in food field
CN105994938A (en) Production method of compound bacterium solid-state fermented maize protein meal
RU2758880C1 (en) Method for producing biological preparation for correcting metabolism in pre-nursery pigs
CN110628683A (en) Probiotic compound live bacterium preparation for preventing and treating chicken diarrhea and preparation method thereof
RU2517734C1 (en) Method to prepare medicated product from live strains and microorganisms of lactobacilli and bifidobacteria "lb-complex plus"
RU2753363C1 (en) Method for increasing resistance of lactic bacteria for probiotic supplement
TWI458438B (en) Fermentation and culture methods, plant fermentation extracts, plant fermentation extract powders, and plant fermentation extract complexes
RU2253673C2 (en) Method for production of pancreatic protein hydrolyzate and broth for bifidus bacteria cultivation using the same
RU2694256C2 (en) Fodder additive for preventing bacterial carry-over of salmonella microorganisms in agricultural poultry and method for use thereof
RU2662949C1 (en) Method for obtaining a native symbiotic preparation
KR20170109454A (en) Composition and Method of Probiotics Stabilization Comprising Poly-Gamma-Glutamic Acid
RU2468079C1 (en) Bacterium lactobacillus reuteri okt strain, used for production of probiotic preparations for poultry