RU2747559C1 - Незаряженный липид, композиция на его основе с поликатионным амфифилом и нейтральным фосфолипидом и способ ее получения для доставки нуклеиновых кислот in vitro - Google Patents
Незаряженный липид, композиция на его основе с поликатионным амфифилом и нейтральным фосфолипидом и способ ее получения для доставки нуклеиновых кислот in vitro Download PDFInfo
- Publication number
- RU2747559C1 RU2747559C1 RU2020124038A RU2020124038A RU2747559C1 RU 2747559 C1 RU2747559 C1 RU 2747559C1 RU 2020124038 A RU2020124038 A RU 2020124038A RU 2020124038 A RU2020124038 A RU 2020124038A RU 2747559 C1 RU2747559 C1 RU 2747559C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- nucleic acids
- composition
- delivery
- lipid
- neutral phospholipid
- Prior art date
Links
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 title claims abstract description 51
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 49
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 title claims abstract description 24
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 title claims abstract description 24
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 title claims abstract description 24
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 title claims abstract description 16
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 title claims abstract description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 6
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 title description 3
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 claims abstract description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 claims abstract description 5
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 claims abstract description 3
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 claims abstract description 3
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 claims abstract description 3
- OGQYPPBGSLZBEG-UHFFFAOYSA-N dimethyl(dioctadecyl)azanium Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCCCCCCCCCCCCCCCC OGQYPPBGSLZBEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 claims 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylethanolamin Natural products NCCOP(O)(=O)OCC(O)CO JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 29
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 20
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 18
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 14
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 14
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 13
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 12
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 9
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 8
- PFNFFQXMRSDOHW-UHFFFAOYSA-N spermine Chemical compound NCCCNCCCCNCCCN PFNFFQXMRSDOHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 7
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 7
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 7
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 7
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 239000010408 film Substances 0.000 description 5
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 5
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 description 5
- 244000309464 bull Species 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- KLHSDMQFUVANEB-MELZOAELSA-L hexadecyl-[(2r,3r)-4-[hexadecyl(dimethyl)azaniumyl]-2,3-dimethoxybutyl]-dimethylazanium;dibromide Chemical compound [Br-].[Br-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C[C@@H](OC)[C@H](OC)C[N+](C)(C)CCCCCCCCCCCCCCCC KLHSDMQFUVANEB-MELZOAELSA-L 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- 229940063675 spermine Drugs 0.000 description 4
- PEPHTALHHSCONG-UHFFFAOYSA-N 2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-aminoethoxy)ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethanamine Chemical compound NCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCN PEPHTALHHSCONG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QJIZTIORKPKGEP-UHFFFAOYSA-N CCCCCCCCCCCCCCOCC(COC(=O)OC1=CC=C(C=C1)[N+](=O)[O-])OCCCCCCCCCCCCCC Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCOCC(COC(=O)OC1=CC=C(C=C1)[N+](=O)[O-])OCCCCCCCCCCCCCC QJIZTIORKPKGEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 description 3
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 3
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 238000001476 gene delivery Methods 0.000 description 3
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 description 3
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 3
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- IAJHLVPJJCPWLF-UHFFFAOYSA-N 2,3-di(tetradecoxy)propan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCOCC(CO)OCCCCCCCCCCCCCC IAJHLVPJJCPWLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004252 FT/ICR mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 239000012124 Opti-MEM Substances 0.000 description 2
- 108700005077 Viral Genes Proteins 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 238000001460 carbon-13 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 2
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 210000001163 endosome Anatomy 0.000 description 2
- 108010048367 enhanced green fluorescent protein Proteins 0.000 description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002356 laser light scattering Methods 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 2
- WOOKNJANWWBKHW-CGMUPKQHSA-N (3s,8r,9r,10s,13r,14r,17r)-10-(hydroxymethyl)-13-methyl-17-[(2r)-6-methyl-5-methylideneheptan-2-yl]-2,3,4,7,8,9,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-3-ol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(CO)[C@H]2[C@H]1[C@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCC(=C)C(C)C)[C@@]1(C)CC2 WOOKNJANWWBKHW-CGMUPKQHSA-N 0.000 description 1
- AGBQKNBQESQNJD-SSDOTTSWSA-N (R)-lipoic acid Chemical compound OC(=O)CCCC[C@@H]1CCSS1 AGBQKNBQESQNJD-SSDOTTSWSA-N 0.000 description 1
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- 101150072531 10 gene Proteins 0.000 description 1
- CSDQQAQKBAQLLE-UHFFFAOYSA-N 4-(4-chlorophenyl)-4,5,6,7-tetrahydrothieno[3,2-c]pyridine Chemical compound C1=CC(Cl)=CC=C1C1C(C=CS2)=C2CCN1 CSDQQAQKBAQLLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 description 1
- OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N N-Pteroyl-L-glutaminsaeure Natural products C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- AGBQKNBQESQNJD-UHFFFAOYSA-N alpha-Lipoic acid Natural products OC(=O)CCCCC1CCSS1 AGBQKNBQESQNJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 239000013011 aqueous formulation Substances 0.000 description 1
- SCJNCDSAIRBRIA-DOFZRALJSA-N arachidonyl-2'-chloroethylamide Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(=O)NCCCl SCJNCDSAIRBRIA-DOFZRALJSA-N 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 229910000355 cerium(IV) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N chloroform;methanol Chemical compound OC.ClC(Cl)Cl WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 1
- 229940125904 compound 1 Drugs 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 229960000304 folic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 description 1
- 239000008098 formaldehyde solution Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 230000030279 gene silencing Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000000887 hydrating effect Effects 0.000 description 1
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 1
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000002743 insertional mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 235000019136 lipoic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000002479 lipoplex Substances 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 1
- 210000000865 mononuclear phagocyte system Anatomy 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000020477 pH reduction Effects 0.000 description 1
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 1
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 1
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical compound O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- -1 tetradecyloxy Chemical group 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 239000010409 thin film Substances 0.000 description 1
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
- 229960002663 thioctic acid Drugs 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 1
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
- A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C271/00—Derivatives of carbamic acids, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atom not being part of nitro or nitroso groups
- C07C271/06—Esters of carbamic acids
- C07C271/08—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms
- C07C271/10—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms with the nitrogen atoms of the carbamate groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
- C07C271/16—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms with the nitrogen atoms of the carbamate groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms to carbon atoms of hydrocarbon radicals substituted by singly-bound oxygen atoms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C271/00—Derivatives of carbamic acids, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atom not being part of nitro or nitroso groups
- C07C271/06—Esters of carbamic acids
- C07C271/32—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings
- C07C271/34—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to carbon atoms of rings other than six-membered aromatic rings with the nitrogen atoms of the carbamate groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
- C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
- C07F9/02—Phosphorus compounds
- C07F9/06—Phosphorus compounds without P—C bonds
- C07F9/08—Esters of oxyacids of phosphorus
- C07F9/09—Esters of phosphoric acids
- C07F9/113—Esters of phosphoric acids with unsaturated acyclic alcohols
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Изобретение относится к незаряженному липиду, имеющему строение 1, который может найти применение для доставки протяженных и коротких нуклеиновых кислот в клетки млекопитающих. Изобретение относится также к композиции для доставки протяженных и коротких нуклеиновых кислот в клетки млекопитающих и к способу ее получения. Композиция содержит поликатионный амфифил 1,26-бис(холест-5ен-3β-илоксикарбониламино)-7,11,16,20-тетраазагексакозан для связывания и упаковки нуклеиновых кислот, нейтральный фосфолипид 1,2-ди-О-олеоилфосфатидилэтаноламин (DOPE) в качестве структурообразующего и промотирующего компонента и незаряженный липид, имеющий строение 1. Способ получения композиции характеризуется тем, что липидную пленку, состоящую из соответствующих поликатионного амфифила, нейтрального фосфолипида и незаряженного липида, гидратируют в воде, затем полученную эмульсионно-дисперсионную систему подвергают ультразвуковой обработке. 3 н. и 1 з.п. ф-лы, 5 пр., 1 табл., 2 ил.
Description
Изобретение относится к области химии, биотехнологии, медицины и химико-фармацевтической промышленности, и раскрывает незаряженный липид, композицию на его основе для транспорта нуклеиновых кислот в клетки в присутствии сыворотки крови в ростовой среде и способ получения такой композиции. Композиция включает незаряженный липид, поликатионный амфифил и нейтральный фосфолипид, и образует комплекс с нуклеиновой кислотой.
Несмотря на огромный потенциал использования генной терапии для лечения заболеваний, ранее считавшихся неизлечимыми (наследственных, онкологических заболеваний и т.д.), на сегодняшний день к клиническому применению в мире разрешено менее 10 геннотерапевтических препаратов [Мельникова Е.В. и др. Мировой опыт регистрации и применения препаратов для генной терапии в клинической практике / Антибиотики и химиотерапия, 2019, Т. 64, №1-2, с. 58-68]. В качестве вектора доставки нуклеиновых кислот (НК) в таких препаратах используются вирусные частицы - аденовирусы, аденоассоциированные вирусы, вирусы простого герпеса, ретровирусы, обладающие высокой эффективностью трансдукции.
Однако их главным недостатком является иммуногенность и риск развития инсерционного мутагенеза, который приводит к злокачественному перерождению клеток [Nayak S. et al. Progress and prospects: immune responses to viral vectors / Gene Ther. Nature Publishing Group, 2010, V. 17, №3, pp. 295-304; Богословская Е.В. и др. Безопасность использования ретровирусных векторов в генной терапии / ВЕСТНИК РАМН, 2012, Т. 10, с. 55-61].
Для внедрения генной терапии в клиническую практику необходимо разрабатывать безопасные и эффективные системы доставки НК. Использование катионных липосом [Maslov М.А. et al. Novel cholesterol spermine conjugates provide efficient cellular delivery of plasmid DNA and small interfering RNA / J. Control. Release, 2012, V. 160, № 2, pp. 182-193; Markov O.O. et al. Novel cationic liposomes provide highly efficient delivery of DNA and RNA into dendritic cell progenitors and their immature offsets / J. Control. Release, 2012, V. 160, № 2, pp. 200-210] позволит решить проблемы, связанные с использованием вирусных векторов. Катионные липосомы должны быть нетоксичны, неиммуногенны, стабильны при хранении и обеспечивать высокую эффективность трансфекции НК.
Катионные липосомы содержат катионный амфифил, который связывает и компактизует НК при физиологических значения рН с образованием комплекса, получившего название липоплекс. Положительно заряженная группа катионного амфифила играет главную роль при формировании электростатического комплекса с отрицательно заряженными НК, при этом гидрофобные хвосты катионного амфифила взаимодействуют с неполярной областью плазматической мембраны клеток-мишеней [Dharmalingam P. et al. An anti-oxidant, α-lipoic acid conjugated oleoyl-sn-phosphatidylcholineas a helper lipid in cationic liposomal formulations / Colloids Surfaces В Biointerfaces, 2017, V. 152, pp. 133-142].
Для улучшения физико-химических свойств липоплексов и увеличения эффективности трансфекции НК в состав катионных липосом добавляют липиды-хелперы. Поглощаясь внутрь клетки, липоплексы попадают в эндосомы, где происходит закисление рН, которое оказывает разрушающее воздействие на молекулы НК. Так, в состав катионных липосом включают 1,2-ди-О-олеоилфосфатидилэтаноламин (DOPE), способный переходить из ламелярной фазы в инвертированную гексагональную, обеспечивая эффективный и своевременный выход НК из эндосом [Metwally А.А. et al. Quantitative Silencing of EGFP Reporter Gene by Self-Assembled siRNA Lipoplexes of LinOS and Cholesterol / Mol. Pharm., 2012, V. 9, №11, pp. 3384-3395]. Известно, что использование холестерина в качестве липида-хелпера приводит к улучшению стабильности липоплексов в присутствии сыворотки крови, а также способствуют слиянию с мембраной клетки-мишени [Cui S. et al. Cationic lioposomes with folic acid as targeting ligand for gene delivery / Bioorg. Med. Chem. Lett., 2016, V. 26, №16, pp. 4025-4029]. Для увеличения эффективности трансфекции в качестве липидов-хелперов также могут быть использованы фосфатидилхолин, ПЭГ-содержащие липиды, анионные липиды [Cheng X. et al. The role of helper lipids in lipid nanoparticles (LNPs) designed for oligonucleotide delivery / Adv. Drug Deliv. Rev., 2016, V. 99, pp. 129-137]. Создание новых липидов-хелперов и включение их в состав катионных липосом может привести к увеличению эффективности трансфекции.
Техническим результатом заявленного изобретения является расширение арсенала средств для эффективной доставки нуклеиновых кислот в клетки в присутствии сыворотки в ростовой среде.
Технический результат достигается незаряженным липидом 1 следующего строения:
В структуру незаряженного липида 1 входят два остатка диглицерида, необходимых для закрепления в липосомальном бислое, полиэтиленгликольный (ПЭГ) спейсер, необходимые для дестабилизации липидного бислоя липосом, и карбамоильный линкер, который обеспечивает оптимальное сочетание стабильности и токсичности липида 1.
Технический результат также достигается предлагаемой композицией для доставки протяженных и коротких нуклеиновых кислот в клетки млекопитающих, которая содержит: 1) незаряженный липид 1 в качестве липида-хелпера, 2) поликатионный амфифил 1,26-бис(холест-5ен-3β-илоксикарбониламино)-7,11,16,20-тетраазагексакозан (2X3), необходимый для связывания и упаковки НК, 3) нейтральный фосфолипид 1,2-ди-О-олеоилфосфатидилэтаноламин (DOPE) в качестве структурообразующего и промотирующего компонента.
В одном из вариантов осуществления изобретения композиция содержит (в мольных % от общего количества липидов композиции): поликатионный амфифил 1,26-бис(холест-5ен-3β-илоксикарбониламино)-7,11,16,20-тетраазагексакозан в количестве от 45 до 49 мольных % от общего количества липидов в композиции, нейтральный фосфолипид 1,2-ди-О-олеоилфосфатидилэтаноламин (DOPE) в количестве от 45 до 49 мольных % от общего количества липидов в композиции и незаряженный липид 1 в количестве от 2 до 10 мольных % от общего количества липидов композиции.
Технический результат также достигается способом получения композиции для доставки протяженных и коротких нуклеиновых кислот, в соответствии с которым липидную пленку, состоящую из трех компонентов - незаряженного липида 1, поликатионного амфифила 2X3 и нейтрального фосфолипида DOPE - гидратируют в воде, затем полученную эмульсионно-дисперсионную систему подвергают ультразвуковой обработке.
Исходным соединением в синтезе незаряженных липидов являлся rac-1-O-(4-нитрофенилоксикарбонил)-2,3-ди-O-тетрадецилглицерин, полученный согласно описанному ранее методу [Shmendel' Е.V. et al. Synthesis of neoglycolipids for the development of non-viral gene delivery systems / Russ. Chem. Bull, 2010, V. 59, №12, pp. 2281-2289]. К раствору O,O'-бис(2-аминоэтил)октадекаэтиленгликоля при перемешивании добавляли трехкратный избыток раствора rac-1-O-(4-нитрофенилоксикарбонил)-2,3-ди-O-тетрадецилглицерина в присутствии безводного триэтиламина и хлористого метилена, получая целевые незаряженные липиды.
Триэтиламин был получен от Aldrich; О,О'-бис(2-аминоэтил)октадекаэтиленгликоль получен от Fluka. Остальные растворители и реагенты были отечественного производства.
Хлористый метилен, триэтиламин кипятили над гидридом кальция и перегоняли перед реакцией.
Тонкослойную хроматографию проводили на пластинках Kieselgel 60 F254 (Merck). Обнаружение пятен на хроматограммах проводили раствором фосформолибденовая кислота-церий (IV) сульфат с последующим прогреванием. Колоночную хроматографию осуществляли на силикагеле Kieselgel 60 (0.040-0.063 мм и 0.063-0.200 мм, Merck). Спектры ЯМР 1Н и 13С регистрировали на приборах Bruker DPX 300 с использованием CDCl3 в качестве растворителя, если не указано иное. Химические сдвиги ЯМР 1Н приведены относительно остаточного сигнала CHCl3 (δH 7.26 м.д.). Химические сдвиги ЯМР 13С приведены относительно центрального сигнала растворителя (δC 77.0 м.д. для растворов в CDCl3). Масс-спектры регистрировали на спектрометре высокого разрешения Q-TOF G6550A (Agilent) с источником ионизации Dual-ESI-Jetstream и масс-спектрометре ионно-циклотронного резонанса с преобразованием Фурье (FT-ICR MS) ApexUltra (Bruker).
На основе поликатионного амфифила 2X3 [Petukhov I.A. et al. Synthesis of polycationic lipids based on cholesterol and spermine / Russ. Chem. Bull., 2010, V. 59, pp. 260-268], нейтрального фосфолипида DOPE и незаряженного липида 1 были приготовлены композиции Р2-Р10 путем гидратирования липидной пленки, состоящей из поликатионного амфифила и DOPE, взятых в соотношении 1:1 (мольн.) и липида 1, взятого в количестве 2-10 мольн. %, с последующей ультразвуковой обработкой. В качестве контроля были приготовлены композиции Н2-Н10, О2-О10, содержащие липид 1a-b [Шмендель Е.В. и др. Получение нейтральных липидов на основе 1,2-ди-О-тетрадецил-rac-глицерина с гидрофильными спейсерными группами, Сборник тезисов докладов Четверного Междисциплинарного симпозиума по медицинской, органической и биологической химии и фармацевтике, 2018, с. 196, С.А. Бахарева и др. Получение нейтральных липидов на основе 1,2-ди-О-тетрадецил-rac-глицерина с гидрофобными спейсерными группами Сборник тезисов докладов Четверного Междисциплинарного симпозиума по медицинской, органической и биологической химии и фармацевтике 2018, с. 103] в количестве 2-10 мольн. %, с последующей ультразвуковой обработкой.
Известно, что оптимальный размер катионных липосом должен быть не менее 30 нм и не более 200 нм для предотвращения их выведения почками и ретикуло-эндотелиальной системой [Cabral Н. et al. Accumulation of sub-100 nm polymeric micelles in poorly permeable tumours depends on size / Nat. Nanotechnol. Nature Publishing Group, 2011, V. 6, №12, pp. 815-823]. Положительный ζ-потенциал обеспечивает не только повышение эффективности загрузки плазмидной ДНК (пДНК), но также является одной из причин эффективного накопления в клетках-мишенях, а также влияет на стабильность липосом в процессе хранения. Положительные значения ζ-потенциала необходимы для обеспечения коллоидной стабильности за счет электростатического отталкивания между частицами [Elsana Н. et al. Evaluation of novel cationic gene based liposomes with cyclodextrin prepared by thin film hydration and microfluidic systems / Sci. Rep., 2019, V. 9, №1, pp. 1-17].
Для изучения размеров и ζ-потенциала полученных катионных липосом и их комплексов с плазмидной ДНК (pEGFP-C2, «Clontech» (Германия)) использовали метод динамического лазерного светорассеяния. Размеры всех полученных катионных липосом и их комплексов с плазмидной ДНК находились в оптимальном диапазоне, а ζ-потенциал был положительным.
Для изучения способности предлагаемой композиции переносить нуклеиновые кислоты в клетки млекопитающих использовали протяженную плазмидную ДНК (pEGFP-С2, «Clontech» (Германия)) и короткую 21-звенную двуцепочечную РНК (siPHК, ИХБФМ СО РАН) (последовательность смысловой цепи 
антисмысловой цепи - 
).
Формирование комплексов нуклеиновых кислот с предлагаемой композицией проводили путем инкубирования аликвот растворов нуклеиновых кислот и композиции, рассчитанные в соответствии с соотношением положительных зарядов аминогрупп к отрицательным зарядам фосфатных групп (соотношение N/P=6/1 и 8/1 в случае доставки плазмидной ДНК, соотношение N/P=8/1 в случае доставки siPHК).
Эффективность проникновения нуклеиновых кислот с использованием композиций Н2-Н10, О2-О10 и Р2-Р10 в клетки млекопитающих in vitro была исследована в экспериментах по трансфекции клеток плазмидной ДНК, кодирующей зеленый флуоресцирующий белок (EGFP) и короткой интерферирующей РНК, направленной на мРНК гена EGFP и подавляющей его экспрессию.
Сопоставительный анализ композиций Н2-Н10, О2-О10 и Р2-Р10 с известными и широко используемыми трансфектантами, такими как Lipofectamine®3000 и композицией L (2X3:DOPE) [Maslov М.А. et al. Novel cholesterol spermine conjugates provide efficient cellular delivery of plasmid DNA and small interfering RNA / J. Control. Release, 2012, V. 160, pp. 182-193] показал, что предлагаемые соединения обладают следующими преимуществами:
1) Заявляемая композиция с высокой эффективностью доставляет в клетки млекопитающих короткие и протяженные нуклеиновые кислоты в присутствии сыворотки крови в ростовой среде, что позволяет рассматривать ее в качестве перспективного средства доставки терапевтических нуклеиновых кислот в эукариотические клетки.
2) Заявляемая композиция не требуют сложной процедуры приготовления, для получения рабочего раствора достаточно подвергнуть ультразвуковой обработке гидратированную липидную пленку, состоящую из поликатионного амфифила, нейтрального фосфолипида (например, DOPE) и незаряженного липида 1.
3) Заявляемая композиция стабильна при хранении как в сухом виде, так и в виде водных формуляций.
4) Заявляемая композиция превосходит известные аналоги по эффективности трансфекции в эукариотические клетки.
Поиск по источникам научно-технической и патентной литературы показал, что заявляемое соединение, композиция на его основе и способ ее получения в известных из уровня техники источниках не описаны.
Изобретение иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1. Синтез незаряженного липида 1
Получение 1,59-ди[rac-2,3-ди(тетрадецилокси)пропил-1-оксикарбониламино]-O,O'-бис(2-аминоэтил)октадекаэтиленгликоля (1)
К раствору О,О'-бис(2-аминоэтил)октадекаэтиленгликоля (47.3 мг, 0.038 ммоль) в безводном CH2Cl2 (2 мл) при перемешивании добавили раствор 1-O-(4-нитрофенилоксикарбонил)-2,3-ди-O-тетрадецилглицерина [Shmendel' E.V. et al. Synthesis of neoglycolipids for the development of non-viral gene delivery systems / Russ. Chem. Bull, 2010, V. 59, №12, pp. 2281-2289] (110.2 мг, 0.169 ммоль) и безводного Et3N (0.2 мл) в безводном CH2Cl2 (3 мл). Реакционную смесь перемешивали 5 ч при 24°С, нейтрализовали 3%-ным водным раствором HCl (0.1 мл), растворители удаляли в вакууме. Продукт выделили колоночной хроматографией, элюируя системой хлороформ-метанол (100:1). Получили 48.2 мг (65%) соединения 1 в виде кристаллизуемого масла белого цвета. Найдено (%): С, 65.09; Н, 10.88; N, 1.58. C104H208N2O27. Вычислено (%): С, 65.10; Н, 10.93; N, 1.46. Спектр ЯМР 1Н (300 МГц, CDCl3): 0.86 (т, J=6.7 Гц, 12Н, 4 СН3); 1.15-1.40 (м, 88Н, 4 (СН2)11,); 1.43-1.69 (м, 8Н, 4 ОСН2СН 2); 3.28-3.37 (м, 4Н, 2 NHCH 2); 3.39-3.89 (м, 90Н, 42 ОСН2, 2 ОСНСН2); 4.08 (дд, J=11.4 Гц, J=5.4 Гц, 2Н) и 4.18 (дд, J=11.4 Гц, J=4.4 Гц, 2Н, 2 СН2ОС(O)); 5.00-5.40 (м, 2Н, 2 NH). Спектр ЯМР 13С ЯМР (60 МГц, CDCl3): 14.08, 14.30, 22.43, 22.66, 22.87, 25.79, 26.04, 26.10, 26.30, 29.33, 29.49, 29.61, 29.63, 29.67, 30.02, 31.67, 31.90, 32.13, 40.91, 46.04, 64.34, 69.32, 70.07, 70.34, 70.48, 70.53, 70.58, 71.11, 71.60, 71.76, 156.41.
Пример 2. Получение композиций L, Н2-Н10, О2-О10, Р2-Р10
Катионный амфифил 2X3 [Petukhov I.A. et al. Synthesis of polycationic lipids based on cholesterol and spermine // Russ. Chem. Bull., 2010, V. 59, pp. 260-268], нейтральный фосфолипид DOPE и незаряженный липид 1 в смеси органических растворителей упаривали до образования липидной пленки. Образовавшуюся липидную пленку сушили 4 ч в вакууме масляного насоса (0.01 Торр), гидратировали в необходимом количестве воды для инъекций в течение 12 ч, а затем озвучивали на ультразвуковой бане до получения однородной композиции. В результате получили композиции Р2 (2X3-DOPE-1, 49:49:2 мольн.), Р5 (2X3-DOPE-1, 47.5:47.5:5 мольн.), Р10 (2X3-DOPE-1, 45:45:10 мольн.).
Также были приготовлены контрольные композиции: L (2X3-DOPE, 50:50 мольн.), Н2 (2X3-DOPE-1a, 49:49:2 мольн.), Н5 (2X3-DOPE-1a, 47.5:47.5:5 мольн.), Н10 (2X3-DOPE-1a, 45:45:10 мольн.), O2 (2X3-DOPE-1b, 49:49:2 мольн.), O5 (2X3-DOPE-1b, 47.5:47.5:5 мольн.), О10 (2X3-DOPE-1b, 45:45:10 мольн.),
Пример 3. Определение размеров катионных липосом и их комплексов с плазмидной ДНК
Гидродинамический диаметр и ζ-потенциал катионных липосом и их комплексов с плазмидной ДНК измеряли с помощью метода динамического лазерного светорассеяния на приборе Zetasizer Nano ZS (Malvern Instruments, Malvern, Великобритания) при температуре 25°C в трех повторах. Измерения катионных липосом проводили при концентрации 0.05 мМ. Для изучения размеров комплексов растворы катионных липосом (100 мкл) и нуклеиновых кислот (100 мкл) в концентрациях, соответствующих необходимым соотношениям N/P, смешивали в деионизированной воде (MilliQ, США) и инкубировали 2 ч при 24°С, затем доводили объем деионизированной водой до 1 мл.
Результаты измерений гидродинамического диаметра и ζ-потенциала катионных липосом и их комплексов с плазмидной ДНК pEGFP-C2 представлены на фиг. 1(А, Б).
Пример 4. Трансфекция клеток HEK 293 плазмидной ДНК с использованием композиций Н2-Н10, О2-О10 или Р2-Р10
Изучение доставки плазмидной ДНК проводили с помощью проточной флуоциториметрии на клетках HEK 293. Эффективность трансфекции оценивали по количеству клеток, содержащих зеленый флуоресцентный белок (EGFP) от общего количества клеток в образце. Клетки HEK 293 высаживали в 24-луночные планшеты (1.2×105 клеток на лунку в 500 мкл среды DMEM с 10% эмбриональной телячьей сывороткой) и культивировали в течение суток при 37°С в атмосфере, содержащей 5% СО2. В день проведения трансфекции среду в лунках заменяли на 200 мкл среды DMEM с 10% эмбриональной телячьей сывороткой. Композицию Н2-Н10, О2-О10 или Р2-Р10 в 25 мкл среды OptiMEM смешивали с раствором pEGFP-C2 (2 мкг/мл) в 25 мкл этой же среды в оптимальном соотношении N/P=6/1 и 8/1 и инкубировали 20 мин при 25°С. Полученную смесь добавляли к клеткам и выдерживали в течение 4 ч при 37°С в атмосфере, содержащей 5% СО2, затем заменяли среду на 500 мкл DMEM с 10% эмбриональной телячьей сывороткой. Через 48 ч клетки промывали фосфатно-солевым буфером (300 мкл), добавляли 50 мкл раствора трипсина и инкубировали 2 мин (37°С, 5% СО2). По окончании инкубации в лунки добавляли 200 мкл DMEM с 10% эмбриональной телячьей сывороткой, клетки суспендировали и переносили в пробирки. Полученную клеточную суспензию центрифугировали при 1200 об/мин, отбирали среду и промывали 400 мкл фосфатно-солевого буфера. Затем клетки фиксировали 600 мкл 2% раствора формальдегида в фосфатно-солевом буфере. Анализ уровня трансфекции клеток проводили на флуоцитометре ACEA NovoCyte™ 3000 (Bioscience Inc., USA). В этих экспериментах определяли количество клеток, экспрессирующих белок EGFP, и средний уровень флуоресценции клеток при длине волны возбуждения 488 нм. В качестве объекта сравнения был выбран коммерчески доступный препарат - Lipofectamine 3000 и липосомы L.
Результаты трансфекции клеток плазмидной ДНК pEGFP-C2 в присутствии эмбриональной телячьей сыворотки в ростовой среде представлены на фиг. 2(А, Б).
Пример 5. Трансфекция клеток BHK IR780 короткой интерферирующей РНК с использованием композиций Н2-Н10, О2-О10 или Р2-Р10
Исследование проникновения siPHК, направленной на подавление синтеза зеленого флуоресцирующего белка EGFP, проводили на клетках линии BHK IR780, стабильно экспрессирующих данный белок. В качестве мишени была выбрана мРНК, кодирующая белок EGFP, таким образом по уменьшению флуоресценции клеток, определяемой этим белком, можно судить об эффективности доставки siPHК в цитоплазму клетки.
Клетки BHK IR780 высаживали в 24-луночные планшеты (0.13×105 клеток на лунку в 500 мкл среды DMEM с 10% эмбриональной телячьей сывороткой) и культивировали в течение суток при 37°С в атмосфере, содержащей 5% СО2. Перед проведением трансфекции для экспериментов в присутствии сыворотки среду в лунках заменяли на 200 мкл среды DMEM с 10% эмбриональной телячьей сывороткой. Композицию Н2-Н10, О2-О10 или Р2-Р10 в 25 мкл среды OptiMEM смешивали с раствором siPHК (с конечной концентрацией siPHК 50 нМ) в 25 мкл этой же среды при оптимальном соотношении N/P=6/1 и выдерживали 20 мин при 25°С. Полученную смесь добавляли к клеткам и выдерживали в течение 4 ч при 37°С в атмосфере, содержащей 5% СО2, затем заменяли среду на 500 мкл DMEM с 10% эмбриональной телячьей сывороткой. Через 72 ч клетки обрабатывали, как описано в примере 4. В качестве объекта сравнения был выбран коммерчески доступный препарат - Lipofectamine 3000 и липосомы L. Результаты по трансфекции клеток короткой интерферирующей РНК с композициями в присутствии сыворотки в ростовой среде, определенные по уровню снижения экспрессии белка EGFP представлены в таблице 1.
Таким образом, приведенные примеры однозначно указывают на способность предлагаемой композиции, состоящей из поликатионного амфифила. нейтрального фосфолипида и незаряженного липида, эффективно способствовать проникновению коротких и протяженных нуклеиновых кислот в клетки млекопитающих в присутствии сыворотки крови, что позволяет использовать их в качестве агентов для доставки нуклеиновых кислот в клетки млекопитающих в условиях in vitro.
Claims (5)
1. Незаряженный липид, имеющий следующее строение:
2. Композиция для доставки протяженных и коротких нуклеиновых кислот в клетки млекопитающих, содержащая поликатионный амфифил 1,26-бис(холест-5ен-3β-илоксикарбониламино)-7,11,16,20-тетраазагексакозан для связывания и упаковки нуклеиновых кислот, нейтральный фосфолипид 1,2-ди-О-олеоилфосфатидилэтаноламин (DOPE) в качестве структурообразующего и промотирующего компонента и незаряженный липид по п. 1.
3. Композиция для доставки нуклеиновых кислот по п. 2, содержащая поликатионный амфифил 1,26-бис(холест-5ен-3β-илоксикарбониламино)-7,11,16,20-тетраазагексакозан в количестве от 45 до 49 мол.% от общего количества липидов в композиции, нейтральный фосфолипид 1,2-ди-О-олеоилфосфатидилэтаноламин (DOPE) в количестве от 45 до 49 мол.% от общего количества липидов в композиции и незаряженный липид по п. 1 в количестве от 2 до 10 мол.% от общего количества липидов композиции.
4. Способ получения композиции для доставки протяженных и коротких нуклеиновых кислот по п. 2 или 3, характеризующийся тем, что липидную пленку, состоящую из соответствующих поликатионного амфифила, нейтрального фосфолипида и незаряженного липида по п. 1, гидратируют в воде, затем полученную эмульсионно-дисперсионную систему подвергают ультразвуковой обработке.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2020124038A RU2747559C1 (ru) | 2020-07-20 | 2020-07-20 | Незаряженный липид, композиция на его основе с поликатионным амфифилом и нейтральным фосфолипидом и способ ее получения для доставки нуклеиновых кислот in vitro |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2020124038A RU2747559C1 (ru) | 2020-07-20 | 2020-07-20 | Незаряженный липид, композиция на его основе с поликатионным амфифилом и нейтральным фосфолипидом и способ ее получения для доставки нуклеиновых кислот in vitro |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2747559C1 true RU2747559C1 (ru) | 2021-05-06 |
Family
ID=75851033
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2020124038A RU2747559C1 (ru) | 2020-07-20 | 2020-07-20 | Незаряженный липид, композиция на его основе с поликатионным амфифилом и нейтральным фосфолипидом и способ ее получения для доставки нуклеиновых кислот in vitro |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2747559C1 (ru) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2683572C1 (ru) * | 2017-12-21 | 2019-03-29 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "МИРЭА - Российский технологический университет" (РТУ МИРЭА) | Полиэтиленгликоль-содержащий липид, композиция на его основе с катионным амфифилом и нейтральным фосфолипидом и способ ее получения для доставки нуклеиновых кислот in vivo |
-
2020
- 2020-07-20 RU RU2020124038A patent/RU2747559C1/ru active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2683572C1 (ru) * | 2017-12-21 | 2019-03-29 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "МИРЭА - Российский технологический университет" (РТУ МИРЭА) | Полиэтиленгликоль-содержащий липид, композиция на его основе с катионным амфифилом и нейтральным фосфолипидом и способ ее получения для доставки нуклеиновых кислот in vivo |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| E.V.SHMENDEL et al. Targeted Delivery of Nucleic Acids by Folate-Containing Liposomes into KB-3-1 and HEK 293 Cells, RUSSIAN JOURNAL OF BIOORGANIC CHEMISTRY, 2019, V.45, N.6, p.719-725. * |
| EV SHMENDEL et al. Obtaining neutral lipids based on 1,2-di-O-tetradecyl-rac-glycerol with hydrophilic spacer groups. COLLECTION OF ABSTRACTS OF THE FOURTH INTERDISCIPLINARY SYMPOSIUM ON MEDICAL, ORGANIC AND BIOLOGICAL CHEMISTRY AND PHARMACEUTICS, 2018, p. 196. * |
| SA BAKHAREVA et al. Obtaining neutral lipids based on 1,2-di-O-tetradecyl-rac-glycerol with hydrophobic spacer groups. COLLECTION OF ABSTRACTS OF THE FOURTH INTERDISCIPLINARY SYMPOSIUM ON MEDICAL, ORGANIC AND BIOLOGICAL CHEMISTRY AND PHARMACEUTICS, 2018, p. 103. * |
| SABAKHAREVA et al. Development of a scheme for obtaining uncharged lipids with hydrophobic and hydrophilic spacer groups. LIPIDS OF THE XXI CENTURY. FIRST QUARTER, 2018, pp. 11-12. * |
| С.А.БАХАРЕВА и др. Разработка схемы получения незаряженных липидов с гидрофобными и гидрофильными спейсерными группами. ЛИПИДЫ XXI ВЕКА. ПЕРВАЯ ЧЕТВЕРТЬ, 2018, с.11-12. С.А.БАХАРЕВА и др. Получение нейтральных липидов на основе 1,2-ди-О-тетрадецил-rac-глицерина с гидрофобными спейсерными группами. СБОРНИК ТЕЗИСОВ ДОКЛАДОВ ЧЕТВЁРТОГО МЕЖДИСЦИПЛИНАРНОГО СИМПОЗИУМА ПО МЕДИЦИНСКОЙ, ОРГАНИЧЕСКОЙ И БИОЛОГИЧЕСКОЙ ХИМИИ И ФАРМАЦЕВТИКЕ, 2018, с.103. Е.В.ШМЕНДЕЛЬ и др. Получение нейтральных липидов на основе 1,2-ди-О-тетрадецил-rac-глицерина с гидрофильными спейсерными группами. СБОРНИК ТЕЗИСОВ ДОКЛАДОВ ЧЕТВЁРТОГО МЕЖДИСЦИПЛИНАРНОГО СИМПОЗИУМА ПО МЕДИЦИНСКОЙ, ОРГАНИЧЕСКОЙ И БИОЛОГИЧЕСКОЙ ХИМИИ И ФАРМАЦЕВТИКЕ, 2018, с.196. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN111902397B (zh) | 改进了细胞内动力学的阳离子脂质 | |
| US20230132645A1 (en) | Lipid membrane structure for delivery into sirna cell | |
| US8678686B2 (en) | Multi-chain lipophilic polyamines | |
| AU2004246904B2 (en) | Sphingolipids polyalkylamine conjugates for use in transfection | |
| JP5836394B2 (ja) | 陽イオン性脂質を含む陰イオン性薬物伝達体およびその製造方法 | |
| CN114957027B (zh) | 一种阳离子脂质化合物、包含其的组合物及用途 | |
| CN107406396B (zh) | 阳离子性脂质 | |
| US20110268772A1 (en) | Pharmaceutical composition containing an anionic drug and a production method thereof | |
| KR20060028655A (ko) | 지질 캡슐화된 간섭 ｒｎａ | |
| EP3391875A1 (en) | Method for preparing polymeric micelle containing anionic drug | |
| CN101163796A (zh) | 阳离子脂质及应用方法 | |
| US11242311B2 (en) | Cationic lipids and transfection methods | |
| CN116744979A (zh) | 包含甘露糖的脂质纳米颗粒或其应用 | |
| Huang et al. | Bioresponsive liposomes and their use for macromolecular delivery | |
| RU2747559C1 (ru) | Незаряженный липид, композиция на его основе с поликатионным амфифилом и нейтральным фосфолипидом и способ ее получения для доставки нуклеиновых кислот in vitro | |
| WO2022158290A1 (ja) | アミノポリエステル及び脂質ナノ粒子 | |
| US20190307901A1 (en) | Method for enhanced nucleic acid transfection using a peptide | |
| JP6826014B2 (ja) | 生分解性化合物、脂質粒子、脂質粒子を含む組成物、およびキット | |
| Herringson et al. | Targeting of plasmid DNA‐lipoplexes to cells with molecules anchored via a metal chelator lipid | |
| RU2683572C1 (ru) | Полиэтиленгликоль-содержащий липид, композиция на его основе с катионным амфифилом и нейтральным фосфолипидом и способ ее получения для доставки нуклеиновых кислот in vivo | |
| US20190328903A1 (en) | Polymer nanoparticle composition for plasmid dna delivery, and preparation method therefor | |
| KR100986604B1 (ko) | 신규한 아미노지질을 함유하는 에스아이알엔에이 수송용 유전자 조성물 및 제조방법 | |
| CN106420615B (zh) | 一种靶向脂质体骨架材料及其制备方法 | |
| CN117534585A (zh) | 一种新型可电离阳离子脂质化合物及其制备方法与应用 | |
| CN115504945A (zh) | 可电离的含杂环脂质分子及其在制备脂质纳米粒的应用 |