RU2574015C1 - Method for prediction risk of chronic true eczema development in males - Google Patents
Method for prediction risk of chronic true eczema development in males Download PDFInfo
- Publication number
- RU2574015C1 RU2574015C1 RU2014153006/15A RU2014153006A RU2574015C1 RU 2574015 C1 RU2574015 C1 RU 2574015C1 RU 2014153006/15 A RU2014153006/15 A RU 2014153006/15A RU 2014153006 A RU2014153006 A RU 2014153006A RU 2574015 C1 RU2574015 C1 RU 2574015C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- tnfα
- tnfr2
- ltα
- combination
- genotype
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области медицинской диагностики, может быть использовано для прогнозирования риска развития хронической истинной экземы у лиц мужского пола.The invention relates to the field of medical diagnosis, can be used to predict the risk of developing chronic true eczema in males.
Истинная экзема - повсеместно встречающееся, рецидивирующее заболевание кожи, которое характеризуется полиморфизмом морфологических элементов и возникает в любом возрасте [Клиническая дерматовенерология: руководство для врачей: в 2-х т. /под ред. Ю.К. Скрипкина, Ю.С. Бутова. - Москва: ГЭОТАР-Медиа, 2009. - Т. 2. - 921 с.]. Название данного заболевания можно объяснить свойством везикул быстро вскрываться, подобно пузырькам кипящей воды (по-гречески eczeo - вскипать). Важный признак острой экземы - наличие сгруппированных, многочисленных и быстро вскрывающихся мелких пузырьков, образующих серозные «колодцы», сходных с пузырьками на поверхности кипящей воды [Оспанова С.А. Совершенствование терапии экземы с учетом эндогенной интоксикации: соавтореф. дис. … канд. мед. наук: 14.00.11 /С.А. Оспанова; Казах. науч.-исслед. кож.-венерол. ин-т М-ва здравоохранения Респ. Казахстан. - Алматы, 2008. - 21 с.].True eczema is a ubiquitous, recurring skin disease that is characterized by polymorphism of morphological elements and occurs at any age [Clinical Dermatovenerology: a guide for doctors: in 2 volumes / ed. Yu.K. Skripkina, Yu.S. Butova. - Moscow: GEOTAR-Media, 2009. - T. 2. - 921 p.]. The name of this disease can be explained by the property of vesicles to quickly open, like bubbles of boiling water (in Greek eczeo - to boil). An important sign of acute eczema is the presence of grouped, numerous and rapidly opening small vesicles that form serous “wells”, similar to vesicles on the surface of boiling water [Ospanova S.A. Improving the treatment of eczema taking into account endogenous intoxication: co-author. dis. ... cand. honey. Sciences: 14.00.11 / С.A. Ospanova; Kazakh. scientific researcher leather.-venerol. Institute of Health Care Rep. Kazakhstan. - Almaty, 2008. - 21 p.].
Этиологический и патогенетический аспекты развития экземы, освещенные в современной литературе, носят противоречивый характер. На разных этапах развития учений об экземе важное значение в этиологии и патогенезе экземы придавали неврогенной и аллергической теориям, роли эндокринной системы, наследственным факторам. Следует отметить, что этиология и патогенез экземы чрезвычайно сложны и во многих своих аспектах остаются неизученными [Кошелева И.В. Эффективность комплексного лечения больных экземой при использовании различных методик озонотерапии/И.В. Кошелева, А.Г. Куликов //Вопросы курортологии, физиотерапии и лечебной физической культуры. - 2001. - №5. - С. 40-42].The etiological and pathogenetic aspects of the development of eczema, highlighted in modern literature, are controversial. At different stages of the development of studies on eczema, neurogenic and allergic theories, the role of the endocrine system, and hereditary factors were given great importance in the etiology and pathogenesis of eczema. It should be noted that the etiology and pathogenesis of eczema are extremely complex and in many of their aspects remain unexplored [Kosheleva I.V. The effectiveness of the complex treatment of patients with eczema using various methods of ozone therapy / I.V. Kosheleva, A.G. Kulikov // Issues of balneology, physiotherapy and physiotherapy. - 2001. - No. 5. - S. 40-42].
Значительную роль в патогенезе экземы играют изменения состояния простагландинов и циклических нуклеотидов, занимающих основное место во внутриклеточных регуляторных механизмах. Они опосредуют нейроэндокринную информацию, превращают ее в специфический ответ клетки и реализуют нормальные и патологические реакции организма [Арушанян Э.Б. Лечебные возможности мелатонина и его влияние на иммунологические показатели у больных экземой /Э.Б. Арушанян и Дж. М. Альи Абси, В.В. Чеботарев//Экспериментальная и клиническая фармакология. - 2003. - Т. 66, №3. - С. 59-61].A significant role in the pathogenesis of eczema is played by changes in the state of prostaglandins and cyclic nucleotides, which occupy a major place in intracellular regulatory mechanisms. They mediate neuroendocrine information, turn it into a specific cell response and realize normal and pathological reactions of the body [Arushanyan EB The therapeutic possibilities of melatonin and its effect on immunological parameters in patients with eczema / E.B. Arushanyan and J. M. Alli Absi, V.V. Chebotarev // Experimental and clinical pharmacology. - 2003. - T. 66, No. 3. - S. 59-61].
Простагландины Е1 и F201, циклические аденозинмонофосфат и гуанозинмонофосфат оказывают регулирующее влияние на развитие аллергических и воспалительных реакций, функциональную деятельность иммунной системы организма. Между простагландинами E1 (ПГЕ1, циклическим аденозинмонофосфатом (цАМФ) и простагландинами F2а циклическим гуанозинмонофосфатом (цГМФ) существуют антагонистические отношения. ПГЕ1 стимулирует синтез цАМФ, который подавляет продукцию гистамина, серотонина и других медиаторов аллергических реакций. ПФГ2а стимулирует синтез цГМФ, активирующего продукцию медиаторов аллергии, тем самым способствуя развитию аллергических и воспалительных реакций [Бурова С.А. Иммуномодуляторы в практике дерматолога /С.А. Бурова, Г.Н. Макова //Актуальные вопросы терапии инфекций, передаваемых половым путем, и хронических дерматозов, Екатеринбург, 30-31 мая 2002 г.: тез. докл. науч.-практ. конф. - Екатеринбург, 2002. - С. 39]. У больных экземой установлено повышение концентрации ПГЕ1 и ПГФ2а в плазме крови, однако более значительно повышение ПГФа, что приводит к изменению соотношения ПГЕ1/ПГФ2 (преобладает ПГФ2а) и образованию своеобразного дефицита ПГЕ1 [Дегтяр Ю.С. Особенность гормонального статуса у больных экземой и другими дерматозами в условиях Севера /Ю.С. Дегтяр, Л.К. Добродеева //Вестник дерматологии и венерологии. - 2000. - №5. - С. 50-53].Prostaglandins E1 and F201, cyclic adenosine monophosphate and guanosine monophosphate have a regulatory effect on the development of allergic and inflammatory reactions, the functional activity of the body's immune system. There are antagonistic relationships between prostaglandins E1 (PGE1, cyclic adenosine monophosphate (cAMP) and prostaglandins F2a, cyclic guanosine monophosphate (cGMP). thereby contributing to the development of allergic and inflammatory reactions [Burova SA Immunomodulators in the practice of a dermatologist / S.A. Burova, GN Makova // Actual issue Therapy for Sexually Transmitted Infections and Chronic Dermatoses, Yekaterinburg, May 30-31, 2002: abstract of the scientific and practical conference - Yekaterinburg, 2002. - P. 39. In patients with eczema, an increase in the concentration of PGE1 was established. and PHF2a in blood plasma, however, an increase in PHPa is more significant, which leads to a change in the ratio of PGE1 / PHF2 (predominantly PHF2a) and the formation of a specific deficiency of PGE1 [Degtyar Yu.S. Peculiarities of the hormonal status in patients with eczema and other dermatoses in the North / South. FROM. Degtyar, L.K. Dobrodeeva // Bulletin of Dermatology and Venereology. - 2000. - No. 5. - S. 50-53].
Установленные биохимические и иммунные нарушения позволили разработать новую концепцию патогенеза экземы. У индивидуумов c наследственной предрасположенностью, которая подтверждается положительной ассоциацией антигенов системы гистосовместимости (В22 и Cw1), усиливается синтез простагландина F2a, что вызывает стимуляцию выработки циклического гуанозинмонофосфата, активирующего синтез серотонина, гистамина и других медиаторов аллергии, что способствует развитию воспалительных и аллергических реакций и повышает проницаемость сосудов [Дегтяр Ю.С. Состояние иммунного статуса у больных экземой на Европейском Севере России /Ю.С. Дегтяр, Л.К. Добродеева//Вестник дерматологии и венерологии. - 2001. - №1. - С. 44-46].The established biochemical and immune disorders made it possible to develop a new concept of the pathogenesis of eczema. In individuals with a hereditary predisposition, which is confirmed by a positive association of histocompatibility system antigens (B22 and Cw1), the synthesis of prostaglandin F2a is enhanced, which stimulates the production of cyclic guanosine monophosphate, which activates the synthesis of serotonin, histamine and other allergy mediators, which contributes to the development of inflammatory and allergens vascular permeability [Degtyar Yu.S. The state of the immune status in patients with eczema in the European North of Russia / U.S. Degtyar, L.K. Dobrodeeva // Bulletin of Dermatology and Venereology. - 2001. - No. 1. - S. 44-46].
Одновременно с увеличением образования простагландина F2a повышается синтез простагландина E1, но его концентрация значительно снижена по отношению к увеличивающейся концентрации простагландина F201. Недостаток содержания простагландина Е1, нарушение его соотношения с содержанием простагландина F2a приводит к недостаточной стимуляции синтеза циклического аденозинмонофосфата, подавляющего формирование аллергических и воспалительных реакций, выработку медиаторов аллергии [Дикова О.В. Состояние эндотоксикоза у больных экземой /О.В. Дикова, С.В. Селиванова, Е.Ю. Кочеткова //Вестник последипломного медицинского образования. - 2001. - №1. - С. 31].Simultaneously with an increase in the formation of prostaglandin F2a, the synthesis of prostaglandin E1 increases, but its concentration is significantly reduced in relation to the increasing concentration of prostaglandin F201. The lack of prostaglandin E1, a violation of its ratio with the content of prostaglandin F2a leads to insufficient stimulation of the synthesis of cyclic adenosine monophosphate, which inhibits the formation of allergic and inflammatory reactions, the development of allergy mediators [Dikova O.V. The state of endotoxemia in patients with eczema / O.V. Dikova, S.V. Selivanova, E.Yu. Kochetkova // Bulletin of postgraduate medical education. - 2001. - No. 1. - S. 31].
Таким образом, у больных экземой в результате повышения содержания F2a и нарушения соотношения ПГЕ1/ПГФ2а и цАМФ/цГМФ происходит преобладание простагландина F2a и циклического гуанозинмонофосфата, что является одной из причин развития заболевания [Мазитова Л.П. Современные аспекты патогенеза излечения аллергодерматозов у детей /Л.П. Мазитова //Русский медицинский журнал. - 2001. - Т. 9, №11. - С. 457-460].Thus, in patients with eczema, as a result of an increase in the F2a content and a violation of the ratio of PGE1 / PHF2a and cAMP / cGMP, there is a predominance of prostaglandin F2a and cyclic guanosine monophosphate, which is one of the causes of the disease [Mazitova L. Modern aspects of the pathogenesis of curing allergic dermatoses in children / L.P. Mazitova // Russian Medical Journal. - 2001. - T. 9, No. 11. - S. 457-460].
В тромбоцитах периферической крови больных экземой установлено усиление синтеза и экскреции серотонина в кровяное русло. Реакция высвобождения тромбоцитов, в результате которой серотонин поступает в кровь, регулируется простагландинами. Простагландин Е1 ее подавляет, а простагландин F2a провоцирует [Кожные и венерические болезни: справ. семейного врача /под ред. К.Н. Монахова. - Москва; Санкт-Петербург: ДИЛЯ, 2005. - 159 с.]. Преобладание простагландина F2a обусловливает повышение содержания в крови серотонина, что усугубляет аллергические реакции. Гормон щитовидной железы тиреокальцитонин стимулирует активность аденилатциклазы - фермента, катализирующего синтез циклического аденозинмонофосфата из АТФ. Повышение содержания тиреокальцитонина у больных экземой, возможно, и есть проявление защитных реакций организма.In platelets of peripheral blood of patients with eczema, an increase in the synthesis and excretion of serotonin into the bloodstream has been established. The platelet release reaction, as a result of which serotonin enters the bloodstream, is regulated by prostaglandins. Prostaglandin E1 suppresses it, and prostaglandin F2a provokes [Skin and sexually transmitted diseases: Ref. family doctor / ed. K.N. Monakhova. - Moscow; St. Petersburg: DILA, 2005. - 159 p.]. The prevalence of prostaglandin F2a causes an increase in blood serotonin, which exacerbates allergic reactions. The thyroid hormone thyrocalcitonin stimulates the activity of adenylate cyclase, an enzyme that catalyzes the synthesis of cyclic adenosine monophosphate from ATP. An increase in the content of thyrocalcitonin in patients with eczema may be a manifestation of the protective reactions of the body.
Простагландины и циклические нуклеотиды являются факторами системы регуляции иммунного ответа. Их повышенный синтез приводит к изменениям иммунологической реактивности и вызывает глубокие иммунологические расстройства, которые проявляются в подавлении клеточного иммунитета (снижается содержание Т-РОК, количественных и функциональных показателей Т-хелперов и Т-супрессоров, подавляется супрессорная активность Т-лимфоцитов) и неспецифических факторов защиты (снижается количество комплементарных и спонтанных нейтрофилов, содержание цитоплазматических гранул нейтрофильных лейкоцитов, процента фагоцитоза) [Страчунский Л.С. Фармакoэпидeмиoлoгия: oснoвныe пoнятия и практ. примeнeниe /Л.С. Страчунский, С.Н. Кoзлoв, С.А. Рачина //Клиничeская фармакoлoгия и тeрапия. - 2001. - Т. 10, №4. - С. 48-53]. Изменения иммунного статуса повышают аллергическую реактивность и наряду с циклическими нуклеотидами и простагландинами приводят к формированию экземы. Выраженность нарушений дисбаланса простагландинов, циклических нуклеотидов и иммунологической реактивности отражается на тяжести течения процесса и клинических проявлениях.Prostaglandins and cyclic nucleotides are factors in the regulation of the immune response. Their increased synthesis leads to changes in immunological reactivity and causes profound immunological disorders, which are manifested in the suppression of cellular immunity (the content of T-ROCK, quantitative and functional indicators of T-helpers and T-suppressors are reduced, the suppressor activity of T-lymphocytes is suppressed) and non-specific defense factors (decreases the number of complementary and spontaneous neutrophils, the content of cytoplasmic granules of neutrophilic leukocytes, the percentage of phagocytosis) [L. Strachunsky Pharmacoepidemiology: Fundamental Concepts and Practices. application / L.C. Strachunsky, S.N. Kozlov, S.A. Rachina // Clinical Pharmacology and Therapy. - 2001. - T. 10, No. 4. - S. 48-53]. Changes in immune status increase allergic reactivity and, along with cyclic nucleotides and prostaglandins, lead to the formation of eczema. The severity of imbalance in prostaglandins, cyclic nucleotides and immunological reactivity is reflected in the severity of the process and clinical manifestations.
По современным представлениям, в развитии экземы главную роль играют Т-лимфоциты, которые несут на своей поверхности специфические рецепторы к антигену и выделяют ряд провоспалительных цитокинов: ИЛ-1, ИЛ-2, ФНО-α [Павлова О.В. Экзема: этиология, патогенез, клиника, диагностика и лечение /О.В. Павлова. - Москва: URSS Либроком, 2010. - 61 с.].According to modern concepts, in the development of eczema, the main role is played by T-lymphocytes, which carry specific antigen receptors on their surface and secrete a number of pro-inflammatory cytokines: IL-1, IL-2, TNF-α [Pavlova OV Eczema: etiology, pathogenesis, clinic, diagnosis and treatment / O.V. Pavlova. - Moscow: URSS Librocom, 2010. - 61 p.].
Выброс биологически активных веществ вызывает развитие тканевых реакций воспаления, что клинически проявляется аллергической реакцией в виде отека, гиперемии, зуда. Антигенная стимуляция Th1 приводит к синтезу ИЛ-2, причем ИЛ-2, продуцирующая способность CD4-клеток, у больных выше, чем у здоровых людей.The release of biologically active substances causes the development of tissue reactions of inflammation, which is clinically manifested by an allergic reaction in the form of edema, hyperemia, and itching. Antigenic stimulation of Th1 leads to the synthesis of IL-2, with IL-2, which produces the ability of CD4 cells, in patients is higher than in healthy people.
Провоспалительные цитокины вызывают индукцию экспрессии молекул адгезии на эндотелиальных клетках и лейкоцитах, вследствие чего путем трансэндотелиальной миграции усиливается приток в очаг воспаления лейкоцитов из сосудистого русла [Intеrlеukin-16 stimulatеs thе еxprеssiоn and prоductiоn оf prо-inflammatоry cytоkinеs by human mоnоcytеs /N. L. Mathy, W. Schеuеr, M. Lanzеndörfеr [еt al.] //Immunоlоgy. - 2000. - Vоl. 100, №1. - P. 63-69]. Дальнейшее накопление и продвижение иммунокомпетентных клеток в очаге воспаления контролируют хемокины, которые продуцируются эндотелиальными клетками и макрофагами. Клеточный инфильтрат в очаге воспаления, состоящий из макрофагов, нейтрофилов и эозинофилов, способствует развитию аллергического воспаления. Полиморфный инфильтрат в коже при экземе - результат действия образовавшихся провоспалительных цитокинов, в том числе ФНО-α.Proinflammatory cytokines induce the expression of adhesion molecules on endothelial cells and leukocytes, as a result of which, through transendothelial migration, the influx of leukocytes from the vascular bed into the foci of inflammation is intensified [Intеrеukin-16 stimulates theexpression and human receptors. L. Mathy, W. Schaeuer, M. Lanzendörfer [et al.] // Immunolgy. - 2000. - Vol. 100, No. 1. - P. 63-69]. Further accumulation and promotion of immunocompetent cells in the focus of inflammation is controlled by chemokines, which are produced by endothelial cells and macrophages. Cellular infiltrate in the focus of inflammation, consisting of macrophages, neutrophils and eosinophils, contributes to the development of allergic inflammation. Polymorphic skin infiltrate in eczema is the result of the action of the resulting pro-inflammatory cytokines, including TNF-α.
Таким образом, в аллергических реакциях замедленного типа, лежащих в основе формирования истинной экземы, участвуют Th1- лимфоциты, макрофаги, эндотелиальные клетки и секретируемые ими цитокины.Thus, Th1 lymphocytes, macrophages, endothelial cells and cytokines secreted by them are involved in delayed-type allergic reactions that underlie the formation of true eczema.
По мнению большинства исследователей, экзему следует относить к мультифакториальным заболеваниям с полигенным типом наследования с пороговым эффектом. При сочетании определенных генетических дефектов и средовых факторов достигается пороговое значение, при котором и появляется клиническая картина заболевания. Существует большое количество фенотипически здоровых людей с высоким риском формирования аллергических заболеваний в неблагоприятных условиях внешней среды.According to most researchers, eczema should be attributed to multifactorial diseases with a polygenic type of inheritance with a threshold effect. With the combination of certain genetic defects and environmental factors, a threshold value is reached at which the clinical picture of the disease appears. There are a large number of phenotypically healthy people with a high risk of the formation of allergic diseases in adverse environmental conditions.
Для оценки сложившейся патентной ситуации был выполнен поиск по охранным документам за период с 1990 по 2013 гг. Анализ документов производился по направлению: способ прогнозирования риска развития хронической истинной экземы у индивидуумов мужского пола на основе молекулярно генетических данных в зависимости от полиморфных маркеров генов. Аналогичных патентов не выявлено.To assess the current patent situation, a search was performed on the title documents for the period from 1990 to 2013. The analysis of documents was carried out in the direction: a method for predicting the risk of developing chronic true eczema in male individuals based on molecular genetic data depending on polymorphic gene markers. No similar patents have been identified.
Немецкие ученые исследовали влияние полиморфизмов -238G/A TNFα и -308G/A TNFα на развитие дерматита кистей. Результаты работы показали, что у больных дерматитом кистей установлена максимальная концентрация генотипа -308GA TNFα (31,20%), что статистически достоверно выше показателей контроля (24,60%, OR=1,33 95%, CI 1,05-1,74). Данный молекулярно-генетический маркер является фактором риска развития дерматита кистей. Протективным фактором развития дерматита кистей служит генетический вариант -238GA TNFα (5,60%) у больных по сравнению с контролем (8,5%, OR=0,57 95%, CI 0,34-0,97).German scientists investigated the effects of polymorphisms -238G / A TNFα and -308G / A TNFα on the development of dermatitis of the hands. The results of the work showed that in patients with dermatitis of the hands, the maximum concentration of the genotype -308GA TNFα was established (31.20%), which is statistically significantly higher than the control indicators (24.60%, OR = 1.33 95%, CI 1.05-1, 74). This molecular genetic marker is a risk factor for the development of dermatitis of the hands. The genetic factor -238GA TNFα (5.60%) in patients compared to the control (8.5%, OR = 0.57–95%, CI 0.34–0.97) serves as a protective factor for the development of dermatitis of the hands.
За прототип выбрана выявленная в научно-медицинской литературе статья, в которой описан способ прогнозирования риска развития хронической истинной экземы (далее ХИЭ) у индивидуумов мужского пола на основе данных о генетическом полиморфизме+250А/G Ltα [Ассоциация полиморфизма лимфотоксина α (+250 A/G Ltα) с формированием хронической истинной экземы [Электронный ресурс] / Я.Е. Денисова, М.И. Чурносов // Современные проблемы науки и образования. - 2014. - №3. - Режим доступа: http://www.science-education.ru/117-13677]. Способ включает забор венозной крови, выделение геномной ДНК из периферической крови и анализ локуса +250 A/G Ltα методом полимеразной цепной реакции (далее ПЦР) синтеза ДНК. Генотип+250GG Ltα является фактором риска развития этого заболевания у мужчин, а протективным фактором - аллель +250А Ltα.The article identified in the scientific and medical literature that describes a method for predicting the risk of developing chronic true eczema (hereinafter referred to as CIE) in male individuals based on data on genetic polymorphism + 250A / G Ltα [Association of lymphotoxin polymorphism α (+250 A / G Ltα) with the formation of chronic true eczema [Electronic resource] / Ya.E. Denisova, M.I. Churnosov // Modern problems of science and education. - 2014. - No. 3. - Access mode: http://www.science-education.ru/117-13677]. The method includes venous blood sampling, isolation of genomic DNA from peripheral blood, and analysis of the +250 A / G Ltα locus by polymerase chain reaction (hereinafter PCR) of DNA synthesis. The + 250GG Ltα genotype is a risk factor for the development of this disease in men, and the + 250A Ltα allele is a protective factor.
Недостатком прототипа является то, что не учитывается влияние на развитие ХИЭ других генетических полиморфизмов и их сочетаний.The disadvantage of the prototype is that it does not take into account the influence on the development of CIE of other genetic polymorphisms and their combinations.
Задачей настоящего исследования является расширение арсенала способов диагностики, а именно создание способа прогнозирования риска развития ХИЭ у индивидуумов мужского пола по данным о генетических полиморфизмах и их сочетаний.The objective of this study is to expand the arsenal of diagnostic methods, namely the creation of a method for predicting the risk of CIE in male individuals according to data on genetic polymorphisms and their combinations.
Технический результат использования изобретения - получение критериев оценки риска развития хронической истинной экземы у индивидуумов мужского пола русской национальности, уроженцев Центрального Черноземья Российской Федерации, по данным о генетических полиморфизмах -308G/A TNFα, +250A/G Ltα, +36A/G TNFR1 и +1663A/G TNFR2 и их сочетаний.The technical result of using the invention is to obtain criteria for assessing the risk of developing chronic true eczema in male individuals of Russian nationality, natives of the Central Black Soil of the Russian Federation, according to genetic polymorphisms -308G / A TNFα, + 250A / G Ltα, + 36A / G TNFR1 and + 1663A / G TNFR2 and combinations thereof.
В соответствии с поставленной задачей был разработан способ прогнозирования ХИЭ, включающий:In accordance with the task, a method for predicting HIE was developed, including:
- забор венозной крови,- venous blood sampling,
- выделение геномной ДНК из периферической крови,- isolation of genomic DNA from peripheral blood,
- анализ локуса +250А/G Ltα методом полимеразной цепной реакции синтеза ДНК,- analysis of the locus + 250A / G Ltα by polymerase chain reaction of DNA synthesis,
в который внесены следующие новые признаки:which has the following new features:
- анализ полиморфизмов генов фактора некроза опухоли α (-308G/A TNFα), рецептора фактора некроза опухоли 1 типа (+36A/G TNFR1) и рецептора фактора некроза опухоли 2 типа (+1663A/G TNFR2);- analysis of gene polymorphisms of tumor necrosis factor α genes (-308G / A TNFα),
- прогнозируют повышенный риск развития ХИЭ у индивидуумов мужского пола русской национальности, уроженцев Центрального Черноземья Российской Федерации, при наличии аллеля -308А TNFα или генотипа -308GA TNFα, или аллеля +1663G TNFR2 или генотипа +1663GG TNFR2, или сочетания аллелей +250G Ltα c +36А TNFR1, или сочетания аллелей -308А TNFα c +36A TNFR1, или сочетания аллелей +250G Ltα c +1663G TNFR2, или сочетания аллелей -308G TNFα c+1663G TNFR2, или сочетания аллелей -308A TNFα с +250G Ltα, или сочетания аллелей -308G TNFα с+250G Ltα с+1663 G TNFR2, или сочетания аллелей -308А TNFα с+250G Ltα с+36А TNFR1, или сочетания аллелей -308А TNFα с +250G Ltα с+1663G TNFR2;- predict an increased risk of developing CIE in male individuals of Russian nationality, natives of the Central Black Earth Region of the Russian Federation, in the presence of the -308A TNFα allele or the -308GA TNFα allele, or the + 1663G TNFR2 allele or the + 1663GG TNFR2 genotype, or a combination of + 250G Ltα alleles 36A TNFR1, or a combination of the -308A TNFα c alleles + 36A TNFR1, or a combination of the + 250G Ltα c + 1663G TNFR2 alleles, or a combination of the -308G TNFα c + 1663G TNFR2 alleles, or a combination of the -308A TNFα alleles, or a combination of +30G Ltα alleles, or -308G TNFα s + 250G Ltα s + 1663 G TNFR2, or a combination of alleles -308A TNFα with + 250G Ltα s + 36A TNFR1, or a combination of alleles -308A TNF with a + 250G Ltα + 1663G TNFR2;
- прогнозируют пониженный риск развития ХИЭ у индивидуумов мужского пола русской национальности, уроженцев Центрального Черноземья Российской Федерации, при наличии генотипа -308GG TNFα, или генотипа+1663АА TNFR2, или сочетания аллеля +250А Ltα с+генотипом 1663АА TNFR2, или сочетания генотипа -308GG TNFα с аллелем +250А Ltα, или сочетания генотипа -308GG TNFα с аллелем +1663А TNFR2, или сочетания аллелей +36G TNFR1 с +1663А TNFR2.- predict a reduced risk of developing CIE in male individuals of Russian nationality, natives of the Central Black Earth Region of the Russian Federation, in the presence of the genotype -308GG TNFα, or the genotype + 1663AA TNFR2, or the combination of the + 250A Ltα allele + + genotype 1663AA TNFR2, or a combination of the TNFR230GG genotype -308G with the + 250A Ltα allele, or a combination of the -308GG TNFα genotype with the + 1663A TNFR2 allele, or a combination of + 36G TNFR1 alleles with + 1663A TNFR2.
Новизна и изобретательский уровень заключается в том, что впервые установлена вовлеченность генетических полиморфизмов фактора некроза опухоли α (-308 G/A TNFα), рецептора фактора некроза опухоли 1-го типа (+36 А/G ТNFR1) и рецептoра фактoра некроза опухоли 2-го типа (+1663А/G ТNFR2) и их сочетаний, в том числе с лимфотоксином α (+250A/G Ltα), в формирование хронической истинной экземы у индивидуумов мужского пола русской национальности, уроженцев Центрального Черноземья Российской Федерации, что позволит повысить достоверность прогноза.The novelty and inventive step consists in the fact that for the first time the involvement of genetic polymorphisms of tumor necrosis factor α (-308 G / A TNFα), tumor necrosis factor receptor type 1 (+36 A / G TNFR1) and tumor necrosis factor receptor 2- type (+ 1663А / G ТNFR2) and their combinations, including with lymphotoxin α (+ 250A / G Ltα), in the formation of chronic true eczema in male individuals of Russian nationality, natives of the Central Black Earth Region of the Russian Federation, which will increase the reliability of the forecast .
Изобретение характеризуется:The invention is characterized by:
Фиг.1. Дискриминации аллелей методом детекции TaqMan зондов по данным величин уровня относительной флуоресценции (далее УОФ) каждого зонда на амплификаторе IQ5 c детектирующей системой в режиме реального времени локуса -308 G/A TNFα, где - 308АА TNFα, - 308GG TNFα, - 308GA TNFα, ♦ - контрольный образец.Figure 1. Allele discrimination by the method of detecting TaqMan probes according to the values of the relative fluorescence level (hereinafter UOF) of each probe on an IQ5 amplifier with a real-time detection system of the locus -308 G / A TNFα, where - 308AA TNFα, - 308GG TNFα, - 308GA TNFα, ♦ - control sample.
Фиг.2. Дискриминации аллелей методом детекции TaqMan зондов по данным величин УОФ каждого зонда на амплификаторе IQ5 c детектирующей системой в режиме реального времени локуса +250 A/G Ltα, где - +250GG Ltα, - +250AA Ltα, - +250AG Ltα, ♦ - контрольный образец.Figure 2. Allele discrimination by the detection method of TaqMan probes according to the UOF values of each probe on an IQ5 amplifier with a real-time detection system of the locus +250 A / G Ltα, where - + 250GG Ltα, - + 250AA Ltα, - + 250AG Ltα, ♦ - control sample.
Фиг.3. Дискриминации аллелей методом детекции TaqMan зондов по данным величин УОФ каждого зонда на амплификаторе IQ5 c детектирующей системой в режиме реального времени локуса +36 A/G TNFR1, где - +36AA TNFR1, - +36GG TNFR1, - +36AG TNFR1, ♦ - контрольный образец.Figure 3. Allele discrimination by the detection method of TaqMan probes according to the UOF values of each probe on an IQ5 amplifier with a real-time detection system of the locus +36 A / G TNFR1, where - + 36AA TNFR1, - + 36GG TNFR1, - + 36AG TNFR1, ♦ - control sample.
Фиг.4. Дискриминации аллелей методом детекции TaqMan зондов по данным величин УОФ каждого зонда на амплификаторе IQ5 c детектирующей системой в режиме реального времени локуса+1663A/G TNFR2, где - +1663GG TNFR2, - +1663AA TNFR2, - +1663AG TNFR2, ♦ - контрольный образец.Figure 4. Allele discrimination by the detection method of TaqMan probes according to the UOF values of each probe on an IQ5 amplifier with a real-time detection system of the locus + 1663A / G TNFR2, where - + 1663GG TNFR2, - + 1663AA TNFR2, - + 1663AG TNFR2, ♦ - control sample.
Фиг. 5, на которой в таблице представлена распространенность сочетаний некоторых аллелей/генотипов генов цитокинов у больных ХИЭ и индивидуумов контрольной группы мужского пола.FIG. 5, in which the table shows the prevalence of combinations of certain alleles / genotypes of cytokine genes in patients with CIE and in males of the control group.
На фигурах 1-4 две полосы, вертикальная и горизонтальная, делят график на четыре секции: одна для каждого гомозиготного состояния, одна для гетерозиготного состояния и секция без реакции. Присвоение генотипов неизвестным образцам определяется вычерчиванием уровня относительной флуоресценции для одного флуорофора на оси x, относительно УОФ для другого флуорофора на оси y на диаграмме дискриминации аллелей. Зонд с флуоресцентным красителем ROX соответствует аллелю A, зонд с красителем FAM - аллелю G.In figures 1-4, two bands, vertical and horizontal, divide the graph into four sections: one for each homozygous state, one for the heterozygous state and the section without reaction. Assigning genotypes to unknown samples is determined by plotting the relative fluorescence level for one fluorophore on the x axis, relative to the UVR for another fluorophore on the y axis on the allele discrimination diagram. A probe with a fluorescent dye ROX corresponds to allele A, a probe with a FAM dye corresponds to allele G.
• Если значения УОФ неизвестного образца находятся выше горизонтальной полосы и правее вертикальной полосы, генотип гетерозиготен (GA).• If the UVR values of an unknown sample are above the horizontal strip and to the right of the vertical strip, the genotype is heterozygous (GA).
• Если значения УОФ неизвестного образца находятся выше горизонтальной полосы и левее вертикальной полосы, генотип гомозиготен по аллелю A (УОФ аллеля A отложены по оси y).• If the PFV of an unknown sample is above the horizontal strip and to the left of the vertical strip, the genotype is homozygous for the A allele (the PF of the A allele is plotted along the y axis).
• Если значения УОФ неизвестного образца находятся ниже горизонтальной полосы и правее вертикальной, генотип гомозиготен по аллелю G (УОФ аллеля G отложены по оси x).• If the PFV of an unknown sample is below the horizontal strip and to the right of the vertical one, the genotype is homozygous for the G allele (PF of the G allele is plotted along the x axis).
• Если значения УОФ неизвестного образца находятся ниже горизонтальной полосы и левее вертикальной, определение генотипа невозможно: в данном случае неопределенный образец - отрицательный контроль.• If the UVR values of an unknown sample are below the horizontal strip and to the left of the vertical, genotype determination is not possible: in this case, an undefined sample is a negative control.
Способ осуществляют следующим образом:The method is as follows:
Выделение геномной ДНК осуществляют стандартным методом фенольно-хлороформной экстракции. 1-ый этап: к 4 мл крови добавляют 25 мл лизирующего буфера, который содержит 320 мМ сахарозы, 1% тритон Х -100, 5 мМ МgСl2 и 10 мМ трис-НCl (pH=7,6) [Мathew С.С., 1984]. Полученную смесь при 4ºС, 4000 об/мин в течение 20 минут перемешивают и центрифугируют. После центрифугирования сливают надосадочную жидкость, к полученному осадку добавляют 4 мл раствора, с 25 мM ЭДTA (рН=7,8) и 75 мМ NаСl, затем ресуспензируют. После этого прибавляют 0,4 мл 10% SDS, 35 мкл протеиназы K (10 мг/мл) и в течение 16 часов при 37ºС инкубируют образец.Genomic DNA is isolated using the standard phenol-chloroform extraction method. Stage 1: 25 ml of lysis buffer, which contains 320 mM sucrose, 1% Triton X-100, 5 mM MgCl 2 and 10 mM Tris-HCl (pH = 7.6), is added to 4 ml of blood [Mathew C. C ., 1984]. The resulting mixture at 4 ° C, 4000 rpm for 20 minutes is stirred and centrifuged. After centrifugation, the supernatant is drained, 4 ml of the solution are added to the resulting precipitate, with 25 mM EDTA (pH = 7.8) and 75 mM NaCl, then resuspended. After that, 0.4 ml of 10% SDS, 35 μl of proteinase K (10 mg / ml) are added and the sample is incubated for 37 hours at 37 ° C.
На 2-м этапе в течение 10 минут при 4000 об/мин из полученного лизата последовательно экстрактируют ДНК равными частями фенола, фенол-хлороформа (1:1) и хлороформа с центрифугированием. Производят отбор водной фазы после каждого центрифугирования. Из раствора 2-мя объемами охлажденного 96% этанола осаждают ДНК. Полученную ДНК растворяют в деионизованной, бидистиллированной воде и хранят при t=-20 °С. Выделенную ДНК используют для полимеразной цепной реакции (ПЦР) синтеза ДНК.At the 2nd stage, for 10 minutes at 4000 rpm, DNA is sequentially extracted from the obtained lysate in equal parts of phenol, phenol-chloroform (1: 1) and chloroform with centrifugation. The selection of the aqueous phase after each centrifugation. DNA was precipitated from the solution in 2 volumes of chilled 96% ethanol. The resulting DNA is dissolved in deionized, double-distilled water and stored at t = -20 ° C. The isolated DNA is used for the polymerase chain reaction (PCR) of DNA synthesis.
Анализ -308G/А TNFα,+250G/A Ltα,+36A/G TNFR1,+1663A/G TNFR2 осуществляют методами ПЦР синтеза ДНК на CFX 96 с системой ПЦР в режиме real time. Используют ДНК-полимеразу Thermus aquaticus (производитель фирма «Силекс-М») и олигонуклеотидные праймеры и зонды (синтезированные фирмой «Синтол»).Analysis of -308G / A TNFα, + 250G / A Ltα, + 36A / G TNFR1, + 1663A / G TNFR2 is carried out by PCR synthesis of DNA on CFX 96 with real-time PCR system. Thermus aquaticus DNA polymerase (manufacturer Sileks-M) and oligonucleotide primers and probes (synthesized by Syntol) are used.
Реакционная смесь (объем 25 мкл) включает: 67 мМ трис-НCl (pН=8,8), 2,5 мМ МgCl2, 0,1 мкг геномной ДHK, по 10 пM каждого праймера, по 5 пkмoль каждого зонда, по 200 мkM dАТР, dGТР, dСТР, dТТР и 1 единицу активной Тaq-полимеразы. Для каждой пары праймеров рассчитывают оптимальный температурный и временной режим отжига и подбирают соответствующую концентрацию MgCl2.The reaction mixture (25 μl volume) includes: 67 mM Tris-HCl (pH = 8.8), 2.5 mM MgCl 2 , 0.1 μg of genomic DNK, 10 pM of each primer, 5 pm of each probe, 200 mkM dATP, dGTP, dSTP, dTTP and 1 unit of active Taq polymerase. For each pair of primers, the optimal temperature and time conditions of annealing are calculated and the corresponding concentration of MgCl 2 is selected.
Генотипирование производят по методу Tag Man зондов на основании данных значений уровня относительной флуоресценции (далее УОФ) для каждого зонда при проведении ПЦP в амплификаторе IQ5.Genotyping is carried out using the Tag Man method of probes based on the data of the relative fluorescence level (hereinafter referred to as UOF) for each probe during PCR in the IQ5 amplifier.
Возможность использования предложенного способа для оценки риска развития хронической истинной экземы подтверждает анализ результатов обследования 205 мужчин: 84 больных ХИЭ и 121 индивидуум контрольной группы.The possibility of using the proposed method for assessing the risk of developing chronic true eczema is confirmed by an analysis of the results of the examination of 205 men: 84 patients with CIE and 121 individuals in the control group.
В исследуемые группы включались лица русской национальности, которые являлись уроженцами Центрального Черноземья Российской Федерации и не имели родства между собой. Клиническое и клинико-лабораторное обследование больных проводили на базе поликлинического отделения ОГБУЗ «Кожно-венерологический диспансер».The studied groups included persons of Russian nationality, who were natives of the Central Black Soil of the Russian Federation and had no kinship with each other. Clinical, clinical and laboratory examination of patients was carried out on the basis of the outpatient department of OGBUZ “Skin and venereologic dispensary”.
Средний возраст больных хронической истинной экземой составил 45,91±2,68 (варьировал от 18 лет до 86 лет), контрольной выборки - 43,62±3,46 (варьировал от 20 до 76 лет) (р>0,05). Следовательно, группа больных не отличалась от группы контроля по возрасту, месту рождения и национальности.The average age of patients with chronic true eczema was 45.91 ± 2.68 (varied from 18 to 86 years), and the control sample was 43.62 ± 3.46 (varied from 20 to 76 years) (p> 0.05). Therefore, the group of patients did not differ from the control group by age, place of birth and nationality.
С целью решения проблемы множественных сравнений, связанной с получением ложноположительных результатов (ошибка 1-го рода), вводят поправку Бонферрони, т.е. производят перерасчет уровня значимости р для множественных парных сравнений по формуле: рcor=р·n, где р - полученный уровень статистической значимости, n - количество парных сравнений. За статистически значимый уровень принимали рcor≤0,05. Анализ ассоциаций сочетаний генетических вариантов с ХИЭ проводят с помощью программного обеспечения АРSampler (http://sources.redhat.com/cygwin/), использующий метод Монте-Карло марковских цепей и байесовскую непараметрическую статистику. Уровень р, полученный после пермутационного теста рреrm ≤0,05 (выполнено 100 пермутаций), принимают за статистически значимый.In order to solve the problem of multiple comparisons associated with obtaining false positive results (error of the first kind), the Bonferroni correction is introduced, i.e. recalculate the significance level p for multiple paired comparisons according to the formula: p cor = p · n, where p is the obtained level of statistical significance, n is the number of paired comparisons. For a statistically significant level, p cor ≤0.05. The analysis of associations of combinations of genetic variants with CIE is carried out using the APSampler software (http://sources.redhat.com/cygwin/), using the Monte Carlo method of Markov chains and Bayesian nonparametric statistics. The p level obtained after the permutation test p rrm ≤0.05 (100 permutations performed) is taken as statistically significant.
В результате проведенного исследования в группе мужчин концентрация генотипа -308GG TNFα (62,03%) - ниже, чем в контрольной группе, где этот показатель составил 79,83% (χ2=6,72, р=0,01, рcor=0,03, OR=0,41 95% CI 0,21-0,82).As a result of the study, in the group of men the concentration of the -308GG TNFα genotype (62.03%) is lower than in the control group, where this indicator was 79.83% (χ 2 = 6.72, p = 0.01, p cor = 0.03, OR = 0.41 95% CI 0.21-0.82).
Также выявлено, что среди больных ХИЭ частота генотипа +1663АА TNFR2 (19,18%) ниже, чем в контрольной группе, где этот показатель составил 39,17% (χ2=7,49, р=0,007, рcor=0,021, OR=0,37 95% CI 0,17-0,77).It was also found that among patients with CIE, the genotype frequency + 1663AA TNFR2 (19.18%) is lower than in the control group, where this indicator was 39.17% (χ 2 = 7.49, p = 0.007, p cor = 0.021, OR = 0.37 95% CI 0.17-0.77).
Таким образом, полученные данные свидетельствуют, что протективное значение имеют генотипы -308GG TNFα (OR=0,41) или +1663АА TNFR2 (OR=0,37).Thus, the obtained data indicate that the genotypes -308GG TNFα (OR = 0.41) or + 1663АА TNFR2 (OR = 0.37) have a protective value.
В результате проведенного комплексного анализа носительства сочетаний аллелей и генотипов исследуемых локусов факторов некроза опухолей и их рецепторов выявлен целый ряд достоверных различий между 84 мужчинами больными ХИЭ и 121 мужчинами контрольной группы (таблица на фигуре 5). Все четыре рассмотренных генетических полиморфизма -308G/А TNFα, +250А/G Ltα, +36А/G TNFR1, +1663А/G TNFR2 участвуют в формировании 12 значимых сочетаний генетических вариантов, отличающих мужчин, больных ХИЭ, от мужчин контрольной группы.As a result of a comprehensive analysis of the carriage of combinations of alleles and genotypes of the studied loci of tumor necrosis factors and their receptors, a number of significant differences were revealed between 84 men with CIE and 121 men in the control group (table in figure 5). All four examined genetic polymorphisms -308G / A TNFα, + 250A / G Ltα, + 36A / G TNFR1, + 1663A / G TNFR2 are involved in the formation of 12 significant combinations of genetic variants that distinguish men with CIE from men in the control group.
При этом следует отметить, что протективную направленность с формированием хронической истинной экземы имеют 4 ассоциации сочетаний (ОR=0,32-0,45):It should be noted that 4 associations of combinations (OR = 0.32-0.45) have a protective orientation with the formation of chronic true eczema.
- сочетание аллеля +250А Ltα с генотипом +1663АА TNFR2 (сочетание А в таблице на фиг. 5) (ОR=0,32 95% CI 0,16-0,66). У 14,29% больных ХИЭ наблюдается эта комбинация генетических маркеров, тогда как в контрольной группе она выявлена у 38,02%.- the combination of the + 250A Ltα allele with the + 1663AA TNFR2 genotype (combination A in the table in Fig. 5) (OR = 0.32 95% CI 0.16-0.66). In 14.29% of patients with CIE, this combination of genetic markers is observed, while in the control group it was detected in 38.02%.
- сочетание генотипа -308GG TNFα с аллелем +250А Ltα (сочетание В), которое наблюдается у 52,38% больных и 77,69% популяционного контроля. Уровень статистической значимости различий в частотах комбинаций данных генетических маркеров между больными и контролем также достаточно высок (рperm=0,002). Отношение шансов для сочетания В составляет 0,34 (95% CI 0,18-0,65).- a combination of the -308GG TNFα genotype with the + 250A Ltα allele (combination B), which is observed in 52.38% of patients and 77.69% of the population control. The level of statistical significance of differences in the frequencies of combinations of these genetic markers between patients and control is also quite high (p perm = 0.002). The odds ratio for combination B is 0.34 (95% CI 0.18-0.65).
- сочетание генотипа -308GG TNFα с аллелем +1663А TNFR2 (сочетание С). Отношение шансов для этой комбинации полиморфных вариантов равно 0,35 при 95% доверительном интервале 0,19-0,65 (рperm=0,002). Сочетание С встречается у 64,46% мужчин контрольной группы и лишь у 34,52% мужчин, больных ХИЭ.- a combination of the -308GG TNFα genotype with the + 1663A TNFR2 allele (combination C). The odds ratio for this combination of polymorphic variants is 0.35 with a 95% confidence interval of 0.19-0.65 (p perm = 0.002). Combination C occurs in 64.46% of men in the control group and only in 34.52% of men with CIE.
- сочетание аллеля +36G TNFR1 с аллелем +1663А TNFR2 (сочетание D). Отношение шансов для этой комбинации полиморфных вариантов равно 0,45 при 95% доверительном интервале 0,25-0,81 (рperm=0,002). Сочетание D встречается у 63,64% мужчин контрольной группы и 38,09% мужчин, больных ХИЭ.- combination of the + 36G TNFR1 allele with the + 1663A TNFR2 allele (combination D). The odds ratio for this combination of polymorphic variants is 0.45 with a 95% confidence interval of 0.25-0.81 (p perm = 0.002). Combination D occurs in 63.64% of men in the control group and 38.09% of men with CIE.
В результате проведенного исследования в группе мужчин выявлены различия в распределении молекулярно-генетических маркеров по локусам -308G/А TNFα и +1663А/G TNFR2 между контролем и больными хронической истинной экземой. Так, среди больных ХИЭ частоты аллеля -308А TNFα (19,62%) и генотипа -308GА TNFα (36,71%) были выше, чем в контрольной группе, где эти показатели составили 10,50% (χ2=5,77, р=0,02, OR=2,08 95% CI 1,13-3,83) и 19,33% (χ2=6,54, р=0,01, рcor=0,03, OR=2,42 95% CI 1,21-4,86) соответственно. Также выявлено, что среди больных ХИЭ концентрации генетических вариантов +1663G TNFR2 (59,59%) и +1663GG TNFR2 (38,35%)- были выше, чем в контрольной группе, где эти показатели составили 40,83% (χ2=12,06, р=0,001, OR=2,14 95% CI 1,38-3,32) и 20,83% (χ2=6,14, р=0,01, рcor=0,03, OR=2,36 95% CI 0,18-4,75) соответственно.As a result of the study, a group of men revealed differences in the distribution of molecular genetic markers at the -308G / A TNFα loci and + 1663A / G TNFR2 between the control and patients with chronic true eczema. So, among patients with CIE, the frequencies of the -308A TNFα allele (19.62%) and the -308GA TNFα genotype (36.71%) were higher than in the control group, where these indicators were 10.50% (χ 2 = 5.77 , p = 0.02, OR = 2.08 95% CI 1.13-3.83) and 19.33% (χ 2 = 6.54, p = 0.01, p cor = 0.03, OR = 2.42 95% CI 1.21-4.86), respectively. It was also found that among patients with CIE, the concentrations of genetic variants + 1663G TNFR2 (59.59%) and + 1663GG TNFR2 (38.35%) were higher than in the control group, where these indicators were 40.83% (χ 2 = 12.06, p = 0.001, OR = 2.14 95% CI 1.38-3.32) and 20.83% (χ 2 = 6.14, p = 0.01, p cor = 0.03, OR = 2.36 95% CI 0.18-4.75), respectively.
Таким образом, полученные данные свидетельствуют о вовлеченности генетических маркеров -308G/А TNFα и+1663А/G TNFR2 в формирование подверженности хронической истинной экземы у мужчин. Факторами повышенного риска развития ХИЭ у мужчин являются -308А TNFα (OR=2,08), или -308GА TNFα (OR=2,42), или +1663G TNFR2 (OR=2,14), или +1663GG TNFR2 (OR=2,36).Thus, the data obtained indicate the involvement of the genetic markers -308G / A TNFα and + 1663A / G TNFR2 in the formation of susceptibility to chronic true eczema in men. Factors for an increased risk of developing CIE in men are -308A TNFα (OR = 2.08), or -308GA TNFα (OR = 2.42), or + 1663G TNFR2 (OR = 2.14), or + 1663GG TNFR2 (OR = 2.36).
При этом следует отметить, что 8 сочетаний являются факторами риска развития ХИЭ у мужчин (ОR=2,18-3,89).It should be noted that 8 combinations are risk factors for the development of CIE in men (OR = 2.18-3.89).
Выявлены достоверные различия в концентрациях сочетаний генотипов +250G Ltα с+36А TNFR1 (сочетание Е) между мужчинами, больными ХИЭ (46,43%), и мужчинами контроля (31,40%). Данное сочетание является фактором риска развития ХИЭ (рperm=0,02, ОR=2,18, 95%CI 1,21-3,93). Также зарегистрированы различия в распределении сочетаний двух генетических маркеров -308А TNFα с+36А TNFR1 (сочетание F) между мужчинами, больными ХИЭ (30,95%), и мужчинами контрольной группы (15,70%). Данное сочетание полиморфных вариантов генов тоже является фактором риска развития хронической истинной экземы (рperm=0,01, ОR=2,68, 95% CI 1,36-5,30).Significant differences were found in the concentrations of combinations of + 250G Ltα genotypes with + 36A TNFR1 (combination E) between men with CIE (46.43%) and control men (31.40%). This combination is a risk factor for the development of CIE (p perm = 0.02, OR = 2.18, 95% CI 1.21-3.93). There were also differences in the distribution of combinations of two genetic markers -308A TNFα with + 36A TNFR1 (combination F) between men with CIE (30.95%) and men in the control group (15.70%). This combination of polymorphic gene variants is also a risk factor for the development of chronic true eczema (p perm = 0.01, OR = 2.68, 95% CI 1.36-5.30).
Установлены различия в частоте сочетаний аллелей +250G Ltα с+1663G TNFR2 (сочетание G) между мужчинами, больными ХИЭ, и мужчинами контроля. Концентрация этого сочетания генетических вариантов в контрольной группе составляет 23,97%, тогда как среди больных мужчин данный показатель равен 40,48% (рperm=0,002, OR=2,81 95% CI 1,51-5,24).Differences were found in the frequency of combinations of + 250G Ltα alleles with + 1663G TNFR2 (combination G) between men with CIE and control men. The concentration of this combination of genetic variants in the control group is 23.97%, while among sick men this indicator is 40.48% (p perm = 0.002, OR = 2.81 95% CI 1.51-5.24).
Комбинация генетических маркеров, которая наблюдается у 69,05% мужчин больных ХИЭ и 59,50% мужчин контрольной группы, включает сочетание двух генетических маркеров: -308G TNFα с +1663G TNFR2 (сочетание Н) (рperm=0,01). Данное сочетание является фактором риска развития ХИЭ (ОR=2,85, 95% CI 1,41-5,77).The combination of genetic markers, which is observed in 69.05% of men with CIE and 59.50% of men in the control group, includes a combination of two genetic markers: -308G TNFα with + 1663G TNFR2 (combination H) (p perm = 0.01). This combination is a risk factor for the development of CIE (OR = 2.85, 95% CI 1.41-5.77).
Сочетание I, которое наблюдается у 33,33% больных мужчин и 15,70% мужчин контрольной группы, включает сочетания двух генетических факторов: -308А TNFα с +250G Ltα. Уровень статистической значимости различий в частотах сочетаний данных генетических маркеров между больными мужчинами и контролем также достаточно высок (рperm=0,01). Отношение шансов для сочетания I составляет 2,95 (95% CI 1,50-5,78).Combination I, which is observed in 33.33% of sick men and 15.70% of men in the control group, includes a combination of two genetic factors: -308A TNFα with + 250G Ltα. The level of statistical significance of differences in the frequencies of combinations of these genetic markers between sick men and the control is also quite high (p perm = 0.01). The odds ratio for combination I is 2.95 (95% CI 1.50-5.78).
Факторами риска развития ХИЭ являются сочетания генетических факторов J, K и L. Сочетание J, представленное сочетанием аллелей -308G TNFα с +250G Ltα с+1663G TNFR2, встречается у мужчин контроля (23,14%) в 1,75 раз реже, чем среди больных ХИЭ (40,48%, рperm=0,001), отношение шансов - 3,04 (при 95% CI 1,61-5,71).The risk factors for the development of CIE are combinations of genetic factors J, K and L. The combination of J, represented by the combination of the -308G TNFα alleles with + 250G Ltα with + 1663G TNFR2, is found in men of control (23.14%) 1.75 times less than among patients with CIE (40.48%, p perm = 0.001), the odds ratio is 3.04 (at 95% CI 1.61-5.71).
Также у мужчин контрольной группы значительно реже (в 1,36 и 1,25 раза, соответственно) встречаются сочетания K и L по сравнению с больными ХИЭ. Концентрации этих сочетаний генетических вариантов у мужчин контроля составляют 12,40% и 9,09% соответственно, тогда как среди больных мужчин данные показатели равны 29,76% (рperm=0,002) и 23,81% (рperm=0,002) соответственно. Отношения шансов для этих сочетаний равны 3,40 и 3,89.Also, in men of the control group, combinations of K and L are significantly less frequent (1.36 and 1.25 times, respectively) compared with patients with CIE. The concentrations of these combinations of genetic variants in control men are 12.40% and 9.09%, respectively, whereas among sick men, these indicators are 29.76% (p perm = 0.002) and 23.81% (p perm = 0.002), respectively . The odds ratios for these combinations are 3.40 and 3.89.
Таким образом, подводя итог полученным результатам, можно сделать вывод, что у индивидуумов мужского пола русской национальности, уроженцев Центрального Черноземья Российской Федерации сочетания всех четырех анализируемых генетических полиморфизмов цитокинов -308G/А TNFα, +250А/G Ltα, +36А/G TNFR1 и +1663А/G TNFR2 определяют предрасположенность к возникновению ХИЭ. Они формируют 12 значимых сочетаний генетических вариантов факторов некроза опухолей и их рецепторов, ассоциированных с развитием ХИЭ. Причем 4 сочетания имеют протективную направленность (ОR=0,32-0,45), а 8 сочетаний являются факторами риска развития ХИЭ (ОR=2,18-3,89).Thus, summarizing the results obtained, it can be concluded that male individuals of Russian nationality, natives of the Central Black Earth Region of the Russian Federation have combinations of all four analyzed genetic polymorphisms of cytokines -308G / A TNFα, + 250A / G Ltα, + 36A / G TNFR1 and + 1663A / G TNFR2 determines the predisposition to the occurrence of CIE. They form 12 significant combinations of genetic variants of tumor necrosis factors and their receptors associated with the development of CIE. Moreover, 4 combinations have a protective focus (OR = 0.32-0.45), and 8 combinations are risk factors for the development of CIE (OR = 2.18-3.89).
Примеры, подтверждающие осуществимость предложенного изобретения.Examples confirming the feasibility of the proposed invention.
1. У пациента А. мужского пола выявлен аллель -308А TNFα. При дальнейшем наблюдении у данного пациента возникла хроническая истинная экзема.1. In the male patient A., the -308A TNFα allele was detected. Upon further observation, chronic true eczema occurred in this patient.
2. У пациента В. мужского пола выявлен генотип -308GА TNFα. При дальнейшем наблюдении у данного пациента возникла хроническая истинная экзема.2. In male patient B., the genotype -308GA TNFα was detected. Upon further observation, chronic true eczema occurred in this patient.
3. У пациента У. мужского пола выявлен аллель +1663G TNFR2. При дальнейшем наблюдении у данного пациента возникла хроническая истинная экзема.3. In the male patient U., the + 1663G TNFR2 allele was detected. Upon further observation, chronic true eczema occurred in this patient.
4. У пациента К. мужского пола выявлен генотип +1663GG TNFR2. При дальнейшем наблюдении у данного пациента возникла хроническая истинная экзема.4. In the male patient K., the genotype + 1663GG TNFR2 was detected. Upon further observation, chronic true eczema occurred in this patient.
5. У пациента Н. мужского пола выявлено сочетание +250G Ltα с +36А TNFR1. При дальнейшем наблюдении у данного пациента возникла хроническая истинная экзема.5. In patient Male N., a combination of + 250G Ltα with + 36A TNFR1 was detected. Upon further observation, chronic true eczema occurred in this patient.
6. У пациента Д. мужского пола выявлено сочетание -308А TNFα с +36А TNFR1. При дальнейшем наблюдении у данного пациента возникла хроническая истинная экзема.6. In male patient D., a combination of -308A TNFα with + 36A TNFR1 was detected. Upon further observation, chronic true eczema occurred in this patient.
7.У пациента Ш. мужского пола выявлена комбинация +250G Ltα с +1663G TNFR2. При дальнейшем наблюдении у данного пациента возникла хроническая истинная экзема.7. A combination of + 250G Ltα with + 1663G TNFR2 was found in male patient Sh. Upon further observation, chronic true eczema occurred in this patient.
8. У пациента О. мужского пола выявлена комбинация -308G TNFα с +1663G TNFR2. При дальнейшем наблюдении у данного пациента возникла хроническая истинная экзема.8. A combination of -308G TNFα with + 1663G TNFR2 was detected in male O. Upon further observation, chronic true eczema occurred in this patient.
9. У пациента Б. мужского пола выявлена комбинация -308 А TNFα с +250G Ltα. При дальнейшем наблюдении у данного пациента возникла хроническая истинная экзема.9. A combination of -308 A TNFα with + 250G Ltα was detected in male patient B. Upon further observation, chronic true eczema occurred in this patient.
10. У пациента Э. мужского пола выявлено сочетание -308G TNFα,+250G Ltα с +1663G TNFR2. При дальнейшем наблюдении у данного пациента возникла хроническая истинная экзема.10. A combination of -308G TNFα, + 250G Ltα with + 1663G TNFR2 was detected in male patient E. Upon further observation, chronic true eczema occurred in this patient.
11. У пациента Л. мужского пола выявлено сочетание -308А TNF ,+250G Ltα с +36А TNFR1. При дальнейшем наблюдении у данного пациента возникла хроническая истинная экзема.11. A combination of -308A TNF, + 250G Ltα with + 36A TNFR1 was detected in male male L. Upon further observation, chronic true eczema occurred in this patient.
12. У пациента П. мужского пола выявлено сочетание -308А TNFα,+250G Ltα с +1663G TNFR2. При дальнейшем наблюдении у данного пациента возникла хроническая истинная экзема.12. The male patient P. showed a combination of -308A TNFα, + 250G Ltα with + 1663G TNFR2. Upon further observation, chronic true eczema occurred in this patient.
13. У пациента И. мужского пола обнаружен генотип -308GG TNFα. При дальнейшем наблюдении данного пациента возникновения хронической истинной экземы не выявлено.13. A male genotype -308GG TNFα was found in male patient I. With further observation of this patient, the occurrence of chronic true eczema was not detected.
14. У пациента Ф. мужского пола обнаружен генотип +1663АА TNFR2. При дальнейшем наблюдении данного пациента возникновения хронической истинной экземы не выявлено.14. In male patient F., genotype + 1663AA TNFR2 was detected. With further observation of this patient, the occurrence of chronic true eczema was not detected.
15. У пациента Ж. мужского пола обнаружено сочетание +250А Ltα с +1663АА TNFR2. При дальнейшем наблюдении данного пациента возникновения хронической истинной экземы не выявлено.15. A combination of + 250A Ltα with + 1663АА TNFR2 was found in male patient J. With further observation of this patient, the occurrence of chronic true eczema was not detected.
16. У пациента Н. мужского пола обнаружено сочетание -308GG TNFα с +250А Ltα. При дальнейшем наблюдении данного пациента возникновения хронической истинной экземы не выявлено.16. A combination of -308GG TNFα with + 250A Ltα was found in male male N. With further observation of this patient, the occurrence of chronic true eczema was not detected.
17. У пациента Ц. мужского пола обнаружено сочетание -308GG TNFα с +1663А TNFR2. При дальнейшем наблюдении данного пациента возникновения хронической истинной экземы не выявлено.17. A combination of -308GG TNFα with + 1663A TNFR2 was found in male C. male patient. With further observation of this patient, the occurrence of chronic true eczema was not detected.
18. У пациента Ч. мужского пола обнаружено сочетание +36G TNFR1 с+1663А TNFR2. При дальнейшем наблюдении данного пациента возникновения хронической истинной экземы не выявлено.18. A combination of + 36G TNFR1 with + 1663A TNFR2 was found in male patient Ch. With further observation of this patient, the occurrence of chronic true eczema was not detected.
Применение данного способа позволит своевременно реализовывать среди индивидуумов мужского пола русской национальности, уроженцев Центрального Черноземья Российской Федерации, входящих в группу риска, необходимые лечебно-профилактические мероприятия по предупреждению развития хронической истинной экземы: исключение слишком частого мытья рук, контакта с раздражающими моюще-чистящими средствами, использование деликатного мыла и увлажнение кожи.The application of this method will allow for timely implementation among male individuals of Russian nationality, natives of the Central Black Earth Region of the Russian Federation who are at risk, the necessary preventive measures to prevent the development of chronic true eczema: the exception of too frequent hand washing, contact with irritating detergents, cleaning products, the use of delicate soap and moisturizing the skin.
Claims (1)
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2014153006/15A RU2574015C1 (en) | 2014-12-26 | 2014-12-26 | Method for prediction risk of chronic true eczema development in males |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2014153006/15A RU2574015C1 (en) | 2014-12-26 | 2014-12-26 | Method for prediction risk of chronic true eczema development in males |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2574015C1 true RU2574015C1 (en) | 2016-01-27 |
Family
ID=55237048
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2014153006/15A RU2574015C1 (en) | 2014-12-26 | 2014-12-26 | Method for prediction risk of chronic true eczema development in males |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2574015C1 (en) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2750963C1 (en) * | 2021-02-16 | 2021-07-07 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") | Method for predicting an increased risk of developing chronic true eczema in men using data on filaggrin gene polymorphism |
RU2753274C1 (en) * | 2021-02-17 | 2021-08-12 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") | Method for predicting risk of developing chronic true eczema in women, taking into account genetic factors |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20070269827A1 (en) * | 2006-05-18 | 2007-11-22 | Oklahoma Medical Research Foundation | Predicting and Diagnosing Patients With Autoimmune Disease |
-
2014
- 2014-12-26 RU RU2014153006/15A patent/RU2574015C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20070269827A1 (en) * | 2006-05-18 | 2007-11-22 | Oklahoma Medical Research Foundation | Predicting and Diagnosing Patients With Autoimmune Disease |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
ДЕНИСОВА Я.Е. Современные представления о молекулярно-генетических механизмах возникновения истинной экземы. Научные ведомости БелГУ. Серия Медицина. Фармация. 2013; N18(161), выпуск 23, стр. 5-11. КРИВОШЕЙ И.В. Изучение полиморфизма генов цитокинов у больных гипертонической болезнью. Медицина и образование в Сибири. 2013; 6: 1-4 [Найдено 21.09.2015] [он-лайн], Найдено из Интернет: URL: http://ngmu.ru/cozo/mos/article/pdf.php?id=1201. * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2750963C1 (en) * | 2021-02-16 | 2021-07-07 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") | Method for predicting an increased risk of developing chronic true eczema in men using data on filaggrin gene polymorphism |
RU2753274C1 (en) * | 2021-02-17 | 2021-08-12 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") | Method for predicting risk of developing chronic true eczema in women, taking into account genetic factors |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
ES2694681T3 (en) | Methods to treat hair loss disorders | |
Guivier et al. | Tnf-α expression and promoter sequences reflect the balance of tolerance/resistance to Puumala hantavirus infection in European bank vole populations | |
CN104520441A (en) | Method for determining complete response to anticancer therapy | |
Kitow et al. | Mitochondrial long noncoding RNAs as blood based biomarkers for cardiac remodeling in patients with hypertrophic cardiomyopathy | |
El-Hefnawy et al. | COVID-19 susceptibility, severity, clinical outcome and Toll-like receptor (7) mRNA expression driven by TLR7 gene polymorphism (rs3853839) in middle-aged individuals without previous comorbidities | |
RU2574015C1 (en) | Method for prediction risk of chronic true eczema development in males | |
Rappoport et al. | Correlation between'ACKR1/DARC null'polymorphism and benign neutropenia in Yemenite Jews. | |
CN108277282A (en) | Detect primer, kit and detection method and its application of circular rna hsa_circ_0006148 | |
JP2016503287A (en) | Use of the HLA-B * 1301 allele | |
Chen et al. | Serum aca-mir-146a is a potential biomarker for early diagnosis of Angiostrongylus cantonensis infection | |
RU2585382C1 (en) | Method for predicting risk of developing chronic true eczema in individuals depending on availability of family history | |
CN109234396A (en) | A kind of g.32336534T > C mutant and its application of the site breast cancer susceptibility gene BRCA2 | |
CN107557472A (en) | Glioma diagnosis marker circ9:135881633|135883078 and application | |
RU2572338C1 (en) | Method for prediction of risk of sub-acute stage of chronic idiopathic eczema | |
Liu et al. | A Functional Polymorphism in the Promoter Region of Interleukin‐12B Increases the Risk of Colorectal Cancer | |
CN102936629A (en) | Method and composition based on tiny RNA for liver cirrhosis and early liver cancer diagnosis | |
CN107043770B (en) | Tuberculosis-related peripheral blood lymphocyte miRNA (micro ribonucleic acid) and application thereof | |
RU2572336C1 (en) | Method of predicting level of arterial pressure in patents with hypertensive disease | |
CN107619869A (en) | Glioma diagnosis and prognosis marker circ16:85633914|85634132 and application | |
RU2578441C1 (en) | Method for prediction of moderate severity of chronic true eczema | |
CN109913481A (en) | PIK3CA gene g.1792224821G > A mutation and its application in Computer-aided Diagnosis of Breast Cancer | |
JP6616983B2 (en) | How to test for mild cognitive impairment | |
RU2580310C1 (en) | Method of predicting the risk of developing hypertension in individuals who have family history | |
RU2507519C1 (en) | Method for prediction of clinical course of acute pancreatitis | |
RU2580308C1 (en) | Method for prediction of risk of developing primary open-angle glaucoma stage iii-iv |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20161227 |