RU2739997C1 - Method for detecting and laboratory confirmation of inherited chromosomally-integrable human herpes virus 6a/b - Google Patents
Method for detecting and laboratory confirmation of inherited chromosomally-integrable human herpes virus 6a/b Download PDFInfo
- Publication number
- RU2739997C1 RU2739997C1 RU2020120283A RU2020120283A RU2739997C1 RU 2739997 C1 RU2739997 C1 RU 2739997C1 RU 2020120283 A RU2020120283 A RU 2020120283A RU 2020120283 A RU2020120283 A RU 2020120283A RU 2739997 C1 RU2739997 C1 RU 2739997C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- hhv
- copies
- dna
- cells
- sample
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
- C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области медицины и молекулярной биологии и может быть использовано в клинической практике для выявления и лабораторного подтверждения наследуемого хромосомно-интегрированного вируса герпеса человека 6А/В (хиВГЧ-6А/В).The invention relates to medicine and molecular biology and can be used in clinical practice for the detection and laboratory confirmation of the inherited chromosomally integrated human herpesvirus 6A / B (hiHHC-6A / B).
Human betaherpesvirus 6А (вирус герпеса человека 6А, ВГЧ-6А) и Human betaherpesvirus 6 В (вирус герпеса человека 6 В, ВГЧ-6В) широко распространены во всем мире. Основные различия между ВГЧ-6А и ВГЧ-6В складываются за счет вариации в проценте схожести ортологичных генов (2-31%), реактивности с моноклональными антителами, клеточному тропизму in vitro, а также ассоциации с различными заболеваниями. На текущий момент для ВГЧ-6А и ВГЧ-6В сохраняется общее название - вирус герпеса человека 6 (ВГЧ-6, ВГЧ-6А/В).Human betaherpesvirus 6A (human herpesvirus 6A, HHV-6A) and Human betaherpesvirus 6B (human herpesvirus 6B, HHV-6B) are widespread throughout the world. The main differences between HHV-6A and HHV-6B are due to variations in the percentage of similarity of orthologous genes (2-31%), reactivity with monoclonal antibodies, cellular tropism in vitro, and associations with various diseases. At the moment, for HHV-6A and HHV-6B, the common name is retained - human herpes virus 6 (HHV-6, HHV-6A / B).
Установлено, что ВГЧ-6А и ВГЧ-6В являются уникальными среди всех представителей семейства Herpesviridae, патогенных для человека: они способны эффективно интегрировать в теломеры хромосом клетки-хозяина как in vivo, так и in vitro, благодаря особенностям организации генома. Уникальная область генома ВГЧ-6А/В, представленного линейной двухцепочной ДНК, фланкируется двумя областями, которые содержат совершенные и несовершенные повторы, комплементарные теломерным повторам хромосом человека. Это позволяет вирусу встраивать свой геном или его участки в субтеломерную / теломерную область хромосом клетки-хозяина посредством гомологичной рекомбинации, в результате чего формируется хромосомно-интегрированная форма ВГЧ-6А/В. Интеграция вируса в половые клетки может привести к наследованию от поколения к поколению: от одного или обоих родителей с 50% вероятностью на каждого новорожденного. При этом 86% врожденных ВГЧ-6А/В-инфекций обусловлены именно наследственной передачей хиВГЧ-6А или хиВГЧ-6В.It was found that HHV-6A and HHV-6V are unique among all members of the Herpesviridae family pathogenic for humans: they are able to effectively integrate chromosomes of the host cell into telomeres both in vivo and in vitro, due to the peculiarities of genome organization. The unique region of the HHV-6A / B genome, represented by linear double-stranded DNA, is flanked by two regions that contain perfect and imperfect repeats, complementary to telomeric repeats of human chromosomes. This allows the virus to insert its genome or parts of it into the subtelomeric / telomeric region of the host cell chromosomes through homologous recombination, resulting in the formation of a chromosomally integrated form of HHV-6A / B. Integration of the virus into germ cells can lead to inheritance from generation to generation: from one or both parents with a 50% probability for each newborn. Moreover, 86% of congenital HHV-6A / B infections are caused precisely by the hereditary transmission of hiHV-6A or hiHHV-6B.
В настоящее время показано, что от 0,2 до 2% населения в мире, в зависимости от географического региона в котором проводилась выборка, являются носителями хиВГЧ-6А или хиВГЧ-6В, передаваемого по наследству.It is now shown that from 0.2 to 2% of the world's population, depending on the geographic region in which the sample was taken, are carriers of hiHHC-6A or hiHHC-6B, which is inherited.
Выявление хиВГЧ-6А/В-статуса невозможно на основании клинических признаков и требует обязательного лабораторного подтверждения. Основные трудности в верификации данного состояния связаны с необходимостью проведения дифференциальной диагностики с острой инфекцией, вызванной ВГЧ-6А/В. Значение данного подтверждения увеличивается в связи с активным внедрением в диагностику различных инфекционных заболеваний методов амплификации нуклеиновых кислот. Так, на текущий момент основным критерием лабораторного подтверждения активной ВГЧ-6А/В-инфекции (острой, реактивированной формы заболевания или реинфекции), требующей назначения противовирусной терапии, является обнаружение высокой концентрации ДНК вируса в крови. Однако при лабораторном обследовании лиц с хиВГЧ-6А/В-статусом данный подход может приводить к диагностическим ошибкам, необоснованному назначению им специфической противовирусной терапии.Detection of hiHVH-6A / B-status is impossible on the basis of clinical signs and requires mandatory laboratory confirmation. The main difficulties in verifying this condition are associated with the need for differential diagnosis with acute infection caused by HHV-6A / B. The significance of this confirmation is increasing due to the active introduction of nucleic acid amplification methods into the diagnosis of various infectious diseases. So, at the moment, the main criterion for laboratory confirmation of active HHV-6A / B infection (acute, reactivated form of the disease or reinfection), requiring the appointment of antiviral therapy, is the detection of a high concentration of virus DNA in the blood. However, in laboratory examination of persons with hiHV-6A / B-status, this approach can lead to diagnostic errors, unjustified prescription of specific antiviral therapy.
Считается, что диагноз хиВГЧ-6А/В вероятен, когда уровень ДНК вируса составляет больше 500 000 (>5,5 lg) копий/мл цельной крови, или больше 3,5 lg копий/мл сыворотки, или больше 4 lg копий/мл ликвора [Ward K.N., Leong H.N., Nacheva Е.Р., Howard J., Atkinson C.E., Davies N.W., Griffiths P.D., Clark D.A. Human herpesvirus 6 chromosomal integration in immunocompetent patients results in high levels of viral DNA in blood, sera, and hair follicles. J. Clin. Microbiol., 2006, Vol. 44, №4, Р. 1571-1574].The diagnosis of hiHV-6A / B is considered to be probable when the viral DNA level is greater than 500,000 (> 5.5 lg) copies / ml of whole blood, or greater than 3.5 lg copies / ml of serum, or greater than 4 lg copies / ml cerebrospinal fluid [Ward KN, Leong HN, Nacheva EP, Howard J., Atkinson CE, Davies NW, Griffiths PD, Clark DA Human herpesvirus 6 chromosomal integration in immunocompetent patients results in high levels of viral DNA in blood, sera, and hair follicles. J. Clin. Microbiol., 2006, Vol. 44, No. 4, P. 1571-1574].
У людей с хиВГЧ-6А/В-статусом пожизненно выявляется очень высокое количество ДНК ВГЧ-6А/В в крови и во всех других биологических жидкостях и тканях организма, что сильно затрудняет правильную диагностику острой ВГЧ-6А/В-инфекции. При этом лица с хиВГЧ-6А/В-статусом имеют значительно более высокие вирусные нагрузки ДНК в цельной крови, чем лица без хиВГЧ-6А/В, передаваемым по наследству, и лица с первичной ВГЧ-6А/В-инфекцией.In people with hiHV-6A / B-status, a very high amount of HHV-6A / B DNA is detected for life in the blood and in all other biological fluids and tissues of the body, which greatly complicates the correct diagnosis of acute HHV-6A / B infection. At the same time, individuals with hiHV-6A / B-status have significantly higher viral loads of DNA in whole blood than individuals without hereditary hiHV-6A / B and individuals with primary HHV-6A / B infection.
Известен способ определения показаний к проведению противогерпетической терапии при инфекции ВГЧ-6 у детей с острыми респираторными заболеваниями, согласно которому при количестве копий ДНК ВГЧ-6 равном или более 100 копий/105 клеток крови является показанием к проведению противогерпетической терапии [Патент RU 2641609, дата приоритета 10.04.2017].There is a known method for determining indications for antiherpetic therapy for HHV-6 infection in children with acute respiratory diseases, according to which, when the number of copies of HHV-6 DNA is equal to or more than 100 copies / 10 5 blood cells is an indication for antiherpetic therapy [Patent RU 2641609, priority date 10.04.2017].
ПЦР-тестирование волосяных фолликулов или ногтей может подтвердить хиВГЧ-6-статус, потому что только лица с хиВГЧ-6 имеют ВГЧ-6 в этих тканях [Хромосомно-интегрированный вирус герпеса человека 6 типа. Никольский М.А., Голубцова B.C. Инфекция и иммунитет, 2015, т. 5, №1, С. 11].PCR testing of hair follicles or nails can confirm hiHV-6 status because only individuals with chiHV-6 have HHV-6 in these tissues [Chromosomally Integrated Human Herpes Virus Type 6. Nikolsky M.A., Golubtsova B.C. Infection and immunity, 2015, vol. 5, No. 1, P. 11].
Известно, что хромосомно-интегрированный вирус герпеса человека 6А может быть диагностирован при обнаружении ДНК ВГЧ-6А одновременно в нескольких биологических образцах в следующих концентрациях (lg копий/105 клеток): цельная кровь - 5,25±0,04; плазма крови - 4,83±0,19; мазок из ротоглотки - 5,49±0,15; моча - 5,49±0,16; волосяные фолликулы - 5,59±0,23; ногтевые пластины - 6,03±0,41 [Первый случай выявления и лабораторного подтверждения наследственной передачи хромосомно-интегрированной передачи Human betaherpesvirus 6А в Российской Федерации. Домонова Э.А., Сильвейстрова О.Ю., Гоптарь И.А., Кулешов К.В., Пасхина И.Н., Никифорова А.В., Шипулина О.Ю., Маркелов М.Л., Шипулин Г.А., Малеев В.В. Инфекционные болезни, 2019, т. 17, №3, С. 5-14].It is known that chromosomally integrated human herpesvirus 6A can be diagnosed by detecting HHV-6A DNA simultaneously in several biological samples at the following concentrations (lg copies / 10 5 cells): whole blood - 5.25 ± 0.04; blood plasma - 4.83 ± 0.19; oropharyngeal smear - 5.49 ± 0.15; urine - 5.49 ± 0.16; hair follicles - 5.59 ± 0.23; nail plates - 6.03 ± 0.41 [The first case of detection and laboratory confirmation of hereditary transmission of chromosomally integrated transmission of Human betaherpesvirus 6A in the Russian Federation. Domonova E.A., Silveistrova O.Yu., Goptar I.A., Kuleshov K.V., Paskhina I.N., Nikiforova A.V., Shipulina O.Yu., Markelov M.L., Shipulin G A., Maleev V.V. Infectious diseases, 2019, vol. 17, No. 3, S. 5-14].
Данный способ разработан на основании анализа результатов двух клинических случаев, что свидетельствует о неподтвержденности полученных данных и не может быть применимо в клинической практике. Кроме того указанный способ предполагает одновременный скрининг в широком наборе биологических образцов, а именно в цельной крови / плазме крови / мазке из ротоглотки / моче / волосяных фолликулах / ногтевых пластинах, что делает его трудоемким и затратным.This method was developed based on the analysis of the results of two clinical cases, which indicates the lack of confirmation of the data obtained and cannot be applied in clinical practice. In addition, this method involves simultaneous screening in a wide range of biological samples, namely in whole blood / blood plasma / oropharyngeal smear / urine / hair follicles / nail plates, which makes it laborious and costly.
Наиболее явные проблемы, связанные с установлением хиВГЧ-6А/В-статуса, касаются диагностики:The most obvious problems associated with the establishment of hiHCh-6A / B-status relate to diagnostics:
- сложность дифференциальной диагностики острой ВГЧ-6А/В-инфекции и носительства хиВГЧ-6А/В, передаваемого по наследству;- the complexity of differential diagnosis of acute HHV-6A / B infection and carriage of hiHVH-6A / B, inherited;
- сложность диагностики заболеваний, связанных с активной ВГЧ-6А/В-инфекцией у пациентов с наследуемым хиВГЧ-6А или хиВГЧ-6В (эндогенными), и, соответственно, решения вопроса о необходимости проведения противовирусной терапии,- the complexity of diagnosing diseases associated with active HHV-6A / B infection in patients with inherited hiHV-6A or hiHV-6B (endogenous), and, accordingly, deciding whether to carry out antiviral therapy,
что, в свою очередь, является следствием отсутствия ясности в клинической интерпретации результатов специфических методов амплификации нуклеиновых кислот и четком представлении о диагностическом значении концентрации ДНК ВГЧ-6А/В в биологическом материале.which, in turn, is a consequence of the lack of clarity in the clinical interpretation of the results of specific methods of amplification of nucleic acids and a clear understanding of the diagnostic value of the concentration of HHV-6A / B DNA in biological material.
Задачей, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является разработка лабораторного способа выявления и подтверждения наследуемого хиВГЧ-6А/В, то есть верификации хиВГЧ-6А-статуса и хиВГЧ-6В-статуса как у детей, так и взрослых.The task to be solved by the claimed invention is to develop a laboratory method for identifying and confirming the inherited hiHHC-6A / B, that is, verification of the hiHHCh-6A-status and hiHHC-6B-status in both children and adults.
Технический результат заключается в повышении точности метода диагностики и установлении клинически значимых пороговых концентраций ДНК ВГЧ-6А/В в уникальном сочетании биологических образцов пациента, что позволяет качественно ускорить выявление и лабораторное подтверждение хромосомно-интерированного ВГЧ-6А или ВГЧ-6В, передаваемого по наследству, у детей и взрослых, а также исключить гипердиагностику ВГЧ-6А/В-инфекции и назначение необоснованной противовирусной терапии. Своевременная верификация хиВГЧ-6А/В-статуса незамедлительно приводит к снижению излишней лекарственной нагрузки на пациента, стоимости проводимого курса комплексной терапии, сокращению длительности амбулаторного или стационарного лечения.The technical result consists in increasing the accuracy of the diagnostic method and establishing clinically significant threshold concentrations of HHV-6A / B DNA in a unique combination of biological samples of the patient, which allows to qualitatively accelerate the identification and laboratory confirmation of chromosomally-intertwined HHV-6A or HHV-6B inherited. in children and adults, as well as to exclude overdiagnosis of HHV-6A / B infection and the appointment of unreasonable antiviral therapy. Timely verification of the hiHCh-6A / B-status immediately leads to a decrease in unnecessary drug load on the patient, the cost of the course of complex therapy, and a reduction in the duration of outpatient or inpatient treatment.
Технический результат достигается за счет определения концентрации ДНК ВГЧ-6А/В в различных типах биологического материала пациента, а именно в образцах цельной крови, ногтевых пластин и/или волосяных фолликулов, с помощью метода полимеразно-цепной реакции (ПНР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией результатов анализа в режиме «реального времени». При определении концентрации ДНК ВГЧ-6А/В в образце цельной крови в пределах от 4,77 до 5,37 lg копий/105 клеток, а также в образце ногтевых пластин - не менее 4,91 lg копий/105 клеток и/или в образце волосяных фолликулов - не менее 4,70 lg копий/105 клеток верифицируют наследуемый хромосомно-интегрированный вирус герпеса человека 6А/В. Выявление в образце цельной крови ДНК ВГЧ-6А/В в концентрации менее 4,77 или более 5,37 lg копий/105 клеток, а также в образцах ногтевых пластин и/или волосяных фолликулов менее 4,91 и 4,70 lg копий/105 клеток, соответственно, позволяет исключить наличие наследуемого хромосомно-интегрированного вируса герпеса человека 6А/В. Исключение хиВГЧ-6А/В-статуса обследуемого является основанием для дальнейшего диагностического поиска, направленного на уточнение стадии развития инфекционного процесса, а также решения вопроса о необходимости проведения противовирусной терапии.The technical result is achieved by determining the concentration of DNA HHV-6A / B in various types of biological material of the patient, namely in samples of whole blood, nail plates and / or hair follicles, using the polymerase chain reaction (PCR) method with hybridization-fluorescence detection analysis results in "real time". When determining the concentration of HHV-6A / B DNA in a whole blood sample in the range from 4.77 to 5.37 lg copies / 10 5 cells, as well as in a sample of nail plates - not less than 4.91 lg copies / 10 5 cells and / or in a hair follicle sample - not less than 4.70 lg copies / 10 5 cells, the inherited chromosomally integrated human herpesvirus 6A / B is verified. Detection of HHV-6A / B DNA in a whole blood sample at a concentration of less than 4.77 or more than 5.37 lg copies / 10 5 cells, as well as in samples of nail plates and / or hair follicles less than 4.91 and 4.70 lg copies / 10 5 cells, respectively, eliminates the presence of the inherited chromosomally integrated human herpesvirus 6A / B. The exclusion of the hiHCh-6A / B-status of the subject is the basis for further diagnostic search aimed at clarifying the stage of development of the infectious process, as well as resolving the issue of the need for antiviral therapy.
В настоящем способе может быть использовано сочетание как двух, так и трех образцов биологического материала, одним из которых обязательно является цельная кровь.In the present method, a combination of two or three samples of biological material can be used, one of which is necessarily whole blood.
Лабораторное подтверждение наследственной передачи хиВГЧ-6А/В выполняется с помощью современных методов исследования. В основе способа обнаружения и количественной оценки ДНК вируса с помощью ПЦР лежит многократное копирование с помощью фермента ДНК-полимеразы определенного фрагмента ДНК, являющегося маркерным для данного вида возбудителя инфекционного заболевания. ПЦР является прямым методом выявления ДНК вируса и имеет высокую степень чувствительности. Метод ПЦР-РВ имеет целый ряд преимуществ, таких как быстрота выполнения (2 часа для комбинированной амплификации и считывания), широкий диапазон линейности сигнала (меньше чем 10 к 108 геномных копий), получение всех флуоресцентных сигналов во время амплификации происходит без открывания реакционной пробирки, стабильность флуоресцентного зонда, наличие 96 лунок, что позволяет производить большие серии тестов [Human Herpesviruses HHV-6A, HHV-6B, and HHV-7. Diagnosis and Clinical Management / Edited by L. Flamand [et al.]. - Amsterdam, Elsevier, 2014.-341].Laboratory confirmation of hereditary transmission of hiVHCh-6A / B is performed using modern research methods. The method for detecting and quantifying the DNA of a virus using PCR is based on multiple copying of a specific DNA fragment, which is a marker for a given type of infectious agent, using the DNA polymerase enzyme. PCR is a direct method for detecting viral DNA and has a high degree of sensitivity. The RT-PCR method has a number of advantages, such as speed of execution (2 hours for combined amplification and reading), a wide range of signal linearity (less than 10 to 10 8 genomic copies), obtaining all fluorescent signals during amplification without opening the reaction tube , stability of the fluorescent probe, the presence of 96 wells, which allows for a large series of tests [Human Herpesviruses HHV-6A, HHV-6B, and HHV-7. Diagnosis and Clinical Management / Edited by L. Flamand [et al.]. - Amsterdam, Elsevier, 2014.-341].
В основе создания предложенного изобретения лежит исследование, проведенное в ФБУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора за период с февраля 2017 года по февраль 2020 года. Обследовано 104 человека в возрасте от 7 дней до 83 лет (медиана возраста 27 лет): 51 пациент с высокими концентрациями ДНК ВГЧ-6А/В в крови (более 3,5 lg копий/105 клеток) и/или других типах биологического материала и 53 ближайших родственников пациентов с подозрением на хиВГЧ-6А/В-статус. Среди которых: 51,9% мужчин (54/104) и 48,1% женщин (50/104). Обследование проводилось в соответствии с законодательством РФ, международными этическими нормами и нормативными документами ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора при наличии письменного согласия пациентов. Длительность клинико-лабораторного наблюдения составляла от 1 до 13 месяцев.The creation of the proposed invention is based on a study conducted at the Federal Budgetary Scientific Institution of the Central Scientific Research Institute of Consumer Rights Protection and Human Welfare for the period from February 2017 to February 2020. We examined 104 people aged from 7 days to 83 years (median age 27 years): 51 patients with high concentrations of HHV-6A / B DNA in the blood (more than 3.5 lg copies / 10 5 cells) and / or other types of biological material and 53 immediate family members of patients with suspected chiHVH-6A / B status. Among them: 51.9% of men (54/104) and 48.1% of women (50/104). The examination was carried out in accordance with the legislation of the Russian Federation, international ethical standards and regulations of the FBSI Central Research Institute of Epidemiology of Rospotrebnadzor with the written consent of patients. The duration of clinical and laboratory observation ranged from 1 to 13 months.
Клиническое обследование, общее лабораторное (общий клинический анализ крови, общий анализ мочи, биохимический анализ крови) и инструментальное (УЗИ) исследование проводили стандартными общепринятыми методами. В динамике проанализированы уровни вирусной нагрузки ВГЧ-6А/В в образцах цельной крови (n=703), ногтевых пластин (n=150), волосяных фолликулов (n=120), а так же маркеров ВГЧ-6А/В-инфекции - специфических антител класса IgG (AT-IgG) к антигенам (АГ) ВГЧ-6А/В (суммарные к АГ ВГЧ-6 обоих видов) в образцах сыворотки крови (n=208) обследуемых.Clinical examination, general laboratory (general clinical blood analysis, general urine analysis, biochemical blood test) and instrumental (ultrasound) examination were carried out using standard generally accepted methods. In dynamics, the levels of the viral load of HHV-6A / B were analyzed in samples of whole blood (n = 703), nail plates (n = 150), hair follicles (n = 120), as well as specific markers of HHV-6A / B infection. antibodies of the IgG class (AT-IgG) to antigens (AH) HHV-6A / B (total to AH HHV-6 of both types) in blood serum samples (n = 208) of the surveyed.
Взятие образцов крови производили натощак одноразовой иглой (диаметр 0,8-1,1 мм) в пробирки объемом 4,0 мл с 6% ЭДТА (для ПЦР-исследования) и активатором свертывания и гелем (для ИФА-исследования) после обработки места пункции кожным антисептиком путем пункции периферической вены. Допускалось хранение образцов крови для ПЦР-исследования: при температуре 18-250С - в течение 2 ч., при температуре 2-80С - в течение 72 ч. с момента взятия биологического материала; а для ИФА-исследования: при температуре 18-250С - в течение 2 ч. с момента взятия биологического материала. Сбор образцов ногтевых пластин производили после удаления декоративного лака или гель-лака (при наличии покрытия ногтевой пластины), тщательного мытья рук, включая подногтевые пространства. Ножницами обрезали свободный край ногтевой пластины, используя одноразовый стерильный инструментарий. Из расчета на одно тестирование - 2 образца размером ~2×10 мм. Сбор образцов волосяных фолликулов осуществлялся с волосистой поверхности головы из расчета 2-3 волосяных фолликула на одно тестирование. Предназначенные для ПЦР-исследования образцы ногтевых пластин и волосяных фолликулов помещали в одноразовые стерильные пластиковые контейнеры с крышкой или пробирки типа «Эппендорф» с возможностью длительного хранения при температуре 18-250С.Blood samples were taken on an empty stomach with a disposable needle (diameter 0.8-1.1 mm) into 4.0 ml tubes with 6% EDTA (for PCR studies) and a coagulation activator and gel (for ELISA studies) after treatment of the puncture site a skin antiseptic by puncture of a peripheral vein. It was allowed to store blood samples for PCR research: at a temperature of 18-250C - for 2 hours, at a temperature of 2-80C - within 72 hours from the moment of taking the biological material; and for ELISA research: at a temperature of 18-250C - within 2 hours from the moment of taking the biological material. The collection of samples of the nail plates was carried out after removing the decorative varnish or gel varnish (if the nail plate was coated), thoroughly washing the hands, including the subungual spaces. The free edge of the nail plate was cut with scissors using disposable sterile instrumentation. Based on one test - 2 samples ~ 2 × 10 mm in size. The collection of samples of hair follicles was carried out from the scalp at the rate of 2-3 hair follicles per test. Samples of nail plates and hair follicles intended for PCR studies were placed in disposable sterile plastic containers with a lid or Eppendorf tubes with the possibility of long-term storage at a temperature of 18-250C.
Экстракцию тотальной ДНК из анализируемых образцов биологического материала осуществляли при помощи комплекта реагентов «АмплиСенс® РИБО-преп» (ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора, РФ). Концентрацию ДНК ВГЧ-6А/В в различных образцах биологического материала определяли методом ПЦР-РВ с учетом результатов анализа в количественном формате («АмплиСенс® HHV6-скрин-титр-FL», ФБУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора, РФ). Постановку и анализ результатов амплификации проводили на приборе с системой детекции флуоресцентного сигнала в режиме «реального времени» «Rotor-Gene Q» (Qiagen, ФРГ) в соответствии с инструкцией производителя. Расчет концентрации вируса выполняли в логарифмах копий специфической ДНК вируса на стандартное количество (105) клеток человека, оцененное по β-глобиновому гену, учитывая копийность искомых генов-мишеней: однокопийный для специфической мишени вируса (участок ДНК генома ВГЧ-6А/В) и двухкопийный для β-глобинового гена (участок ДНК генома человека).Extraction of total DNA from the analyzed samples of biological material was carried out using a set of reagents "AmpliSens® RIBO-prep" (FBSI TsNII Epidemiologii Rospotrebnadzor, RF). The concentration of HHV-6A / B DNA in various samples of biological material was determined by RT-PCR taking into account the results of the analysis in a quantitative format (AmpliSens ® HHV6-screen-titer-FL, FBUN TsNIIE Rospotrebnadzor, RF). The amplification results were set and analyzed on a device with a "Rotor-Gene Q" real-time fluorescent signal detection system (Qiagen, Germany) in accordance with the manufacturer's instructions. Calculation of virus concentration was performed in logarithms of copies of specific DNA virus in a standard amount (10 5) human cell estimated from the β-globin gene, taking into account the copy number of the desired target gene: a single-copy to specifically target the virus (DNA portion of the genome of HHV-6A / B), and double copy for the β-globin gene (DNA region of the human genome).
Выявление и количественное определение вирусоспецифических AT-IgG в образцах сыворотки крови, взятой с интервалом 14 дней, выполняли методом твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием набора реагентов «BeKToHHV-6-IgG» (ЗАО «Вектор-Бест», РФ). Постановку ИФА и последующий анализ полученных результатов осуществляли с использованием автоматического иммуноферментного анализатора «Freedom EVOlyzer 200» («ТЕСAN Schweiz AG», Швейцария), согласно инструкции производителя. Концентрацию вирусоспецифических AT-IgG оценивали исходя из коэффициента позитивности: положительный результат ≥1,0; пограничный - от ≥0,8 до <1,0; отрицательный - <0,80.The detection and quantification of virus-specific AT-IgG in blood serum samples taken with an interval of 14 days was performed by the method of enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) using the BeKToHHV-6-IgG reagent kit (ZAO Vector-Best, RF). The setting of ELISA and the subsequent analysis of the results were carried out using an automatic enzyme immunoassay analyzer "Freedom EVOlyzer 200" ("TESAN Schweiz AG", Switzerland), according to the manufacturer's instructions. The concentration of virus-specific AT-IgG was assessed based on the coefficient of positivity: positive result ≥1.0; borderline - from ≥0.8 to <1.0; negative - <0.80.
Видовую идентификацию вирусов проводили на основании данных, полученных с помощью метода массового параллельного секвенирования («MiSeq», Illumina).The species identification of viruses was carried out on the basis of data obtained using the method of massive parallel sequencing (MiSeq, Illumina).
Для подтверждения или опровержения наследственной передачи хиВГЧ-6А/В клинико-лабораторно обследовали биологических родителей и других ближайших родственников пациентов в том же объеме.To confirm or refute the hereditary transmission of chiHCh-6A / B, clinical and laboratory examinations of the biological parents and other close relatives of the patients were examined in the same volume.
Статистический анализ полученных результатов исследования, включающий обработку данных методами описательной статистики, проводили с использованием программного пакета Microsoft Excel (Windows ХР) и SPSS 16. Проверку исследуемых признаков на нормальность выполняли с помощью критерия Колмогорова-Смирнова.Statistical analysis of the obtained research results, including data processing by descriptive statistics methods, was carried out using the Microsoft Excel (Windows XP) and SPSS 16 software package. Testing of the studied signs for normality was performed using the Kolmogorov-Smirnov test.
Наследуемый хиВГЧ-6А/В лабораторно подтвержден у 12/51 (23,5%) обследованных пациентов с высокими концентрациями ДНК ВГЧ-6А/В в крови и 22/53 (41,5%) их ближайших родственников.Inherited hiHV-6A / B was laboratory confirmed in 12/51 (23.5%) of the examined patients with high concentrations of HHV-6A / B DNA in the blood and 22/53 (41.5%) of their closest relatives.
Специфические AT-IgG к АГ ВГЧ-6А/В в сыворотке крови обследованных с хиВГЧ-6А/В-статусом обнаружены у 10/34 (29,4%) с коэффициентом позитивности: 1,19-12,39 (медиана 3,71) без увеличения в динамике. Определение вирусоспецифических AT не позволило установить хиВГЧ-6А/В-статус, а указывало лишь на то, что на текущий момент произошло инфицирование экзогенным ВГЧ-6А/В, их отсутствие, в свою очередь, свидетельствовало об обратном.Specific AT-IgG to HHV-6A / B AH in the blood serum of those examined with hiHV-6A / B-status were found in 10/34 (29.4%) with a positivity rate: 1.19-12.39 (median 3.71 ) without increasing in dynamics. Determination of virus-specific AT did not allow to establish the hiHV-6A / B-status, but indicated only that at the current moment there was an infection with exogenous HHV-6A / B, their absence, in turn, indicated the opposite.
В целом, расшифровано 10 случаев наследственной передачи хиВГЧ-6В: 7 (70,0%) в двух поколениях и 3 (30,0%) в трех поколениях, а также 2 случая наследственной передачи хиВГЧ-6А: 1 (50,0%) в двух поколениях и 1 (50,0%) в трех поколениях. Распределение концентраций ДНК ВГЧ-6А/В в различных типах биологического материала пациентов с хиВГЧ-6А/В-статусом представлены в Таблице 1. Распределение концентраций ДНК ВГЧ-6А/В в различных типах биологического материала пациентов с хиВГЧ-6А/В-статусом.In general, 10 cases of hereditary transmission of chiVHC-6V were deciphered: 7 (70.0%) in two generations and 3 (30.0%) in three generations, as well as 2 cases of hereditary transmission of chiVHC-6A: 1 (50.0% ) in two generations and 1 (50.0%) in three generations. The distribution of HHV-6A / B DNA concentrations in various types of biological material of patients with hiHV-6A / B-status are presented in Table 1. Distribution of HHV-6A / B DNA concentrations in various types of biological material of patients with hiHV-6A / B-status.
Проведенный ретроспективно анализ анамнестических данных показал, что среди обследованных с клиническими признаками, сходными с острой первичной ВГЧ-6А/В-инфекцией было 29,4%, без клинических признаков активной инфекции - 70,6% человек. Специфическую противовирусную терапию до установления хиВГЧ-6А/В-статуса проводили 70% пациентам с высокими концентрациями ДНК ВГЧ-6А/В в крови, в том числе 60% - более 3-4 курсов лечения без положительного эффекта.A retrospective analysis of the anamnestic data showed that among those examined with clinical signs similar to acute primary HHV-6A / B infection there were 29.4%, without clinical signs of active infection - 70.6%. Prior to the establishment of hiHV-6A / B-status, specific antiviral therapy was administered to 70% of patients with high concentrations of HHV-6A / B DNA in the blood, including 60% - more than 3-4 courses of treatment without a positive effect.
В результате проведенного исследования выявлен и подтвержден хиВГЧ-6А/В-статус у 34 из 104 обследованных человек, среди которых пациенты с высокими концентрациями ДНК ВГЧ-6А/В в крови и их ближайшие родственники. Проведенное исследование позволило определить граничные значения концентрации ДНК ВГЧ-6А/В в образцах цельной крови, ногтевых пластин, волосяных фолликулов, с 99% вероятностью свидетельствующие о наличии наследуемой хромосомно-интегрированной эндогенной формы существования вируса. А именно:As a result of the study, the hiHV-6A / B-status was revealed and confirmed in 34 out of 104 examined people, including patients with high concentrations of HHV-6A / B DNA in the blood and their closest relatives. The study made it possible to determine the boundary values of the concentration of HHV-6A / B DNA in samples of whole blood, nail plates, hair follicles, which with 99% probability indicate the presence of an inherited chromosomally integrated endogenous form of the virus. Namely:
- концентрация ДНК ВГЧ-6А/В в образце цельной крови в пределах значений от 4,77 до 5,37 lg копий/105 клеток;- the concentration of HHV-6A / B DNA in a whole blood sample in the range of values from 4.77 to 5.37 lg copies / 10 5 cells;
- концентрация ДНК ВГЧ-6А/В в образце ногтевых пластин в значении не менее 4,91 lg копий/105 клеток- the concentration of HHV-6A / B DNA in a sample of nail plates in a value of not less than 4.91 lg copies / 10 5 cells
и/илиand / or
- концентрация ДНК ВГЧ-6А/В в образце волосяных фолликулов в значении не менее 4,70 lg копий/105 клеток.- the concentration of HHV-6A / B DNA in the hair follicle sample in a value of at least 4.70 lg copies / 10 5 cells.
Соблюдение требований к технике сбора образцов ногтевых пластин, волосяных фолликулов у обследуемых лиц и критериев трактовки определяемой концентрации ДНК ВГЧ-6А/В в данных типах биологического материала позволили избежать затруднений в интерпретации результатов ПЦР-анализа, связанных с получением ложноположительных (контаминация исследуемых образцов другим типом биологического материала, например, слюной) и ложноотрицательных результатов (несоблюдение условий при сборе биологического материала).Compliance with the requirements for the technique of collecting samples of nail plates, hair follicles from the examined individuals and the criteria for interpreting the determined concentration of HHV-6A / B DNA in these types of biological material made it possible to avoid difficulties in interpreting the results of PCR analysis associated with obtaining false positives (contamination of the test samples with another type biological material, for example, saliva) and false negative results (non-observance of the conditions when collecting biological material).
В 100% случаев своевременное установление хиВГЧ-6А-статуса или хиВГЧ-6 В-статуса являлось обоснованием для исключения активной инфекции, вызываемой ВГЧ-6А/В, отмены проведения специфической противовирусной терапии (при ее наличии) и своевременного выбора оптимальной тактики ведения пациента.In 100% of cases, the timely establishment of hiHV-6A-status or hiHV-6 B-status was the rationale for excluding active infection caused by HHV-6A / B, cancellation of specific antiviral therapy (if any) and timely selection of the optimal patient management tactics.
Клинические примеры:Clinical examples:
Пример 1. Пациентка (девочка, 2 года 2 месяца) с выявленным и лабораторно подтвержденным хиВГЧ-6В-статусом впоследствии, имеющая значения концентрации ДНК вируса в образцах цельной крови - 5,26 lg копий/105 клеток, ногтевых пластин - 5,67 lg копий/105 клеток, волосяных фолликулов - 5,35 lg копий/105 клеток.Example 1. A patient (girl, 2 years 2 months) with identified and laboratory confirmed hiHV-6B status subsequently, having the values of the virus DNA concentration in whole blood samples - 5.26 lg copies / 10 5 cells, nail plates - 5.67 lg copies / 10 5 cells, hair follicles - 5.35 lg copies / 10 5 cells.
На амбулаторный прием врача-инфекциониста обратились родители с ребенком (2017 г. р.) с жалобами на сохраняющиеся изменения в анализах крови девочки (нейтропения, абсолютное количество нейтрофилов 900 клеток/мкл) после острого респираторного заболевания, перенесенного 5 месяцев назад.Parents with a child (born in 2017) turned to an outpatient appointment with an infectious disease doctor with complaints about persisting changes in the girl's blood tests (neutropenia, an absolute neutrophil count of 900 cells / μL) after an acute respiratory illness that had been transferred 5 months ago.
Из анамнеза известно, что пациентка в возрасте 1 год 9 месяцев перенесла острую респираторную вирусную инфекцию (ОРВИ), характеризующуюся лихорадкой (максимальное повышение температуры до 39°С) в течение 5 дней, явлениями бронхита, ринита. При лабораторном обследовании ребенка методом ПЦР выявлена в цельной крови ДНК ВГЧ-6А/В в концентрации 5,26 lg копий/105 клеток, респираторном мазке - ДНК Human adenovirus и ДНК ВГЧ-6А/В в концентрации 4,94×105 копий/мл. Проведена комплексная терапия, включающая интерферон альфа-2b человеческий рекомбинантный ректально курсом в течение 2 месяцев в соответствии с инструкцией по применению. На фоне которой самочувствие девочки нормализовалось, в крови абсолютное количество нейтрофилов 900-1000 кг/мкл. Однако, при повторном лабораторном обследовании пациентки, проведенном через 21 день после окончания курса комплексной терапии, в крови ДНК ВГЧ-6 А/В сохранялась на высоком уровне (концентрация 5,28 lg копий /105 клеток).It is known from the anamnesis that the patient, at the age of 1 year and 9 months, had an acute respiratory viral infection (ARVI) characterized by fever (the maximum temperature rise to 39 ° C) for 5 days, symptoms of bronchitis, rhinitis. During laboratory examination of a child by PCR, HHV-6A / B DNA was detected in whole blood at a concentration of 5.26 lg copies / 10 5 cells, a respiratory smear - Human adenovirus DNA and HHV-6A / B DNA at a concentration of 4.94 × 10 5 copies / ml. A complex therapy was carried out, including interferon alfa-2b human recombinant rectal course for 2 months in accordance with the instructions for use. Against the background of which the girl's state of health returned to normal, the absolute number of neutrophils in her blood was 900-1000 kg / μL. However, during the repeated laboratory examination of the patient, conducted 21 days after the end of the course of complex therapy, the HHV-6 A / B DNA in the blood remained at a high level (concentration of 5.28 lg copies / 10 5 cells).
При осмотре: состояние удовлетворительное, девочка правильного телосложения, удовлетворительного питания (рост 94 см, вес 15 кг). Кожные покровы обычной окраски, чистые, сухие по задней поверхности бедер. Язык чистый. Видимые слизистые чистые, задняя стенка глотки умеренно зерниста, обычной окраски. Миндалины не увеличены, рыхлые, чистые. Лимфоузлы шейных, подмышечных, надключичных, паховых групп не увеличены, единичные, мягкой, плотно-эластичной консистенции, безболезненные. Дыхание через нос свободное, над легкими пуэрильное, хрипов нет. Сердечные тоны, звучные, ритмичные. Живот мягкий, безболезненный при пальпации. Печень +2 см из-под края реберной дуги, селезенка не пальпируется. Стул 1 раз/сутки, ежедневный или через день, оформленный, мягкой консистенции. Риноскопия: без особенностей. Отоскопия: без особенностей.On examination: the condition is satisfactory, the girl is of the correct constitution, satisfactory nutrition (height 94 cm, weight 15 kg). The skin is of normal color, clean, dry on the back of the thighs. The language is clean. Visible mucous membranes are clean, the posterior wall of the pharynx is moderately granular, of normal color. Tonsils are not enlarged, loose, clean. Lymph nodes of the cervical, axillary, supraclavicular, inguinal groups are not enlarged, single, soft, densely elastic consistency, painless. Breathing through the nose is free, puerile over the lungs, no wheezing. Heart tones, sonorous, rhythmic. The abdomen is soft, painless on palpation. The liver is +2 cm from under the costal margin, the spleen is not palpable. Stool 1 time / day, daily or every other day, decorated, soft consistency. Rhinoscopy: no peculiarities. Otoscopy: no peculiarities.
Результаты клинического анализа крови пациентки при обращении за амбулаторной помощью к врачу-инфекционисту представлены в Таблице 2. Результаты клинического анализа крови девочки (2 года 2 месяца) при обращении. Результаты общего анализа мочи в тот же период времени - без патологии.The results of the clinical analysis of the patient's blood when applying for outpatient care to the infectious disease doctor are presented in Table 2. The results of the clinical analysis of the girl's blood (2 years 2 months) at the time of treatment. The results of the general analysis of urine in the same period of time are without pathology.
На основании данных о длительно сохраняющейся ДНКемии ВГЧ-6А/В у девочки после купирования клинических проявлений острого заболевания и проведения противовирусной терапии, принято решение о необходимости исключения хиВГЧ-6А/В-статуса пациентки. Для этого выполнено ее дополнительное лабораторное обследование, результаты которого приведены в Таблице 3. Результаты выявления и количественного определения специфических маркеров ВГЧ-6А/В-инфекции у членов семьи с наследственной передачей хиВГЧ-6 В.Based on the data on the long-term HHV-6A / B DNAemia in the girl after the relief of clinical manifestations of the acute disease and antiviral therapy, it was decided to exclude the hiHV-6A / B status of the patient. For this, her additional laboratory examination was performed, the results of which are shown in Table 3. Results of detection and quantification of specific markers of HHV-6A / B infection in family members with hereditary transmission of chiHVH-6 B.
Так, ДНК ВГЧ-6В методом ПЦР-РВ обнаружена в образцах цельной крови, ногтевых пластин и волосяных фолликулов девочки в концентрации 5,26; 5,67 и 5,35 lg копий/105 клеток, что позволило подтвердить хиВГЧ-6В-статус обследованной. Для расшифровки случая наследственной передачи хиВГЧ-6В проведено обследование пяти условно-здоровых ближайших родственников ребенка с хиВГЧ-6В-статусом (биологических родителей, бабушки и дедушки по материнской линии, бабушки по отцовской линии). На момент клинико-лабораторного обследования все пациенты жалоб не предъявляли, клинических симптомов активной инфекции у них не выявлено. Показатели общего и биохимического анализов крови - в пределах диапазона референсных значений, общий анализ мочи - без патологии. Наследуемый хиВГЧ-6В верифицирован у отца девочки на основании обнаружении ДНК ВГЧ-6В в образцах цельной крови, ногтевых пластин, волосяных фолликулов методом ПЦР-РВ в концентрациях: 5,29; 5,66; 5,32 lg копий/105 клеток, соответственно. У остальных членов семьи (матери ребенка, бабушки и дедушки по материнской линии, бабушки по отцовской линии) хиВГЧ-6А/В-статус не подтвержден. Видовая идентификация вируса (ВГЧ-6 В) определена на основании данных, полученных при использовании метода массового параллельного секвенирования. В сыворотке крови у 4/6 пациентов методом ИФА обнаружены AT-IgG к АГ ВГЧ-6А/В (коэффициент позитивности варьировал от 1,97 до 4,75) без увеличения в динамике, косвенно свидетельствующие о перенесенной ВГЧ-6В-инфекции и отсутствии активного процесса на момент обследования. При этом в образцах сыворотки крови девочки (2 года 2 месяца) и ее отца AT-IgG к АГ ВГЧ-6А/В не обнаружены (коэффициент позитивности 0,15 и 0,25, соответственно), что указывало на отсутствие данных, лабораторно подтверждающих инфицирование пациентов экзогенным ВГЧ-6А/В.Thus, HHV-6V DNA was detected by RT-PCR in samples of whole blood, nail plates and hair follicles of a girl at a concentration of 5.26; 5.67 and 5.35 lg copies / 10 5 cells, which made it possible to confirm the chiHHV-6B status of the examined. To decipher the case of hereditary transmission of hiHCh-6V, five apparently healthy close relatives of a child with hiHHC-6V status (biological parents, maternal grandparents, paternal grandmothers) were examined. At the time of clinical and laboratory examination, all patients had no complaints, no clinical symptoms of active infection were revealed. Indicators of general and biochemical blood tests are within the range of reference values, general urinalysis is without pathology. Inherited hiHVH-6V was verified in the girl's father on the basis of the detection of HHV-6V DNA in samples of whole blood, nail plates, hair follicles by RT-PCR at concentrations: 5.29; 5.66; 5.32 lg copies / 10 5 cells, respectively. The rest of the family members (mothers of the child, maternal grandparents, paternal grandmothers) had hiVHCh-6A / B-status not confirmed. The species identification of the virus (HHV-6 B) was determined on the basis of data obtained using the method of mass parallel sequencing. In the blood serum of 4/6 patients, the ELISA method revealed AT-IgG to AG HHV-6A / B (the positivity coefficient varied from 1.97 to 4.75) without an increase in dynamics, indirectly indicating the transferred HHV-6B infection and the absence active process at the time of examination. At the same time, in the serum samples of the girl (2 years 2 months) and her father, AT-IgG to AG HHV-6A / B were not detected (positivity coefficient 0.15 and 0.25, respectively), which indicated the absence of laboratory data confirming infection of patients with exogenous HHV-6A / B.
Данный пример демонстрирует выявление и подтверждение хиВГЧ-6В-статуса у девочки (возраст 2 года 2 месяца), впервые заподозренного на фоне течения ОРВИ, вероятно аденовирусной этиологии, сопровождающейся лихорадочным состоянием. В ходе динамического наблюдения (3 месяца) пациентки зафиксировано ее полное клиническое выздоровление. Наследуемый хиВГЧ-6В обнаружен и подтвержден в двух поколениях: отец-дочь. На момент установления хиВГЧ-6В-статуса пациенты в специфической противовирусной терапии не нуждались.This example demonstrates the identification and confirmation of the hiHV-6B status in a girl (age 2 years 2 months), first suspected against the background of ARVI, probably of adenoviral etiology, accompanied by a febrile state. During dynamic observation (3 months) of the patient, her complete clinical recovery was recorded. The inherited hiVHCh-6V was discovered and confirmed in two generations: father-daughter. At the time of the establishment of the hiHV-6B status, the patients did not need specific antiviral therapy.
Пример 2. Пациентка (женщина, 31 год) с выявленным и лабораторно подтвержденным хиВГЧ-6А-статусом впоследствии, имеющая значения ДНК вируса в образцах цельной крови - 5,23 lg копий/105 клеток, ногтевых пластин - 5,63 lg копий/105 клеток, волосяных фолликулов - 5,00 lg копий/105 клеток.Example 2. A patient (woman, 31 years old) with identified and laboratory confirmed hiHHV-6A status subsequently, having virus DNA values in whole blood samples - 5.23 lg copies / 10 5 cells, nail plates - 5.63 lg copies / 10 5 cells, hair follicles - 5.00 lg copies / 10 5 cells.
Женщина (1986 г.р.) соматически здорова, жалоб не предъявляла, при клиническом осмотре симптомов активной инфекции не выявлено, показатели общего и биохимического анализов крови в пределах диапазона референсных значений, в крови методом ПЦР-РВ выявлена ДНК ВГЧ-6А/В в концентрации 5,23 lg копий/105 клеток. Пациентка клинико-лабораторно обследована совместно с сыном в возрасте 2 мес. (2016 г.р.) с предварительным диагнозом «Острая инфекция, вызванная вирусом герпеса человека 6». Мальчик от I беременности, протекавшей: I триместр - ретрохориальная гематома, повышение Д-димера, II триместр - без особенностей, III триместр - анемия беременных. Роды I самопроизвольные в срок. Ребенок родился с весом 3570 г, длиной тела 54 см, окружностью головы - 36 см, окружностью груди - 36 см. Оценка по шкале Апгар - 8/9 баллов. Неонатальный период - без особенностей. При лабораторном обследовании ребенка на фоне клинического здоровья в возрасте 1,5 месяцев выявлены изменения: в гемограмме анемия (Нв 85 г/л), относительная нейтропения (12,6%), тромбоцитоз (506 тыс.); в крови ДНК ВГЧ-6А/В в концентрации 5,14 lg копий/105 клеток (ПЦР-РВ) при отсутствии специфических AT-IgG к АГ ВГЧ-6А/В (ИФА) в сыворотке крови. По данным УЗИ - тимомегалия III степени. Рассматривался вопрос о назначении пациенту специфической противовирусной терапии.A woman (born 1986) is somatically healthy, had no complaints, clinical examination did not reveal symptoms of active infection, indicators of general and biochemical blood tests were within the range of reference values, HHV-6A / B DNA was detected in the blood by RT-PCR concentration of 5.23 lg copies / 10 5 cells. The patient was clinically and laboratory examined together with her son at the age of 2 months. (Born in 2016) with a preliminary diagnosis of "Acute infection caused by the human herpes virus 6". A boy from I pregnancy, which proceeded: I trimester - retrochorial hematoma, increased D-dimer, II trimester - no features, III trimester - anemia of pregnant women. Childbirth I spontaneous on time. The child was born with a weight of 3570 g, a body length of 54 cm, a head circumference of 36 cm, and a chest circumference of 36 cm. The Apgar score was 8/9 points. The neonatal period was normal. The laboratory examination of the child against the background of clinical health at the age of 1.5 months revealed changes: in the hemogram, anemia (Hb 85 g / l), relative neutropenia (12.6%), thrombocytosis (506 thousand); in the blood of HHV-6A / B DNA at a concentration of 5.14 lg copies / 10 5 cells (RT-PCR) in the absence of specific AT-IgG to HHV-6A / B AG (ELISA) in the blood serum. According to ultrasound data, thymomegaly of the III degree. The issue of prescribing specific antiviral therapy to the patient was considered.
Несоответствие между клинической симптоматикой (отсутствие клинических признаков активной инфекции) и результатами лабораторного исследования явилось основанием для подозрения на хиВГЧ-6А/В-статус обследуемых.The discrepancy between clinical symptoms (absence of clinical signs of active infection) and laboratory results was the basis for suspicion of hiHVH-6A / B-status of the subjects.
ХиВГЧ-6А-статус пациентов установлен при обнаружении ДНК ВГЧ-6А методом ПЦР-РВ в концентрации:HiHVH-6A-status of patients was established when HHV-6A DNA was detected by RT-PCR at a concentration:
- в образцах цельной крови (lg копий/105) - 5,23 у женщины и 5,24 у ее сына, без увеличения значений в динамике;- in whole blood samples (lg copies / 10 5 ) - 5.23 for a woman and 5.24 for her son, without an increase in values over time;
- в образцах ногтевых пластин (lg копий/105)-5,63 у женщины и 5,37 у ее сына;- in samples of nail plates (lg copies / 10 5 ) -5.63 for a woman and 5.37 for her son;
- в образцах волосяных фолликулов (lg копий/105) - 5,00 у женщины и 5,15 у ее сына.- in samples of hair follicles (lg copies / 10 5 ) - 5.00 for a woman and 5.15 for her son.
Видовая идентификация вируса - ВГЧ-6А - определена на основании данных, полученных при использовании метода массового параллельного секвенирования. В образцах сыворотки крови обследуемых специфические AT-IgG к АГ ВГЧ-6А/В методом ИФА в динамике не обнаружили, что указывало на отсутствие данных, свидетельствующих об инфицировании пациентов экзогенным ВГЧ-6 А/В.The species identification of the virus - HHV-6A - was determined on the basis of data obtained using the method of mass parallel sequencing. In the blood serum samples of the surveyed, specific AT-IgG to AG HHV-6A / B were not detected by ELISA in dynamics, which indicated the absence of data indicating the infection of patients with exogenous HHV-6 A / B.
Для расшифровки случая наследственной передачи хиВГЧ-6А проведено обследование трех условно-здоровых ближайших родственников женщины с хиВГЧ-6А-статусом (биологических родителей, родной сестры), а также супруга. На момент клинико-лабораторного обследования пациенты жалоб не предъявляли, клинических симптомов активной инфекции у них не выявлено. Показатели общего и биохимического анализов крови - в пределах диапазона референсных значений, общий анализ мочи - без патологии. Наследуемый хиВГЧ-6А верифицирован у отца женщины на основании обнаружении ДНК ВГЧ-6А методом ПЦР-РВ в образцах цельной крови в концентрации 5,03 lg копий/105 клеток, ногтевых пластин - 5,84 lg копий/105 клеток, волосяных фолликулов - 5,01 lg копий/105. У остальных членов семьи (матери женщины, ее родной сестры, супруга) хиВГЧ-6А/В-статус не подтвержден. В сыворотке крови у 3/4 обследуемых методом ИФА обнаружены AT-IgG к АГ ВГЧ-6А/В (коэффициент позитивности варьировал от 1,55 до 6,40) без увеличения в динамике, косвенно свидетельствующие о перенесенной ВГЧ-6В-инфекции и отсутствии активного процесса на момент обследования. При этом в образцах сыворотки крови отца женщины AT-IgG к АГ ВГЧ-6А/В не обнаружены (коэффициент позитивности 0,15), что указывало на отсутствие данных, лабораторно подтверждающих инфицирование его экзогенным ВГЧ-6А/В.To decipher the case of hereditary transmission of hiHCh-6A, an examination of three conditionally healthy close relatives of a woman with hiHCh-6A status (biological parents, sibling) and her spouse was carried out. At the time of clinical and laboratory examination, the patients had no complaints, no clinical symptoms of active infection were revealed. Indicators of general and biochemical blood tests are within the range of reference values, general urinalysis is without pathology. Inherited hiHVH-6A was verified in the woman's father based on the detection of HHV-6A DNA by RT-PCR in whole blood samples at a concentration of 5.03 lg copies / 10 5 cells, nail plates - 5.84 lg copies / 10 5 cells, hair follicles - 5.01 lg copies / 10 5 . The rest of the family members (the woman's mother, her own sister, spouse) had hiVHCh-6A / B status not confirmed. In the blood serum of 3/4 of those examined by the ELISA method, AT-IgG to AG HHV-6A / B was detected (the positivity coefficient varied from 1.55 to 6.40) without an increase in dynamics, indirectly indicating the transferred HHV-6B infection and the absence active process at the time of examination. At the same time, in blood serum samples of the woman's father, AT-IgG to AG HHV-6A / B were not found (positivity coefficient 0.15), which indicated the absence of laboratory data confirming its infection with exogenous HHV-6A / B.
Результаты исследования приведены в Таблице 4. Результаты выявления и количественного определения специфических маркеров ВГЧ-6А-инфекции у членов семьи с наследственной передачей хиВГЧ-6А.The results of the study are shown in Table 4. The results of the detection and quantification of specific markers of HHV-6A infection in family members with hereditary transmission of chiHV-6A.
За время динамического наблюдения (13 месяцев) при повторных клинических обследованиях отклонения в состоянии здоровья женщины, ее сына и отца не выявлены. Лабораторных данных, подтверждающих реактивацию наследуемого хиВГЧ-6А или первичное заражение экзогенным ВГЧ-6А/В, не получено. У мальчика: психомоторное развитие за первый год жизни соответствовало возрастной норме; в крови: длительно абсолютная нейтропения, тромбоцитоз, не имевшие клинических эквивалентов. Значение нейтрофилов, тромбоцитов и размер тимуса нормализовались самостоятельно к 11-и месячному возрасту. Специфической противовирусной терапии пациенты не получали. За весь период наблюдения хронические соматические или инфекционные заболевания у них не зафиксированы. Зарегистрированы лишь острые респираторные заболевания, протекавшие без осложнений, и с частотой, не превышающей популяционную.During the follow-up period (13 months), repeated clinical examinations did not reveal any abnormalities in the state of health of the woman, her son and father. Laboratory data confirming the reactivation of the inherited hiHV-6A or primary infection with exogenous HHV-6A / B have not been obtained. In the boy: psychomotor development in the first year of life corresponded to the age norm; in the blood: long-term absolute neutropenia, thrombocytosis, which had no clinical equivalents. The value of neutrophils, platelets and the size of the thymus normalized on their own by the age of 11 months. The patients did not receive specific antiviral therapy. During the entire observation period, no chronic somatic or infectious diseases were recorded. Only acute respiratory diseases were registered, proceeding without complications, and with a frequency not exceeding the population one.
Данный пример демонстрирует случай выявления и лабораторного подтверждения хиВГЧ-6А-статуса у членов одной семьи в трех поколениях (от отца дочери и внуку).This example demonstrates the case of detection and laboratory confirmation of hiHHC-6A status in members of the same family in three generations (from father to daughter and grandson).
ХиВГЧ-6А, передаваемый по наследству, верифицирован на основании определения ДНК вируса методом ПЦР-РВ в образцах цельной крови, ногтевых пластин и волосяных фолликулов в концентрациях, соответствующих референсным значениям, а именно: в образцах цельной крови - от 4,77 до 5,37 lg копий ДНК ВГЧ-6А/В/105 клеток; в образцах ногтевых пластин - не менее 4,91 lg копий ДНК ВГЧ-6А/В/105 клеток, в образцах волосяных фолликулов - не менее 4,70 lg копий ДНК ВГЧ-6А/В/105 клеток.Hereditary HiVHCh-6A was verified based on the determination of the virus DNA by RT-PCR in whole blood samples, nail plates and hair follicles at concentrations corresponding to the reference values, namely: in whole blood samples - from 4.77 to 5, 37 lg copies of DNA HHV-6A / B / 10 5 cells; in samples of nail plates - not less than 4.91 lg copies of HHV-6A / B / 10 5 cells DNA, in hair follicle samples - not less than 4.70 lg copies of HHV-6A / B / 10 5 cells.
Лабораторное подтверждение хиВГЧ-6А-статуса явилось обоснованием для исключения активной инфекции, вызванной ВГЧ-6А и проведения излишней противовирусной терапии.Laboratory confirmation of hiHV-6A status was the rationale for excluding active infection caused by HHV-6A and for unnecessary antiviral therapy.
Пример. 3. Пациент (мальчик, 2 года 5 месяцев) с лабораторно неподтвержденным хиВГЧ-6А/В-статусом впоследствии, имеющий значения концентрации ДНК ВГЧ-6 В в образцах цельной крови - 3,75 lg копий/105 клеток, ногтевых пластин и волосяных фолликулов - не обнаружено.Example. 3. A patient (boy, 2 years 5 months) with a laboratory unconfirmed hiHV-6A / B-status subsequently, having values of the HHV-6 B DNA concentration in whole blood samples - 3.75 lg copies / 10 5 cells, nail plates and hair follicles - not found.
Ребенок (2016 г.р.) поступил в инфекционное отделение с жалобами на повышение температуры до 39,7°С в течение двух дней, насморк, судороги. На вторые сутки лихорадки на фоне 39,5°С отмечались тонико-клонические судороги на протяжении нескольких минут, купировавшиеся самостоятельно, выраженная мраморность кожи.A child (born in 2016) was admitted to the infectious diseases department with complaints of fever up to 39.7 ° C for two days, runny nose, convulsions. On the second day of fever, against a background of 39.5 ° C, tonic-clonic convulsions were noted for several minutes, which were stopped independently, pronounced marbling of the skin.
При клиническом осмотре: состояние средней тяжести, вялый, аппетит снижен, кожные покровы чистые, бледные; температура 40,6°С, полилимфадения. Зев гиперемирован, небные миндалины увеличены до 1-2 размера, чистые. Лимфоузлы шейных групп (задне- и передне-шейные), надключичные, подмышечные увеличены до 12 мм, до 2-3 в группе, мягкой, эластичной консистенции, безболезненные при пальпации. Дыхание через нос умеренно затруднено, выделений нет. Над легкими - жесткое, хрипов нет, ЧДД 28 уд./мин. Тоны сердца звучные, ритмичные, ЧСС 120 уд./мин. Язык умеренно обложен белым налетом, живот мягкий, безболезненный при пальпации по ходу кишечника. Печень выступает из-под края реберной дуги на 2 см по средне-ключичной линии, край мягкий острый, селезенка не увеличена. Стул 1 раз в день оформленный, мочеиспускание не нарушено.On clinical examination: a state of moderate severity, sluggish, decreased appetite, the skin is clean, pale; temperature 40.6 ° C, polylymphadenia. The pharynx is hyperemic, the palatine tonsils are enlarged to 1-2 sizes, clean. Lymph nodes of the cervical groups (posterior and anterior cervical), supraclavicular, axillary increased up to 12 mm, up to 2-3 in the group, soft, elastic consistency, painless on palpation. Breathing through the nose is moderately difficult, no discharge. Over the lungs - hard, no wheezing, NPV 28 beats / min. Heart sounds are sonorous, rhythmic, heart rate 120 beats / min. The tongue is moderately coated with white bloom, the abdomen is soft, painless on palpation along the intestines. The liver protrudes from under the edge of the costal arch by 2 cm along the mid-clavicular line, the edge is soft, sharp, the spleen is not enlarged. Stool once a day, decorated, urination is not disturbed.
Результаты клинического анализа крови мальчика при поступлении представлены в Таблице 5. Результаты клинического анализа крови мальчика (2 года 5 месяцев) при поступлении в инфекционное отделение. Общий анализ мочи при поступлении - без патологии.The results of the clinical analysis of the boy's blood upon admission are presented in Table 5. The results of the clinical analysis of the boy's blood (2 years 5 months) upon admission to the infectious diseases department. General urine analysis at admission - no pathology.
При обследовании выявлена ДНК ВГЧ-6В методом ПЦР-РВ в цельной крови в концентрации 3,75 lg копий/105 клеток (лабораторный маркер активной ВГЧ-6А/В-инфекции) при отсутствии AT-IgG к AT ВГЧ-6А/В в сыворотке крови.Examination revealed HHV-6V DNA by RT-PCR in whole blood at a concentration of 3.75 lg copies / 10 5 cells (laboratory marker of active HHV-6A / B infection) in the absence of AT-IgG to AT HHV-6A / B c serum.
Принято решение о необходимости исключении хиВГЧ-6А/В-статуса у пациента. Для этого дополнительно исследованы образцы ногтевых пластин и волосяных фолликулов ребенка методом ПЦР-РВ в количественном формате. А также проведено клинико-лабораторное обследование его четырех ближайших родственников: биологических родителей, родных сестры и брата (условно здоровы, жалоб не предъявляли, показатели общего и биохимического анализов крови - в пределах диапазона референсных значений, общий анализ мочи - без патологии), включающее выявление ДНК ВГЧ-6А/В в образцах цельной крови, ногтевых пластин и волосяных фолликулов методом ПЦР-РВ в количественном формате. Результаты лабораторного обследования представлены в Таблице 6. Результаты выявления и количественного определения специфических маркеров ВГЧ-6А/В-инфекции у членов семьи без наследственной передачи хиВГЧ-6А/В.A decision was made on the need to exclude the hiVHC-6A / B-status in the patient. For this, samples of the child's nail plates and hair follicles were additionally examined by RT-PCR in a quantitative format. And also a clinical and laboratory examination of his four closest relatives was carried out: biological parents, sisters and brother (conditionally healthy, no complaints were presented, indicators of general and biochemical blood tests were within the range of reference values, general urine analysis was without pathology), including the identification HHV-6A / B DNA in whole blood samples, nail plates and hair follicles by RT-PCR in a quantitative format. The results of the laboratory examination are presented in Table 6. The results of the detection and quantification of specific markers of HHV-6A / B infection in family members without hereditary transmission of chiHV-6A / B.
Видовая идентификация вируса - ВГЧ-6В - определена на основании данных, полученных при использовании метода массового параллельного секвенирования.The species identification of the virus - HHV-6V - was determined on the basis of data obtained using the method of mass parallel sequencing.
На третьи сутки пребывания в отделении у пациента после нормализации температуры тела отмечалось появление на теле обильной пятнисто-папулезной сыпи. На фоне проводимой в отделении комплексной терапии самочувствие ребенка улучшилось, выписан на 7-й день заболевания в удовлетворительном состоянии.On the third day of stay in the department, the patient after normalization of body temperature showed the appearance on the body of a profuse maculopapular rash. Against the background of the complex therapy carried out in the department, the child's well-being improved, he was discharged on the 7th day of illness in a satisfactory condition.
При повторном лабораторном обследовании мальчика (через 21 день после окончания проведенного курса комплексной терапии): ДНК ВГЧ-6А/В (ПЦР-РВ) в образцах цельной крови, ногтевых пластин и волосяных фолликулов не выявлена, в сыворотке крови обнаружены AT IgG к АГ ВГЧ-6А/В методом ИФА (коэффициент позитивности 4,36).During the repeated laboratory examination of the boy (21 days after the end of the course of complex therapy): DNA HHV-6A / B (PCR-RV) was not detected in samples of whole blood, nail plates and hair follicles, AT IgG to HHV AH was found in blood serum -6A / B by ELISA (positivity coefficient 4.36).
Данный пример демонстрирует развитие у мальчика в возрасте 2 года 5 месяцев характерной клинической формы первичной инфекции (внезапная экзантема, ринит, фебрильный судорожный приступ), вызванной ВГЧ-6В, подтвержденной лабораторно с применением прямых (выявление ДНК вируса (ПЦР-РВ) в цельной крови) и косвенных (обнаружение сероконверсии AT IgG к АГ ВГЧ-6А/В (ИФА) при исследовании парных образцов сыворотки крови) методов диагностики.This example demonstrates the development in a boy at the age of 2 years 5 months of the characteristic clinical form of primary infection (sudden exanthema, rhinitis, febrile convulsive seizure) caused by HHV-6V, confirmed by laboratory using direct (detection of virus DNA (PCR-RT) in whole blood ) and indirect (detection of seroconversion of AT IgG to AG HHV-6A / B (ELISA) in the study of paired serum samples) diagnostic methods.
Несмотря на выявление высокой концентрации ДНК вируса (3,75 lg копий/105 клеток) в цельной крови при первичном обследовании хиВГЧ-6А/В-статус не подтвержден, что обосновано отсутствием ДНК вируса в образцах ногтевых пластин и волосяных фолликулов, а также снижением ее концентрации в крови до неопределяемого уровня. Учтено, что у ближайших родственников ребенка (4 человека) хиВГЧ-6А/В-статус не выявлен. Своевременное исключение хиВГЧ-6В-статуса у ребенка и верификация у него острой (первичной) ВГЧ-6В-инфекции явились основанием для назначения адекватной противовирусной терапии, приведшей к полному клиническому выздоровлению пациента.Despite the detection of a high concentration of virus DNA (3.75 lg copies / 10 5 cells) in whole blood, during the initial examination, the chiHHC-6A / B status was not confirmed, which is justified by the absence of virus DNA in the samples of nail plates and hair follicles, as well as by a decrease in its concentration in the blood to an undetectable level. It was taken into account that the closest relatives of the child (4 people) had no hiVHCh-6A / B-status. Timely exclusion of the chiHV-6B status in a child and verification of acute (primary) HHV-6B infection in him were the basis for the appointment of adequate antiviral therapy, which led to the patient's complete clinical recovery.
Таким образом, заявляемый способ позволяет своевременно и точно выявить и лабораторно подтвердить хромосомно-интегрированный ВГЧ-6А или ВГЧ-6В, передаваемый по наследству, как у детей, так и взрослых.Thus, the claimed method allows timely and accurate detection and laboratory confirmation of chromosomally integrated HHV-6A or HHV-6B, which is inherited in both children and adults.
Claims (6)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2020120283A RU2739997C1 (en) | 2020-06-18 | 2020-06-18 | Method for detecting and laboratory confirmation of inherited chromosomally-integrable human herpes virus 6a/b |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2020120283A RU2739997C1 (en) | 2020-06-18 | 2020-06-18 | Method for detecting and laboratory confirmation of inherited chromosomally-integrable human herpes virus 6a/b |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2739997C1 true RU2739997C1 (en) | 2020-12-30 |
Family
ID=74106467
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2020120283A RU2739997C1 (en) | 2020-06-18 | 2020-06-18 | Method for detecting and laboratory confirmation of inherited chromosomally-integrable human herpes virus 6a/b |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2739997C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2800731C1 (en) * | 2022-12-28 | 2023-07-27 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора) | Method of quantitative determination of dna of human herpes virus 6a (hhv-6a) and dna of human herpes virus 6b (hhv-6b) and a set of oligonucleotide primers and a probe for its implementation |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20120122700A1 (en) * | 2010-11-11 | 2012-05-17 | University Of South Florida | Materials and methods for determining subtelomere dna sequence |
-
2020
- 2020-06-18 RU RU2020120283A patent/RU2739997C1/en active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20120122700A1 (en) * | 2010-11-11 | 2012-05-17 | University Of South Florida | Materials and methods for determining subtelomere dna sequence |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| E. A. DOMONOVA et al. The first case of detection and laboratory confirmation of hereditary transmission of chromosomally integrated transmission of Human betaherpesvirus 6A in the Russian Federation. Infectious diseases. 2019; 17 (3): 5-14. * |
| E.V. MELEKHINA Human betaherpesvirus 6A / B infection in children: clinical and pathogenetic aspects, diagnosis and therapy. Abstract of thesis. diss. doctor honey. sciences. Moscow, 2019, 48 p. * |
| МЕЛЕХИНА Е.В. Инфекция, вызванная Human betaherpesvirus 6A/B, у детей: клинико-патогенетические аспекты, диагностика и терапия. Автореф. дисс. доктора мед. наук. Москва, 2019, 48 c. ДОМОНОВА Э.А. и др. Первый случай выявления и лабораторного подтверждения наследственной передачи хромосомно-интегрированной передачи Human betaherpesvirus 6А в Российской Федерации. Инфекционные болезни. 2019; 17(3): 5-14. * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2800731C1 (en) * | 2022-12-28 | 2023-07-27 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора) | Method of quantitative determination of dna of human herpes virus 6a (hhv-6a) and dna of human herpes virus 6b (hhv-6b) and a set of oligonucleotide primers and a probe for its implementation |
| RU2800995C1 (en) * | 2022-12-28 | 2023-08-01 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора) | Method of quantitative determination of dna of human herpes virus 6a (hhv-6a) and dna of human herpes virus 6b (hhv-6b) and a set of oligonucleotide primers and a probe for its implementation |
| RU2806427C1 (en) * | 2022-12-28 | 2023-10-31 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора) | Set of oligonucleotide primers and probes for species differentiation of human herpes virus 6a and human herpes virus 6b and method of its use |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Lunniss et al. | Magnetic resonance imaging of anal fistulae | |
| Dunlop et al. | Vaginal microbiome composition in early pregnancy and risk of spontaneous preterm and early term birth among African American women | |
| Karin et al. | Diagnostic evaluation of intrauterine fetal deaths in Stockholm 1998-99 | |
| CN108513586A (en) | Pathogenic organisms marker and application thereof | |
| Cohen et al. | Antenatal detection of cystic hygroma | |
| Stagno et al. | Factors associated with primary cytomegalovirus infection during pregnancy | |
| Randolph | Prenatal cytogenetics | |
| RU2408014C2 (en) | Method for prediction of preterm delivery of infectious genesis | |
| RU2334233C1 (en) | Method for forecasting preterm labour in presence of urogenital infection | |
| RU2739997C1 (en) | Method for detecting and laboratory confirmation of inherited chromosomally-integrable human herpes virus 6a/b | |
| Cole et al. | Prenatal testing for Duchenne and Becker muscular dystrophy | |
| Kielar et al. | Parechovirus and enterovirus infections in neonates | |
| RU2683955C1 (en) | Method for early differential diagnostics of hemorrhagic fever with renal syndrome | |
| RU2231791C2 (en) | Method for diagnosis of intrauterine infection in newborns | |
| Fan et al. | Clinical value of ultrasound fetal neck transparent layer index in early screening of 21-trisomy syndrome | |
| Jiang et al. | Diagnostic value of human cytomegalovirus late mRNA detection in active intrauterine infection | |
| Viani et al. | Performance of rapid HIV testing using Determine® HIV-1/2 for the diagnosis of HIV infection during pregnancy in Tijuana, Baja California, Mexico | |
| CN108866241A (en) | It is a kind of for detecting the kit of border disease | |
| RU2786211C1 (en) | Method for laboratory personalized diagnostics of the state of immunity of patients and a set of oligodeoxyribonucleotide primers, and fluorescently labeled probes, and standard samples | |
| CN117904270A (en) | Biomarker for evaluating peripheral immune function of HCMV acute infection infant and application thereof | |
| Koutras et al. | Echogenic intracardiac focus–existence in the first trimester and the role of microRNAs | |
| RU2706126C1 (en) | Diagnostic technique for the combined infection in children with acute respiratory infections | |
| RU2751244C1 (en) | Method for extraction of nucleic acids from nail plates | |
| RU2790239C1 (en) | Method for early differential diagnosis of viral and bacterial community-acquired pneumonia in children | |
| Godhardt et al. | Evaluation of antigen-capture ELISA and immunohistochemical methods for avian surveillance of West Nile virus |