RU2738735C2 - Recombinant vector for synthesis in plant cells of receptor kinase k1, controlling symbiosis development with nodule bacteria, and vector replication strain - Google Patents
Recombinant vector for synthesis in plant cells of receptor kinase k1, controlling symbiosis development with nodule bacteria, and vector replication strain Download PDFInfo
- Publication number
- RU2738735C2 RU2738735C2 RU2018143939A RU2018143939A RU2738735C2 RU 2738735 C2 RU2738735 C2 RU 2738735C2 RU 2018143939 A RU2018143939 A RU 2018143939A RU 2018143939 A RU2018143939 A RU 2018143939A RU 2738735 C2 RU2738735 C2 RU 2738735C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- symbiosis
- vector
- sequence
- 3xflag
- development
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области сельскохозяйственной микробиологии, а именно к биопрепаратам, направленным на совершенствование технологии выращивания бобовых растений.The invention relates to the field of agricultural microbiology, namely to biological products aimed at improving the technology of growing leguminous plants.
Известно, что выращивание бобовых растений во многом определяется эффективностью их взаимодействия с клубеньковыми бактериями ризобиями. Для повышения эффективности взаимодействия создаются новые штаммы бактерий, совершенствуются способы введения в растения инокулянтов (RU 2654578, 2018; RU 2653751, 2018; RU 2561528, 2015; RU 1529487, 1994; https://agroserver.ru/b/inokulyant-dlya-gorokha-411199.htm).It is known that the cultivation of leguminous plants is largely determined by the efficiency of their interaction with the rhizobia nodule bacteria. To increase the efficiency of interaction, new strains of bacteria are being created, methods of introducing inoculants into plants are being improved (RU 2654578, 2018; RU 2653751, 2018; RU 2561528, 2015; RU 1529487, 1994; https://agroserver.ru/b/inokulyant-dlya- gorokha-411199.htm).
Рецепторная киназа K1 - LysM-содержащий рецептор, контролирующий формирование симбиоза с клубеньковыми бактериями ризобиями и выход бактерий из инфекционных нитей в процессе развития симбиоза. K1 управляет этим процессом через регуляторы везикулярного транспорта семейства VAMP721. Кроме того, K1 может регулировать развитие защитных реакций при выходе бактерий. Нарушение функции K1 снижает устойчивость растений к патогенам. K1 может играть ключевую роль в формировании симбиотических структур при симбиозе и регулировать восприимчивость к заражению.Receptor kinase K1 - LysM-containing receptor that controls the formation of symbiosis with rhizobial nodule bacteria and the release of bacteria from infectious filaments during the development of symbiosis. K1 controls this process through the vesicular transport regulators of the VAMP721 family. In addition, K1 can regulate the development of defense responses when bacteria exit. Dysfunction of K1 reduces plant resistance to pathogens. K1 may play a key role in the formation of symbiotic structures during symbiosis and regulate susceptibility to infection.
Другим перспективным направлением является создание генно-инженерных конструкций, позволяющих воздействовать на механизм взаимодействия растение-микроорганизм. В частности, в развитии бобово-ризобиального симбиоза основную роль играют Nod-факторы, выделяемые ризобиями, которые взаимодействуют с соответствующими рецепторами. Для гороха вероятными кандидатами на роль рецепторов являются LysM-содержащие рецепторные киназы Sym10, Sym37 и K1. При этом особое значение имеет киназа K1, необходимая для инициации симбиоза и влияющая на защитные свойства растения.Another promising direction is the creation of genetically engineered structures that allow influencing the mechanism of plant-microorganism interaction. In particular, Nod factors secreted by rhizobia, which interact with the corresponding receptors, play the main role in the development of legume-rhizobial symbiosis. For peas, LysM-containing receptor kinases Sym10, Sym37, and K1 are likely candidates for the role of receptors. In this case, kinase K1 is of particular importance, it is necessary for the initiation of symbiosis and affects the protective properties of the plant.
Бобовые растения способны вступать во взаимодействие как с полезными микроорганизмами - ризобиальными бактериями и грибами арбускулярной микоризы, а также эффективно различать патогенные микроорганизмы. При этом начальные этапы взаимодействия бобовых растений с симбиотическими и патогенными микроорганизмами имеют много общего. Так, и при патогенезе, и при развитии симбиоза происходит активация защитных систем растений. Однако при симбиозе эта активация носит кратковременный характер, что позволяет бактериям проникать в клетки растений. У растений в узнавание таких сигнальных молекул вовлечены белки - рецептор-подобные киназы, содержащие LysM домен во внеклеточном участке (LysM-РПК). У объекта наших исследований - гороха посевного (Pisum sativum L.), несколько LysM-РПК Sym10, Sym37, K1 контролируют процесс узнавания растением сигнальных молекул Nod-факторов. Кроме того, у гороха LysM-содержащая рецепторная киназа K1 контролирует выход бактерий из инфекционных нитей при симбиозе с ризобиями. K1 управляет этим процессом через регуляторы везикулярного транспорта семейства VAMP721. Кроме того, K1 может регулировать развитие защитных реакций при выходе бактерий из инфекционных нитей. Нарушение функции K1 снижает устойчивость растений к патогенам. K1 может играть ключевую роль в формировании симбиотических структур при симбиозе и регулировать восприимчивость к заражению.Leguminous plants are able to interact with both beneficial microorganisms - rhizobial bacteria and fungi of arbuscular mycorrhiza, and also effectively distinguish pathogenic microorganisms. At the same time, the initial stages of interaction of leguminous plants with symbiotic and pathogenic microorganisms have much in common. Thus, both during pathogenesis and during the development of symbiosis, the activation of plant defense systems occurs. However, in symbiosis, this activation is short-lived, which allows bacteria to enter plant cells. In plants, the recognition of such signaling molecules involves proteins - receptor-like kinases containing the LysM domain in the extracellular region (LysM-RPK). In the object of our research, the common pea (Pisum sativum L.), several LysM-PKK Sym10, Sym37, K1 control the process of plant recognition of signaling molecules Nod-factors. In addition, in peas, LysM-containing receptor kinase K1 controls the release of bacteria from infectious filaments during symbiosis with rhizobia. K1 controls this process through the vesicular transport regulators of the VAMP721 family. In addition, K1 can regulate the development of defense reactions when bacteria exit from infection threads. Dysfunction of K1 reduces plant resistance to pathogens. K1 may play a key role in the formation of symbiotic structures during symbiosis and regulate susceptibility to infection.
В этой связи встает вопрос о разработке технологии, обеспечивающей эффективное взаимодействие растений с ризобиальными бактериями посредством рецепторной киназы K1. Предлагалось для клонирования полноразмерного гена K1 без стоп-кодона (1860 пар оснований, п.о.) использовать две пары праймеров для амплификации на матрице кДНК, полученной на основе суммарной РНК из клубеньков гороха сорта Finale (14 день после инокуляции). Для клонирования полноразмерного гена K1 без стоп-кодона использовали вектор pBIN19. Клонирование осуществляли под промотором CaMV35S вируса табачной мозаики. Полноразмерный ген K1 без стоп-кодона был слит в одну рамку считывания с последовательностью 3xFLAG. В качестве терминатора был использован терминатор нопалинсинтазы Tnos. Вставка гена полноразмерного K1 была проверена путем секвенирования. Проверенные конструкции переносили в штамм.In this regard, the question arises of the development of a technology that ensures effective interaction of plants with rhizobial bacteria through the K1 receptor kinase. It was proposed to clone the full-length K1 gene without a stop codon (1860 base pairs, bp) to use two pairs of primers for amplification on a cDNA template obtained on the basis of total RNA from nodules of pea cultivar Finale (day 14 after inoculation). The pBIN19 vector was used to clone the full-length K1 gene without a stop codon. Cloning was carried out under the CaMV35S promoter of the tobacco mosaic virus. The full-length K1 gene without a stop codon was fused in frame with the 3xFLAG sequence. The Tnos nopaline synthase terminator was used as a terminator. The insert of the full-length K1 gene was verified by sequencing. The tested constructs were transferred to the strain.
Наиболее близкими по технической сущности к заявляемому изобретению являются исследования, описанные в статье «Изучение биохимической функции рецептор-подобных киназ гороха SYM10, SYM37 И K1, необходимых для развития бобово-ризобиального симбиоза» (Экологическая генетика. - 2017. - Т. 15. - №4. - С. 4-12. 10.1781б/ееоееп1544-12), в рамках которой в бактериях E.coli С41 были созданы генетические конструкции в векторе pRSETa для экспрессии клонированных генов под контролем эффективного промотора Т7. В ходе проведенных авторами исследований были разработаны подходы для синтеза K1 в растворимом состоянии в бактериях Е. coli. Амплификацию фрагмента, кодирующего внеклеточный домен рецептора, проводили на матрице кДНК с помощью специфичных праймеров и высокоточной Phusion-полимеразы. Синтез кДНК был осуществлен на матрице РНК, выделенной из корней или клубеньков гороха сорта Finale с помощью обратной транскриптазы RevertAid Н- (Thermo Scientific, США) и олиго(дТ)праймеров (Sileks, Россия).The closest in technical essence to the claimed invention are the studies described in the article "Study of the biochemical function of receptor-like kinases in pea SYM10, SYM37 and K1, necessary for the development of legume-rhizobial symbiosis" (Ecological genetics. - 2017. - T. 15. - No. 4. - S. 4-12. 10.1781b / eeoeep1544-12), in the framework of which in bacteria E. coli C41 genetic constructs were created in the pRSETa vector for the expression of cloned genes under the control of an effective promoter T7. In the course of the research carried out by the authors, approaches were developed for the synthesis of K1 in a soluble state in E. coli bacteria. Amplification of the fragment encoding the extracellular domain of the receptor was carried out on a cDNA template using specific primers and high-precision Phusion polymerase. The synthesis of cDNA was carried out on an RNA template isolated from the roots or nodules of peas cv. Finale using reverse transcriptase RevertAid H- (Thermo Scientific, USA) and oligo (dT) primers (Sileks, Russia).
Для амплификации применяли следующие праймеры:The following primers were used for amplification:
Для наработки белков-рецепторов рецепторных киназ Sym10, Sym37 и K1 последовательности, кодирующие внеклеточный домен K1 (а также LysM-РПК, Sym10, Sym 37), были клонированы в векторе pRSETa по сайтам BamHl и EcoRl. (Экологическая генетика. - 2017. - Т. 15. - №4. - С. 4-12. 10.1781б/ееоееп1544-12). Затем полученные конструкции использовали для синтеза внеклеточных доменов рецепторов в штамме Е. coli С41 (мутантный штамм, полученный на основе BL21 (DE3)).To generate receptor kinase proteins Sym10, Sym37, and K1, the sequences encoding the extracellular domain of K1 (as well as LysM-PKK, Sym10, Sym 37) were cloned into the pRSETa vector at the BamHl and EcoRl sites. (Ecological genetics. - 2017. - T. 15. - No. 4. - S. 4-12. 10.1781b / eoeep1544-12). The resulting constructs were then used to synthesize the extracellular domains of receptors in E. coli C41 (mutant strain derived from BL21 (DE3)).
Полученные конструкции были названы pRSETa/Sym10-ECD, pRSETa/ Sym37-ECD и pRSETa/K1-ECD, а образующиеся белки - Sym10-ECD, Sym37-ECD и K1-ECD соответственно.The resulting constructs were named pRSETa / Sym10-ECD, pRSETa / Sym37-ECD, and pRSETa / K1-ECD, and the resulting proteins were named Sym10-ECD, Sym37-ECD, and K1-ECD, respectively.
Оценку связывающей способности внеклеточных доменов рецепторов с Nod-факторами проводили на примере K1-ECD с помощью метода поверхностного плазмонного резонанса на биосенсоре Proteon ХРР36, позволяющего работать с лигандом без меток. С этой целью белок-рецептор K1-ECD, содержащий HIS-метку, был иммобилизован на чипе HTG, а лиганд Nod-фактор использовали в поступающем растворе (10-2500 нМ). Уровень иммобилизации белка составлял в среднем 2500-3000 RU. Анализ связывающей способности K1-ECD с Nod-факторами с помощью метода поверхностного плазмонного резонанса, что позволило выявить константу аффинности Kd=8,64 × 10-6±0,51 М, что было ниже, чем мы ожидали, на основании того, что реакция растения на Nod-факторы проявляется в диапазоне концентраций 10-12-10-8 М. Таким образом, для очищенного внеклеточного домена рецептора K1 гороха, синтезированного в бактериях, была показана способность связывать Nod-факторы, но при этом аффинность была невысокой. Таким образом, недостатком ближайшего аналога является низкая связывающая способность синтезируемого внеклеточного домена рецептора с лигандом, что не позволяет обеспечить достаточно эффективное взаимодействие между растением и ризобием.The binding capacity of the extracellular domains of receptors with Nod factors was assessed using the example of K1-ECD using the surface plasmon resonance method on the Proteon XPP36 biosensor, which allows working with the ligand without labels. For this purpose, the K1-ECD receptor protein containing the HIS tag was immobilized on the HTG chip, and the Nod factor ligand was used in the incoming solution (10-2500 nM). The level of protein immobilization averaged 2500-3000 RU. Analysis of the binding capacity of K1-ECD with Nod factors using the method of surface plasmon resonance, which allowed us to reveal the affinity constant Kd = 8.64 × 10 -6 ± 0.51 M, which was lower than we expected, based on the fact that the plant response to Nod factors is manifested in the concentration range of 10 –12 –10 –8 M. Thus, for the purified extracellular domain of the pea K1 receptor synthesized in bacteria, the ability to bind Nod factors was shown, but the affinity was low. Thus, the disadvantage of the closest analog is the low binding capacity of the synthesized extracellular domain of the receptor with the ligand, which does not allow for a sufficiently effective interaction between the plant and rhizobia.
Технической задачей являлось создание рекомбинантного вектора для синтеза в клетках растений рецепторной киназы K1, контролирующей развитие симбиоза с клубеньковыми бактериями, и штамм для репликации вектора.The technical task was to create a recombinant vector for the synthesis of receptor kinase K1 in plant cells, which controls the development of symbiosis with nodule bacteria, and a strain for vector replication.
Технический результат достигался за счет создания рекомбинантного вектора pBIN-K1-3xFLAG для синтеза в клетках растений рецепторной киназы K1 и штамма клеток Escherichia coli DH5α (pBIN-K1-3xFLAG), депонированного в Ведомственной коллекции полезных микроорганизмов сельскохозяйственного назначения (RCAM) 05.12.2018 г. под номером RCAM05023. Созданный рекомбинантный вектор pBIN-K1-3xFLAG включает в себя последовательность вектора pBIN19; LR-последовательность для рекомбинации Т-ДНК в растения; р358-последовательность промотора CCaMV35S; K1-последовательность ДНК, кодирующая ген K1; FLAG-последовательность ДНК, кодирующая 3xFLAG (последовательность аминокислот, позволяющая выявлять синтезируемый белок с помощью антител анти-FLAG); Tnos -последовательность ДНК, являющаяся терминатором Tnos; HindIII, PstIи т.д. - сайты для рестрикционных ферментов, причем последовательность ДНК, кодирующая K1 размещена между последовательностями p35S и FLAG.The technical result was achieved by creating a recombinant vector pBIN-K1-3xFLAG for the synthesis in plant cells of receptor kinase K1 and a cell strain of Escherichia coli DH5α (pBIN-K1-3xFLAG), deposited in the Departmental collection of useful microorganisms for agricultural purposes (RCAM) 05.12.2018 g . under the number RCAM05023. The generated recombinant vector pBIN-K1-3xFLAG includes the sequence of the vector pBIN19; LR sequence for recombination of T-DNA into plants; p358 sequence of the CCaMV35S promoter; K1 DNA sequence encoding the K1 gene; FLAG DNA sequence encoding 3xFLAG (amino acid sequence that allows detecting the synthesized protein using anti-FLAG antibodies); Tnos is a DNA sequence that is a Tnos terminator; HindIII, PstI, etc. - sites for restriction enzymes, with the DNA sequence encoding K1 located between the sequences p35S and FLAG.
Для получения рекомбинантного вектора pBIN-K1-3xFLAG кодирующая полноразмерная последовательность гена K1 гороха Pisum sativum L. (без интронов) была амплифицирована на матрице кодирующей ДНК (кДНК), полученной на основе суммарной РНК из клубеньков гороха сорта Finale. Были использованы следующие праймеры для амплификации:To obtain a recombinant vector pBIN-K1-3xFLAG, the coding full-length sequence of the K1 gene of the pea Pisum sativum L. (without introns) was amplified on a coding DNA template (cDNA) obtained on the basis of total RNA from nodules of pea cv. Finale. The following amplification primers were used:
Для клонирования полноразмерного гена K1 без стоп-кодона (1860 пар оснований, п.о.) использовали вектор pBIN19. Клонирование осуществляли под промотором CaMV35S вируса табачной мозаики. Полноразмерный ген K1 без стоп-кодона был слит в одну рамку считывания с последовательностью 3xFLAG. В качестве терминатора был использован терминатор нопалинсинтазы Tnos.The pBIN19 vector was used to clone the full-length K1 gene without a stop codon (1860 base pairs, bp). Cloning was carried out under the CaMV35S promoter of the tobacco mosaic virus. The full-length K1 gene without a stop codon was fused in frame with the 3xFLAG sequence. The Tnos nopaline synthase terminator was used as a terminator.
3xFLAG - короткая последовательность аминокислот, позволяющая после синтеза белка в клетках растений проводить очистку белка на носителе с антителами к 3xFLAG и детектировать рекомбинантный белок K1.3xFLAG is a short amino acid sequence that allows, after protein synthesis in plant cells, to purify the protein on a carrier with antibodies to 3xFLAG and to detect the recombinant K1 protein.
3xFLAG в отличие от флуоресцентных меток YFP и RFP имеет ряд преимуществ, в частности, состоит из 22 аминокислот, обладает гидрофильными свойствами, а значит, не влияет на растворимость белка. Небольшие размеры последовательности 3xFLAG исключают возможность изменения свойств белка и закрытия его эпитопов для детекции с помощью антител. Наличие сайта для расщепления ферментом энтерокиназой позволяют получить рекомбинантный белок практически неотличимый по свойствам от нативного. Рекомбинантный вектор pBIN-K1-3xFLAG позволяет произвести синтез белка K1 в гетерологичной системе, например, в листьях табака, а наличие последовательности 3xFLAG позволяет детектировать K1 с помощью Вестерн-блот гибридизации с использованием aHTH-3xFLAG антител.3xFLAG, unlike YFP and RFP fluorescent labels, has a number of advantages, in particular, it consists of 22 amino acids, has hydrophilic properties, and therefore does not affect protein solubility. The small size of the 3xFLAG sequence excludes the possibility of changing the properties of the protein and closing its epitopes for detection using antibodies. The presence of a site for cleavage by the enzyme enterokinase makes it possible to obtain a recombinant protein practically indistinguishable in properties from a native one. The recombinant vector pBIN-K1-3xFLAG allows the synthesis of the K1 protein in a heterologous system, for example, in tobacco leaves, and the presence of the 3xFLAG sequence allows K1 to be detected by Western blot hybridization using aHTH-3xFLAG antibodies.
Штамм RCAM05023 характеризуется следующими признаками:Strain RCAM05023 is characterized by the following features:
1. Наименование штамма: штамм Escherichia coli DH5α, содержащий рекомбинантный вектор pBIN-K1-3xFLAG.1. Strain name: Escherichia coli DH5α strain containing the recombinant vector pBIN-K1-3xFLAG.
2. Внутренний номер штамма в коллекции - 2-148.2. The internal number of the strain in the collection is 2-148.
3. Основания для депонирования: штамм содержит рекомбинантный вектор pBIN-K1-3xFLAG, несущий последовательность кДНК гена K1. Ген K1 кодирует LysM-содержащую рецепторную киназу, контролирующую развитие симбиоза с клубеньковыми бактериями. Последовательность гена K1 слита в одну рамку считывания с последовательностью, кодирующей маркерный белок 3xFLAG.3. Reasons for deposition: the strain contains the recombinant vector pBIN-K1-3xFLAG carrying the cDNA sequence of the K1 gene. The K1 gene encodes a LysM-containing receptor kinase that controls the development of symbiosis with nodule bacteria. The K1 gene sequence is fused into one reading frame with the sequence coding for the 3xFLAG marker protein.
4. Культурально-морфологические особенности штамма: мелкие грамотрицательные палочки.4. Cultural and morphological characteristics of the strain: small gram-negative bacilli.
5. Физиолого-биохимические свойства штамма: температурный оптимум для роста - 37°С, рН 7.2-7.4, факультативный анаэроб, к составу питательной среды неприхотлив.5. Physiological and biochemical properties of the strain: optimum temperature for growth - 37 ° C, pH 7.2-7.4, facultative anaerobic, unpretentious to the composition of the nutrient medium.
6. Условия культивирования: штамм культивируется сутки в среде LB с канамицином в концентрации 100 мкг/мл при температуре +37°С. При периодическом пересеве срок хранения - 2 недели.6. Cultivation conditions: the strain is cultivated for a day in LB medium with kanamycin at a concentration of 100 μg / ml at a temperature of + 37 ° C. With periodic reseeding, the shelf life is 2 weeks.
7. Рекомендуемые способы и условия хранения: при криоконсервации культура выращивается сутки в жидкой среде LB с антибиотиком. Замораживается в 25% растворе глицерина в жидком азоте в течение 30 секунд и хранится на -80°С. Срок хранения не ограничен.7. Recommended methods and conditions of storage: during cryopreservation, the culture is grown for 24 hours in a liquid LB medium with an antibiotic. It is frozen in a 25% solution of glycerin in liquid nitrogen for 30 seconds and stored at -80 ° C. The shelf life is not limited.
Сущность изобретения иллюстрируется следующими последовательностями и графическими материалами.The essence of the invention is illustrated by the following sequences and graphics.
Список последовательностей включает в себя перечень нуклеотидов основных фрагментов, образующих рекомбинантный векторThe sequence listing includes a list of nucleotides of the main fragments that make up the recombinant vector
На Рис.1 показана схема экспрессионного вектора, использованного для создания конструкции pBIN-K1-3xFLAG и получения штамма RCAM05023.Figure 1 shows a schematic of the expression vector used to create the pBIN-K1-3xFLAG construct and obtain the RCAM05023 strain.
При этом используются следующие обозначения: (1 - 9533) - последовательность вектора pBIN19; (6113-6137) LR - последовательность для рекомбинации Т-ДНК в растения (левый повтор); (6138 - 9533) - последовательность вектора pBIN19; (9534-10200) p35S - последовательность промотора CCaMV35S; (10201-12060) K1-последовательность ДНК, кодирующая ген K1; (12061-12144) FLAG- последовательность ДНК, кодирующая 3xFLAG (последовательность аминокиcлот, позволяющая выявлять синтезируемый белок с помощью антител анти-FLAG); (12145- 12436) Tnos-последовательность ДНК, являющаяся терминатором Tnos (12437 - 152750) последовательность вектора pBIN19; HindIII, PstI и т.д. - сайты для рестрикционных ферментов.The following designations are used: (1 - 9533) - sequence of vector pBIN19; (6113-6137) LR - sequence for recombination of T-DNA into plants (left repeat); (6138 - 9533) - sequence of the vector pBIN19; (9534-10200) p35S - CCaMV35S promoter sequence; (10201-12060) K1 DNA sequence encoding the K1 gene; (12061-12144) FLAG- DNA sequence encoding 3xFLAG (amino acid sequence that allows to detect the synthesized protein using anti-FLAG antibodies); (12145-12436) Tnos DNA sequence, which is a Tnos terminator (12437-152750) sequence of the vector pBIN19; HindIII, PstI, etc. - sites for restriction enzymes.
Claims (2)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018143939A RU2738735C2 (en) | 2018-12-12 | 2018-12-12 | Recombinant vector for synthesis in plant cells of receptor kinase k1, controlling symbiosis development with nodule bacteria, and vector replication strain |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018143939A RU2738735C2 (en) | 2018-12-12 | 2018-12-12 | Recombinant vector for synthesis in plant cells of receptor kinase k1, controlling symbiosis development with nodule bacteria, and vector replication strain |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2018143939A RU2018143939A (en) | 2020-06-15 |
| RU2018143939A3 RU2018143939A3 (en) | 2020-10-16 |
| RU2738735C2 true RU2738735C2 (en) | 2020-12-16 |
Family
ID=71095382
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2018143939A RU2738735C2 (en) | 2018-12-12 | 2018-12-12 | Recombinant vector for synthesis in plant cells of receptor kinase k1, controlling symbiosis development with nodule bacteria, and vector replication strain |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2738735C2 (en) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2654578C1 (en) * | 2017-01-20 | 2018-05-21 | ООО "2Д-Фарма" | Rhizobium leguminosarum ccm 32 (rncim b-12661) strain - risobial component of microbic biologic drug for presowing treatment of pea |
-
2018
- 2018-12-12 RU RU2018143939A patent/RU2738735C2/en active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2654578C1 (en) * | 2017-01-20 | 2018-05-21 | ООО "2Д-Фарма" | Rhizobium leguminosarum ccm 32 (rncim b-12661) strain - risobial component of microbic biologic drug for presowing treatment of pea |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ДОЛГИХ Е.А. и др. Изучение биохимической функции рецептор-подобных киназ гороха SYM10, SYM37 И K1, необходимых для развития бобово-ризобиального симбиоза, Экологическая генетика. 2017. Т. 15, номер 4 стр 4-12. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2018143939A (en) | 2020-06-15 |
| RU2018143939A3 (en) | 2020-10-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU733792B2 (en) | RNA binding protein and binding site useful for expression of recombinant molecules | |
| CN110845622B (en) | Preparation of fusion protein with deletion of different structural domains and application of fusion protein in improvement of protein synthesis | |
| CN113061171B (en) | Rice blast resistant protein and gene, isolated nucleic acid and application thereof | |
| CN113604450B (en) | KOD DNA polymerase mutant and preparation method and application thereof | |
| KR101554762B1 (en) | Method and gene for imparting or enhancing nonspecific adherence and/or aggregability to microorganism | |
| Nissan et al. | Analysis of promoters recognized by HrpL, an alternative σ-factor protein from Pantoea agglomerans pv. gypsophilae | |
| CN108250279A (en) | Applications of the heat shock protein Hsp17.6CII in plant salt tolerance alkali is regulated and controled | |
| CN102234322B (en) | Protein GmNF-YA1 related with stress tolerance of plants, and coding gene and application thereof | |
| RU2738735C2 (en) | Recombinant vector for synthesis in plant cells of receptor kinase k1, controlling symbiosis development with nodule bacteria, and vector replication strain | |
| CN114107327B (en) | Trichoderma viride high-temperature stress response key enzyme gene TvHSP70, recombinant expression vector, engineering bacteria and application thereof | |
| CN102234321B (en) | Plant stress-tolerant associated protein GmNF-YB1 and encoding gene and application thereof | |
| CN109055416A (en) | A kind of preparation method of soluble recombinant protein | |
| CN112481278B (en) | Biosensor based on AIP induction and application thereof | |
| CN103304651B (en) | Plant stress tolerance related protein TaDREB (triticum aestivum L. dehydration responsive element binding) 8 and coding gene as well as application thereof | |
| CN106520721A (en) | High-glyphosate-resistance EPSP synthase and application of encoding gene thereof | |
| CN109880840B (en) | In vivo biotinylation labeling system for recombinant protein escherichia coli | |
| CN103305526B (en) | Application of protein TaDREB (triticum aestivum L. dehydration responsive element binding) 6 to preparation of high temperature resistant transgenic plant | |
| CN105349536A (en) | Specific PCR primer for pathogenesis-related protein PR10 gene of tobacco and application thereof | |
| CN113087807B (en) | Shiga toxin B subunit recombinant protein-based probe for detecting carbohydrate antigen and preparation method thereof | |
| KR101250063B1 (en) | Pepper DC1 domain-containing CCCH-type zinc finger gene 1 and screening method of plant disease resistance using the same | |
| KR101438685B1 (en) | Disease resistance and heat shock-related gene CaHSP70 and transgenic plants using the same | |
| CN108841850A (en) | For the carrier and method in riemerella anatipestifer genome insertion foreign gene | |
| CN102127159B (en) | Plant light energy conversion efficiency associated protein and encoding gene and application thereof | |
| CN103360481B (en) | Plant stress tolerance related protein TaDREB4A as well as coding gene and application thereof | |
| JP2017149703A (en) | Adhesive fiber and use thereof |