RU2753274C1 - Method for predicting risk of developing chronic true eczema in women, taking into account genetic factors - Google Patents

Method for predicting risk of developing chronic true eczema in women, taking into account genetic factors Download PDF

Info

Publication number
RU2753274C1
RU2753274C1 RU2021104010A RU2021104010A RU2753274C1 RU 2753274 C1 RU2753274 C1 RU 2753274C1 RU 2021104010 A RU2021104010 A RU 2021104010A RU 2021104010 A RU2021104010 A RU 2021104010A RU 2753274 C1 RU2753274 C1 RU 2753274C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
risk
women
eczema
developing
gene
Prior art date
Application number
RU2021104010A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Михаил Иванович Чурносов
Анна Владимировна Елыкова
Ирина Васильевна Пономаренко
Татьяна Михайловна Беляева
Original Assignee
Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ")
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") filed Critical Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ")
Priority to RU2021104010A priority Critical patent/RU2753274C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2753274C1 publication Critical patent/RU2753274C1/en

Links

Images

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6806Preparing nucleic acids for analysis, e.g. for polymerase chain reaction [PCR] assay
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/483Physical analysis of biological material
    • G01N33/487Physical analysis of biological material of liquid biological material
    • G01N33/49Blood
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/58Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Ecology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

FIELD: medicine.
SUBSTANCE: invention relates to the field of medicine and is intended to predict the risk of developing chronic true eczema (CTE) in unrelated Russian patients, a native of the Central Black Earth region of the Russian Federation. DNA is isolated from the peripheral venous blood. Analysis of the genetic markers of the filaggrin gene is carried out. Identification of the ACTGGAT haplotype of the polymorphic loci rs558269137, rs61816761, rs3126085 and rs12144049 of the FLG gene, where ACTG refers to the rs558269137 polymorphism, predicts a high risk of developing CTE in women.
EFFECT: invention ensures the receipt of criteria for assessing the risk of developing CTE in women born and living in the Central Black Earth Region of Russia, who have Russian nationality and are not relatives.
1 cl, 4 dwg, 2 ex

Description

Экзема является распространенным хроническим заболеванием, характеризующимся воспалением кожи. От нее, по оценкам ученых, страдают около сорока миллионов человек по всему миру (Plötz S.G., Wiesender M., Todorova A., et al. What is new in atopic dermatitis/eczema? // Expert Opin. Emerg. Drugs. 2014;19:441–458), и заболеваемость ею продолжает расти. Eczema is a common chronic disease characterized by skin inflammation. According to scientists, about forty million people worldwide suffer from it (Plötz SG, Wiesender M., Todorova A., et al. What is new in atopic dermatitis / eczema? // Expert Opin. Emerg. Drugs. 2014; 19: 441-458), and its incidence continues to rise.

С точки зрения общего понятия экзема - это острое или хроническое рецидивирующее воспалительное заболевание кожи, вызываемое различными экзогенными и эндогенными факторами, характеризующееся полиморфной сыпью и зудом (Дерматовенерология. Национальное руководство / под ред. Ю.К. Скрипкина, Ю. С. Бутова, О.Л. Иванова. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2014. - 1024 с.). From the point of view of the general concept, eczema is an acute or chronic recurrent inflammatory skin disease caused by various exogenous and endogenous factors, characterized by polymorphic rash and itching (Dermatovenereology. National Guide / edited by Yu.K. Skripkin, Yu.S. Butov, O L. Ivanova. - M .: GEOTAR-Media, 2014. - 1024 p.).

С клинической точки зрения для экземы, в том числе истинной, присущ особый симптомо-комплекс: серозные колодцы, зуд и эволюционный полиморфизм, которые в свою очередь приводят к обезвоживанию эпидермиса на пораженных участках (Thomsen S.F. Atopic Dermatitis: Natural history, diagnosis, and treatment // ISRN Allergy. 2014;2014). Преобладающие в клинической картине острой экземы серозные (экзематозные) колодцы, представляющие собой эрозии на месте вскрывшихся пузырьков и обильно отделяющие серозный экссудат, а также упоминание о их наличии в анамнезе при хронической экземе, можно считать патогномоничным признаком экземы. Благодаря этим симптомам, пациенты с экземой обычно имеют значительное снижение качества жизни, так как в первую очередь испытывают зуд, нарушения сна и снижение психологического благополучия (Solomon I., Ilie M.A., Draghici C., et al. The impact of lifestyle factors on evolution of atopic dermatitis: An alternative approach // Exp Ther Med. 2019;17(2):1078‐1084).From a clinical point of view, eczema, including true eczema, is characterized by a special symptom-complex: serous wells, itching and evolutionary polymorphism, which in turn lead to dehydration of the epidermis in the affected areas (Thomsen SF Atopic Dermatitis: Natural history, diagnosis, and treatment // ISRN Allergy. 2014; 2014). Serous (eczematous) wells prevailing in the clinical picture of acute eczema, which are erosion at the site of the opened vesicles and abundantly separating serous exudate, as well as the mention of their presence in the history of chronic eczema, can be considered a pathognomonic sign of eczema. Due to these symptoms, patients with eczema usually have a significant decrease in the quality of life, as they primarily experience itching, sleep disturbances and a decrease in psychological well-being (Solomon I., Ilie MA, Draghici C., et al. The impact of lifestyle factors on evolution of atopic dermatitis: An alternative approach // Exp Ther Med. 2019; 17 (2): 1078-1084).

Учитывая все вышесказанное, экзему следует считать, как это принято среди российского научного дерматологического сообщества, отдельной нозологией.Considering all of the above, eczema should be considered, as is customary among the Russian scientific dermatological community, a separate nosology.

Экзема формируется в результате воздействия сложного комплекса этиологических и патогенетических факторов, в том числе нейроэндокринных, метаболических, инфекционно-аллергических, вегето-сосудистых и наследственных (Sehgal V.N., Khurana A., Mendiratta V., et al. Atopic Dermatitis; Etio-Pathogenesis, An Overview // Indian J Dermatol. 2015;60(4):327‐331).Eczema is formed as a result of exposure to a complex complex of etiological and pathogenetic factors, including neuroendocrine, metabolic, infectious-allergic, vegetative-vascular and hereditary (Sehgal VN, Khurana A., Mendiratta V., et al. Atopic Dermatitis; Etio-Pathogenesis, An Overview // Indian J Dermatol. 2015; 60 (4): 327-331).

Заболевание вызывается многообразным и многогранным рядом экзогенных триггерных факторов: (бактериальными, грибковыми и вирусными инфекционными агентами, химическими и биологическими веществами, физическими факторами, лекарственными средствами и медикаментами, пищевыми продуктами, косметическими средствами и др.) и эндогенных факторов (генетической предрасположенностью, патологией имунной системы, наличием сенсибилизации к различным аллергенам, наличием инфекционных и неинфекционных заболеваний, антигенными свойствами микроорганизмов из очагов хронической инфекции, гиперреактивностью кожи) (Park K.D., Pak S.C., Park K.K. The Pathogenetic Effect of Natural and Bacterial Toxins on Atopic Dermatitis // Toxins (Basel). 2016;9(1):3).The disease is caused by a diverse and multifaceted number of exogenous trigger factors: (bacterial, fungal and viral infectious agents, chemical and biological substances, physical factors, drugs and medication, food, cosmetics, etc.) and endogenous factors (genetic predisposition, immune pathology system, the presence of sensitization to various allergens, the presence of infectious and non-infectious diseases, antigenic properties of microorganisms from foci of chronic infection, hyperreactivity of the skin) (Park KD, Pak SC, Park KK The Pathogenetic Effect of Natural and Bacterial Toxins on Atopic Dermatitis // Toxins (Basel ). 2016; 9 (1): 3).

Важный вклад в формирование подверженности к развитию экземы вносят мутации в гене филаггрина (Marenholz I., Esparza-Gordillo J., Rüschendorf F., et al. Meta-analysis identifies seven susceptibility loci involved in the atopic march // Nat Commun. 2015;6:8804). Различными научными коллективами активно изучаются ассоциации мутаций гена филаггрина, связанных с потерей функции (loss-of-function variants), с формированием экземы.An important contribution to the formation of susceptibility to the development of eczema is made by mutations in the filaggrin gene (Marenholz I., Esparza-Gordillo J., Rüschendorf F., et al. Meta-analysis identifies seven susceptibility loci involved in the atopic march // Nat Commun. 2015; 6: 8804). Various scientific teams are actively studying the associations of mutations in the filaggrin gene associated with loss-of-function variants with the formation of eczema.

Филаггрин – это многофункциональный, богатый гистидином, нерастворимый эпидермальный белок, синтезируемый в виде крупного предшественника (400 kDa) под названием профилаггрин и хранящийся в гранулах кератогиалина (Cau L., Pendaries V., Lhuillier E., et al. Lowering relative humidity level increases epidermal protein deimination and drives human filaggrin breakdown // Dermatol Sci. 2017;86(2):106–113.). Профилаггрин (рисунок 2) посттрансляционно расщепляется на отдельные филаггриновые пептиды, которые связываются с кератиновыми нитями и агрегируют в цитоскелете кератиноцитов, конденсируясь в плотные пучки (Pin D., Pendaries V., Keita Alassane S., et al. Refined Immunochemical Characterization in Healthy Dog Skin of the Epidermal Cornification Proteins, Filaggrin, and Corneodesmosin // J Histochem Cytochem. 2019;67(2):85–97.). Это способствует поддержанию сцепления и постоянства между корнеоцитами, которые образуют кожный барьер, тем самым предотвращая трансэпидермальную потерю воды и защищая от неблагоприятного воздействия внешних факторов, таких как патогенные микроорганизмы и аллергены (Goleva E., Berdyshev E., Leung D.Y. Epithelial barrier repair and prevention of allergy // J Clin Invest. 2019;129(4):1463‐1474.). Кроме того, отдельные пептиды филаггрина далее разлагаются на свободные аминокислоты, которые, в свою очередь, расщепляются на урокановую и пирролидонкарбоновую кислоты, защищающие кожу от ультрафиолетового излучения и способствующие естественному ее увлажнению и поддерживающие рH градиента кожи (McAleer M.A., Jakasa I., Raj N., et al. Early-life regional and temporal variation in filaggrin-derived natural moisturizing factor, filaggrin-processing enzyme activity, corneocyte phenotypes and plasmin activity: implications for atopic dermatitis // Br J Dermatol. 2018;179(2):431–441).Filaggrin is a multifunctional, histidine-rich, insoluble epidermal protein synthesized as a large precursor (400 kDa) called profilaggrin and stored in keratohyalin granules (Cau L., Pendaries V., Lhuillier E., et al. Lowering relative humidity level increases epidermal protein deimination and drives human filaggrin breakdown // Dermatol Sci. 2017; 86 (2): 106-113.). Profilaggrin (Figure 2) is post-translationally cleaved into individual filaggrin peptides that bind to keratin filaments and aggregate in the cytoskeleton of keratinocytes, condensing into dense bundles (Pin D., Pendaries V., Keita Alassane S., et al. Refined Immunochemical Characterization in Skin of the Epidermal Cornification Proteins, Filaggrin, and Corneodesmosin // J Histochem Cytochem. 2019; 67 (2): 85–97.). This helps to maintain adhesion and constancy between corneocytes, which form the skin barrier, thereby preventing transepidermal water loss and protecting against adverse effects of external factors such as pathogens and allergens (Goleva E., Berdyshev E., Leung DY Epithelial barrier repair and prevention of allergy // J Clin Invest. 2019; 129 (4): 1463-1474.). In addition, individual filaggrin peptides are further degraded into free amino acids, which, in turn, are degraded into urocanic and pyrrolidone carboxylic acids, which protect the skin from ultraviolet radiation and promote its natural hydration and maintain the pH gradient of the skin (McAleer MA, Jakasa I., Raj N ., et al. Early-life regional and temporal variation in filaggrin-derived natural moisturizing factor, filaggrin-processing enzyme activity, corneocyte phenotypes and plasmin activity: implications for atopic dermatitis // Br J Dermatol. 2018; 179 (2): 431 –441).

Таким образом, филаггрин играет ключевую роль в формировании барьера кожи, он участвует в поддержании уровня гидратации в эпидермисе, регуляции рH кожи, антибактериальной защите и устойчивости кожи к ультрафиолетовому излучению (Margolis D.J., Mitra N., Gochnauer H., et al. Uncommon Filaggrin Variants Are Associated with Persistent Atopic Dermatitis in African Americans // J Invest Dermatol. 2018;138(7):1501–1506). Согласно литературным данным, недостаток филаггрина лежит как в основе патогенеза различных кожных болезней (экзема, аллергический контактный дерматит, вульгарный ихтиоз), а также связан с формированием не кожных заболеваний (сахарный диабет, воспалительные заболевания желудочно-кишечного тракта) (Ziyab A.H., Ewart S., Lockett G.A., et al. Expression of the filaggrin gene in umbilical cord blood predicts eczema risk in infancy: A birth cohort study // Clin Exp Allergy. 2017;47(9):1185–1192.).Thus, filaggrin plays a key role in the formation of the skin barrier, it is involved in maintaining the level of hydration in the epidermis, regulation of skin pH, antibacterial protection and skin resistance to ultraviolet radiation (Margolis DJ, Mitra N., Gochnauer H., et al. Uncommon Filaggrin Variants Are Associated with Persistent Atopic Dermatitis in African Americans // J Invest Dermatol. 2018; 138 (7): 1501-1506). According to the literature, the lack of filaggrin underlies the pathogenesis of various skin diseases (eczema, allergic contact dermatitis, ichthyosis vulgaris), and is also associated with the formation of non-skin diseases (diabetes mellitus, inflammatory diseases of the gastrointestinal tract) (Ziyab AH, Ewart S ., Lockett GA, et al. Expression of the filaggrin gene in umbilical cord blood predicts eczema risk in infancy: A birth cohort study // Clin Exp Allergy. 2017; 47 (9): 1185-1192.).

На сегодняшний день идентифицировано около 60 мутаций в гене FLG, связанных с потерей функции филаггрина (loss-of-function variants ). Установлено, что мутации, приводящие к потере функции или нулевые мутации гена филаггрина, обусловливают образование неактивной формы синтезированного полипептида (вследствие преждевременного прекращения синтеза, сигналом для которого являются появившиеся в результате мутаций стоп-кодоны). Это в конечном итоге приводит к низкой концентрации профилаггрина в зернистом слое эпидермиса, что в последующем определяет формирование аномально тонкого слоя кератиноцитов, и является морфологическим субстратом, лежащим в основе предрасположенности к хроническим заболеваниям кожи (дерматит, экзема, псориаз и др.) (Čepelak I., Dodig S., Pavić I. Filaggrin and atopic march // Biochem Med (Zagreb). 2019;29(2):020501).To date, about 60 mutations have been identified in the FLG gene associated with loss-of-function variants. It was found that mutations leading to loss of function or null mutations in the filaggrin gene cause the formation of an inactive form of the synthesized polypeptide (due to premature termination of synthesis, the signal for which is the stop codons that appeared as a result of mutations). This ultimately leads to a low concentration of profilaggrin in the granular layer of the epidermis, which subsequently determines the formation of an abnormally thin layer of keratinocytes, and is a morphological substrate underlying the predisposition to chronic skin diseases (dermatitis, eczema, psoriasis, etc.) (Čepelak I ., Dodig S., Pavić I. Filaggrin and atopic march // Biochem Med (Zagreb). 2019; 29 (2): 020501).

Частота мутаций гена FLG в общей популяции составляет 8-10%, причем существуют значительные межэтнические различия в их распространенности (Park K.D., Pak S.C., Park K.K. The Pathogenetic Effect of Natural and Bacterial Toxins on Atopic Dermatitis // Toxins (Basel). 2016;9(1):3).The frequency of mutations of the FLG gene in the general population is 8-10%, and there are significant interethnic differences in their prevalence (Park KD, Pak SC, Park KK The Pathogenetic Effect of Natural and Bacterial Toxins on Atopic Dermatitis // Toxins (Basel). 2016; 9 (1): 3).

Согласно данным литературы, мутации в гене филаггрина связаны с развитием различных заболеваний кожи, таких как экзема, аллергический контактный дерматит, атопический дерматит, вульгарный ихтиоз, герпетическая экзема и др., а также являются факторами риска развития аллергического ринита, бронхиальной астмы, сахарного диабета и др. According to the literature, mutations in the filaggrin gene are associated with the development of various skin diseases such as eczema, allergic contact dermatitis, atopic dermatitis, ichthyosis vulgaris, herpetic eczema, etc., and are also risk factors for the development of allergic rhinitis, bronchial asthma, diabetes mellitus and dr.

Мутации в гене FLG, связанные с потерей функции являются известными факторами риска развития экземы и встречаются у 10-50% больных (Leitch C.S., Natafji E., Yu C., et al. Filaggrin-null mutations are associated with increased maturation markers on Langerhans cells // J Allergy Clin Immunol. 2016;138(2):482‐490.e7). Они снижают экспрессию филаггрина и способствуют возникновению функциональных дефектов эпидермального барьера (Wallmeyer L., Dietert K., Sochorová M., et al. TSLP is a direct trigger for T cell migration in filaggrin-deficient skin equivalents // Sci Rep. 2017;7(1):774). Имеются данные, что у больных экземой, имеющих мутации в гене FLG наблюдается более тяжелое течение заболевания и повышенная аллергическая сенсибилизация, чем у пациентов с экземой не имеющих данных мутаций. Кроме того, следует отметить, что наличие мутаций в гене FLG у женщины увеличивает в 1,5 раза риск развития экземы у ее ребенка (р=8,4x10-8), даже если он и не унаследовал от матери данный генетический дефект (Esparza-Gordillo J., Matanovic A., Marenholz I., et al. Maternal filaggrin mutations increase the risk of atopic dermatitis in children: an effect independent of mutation inheritance // PLoS Genet. 2015;11(3):e1005076).Mutations in the FLG gene associated with loss of function are known risk factors for the development of eczema and occur in 10-50% of patients (Leitch CS, Natafji E., Yu C., et al. Filaggrin-null mutations are associated with increased maturation markers on Langerhans cells // J Allergy Clin Immunol. 2016; 138 (2): 482-490.e7). They reduce the expression of filaggrin and contribute to the appearance of functional defects of the epidermal barrier (Wallmeyer L., Dietert K., Sochorová M., et al. TSLP is a direct trigger for T cell migration in filaggrin-deficient skin equivalents // Sci Rep. 2017; 7 (1): 774). There is evidence that patients with eczema with mutations in the FLG gene have a more severe course of the disease and increased allergic sensitization than patients with eczema who do not have these mutations. In addition, it should be noted that the presence of mutations in the FLG gene in a woman increases the risk of developing eczema in her child by 1.5 times (p = 8.4x10 -8 ), even if he did not inherit this genetic defect from the mother (Esparza- Gordillo J., Matanovic A., Marenholz I., et al. Maternal filaggrin mutations increase the risk of atopic dermatitis in children: an effect independent of mutation inheritance // PLoS Genet. 2015; 11 (3): e1005076).

В Российской Федерации исследования вовлеченности гена филаггрина в формирование предрасположенности к хронической истинной экземе и ее осложнений у женщин единичны и фрагментарны, а данные о роли генетических вариантов rs558269137, rs61816761, rs3126085 и rs12144049 FLG в развитии ХИЭ у женщин отсутствуют.In the Russian Federation, studies of the involvement of the filaggrin gene in the formation of a predisposition to chronic true eczema and its complications in women are sporadic and fragmentary, and there are no data on the role of the genetic variants rs558269137, rs61816761, rs3126085 and rs12144049 FLG in the development of CIE in women.

Для оценки сложившейся патентной ситуации был выполнен поиск по охранным документам за период с 1990 по 2020 гг. Анализ документов производился по направлению: способ прогнозирования риска развития хронической истинной экземы у женщин на основе молекулярно-генетических данных в зависимости от полиморфных маркеров гена филаггрина. Источники информации: сайты Федерального института промышленной собственности http://fips.ru.To assess the current patent situation, a search was carried out on titles of protection for the period from 1990 to 2020. The analysis of the documents was carried out in the direction: a method of predicting the risk of developing chronic true eczema in women on the basis of molecular genetic data depending on polymorphic markers of the filaggrin gene. Sources of information: sites of the Federal Institute of Industrial Property http://fips.ru.

В изученной научно-медицинской и доступной патентной литературе авторами не было обнаружено способа прогнозирования риска развития ХИЭ у женщин на основе данных о гаплотипе WGAT генетических полиморфизмов rs558269137, rs61816761, rs3126085 и rs12144049 гена FLG.In the studied medical scientific and available patent literature, the authors did not find a way to predict the risk of developing CIE in women based on data on the WGAT haplotype of the rs558269137, rs61816761, rs3126085 and rs12144049 genetic polymorphisms of the FLG gene.

Известен способ прогнозирования риска раннего развития профессиональных аллергических дерматозов по патенту РФ №2467330 (опубликован 2012.11.20), включающий забор венозной крови, выделение генетического материала, проведение полимеразной цепной реакции со специфическими праймерами, определение нуклеотидной последовательности и на основании этого определение полиморфизного варианта A4889G цитохрома Р-450 1А1, отличающийся тем, что при проведении полимеразной цепной реакции используют специфические праймеры С1А1-F Biotin - ggT gTT Aag TgA gAA ggT gAT Т C1A1-R Cag gAT AgC Cag gAA gAg AAA, а после проведения полимеразной цепной реакции проводят реакцию пиросеквенирования в режиме реального времени с использованием специфического праймера C1A1-S АСС ТСС Cag Cgg gCA А и детекцию нуклеотидной последовательности с помощью хемилюминесцентного сигнала, далее проводят сравнение полученной нуклеотидной последовательности в положении 4889 с референсными последовательностями, при выявлении на полученной пирограмме отсутствия замены аденина на гуанин и при воздействии на организм вредного производственного фактора раздражающего и сенсибилизирующего действия прогнозируют риск раннего развития профессиональных аллергических дерматозов менее 40%, при выявлении на полученной пирограмме гетерозиготного варианта Сур1А1*2С, обусловленного заменой аденина на гуанин в нуклеотидной последовательности в положении 4889, и при воздействии на организм вредного производственного фактора раздражающего и сенсибилизирующего действия прогнозируют 40÷80% риска раннего развития профессиональных аллергических дерматозов. Недостатком патента является то, что не учитывается влияние на развитие ХИЭ других генетических полиморфизмов и их сочетаний, не учитывается половая специфичность.There is a known method for predicting the risk of early development of occupational allergic dermatoses according to RF patent No. 2467330 (published 2012.11.20), including the collection of venous blood, isolation of genetic material, carrying out a polymerase chain reaction with specific primers, determining the nucleotide sequence and, based on this, determining the polymorphic variant A4889G of cytochrome P-450 1A1, characterized in that when carrying out the polymerase chain reaction, specific primers C1A1-F Biotin are used - ggT gTT Aag TgA gAA ggT gAT T C1A1-R Cag gAT AgC Cag gAA gAg AAA, and after the polymerase chain reaction, a pyrosequencing reaction is carried out in real time using a specific primer C1A1-S ACC TCC Cag Cgg gCA A and detection of the nucleotide sequence using a chemiluminescent signal, then the obtained nucleotide sequence at position 4889 is compared with the reference sequences, if The pyrogram of the absence of replacement of adenine with guanine and when the body is exposed to a harmful production factor of irritating and sensitizing action predict the risk of early development of occupational allergic dermatoses less than 40%, when a heterozygous variant Cyp1A1 * 2C is detected on the obtained pyrogram, due to the replacement of adenine with guanine in the nucleotide sequence in position 4889, and when the body is exposed to a harmful production factor of irritating and sensitizing action, 40 ÷ 80% of the risk of early development of occupational allergic dermatoses is predicted. The disadvantage of the patent is that it does not take into account the influence on the development of CIE of other genetic polymorphisms and their combinations, does not take into account gender specificity.

Известен способ прогноза течения и оценки эффективности лечения атопического дерматита, который заключается в проведении клинического и лабораторного обследования пациентов с верифицированным атопическим дерматитом с определением содержания в сыворотке крови белка - лактоферрина (ЛФ) в мкг/мл, альфа-1-антитрипсина (a1-AT) в г/л, альфа-2-макроглобулина (а2-МГ) в г/л, далее вычисляют коэффициент К по определенной формуле и при его значениях от 6 до 15 прогнозируют легкую степень тяжести заболевания, а при 15 и более -среднюю и тяжелую степень тяжести заболевания, через месяц после лечения проводят повторное обследование с вычислением коэффициента К и при его снижении на 30% и более от его исходного значения лечение считают эффективным, прогнозируют длительную ремиссию, а при снижении коэффициента К менее 30% от его исходного значения лечение считают малоэффективным, прогнозируют короткий период ремиссии и высокий риск рецидива [патент RU 2603463, 2016 г.]. Недостатками данного способа являются несвоевременность оценки эффективности лечения и трудоемкость, а так же то, что не учитывается влияние на развитие ХИЭ других генетических полиморфизмов и их сочетаний, не учитывается половая специфичность.There is a known method for predicting the course and evaluating the effectiveness of treatment of atopic dermatitis, which consists in conducting a clinical and laboratory examination of patients with verified atopic dermatitis with the determination of the serum protein content - lactoferrin (Lf) in μg / ml, alpha-1-antitrypsin (a1-AT ) in g / l, alpha-2-macroglobulin (a2-MG) in g / l, then the K coefficient is calculated according to a certain formula and, with its values from 6 to 15, a mild severity of the disease is predicted, and at 15 or more, the average and severe severity of the disease, a month after treatment, a second examination is carried out with the calculation of the K coefficient and when it decreases by 30% or more from its initial value, treatment is considered effective, long-term remission is predicted, and if the K coefficient decreases to less than 30% of its initial value, treatment consider it ineffective, predict a short period of remission and a high risk of relapse [patent RU 2603463, 2016]. The disadvantages of this method are the delay in assessing the effectiveness of treatment and laboriousness, as well as the fact that the influence of other genetic polymorphisms and their combinations on the development of CIE is not taken into account, sex specificity is not taken into account.

Из уровня техники известен способ прогнозирования среднетяжелого течения хронической истинной экземы у индивидуумов русской национальности, уроженцев Центрального Черноземья РФ (Патент РФ №2578441). Сущность способа заключается в том, что выделяют ДНК из периферической венозной крови, проводят анализ полиморфизмов генов -308G/A TNFα,+250A/G Ltα,+1663A/G TNFR2 и их сочетаний. Повышенный риск развития среднетяжелого течения хронической истинной экземы прогнозируют при наличии аллеля +250G Ltα или сочетании аллеля+250G Ltα с аллелем +1663G TNFR2, или сочетании аллеля -308A TNFα с аллелем +1663G TNFR2, или сочетании аллеля -308G TNFα с аллелем+250G Ltα. Прогнозируют пониженный риск развития среднетяжелого течения ХИЭ при сочетании аллеля -308G TNFα с генотипом +250АА Ltα. Однако известный способ оценивает только генетический риск развития хронической истинной экземы, поскольку исследуются гены рецепторной системы фактора некроза опухоли, отражающие события апоптоза, а что не учитывается влияние на развитие ХИЭ других генетических полиморфизмов и их сочетаний, не учитывается половая специфичность.A method for predicting a moderate course of chronic true eczema in individuals of Russian nationality, natives of the Central Black Earth Region of the Russian Federation (RF Patent No. 2578441) is known from the prior art. The essence of the method lies in the fact that DNA is isolated from peripheral venous blood, analysis of polymorphisms of genes -308G / A TNFα, + 250A / G Ltα, + 1663A / G TNFR2 and their combinations is carried out. An increased risk of developing a moderate course of chronic true eczema is predicted in the presence of the + 250G Ltα allele or the combination of the + 250G Ltα allele with the + 1663G TNFR2 allele, or the combination of the -308A TNFα allele with the + 1663G TNFR2 allele, or the combination of the -308G TNFα allele with the + 250 allele ... A lower risk of developing a moderate course of CIE is predicted when the -308G TNFα allele is combined with the + 250АА Ltα genotype. However, the known method assesses only the genetic risk of developing chronic true eczema, since the genes of the tumor necrosis factor receptor system, reflecting the events of apoptosis, are being investigated, and that the influence of other genetic polymorphisms and their combinations on the development of CIE is not taken into account, and sex specificity is not taken into account.

За прототип выбрана выявленная в научно-медицинской литературе статья, в которой описан способ прогнозирования риска развития хронической истинной экземы (далее ХИЭ) у индивидуумов мужского пола на основе данных о генетическом полиморфизме+250А/G Ltα [Ассоциация полиморфизма лимфотоксина α (+250 A/G Ltα) с формированием хронической истинной экземы [Электронный ресурс] / Я.Е. Денисова, М.И. Чурносов // Современные проблемы науки и образования. - 2014. - №3. - Режим доступа: http://www.science-education.ru/117-13677]. Способ включает забор венозной крови, выделение геномной ДНК из периферической крови и анализ локуса +250 A/G Ltα методом полимеразной цепной реакции (далее ПЦР) синтеза ДНК. Генотип+250GG Ltα является фактором риска развития этого заболевания у мужчин, а протективным фактором - аллель +250А Ltα. Недостатком прототипа является то, что не учитывается влияние на развитие ХИЭ других генетических полиморфизмов и их сочетаний у женщин.For the prototype, an article identified in the scientific and medical literature is selected, which describes a method for predicting the risk of developing chronic true eczema (hereinafter CIE) in males based on data on genetic polymorphism + 250A / G Ltα [Association of polymorphism of lymphotoxin α (+250 A / G Ltα) with the formation of chronic true eczema [Electronic resource] / Ya.E. Denisova, M.I. Churnosov // Modern problems of science and education. - 2014. - No. 3. - Access mode: http://www.science-education.ru/117-13677]. The method includes taking venous blood, isolating genomic DNA from peripheral blood and analyzing the +250 A / G Ltα locus by the polymerase chain reaction (hereinafter PCR) DNA synthesis method. Genotype + 250GG Ltα is a risk factor for the development of this disease in men, and allele + 250A Ltα is a protective factor. The disadvantage of the prototype is that the effect on the development of CIE of other genetic polymorphisms and their combinations in women is not taken into account.

Задачей настоящего исследования является расширение арсенала методов диагностики, а именно создание способа прогнозирования риска развития ХИЭ у женщин на основе данных о полиморфных локусах rs558269137, rs61816761, rs3126085 и rs12144049 гена FLG. The objective of this study is to expand the arsenal of diagnostic methods, namely, to create a method for predicting the risk of developing CIE in women based on data on the polymorphic loci rs558269137, rs61816761, rs3126085, and rs12144049 of the FLG gene.

Технический результат использования изобретения – получение критериев оценки риска развития ХИЭ у женщин, родившихся и проживающих в Центральном Черноземье России, имеющих русскую национальность и не являющихся родственниками, на основе данных о полиморфных локусах rs558269137, rs61816761, rs3126085 и rs12144049 гена FLG.The technical result of using the invention is to obtain criteria for assessing the risk of developing CIE in women born and living in the Central Black Earth Region of Russia, having Russian nationality and not being relatives, based on data on the polymorphic loci rs558269137, rs61816761, rs3126085 and rs12144049 of the FLG gene.

Технический результат достигается с помощью заявленного способа, включающего:The technical result is achieved using the claimed method, including:

- выделение ДНК из периферической венозной крови у женщин, родившихся и проживающих в Центральном Черноземье России, имеющих русскую национальность и не являющихся родственниками;- isolation of DNA from peripheral venous blood in women born and living in the Central Black Earth Region of Russia, having Russian nationality and not being relatives;

- анализ полиморфизмов rs558269137, rs61816761, rs3126085 и rs12144049 гена FLG; - analysis of polymorphisms rs558269137, rs61816761, rs3126085 and rs12144049 of the FLG gene;

- прогнозирование высокого риска развития ХИЭ у женщин при выявлении гаплотипа ACTGGAT полиморфных локусов rs558269137, rs61816761, rs3126085 и rs12144049 гена FLG, где ACTG относится к полиморфизму rs558269137.- Predicting a high risk of developing CIE in women when detecting the ACTGGAT haplotype of polymorphic loci rs558269137, rs61816761, rs3126085 and rs12144049 of the FLG gene, where ACTG refers to the rs558269137 polymorphism.

Новизна и изобретательский уровень заключаются в том, что из уровня техники не известна возможность прогноза развития ХИЭ у женщин на основе данных о гаплотипе ACTGGAT полиморфных локусов rs558269137, rs61816761, rs3126085 и rs12144049 гена FLG, где ACTG относится к полиморфизму rs558269137.The novelty and inventive step lies in the fact that the prior art does not know the possibility of predicting the development of CIE in women based on the data on the ACTGGAT haplotype of the polymorphic loci rs558269137, rs61816761, rs3126085 and rs12144049 of the FLG gene, where ACTG refers to the rs55826 polymorphism.

Способ осуществляют следующим образом:The method is carried out as follows:

Выделение геномной ДНК из периферической крови осуществляют методом фенольно-хлороформной экстракции (Mathew, 1984) в два этапа. На первом этапе к 4 мл крови с ЭДТА добавляют 25 мл лизирующего буфера, содержащего 320 мМ сахарозы, 1% тритон Х-100, 5 мМ MgCl2, 10мМ трис-HCl (pH=7,6). Полученную смесь перемешивают и центрифугируют при 4°С, 4000 об/мин в течение 20 минут. После центрифугирования надосадочную жидкость сливают, к осадку добавляют 4 мл раствора, содержащего 25 мМ ЭДТА (рН=8,0) и 75 мМ NaCl, ресуспензируют. Затем прибавляют 0,4 мл 10% SDS, 35 мкл протеиназы К (10мг/мл) и инкубируют образец при 37°С в течение 16 часов. Isolation of genomic DNA from peripheral blood is carried out by phenol-chloroform extraction (Mathew, 1984) in two stages. At the first stage, 25 ml of lysis buffer containing 320 mM sucrose, 1% Triton X-100, 5 mM MgCl 2 , 10 mM Tris-HCl (pH = 7.6) are added to 4 ml of blood with EDTA. The resulting mixture is stirred and centrifuged at 4 ° C, 4000 rpm for 20 minutes. After centrifugation, the supernatant is decanted, 4 ml of a solution containing 25 mM EDTA (pH = 8.0) and 75 mM NaCl are added to the sediment and resuspended. Then add 0.4 ml of 10% SDS, 35 μl of proteinase K (10 mg / ml) and incubate the sample at 37 ° C for 16 hours.

На втором этапе из полученного лизата последовательно проводят экстракцию ДНК равными объемами фенола, фенол-хлороформа (1:1) и хлороформа с центрифугированием при 4000 об/мин в течение 10 минут. После каждого центрифугирования производят отбор водной фазы. ДНК осаждают из раствора двумя объемами охлажденного 96% этанола. После лиофилизации полученную ДНК растворяют в бидистиллированной, деионизованной воде и хранят при -20°С. At the second stage, DNA extraction is carried out sequentially from the obtained lysate with equal volumes of phenol, phenol-chloroform (1: 1) and chloroform with centrifugation at 4000 rpm for 10 minutes. After each centrifugation, the aqueous phase is sampled. DNA is precipitated from solution with two volumes of chilled 96% ethanol. After lyophilization, the resulting DNA is dissolved in bidistilled, deionized water and stored at -20 ° C.

Анализ полиморфных маркеров rs558269137, rs61816761, rs3126085 и rs12144049 гена FLG осуществлялся методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) на термоциклере CFX-96 Real-Time System (Bio-Rad) c использованием стандартных олигонуклеотидных праймеров и зондов [Еlеvаtеd MMР-8 аnd dесrеаsеd myеlореrохidаsе соnсеntrаtiоns аssосiаtе signifiсаntly with thе risk fоr аthеrоsсlеrоsis disеаsе аnd аbdоminаl аоrtiс аnеurysm [Tехt] / Р. Рrаdhаn-Раlikhе, Р. Vikаtmаа, T. Lаjunеn [еt аl.] // Sсаnd. J. Immunоl. – 2010. – Vоl. 72, № 2. – Р. 150-157] (синтезированы в ООО «Тест - Ген» (Ульяновск)). Analysis of the polymorphic markers rs558269137, rs61816761, rs3126085, and rs12144049 of the FLG gene was carried out by polymerase chain reaction (PCR) on a CFX-96 Real-Time System (Bio-Rad) thermal cycler using standard oligonucleotide primers and probes [Elsevidevacensendacensendacensevide associate signifi-cantly with thе risk fоr аthеrоsсlеrоsis disеаse аnd аbdоminаl аоrtiс аneurysm [Techt] / P. Prodhan-Palikhe, P. Vikatmaa, T. Lajunen. J. Immunol. - 2010. - Vol. 72, No. 2. - P. 150-157] (synthesized at OOO Test - Gen (Ulyanovsk)).

Амплификация геномной ДНК производилась в реакционной смеси, суммарным объемом 10 мкл, включающей смесь для ПЦР ММР – 4 мкл, Taq-полимеразу - 2 мкл, исследуемый образец (~30 нг ДНК/мкл) - 1 мкл, деионизированная вода – 3 мкл. Amplification of genomic DNA was carried out in a reaction mixture with a total volume of 10 μL, including a mixture for MMP PCR - 4 μL, Taq polymerase - 2 μL, a test sample (~ 30 ng DNA / μL) - 1 μL, deionized water - 3 μL.

Генотипирование исследуемых образцов осуществлялось с использованием программного обеспечения «CFX-Manager™» методом дискриминации аллелей по величинам относительных единиц флуоресценции (ОЕФ) (фиг. 1,фиг. 2, фиг. 3, фиг. 4)Genotyping of the studied samples was carried out using the software "CFX-Manager ™" by the method of discrimination of alleles by the values of relative fluorescence units (RFU) (Fig. 1, Fig. 2, Fig. 3, Fig. 4)

Изобретение характеризуется фигурами:The invention is characterized by the following figures:

Фиг. 1. Дискриминации аллелей методом детекции TaqMan зондов по данным величин ОЕФ (относительные единицы флуоресценции) каждого зонда на амплификаторе CFX96 c детектирующей системой в режиме реального времени полиморфизма rs558269137 FLG (

Figure 00000001
- AA,
Figure 00000002
- GG,
Figure 00000003
- GA, ■ - отрицательный контроль).FIG. 1. Discrimination of alleles by the TaqMan probe detection method according to the RFU values (relative fluorescence units) of each probe on the CFX96 amplifier with a real-time detection system of rs558269137 FLG (
Figure 00000001
- AA,
Figure 00000002
- GG,
Figure 00000003
- GA, ■ - negative control).

Фиг. 2. Дискриминации аллелей методом детекции TaqMan зондов по данным величин ОЕФ (относительные единицы флуоресценции) каждого зонда на амплификаторе CFX96 c детектирующей системой в режиме реального времени полиморфизма rs61816761 FLG (

Figure 00000001
- AA,
Figure 00000002
- GG
Figure 00000003
- GA, ■ - отрицательный контроль).FIG. 2. Discrimination of alleles by the TaqMan probe detection method according to the RFU values (relative fluorescence units) of each probe on the CFX96 amplifier with a real-time detection system for rs61816761 FLG (
Figure 00000001
- AA,
Figure 00000002
- GG
Figure 00000003
- GA, ■ - negative control).

Фиг. 3. Дискриминации аллелей методом детекции TaqMan зондов по данным величин ОЕФ (относительные единицы флуоресценции) каждого зонда на амплификаторе CFX96 c детектирующей системой в режиме реального времени полиморфизма rs3126085 FLG (

Figure 00000001
- AA,
Figure 00000002
- GA,
Figure 00000003
- GG, ■ - отрицательный контроль).FIG. 3. Discrimination of alleles by the TaqMan probe detection method according to the RFU values (relative fluorescence units) of each probe on the CFX96 amplifier with a real-time detection system of the rs3126085 FLG (
Figure 00000001
- AA,
Figure 00000002
- GA,
Figure 00000003
- GG, ■ - negative control).

Фиг. 4. Дискриминации аллелей методом детекции TaqMan зондов по данным величин ОЕФ (относительные единицы флуоресценции) каждого зонда на амплификаторе CFX96 c детектирующей системой в режиме реального времени полиморфизма rs 12144049 FLG (

Figure 00000001
- TT,
Figure 00000002
- CC,
Figure 00000003
- TC, ■ - отрицательный контроль).FIG. 4. Discrimination of alleles by the TaqMan probe detection method according to the RFU values (relative fluorescence units) of each probe on the CFX96 amplifier with a real-time detection system of the rs 12144049 FLG (
Figure 00000001
- TT,
Figure 00000002
- CC,
Figure 00000003
- TC, ■ - negative control).

С помощью программы Haploview v.4.2 (https://www.broadinstitute.org/haploview/haploview) проведен анализ неравновесия по сцеплению между парами SNPs и построены гаплоблоки. С использованием коэффициента D’, предложенного Левонтином и коэффициента корреляции r2 Пирсона оценивали неравновесие по сцеплению между рядом расположенными SNPs. В соответствии с алгоритмами «Solid Spine» и «Four gamete frequencies» с заданным порогом D’>0,8 определялась блочная структура. (Беляева Т.М. Изучение ассоциаций гаплотипов полиморфизма гена FLG с развитием хронической истинной экземы у мужчин. Научные результаты биомедицинских исследований. 2020;6(2):160-171). Using the Haploview v.4.2 program (https://www.broadinstitute.org/haploview/haploview), the linkage disequilibrium between pairs of SNPs was analyzed and haploblocks were constructed. Linkage disequilibrium between adjacent SNPs was assessed using Lewontin's D 'coefficient and Pearson's r2 correlation coefficient. In accordance with the algorithms "Solid Spine" and "Four gamete frequencies" with a given threshold D '> 0.8, the block structure was determined. (Belyaeva TM Study of associations of haplotypes of the FLG gene polymorphism with the development of chronic true eczema in men. Scientific results of biomedical research. 2020; 6 (2): 160-171).

Расчет частот гаплотипов и анализ их ассоциаций с формированием ХИЭ осуществляли с помощью программного обеспечения PLINK v. 2.050 (http://zzz.bwh.harvard.edu/plink/) по ЕМ-алгоритму. За статистически значимый уровень принимали ррerm<0,05.The calculation of the haplotype frequencies and the analysis of their associations with the formation of CIE was carried out using the PLINK v. 2.050 (http://zzz.bwh.harvard.edu/plink/) using the EM algorithm. Р рerm <0.05 was taken as a statistically significant level.

Возможность использования предложенного способа для оценки прогнозирования риска развития ХИЭ у женщин подтверждает анализ результатов наблюдений 453 пациенток, из которых 237 больных с хронической истинной экземой и 216 женщин контрольной группы (ХИЭ отсутствовала). Среди больных средний возраст–42,73 ± 17,53 лет, от 18 до 86 лет, в контрольной группе средний возраст–42,56 ± 15,42 лет, от 17 до 88 лет. Изучаемые группы включали неродственных русских пациенток, родившихся и проживающих в Центральном Черноземье России. На проведение данного исследования у всех пациентов было получено информированное согласие. Работа выполнялось под контролем этического комитета медицинского института НИУ «БелГУ» в период с 2013 по 2018 гг. На каждого пациента заполнялась специально разработанная анкета-опросник, которая включала следующие данные: возраст, пол, место рождения, наличие внешнесредовых факторов риска, жалобы (высыпания, зуд, нарушение сна), анамнестические данные (возраст, возникновения заболевания, количество обострений в год, сезонность обострений, наличие наследственной отягощенности), осложнения заболевания, сопутствующая патология, результаты клинического и лабораторного обследований.The possibility of using the proposed method to assess the prediction of the risk of developing CIE in women is confirmed by the analysis of the observation results of 453 patients, of which 237 patients with chronic true eczema and 216 women in the control group (CIE was absent). Among the patients, the average age was 42.73 ± 17.53 years, from 18 to 86 years, in the control group, the average age was 42.56 ± 15.42 years, from 17 to 88 years. The study groups included unrelated Russian patients born and living in the Central Black Earth Region of Russia. Informed consent was obtained from all patients to conduct this study. The work was carried out under the supervision of the Ethics Committee of the Medical Institute of the National Research University "BelSU" in the period from 2013 to 2018. For each patient, a specially designed questionnaire was filled out, which included the following data: age, gender, place of birth, presence of environmental risk factors, complaints (rashes, itching, sleep disturbance), anamnestic data (age, disease occurrence, number of exacerbations per year, seasonality of exacerbations, the presence of hereditary burden), complications of the disease, concomitant pathology, the results of clinical and laboratory examinations.

Клиническое и клинико-лабораторное обследование больных осуществлялось на базах ОБУЗ «Курский областной клинический кожно-венерологический диспансер» и ОГБУЗ «Кожно-венерологический диспансер» г. Белгорода. В исследуемую группу больных включались пациенты с диагнозом хроническая истинная экзема, который устанавливался на основании жалоб, анамнеза, клинических проявлений, течения заболевания и лабораторных методов исследования (Федеральные клинические рекомендации, 2016). В контрольную группу включались индивидуумы без заболеваний кожи и соматической патологии, приводящей к вторичному поражению кожи. Группа контроля формировалась при профилактических осмотрах населения.Clinical and clinical and laboratory examination of patients was carried out at the bases of the Kursk Regional Clinical Dermatovenerologic Dispensary and OGBUZ Dermatovenerologic Dispensary in Belgorod. The study group of patients included patients with a diagnosis of chronic true eczema, which was established on the basis of complaints, anamnesis, clinical manifestations, course of the disease and laboratory research methods (Federal Clinical Recommendations, 2016). The control group included individuals without skin diseases and somatic pathology leading to secondary skin lesions. The control group was formed during preventive examinations of the population.

Типирование молекулярно-генетических маркеров осуществлялось на кафедре медико-биологических дисциплин факультета лечебного дела и педиатрии медицинского института Белгородского государственного национального исследовательского университета. The typing of molecular genetic markers was carried out at the Department of Biomedical Disciplines, Faculty of General Medicine and Pediatrics, Medical Institute, Belgorod State National Research University.

При расчете частот гаплотипов и анализе их ассоциаций с формированием ХИЭ у женщин установлена связь с формированием заболевания гаплотипа ACTGGAT полиморфных локусов rs558269137, rs61816761, rs3126085 и rs12144049 гена FLG, где ACTG относится к полиморфизму rs558269137, находящихся в неравновесии по сцеплению. Гаплотип ACTGGAT rs558269137, rs61816761, rs3126085 и rs12144049 является фактором риска развития ХИЭ у женщин (ОR=1,66; р=0,016).When calculating the frequencies of haplotypes and analyzing their associations with the formation of CIE in women, a connection was established with the formation of the disease of the ACTGGAT haplotype of the polymorphic loci rs558269137, rs61816761, rs3126085 and rs12144049 of the FLG gene, where ACTG refers to the rs558269137 polymorphism in linkage disequilibrium. The haplotype ACTGGAT rs558269137, rs61816761, rs3126085 and rs12144049 is a risk factor for developing CIE in women (OR = 1.66; p = 0.016).

В качестве примеров конкретного применения разработанного способа приведено обследование русских пациенток, уроженок Центрально-Черноземного региона РФ и не являющихся родственниками между собой: проведено генетическое обследование по локусам rs558269137, rs61816761, rs3126085 и rs12144049 гена FLG. As examples of the specific application of the developed method, a survey of Russian patients, natives of the Central Black Earth region of the Russian Federation and not related to each other, is given: a genetic examination was carried out at the loci rs558269137, rs61816761, rs3126085 and rs12144049 of the FLG gene.

Пример 1Example 1

У пациентки С. была взята венозная кровь, при генотипировании ДНК-маркеров был выявлен гаплотип ACTGGAT полиморфных локусов rs558269137, rs61816761, rs3126085 и rs12144049 гена FLG, что позволило отнести пациентку в группу больных с высоким риском развития ХИЭ. Дальнейшее наблюдение подтвердило диагноз хронической истинной экземы у пациентки.Venous blood was taken from patient S., during genotyping of DNA markers, the ACTGGAT haplotype of polymorphic loci rs558269137, rs61816761, rs3126085 and rs12144049 of the FLG gene was identified, which allowed the patient to be assigned to the group of patients with a high risk of developing CIE. Further observation confirmed the diagnosis of chronic true eczema in the patient.

Пример 2Example 2

У пациентки Р. была взята венозная кровь, при генотипировании ДНК-маркеров был выявлен гаплотип ACTGGGT по локусу rs558269137, rs61816761, rs3126085 и rs12144049 гена FLG, что позволило отнести пациентку в группу больных с низким риском развития ХИЭ. Дальнейшее наблюдение не выявило у пациентки диагноза хронической истинной экземы.Venous blood was taken from patient R., during genotyping of DNA markers, the ACTGGGT haplotype was identified at the locus rs558269137, rs61816761, rs3126085 and rs12144049 of the FLG gene, which allowed the patient to be assigned to the group of patients with a low risk of developing CIE. Further observation did not reveal a diagnosis of chronic true eczema in the patient.

Применение данного способа позволит на доклиническом этапе формировать среди женщин группы риска и своевременно реализовывать в этих группах необходимые лечебно-профилактические мероприятия по предупреждению развития ХИЭ у женщин.The use of this method will allow at the preclinical stage to form risk groups among women and timely implement in these groups the necessary therapeutic and prophylactic measures to prevent the development of CIE in women.

Claims (1)

Способ прогнозирования риска развития хронической истинной экземы у неродственных русских пациенток, уроженок Центрально-Черноземного региона РФ, включающий выделение ДНК из периферической венозной крови, анализ генетических маркеров гена филаггрина, отличающийся тем, что высокий риск развития хронической истинной экземы у женщин прогнозирует выявление гаплотипа ACTGGAT полиморфных локусов rs558269137, rs61816761, rs3126085 и rs12144049 гена FLG, где ACTG относится к полиморфизму rs558269137. A method for predicting the risk of developing chronic true eczema in unrelated Russian patients, natives of the Central Black Earth region of the Russian Federation, including DNA isolation from peripheral venous blood, analysis of genetic markers of the filaggrin gene, characterized in that a high risk of developing chronic true eczema in women predicts the detection of the ACTGGAT haplotype polymorphic loci rs558269137, rs61816761, rs3126085 and rs12144049 of the FLG gene, where ACTG refers to the rs558269137 polymorphism.
RU2021104010A 2021-02-17 2021-02-17 Method for predicting risk of developing chronic true eczema in women, taking into account genetic factors RU2753274C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2021104010A RU2753274C1 (en) 2021-02-17 2021-02-17 Method for predicting risk of developing chronic true eczema in women, taking into account genetic factors

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2021104010A RU2753274C1 (en) 2021-02-17 2021-02-17 Method for predicting risk of developing chronic true eczema in women, taking into account genetic factors

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2753274C1 true RU2753274C1 (en) 2021-08-12

Family

ID=77349100

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2021104010A RU2753274C1 (en) 2021-02-17 2021-02-17 Method for predicting risk of developing chronic true eczema in women, taking into account genetic factors

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2753274C1 (en)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2572338C1 (en) * 2014-12-29 2016-01-10 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") Method for prediction of risk of sub-acute stage of chronic idiopathic eczema
RU2574015C1 (en) * 2014-12-26 2016-01-27 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") Method for prediction risk of chronic true eczema development in males
RU2585382C1 (en) * 2014-12-26 2016-05-27 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") Method for predicting risk of developing chronic true eczema in individuals depending on availability of family history

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2574015C1 (en) * 2014-12-26 2016-01-27 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") Method for prediction risk of chronic true eczema development in males
RU2585382C1 (en) * 2014-12-26 2016-05-27 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") Method for predicting risk of developing chronic true eczema in individuals depending on availability of family history
RU2572338C1 (en) * 2014-12-29 2016-01-10 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") Method for prediction of risk of sub-acute stage of chronic idiopathic eczema

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ESPARZA-GORDILLO J. et al. Maternal Filaggrin Mutations Increase the Risk of Atopic Dermatitis in Children: An Effect Independent of Mutation Inheritance. PLoS Genet. 2015; 11(3): e1005076. *
БЕЛЯЕВА Т.М. Изучение ассоциаций гаплотипов полиморфизма гена FLG с развитием хронической истинной экземы у мужчин. Научные результаты биомедицинских исследований. 26 мая 2020; 6(2): 160-171. *
БЕЛЯЕВА Т.М. Роль взаимодействия полиморфных локусов гена FLG в формировании хронической истинной экземы у женщин. Научные результаты биомедицинских исследований. 2019; 5(4): 5-18. *
ДЕНИСОВА Я.Е. и др. Ассоциация полиморфизма лимфотоксина α (+250 A/G LTα) с формированием хронической истинной экземы. Современные проблемы науки и образования. 2014; 3. *
ДЕНИСОВА Я.Е. и др. Ассоциация полиморфизма лимфотоксина α (+250 A/G LTα) с формированием хронической истинной экземы. Современные проблемы науки и образования. 2014; 3. БЕЛЯЕВА Т.М. Роль взаимодействия полиморфных локусов гена FLG в формировании хронической истинной экземы у женщин. Научные результаты биомедицинских исследований. 2019; 5(4): 5-18. БЕЛЯЕВА Т.М. Изучение ассоциаций гаплотипов полиморфизма гена FLG с развитием хронической истинной экземы у мужчин. Научные результаты биомедицинских исследований. 26 мая 2020; 6(2): 160-171. ESPARZA-GORDILLO J. et al. Maternal Filaggrin Mutations Increase the Risk of Atopic Dermatitis in Children: An Effect Independent of Mutation Inheritance. PLoS Genet. 2015; 11(3): e1005076. *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Negoro et al. Crohn's disease is associated with novel polymorphisms in the 5'-flanking region of the tumor necrosis factor gene
Leung et al. Human atopic dermatitis complicated by eczema herpeticum is associated with abnormalities in IFN-γ response
Ueta et al. Association between prostaglandin E receptor 3 polymorphisms and Stevens-Johnson syndrome identified by means of a genome-wide association study
Karpouzis et al. Assessment of tachykinin receptor 3′ gene polymorphism rs3733631 in rosacea
Martin et al. Uveitis in patients with sarcoidosis is not associated with mutations in NOD2 (CARD15)
Trzeciak et al. Association of a Single Nucleotide Polymorphism in a Late Cornified Envelope-like Proline-rich 1 Gene (LELP1) with Atopic Dermatitis.
El-Hefnawy et al. COVID-19 susceptibility, severity, clinical outcome and Toll-like receptor (7) mRNA expression driven by TLR7 gene polymorphism (rs3853839) in middle-aged individuals without previous comorbidities
Settin et al. Clinical and molecular diagnosis of Familial Mediterranean Fever in Egyptian children
US8071307B2 (en) Method of detecting relative risk for the onset of atopic dermatitis by gene single nucleotide polymorphism analysis
Wongpiyabovorn et al. Association of the CTG (− 2578/− 460/+ 405) haplotype within the vascular endothelial growth factor gene with early‐onset psoriasis
Das et al. Integrative network analysis reveals different pathophysiological mechanisms of insulin resistance among Caucasians and African Americans
Cai et al. A single-nucleotide polymorphism of the TNFAIP3 gene is associated with systemic lupus erythematosus in Chinese Han population
RU2753274C1 (en) Method for predicting risk of developing chronic true eczema in women, taking into account genetic factors
RU2750963C1 (en) Method for predicting an increased risk of developing chronic true eczema in men using data on filaggrin gene polymorphism
Soares et al. Investigation of IGF2/ApaI and H19/RsaI polymorphisms in patients with cutaneous melanoma
RU2757936C1 (en) Method for predicting the risk of developing chronic true eczema based on molecular genetic data
AU2008327841B2 (en) In vitro method for diagnosing skin cancer
Ali et al. Association study of Klotho gene polymorphism with calcium oxalate stones in the Uyghur population of Xinjiang, China
US20170356048A1 (en) Method for predicting receptivity to targeted anticancer drug
JP5904501B2 (en) Method for detecting type 2 diabetes
US20140288011A1 (en) Genetic association
RU2795720C1 (en) Method for predicting the risk of development of the luminal subtype of breast cancer
CN105765077B (en) Detection method for determining risk of anti-thyroid drug-induced agranulocytosis and kit for determination
RU2809798C1 (en) Method of predicting risk of developing breast cancer in women using molecular genetic data
RU2798666C1 (en) Method of predicting a low risk of developing breast cancer in women with highly penetrating mutations in the brca1 and chek2 genes