RU2749731C2 - Применение ингибиторов активности или функции pi3k для лечения первичного синдрома шегрена - Google Patents

Применение ингибиторов активности или функции pi3k для лечения первичного синдрома шегрена Download PDF

Info

Publication number
RU2749731C2
RU2749731C2 RU2018132042A RU2018132042A RU2749731C2 RU 2749731 C2 RU2749731 C2 RU 2749731C2 RU 2018132042 A RU2018132042 A RU 2018132042A RU 2018132042 A RU2018132042 A RU 2018132042A RU 2749731 C2 RU2749731 C2 RU 2749731C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
pyrrolidin
propan
methoxy
ylamino
treatment
Prior art date
Application number
RU2018132042A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2018132042A (ru
RU2018132042A3 (ru
Inventor
Бруно БИТ
Кристоф БУРКХАРТ
Андреас КРИСТ
БУК Штефан ДЕ
Кристоф Калис
Сэм ЛИНДГРЕН
Original Assignee
Новартис Аг
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Новартис Аг filed Critical Новартис Аг
Publication of RU2018132042A publication Critical patent/RU2018132042A/ru
Publication of RU2018132042A3 publication Critical patent/RU2018132042A3/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2749731C2 publication Critical patent/RU2749731C2/ru

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Группа изобретений относится к медицине, а именно к терапии, и может быть использована для лечения первичного синдрома Шегрена. Примененяют 1-{(S)-3-[6-(6-метокси-5-трифторметил-пиридин-3-ил)-5,6,7,8-тетрагидро-пиридо[4,3-d]пиримидин-4-иламино]-пирролидин-1-ил}-пропан-1-он или его фармацевтически приемлемые соли для лечения первичного синдрома Шегрена. В другом воплощении обеспечивается применение фармацевтической композиции, содержащей терапевтически эффективное количество 1-{(S)-3-[6-(6-метокси-5-трифторметил-пиридин-3-ил)-5,6,7,8-тетрагидро-пиридо[4,3-d]пиримидин-4-иламино]-пирролидин-1-ил}-пропан-1-она или его фармацевтически приемлемых солей и один или более фармацевтически приемлемых носителей, для лечения первичного синдрома Шегрена. Использование данной группы изобретений позволяет снизить уровни CXCL13 в сыворотке у больных с первичным синдромом Шегрена, который играет роль в патогенезе этого заболевания. 2 н. и 4 з.п. ф-лы, 6 табл., 1 ил.

Description

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
Настоящее изобретение относится к применению ингибиторов активности или функции семейства фосфатидилинозитол-3-киназы (в дальнейшем ингибиторы PI3K), где указанные ингибиторы обладают ингибирующим действием на изоморфу PI3K-дельта, и/или их фармацевтически приемлемых солей и/или сольватов для лечения первичного синдрома Шегрена. Более конкретно, настоящее изобретение относится к применению 1-{(S)-3-[6-(6-метокси-5-трифторметил-пиридин-3-ил)-5,6,7,8-тетрагидро-пиридо[4,3-d]пиримидин-4-иламино]-пирролидин-1-ил}-пропан-1-она или его фармацевтически приемлемых солей для лечения первичного синдрома Шегрена.
ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Синдром Шегрена классифицируют либо как «первичный», либо как «вторичный». Первичный синдром Шегрена (пСШ) возникает при отсутствии другого основного ревматического заболевания, тогда как вторичный синдром Шегрена связан с другим основным ревматическим заболеванием, таким как системная красная волчанка (СКВ), ревматоидный артрит (РА) или склеродермия. Первичный синдром Шегрена является хроническим аутоиммунным заболеванием, при котором иммунная система организма поражает железы, которые секретируют жидкость, например, слюнные и слезные железы. Иммуноопосредованное поражение слюнных и слезных желез приводит к развитию сухости во рту и сухости глаз. Другие симптомы или состояния при пСШ включают сухость кожи, утомляемость и усталость, иногда до полного упадка сил, боль в мышцах, боль в суставах, скованность и отек суставов, васкулит, трудности с концентрацией. В настоящее время не существует известного лечения первичного синдрома Шегрена, но лекарственные средства могут помочь контролировать симптомы. При лечении скелетно-мышечных симптомов могут быть использованы нестероидные противовоспалительные препараты, а также назначают кортикостероиды, иммунодепрессанты и противоревматические препараты, модифицирующие течение болезни (DMARD), у большинства из которых имеются неблагоприятные побочные эффекты. Поэтому существует потребность в дополнительных терапевтических достижениях в лечении первичного синдрома Шегрена (Holdgate N. F1000Research 2016, 5(F1000 Faculty Rev):1412).
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Было обнаружено, что ингибитор PI3K-дельта 1-{(S)-3-[6-(6-метокси-5-трифторметил-пиридин-3-ил)-5,6,7,8-тетрагидро-пиридо[4,3-d]пиримидин-4-иламино]-пирролидин-1-ил}-пропан-1-он или его фармацевтически приемлемые соли пригодны при лечении первичного синдрома Шегрена.
ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
На фигуре 1 показано соотношение PK/PD для соединения A после разового перорального введения здоровым субъектам-людям.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Было обнаружено, что 1-{(S)-3-[6-(6-метокси-5-трифторметил-пиридин-3-ил)-5,6,7,8-тетрагидро-пиридо[4,3-d]пиримидин-4-иламино]-пирролидин-1-ил}-пропан-1-он или его фармацевтически приемлемые соли пригодны для лечения первичного синдрома Шегрена.
1-{(S)-3-[6-(6-Метокси-5-трифторметил-пиридин-3-ил)-5,6,7,8-тетрагидро-пиридо[4,3-d]пиримидин-4-иламино]пирролидин-1-ил}-пропан-1-он
Figure 00000001
(соединение А)
и примеры его фармацевтически приемлемых солей описаны в примере 67 WO2012/004299.
Фосфорилированный Akt (pAkt) является нижележащим эффектором активации PI3K-дельта. 1-{(S)-3-[6-(6-Метокси-5-трифторметил-пиридин-3-ил)-5,6,7,8-тетрагидро-пиридо[4,3-d]пиримидин-4-иламино]-пирролидин-1-ил}-пропан-1-он или его фармацевтически приемлемые соли представляют собой ингибиторы PI3K с селективностью в отношении изоформы PI3K-дельта (WO2012/004299). Авторы настоящего изобретения предположили, что у пациентов с пСШ сигнальный путь Akt активирован, и было установлено, что 1-{(S)-3-[6-(6-метокси-5-трифторметил-пиридин-3-ил)-5,6,7,8-тетрагидро-пиридо[4,3-d]пиримидин-4-иламино]-пирролидин-1-ил}-пропан-1-он или фармацевтически приемлемые соли могут быть использованы при лечении пСШ.
1) Хроническая В-клеточная гиперактивность является закономерной и выраженной иммунорегуляторной аномалией при пСШ (Hansen A et al, Arthritis Research & Therapy 2007; 9; 218). 1-{(S)-3-[6-(6-Метокси-5-трифторметил-пиридин-3-ил)-5,6,7,8-тетрагидро-пиридо[4,3-d]пиримидин-4-иламино]-пирролидин-1-ил}-пропан-1-он или его фармацевтически приемлемые соли напрямую ингибируют множественные функции В-клеток in vitro и in vivo, например, pAkt, CD69, CD86, функцию APC, продукцию цитокинов и продукцию антител.
2) Было обнаружено, что у пациентов с пСШ экспрессируется уникальный профиль молекул адгезии, цитокинов и хемокинов, включая выраженную сверхэкспрессию хемокина, привлекающего В-клетки, CXCL13 (BCA-1, BLC), а также CXCL10 (IP-10) и CCL4 (MIP-1beta), которые играют роль в патогенезе пСШ (Hansen A et al, Arthritis Research & Therapy 2007; 9; 218, Lee, Y. J. et al, Rheumatology 2010; 49(9);1747-1752, Kramer JM et al, J Leukoc Biol. 2013; 94(5);1079-1089, Nishikawa A et al Arthritis Research & Therapy 2016;18;106). 1-{(S)-3-[6-(6-Метокси-5-трифторметил-пиридин-3-ил)-5,6,7,8-тетрагидро-пиридо[4,3-d]пиримидин-4-иламино]-пирролидин-1-ил}-пропан-1-он или его фармацевтически приемлемые соли ингибируют CXCL13 (BCA-1, BLC), а также CXCL10 (IP-10) и CCL4 (MIP-1beta) в супернатанте BPMC, полученном от здоровых добровольцев, стимулированных CpG или анти-IgM.
3) Характерные признаки пСШ включают образование эктопической лимфоидной ткани с зародышевыми центрами (GC)-подобных структур. У здоровых людей GC образуются из первичных B-клеточных фолликул вторичных лимфоидных органов в процессе Т-зависимых иммунных ответов (Hansen A et al., Arthritis Research & Therapy 2007, 9; 218). Гистологически ингибирование образования GC сопровождается общим снижением B-клеток маргинальной зоны (B-клеток MZ) и фолликулярных Т-хелперных клеток (TFH), как определено с помощью анализа FACS. Эти клетки, как считается, способствуют патофизиологии при пСШ. 1-{(S)-3-[6-(6-Метокси-5-трифторметил-пиридин-3-ил)-5,6,7,8-тетрагидро-пиридо[4,3-d]пиримидин-4-иламино]-пирролидин-1-ил}-пропан-1-он или его фармацевтически приемлемые соли уменьшают GC-подобные структуры, B-клетки MZ и TFH.
В одном варианте осуществления изобретение предоставляет 1-{(S)-3-[6-(6-метокси-5-трифторметил-пиридин-3-ил)-5,6,7,8-тетрагидро-пиридо[4,3-d]пиримидин-4-иламино]-пирролидин-1-ил}-пропан-1-он или его фармацевтически приемлемые соли для применения при лечении первичного синдрома Шегрена.
В другом варианте осуществления изобретение предоставляет способ лечения первичного синдрома Шегрена, включающий введение терапевтически эффективного количества 1-{(S)-3-[6-(6-метокси-5-трифторметилпиридин-3-ил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[4,3-d]пиримидин-4-иламино]-пирролидин-1-ил}-пропан-1-она или его фармацевтически приемлемых солей субъекту, например, человеку, нуждающемуся в таком лечении.
В другом варианте осуществления изобретение предоставляет применение 1-{(S)-3-[6-(6-метокси-5-трифторметил-пиридин-3-ил)-5,6,7,8-тетрагидро-пиридо[4,3-d]пиримидин-4-иламино]-пирролидин-1-ил}-пропан-1-она или его фармацевтически приемлемых солей для изготовления лекарственного средства для лечения первичного синдрома Шегрена.
В другом варианте осуществления изобретение предоставляет применение 1-{(S)-3-[6-(6-метокси-5-трифторметил-пиридин-3-ил)-5,6,7,8-тетрагидро-пиридо[4,3-d]пиримидин-4-иламино]-пирролидин-1-ил}-пропан-1-она или его фармацевтически приемлемых солей для лечения первичного синдрома Шегрена.
Предпочтительными являются любой из вышеуказанных вариантов осуществления, где 1-{(S)-3-[6-(6-метокси-5-трифторметилпиридин-3-ил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[4,3-d]пиримидин-4-иламино]-пирролидин-1-ил}-пропан-1-он представлен в виде фосфатной соли.
В предпочтительном варианте осуществления изобретение относится к фосфатной соли 1-{(S)-3-[6-(6-метокси-5-трифторметил-пиридин-3-ил)-5,6,7,8-тетрагидро-пиридо[4,3-d]пиримидин-4-ил]пирролидин-1-ил}-пропан-1-она.
Как используется в настоящем документе, термин «субъект» относится к животному. Как правило, животное является млекопитающим. Субъект также относится, например, к приматам (например, человеку, мужчине или женщине), коровам, овцам, козам, лошадям, собакам, кошкам, кроликам, крысам, мышам, рыбам, птицам и тому подобное. В некоторых вариантах осуществления субъектом является примат. В предпочтительном варианте осуществления субъектом является человеком.
Как используется в настоящем документе, термин «ингибировать», «ингибирование» или «ингибирующий» относится к ослаблению или подавлению данного состояния, симптома или расстройства, или болезни, или к значительному снижению базового уровня активности биологической активности или процесса.
Как используется в настоящем документе, термин «лечить», «подвергать лечению» или «лечение» какого-либо заболевания или расстройства в одном варианте осуществления относится к облегчению заболевания или расстройства (то есть, к замедлению, или прекращению, или к уменьшению развития заболевания, или по крайней мере одного из его клинических симптомов). В еще одном варианте осуществления «лечить», «подвергать лечению» или «лечение» относится к ослаблению или облегчению по меньшей мере одного физического параметра, включая параметры, которые не могут быть распознаны самим пациентом. В еще одном варианте осуществления «лечить», «подвергать лечению» или «лечение» относится к модуляции заболевания или расстройства либо физически (например, стабилизация выраженного симптома), либо физиологически (например, стабилизация физического параметра), либо и так и иначе. В еще одном варианте осуществления, «лечить», «подвергать лечению» или «лечение» относится к профилактике или задержке начала, или развития, или прогрессирования заболевания или расстройства.
Как используется в настоящем документе, субъект «нуждается» в лечении, если такому субъекту от такого лечения будет лучше с биологической, с медицинской точки зрения, или улучшится качество его жизни.
Как используется в настоящем документе, термин «вводить» или «введение» рассматриваемого соединения означает предоставление соединения по изобретению и его пролекарств субъекту, нуждающемуся в лечении. Введение «в сочетании с» одним или несколькими дополнительными терапевтическими агентами включает одновременное (параллельное) и последовательное введение в любом порядке и любым путем введения.
Другие терапевтические агенты в качестве партнеров по комбинации включают, например, антитела, связывающиеся с CD40, такие как описанные в WO2012/065950; индуцибельный Т-клеточный костимулятор, такой как AMG557; антитела, нацеленные на рецептор фактора активации B-клеток (BAFF-R), такие как описанные в WO2010/007082; IL-2 в низких дозах, антитела против CD20, такие как ритуксимаб; антитела, которые ингибируют фактор, активирующий B-клетки (BAFF), такой как белимумаб; антитела против рецептора интерлейкина-6 (IL-6R), такие как тоцилизумаб; абатацепт; или белетацепт; а также капли циклоспорина для глаз; болезнь-модифицирующие противоревматические препараты (DMARD), такие как метотрексат, сульфасалазин, лефлуномид, гидроксихлорохин и соли золота; ингибиторы фактора некроза опухоли, (TNF)-ингибиторы, такие как инфликсимаб и этанерцепт; нестероидные противовоспалительные препараты, такие как ибупрофен; системные кортикостероиды, такие как преднизон; или другие иммунодепрессанты, такие как азатиоприн, микофенолят мофетил и циклофосфамид.
Другие агенты в качестве партнеров по комбинации включают, например, стимуляторы секреции; агонисты мускариновых рецепторов, такие как цевимелин и пилокарпин; габапентин или прегабалин; заменители слезы; заменители слюны; или вагинальный крем с гормонами.
Фармацевтическая композиция, содержащая 1-{(S)-3-[6-(6-метокси-5-трифторметилпиридин-3-ил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[4,3-d]пиримидин-4-иламино]-пирролидин-1-ил}-пропан-1-он или его фармацевтически приемлемые соли и фармацевтически приемлемый носитель. Подходящие фармацевтически приемлемые носители описаны в WO2012/004299. Предпочтительным путем введения является пероральный.
В одном варианте осуществления изобретение предоставляет комбинацию, в частности, фармацевтическую комбинацию, содержащую терапевтически эффективное количество 1-{(S)-3-[6-(6-метокси-5-трифторметилпиридин-3-ил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[4,3-d]пиримидин-4-иламино]-пирролидин-1-ил}-пропан-1-она или его фармацевтически приемлемых солей и один или более терапевтически активных агентов.
В одном варианте осуществления изобретение предоставляет комбинацию, в частности, фармацевтическую комбинацию, содержащую терапевтически эффективное количество фосфатной соли 1-{(S)-3-[6-(6-метокси-5-трифторметилпиридин-3-ил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[4,3-d]пиримидин-4-иламино]-пирролидин-1-ил}-пропан-1-она и один или более терапевтически активных агентов.
В другом варианте осуществления изобретение предоставляет продукт, содержащий 1-{(S)-3-[6-(6-метокси-5-трифторметилпиридин-3-ил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[4,3-d]пиримидин-4-иламино]-пирролидин-1-ил}-пропан-1-он или фармацевтически приемлемые соли и по меньшей мере один другой терапевтический агент в качестве комбинированного препарата для одновременного, раздельного или последовательного применения в лечении пСШ.
В другом варианте осуществления изобретение предоставляет продукт, содержащий фосфатную соль 1-{(S)-3-[6-(6-метокси-5-трифторметилпиридин-3-ил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[4,3-d]пиримидин-4-иламино]-пирролидин-1-ил}-пропан-1-она и по меньшей мере один другой терапевтический агент, в виде комбинированного препарата для одновременного, раздельного или последовательного применения в лечении пСШ.
Продукты, предоставленные в качестве комбинированного препарата для лечения пСШ, включают композицию, содержащую 1-{(S)-3-[6-(6-метокси-5-трифторметилпиридин-3-ил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[4,3-d]пиримидин-4-иламино]-пирролидин-1-ил}-пропан-1-он или его фармацевтически приемлемые соли и другой терапевтический агент (агенты) вместе в одной и той же фармацевтической композиции, или соединение формулы (I) и другой терапевтический агент (агенты) в отдельной форме, например в виде набора.
Продукты, предоставленные в качестве комбинированного препарата для лечения пСШ, включают композицию, содержащую фосфатную соль 1-{(S)-3-[6-(6-метокси-5-трифторметилпиридин-3-ил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[4,3-d]пиримидин-4-иламино]-пирролидин-1-ил}-пропан-1-она и другой терапевтический агент (агенты) вместе в одной и той же фармацевтической композиции, или соединение формулы (I) и другой терапевтический агент (агенты) в отдельной форме, например в виде набора.
Соответственно, настоящее изобретение предоставляет 1-{(S)-3-[6-(6-метокси-5-трифторметилпиридин-3-ил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[4,3-d]пиримидин-4-иламино]-пирролидин-1-ил}-пропан-1-он или его фармацевтически приемлемые соли для применения при лечении пСШ, где лекарственное средство готовят для введения с другим терапевтическим агентом.
Изобретение также предоставляет применение другого терапевтического средства для лечения пСШ, где лекарственное средство вводят с 1-{(S)-3-[6-(6-метокси-5-трифторметилпиридин-3-ил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[4,3-d]пиримидин-4-иламино]-пирролидин-1-ил}пропан-1-оном или его фармацевтически приемлемыми солями.
Изобретение также предоставляет 1-{(S)-3-[6-(6-метокси-5-трифторметилпиридин-3-ил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[4,3-d]пиримидин-4-иламино]-пирролидин-1-ил}-пропан-1-он или его фармацевтически приемлемые соли для применения в способе лечения пСШ, где 1-{(S)-3-[6-(6-метокси-5-трифторметилпиридин-3-ил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[4,3-d]пиримидин-4-иламино]-пирролидин-1-ил}-пропан-1-он или его фармацевтически приемлемые соли готовят для введения с другим терапевтическим агентом.
Изобретение также предоставляет другой терапевтический агент для применения в способе лечения пСШ, где другой терапевтический агент готовят для введения с 1-{(S)-3-[6-(6-метокси-5-трифторметилпиридин-3-ил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[4,3-d]пиримидин-4-иламино]-пирролидин-1-ил}-пропан-1-оном или его фармацевтически приемлемыми солями.
Изобретение также предоставляет 1-{(S)-3-[6-(6-метокси-5-трифторметилпиридин-3-ил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[4,3-d]пиримидин-4-иламино]-пирролидин-1-ил}-пропан-1-он или его фармацевтически приемлемые соли для применения в способе лечения пСШ, где 1-{(S)-3-[6-(6-метокси-5-трифторметилпиридин-3-ил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[4,3-d]пиримидин-4-иламино]-пирролидин-1-ил}-пропан-1-он или его фармацевтически приемлемые соли вводят с другим терапевтическим агентом.
Изобретение также предоставляет другой терапевтический агент для применения в способе лечения пСШ, где другой терапевтический агент вводят с 1-{(S)-3-[6-(6-метокси-5-трифторметилпиридин-3-ил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[4,3-d]пиримидин-4-иламино]-пирролидин-1-ил}-пропан-1-оном или его фармацевтически приемлемыми солями.
Изобретение также предоставляет применение 1-{(S)-3-[6-(6-метокси-5-трифторметилпиридин-3-ил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[4,3-d]пиримидин-4-иламино]-пирролидин-1-ил}-пропан-1-она или его фармацевтически приемлемых солей для лечения пСШ, где пациента ранее (например не позднее 24 часов) лечили другим терапевтическим агентом.
Изобретение также предоставляет применение другого терапевтического агента для лечения пСШ, где пациента ранее (например не позднее 24 часов) лечили 1-{(S)-3-[6-(6-метокси-5-трифторметилпиридин-3-ил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[4,3-d]пиримидин-4-иламино]-пирролидин-1-ил}-пропан-1-оном или его фармацевтически приемлемыми солями.
Изобретение предоставляет фосфатную соль 1-{(S)-3-[6-(6-метокси-5-трифторметилпиридин-3-ил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[4,3-d]пиримидин-4-иламино]-пирролидин-1-ил}-пропан-1-она для применения при лечении пСШ, где лекарственное средство готовят для введения с другим терапевтическим агентом.
Изобретение также предоставляет применение другого терапевтического агента для лечения пСШ, где лекарственное средство вводят с фосфатной солью 1-{(S)-3-[6-(6-метокси-5-трифторметилпиридин-3-ил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[4,3-d]пиримидин-4-иламино]-пирролидин-1-ил} пропан-1-она.
Изобретение также предоставляет фосфатную соль 1-{(S)-3-[6-(6-метокси-5-трифторметилпиридин-3-ил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[4,3-d]пиримидин-4-иламино]-пирролидин-1-ил}-пропан-1-она для применения в способе лечения пСШ, где фосфатную соль 1-{(S)-3-[6-(6-метокси-5-трифторметил-пиридин-3-ил)-5,6,7,8-тетрагидро-пиридо[4,3-d]пиримидин-4-ил]пирролидин-1-ил}-пропан-1-она получают для введения с другим терапевтическим агентом.
Изобретение также предоставляет другой терапевтический агент для применения в способе лечения пСШ, где другой терапевтический агент получают для введения с фосфатной солью 1-{(S)-3-[6-(6-метокси-5-трифторметилпиридин-3-ил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[4,3-d]пиримидин-4-иламино]-пирролидин-1-ил}-пропан-1-она.
Изобретение также предоставляет фосфатную соль 1-{(S)-3-[6-(6-метокси-5-трифторметилпиридин-3-ил)5,6,7,8-тетрагидропиридо[4,3-d]пиримидин-4-иламино]-пирролидин-1-ил}-пропан-1-она для применения в способе лечения пСШ, где фосфатную соль 1-{(S)-3-[6-(6-метокси-5-трифторметил-пиридин-3-ил)-5,6,7,8-тетрагидро-пиридо[4,3-d]пиримидин-4-ил]пирролидин-1-ил}-пропан-1-она вводят с другим терапевтическим агентом.
Изобретение также предоставляет другой терапевтический агент для применения в способе лечения пСШ, где другой терапевтический агент вводят с фосфатной солью 1-{(S)-3-[6-(6-метокси-5-трифторметилпиридин-3-ил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[4,3-d]пиримидин-4-иламино]-пирролидин-1-ил}-пропан-1-она.
Изобретение также предоставляет применение фосфатной соли 1-{(S)-3-[6-(6-метокси-5-трифторметилпиридин-3-ил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[4,3-d]пиримидин-4-иламино]-пирролидин-1-ил}-пропан-1-она для лечения пСШ, где пациента ранее (например не позднее 24 часов) лечили другим терапевтическим агентом.
Изобретение также предоставляет применение другого терапевтического агента для лечения пСШ, где пациента ранее (например не позднее 24 часов) лечили фосфатной солью 1-{(S)-3-[6-(6-метокси-5-трифторметилпиридин-3-ил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[4,3-d]пиримидин-4-иламино]-пирролидин-1-ил}-пропан-1-она.
В одном варианте осуществления фармацевтическая композиция или комбинация, содержащая 1-{(S)-3-[6-(6-метокси-5-трифторметилпиридин-3-ил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[4,3-d]пиримидин-4-иламино]-пирролидин-1-ил}-пропан-1-он или его фармацевтически приемлемые соли, для лечения пСШ может быть в виде стандартной дозы, содержащей примерно 10-100 мг активного вещества, для субъекта-человека весом примерно 50-70 кг.
В другом варианте осуществления фармацевтическая композиция или комбинация, содержащая 1-{(S)-3-[6-(6-метокси-5-трифторметил-пиридин-3-ил)-5,6,7,8-тетрагидро-пиридо[4,3-d]пиримидин-4-иламино]-пирролидин-1-ил}-пропан-1-он или его фармацевтически приемлемые соли, для лечения пСШ может быть в виде стандартной дозы, содержащей примерно 10-100 мг активного вещества, для субъекта-человека весом примерно 40-200 кг.
В одном варианте осуществления фармацевтическая композиция или комбинация, содержащая фосфатную соль 1-{(S)-3-[6-(6-метокси-5-трифторметилпиридин-3-ил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[4,3-d]пиримидин-4-иламино]-пирролидин-1-ил}-пропан-1-она, для лечения пСШ может быть в виде стандартной дозы, содержащей примерно 10-100 мг активного вещества, для субъекта-человека весом примерно 50-70 кг.
В другом варианте осуществления фармацевтическая композиция или комбинация, содержащая фосфатную соль 1-{(S)-3-[6-(6-метокси-5-трифторметилпиридин-3-ил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[4,3-d]пиримидин-4-иламино]-пирролидин-1-ил}-пропан-1-она, для лечения пСШ может быть в виде стандартной дозы, содержащей примерно 10-100 мг активного вещества, для субъекта-человека весом примерно 40-200 кг.
Терапевтически эффективная доза соединения, фармацевтической композиции или их комбинаций зависит от массы тела, возраста и индивидуального состояния или от тяжести расстройства или заболевания, в отношении которых проводится лечение. Врач или клиницист обычной квалификации может легко определить эффективное количество каждого из активных ингредиентов, необходимых для профилактики, лечения или подавления прогресса заболевания или расстройства.
В другом варианте осуществления фармацевтическая композиция или комбинация, содержащая 1-{(S)-3-[6-(6-метокси-5-трифторметилпиридин-3-ил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[4,3-d]пиримидин-4-иламино]-пирролидин-1-ил}-пропан-1-он или его фармацевтически приемлемые соли, для лечения пСШ может быть в виде стандартной дозы, содержащей примерно 70 мг активного вещества, для субъекта-человека весом примерно 50-70 кг.
В другом варианте осуществления фармацевтическая композиция или комбинация, содержащая 1-{(S)-3-[6-(6-метокси-5-трифторметилпиридин-3-ил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[4,3-d]пиримидин-4-иламино]-пирролидин-1-ил}-пропан-1-он или его фармацевтически приемлемые соли, для лечения пСШ может быть в виде стандартной дозы, содержащей примерно 70 мг активного вещества, для субъекта-человека весом примерно 40-200 кг.
В другом варианте осуществления фармацевтическая композиция или комбинация, содержащая фосфатную соль 1-{(S)-3-[6-(6-метокси-5-трифторметилпиридин-3-ил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[4,3-d]пиримидин-4-иламино]-пирролидин-1-ил}-пропан-1-она, для лечения пСШ может быть в виде стандартной дозы, содержащей примерно 70 мг активного вещества, для субъекта-человека весом примерно 50-70 кг.
В другом варианте осуществления фармацевтическая композиция или комбинация, содержащая фосфатную соль 1-{(S)-3-[6-(6-метокси-5-трифторметилпиридин-3-ил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[4,3-d]пиримидин-4-иламино]-пирролидин-1-ил}-пропан-1-она, для лечения пСШ может быть в виде стандартной дозы, содержащей примерно 70 мг активного вещества, для субъекта-человека весом примерно 40-200 кг.
В другом варианте осуществления фармацевтическую композицию или комбинацию, содержащую 1-{(S)-3-[6-(6-метокси-5-трифторметилпиридин-3-ил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[4,3-d]пиримидин-4-иламино]-пирролидин-1-ил}-пропан-1-он или его фармацевтически приемлемые соли, для лечения пСШ вводят в дозе около 70 мг активного вещества на субъекта-человека весом около 50-70 кг два раза в день.
В другом варианте осуществления фармацевтическую композицию или комбинацию, содержащую 1-{(S)-3-[6-(6-метокси-5-трифторметилпиридин-3-ил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[4,3-d]пиримидин-4-иламино]-пирролидин-1-ил}-пропан-1-он или его фармацевтически приемлемые соли, для лечения пСШ вводят в дозе около 70 мг активного вещества на субъекта-человека весом около 40-200 кг два раза в день.
В другом варианте осуществления фармацевтическую композицию или комбинацию, содержащую фосфатную соль 1-{(S)-3-[6-(6-метокси-5-трифторметилпиридин-3-ил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[4,3-d]пиримидин-4-иламино]-пирролидин-1-ил}-пропан-1-она, для лечения пСШ вводят в дозе около 70 мг активного вещества на субъекта-человека весом около 50-70 кг два раза в день.
В другом варианте осуществления фармацевтическую композицию или комбинацию, содержащую фосфатную соль 1-{(S)-3-[6-(6-метокси-5-трифторметилпиридин-3-ил)-5,6,7,8-тетрагидропиридо[4,3-d]пиримидин-4-иламино]-пирролидин-1-ил}-пропан-1-она, для лечения пСШ вводят в дозе около 70 мг активного вещества на субъекта-человека весом около 40-200 кг два раза в день.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ДАННЫЕ
Так как получение исходных материалов конкретно не описано, соединения являются известными или могут быть получены способами, аналогичными известным в данной области или описанным ниже.
Следующие примеры иллюстрируют изобретение без каких-либо ограничений.
Сокращения:
Сокращенние Описание
Akt см. PKB
APC Антиген-презентирующая клетка
BCR Рецептор B-клеток
BD Becton Dickinson
b.i.d. два раза в день («bis in die»)
BMMC Тучные клетки, полученные из костного мозга
BSA Бычий сывороточный альбумин
CsA Циклоспорин A
ДМСО Диметилсульфоксид
EC50 Концентрация, приводящая к 50%-ному эффекту
FACS Флуоресцентная сортировка клеток
fMLP N-Формилметионил-лейцил-фенилаланин
HEL Лизоцим куриного яйца
IC50 Концентрация, приводящая к 50%-ному ингибированию
IFNα альфа-Интерферон
Ig Иммуноглобулин
IL Интерлейкин
InsR Инсулиновый рецептор
LLOQ Нижний предел количественных колебаний
LPS Липополисахарид
m-IL-3 Мышиный IL-3
MLR Реакция смешанных лимфоцитов
mTOR Мишень рапамицина в клетках млекопитающих
но не определено
PBMC Мононуклеарные клетки периферической крови
pDC Плазмацитоидная дендритная клетка
PDK1 3-Фосфоинозитидзависимая протеинкиназа 1
PH Плекстрин-гомологичный домен
PI Фосфатидил-инозитол
PI3K Фосфатидил-инозитол-3-киназа
PKB Протеинкиназа B (также известная как Akt)
rIL-4 Интерлейкин-4 крысы
RT Комнатная температура
SCF Фактор роста стволовых клеток
SD Стандартное отклонение
SEM Стандартная средняя ошибка
Ser473 Серин в положении 473
Th T хелперная клетка
TLR Toll-подобный рецептор
Активация В-клеток человека в разбавленной цельной крови .
Метод. Для оценки влияния активации B-клеток на стимуляцию поверхностных B-клеточных рецепторов B-лимфоциты в 90% человеческой цельной крови стимулировали инкубацией только с антителами против IgM (aIgM) или в комбинации с IL-4 (aIgM/IL-4) в присутствии дозированных количеств соединений. Стимуляции в цельной крови четко отражают физиологическое состояние и учитывают потенциальное связывание с белками плазмы. Ранняя активация через сигнальный путь, ближайший к мишени PI3K, визуализировалась как ингибирование фосфорилирования Akt.
Для оценки эффектов in vitro соединения А на маркеры активации поверхности B-клеток при стимуляции, в 96-луночные планшеты для микротитрования с U-образным дном (Nunc) помещали 180,5 мкл гепаринизированной цельной крови с 9,5 мкл предварительно разбавленного соединения А, получая 2-кратное серийное разведение с концентрацией от 50 до 0,008 мкМ. Контрольные лунки предварительно обрабатывали ДМСО с получением конечной концентрации 0,5% ДМСО. Культуры готовили в двух повторах, хорошо перемешивали на планшетном шейкере (30 сек, скорость 900), смешивали в пипетке и снова взбалтывали на планшетном шейкере. Культуры инкубировали при 37°C, 5% СО2, в течение 1 часа. Затем 10 мкл стимулирующего раствора, описанного выше и смешанного, как описано выше, и культуры инкубировали при 37°C, 5% СО2, в течение еще 24 часов.
Анализ методом проточной цитометрии
После инкубации клеточные агрегаты разрушали добавлением к культурам 15 мкл/лунку 25 мМ раствора EDTA, рН 7,4. Образцы тщательно перемешивали встряхиванием на планшетном шейкере (скорость 900) в течение 15 мин. Клетки окрашивали добавлением 25 мкл смеси флуоресцентно меченых антибиотиков, перемешивали на планшетном шейкере (30 сек, скорость 900) и инкубировали в течение 30 мин в темноте при комнатной температуре. Образцы окрашивали анти-huCD3-APC-Cy7 (Becton Dickinson [BD] #557832), чтобы обеспечить гейтинг Т-клеток, и анти-huCD19-APC (BD #555415), чтобы обеспечить гейтинг В-клеток в анализе FACS. Кроме того, образцы окрашивали комбинациями следующих антител, как описано в разделе «Результаты»: анти-huCD69-PE-Cy7 (BD #557745) и анти-huCD86-PE-Cy5 (BD #555659).
После окрашивания образцы переносили в 96-луночные планшеты для микротитрования с глубокими лунками и V-образным дном (Corning #396096), содержащие 2 мл/лунку 1×BD раствора для лизиса (BD #349202). Планшеты перемешивали путем смешивания в пипетке и инкубировали в течение 10 мин в темноте при комнатной температуре. Планшеты центрифугировали при 450×g в течение 5 мин, и после удаления супернатанта в каждую лунку добавляли 2 мл CellWASH (BD #349524). Планшеты опять центрифугировали при 450×g в течение 5 мин, супернатант удаляли и клеточный осадок ресуспендировали в 0,5 мл CellWASH.
Данные получали на проточном цитометре BD LSR II с использованием программного обеспечения BD FACSDiva (версия 4.1.2). Лимфоциты гейтировали в координатах FSC/SSC в соответствии с размером и зернистостью и затем анализировали на экспрессию CD19, CD3 и маркеры активации. Данные вычисляли на основе дот-блотов в виде процентов клеток, положительно окрашенных для маркеров активации в популяции CD19+ или CD3+.
Статистическая оценка
Отношение сигнал/шум (S/N) рассчитывали путем деления процентов маркер-положительных B- или Т-клеток из образцов активированной крови на процент маркер-положительных B или Т-клеток из неактивированных образцов.
Процент ингибирования активации B или T-клеток после воздействия лекарственного средства рассчитывали по следующей формуле:
Figure 00000002
Для подгонки нелинейной регрессии использовалось программное обеспечение ORIGIN 7 (OriginLab Corporation, Northampton, MA). Концентрацию лекарственного средства, приводящую к 50%-ному ингибированию (IC50), получали путем подгонки уравнения Хилла к данным ингибирования.
Для оценки эффектов in vitro соединения А на маркер активации внутриклеточного пути pAkt при стимуляции, 180 мкл гепаринизированной цельной крови с 10 мкл предварительно разбавленного соединения А помещали в 5 мл-овые U-образные пробирки (BD, кат. #52063), что приводило к разведению с диапазоном концентрации от 16666 нМ до 0,8 нМ. Контрольные образцы предварительно обрабатывали ДМСО с получением конечной концентрации 0,17% ДМСО. Культуры готовили в двух повторах, хорошо перемешивали путем взбалтывания на Vortex (3 раза по 5 сек, скорость 1800). Образцы инкубировали при 37°C на водяной бане в течение 1,5 часов (закрытые крышки). Затем добавляли стимулятор в объеме 10 мкл, перемешивали (3 раза по 5 сек, скорость 1800) и инкубировали в течение 20 мин при 37°C на водяной бане.
Лизис, фиксация и пермеабилизация
После инкубации добавляли предварительно нагретый (37°C на водяной бане) буфер BD Phosflow Lyse/Fix (BD, кат #558049) по 2 мл на каждую пробирку и встряхивали в течение 3 секунд на Vortex и инкубировали в течение 20 минут при 37°C на водяной бане. Образцы центрифугировали при 400 g в течение 5 мин. После центрифугирования в каждую пробирку добавляли по 2 мл BD Phosflow Perm/промывочный буфер I (BD, кат. #557885) и инкубировали при комнатной температуре (RT) в темноте в течение 10 мин. После центрифугирования при 400 g в течение 5 мин осадок в пробирке после центрифугирования промывали 2 мл BD Phosflow Perm/промывочного буфера I и снова центрифугировали при 400 g в течение 5 мин. Супернатанты отбрасывали и образцы окрашивали, как описано ниже.
Анализ методом проточной цитометрии
Для анализа pAkt обработанные образцы крови человека окрашивали анти-hu CD20 (Alexa488-меченный анти-huCD20, BD кат. #558056), чтобы обеспечить гейтинг В-клеток в цитометрическом анализе. Кроме того, образцы окрашивали конъюгированным с Alexa647 античеловеческим фосфо-Akt (Ser473, BD, кат. #560343).
Процедуры окрашивания проводили в BD Phosflow Perm/промывочном буфере I при комнатной температуре в течение 30 мин в темноте. После инкубации образцы промывали 2 мл BD Phosflow Perm/промывочного буфера I и центрифугировали при 400 g в течение 5 минут, и осадок в пробирке после центрифугирования ресуспендировали в 300 мкл буфера для окрашивания BD (BD, кат. #554656). Образцы хранили на льду до тех пор, пока не получали данные на проточном цитометре LSRII (BD Biosciences) с использованием программного обеспечения DIVA (версия 6.1.2). Лимфоциты гейтировали в координатах FSC/SSC дот блота в соответствии с размером и зернистостью и затем анализировали на экспрессию CD20 и фосфорилирование Akt. Данные вычисляли на основе дот-блотов или гистограмм в виде процентов клеток, положительно окрашенных для Akt-фосфорилирования в популяции CD20+. Статистическую оценку выполняли, как описано выше для маркеров поверхностной активации.
Результаты. (Таблица 1).
Таблица 1 Ингибирование функций В-клеток человека в цельной крови
Матрикс 90%-ная кровь человека
Стимулятор aIgM/IL-4 aIgM
Показания приборов CD69 CD86 pAktе
(A)
IC50 [мкM]		 0,193d 0,202d 0,144
dПоказанные данные представляют собой средние значения ±SD по меньшей мере четырех независимых экспериментов;
еПоказанные данные представляют собой средние значения ±SD по меньшей мере двух независимых экспериментов
Пролиферация B-клеток мышей после стимуляции BCR .
Метод. В-клетки мышей стимулировали с помощью BCR антителом против IgM в присутствии титрованных количеств соединений, как описано в (Julius et al 1984), и пролиферацию оценивали путем включения радиоактивного 3Н-тимидина.
Результаты. (Таблица 2).
Продукция антител, индуцированная LPS, B-клетками мышей in vitro .
Метод. Индуцированные LPS функции В-клеток исследовали по протоколу, адаптированному по Moon (Moon et al 1989) с незначительными модификациями: B-клетки селезенки мышей Balb/c nu/nu культивировали с mIL-4, mIL-5 и LPS в присутствие отмеренных количеств соединения. Конечные концентрации составляли 0,5×105 спленоцитов/лунку, 500 Ед/мл mIL-4, 500 Ед/мл mIL-5 и 50 мкг/мл LPS. Супернатанты анализировали на продукцию антител с помощью ELISA после 6 дней инкубации.
Результаты. (Таблица 2).
Презентация антигена и производство цитокинов В-клеток трансгенных мышей BCR .
Метод. Очистка CD19+ В-клеток селезенки мышей MD4 HEL BcR Tg. Трансгенные B10.BR (MD4 B10.BR) мыши MD4 HEL BcR были любезным даром профессора Хосе Морено (Research Unit on Autoimmune Diseases, Centro Medico Nacional Siglo XXI, Mexico).
Селезенки выделяли из мышей MD4 B10.BR и контрольного нетрансгенного помета B10.BR после умерщвления путем воздействия избыточного количества изофлурана. Изъятые селезенки суспендировали в RPMI1640 (Invitrogen, #31870) и диссоциировали диссоциатором GentleMACS (Miltenyi Biotec) и фильтровали с помощью Cell Strainer (BD Falcon, 70 мкм меш, #352350). Отдельную суспензию клеток селезенки дополнительно обрабатывали лизирующим буфером (Sigma, #R7757) для удаления эритроцитов, два раза промывали PBS и ресуспендировали в полной культуральной среде, состоящей из RPMI-1640, дополненной 10% FBS, 100 Ед/мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина и 50 мкМ 2-меркаптоэтанола (2-ME). Последующую очистку В-клеток селезенки осуществляли путем истощения не-В-клеток магнитной сортировкой клеток, AutoMACS (Miltenyi Biotec) в соответствии с инструкцией производителя. Вкратце, 1×107 клеток селезенки, суспендированных в 40 мкл буфера MACS, PBS, дополненным 0,5% бычьего сывороточного альбумина (BSA) и 2 мМ EDTA, инкубировали с 10 мкл коктейля из биотинилированных антител, состоящего из моноклональных антител против CD43 (Ly48, крысиный IgG2а), CD4 (L3T4, крысиный IgG2b) и Ter-119 (крысиный IgG2b) в течение 15 минут на льду. После обработки коктейлем из биотинилированных антител спленоциты далее инкубировали с 30 мкл антибиотиновых антител в течение 15 минут на льду, повторно суспендировали в 1 мл буфера MACS и применяли для очистки В-клеток с помощью AutoMACS. В программе AutoMACS была выбрана программа «Deplete», и негативную фракцию из выходного отверстия neg1 собирали в виде фракции, богатой В-клетками. Чистоту определяли по доле клеток CD19+ в выделенной фракции в анализе FACS, и она составляла более 95%.
Окрашивание клеток и анализ FACS
Очищенные В-клетки ресуспендировали в 50 мкл ледяного буфера FACS (PBS, дополненный 0,1% азида и 0,1% BSA). Суспензии клеток в буфере FACS обрабатывали 1 мкл Fc block (крысиное антитело против мышиного CD16/CD32, BD Pharmingen, #553142) в течение 10 минут на льду. После обработки Fc block, клетки окрашивали в течение 30 минут на льду с помощью анти-CD19 PerCp для идентификации популяции B-клеток и затем анти-HEL48-61 пептидом/МНС класса II I-Ак (Aw3.18.14) антителами с последующим антимышиным IgG1 PE антителом для измерения активации клеток, а также антигенпрезентирующей активности. Образцы окрашенных клеток дважды промывали 5 мл ледяного буфера FACS и анализировали с помощью FACS Calibur (BD Bioscience).
Антитело Aw3.18.14 (Dadaglio G et al. 1997) очищали от гибридомной культуры (ATCC, #CRL2826) с помощью центрифужного фильтра Amicon 30 кДа (Milliore, #LSK2ABA20). Все другие антитела приобретали у компании BD Bioscience.
Данные FACS анализировали и рассчитывали среднюю интенсивность флуоресценции (MFI) с использованием программного обеспечения FlowJo (Tree Star Inc). Значения IC50 рассчитывали с помощью программного обеспечения GraphPad PRISM, версия 6.0 (GraphPad Software Inc).
Измерение антиген-нагрузки через MHC II
Один миллион спленоцитов или очищенных В-клеток мышей MD4 B10.BR суспендировали в 500 мкл полной культуральной среды и высевали в 24 луночном планшете. Клетки предварительно обрабатывали соединением А в течение 30 мин и затем культивировали с определенными концентрациями белка HEL при 37°C, 5% CO2, в течение ночи. После культивирования в течение ночи клетки собирали и направляли на анализ FACS для измерения уровня экспрессии комплекса HEL пептида/MHC II на клетки CD19+, как описано выше. ДМСО поддерживали при концентрации менее 0,1%.
Определение освобождения провоспалительных цитокинов
Один миллион очищенных В-клеток от MD4 B10.BR, как указано в разделе 2.1, суспендировали в 200 мкл полной культуральной среды и стимулировали 100 мкМ белков HEL растворимым CD40-лигандом при 37°CC, 5% CO2, в течение 48 часов. Соединение А добавляли к культуре за 30 минут до стимуляции. После стимуляции протеином HEL супернатанты культуры собирали и применяли для измерения IL-6 и TNFα с помощью ELISA в соответствии с инструкцией изготовителя (R&D systems). Данные представлены в виде среднего значения концентрации (пг/мл) из трех повторов, и вычисляли значения IC50, как описано выше. Концентрацию ДМСО поддерживали при концентрации менее 0,1%.
Результаты. (Таблица 2).
Таблица 2 Ингибирование функций В-клеток мыши
Матрикс Селезенка мыши B-клетки мыши BCR tg
Стимулятор Анти-IgM LPS/
IL-4		 Лизоцим куриного яйца (HEL)
Показания приборов Пролиферация IgM Функция APC IL-6 TNFα
(A)
IC50 [мкМ] 		0,008a 0,234a 0,395b 0,022a 0,028a
a Показанные данные представляют собой среднее по меньшей мере для двух независимых экспериментов; b Показанные данные представляют собой среднее по меньшей мере для четырех независимых экспериментов
Продукция хемокинов периферическими мононуклеарными клетками крови человека (РВМС)
Метод.
Выделение РВМС
Для оценки влияния соединения А на продукцию хемокинов, относящихся к образованию зародышевых центров, РВМС выделяли из Buffy Coat (полученных через Inter-Regionale Blutspende of the Swiss Red Cross) с помощью стандартного градиентного центрифугирования Ficoll с использованием Ficoll-Paque plus (GE healthcare #17-1440-03) в пробирках Leucosep (Greiner Bio-one #227289). Клетки два раза промывали PBS и затем ресуспендировали при 2,2×106/мл в среде RPMI 1640, дополненной 10% FBS, гентамицином (50 мкг/мл), инсулин-трансферрин-селеном и β-меркаптоэтанолом (50 мкМ).
Стимулирование РВМС
PBMC распределяли на 48-луночные планшетах (Costar #3548) и инкубировали с предварительно разбавленным соединением А, получая разбавление с конечной концентрацией 0,3, 1 или 3 мкМ. Контрольные образцы предварительно обрабатывали ДМСО с получением конечной концентрации 0,03% ДМСО. Образцы тщательно перемешивали и инкубировали в гумифицированном инкубаторе при 37°C в течение 1 часа. Затем клетки стимулировали добавлением агониста TLR9 ODN M362 (Invivogen, #tlrl-m362) с конечной концентрацией 30 мкг/мл или анти-IgM-декстраном (Finabiosolution #0004) при конечной концентрации 2 мкг/мл. Контрольные образцы оставались нестимулированными. Образцы тщательно перемешивали и инкубировали в гумифицированном инкубаторе при 37°C в течение 24 часов.
Определение цитокинов/хемокинов
После стимуляции супернатанты культуры собирали, и количество хемокинов определяли с помощью иммуноанализа Bio-Plex Multiplex (CXCL13, Bio Rad #171BK12MR2) или MSD V-Plex (IP-10; Meso Scale Diagnostics) или в соответствии с инструкциями изготовителя.
Результаты. (Таблицы 3 и 4).
Таблица 3 Ингибирование продукции CXCL13, индуцированной лигандом TLR9
стимулятор но ODN ODN ODN ODN
Соединение A (нМ) но но 3000 1000 300
Донор 1 1а 61 41 42 51
Донор 2 1 19 4 6 8
Донор 3 0 14 5 7 8
Донор 4 1 9 3 3 3
Донор 5 1 63 29 42 39
Донор 6 4 202 86 84 113
среднее 1 61 28 31 37
SD 1 73 33 32 42
% ингибирования 55 51 40
aКоличество определенного CXCL13 в супернатанте культуры представлено в виде пг/мл
Таблица 4 Ингибирование продукции IP-10, индуцированной лигандом анти-IgM-декстрана
стимулятор но анти-IgM-декстран анти-IgM-декстран анти-IgM-декстран анти-IgM-декстран
Соединение A (нМ) но но 3000 1000 300
Донор 1 117 3026 715 1624 2764
Донор 2 48 106 93 71 79
Донор 3 15 77 27 29 32
Донор 4 17 35 34 42 37
Донор 5 88 1460 899 1010 1233
Донор 6 442 58 59 52 52
среднее 121 794 305 471 699
SD 162 1227 394 683 1117
% ингибирования 62 41 12
aКоличество измеренного IP-10 в супернатанте культуры представлено в виде пг/мл
CXCL13-индуцированная миграция В-клеток
Метод.
Выделение B-клеток из Buffy Coat
PBMC выделяли из Buffy Coat, как описано выше. Клетки дважды промывали PBS и затем ресуспендировали при 5×107/мл в PBS, содержащем 2% FBS и 1 мМ EDTA. Дальнейшую очистку В-клеток осуществляли путем истощения не-В-клеток с помощью набора для обогащения человеческих клеток EasySep™ (STEMCELL Technologies #19054) в соответствии с инструкцией изготовителя. Вкратце, 4×108 РВМС в 8 мл изолирующего буфера инкубировали с 400 мкл обогащенного коктейля в 14 мл-овой круглодонной пробирке в течение 10 минут при комнатной температуре. PBMC затем инкубировали с 600 мкл магнитных частиц в течение 5 минут при комнатной температуре. Для выделения В клеток пробирку помещали на магнит на 5 мин, и обогащенные В клетки собирали в свежей пробирке объемом 14 мл. Клетки два раза промывали и ресуспендировали при 5×106/мл в среде RPMI 1640, дополненной 10% FBS, гентамицином (50 мкг/мл), инсулин-трансферрин-селеном и β-меркаптоэтанолом (50 мкМ).
Анализ миграции на 96-луночном планшете со вставками Transwell
Выделенные В клетки помещали в 5 мл-овую круглодонную пробирку (Costar #352054) и инкубировали с предварительно разбавленным соединением А, получая разбавление с конечной концентрацией 10, 1, 0,1 или 0,01 мкМ. Контрольные образцы предварительно обрабатывали ДМСО с получением конечной концентрации 0,1% ДМСО. Образцы тщательно перемешивали и инкубировали на водяной бане при 37°C в течение 30 минут. Около 235 мкл CXCL13 (R&D Systems #801-CX) в разведении с конечной концентрацией 100 нМ добавляли в лунки 96-луночного планшета-приемника со вставками Transwell (Costar #3387). Контрольные лунки заполняли по 235 мкл среды. 5 мкм-овый проницаемый вкладыш-подложку помещали на планшет-приемник и заполняли 80 мкл предварительно инкубированных В клеток. Планшет со вставками Transwell инкубировали в гумифицированном инкубаторе при 37°C в течение 3 часов. Проницаемый вкладыш-подложку удаляли, и число клеток в приемной пластине оценивали с помощью проточной цитометрии.
Результаты. (Таблица 5).
Таблица 5 Ингибирование миграции B-клеток, индуцированной CXCL13
стимулятор но CXCL13 CXCL13 CXCL13 CXCL13 CXCL13
Соединение A (нМ) но но 10000 1000 100 10
число клетокa 737 6981 2043 3743 4556 6165
SD 42 478 353 594 317 953
% ингибирования 100 0 79 52 39 13
StD 1 8 6 10 5 15
aСреднее значение для 4 лунок
Зависимое от времени ингибирование Akt-фосфорилирования ex vivo с помощью разовой пероральной дозы тестируемого соединения у крыс
Метод.
Животные
Все эксперименты проводились на взрослых самцах крыс Lewis (LEW/Han/Hsd, Charles River, Germany и LEW/Orl@Rj, Janvier, France), весом 220-280 г.
Условия содержания животных
Животных содержали в стандартных гигиенических условиях и давали стандартный корм и питьевую воду ad libitum. Им разрешался неограниченный доступ к корму и воде до и во время эксперимента.
Реагенты
В качестве антикоагулянта использовали высокомолекулярный натрий гепарин (B. Braun, Melsungen, Germany, 5000 МЕ/мл). Антитело козы к IgM крысы было получено от компании Serotec, Düsseldorf Germany (кат. #302001). Буфер I BD Phosflow Lyse/Fix был получен от BD biosciences (кат. #558049). Рекомбинантный крысиный IL-4 (BD, кат. #555107) хранили в аликвотах при -80°C.
Лекарственные средства и применение лекарственного средства in vivo
Суспензия для введения была свежеприготовленной и хранилась в темноте при комнатной температуре. 14,8 мг соединения А суспендировали в 5,92 мл CMC 0,5% с 0,5% Tween80. Затем животному вводили молочную гомогенную суспензию. Исследуемые вещества вводили перорально в объеме 4 мл/кг массы тела в виде пероральной дозы в 10 мг/кг.
Забор крови
Животных анестезировали изофлураном при использовании системы воздушного потока Fluvac. Цельную кровь собирали сублингвально перед дозированием и через 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12 и 24 часа после дозирования. Для фармакодинамического анализа 100 мкл крови крыс собирали во временной точке в пробирки Эппендорфа с 30 МЕ натрий гепарином (B. Braun, Melsungen, Germany, 5000 МЕ/мл). Для фармакокинетического анализа 150 мкл крови крыс собирали во временной точке в пробирки Эппендорфа, покрытые EDTA (Milian кат. #TOM-14).
Фармакокинетический анализ
Для фармакокинетического анализа 150 мкл каждого образца цельной крови перед анализом хранили при -80°C. После добавления 20 мкл внутреннего стандарта (конц.=400 нг/мл) до 80 мкл аликвоты каждого образца цельной крови, клетки и белки после осаждения 400 мкл ацетонитрила удаляли центрифугированием. Затем органический верхний слой выпаривали досуха. Остатки растворяли в 50%-ном ацетонитриле, содержащем 0,2% муравьиной кислоты, разводили 0,2% муравьиной кислотой, центрифугировали и затем перед анализом хранили при 10°C. Для калибровки к 8 пустым образцам цельной крови добавляли соединение в количестве от 1 до 5000 нг/мл. Пробы для контроля качества и восстановления были установлены как 100 нг/мл.
Для анализа 10 мкл аликвоты каждой пробы образца вводили в систему ЖХ-МС-МС. Соединения разделяли на колонке с обращенной фазой Reprosil-pur C18, используя линейный градиент от 5 мМ формиата аммония, содержащего 0,2% муравьиной кислоты, до ацетонитрила, содержащего 5% метанола, в течение 5 минут. Для обнаружения использовалась масс-спектрометрия в MRM с массовым переходом 451,2 m/z→247,0 m/z. После ионизации выходящего потока из колонны в источнике электрораспыления AP, соединение А и внутренний стандарт регистрировали в виде ионов [MH]+ продукта.
Концентрации соединения А рассчитывали с помощью XKalibur® и Excel® на основе соотношения площадей извлеченных пиков, полученных из относительной интенсивности сигнала МС/МС. Было определено, что LOQ составляет 1 нг/мл, и точность калибровки между 1 нг/мл и 1000 нг/мл была лучше, чем 5%. Мера точности образцов QC (n=5 при 100 нг/мл) была лучше, чем 4,7% RSD, и восстановление составляло 102,6%.
Стимуляция в цельной крови in vitro
Для ex vivo анализа крови у обработанных лекарственными средствами животных 90 мл гепаринизированной крови смешивали в 5 мл пробирках с U-образным дном (BD, кат. #352063) со 100 мл среды RPMI (Gibco, кат. #31870) сразу же после сбора крови и активировали 10 мкл анти-крысиного IgM/rIL-4 при конечной концентрации анти-крысиного IgM 50 мг/мл и rIL-4 10 нг/мл. Контрольные образцы оставались нестимулированными. Образцы тщательно перемешивали и инкубировали в течение 10 минут при 37°C на водяной бане.
Лизис, фиксация и пермеабилизация
После инкубации в каждую пробирку добавляли 2 мл предварительно нагретого (37°C на водяной бане) буфера BD Phosflow Lyse/Fix. Образцы тщательно перемешивали и инкубировали в течение 20 минут при 37°C на водяной бане. Затем образцы центрифугировали при 400 g в течение 5 минут. После центрифугирования в каждую пробирку добавляли 2 мл BD Phosflow Perm/промывочного буфера. Образцы тщательно перемешивали и инкубировали при комнатной температуре (RT) в темноте в течение 10 минут. После этого образцы замораживали на сухом льду и затем хранили при -80оC до окрашивания FACS.
Анализ методом проточной цитометрии
Для разморозки все образцы инкубировали в течение 10 минут на водяной бане при 25°C. После центрифугирования при 400 g в течение 5 минут осадок после центрифугирования промывали 2 мл BD Phosflow Perm/промывочным буфером и снова центрифугировали при 400 g в течение 5 минут. Супернатанты удаляли. Для анализа pAkt образцы окрашивали PE-меченным анти-крысиным IgM (BD, кат. #553888), чтобы обеспечить гейтирование на B-клетках в анализе FACS. Кроме того, образцы окрашивали Alexa647, конъюгированным с анти-фосфо-Akt (Ser473; BD, кат. #560343). Процедуры окрашивания проводили в общем объеме 100 мкл BD Phosflow Perm/промывочного буфера при комнатной температуре в течение 30 минут в темноте. После инкубации образцы промывали 2 мл BD Phosflow Perm/промывочного буфера и центрифугировали при 400 g в течение 5 минут и осадок после центрифугирования ресуспендировали в 300 мкл буфера для окрашивания BD (BD, кат. #554656). Образцы хранились на льду до тех пор, пока не были получены данные на проточном цитометре LSRII (BD Biosciences) с использованием программного обеспечения DIVA (версия 6.1.2). Лимфоциты гейтировали в дот блоте FSC/SSC в соответствии с размером и зернистостью и дополнительно анализировали на экспрессию IgM и фосфорилирование Akt. Данные рассчитывали на основе дот-блотов или гистограмм в процентах от клеток, положительно окрашенных для Akt-фосфорилирования в популяции IgM+.
Статистическая оценка
Эффекты лекарственных средств ex vivo выражали в виде ингибирования Akt-фосфорилирования, определенного проточной цитометрией. Процент ингибирования Akt-фосфорилирования рассчитывали по следующей формуле:
Figure 00000003
Результаты. (Таблица 6).
Таблица 6 Зависимое от времени ингибирование Akt-фосфорилирования у крыс
% ингибирования pAkt в B-клетках IgM+
время [ч] крыса 1 крыса 2 крыса 3 крыса 4 Средний показатель SD.
0 -2,0 15,7 6,9 -20,6 0,0 15,5
1 100,0 98,2 95,6 99,1 98,2 1,9
2 100,9 97,3 101,8 98,2 99,6 2,1
4 93,8 100,0 105,3 81,4 95,1 10,3
6 76,1 99,1 94,7 83,1 88,2 10,6
8 83,1 83,1 85,8 65,4 79,4 9,4
10 69,0 74,3 76,9 62,7 70,7 6,3
12 74,3 71,6 73,4 69,0 72,1 2,3
24 30,8 40,6 37,0 12,2 30,2 12,6
Группу из четырех крыс Lewis обрабатывали разовой пероральной дозой 10 мг/кг соединения A. В указанные моменты времени 50% цельной крови крысы стимулировали анти-крысиным IgM/rIL-4, и Akt-фосфорилирование определяли, как описано в разделе «Метод». Данные показывают отдельные и средние значения четырех животных с SD.
Фармакокинетический анализ соединения А в плазме человека
Метод. Образец цельной крови получали либо прямой венопунктурой, либо через постоянную канюлю, вставленную в предплечье. Образцы крови собирали в пробирки, содержащие триэтилендиаминтетрауксусную кислоту (K3 EDTA), и центрифугировали в течение 60 минут при 3-5°C для отделения плазмы. Полученную плазму замораживали и хранили при -20°C до измерения концентрации лекарственного средства.
Концентрации в плазме соединения А определяли количественно с использованием проверенного метода электрораспылительной ионизационной жидкостной хроматографии-тандемной масс-спектрометрии (ВЭЖХ-МС/МС) в режиме положительных ионов. Вкратце, 40 мкл образцов плазмы переносили в планшет для осаждения белка Impact, помещенный на 96-луночный планшет. Сто пятьдесят микролитров внутреннего стандарта [13CD3] соединение А, разведенного до 4 нг/мл, полученного в 75% ацетонитриле в воде, добавляли в 96-луночный планшет, затем подвергали вихревому перемешиванию. Для контрольных пустых образцов вместо этого добавляли сто пятьдесят микролитров 75% ацетонитрила в воде, не содержащей внутреннего стандарта. Планшет, запечатанный пленкой, встряхивали в течение 10 минут, центрифугировали (10 минут, 2250 g, при 4°C). Пробу образца объемом 4 мкл вводили в систему ЖХ/МС/МС (API4000, Applied Biosystems).
Хроматографическое выделение соединения А проводили с использованием Ascentis 2,7 мкм C18, 50×2,1 мм (Sigma-Aldrich) при 40°C и скорости потока 1,00 мл/мин. Подвижная фаза состояла из A: 0,1% муравьиной кислоты в воде, и B: 0,1% муравьиной кислоты в ацетонитриле. Начальное состояние с 10% подвижной фазы В поддерживали в течение первых 0,3 мин, состав подвижной фазы В увеличивали линейно до 50% в течение следующих 0,3 мин, резко поднимали до 95% за 1,0 мин, а затем возвращали до 10%. Время удерживания соединения А и его внутреннего стандарта составляло приблизительно 1,4 мин. Выбранные массовые переходы для соединения А и [13CD3] соединения А были, соответственно, 451,2→247,1, 174,1 и 455,3→251,2, 174,2, 124,2.
Калибровочные кривые строили с использованием соотношений площадей пиков (соединение А по сравнению с [13CD3] соединением А) калибровочных стандартов, применяя алгоритм квадратичной регрессии по методу взвешенных (1/концентрация в квадрате) наименьших квадратов.
Концентрации соединений А в клинических образцах были пересчитаны из соотношений площадей пиков относительно калибровочной кривой (программное обеспечение Analyst). Метод был успешно проверен в диапазоне от 3 нг/мл до 1000 нг/мл с LLOQ 3 нг/мл. Динамический диапазон был охвачен 7 калибровочными стандартами. Метод отвечал заданным критериям для принятия в отношении линейности (отклонение калибровочных стандартов ≤15% (≤ 20% при LLOQ) от калибровочной кривой), правильности и точности в разные дни и в течение дня (среднее устойчивое отклонение ≤ 15% (≤20% в LLOQ) номинальной величины, точности ≤ 15% (≤20% при LLOQ)), а также реакции переноса.
Результаты. (Фигура 1).
Измерение pAkt в В-клетках в стимулированных/нестимулированных клинических образцах крови
Метод.
Забор крови и стимуляция клеток
Для оценки in vivo эффектов соединения А на активацию В-клеток человека, измеряемого как фосфорилирование Akt, клинические образцы получали из цельной крови с использованием системы Na-Heparin monovette.
Затем целую кровь инкубировали либо с анти-IgM/IL-4 (7,5 мкг/мл анти-IgM [Southern Biotech] и 7,5 нг/мл IL-4 [R&D]), либо с PBS (нестимулированный образец). Инкубацию проводили с использованием 95 мкл крови (в двух повторах) в формате планшета в течение 1 ч после сбора крови. Культуры хорошо смешивали, осторожно перемешивая в пипетке, и инкубировали при 37°C (в инкубаторе, 5% CO2). Через 30 минут цельную кровь лизировали и фиксировали предварительно нагретым (37°C) BD PhosFlow-Lyse/Fix буферомr (1600 мкл) в течение 20 минут при 37оC (водяная баня) в темноте. Лизис и фиксированные образцы крови немедленно замораживали и хранили при -80°C до дальнейшей обработки.
Окрашивание для маркера активации В-клеток
Клинические образцы обрабатывали в течение одной недели после сбора крови. После полного размораживания (при 37°C на водяной бане) образцы центрифугировали при 502 g (1580 об/мин) в течение 5 мин при комнатной температуре. Затем осажденные при центрифугировании клетки промывали 500 мкл ледяного буфера BD Phosflow Perm II, хорошо перемешивали и выдерживали на льду в течение 30-35 минут. После инкубации добавляли 1200 мкл буфера FACS и клетки центрифугировали в течение 10 мин при 650 g (1800 об/мин) при комнатной температуре. Супернатанты отбрасывали и образцы снова промывали, как описано выше. Процедура окрашивания включала как прямое окрашивание (анти-человеческим CD20 Per-CP-Cy5.5-меченым [BD кат. #558021] и анти-человеческим цельным антагонистом Akt Alexa Fluor® 488 конъюгированным [Cell Signaling кат. #2917S]), так и непрямое окрашивание для pAkt (Ser473) (Cell Signaling кат. #4058L). Сначала клетки инкубировали с первичными антителами (общий объем 50 мкл) в течение 30-35 мин при комнатной температуре в темноте с последующим промыванием буфером FACS (1200 мкл) и центрифугированием при 650 g (1800 об/мин) в течение 10 мин при комнатной температуре. Осадок клеток после центрифугирования дополнительно инкубировали со вторичным Ab (общий объем 50 мкл) в течение 15-17 минут при комнатной температуре в темноте с последующей промывкой буфером FACS (1200 мкл) и центрифугированием при 650 g (1800 об/мин) в течение 10 мин при комнатной температуре. После повторения стадии промывки (буфер FACS 1200 мкл, центрифугирование при 650 g в течение 10 мин при комнатной температуре) клетки ресуспендировали в 300 мкл 1% PFA (в PBS) и переносили в 5 мл пробирки из полистирола.
Сбор и анализ данных
Образцы анализировали в тот же день. Сбор данных выполнялся на FACS Canto II с использованием программного обеспечения DIVA с высокой скоростью потока. Гейтинг был следующим: во-первых, дублеты были исключены с использованием точечной диаграммы FSC-A в сравнении с FSC-H. Отдельные клетки затем отображались на точечной диаграмме FSC-A и SSC-A для создания гейта на лейкоцитах. Был построена точечная диаграмма CD20 против SSC-A и были показаны лейкоциты. На основе CD20-положительных В клеток был создан график гистограммы для pAkt. Нестимулированные образцы использовались для установки интервального гейта для положительных и отрицательных популяций pAkt. Данные рассчитывали как процентное ингибирование pAkt относительно исходного значения.
Результаты. (Фигура 1).
Соединение А показывает зависящее от дозы, концентрации и времени ингибирование пути PI3K/Akt. Ингибирование хода более чем на 80% в течение 12 часов достигалось после однократного введения 80 мг соединения А. Моделирование зависимости доза-ответная реакция для соединения А предполагает, что ингибирование устойчивого пути в течение 24 часов обеспечивалось бы режимом дозирования два раза в день.

Claims (6)

1. Применение 1-{(S)-3-[6-(6-метокси-5-трифторметил-пиридин-3-ил)-5,6,7,8-тетрагидро-пиридо[4,3-d]пиримидин-4-иламино]-пирролидин-1-ил}-пропан-1-она или его фармацевтически приемлемых солей для лечения первичного синдрома Шегрена.
2. Применения по п.1, где соединение представляет собой фосфатную соль 1-{(S)-3-[6-(6-метокси-5-трифторметил-пиридин-3-ил)-5,6,7,8-тетрагидро-пиридо[4,3-d]пиримидин-4-иламино]пирролидин-1-ил}-пропан-1-она.
3. Применение по п.1 или 2, где стандартная доза составляет 10-100 мг активного ингредиента для субъкта-человека весом примерно 40-200 кг.
4. Применение по п.1 или 2, где стандартная доза составляет 70 мг активного ингредиента для субъкта-человека весом примерно 50-70 кг.
5. Применение по п.3 или 4, где введение осуществляют два раза в день.
6. Применение фармацевтической композиции, содержащей терапевтически эффективное количество 1-{(S)-3-[6-(6-метокси-5-трифторметил-пиридин-3-ил)-5,6,7,8-тетрагидро-пиридо[4,3-d]пиримидин-4-иламино]-пирролидин-1-ил}-пропан-1-она или его фармацевтически приемлемых солей и один или более фармацевтически приемлемых носителей, для лечения первичного синдрома Шегрена.
RU2018132042A 2016-02-10 2017-02-10 Применение ингибиторов активности или функции pi3k для лечения первичного синдрома шегрена RU2749731C2 (ru)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP16155123 2016-02-10
EP16155123.9 2016-02-10
EP16186188.5 2016-08-29
EP16186188 2016-08-29
PCT/IB2017/050743 WO2017118965A1 (en) 2016-02-10 2017-02-10 Use of inhibitors of the activity or function of pi3k for the treatment of primary sjögren's syndrome

Publications (3)

Publication Number Publication Date
RU2018132042A RU2018132042A (ru) 2020-03-10
RU2018132042A3 RU2018132042A3 (ru) 2020-05-15
RU2749731C2 true RU2749731C2 (ru) 2021-06-16

Family

ID=58016749

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2018132042A RU2749731C2 (ru) 2016-02-10 2017-02-10 Применение ингибиторов активности или функции pi3k для лечения первичного синдрома шегрена

Country Status (25)

Country Link
US (1) US20190038628A1 (ru)
EP (2) EP3695840A1 (ru)
JP (1) JP7132123B2 (ru)
KR (1) KR20180108651A (ru)
CN (1) CN108601786B (ru)
AU (1) AU2017204936B2 (ru)
BR (1) BR112018015272A2 (ru)
CA (1) CA3011205A1 (ru)
CL (1) CL2018001871A1 (ru)
CY (1) CY1122989T1 (ru)
DK (1) DK3413894T3 (ru)
ES (1) ES2797091T3 (ru)
HK (1) HK1257288A1 (ru)
HR (1) HRP20200916T1 (ru)
HU (1) HUE050632T2 (ru)
IL (1) IL260274A (ru)
LT (1) LT3413894T (ru)
MX (1) MX2018009758A (ru)
PH (1) PH12018501490A1 (ru)
PL (1) PL3413894T3 (ru)
PT (1) PT3413894T (ru)
RS (1) RS60477B1 (ru)
RU (1) RU2749731C2 (ru)
SI (1) SI3413894T1 (ru)
WO (1) WO2017118965A1 (ru)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012004299A1 (en) * 2010-07-06 2012-01-12 Novartis Ag Tetrahydro-pyrido-pyrimidine derivatives
WO2013001445A1 (en) * 2011-06-27 2013-01-03 Novartis Ag Solid forms and salts of tetrahydro-pyrido-pyrimidine derivatives
WO2015162584A1 (en) * 2014-04-24 2015-10-29 Novartis Ag Crystalline forms of the sulfate salt of n-[5-(3-imidazol-1-yl-4-methanesulfonyl-phenyl)-4-methyl-thiazol-2-yl]-acetamide

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP5767109B2 (ja) 2008-07-17 2015-08-19 ノバルティス アーゲー 治療抗体を用いる組成物及び方法
AR083847A1 (es) 2010-11-15 2013-03-27 Novartis Ag Variantes de fc (fragmento constante) silenciosas de los anticuerpos anti-cd40

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012004299A1 (en) * 2010-07-06 2012-01-12 Novartis Ag Tetrahydro-pyrido-pyrimidine derivatives
WO2013001445A1 (en) * 2011-06-27 2013-01-03 Novartis Ag Solid forms and salts of tetrahydro-pyrido-pyrimidine derivatives
WO2015162584A1 (en) * 2014-04-24 2015-10-29 Novartis Ag Crystalline forms of the sulfate salt of n-[5-(3-imidazol-1-yl-4-methanesulfonyl-phenyl)-4-methyl-thiazol-2-yl]-acetamide

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Nakamura H. et al. TLR3-mediated apoptosis and activation of phosphorylated Akt in the salivary gland epithelial cells of primary Sjцgren's syndrome patients // Rheumatol Int. 2013 Feb;33(2):441-50. doi: 10.1007/s00296-012-2381-9. Epub 2012 Mar 29). *

Also Published As

Publication number Publication date
IL260274A (en) 2018-07-31
RS60477B1 (sr) 2020-08-31
MX2018009758A (es) 2018-09-11
HRP20200916T1 (hr) 2020-09-18
JP7132123B2 (ja) 2022-09-06
KR20180108651A (ko) 2018-10-04
AU2017204936B2 (en) 2019-06-27
HUE050632T2 (hu) 2020-12-28
BR112018015272A2 (pt) 2018-12-18
DK3413894T3 (da) 2020-06-15
US20190038628A1 (en) 2019-02-07
EP3413894A1 (en) 2018-12-19
HK1257288A1 (zh) 2019-10-18
AU2017204936A1 (en) 2018-07-19
WO2017118965A1 (en) 2017-07-13
EP3695840A1 (en) 2020-08-19
CL2018001871A1 (es) 2018-11-23
ES2797091T3 (es) 2020-12-01
PL3413894T3 (pl) 2020-10-05
CN108601786A (zh) 2018-09-28
JP2019508413A (ja) 2019-03-28
EP3413894B1 (en) 2020-03-11
RU2018132042A (ru) 2020-03-10
PH12018501490A1 (en) 2019-03-25
CY1122989T1 (el) 2021-10-29
RU2018132042A3 (ru) 2020-05-15
CN108601786B (zh) 2021-11-02
PT3413894T (pt) 2020-06-16
CA3011205A1 (en) 2017-07-13
LT3413894T (lt) 2020-07-10
SI3413894T1 (sl) 2020-09-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Vedhara et al. Human psychoneuroimmunology
Chowdhury et al. Synovial IL-9 facilitates neutrophil survival, function and differentiation of Th17 cells in rheumatoid arthritis
Itoh et al. The role of IL-10 in human B cell activation, proliferation, and differentiation.
CN105307725B (zh) 治疗自身免疫疾病的方法和组合物
Maier‐Moore et al. Interleukin‐6 Deficiency Corrects Nephritis, Lymphocyte Abnormalities, and Secondary Sjögren's Syndrome Features in Lupus‐Prone Sle1. Yaa Mice
US20110243938A1 (en) Methods to Reduce B-Helper T Cells to Treat Autoimmune Diseases
Kasama et al. Biphasic regulation of the development of murine type II collagen–induced arthritis by interleukin‐12: possible involvement of endogenous interleukin‐10 and tumor necrosis factor α
Huang et al. Increased levels of circulating acetylcholine receptor (AChR)‐reactive IL‐10‐secreting cells are characteristic for myasthenia gravis (MG)
RU2749731C2 (ru) Применение ингибиторов активности или функции pi3k для лечения первичного синдрома шегрена
CN109803681B (zh) 用于治疗免疫病症的免疫抑制组合物
Gilman‐Sachs et al. Flow cytometric analysis of lymphocyte subsets in peripheral blood of chronic headache patients
US11510928B2 (en) Use of mirtazapine in the treatment of inflammatory disorders, autoimmune disease and PBC
Wildberger Therapeutic approach for Myasthenia Gravis using conditioned mesenchymal stromal cells
Pant et al. The CCR6–CCL20 Axis Promotes Regulatory T-cell Glycolysis and Immunosuppression in Tumors
JP2004315381A (ja) ナチュラルキラーＴ細胞のインターロイキン１８による刺激を利用した免疫疾患治療薬剤および治療キット、並びにＩｇＥ産生の制御方法
Griesenauer ST2/MYD88 signaling is a therapeutic target alleviating murine acute graft-versus-host disease sparing T regulatory cell function
Pauley et al. Mechanisms of Salivary Gland Secretory Dysfunction in Sjögren’s Syndrome
Aike et al. Increased mTORC1 activation in salivary gland B cells and T cells from Sjögren’s syndrome patients: mTOR inhibition as a novel therapeutic strategy to halt immunopathology
CN110917336A (zh) 白细胞介素-2的新用途
Saleh Pro-inflammatory mediators in arthritic pain and disease
Cai Immunoregulatory Activities of Novel Anti-inflammatory Cytokine Interleukin-35 on Systemic Lupus Erythematosus: Clinical and in vivo Study
JP2009536924A (ja) ヘルパーｔ細胞が媒介する免疫応答の調節方法
Chiang Th1-Th2 imbalance in schizophrenia: an immunological exploration of etiology
Perretti Increasing Serum 25-Hydroxyvitamin D as a Possible Deterrent to the Onset of Multiple Sclerosis
Bryant The role of CXCR4/SDF-1 and VLA-4/VCAM-1 in migration of bystander-activated T cells: implications for rheumatoid arthritis