RU2738308C1 - Method for creating xenograft of cancer of esophagus of intrathoracic localization on immune deficient mice - Google Patents

Method for creating xenograft of cancer of esophagus of intrathoracic localization on immune deficient mice Download PDF

Info

Publication number
RU2738308C1
RU2738308C1 RU2020119699A RU2020119699A RU2738308C1 RU 2738308 C1 RU2738308 C1 RU 2738308C1 RU 2020119699 A RU2020119699 A RU 2020119699A RU 2020119699 A RU2020119699 A RU 2020119699A RU 2738308 C1 RU2738308 C1 RU 2738308C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
esophagus
stomach
needle
thoracic
cancer
Prior art date
Application number
RU2020119699A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Алексей Юрьевич Максимов
Сергей Олегович Кит
Анна Сергеевна Гончарова
Екатерина Алексеевна Лукбанова
Евгений Николаевич Колесников
Мария Вадимовна Миндарь
Дарья Владиславовна Ходакова
Анастасия Владимировна Волкова
Екатерина Владиславовна Заикина
Татьяна Пантелеевна Протасова
Сергей Юрьевич Ткачев
Original Assignee
федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр онкологии" Министерства здравоохранения Российской Федерации
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр онкологии" Министерства здравоохранения Российской Федерации filed Critical федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр онкологии" Министерства здравоохранения Российской Федерации
Priority to RU2020119699A priority Critical patent/RU2738308C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2738308C1 publication Critical patent/RU2738308C1/en

Links

Images

Classifications

    • GPHYSICS
    • G09EDUCATION; CRYPTOGRAPHY; DISPLAY; ADVERTISING; SEALS
    • G09BEDUCATIONAL OR DEMONSTRATION APPLIANCES; APPLIANCES FOR TEACHING, OR COMMUNICATING WITH, THE BLIND, DEAF OR MUTE; MODELS; PLANETARIA; GLOBES; MAPS; DIAGRAMS
    • G09B23/00Models for scientific, medical, or mathematical purposes, e.g. full-sized devices for demonstration purposes
    • G09B23/28Models for scientific, medical, or mathematical purposes, e.g. full-sized devices for demonstration purposes for medicine

Landscapes

  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Computational Mathematics (AREA)
  • Mathematical Analysis (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Algebra (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Mathematical Optimization (AREA)
  • Mathematical Physics (AREA)
  • Pure & Applied Mathematics (AREA)
  • Business, Economics & Management (AREA)
  • Educational Administration (AREA)
  • Educational Technology (AREA)
  • Theoretical Computer Science (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

FIELD: medicine.
SUBSTANCE: invention refers to medicine, namely to oncology, and can be used for creation of orthotopic xenograft of esophagus cancer of intrathyrus localization on immunodeficient mice. Method involves accessing the abdominal cavity, excreting the stomach and esophagus into the surgical wound, injecting a suspension of oesophageal cell culture into the muscular layer of the esophagus. Skin, muscular layer and peritoneum are incised perpendicular to animal body axis, 2 mm below edge of costal arch, starting incision from point of intersection of edge of thirteenth costal arch with posterior axillary line, ending incision at 5 mm from mouse vertebral column, patient's stomach is taken out into a postoperative wound, stomach is held with an anatomic tweezers. Inserting an injection needle into the muscular layer of the esophagus at distance of 2 mm from the diaphragm at angle of 15 degrees parallel to the axis of the esophagus with an upward cut, further, a needle is drawn in the muscular layer of the esophagus through a diaphragmatic opening into the thoracic part of esophagus 3 mm above the diaphragmatic opening, the muscular layer of the esophagus is infiltrated by tumor cells, the needle is removed, and the abdominal cavity is closed.
EFFECT: use of the invention provides low-traumatic access to the thoracic esophagus of an animal in orthotopic transplantation of human oesophageal tumor cell culture in the thoracic esophagus of immunodeficiency mice to obtain tumor models used in preclinical studies of various versions of therapy of thoracic esophagus cancer.
1 cl, 1 ex, 3 dwg

Description

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной онкологии, и касается способа создания ортотопического ксенографта рака пищевода внутригрудной локализации на иммунодефицитных мышах, позволяющего получить наиболее адекватную модель онкогенеза рака пищевода в грудном отделе пищевода.The invention relates to medicine, namely to experimental oncology, and concerns a method for creating an orthotopic xenograft of esophageal cancer of intrathoracic localization in immunodeficient mice, which allows obtaining the most adequate model of oncogenesis of esophageal cancer in the thoracic esophagus.

На сегодняшний день рак пищевода занимает 9 место по распространенности в мире (см. Bray F., Ferlay J., Soerjomataram I. et al. Global cancer statistics 2018: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries // CA: a cancer journal for clinicians, 2018, 68(6), P. 394-424). Индекс агрессивности данного заболевания (соотношение умерших к количеству вновь заболевших) крайне высок и составляет 0,87 (см. Torre L.A., Bray F., Siegel R.L. et al. Global cancer statistics, 2012 // CA: a cancer journal for clinicians, 2015, 65(2), P. 87-108). Несмотря на разработку новых методов диагностики, у 67% пациентов данная патология выявляется уже на III-IV стадиях опухолевого процесса (см. Состояние онкологической помощи населению в 2017 году // под ред. Каприна А.Д., Старинского В.В., Петровой Г.В. - М.: МНИОИ им. П.А. Герцена - филиал ФГБУ «НМИЦ радиологии» Минздрава России, 2018 г. - 236 с.). По этим причинам рак пищевода находится на 6-м месте по уровню смертности среди онкологических заболеваний (см. Bray F., Ferlay J., Soerjomataram I. et al. Global cancer statistics 2018: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries // CA: a cancer journal for clinicians, 2018, 68(6), P. 394-424).Today, esophageal cancer is the 9th most common cancer in the world (see Bray F., Ferlay J., Soerjomataram I. et al. Global cancer statistics 2018: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries // CA : a cancer journal for clinicians, 2018, 68 (6), P. 394-424). The index of aggressiveness of this disease (the ratio of deaths to the number of new cases) is extremely high and is 0.87 (see Torre LA, Bray F., Siegel RL et al. Global cancer statistics, 2012 // CA: a cancer journal for clinicians, 2015 , 65 (2), P. 87-108). Despite the development of new diagnostic methods, in 67% of patients this pathology is detected already at the III-IV stages of the tumor process (see State of cancer care to the population in 2017 // ed.Kaprin A.D., Starinskiy V.V., Petrova G.V. - M .: P.A.Herzen Moscow Oncological Institute - branch of the Federal State Budgetary Institution "National Medical Research Center of Radiology" of the Ministry of Health of Russia, 2018 - 236 p.). For these reasons, esophageal cancer is the 6th most common cancer mortality rate (see Bray F., Ferlay J., Soerjomataram I. et al. Global cancer statistics 2018: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries // CA: a cancer journal for clinicians, 2018, 68 (6), P. 394-424).

Лечение рака пищевода производится с помощью химиотерапевтического, лучевого, хирургического или сочетанных методов. Химиолучевая терапия является малоэффективной при лечении даже I-II стадий из-за высокой резистентности опухоли (см. Скворцов М.Б. Рак пищевода: хирургическое лечение // Сибирский медицинский журнал (Иркутск), 2011, 103(4), С. 21-30). Поэтому основным, а чаще всего и единственным, методом лечения данного заболевания остается хирургическое. Однако из-за технической сложности оперативного вмешательства и часто возникающих послеоперационных осложнений отмечается высокая летальность пациентов, а их пятилетняя выживаемость не превышает 10% (см. Арутюнян К.В., Шостка К.Г., Кузнецов И.М. и др. Хирургия рака пищевода: прошлое, настоящее, будущее (научный обзор) // Профилактическая и клиническая медицина, 2018, 1, С. 70-77). Наиболее проблематичным является хирургическое лечение у больных по поводу злокачественных новообразований в грудном отделе пищевода в виду технической сложности, а также локализацией опухоли в сложной анатомической зоне. Поэтому радикальные операции на грудном отделе пищевода сопровождаются высокой частотой послеоперационных осложнений (14,5-64%) и высоким уровнем летальности - 2,6-21% (см. Jiang K. Cheng L., Wang J.-J. et al Fast track clinical path-way implications in esophagogastrectomy // World J. Gastroenterol. - 2009. - Vol. 15 (4). - P. 496-501). Осложняет ситуацию высокий уровень встречаемости нерезектабельных случаев данного заболевания - 20-40% (см. Давыдов М.И., Стилиди И.С. Рак пищевода. 3-е изд. испр. и доп. М.: Изд. Гр. РОНЦ. 2007. 392 с.). Также в случае рака грудного отдела пищевода часто наблюдается развитие в послеоперационном периоде метастазов в медиастенальном, паратрахеальном и трахеобронхиальном лимфатических узлах (см. Дворецкий С.Ю. Современная стратегия лечения рака пищевода // Вестник хирургии. - 2016. - Т. 175. - №4. - С. 102-107).Esophageal cancer is treated with chemotherapy, radiation, surgery, or a combination. Chemoradiation therapy is ineffective in the treatment of even stages I-II due to the high resistance of the tumor (see Skvortsov M.B. Cancer of the esophagus: surgical treatment // Siberian Medical Journal (Irkutsk), 2011, 103 (4), S. 21- thirty). Therefore, the main, and most often the only, method of treating this disease remains surgical. However, due to the technical complexity of the surgical intervention and frequently occurring postoperative complications, there is a high mortality rate of patients, and their five-year survival rate does not exceed 10% (see Arutyunyan K.V., Shostka K.G., Kuznetsov I.M. and others. Surgery esophageal cancer: past, present, future (scientific review) // Preventive and clinical medicine, 2018, 1, pp. 70-77). The most problematic is the surgical treatment in patients with malignant neoplasms in the thoracic esophagus in view of the technical complexity, as well as the localization of the tumor in a complex anatomical zone. Therefore, radical operations on the thoracic esophagus are accompanied by a high incidence of postoperative complications (14.5-64%) and a high mortality rate - 2.6-21% (see Jiang K. Cheng L., Wang J.-J. et al Fast track clinical path-way implications in esophagogastrectomy // World J. Gastroenterol. - 2009. - Vol. 15 (4). - P. 496-501). The situation is complicated by a high level of incidence of unresectable cases of this disease - 20-40% (see Davydov MI, Stylidi IS Esophageal cancer. 3rd ed. Rev. And additional. M .: Publishing house Gr. RONTs. 2007.392 s.). Also, in the case of cancer of the thoracic esophagus, postoperative development of metastases in the mediastinal, paratracheal and tracheobronchial lymph nodes is often observed (see Dvoretsky S.Yu. Modern strategy for the treatment of esophageal cancer // Bulletin of surgery. - 2016. - T. 175. - No. 4. - S. 102-107).

На сегодняшний день представляется актуальным детальное изучение этиологии и патогенеза рака грудного отдела пищевода, а также разработка более эффективных методов лечения. Для этого необходимо создание объективной ксеногенной модели на иммунодефицитных мышах.Today, it seems relevant to study the etiology and pathogenesis of cancer of the thoracic esophagus, as well as the development of more effective methods of treatment. This requires the creation of an objective xenogeneic model in immunodeficient mice.

Известен способ ксенотрансплантации различных клеточных линий рака пищевода подкожно иммунодефицитным мышам методом инъекции (см. Grace G.-L.Y., Lin L., Julia K.-M.L. et al. Multiple modulatory activities of Andrographis paniculata on immune responses and xenograft growth in esophageal cancer preclinical models // Phytomedicine, 2019, 60, P. 152886). Этот метод является наиболее распространенным благодаря своей простоте и возможности непосредственного наблюдения за ростом опухоли. Его недостатком является развитие опухоли в нетипичном микроокружении, из-за чего она оказывается неспособной к инвазии и метастазированию.There is a known method of xenotransplantation of various cell lines of esophageal cancer subcutaneously in immunodeficient mice by injection (see Grace G.-LY, Lin L., Julia K.-ML et al. Multiple modulatory activities of Andrographis paniculata on immune responses and xenograft growth in esophageal cancer preclinical models // Phytomedicine, 2019, 60, P. 152886). This method is the most common due to its simplicity and the ability to directly monitor tumor growth. Its disadvantage is the development of a tumor in an atypical microenvironment, which makes it incapable of invasion and metastasis.

Известен способ ксенотрансплантации клеточной линии аденокарциномы пищевода в абдоминальный отдел пищевода иммунодефицитных мышей методом инъекции. Авторами указывается, что доступ к пищеводу обеспечивается путем рассечения кожи и брюшной стенки в верхней части туловища вдоль средней линии тела длиной 10 мм. Для выделения и создания натяжения абдоминальной части пищевода приподнимали печень, выводили желудок в операционную рану, заводили под пищевод пинцет для микрохирургии, после чего вводили шприц на расстояние 3 мм в стенку дистальной части органа для имплантации суспензии культуры опухолевых клеток (см. Melsens Е., Vlieghere Е., Descamps В. et al. Improved xenograft efficiency of esophageal adenocarcinoma cell lines through in vivo selection // Oncology reports, 2017, 38(1), P. 71-81).A known method of xenotransplantation of a cell line of adenocarcinoma of the esophagus in the abdominal esophagus of immunodeficient mice by injection. The authors point out that access to the esophagus is provided by dissecting the skin and abdominal wall in the upper part of the body along the midline of the body 10 mm long. To isolate and create tension in the abdominal part of the esophagus, the liver was lifted, the stomach was removed into the surgical wound, forceps for microsurgery were inserted under the esophagus, after which a syringe was inserted at a distance of 3 mm into the wall of the distal part of the organ for implantation of a tumor cell culture suspension (see Melsens E., Vlieghere E., Descamps B. et al. Improved xenograft efficiency of esophageal adenocarcinoma cell lines through in vivo selection // Oncology reports, 2017, 38 (1), P. 71-81).

Известен способ инъекционной ксенотрансплантации клеточных линий рака пищевода в шейный отдел пищевода иммунодефицитных мышей. Для этого производили вертикальный и горизонтальный разрезы кожи шеи по типу «крест-накрест», тупое выделение пищевода и инъекцию опухолевого материала (см. Tung L.N., Song S., Chan K.T. et al. Preclinical Study of Novel Curcumin Analogue SSC-5 Using Orthotopic Tumor Xenograft Model for Esophageal Squamous Cell Carcinoma // Cancer Res Treat, 2018, 50(4), P. 1362-1377).A known method of injection xenotransplantation of esophageal cancer cell lines into the cervical esophagus of immunodeficient mice. For this, vertical and horizontal incisions of the skin of the neck were made in a "criss-cross" pattern, blunt extraction of the esophagus and injection of tumor material (see Tung LN, Song S., Chan KT et al. Preclinical Study of Novel Curcumin Analogue SSC-5 Using Orthotopic Tumor Xenograft Model for Esophageal Squamous Cell Carcinoma // Cancer Res Treat, 2018, 50 (4), P. 1362-1377).

При ортотопической имплантации опухоль находится в адекватном клеточном микроокружении, что позволяет учитывать опухоле-стромальные взаимодействия. Еще одним преимуществом таких моделей является высокая вероятность развития метастазов, что оказывается крайне важным для изучения поздних стадий заболевания.With orthotopic implantation, the tumor is in an adequate cellular microenvironment, which allows taking into account tumor-stromal interactions. Another advantage of such models is the high probability of developing metastases, which turns out to be extremely important for studying the late stages of the disease.

В настоящее время неизвестны способы трансплантации опухолевого материала в грудной отдел пищевода иммунодефицитных мышей.At present, no methods are known for transplanting tumor material into the thoracic esophagus of immunodeficient mice.

Техническим результатом предлагаемого изобретения является разработка способа создания ксенографта рака пищевода внутригрудной локализации на иммунодефицитных мышах, обеспечивающего малотравматичный доступ к грудному отделу пищевода животного, позволяющий сохранить целостность грудной полости животного и избежать развития пневмоторакса.The technical result of the present invention is the development of a method for creating a xenograft of intrathoracic esophageal cancer in immunodeficient mice, providing low-traumatic access to the thoracic esophagus of an animal, allowing to preserve the integrity of the animal's chest cavity and avoid the development of pneumothorax.

Технический результат изобретения достигается тем, что осуществляют создание ксенографта рака пищевода внутригрудной локализации на иммунодефицитных мышах, включающий выполнение доступа в брюшную полость, выведение желудка и пищевода в операционную рану, инъекцию суспензии культуры клеток рака пищевода в мышечный слой пищевода, отличающийся тем, что укладывают животное на операционный стол в положение на живот, выполняют разрез кожи, мышечного слоя и брюшины перпендикулярно оси тела животного, на 2 мм ниже края реберной дуги, начиная разрез от точки пересечения края тринадцатой реберной дуги с задней подмышечной линией, заканчивая разрез на расстоянии 5 мм от позвоночного столба мыши, выводят в послеоперационную рану желудок животного, удерживая анатомическим пинцетом оттянутым желудок, вводят инъекционную иглу в мышечный слой пищевода на расстоянии 2 мм от диафрагмы под углом 15 градусов параллельно оси пищевода срезом вверх, далее проводят иглу в мышечном слое пищевода через диафрагмальное окно в грудную часть пищевода на 3 мм выше диафрагмального окна, производят инфильтрацию мышечного слоя пищевода опухолевыми клетками, удаляют иглу, послойно ушивают брюшную полость.The technical result of the invention is achieved by creating a xenograft of esophageal cancer of intrathoracic localization in immunodeficient mice, including access to the abdominal cavity, removal of the stomach and esophagus into the surgical wound, injection of a suspension of esophageal cancer cells into the muscular layer of the esophagus, characterized in that the animal is placed on the operating table in the prone position, an incision is made in the skin, muscle layer and peritoneum perpendicular to the axis of the animal's body, 2 mm below the edge of the costal arch, starting from the point of intersection of the edge of the thirteenth costal arch with the posterior axillary line, ending the incision at a distance of 5 mm from the vertebral column of the mouse, the stomach of the animal is brought out into the postoperative wound, holding the stomach with anatomical forceps, the injection needle is inserted into the muscle layer of the esophagus at a distance of 2 mm from the diaphragm at an angle of 15 degrees parallel to the axis of the esophagus with a slice upward, then the needle is inserted into the muscle layer of the esophagus through the diaphragm The alial window into the thoracic part of the esophagus is 3 mm above the diaphragmatic window, the muscle layer of the esophagus is infiltrated with tumor cells, the needle is removed, and the abdominal cavity is sutured in layers.

Способ осуществляют следующим образом.The method is carried out as follows.

Культура клеток рака пищевода отмывается и ресуспендируется в культуральной среде 199, не содержащей сыворотку и антибиотики.The esophageal cancer cell culture is washed and resuspended in the culture medium 199, which does not contain serum and antibiotics.

Реципиентом опухолевого материала служат иммунодефицитные мыши Balb/c Nude.Immunodeficient Balb / c Nude mice are the recipient of tumor material.

Анестезию животных осуществляют с использованием ксилазина концентрацией 20 мг/мл в качестве премедикации и золетила концентрацией 22,57 мг/мл.Animals are anesthetized using xylazine at a concentration of 20 mg / ml as premedication and zoletil at a concentration of 22.57 mg / ml.

Для обеспечения доступа в брюшную полость мыши ее укладывают в положение на живот и разрезают кожу, мышечный слой, брюшину перпендикулярно оси тела животного, на 2 мм ниже края реберной дуги. Разрез начинается от точки пересечения края тринадцатой реберной дуги с задней подмышечной линией и заканчивается на расстоянии 5 мм от позвоночного столба мыши.To provide access to the abdominal cavity, the mouse is placed in a position on the stomach and the skin, muscle layer, and peritoneum are cut perpendicular to the axis of the animal's body, 2 mm below the edge of the costal arch. The incision starts from the point of intersection of the edge of the thirteenth costal arch with the posterior axillary line and ends at a distance of 5 mm from the mouse spinal column.

При помощи анатомического пинцета выводят в послеоперационную рану желудок и часть абдоминального отдела пищевода. Удерживая анатомическим пинцетом оттянутым желудок, вводят инъекционную иглу в мышечный слой пищевода на расстоянии 2 мм от диафрагмы под углом 15 градусов параллельно оси пищевода срезом вверх, далее проводят иглу в мышечном слое пищевода через диафрагмальное окно в грудную часть пищевода на 3 мм выше диафрагмального окна. Инъекцию суспензии культуры клеток производят в объеме 20 мкл с помощью инсулинового шприца (100 U) с иглой 27 G. Осуществляют инфильтрацию мышечного слоя грудного отдела пищевода опухолевыми клетками.With the help of anatomical tweezers, the stomach and part of the abdominal esophagus are removed into the postoperative wound. Holding the stomach with anatomical tweezers, the injection needle is inserted into the muscle layer of the esophagus at a distance of 2 mm from the diaphragm at an angle of 15 degrees parallel to the axis of the esophagus with a cut upward, then the needle is inserted into the muscle layer of the esophagus through the diaphragmatic window into the thoracic part of the esophagus 3 mm above the diaphragmatic window. The cell culture suspension is injected in a volume of 20 μl using an insulin syringe (100 U) with a 27 G needle. The muscle layer of the thoracic esophagus is infiltrated with tumor cells.

Удаляют иглу, послойно ушивают брюшную полость.The needle is removed, the abdominal cavity is sutured in layers.

Изобретение иллюстрируется фигурами (1-3).The invention is illustrated in figures (1-3).

На Фиг 1 изображено выведение желудка и пищевода в операционную рану иммунодефицитной мыши Balb/c Nude.Figure 1 depicts the removal of the stomach and esophagus into the surgical wound of an immunodeficient Balb / c Nude mouse.

На Фиг 2 изображена инъекция суспензии культуры опухолевых клеток в стенку пищевода иммунодефицитной мыши Balb/c Nude.Figure 2 depicts the injection of a tumor cell culture suspension into the esophagus wall of an immunodeficient Balb / c Nude mouse.

На Фиг 3 изображено ушитие операционной раны у иммунодефицитной мыши Balb/c Nude.Figure 3 depicts wound closure in an immunodeficient Balb / c Nude mouse.

Данным способом произведена ортотопическая трансплантация культуры клеток рака пищевода человека в грудной отдел пищевода 15 иммунодефицитным мышам Balb/c Nude.Using this method, orthotopic transplantation of a culture of human esophageal cancer cells into the thoracic esophagus was performed in 15 Balb / c Nude immunodeficient mice.

Технико-экономическая эффективность данного способа заключается в том, что он позволяет обеспечить малотравматичный доступ к грудному отделу пищевода животного при ортотопической трансплантации культуры опухолевых клеток пищевода человека в грудной отдел пищевода иммунодефицитных мышей с целью получения опухолевых моделей, использующихся в доклинических исследованиях различных вариантов терапии рака грудного отдела пищевода.The technical and economic efficiency of this method lies in the fact that it allows to provide low-traumatic access to the thoracic esophagus of an animal during orthotopic transplantation of a culture of human esophageal tumor cells into the thoracic esophagus of immunodeficient mice in order to obtain tumor models used in preclinical studies of various options for the treatment of breast cancer. department of the esophagus.

Пример.Example.

Ксенотрансплантацию культуры клеток рака пищевода человека провели самке мыши линии Balb/c Nude весом 22 г. Премедикация была выполнена с использованием ксилазина концентрацией 20 мг/мл. Для наркоза применяли золетил концентрацией 22,57 мг/мл.Xenotransplantation of a culture of human esophageal cancer cells was performed in a Balb / c Nude female mouse weighing 22 g. Premedication was performed using xylazine at a concentration of 20 mg / ml. Zoletil with a concentration of 22.57 mg / ml was used for anesthesia.

Мышь укладывали в положение лежа на живот. Разрез кожи, мышечного слоя и брюшной стенки производился перпендикулярно оси тела, на 2 мм ниже края реберной дуги, и начинался от точки пересечения края тринадцатой реберной дуги с задней подмышечной линией, заканчивался на расстоянии 5 мм от позвоночного столба мыши.The mouse was placed in a prone position. The incision of the skin, muscle layer and abdominal wall was made perpendicular to the body axis, 2 mm below the edge of the costal arch, and began from the point of intersection of the edge of the thirteenth costal arch with the posterior axillary line, and ended at a distance of 5 mm from the mouse spinal column.

С помощью анатомического пинцета вывели в послеоперационную рану желудок с абдоминальной частью пищевода. Удерживая пинцетом желудок, ввели инъекционную иглу срезом вверх в мышечный слой на расстоянии 2 мм от диафрагмы под углом 15 градусов параллельно оси пищевода. Иглу проводили в мышечном слое пищевода через диафрагмальное окно в грудную его часть на 3 мм выше диафрагмального окна. Инъекцию суспензии культуры опухолевых клеток произвели в объеме 20 мкл при помощи инсулинового шприца с иглой 27G в мышечный слой грудного отдела пищевода. Удалили иглу и послойно ушили послеоперационную рану.With the help of anatomical tweezers, the stomach with the abdominal part of the esophagus was brought out into the postoperative wound. Holding the stomach with tweezers, the injection needle was inserted with a cut up into the muscle layer at a distance of 2 mm from the diaphragm at an angle of 15 degrees parallel to the esophagus axis. The needle was inserted into the muscle layer of the esophagus through the diaphragmatic window into the thoracic part, 3 mm above the diaphragmatic window. The tumor cell culture suspension was injected in a volume of 20 μl using an insulin syringe with a 27G needle into the muscle layer of the thoracic esophagus. The needle was removed and the postoperative wound was sutured in layers.

Claims (1)

Способ создания ксенографта рака пищевода внутригрудной локализации на иммунодефицитных мышах, включающий выполнение доступа в брюшную полость, выведение желудка и пищевода в операционную рану, инъекцию суспензии культуры клеток рака пищевода в мышечный слой пищевода, отличающийся тем, что укладывают животное на операционный стол в положение на живот, выполняют разрез кожи, мышечного слоя и брюшины перпендикулярно оси тела животного, на 2 мм ниже края реберной дуги, начиная разрез от точки пересечения края тринадцатой реберной дуги с задней подмышечной линией, заканчивая разрез на расстоянии 5 мм от позвоночного столба мыши, выводят в послеоперационную рану желудок животного, удерживая анатомическим пинцетом оттянутым желудок, вводят инъекционную иглу в мышечный слой пищевода на расстоянии 2 мм от диафрагмы под углом 15 градусов параллельно оси пищевода срезом вверх, далее проводят иглу в мышечном слое пищевода через диафрагмальное окно в грудную часть пищевода на 3 мм выше диафрагмального окна, производят инфильтрацию мышечного слоя пищевода опухолевыми клетками, удаляют иглу, послойно ушивают брюшную полость.A method for creating a xenograft of esophageal cancer of intrathoracic localization in immunodeficient mice, including access to the abdominal cavity, removal of the stomach and esophagus into the surgical wound, injection of a suspension of esophageal cancer cells into the muscular layer of the esophagus, characterized in that the animal is placed on the operating table in a prone position , an incision is made in the skin, muscle layer and peritoneum perpendicular to the axis of the animal's body, 2 mm below the edge of the costal arch, starting from the point of intersection of the edge of the thirteenth costal arch with the posterior axillary line, ending with the incision at a distance of 5 mm from the mouse spinal column, taken to the postoperative the wound is the stomach of the animal, holding the stomach with anatomical forceps, the injection needle is inserted into the muscle layer of the esophagus at a distance of 2 mm from the diaphragm at an angle of 15 degrees parallel to the axis of the esophagus with a cut upward, then the needle is inserted into the muscle layer of the esophagus through the diaphragmatic window into the thoracic part of the esophagus by 3 mm higher diaphragm nogo window, produce the infiltration of the muscle layer of the esophagus with tumor cells, remove the needle, layer by layer suture the abdominal cavity.
RU2020119699A 2020-06-08 2020-06-08 Method for creating xenograft of cancer of esophagus of intrathoracic localization on immune deficient mice RU2738308C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2020119699A RU2738308C1 (en) 2020-06-08 2020-06-08 Method for creating xenograft of cancer of esophagus of intrathoracic localization on immune deficient mice

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2020119699A RU2738308C1 (en) 2020-06-08 2020-06-08 Method for creating xenograft of cancer of esophagus of intrathoracic localization on immune deficient mice

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2738308C1 true RU2738308C1 (en) 2020-12-11

Family

ID=73834933

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2020119699A RU2738308C1 (en) 2020-06-08 2020-06-08 Method for creating xenograft of cancer of esophagus of intrathoracic localization on immune deficient mice

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2738308C1 (en)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU85879A1 (en) * 1949-11-16 1975-07-15 Method of treating esophageal cancer
RU2638285C1 (en) * 2016-08-19 2017-12-12 федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Казанский (Приволжский) федеральный университет" (ФГАОУ ВО КФУ) Method for estimation of effectiveness of impact of chemotherapeutic precautions of xenograft model in vivo
RU2709835C1 (en) * 2018-12-24 2019-12-23 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Ростовский научно-исследовательский онкологический институт" Министерства здравоохранения Российской Федерации Method for optimal access to the abdominal portion of the esophagus of immunodeficient mice in orthotopic transplantation of a human oesophageal tumor fragment

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU85879A1 (en) * 1949-11-16 1975-07-15 Method of treating esophageal cancer
RU2638285C1 (en) * 2016-08-19 2017-12-12 федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Казанский (Приволжский) федеральный университет" (ФГАОУ ВО КФУ) Method for estimation of effectiveness of impact of chemotherapeutic precautions of xenograft model in vivo
RU2709835C1 (en) * 2018-12-24 2019-12-23 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Ростовский научно-исследовательский онкологический институт" Министерства здравоохранения Российской Федерации Method for optimal access to the abdominal portion of the esophagus of immunodeficient mice in orthotopic transplantation of a human oesophageal tumor fragment

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
КИТ О.И. и др. Методы создания ортотопических моделей рака пищевода и их применение в доклинических исследованиях // Современные проблемы науки и образования. - 2019. - N 2.; URL: http://www.science-education.ru/ru/article/view?id=28606 (дата обращения: 26.10.2020). LAI NAR TUNG et al. Preclinical Study of Novel Curcumin Analogue SSC-5 Using Orthotopic Tumor Xenograft Model for Esophageal Squamous Cell Carcinoma. Cancer Res Treat, 2018, 50(4), P. 1362-1377, реферат. *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Fu et al. Models of human metastatic colon cancer in nude mice orthotopically constructed by using histologically intact patient specimens.
ES2381641T3 (en) Methods and devices for minimally invasive administration of fluid compositions containing cells
CN103656666A (en) Preparation and application of novel targeting peptide for specifically inhibiting tumor cell metastasis
CN107454844A (en) Cellular therapeutic agent for treatment of cancer and the therapeutic alliance using the cellular therapeutic agent
Wang et al. Breast reconstruction using a laparoscopically harvested pedicled omental flap after endoscopic mastectomy for patients with breast cancer: an observational study of a minimally invasive method
RU2416370C1 (en) Method of mammary gland plasty
RU2738308C1 (en) Method for creating xenograft of cancer of esophagus of intrathoracic localization on immune deficient mice
Stone et al. Can resistance to cancer be induced?
CN104997718A (en) Application of biomembrane or closed structure or cellular compartment with biomembrane properties as cosmetic or cosmetic carrier
Raven The Properties and Surgical Problems of Malignant Melanoma: Hunterian Lecture delivered at the Royal College of Surgeons of England on 7th February, 1949
RU2709835C1 (en) Method for optimal access to the abdominal portion of the esophagus of immunodeficient mice in orthotopic transplantation of a human oesophageal tumor fragment
RU2713798C1 (en) Method of orthotopic transplantation of human esophageal cell culture into cervical esophageal segment of immunodeficient mice
Baserga et al. Induction of blood-borne metastases by tumor transplantation in the tail of mice
Castro et al. Maintenance of human tumours and tissues in immunosuppressed mice
RU2714949C2 (en) Method for simulating local circumscribed peritonitis in rats
RU2740423C1 (en) Method of selecting optimal access for orthotopic transplantation of human ovarian cancer tumor into ovary of immune-deficient mouse
RU2398529C2 (en) Method of autotransplant formation
Sriussadaporn et al. Experience with surgical treatment of retroperitoneal soft tissue sarcomas at a university hospital in Thailand
RU2799132C1 (en) Method of creating liver cancer model on immunodeficient mice
RU2301088C2 (en) Method for treating mammary gland carcinoma relapse cases
RU2725273C1 (en) Method of human pancreatic neuroendocrine tumor fragment transplantation into immunodeficiency mice pancreatic gland
CN104922685A (en) Application of naturally-sourced and/or self-assembled biological membrane, closed structure or cell compartment with biological membrane property as medical high polymer material
Barrett et al. Pulmonary hydatid disease
Delaney et al. Long survival after solitary distant metastasis from carcinoma of the colon
RU2457546C1 (en) Method for simulating human colon adenocarcinoma