RU2739855C1 - Method for recovering biochemical indices of peripheral blood of laboratory animals with toxic hepatitis - Google Patents

Method for recovering biochemical indices of peripheral blood of laboratory animals with toxic hepatitis Download PDF

Info

Publication number
RU2739855C1
RU2739855C1 RU2020100837A RU2020100837A RU2739855C1 RU 2739855 C1 RU2739855 C1 RU 2739855C1 RU 2020100837 A RU2020100837 A RU 2020100837A RU 2020100837 A RU2020100837 A RU 2020100837A RU 2739855 C1 RU2739855 C1 RU 2739855C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
cells
laboratory animals
mmsc
peripheral blood
recovering
Prior art date
Application number
RU2020100837A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Ирина Юрьевна Маклакова
Дмитрий Юрьевич Гребнев
Виктория Чаукатовна Вахрушева
Илья Валерьевич Гаврилов
Original Assignee
Государственное автономное учреждение здравоохранения Свердловской области "Центр специализированных видов медицинской помощи "Институт медицинских клеточных технологий"
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Уральский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Государственное автономное учреждение здравоохранения Свердловской области "Центр специализированных видов медицинской помощи "Институт медицинских клеточных технологий", Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Уральский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации filed Critical Государственное автономное учреждение здравоохранения Свердловской области "Центр специализированных видов медицинской помощи "Институт медицинских клеточных технологий"
Priority to RU2020100837A priority Critical patent/RU2739855C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2739855C1 publication Critical patent/RU2739855C1/en

Links

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/48Reproductive organs
    • A61K35/50Placenta; Placental stem cells; Amniotic fluid; Amnion; Amniotic stem cells
    • GPHYSICS
    • G09EDUCATION; CRYPTOGRAPHY; DISPLAY; ADVERTISING; SEALS
    • G09BEDUCATIONAL OR DEMONSTRATION APPLIANCES; APPLIANCES FOR TEACHING, OR COMMUNICATING WITH, THE BLIND, DEAF OR MUTE; MODELS; PLANETARIA; GLOBES; MAPS; DIAGRAMS
    • G09B23/00Models for scientific, medical, or mathematical purposes, e.g. full-sized devices for demonstration purposes
    • G09B23/28Models for scientific, medical, or mathematical purposes, e.g. full-sized devices for demonstration purposes for medicine

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Computational Mathematics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Algebra (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Pregnancy & Childbirth (AREA)
  • Mathematical Analysis (AREA)
  • Mathematical Optimization (AREA)
  • Mathematical Physics (AREA)
  • Pure & Applied Mathematics (AREA)
  • Business, Economics & Management (AREA)
  • Educational Administration (AREA)
  • Educational Technology (AREA)
  • Theoretical Computer Science (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

FIELD: medicine.SUBSTANCE: invention refers to medicine and aims at recovering biochemical parameters of peripheral blood of laboratory animals (mice, rats). Method for preventing embolism development by transplanted cells in laboratory animals involves intravenous combined allogenic transplantation of multipotent mesenchymal stromal cells (MMSC) obtained from laboratory animal placenta chorion, and laboratory animals of hematopoietic stem cells (HSC) derived from placenta chorion are: MMSC in dose of 2 million cells/kg, HSC in dose of 300 thousand cells/kg.EFFECT: invention provides recovering biochemical parameters of peripheral blood in hepatic cirrhosis and eliminates the possibility of developing embolism by transplanted cells.1 cl, 2 tbl

Description

Изобретение относится к области медицины и предназначено для восстановления биохимических показателей периферической крови лабораторных животных.The invention relates to medicine and is intended to restore the biochemical parameters of the peripheral blood of laboratory animals.

Известен способ восстановления биохимических показателей крови лабораторных животных с токсическим гепатитом путем использования спиртового эктракта лавра благородного (Laurus nobilis). Токсическое повреждение печени моделировали путем внутрибрюшинного введения четыреххлористого углерода (CCl4). Экстракт лавра вводился в количестве 0,2 мл/100 г массы лабораторного животного (https://docplayer.ru/69619930-Biohimicheskie-pokazateli-krovi-krys-s-toksicheskim-gepatitom-pri-deystvii-spirtovogo-ekstrakta-lavra-blagorodnogo-laurus-nobilis.html). Недостатком данного подхода является то, что спиртовый экстракт лаврового листа нельзя употреблять пациентам с мочекаменной болезнью, при острой или хронической почечной недостаточности, при нефритах, тяжелой форме сахарного диабета. (Лавренов В.К., Лавренова Г.В. «Энциклопедия лекарственных растений народной медицины, Санкт-Петербург, Издательский дом «Нева», 2003 - 126 с.).A known method of restoring the biochemical parameters of the blood of laboratory animals with toxic hepatitis by using an alcohol extract of laurel noble (Laurus nobilis). Toxic liver damage was modeled by intraperitoneal administration of carbon tetrachloride (CCl4). Laurel extract was administered in an amount of 0.2 ml / 100 g of the mass of a laboratory animal (https://docplayer.ru/69619930-Biohimicheskie-pokazateli-krovi-krys-s-toksicheskim-gepatitom-pri-deystvii-spirtovogo-ekstrakta-lavra- blagorodnogo-laurus-nobilis.html). The disadvantage of this approach is that the alcoholic extract of bay leaves cannot be used by patients with urolithiasis, with acute or chronic renal failure, with nephritis, and severe diabetes mellitus. (Lavrenov V.K., Lavrenova G.V. "Encyclopedia of medicinal plants of folk medicine, St. Petersburg, Publishing house" Neva ", 2003 - 126 p.).

Наиболее близким техническим решением к заявляемому является способ восстановления биохимических показателей периферической крови лабораторных животных путем введения мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток (ММСК) в количестве 4 млн кл./кг ММСК. (Изменение биохимических показателей крови лабораторных животных с токсическим гепатитом после введения ММСК // Сборник материалов VI Международной научно-практической конференции «Актуальные направления научных исследований: перспективы развития», Чебоксары 2018. С 44-46.) Недостатком данного подхода является использование высокой концентрации клеток в единице объема вводимой суспензии. Так, было суспендировано 4 млн кл./кг ММСК в 0,2 мл. 0,9% раствора NaCl. Эта концентрация клеток (ММСК) может вызвать эмболию, при этом отмечается достаточно высокая активность ферментов цитолиза гепатоцитов.The closest technical solution to the claimed one is a method of restoring the biochemical parameters of the peripheral blood of laboratory animals by introducing multipotent mesenchymal stromal cells (MMSC) in the amount of 4 million cells / kg of MMSC. (Changes in the biochemical parameters of the blood of laboratory animals with toxic hepatitis after the introduction of MMSC // Proceedings of the VI International Scientific and Practical Conference "Actual directions of scientific research: development prospects", Cheboksary 2018. P 44-46.) The disadvantage of this approach is the use of a high concentration of cells per unit volume of the injected suspension. Thus, 4 million cells / kg of MMSC were suspended in 0.2 ml. 0.9% NaCl solution. This concentration of cells (MMSC) can cause embolism, while there is a fairly high activity of hepatocyte cytolysis enzymes.

Задачей данного изобретения является расширение арсенала средств, способных приводить к восстановлению биохимических показателей периферической крови лабораторных животных с токсическим гепатитом.The objective of this invention is to expand the arsenal of agents capable of restoring the biochemical parameters of the peripheral blood of laboratory animals with toxic hepatitis.

Технический результат, который будет получен от использования изобретения, заключается в исключении возможности развития эмболии трансплантированными клетками, а также в более существенном снижении уровня в крови показателей, характеризующих цитолиз гепатоцитов - аланинаминотрансфераза (ACT), аспартатаминотрансфераза (ACT), щелочной фосфатазы.The technical result that will be obtained from the use of the invention consists in excluding the possibility of embolism by transplanted cells, as well as in a more significant decrease in the blood level of indicators characterizing the cytolysis of hepatocytes - alanine aminotransferase (ACT), aspartate aminotransferase (ACT), alkaline phosphatase.

Технический результат достигается путем внутривенной сочетанной аллогенной трансплантации ММСК, полученных из хориона плаценты лабораторных животных в дозе 2 млн. клеток/кг и полученных из хориона плаценты лабораторных животных гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) в дозе 300 тыс. клеток/кг.The technical result is achieved by intravenous combined allogeneic transplantation of MMSCs obtained from the placenta chorion of laboratory animals at a dose of 2 million cells / kg and hematopoietic stem cells (HSC) obtained from the placental chorion of laboratory animals at a dose of 300 thousand cells / kg.

Способ позволяет обеспечить восстановление биохимических показателей периферической крови при циррозе печени и исключить возможность развития эмболии трансплантированными клетками.EFFECT: method allows to provide restoration of biochemical parameters of peripheral blood in liver cirrhosis and to exclude the possibility of embolism by transplanted cells.

Сущность изобретения обеспечена проведением сочетанной трансплантации лабораторным животным плацентарных ММСК и ГСК в количестве 4 млн клеток/кг и 330 тыс. клеток/кг соответственно.The essence of the invention is provided by the combined transplantation of placental MMSC and HSC in laboratory animals in the amount of 4 million cells / kg and 330 thousand cells / kg, respectively.

Эффективность применения ММСК обусловлена тем, что они вырабатывают противовоспалительные цитокины (интерлейкин-10, трансформирущий фактор роста -β), факторы роста, необходимые для дифференцировки звездчатых клеток печени (клетки Ито) в гепатоциты. ММСК синтезируют компоненты матрикса, в том числе фибронектин, ламинин, коллаген и протеогликаны. При этом ММСК способны дифференцироваться в клетки стромы, которая обеспечивает синтез экстрацеллюлярного матрикса, формирующего микроокружение, необходимое для пролиферации и дифференцировки стволовых клеток. Способность ММСК в заявляемой дозировке оказывает иммуносупрессивное действие, обеспечивающее приживление аллогенного трансплантата.The effectiveness of MMSC is due to the fact that they produce anti-inflammatory cytokines (interleukin-10, transforming growth factor -β), growth factors necessary for the differentiation of hepatic stellate cells (Ito cells) into hepatocytes. MMSCs synthesize matrix components including fibronectin, laminin, collagen, and proteoglycans. In this case, MMSCs are able to differentiate into stromal cells, which provides the synthesis of an extracellular matrix that forms the microenvironment necessary for the proliferation and differentiation of stem cells. The ability of MMSC in the claimed dosage has an immunosuppressive effect, ensuring the engraftment of the allogeneic graft.

ГСК способны дифференцироваться в гепатоциты. (Роль стволовых клеток в регенерации печени и перспективы их использования в лечении печеночной недостаточности / А.Н. Лызиков, А.Г. Скуратов, Е.В. Воропаев, А.А. Призенцов // Проблемы здоровья и экологии. - 2012, №2 (32). - С. 7-13.). В то же время известно, что ММСК способны вырабатывать хемоаттрактант для ГСК, обеспечивая их направленную миграцию (Стволовые клетки, их свойства, источники получения и роль в регенеративной медицине / А.П. Ястребов, Д.Ю. Гребнев, И.Ю. Маклакова. - Екатеринбург, 2016. - 282).HSCs are able to differentiate into hepatocytes. (The role of stem cells in liver regeneration and the prospects for their use in the treatment of liver failure / A.N. Lyzikov, A.G. Skuratov, E.V. Voropaev, A.A. Prizentsov // Problems of health and ecology. - 2012, no. 2 (32). - S. 7-13.). At the same time, it is known that MMSCs are capable of producing a chemoattractant for HSC, providing their directed migration (Stem cells, their properties, sources of production and role in regenerative medicine / A.P. Yastrebov, D.Yu. Grebnev, I.Yu. Maklakova . - Yekaterinburg, 2016. - 282).

Заявляемая дозировка ММСК и ГСК подобрана эксперементальным путем и способствует активации регенерации печени и исключает возможность развития эмболии трансплантированными клетками.The claimed dosage of MMSC and HSC is selected experimentally and promotes the activation of liver regeneration and excludes the possibility of embolism by transplanted cells.

Из анализа научно-технической и патентной литературы использования плацентарных ММСК и ГСК для восстановления биохимических показателей периферической крови лабораторных животных с циррозом печени не выявлено, что позволяет сделать вывод о соответствии заявляемого технического решения критериям «новизна» и «изобретательский уровень».Analysis of the scientific, technical and patent literature on the use of placental MMSC and HSC to restore the biochemical parameters of the peripheral blood of laboratory animals with liver cirrhosis was not revealed, which allows us to conclude that the proposed technical solution meets the criteria of "novelty" and "inventive step".

Изобретение осуществляется следующим образом.The invention is carried out as follows.

Эксперименты выполнены на 28 зрелых лабораторных мышах-самцах в возрасте 7-8 месяцев с массой 25-30 г. Животные содержались в стандартных условиях лабораторного вивария при естественном освещении и сбалансированном рационе.The experiments were carried out on 28 mature laboratory male mice aged 7-8 months and weighing 25-30 g. The animals were kept in standard laboratory vivarium conditions with natural light and a balanced diet.

Лабораторные животные были разделены на опытные и контрольные группы (по 7 животных в каждой группе). Лабораторным животным опытных групп внутривенно вводились ММСК и ГСК соответственно в дозе 2 млн. клеток/кг и 300 тыс. клеток/кг, суспендированные в 0,2 мл 0,9% NaCl. Животным контрольных групп вводили 0,2 мл 0,9% NaCl внутривенно. Токсический гепатит вызывали путем внутрибрюшинного введения CCl4 (четыреххлористый углерод) в дозе 50 мкг/кг. Трансплантация клеток осуществлялась в хвостовую вену через 1 час после введения четыреххлористого углерода однократно. Забой лабораторных животных осуществлялся на 3 и 7 сутки после трансплантации клеток.Laboratory animals were divided into experimental and control groups (7 animals in each group). Laboratory animals of the experimental groups were injected intravenously with MMSC and HSC, respectively, at a dose of 2 million cells / kg and 300 thousand cells / kg, suspended in 0.2 ml of 0.9% NaCl. The animals of the control groups were injected with 0.2 ml of 0.9% NaCl intravenously. Toxic hepatitis was induced by intraperitoneal injection of CCl4 (carbon tetrachloride) at a dose of 50 μg / kg. Cell transplantation was carried out into the tail vein 1 hour after the introduction of carbon tetrachloride once. The slaughter of laboratory animals was carried out on days 3 and 7 after cell transplantation.

Клеточные культурыCell culture

Получение клеточной культуры ММСК и ГСК производилось из хориона плаценты лабораторных животных. При этом мононуклеарная фракция клеток была получена путем последовательной механической и ферментативной (раствор аккутазы (Millipore, США)) обработки ткани плаценты.Cell culture of MMSC and HSC was obtained from the placenta chorion of laboratory animals. In this case, the mononuclear fraction of cells was obtained by sequential mechanical and enzymatic (solution of accutase (Millipore, USA)) processing of placental tissue.

Выделение ГСК осуществлялось методом позитивной иммуномагнитной сепарации по антигенам SCA-1 (StemCell Technologies, США) и CD 117 (StemCell Technologies, США) (X. Muniraetal., 2009).Isolation of HSCs was carried out by the method of positive immunomagnetic separation for SCA-1 (StemCell Technologies, USA) and CD 117 (StemCell Technologies, USA) antigens (X. Munira et al., 2009).

Проточная цитометрия была проведена на цитометре FACS Calibur (BD Bioscienses, США). В суспензии трансплантируемых клеток оценивалось содержание ГСК с иммунофенотипом положительных по CD117, Sca-1 и отрицательных по Lin- (CD45, C3e, Ly-6G, M1/70, Ter-119).Flow cytometry was performed on a FACS Calibur cytometer (BD Bioscienses, USA). The content of HSCs with immunophenotype positive for CD117, Sca-1 and negative for Lin- (CD45, C3e, Ly-6G, M1 / 70, Ter-119) was assessed in the suspension of transplanted cells.

В качестве изотипического контроля для антител при проведении позитивной иммуномагнитной сепарации по SCA-1 и CD117 были использованы антитела РЕ labeled Rat IgG2a, kappa isotype control (BD Bioscienses). С целью определения Lin антигенов на поверхности клеток был использован набор антител - FITC anti-mouse Lineage Coctail with isotype control (Biolegend, США).The labeled Rat IgG2a, kappa isotype control (BD Bioscienses) antibodies were used as an isotypic control for antibodies during positive immunomagnetic separation for SCA-1 and CD117. In order to determine Lin antigens on the cell surface, a set of antibodies - FITC anti-mouse Lineage Coctail with isotype control (Biolegend, USA) was used.

Проведенные исследования позволили установить, что содержание клеток после иммуномагнитной сепарации с иммунофенотипом CD117+ (рис. 1), Sca-1+, Lin- составило 70-93%.The studies carried out made it possible to establish that the content of cells after immunomagnetic separation with immunophenotype CD117 + (Fig. 1), Sca-1 +, Lin- was 70-93%.

Тест колониеобразования. С целью определения функциональной способности клеток, выделенных с помощью позитивной иммуномагнитной сепарации (Sca1+, CD 117+, Lin-) был проведен стандартный тест колониеобразования в метилцеллюлозной среде MethoCult (StemCell Technologies, Канада). Данный тест позволяет установить способность полученных клеток формировать различные типы гемопоэтических колоний. Образование колоний было зарегистрировано под инвертированным микроскопом Unico (США).Colony formation test. In order to determine the functional ability of cells isolated by positive immunomagnetic separation (Sca1 +, CD 117+, Lin-), a standard test for colony formation in methylcellulose MethoCult medium (StemCell Technologies, Canada) was carried out. This test allows to establish the ability of the obtained cells to form various types of hematopoietic colonies. Colony formation was recorded under an inverted microscope Unico (USA).

Культура ММСК. С целью получения первичной культуры ММСК осуществлялся пассаж мононуклеарной фракции клеток, выделенной из ткани плаценты, в специализированной среде для культивирования ММСК в чашки Петри в концентрации 1×106 клеток на 1 см2. Культивирование ММСК проводилось в условиях CO2-инкубатора при температуре 37°С с содержанием углекислого газа 5% и влажностью 90%. Через 24-48 часов инкубации не прикрепленные к дну чашки Петри клетки аспирировали. Среду для культивирования ММСК добавляли к прикрепленным к пластику клеткам. Замена среды проводилась каждые 3-4 сутки до достижения клетками 70-80% конфлюэнтности. При формировании соответствующего монослоя осуществлялся пересев клеток.Culture of MMSK. In order to obtain a primary culture of MMSC, the passage of the mononuclear fraction of cells isolated from the placental tissue was carried out in a specialized medium for the cultivation of MMSC in Petri dishes at a concentration of 1 × 10 6 cells per 1 cm 2 . The cultivation of MMSC was carried out in a CO 2 incubator at a temperature of 37 ° C with a carbon dioxide content of 5% and a humidity of 90%. After 24-48 hours of incubation, cells not attached to the bottom of the Petri dish were aspirated. The MMSC culture medium was added to the cells attached to the plastic. The medium was replaced every 3-4 days until the cells reached 70-80% confluence. When the corresponding monolayer was formed, the cells were subcultured.

При трансплантации лабораторным животным была использована культура ММСК третьего пассажа.For transplantation into laboratory animals, a third passage MMSC culture was used.

Иммуноцитохимия. Для подтверждения принадлежности культуры к ММСК производилась окраска клеток с помощью набора антител Mesenchymal Stem Cell Characterization Kit (Millipore, США), содержащего позитивные (антитела к integrin β1, CD 54, collagentypeI и fibronectin) и негативные маркеры (антитела к CD 14, CD 45).Immunocytochemistry. To confirm that the culture belongs to MMSC, the cells were stained using the Mesenchymal Stem Cell Characterization Kit (Millipore, USA) containing positive (antibodies to integrin β1, CD 54, collagentypeI, and fibronectin) and negative markers (antibodies to CD 14, CD 45 ).

Производилась дифференцировка полученной культуры в адипоцитарном и остеогенном направлениях. Состав среды, индуцирующей дифференцировку: MesenCult™ Osteogenic Stimulatory Supplement («StemCell Technologies», Канада) / MesenCult™ Adipogenic Stimulatory Supplement («StemCell Technologies», Канада) и MesenCult™ MSC Basal Medium (Mouse) («StemCell Technologies», Канада) в соотношении 1:4, 2 ммоль раствора L-глутамина («StemCell Technologies», Канада). Факт остеогенной дифференцировки подтвержден гистохимическим методом регистрации увеличения экспрессии щелочной фосфатазы, а также с помощью окраски vonKossa, выявляющей наличие минерализованного фосфата кальция. Способность клеток дифференцироваться в адипоцитарном направлении подтверждена гистохимическим методом регистрации липидных вакуолей, окрашивающихся красителем Oil Red О (J.J. Minguelletal., 2004).The resulting culture was differentiated in adipocytic and osteogenic directions. Composition of the differentiation-inducing medium: MesenCult ™ Osteogenic Stimulatory Supplement (StemCell Technologies, Canada) / MesenCult ™ Adipogenic Stimulatory Supplement (StemCell Technologies, Canada) and MesenCult ™ MSC Basal Medium (Mouse) (StemCell Technologies, Canada) in a ratio of 1: 4, 2 mmol L-glutamine solution (StemCell Technologies, Canada). The fact of osteogenic differentiation was confirmed by the histochemical method of recording an increase in the expression of alkaline phosphatase, as well as by vonKossa staining, which revealed the presence of mineralized calcium phosphate. The ability of cells to differentiate in the adipocytic direction was confirmed by the histochemical method of registering lipid vacuoles stained with Oil Red O dye (J.J. Minguelletal., 2004).

Подсчет и определение жизнеспособности клеток. Жизнеспособность клеток была определена с помощью суправитальной окраски раствором трипанового синего. Подсчет клеток производился в 5 больших квадратах камеры Горяева (или ≥100 клеток). Жизнеспособность выделенных клеток перед трансплантацией составляла 95-97%.Counting and determination of cell viability. Cell viability was determined by supravital staining with trypan blue solution. Cells were counted in 5 large squares of the Goryaev chamber (or ≥100 cells). The viability of the isolated cells before transplantation was 95-97%.

Производилась оценка биохимических показателей периферической крови на автоматическом биохимическом и иммуноферментном анализаторе Chem Well 2910 (Combi) на 3 и 7 сутки после трансплантации клеток. Изучались следующие биохимические показатели: альбумин, мочевина, глюкоза, общий билирубин, аспартатаминотрансфераза (ACT), аланинаминотрансфераза (АЛТ), щелочная фосфатаза.The biochemical parameters of peripheral blood were assessed on an automatic biochemical and enzyme immunoassay analyzer Chem Well 2910 (Combi) on the 3rd and 7th days after cell transplantation. The following biochemical parameters were studied: albumin, urea, glucose, total bilirubin, aspartate aminotransferase (ACT), alanine aminotransferase (ALT), alkaline phosphatase.

Достоверность отличий в сравниваемых выборках проведено с применением непараметрического (рангового) метода Манна-Уитни. Статистическая обработка данных проведена с помощью программного пакета SPSS Statistics (версия 17,0).The significance of differences in the compared samples was carried out using the nonparametric (rank) Mann-Whitney method. Statistical data processing was carried out using the SPSS Statistics software package (version 17.0).

Сравнительные данные показателей приведены в таблицах 1 и 2.Comparative data of indicators are shown in tables 1 and 2.

Figure 00000001
Figure 00000001

Figure 00000002
Figure 00000002

Figure 00000003
Figure 00000003

Как видно из таблицы 1 и 2, на 3 и 7 сутки по заявляемому способу биохимические показатели периферической крови, отражающие степень выраженности цитолиза гепатоцитов существенно ниже, чем в прототипе. Таким образом, выявлено, что сочетанная аллогенная трансплантация плацентарных ММСК и ГСК (заявляемый способ) влияет на восстановление биохимических показателей в существенно большей степени, чем прототип. Заявляемое изобретение исключает возможность развития эмболии трансплантированными клетками.As can be seen from tables 1 and 2, on days 3 and 7 according to the claimed method, the biochemical parameters of peripheral blood, reflecting the severity of hepatocyte cytolysis, are significantly lower than in the prototype. Thus, it was revealed that the combined allogeneic transplantation of placental MMSC and HSC (the claimed method) affects the recovery of biochemical parameters to a much greater extent than the prototype. The claimed invention excludes the possibility of the development of embolism by transplanted cells.

Claims (1)

Способ предотвращения развития эмболии трансплантированными клетками у лабораторных животных с токсическим гепатитом, заключающийся в том, что осуществляют внутривенную сочетанную аллогенную трансплантацию мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток (ММСК), полученных из хориона плаценты лабораторных животных, и полученных из хориона плаценты лабораторных животных гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) соответственно: ММСК в дозе 2 млн клеток/кг, ГСК в дозе 300 тыс. клеток/кг.A method for preventing the development of embolism with transplanted cells in laboratory animals with toxic hepatitis, which consists in the fact that intravenous combined allogeneic transplantation of multipotent mesenchymal stromal cells (MMSC) obtained from the placenta chorion of laboratory animals and hematopoietic stem cells obtained from the placental chorion of laboratory animals (HSC ), respectively: MMSC at a dose of 2 million cells / kg, HSC at a dose of 300 thousand cells / kg.
RU2020100837A 2020-01-09 2020-01-09 Method for recovering biochemical indices of peripheral blood of laboratory animals with toxic hepatitis RU2739855C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2020100837A RU2739855C1 (en) 2020-01-09 2020-01-09 Method for recovering biochemical indices of peripheral blood of laboratory animals with toxic hepatitis

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2020100837A RU2739855C1 (en) 2020-01-09 2020-01-09 Method for recovering biochemical indices of peripheral blood of laboratory animals with toxic hepatitis

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2739855C1 true RU2739855C1 (en) 2020-12-29

Family

ID=74106522

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2020100837A RU2739855C1 (en) 2020-01-09 2020-01-09 Method for recovering biochemical indices of peripheral blood of laboratory animals with toxic hepatitis

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2739855C1 (en)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2551937C1 (en) * 2013-12-26 2015-06-10 Государственное бюджетное учреждение здравоохранения Свердловской области "Центр организации специализированных видов медицинской помощи "Институт медицинских клеточных технологий" (ГБУЗСО Институт медицинских клеточных технологий) Method of recovering spleen after radiation load
RU2639404C1 (en) * 2016-08-24 2017-12-21 Государственное автономное учреждение здравоохранения Свердловской области "Центр специализированных видов медицинской помощи "Институт медицинских клеточных технологий" Method for spleen lymphoid tissue reconstruction in laboratory animals

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2551937C1 (en) * 2013-12-26 2015-06-10 Государственное бюджетное учреждение здравоохранения Свердловской области "Центр организации специализированных видов медицинской помощи "Институт медицинских клеточных технологий" (ГБУЗСО Институт медицинских клеточных технологий) Method of recovering spleen after radiation load
RU2639404C1 (en) * 2016-08-24 2017-12-21 Государственное автономное учреждение здравоохранения Свердловской области "Центр специализированных видов медицинской помощи "Институт медицинских клеточных технологий" Method for spleen lymphoid tissue reconstruction in laboratory animals

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
A.P. KIYASOV et al. Transplantation of autogenous hematopoietic stem cells in patients with chronic hepatitis / Cell transplantology and tissue engineering, 2008, volume III, N 1, pp. 70-75. *
V .S. RUDAKOV et al. Effect of transplantation of allogeneic multipotent mesenchymal bone marrow stromal cells on liver regeneration after extensive resection in experiment / Genes and Cells, 2018, vol. XIII, N 2, pp. 83-88. *
XIAO-PENG TANG et al. Clinical and experimental study on the therapeutic effect of umbilical cord blood transplantation on severe viral hepatitis / World J Gastroenterol, 2003, vol. 9, N 9, pages 1999-2003. *
В.С. РУДАКОВ и др. Влияние трансплантации аллогенных мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток костного мозга на регенерацию печени после обширной резекции в эксперименте / Гены и Клетки, 2018, т. XIII, N 2, стр. 83-88. XIAO-PENG TANG et al. Clinical and experimental study on therapeutic effect of umbilical cord blood transplantation on severe viral hepatitis / World J Gastroenterol, 2003, vol.9, N 9, pages 1999-2003. А.П. КИЯСОВ и др. Трансплантация аутогенных гемопоэтических стволовых клеток больным хроническими гепатитами / Клеточная трансплантология и тканевая инженерия, 2008, том III, N 1, стр. 70-75. *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Kholodenko et al. Cellular mechanisms of liver regeneration and cell‐based therapies of liver diseases
Stutchfield et al. Prospects for stem cell transplantation in the treatment of hepatic disease
US8455250B2 (en) Co-culture of placental stem cells and stem cells from a second source
US20080038231A1 (en) Processing procedure for peripheral blood stem cells
Mayani et al. Biology of human hematopoietic stem and progenitor cells present in circulation
Francese et al. Immunological and regenerative properties of cord blood stem cells
Dollé et al. The quest for liver progenitor cells: a practical point of view
Simovic Markovic et al. Pharmacological inhibition of Gal‐3 in mesenchymal stem cells enhances their capacity to promote alternative activation of macrophages in dextran sulphate sodium‐induced colitis
Mahony et al. How HSCs colonize and expand in the fetal niche of the vertebrate embryo: an evolutionary perspective
CN106854638B (en) Method for inducing mesenchymal stem cells to differentiate into islet-like cells
Tavassoli Handbook of the hemopoietic microenvironment
Shukai et al. Allogeneic compact bone-derived mesenchymal stem cell transplantation increases survival of mice exposed to lethal total body irradiation: a potential immunological mechanism
CN102028970A (en) Stem cell preparation for treating cirrhosis
JPH08511935A (en) Selective cell growth
Siapati et al. Liver regeneration by hematopoietic stem cells: have we reached the end of the road?
TW201000110A (en) Method of differentiating mammalian progenitor cells into insulin producing pancreatic islet cells
RU2739855C1 (en) Method for recovering biochemical indices of peripheral blood of laboratory animals with toxic hepatitis
US9650604B2 (en) Equine amniotic membrane-derived mesenchymal stem cells
RU2729931C1 (en) Method for recovering biochemical parameters of peripheral blood of laboratory animals with hepatic cirrhosis
RU2639404C1 (en) Method for spleen lymphoid tissue reconstruction in laboratory animals
Allen et al. Stem cells for the treatment of liver disease
KR20040068135A (en) Stem cells originating in salivary duet epithelial cells and use thereof
Aziz et al. Reversal of hepatic fibrosis by human CD34+ stem/progenitor cell transplantation in rats
Ookura et al. Adipocyte differentiation of human marrow mesenchymal stem cells reduces the supporting capacity for hematopoietic progenitors but not for severe combined immunodeficiency repopulating cells
CN101506353A (en) Processing procedure for peripheral blood stem cells