RU2731381C1 - Nucleoside derivatives of 1,3-diaza-2-oxophenoxazine as herpesvirus replication inhibitors - Google Patents

Nucleoside derivatives of 1,3-diaza-2-oxophenoxazine as herpesvirus replication inhibitors Download PDF

Info

Publication number
RU2731381C1
RU2731381C1 RU2019112842A RU2019112842A RU2731381C1 RU 2731381 C1 RU2731381 C1 RU 2731381C1 RU 2019112842 A RU2019112842 A RU 2019112842A RU 2019112842 A RU2019112842 A RU 2019112842A RU 2731381 C1 RU2731381 C1 RU 2731381C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
ris
mmol
diaza
oxophenoxazine
dmtr
Prior art date
Application number
RU2019112842A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Андрей Владимирович Аралов
Елена Сергеевна Матюгина
Евгений Семенович Беляев
Original Assignee
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской академии наук (ИБХ РАН)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное бюджетное учреждение науки институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской академии наук (ИБХ РАН) filed Critical Федеральное государственное бюджетное учреждение науки институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской академии наук (ИБХ РАН)
Priority to RU2019112842A priority Critical patent/RU2731381C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2731381C1 publication Critical patent/RU2731381C1/en

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
    • A61K31/5383—1,4-Oxazines, e.g. morpholine ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D498/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D498/12—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains three hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/24—Heterocyclic radicals containing oxygen or sulfur as ring hetero atom

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

FIELD: chemistry; medicine.SUBSTANCE: invention relates to use of 1,3-diaza-2-oxophenoxazine derivatives of formulas (1), (2) and (3) in medicine as herpes virus recurrence inhibitors. Disclosed is use of derivatives of formulas (1), (2) and (3):,,where Ris H, Ris H and Ris H; or Ris H, Ris H and Ris OCH; or Ris H, Ris DMTr and Ris H; or Ris H, Ris DMTr and Ris OH; or Ris H, Ris DMTr and Ris OCH; or Ris OCHCHNH, Ris H and Ris H; or Ris OCHCHNH, Ris H and Ris OH; or Ris OCHCHNH-CBz, Ris DMTr and Ris OH; or Ris OCHCHNH, Ris DMTr and Ris H as herpes virus inhibitors, including varicella-zoster virus and cytomegalovirus.EFFECT: novel use of said derivatives effective as herpesvirus reproduction inhibitors, including varicella zoster virus and cytomegalovirus.2 cl, 1 tbl, 21 ex, 3 dwg

Description

Область техникиTechnology area

Изобретение относится к области молекулярной биологии, микробиологии и медицины, а именно к производным 1,3-диаза-2-оксофеноксазина, их получению и применению в качестве ингибиторов репродукции герпесвирусов.The invention relates to the field of molecular biology, microbiology and medicine, namely, derivatives of 1,3-diaza-2-oxophenoxazine, their production and use as inhibitors of the reproduction of herpes viruses.

Вирусные заболевания являются наиболее частой причиной смерти человека от инфекционных заболеваний. Герпесвирусы (Herpesviridae) - это большое семейство вирусов, которые широко распространены в природе и способны поражать человека и других млекопитающихся. На сегодняшний день известно 8 типов герпесвирусов человека, которые разделены на три группы. Вирусы простого герпеса 1 и 2 типа (ВПГ-1, ВПГ-2) и вирус ветряной оспы - опоясывающего герпеса (варицелла-зостер, ВЗВ) - это α-герпесвирусы. Первичное инфицирование ВПГ-1 и ВПГ-2 приводит к поражению кожи чаще около рта и в области гениталей, соответственно. Вирус варицелла-зостера первично вызывает ветряную оспу, в основном у детей, и характеризуется высыпаниями по всему телу. После первичного инфицирования герпесвирусы переходят в латентное состояние, при котором не происходит репликации вируса и экспрессии вирусных белков. Реактивация из латентной формы приводит к более тяжелому и затяжному течению заболевания. Рецидивам наиболее подвержены люди с ослабленным иммунитетом при наличии иммунодефицитных состояний и после иммуносупрессивной терапии. Цитомегаловирус (ЦМВ), вирус герпеса человека 6 типа (ВГЧ-6) и ВГЧ-7 относятся к β-герпесвирусам. Цитомегаловирус особенно опасен для беременных женщин. Различные врожденные патологии диагностируют у 10-15% детей, инфицированных во время внутриутробного развития. У иммунокомпетентных людей ЦМВ приводит к серьезным заболеваниям, в том числе ретиниту, тяжелой пневмонии или энцефалиту. ВГЧ-6 первично вызывает внезапную экзантему у младенцев, известную также как детская розеола. Наиболее часто ВГЧ-6 и ВГЧ-7 реактивируются у пациентов, перенесших операции по трансплантаций, и могут приводить к осложнениям, таким как энцефалит и интерстициальный пневмонит. К γ-герпесвирусам пренадлежат вирус Эпштейна - Барра (ВЭБ) и ВГЧ-8. Вирус Эпштейна - Барра вызывает инфекционный мононуклеоз и зачастую тесно связан с развитием различных злокачественных новообразований [H.J. Field, R.A. Vere Hodge. Recent developments in anti-herpesvirus drugs. British Medical Bulletin 2013, 106: 213-249]. Герпесвирусные инфекции - одни из самых распространенных заболеваний человека, и по данным ВОЗ, 60-90% населения земли инфицированы одним или несколькими видами герпесвирусов [Y.C. Jiang, Н. Feng, Y.C. Lin, X.R. Guo. New strategies against drug resistance to herpes simplex virus. International Journal of Oral Science 2016, 8:1-6].Viral diseases are the most common cause of human death from infectious diseases. Herpesviruses (Herpesviridae) are a large family of viruses that are widespread in nature and can infect humans and other mammals. Today, 8 types of human herpes viruses are known, which are divided into three groups. Herpes simplex viruses type 1 and 2 (HSV-1, HSV-2) and varicella-zoster virus (varicella zoster, VZV) are α-herpes viruses. Primary infection with HSV-1 and HSV-2 leads to skin lesions more often near the mouth and in the genital area, respectively. Varicella zoster virus primarily causes chickenpox, mainly in children, and is characterized by rashes all over the body. After primary infection, herpes viruses enter a latent state, in which there is no viral replication and no expression of viral proteins. Reactivation from the latent form leads to a more severe and protracted course of the disease. People with weakened immune systems are most susceptible to relapses in the presence of immunodeficiency states and after immunosuppressive therapy. Cytomegalovirus (CMV), human herpesvirus type 6 (HHV-6) and HHV-7 are β-herpes viruses. Cytomegalovirus is especially dangerous for pregnant women. Various congenital pathologies are diagnosed in 10-15% of children infected during intrauterine development. In immunocompetent people, CMV leads to serious medical conditions, including retinitis, severe pneumonia, or encephalitis. HHV-6 is the primary cause of sudden exanthema in infants, also known as infant roseola. Most often, HHV-6 and HHV-7 are reactivated in transplant patients and can lead to complications such as encephalitis and interstitial pneumonitis. The γ-herpes viruses include the Epstein-Barr virus (EBV) and HHV-8. The Epstein-Barr virus causes infectious mononucleosis and is often closely associated with the development of various malignant neoplasms [H.J. Field, R.A. Vere Hodge. Recent developments in anti-herpesvirus drugs. British Medical Bulletin 2013 106: 213-249]. Herpesvirus infections are one of the most common human diseases, and according to WHO, 60-90% of the world's population is infected with one or more types of herpes viruses [Y.C. Jiang, H. Feng, Y.C. Lin, X.R. Guo. New strategies against drug resistance to herpes simplex virus. International Journal of Oral Science 2016, 8: 1-6].

Несмотря на то, что противовирусная терапия позволяет справляться с первичными и повторными инфекциями, вызванными герпесвирусами, резистентность к применяемым препаратам и токсичность требуют изыскания и изучение новых высокоактивных противовирусных соединений.Despite the fact that antiviral therapy can cope with primary and repeated infections caused by herpes viruses, resistance to the drugs used and toxicity require the search and study of new highly active antiviral compounds.

Уровень техникиState of the art

На сегодняшний день существует три класса препаратов, одобренных для лечения герпесвирусных инфекций: ациклические аналоги нуклеозидов (ацикловир, пенцикловир, ганцикловир), ациклические нуклеотидные аналоги (цидофовир, адефовир дипивоксил) и аналоги пирофосфата (фоскарнет) [Y.C. Jiang, Н. Feng, Y.C. Lin, X.R. Guo. New strategies against drug resistance to herpes simplex virus. International Journal of Oral Science 2016, 8:1-6].Today, there are three classes of drugs approved for the treatment of herpesvirus infections: acyclic nucleoside analogs (acyclovir, penciclovir, ganciclovir), acyclic nucleotide analogs (cidofovir, adefovir dipivoxil) and pyrophosphate analogs (foscarnet) [Y.C. Jiang, H. Feng, Y.C. Lin, X.R. Guo. New strategies against drug resistance to herpes simplex virus. International Journal of Oral Science 2016, 8: 1-6].

Открытие противовирусного препарата нуклеозидной природы - ацикловира в 1977 году можно считать отправной точной в терапии герпесвирусов [G.B. Elion, Р.А. Furman, J.A. Fyfe et al. Selectivity of action of an antiherpetic agent, 9-(2-hydroxyethoxymethyl)guanine. Proc Natl Acad Sci USA 1977, 74: 5716-20; H.J. Field, R.A. Vere Hodge. Recent developments in anti-herpesvirus drugs. British Medical Bulletin 2013, 106: 213-249]. Мишенью противовирусного действия ацикловира и других нуклеозидных аналогов является герпесная ДНК полимераза, и механизм заключается в постадийном фосфорилировании препарата и ингибировании синтеза вирусной ДНК.The discovery of an antiviral drug of a nucleoside nature - acyclovir in 1977 can be considered the starting point for the treatment of herpes viruses [G.B. Elion, R.A. Furman, J.A. Fyfe et al. Selectivity of action of an antiherpetic agent, 9- (2-hydroxyethoxymethyl) guanine. Proc Natl Acad Sci USA 1977,74: 5716-20; H.J. Field, R.A. Vere Hodge. Recent developments in anti-herpesvirus drugs. British Medical Bulletin 2013 106: 213-249]. The target of the antiviral action of acyclovir and other nucleoside analogs is herpes DNA polymerase, and the mechanism consists in the stepwise phosphorylation of the drug and inhibition of viral DNA synthesis.

Ациклический аналог гуанозина - ацикловир мало токсичен, хорошо переносится пациентами, однако имеет низкую биодоступность. Валацикловир, L-валиновый эфир ацикловира - это пролекарство, которое под действием фермента валацикловир-гидроксилазы превращается в организме в активное вещество - ацикловир. Валацикловир, в отличие от ацикловира, активен в отношении всех видов герпесвирусов, однако наиболее высокая чувствительность проявляется у представителей α-подсемейства. Недостатком валацикловира является отсутствие инфузионной формы препарата, что ограничивает его применение при тяжелых острых поражениях [L. Poole, S.H. James. Antiviral Therapies for Herpesviruses: Current Agents and New Directions. Clinical Therapeutics 2018, 40(8): 1282-1298].The acyclic analogue of guanosine, acyclovir, is of little toxicity, is well tolerated by patients, but has low bioavailability. Valacyclovir, L-valine ester of acyclovir, is a prodrug that, under the action of the enzyme valacyclovir hydroxylase, is converted in the body into an active substance - acyclovir. Valacyclovir, unlike acyclovir, is active against all types of herpes viruses, but the highest sensitivity is manifested in representatives of the α-subfamily. The disadvantage of valacyclovir is the lack of an infusion form of the drug, which limits its use in severe acute lesions [L. Poole, S.H. James. Antiviral Therapies for Herpesviruses: Current Agents and New Directions. Clinical Therapeutics 2018, 40 (8): 1282-1298].

Фамцикловир является пролекарством пенцикловира, а именно, его диацетататным эфиром. Пенцикловир примерно в 100 раз менее активен, чем ацикловир, но поскольку для препарата достигается высокая концентрация в клетках, и он обладает долгим временем полувыведения, его эффективно применяют в терапии [Y.C. Jiang, Н. Feng, Y.C. Lin, X.R. Guo. New strategies against drug resistance to herpes simplex virus. International Journal of Oral Science 2016. 8:1-6].Famciclovir is a prodrug of penciclovir, namely its diacetate ester. Penciclovir is about 100 times less active than acyclovir, but since the drug reaches a high concentration in cells and has a long half-life, it is effectively used in therapy [Y.C. Jiang, H. Feng, Y.C. Lin, X.R. Guo. New strategies against drug resistance to herpes simplex virus. International Journal of Oral Science 2016. 8: 1-6].

Ганцикловир - это синтетический нуклеозидный аналог гуанозина. Механизм действия аналогичен таковому у ацикловира, однако исключает активное участие вирусной тимидинкиназы, что позволяет использовать ганцикловир преимущественно при тех герпетических инфекциях, при которых ацикловир является недостаточно эффективным (ЦМВ, вирус Эпштейна-bappa, ВГЧ-6 и ВГЧ-7) [C.L. Poole, S.H. James. Antiviral Therapies for Herpesviruses: Current Agents and New Directions. Clinical Therapeutics 2018, 40(8): 1282-1298].Ganciclovir is a synthetic nucleoside analogue of guanosine. The mechanism of action is similar to that of acyclovir, but excludes the active participation of viral thymidine kinase, which allows the use of ganciclovir mainly for those herpetic infections in which acyclovir is not effective enough (CMV, Epstein-bappa virus, HHV-6 and HHV-7) [C.L. Poole, S.H. James. Antiviral Therapies for Herpesviruses: Current Agents and New Directions. Clinical Therapeutics 2018, 40 (8): 1282-1298].

Фоскарнет является неорганическим аналогом пирофосфата, неконкурентным ингибитором вирусной ДНК полимеразы. Фоскарнет показал активность против всех известных герпесвирусов. Его применяют при резистентных формах ВПГ и ВЗВ, а также при ЦМВ, резистентном к ганцикловиру. Однако сравнительно высокая токсичность фоскарнета ограничивает его эффективное применение [Y.C. Jiang. Н. Feng, Y.C. Lin, X.R. Guo. New strategies against drug resistance to herpes simplex virus. International Journal of Oral Science 2016, 8:1-6].Foscarnet is an inorganic analogue of pyrophosphate, a non-competitive inhibitor of viral DNA polymerase. Foscarnet has shown activity against all known herpesviruses. It is used for resistant forms of HSV and VZV, as well as for CMV resistant to ganciclovir. However, the relatively high toxicity of foscarnet limits its effective use [Y.C. Jiang. H. Feng, Y.C. Lin, X.R. Guo. New strategies against drug resistance to herpes simplex virus. International Journal of Oral Science 2016, 8: 1-6].

Цидофовир - это ациклический фосфонатный нуклеотидный аналог.Наличие фосфонатной группы исключает первую стадию фосфорилирования вирусной киназой. Последующие фосфорилирование осуществляется клеточными киназами, и далее активная молекула включается в ДНК вируса. Цидофовир проявляет активность против всех герпесвирусов человека, ортопоксвирусов, аденовирусов и папиломовирусов. Цидофовир переносится хуже, чем ацикловир и ганцикловир, поэтому его используют в основном при тяжелых, угрожающих жизни формах герпесвирусных инфекций (Иммунокомпетентные пациенты с ВПГ и ЦМВ инфекциями, резистентными к ацикловиру, ганцикловиру и фоскарнету) [Е. De Clercq, A.

Figure 00000001
. Acyclic nucleoside phosphonates: a key class of antiviral drugs. Nat Rev Drug Discov 2005. 4(11): 928-940 С.].Cidofovir is an acyclic phosphonate nucleotide analogue; the presence of a phosphonate group excludes the first step of viral kinase phosphorylation. Subsequent phosphorylation is carried out by cellular kinases, and then the active molecule is incorporated into the DNA of the virus. Cidofovir is active against all human herpesviruses, orthopoxviruses, adenoviruses and papillomaviruses. Cidofovir is less tolerated than acyclovir and ganciclovir, therefore it is used mainly for severe, life-threatening forms of herpesvirus infections (see table Immunocompetent patients with HSV and CMV infections resistant to acyclovir, ganciclovir and foscarnet) [E. De Clercq, A.
Figure 00000001
... Acyclic nucleoside phosphonates: a key class of antiviral drugs. Nat Rev Drug Discov 2005.4 (11): 928-940 C.].

Таким образом, возникновение резистентности и недостатки существующих на данный момент одобренных препаратов обуславливают необходимость разработки новых производных, активных относительно представителей семейства герпесвирусов.Thus, the emergence of resistance and the shortcomings of currently existing approved drugs necessitate the development of new derivatives that are active against members of the herpesvirus family.

Раскрытие изобретенияDisclosure of invention

Предлагаемое изобретение решает задачу расширения арсенала противовирусных лекарственных средств за счет производных 1,3-диаза-2-оксофеноксазина, обладающих активностью относительно герпесвирусов, а именно вируса варицелла-зостер и цитомегаловируса. В процессе создания настоящего изобретения были разработаны способы получения соединений, являющихся производными 1,3-диаза-2-оксофеноксазина, и обнаружено, что некоторые из них обладают способностью ингибировать репликацию вируса варицелла-зостер и цитомегаловируса.The proposed invention solves the problem of expanding the arsenal of antiviral drugs due to derivatives of 1,3-diaza-2-oxophenoxazine, which have activity against herpes viruses, namely varicella-zoster virus and cytomegalovirus. In the process of creating the present invention, methods were developed for preparing compounds derived from 1,3-diaza-2-oxophenoxazine, and it was found that some of them have the ability to inhibit the replication of varicella zoster virus and cytomegalovirus.

Соединения 2а-с получают из соответствующих нуклеозидных производных 5-бромурацила 1а-с (фиг. 1): активацией С4 атома гетероциклического кольца производных 1a-с кипячением в смеси CH2Cl2/CCl4 (v/v:5/1) в присутствии трифенилфосфина (PPh3), с последующим его замещением 2-аминофенолом в присутствии DIPEA; затем, циклизацией при кипячении с обратным холодильником в смеси абс. C2H5OH/DIPEA (v/v:4:1), с последующим удалением ацетильных защитных групп обработкой водным аммиаком. Соединения 3а-с получают из соответствующих производных 2а-с обработкой 4,4'-диметокситритилхлоридом (DMTr-Cl) в пиридине (фиг. 1).Compounds 2a-c are prepared from the corresponding nucleoside derivatives of 5-bromouracil 1a-c (Fig. 1): activation of the C4 atom of the heterocyclic ring of derivatives 1a-with reflux in a mixture CH 2 Cl 2 / CCl 4 (v / v: 5/1) in the presence of triphenylphosphine (PPh 3 ), followed by its substitution with 2-aminophenol in the presence of DIPEA; then, cyclization while boiling under reflux in a mixture of abs. C 2 H 5 OH / DIPEA (v / v: 4: 1), followed by removal of the acetyl protecting groups by treatment with aqueous ammonia. Compounds 3a-c were prepared from the corresponding derivatives 2a-with treatment with 4,4'-dimethoxytrityl chloride (DMTr-Cl) in pyridine (Fig. 1).

Соединения 6а-b получают в 2 стадии из соответствующих производных 5-бромурацила 4а-b (фиг. 2): а) активацией С4 атома гетероциклического кольца производных 4а-b кипячением в смеси CH2Cl2/CCl4 (v/v: 5:1) в присутствии трифенилфосфина (PPh3), с последующим его замещением 2-аминорезорцином в присутствии 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ена (DBU); б) конденсацией полученных производных 5а-b с бензил-N-(2-гидроксиэтил)карбаматом в CH2Cl2 в присутствии диэтилазодикарбоксилата (DEAD) и PPh3 (реакция Мицунобу), с последующей циклизацией при кипячении с обратным холодильником в смеси абс. C2H5OH/DIPEA (v/v: 5:1) и удалением ацетильных защитных групп обработкой водным аммиаком. Соединения 8а-b получают из соответствующих производных 6а-b обработкой 4,4'-диметокситритилхлоридом (DMTr-Cl) в пиридине (фиг. 2). Наконец, производные 7а-b и 9а-b получают удалением бензилоксикарбонильной (CBz) защитной группы из соединений 6а-b или 8а-b, соответственно, каталитическим гидрированием в присутствии 10% Pd/C в атмосфере водорода.Compounds 6а-b were obtained in 2 stages from the corresponding derivatives of 5-bromouracil 4а-b (Fig. 2): a) activation of the C4 atom of the heterocyclic ring of derivatives 4а-b by refluxing in a mixture CH 2 Cl 2 / CCl 4 (v / v: 5 : 1) in the presence of triphenylphosphine (PPh 3 ), followed by its substitution with 2-aminoresorcinol in the presence of 1,8-diazabicyclo [5.4.0] undec-7-ene (DBU); b) condensation of the obtained derivatives 5а-b with benzyl-N- (2-hydroxyethyl) carbamate in CH 2 Cl 2 in the presence of diethyl azodicarboxylate (DEAD) and PPh 3 (Mitsunobu reaction), followed by cyclization at reflux in a mixture of abs. C 2 H 5 OH / DIPEA (v / v: 5: 1) and removal of the acetyl protecting groups by treatment with aqueous ammonia. Compounds 8a-b were prepared from the corresponding derivatives 6a-b by treatment with 4,4'-dimethoxytrityl chloride (DMTr-Cl) in pyridine (Fig. 2). Finally, derivatives 7a-b and 9a-b are prepared by removing the benzyloxycarbonyl (CBz) protecting group from compounds 6a-b or 8a-b, respectively, by catalytic hydrogenation in the presence of 10% Pd / C under a hydrogen atmosphere.

Для получения N10-алкилированных производных, 3а алкилируют йодацетамидом в присутствии DBU, получая 10, из которого, в свою очередь, удаляют 5'-O-DMTr защитную группу, получая соединение 11 (фиг. 3). 1,3-диаза-2-оксофеноксазин 12 получают расщеплением гликозидной связи в соединении 2а обработкой его конц. HCl в воде (фиг. 3).To obtain the N10-alkylated derivatives, 3a is alkylated with iodoacetamide in the presence of DBU to give 10, from which the 5'-O-DMTr protecting group is in turn removed to give compound 11 (FIG. 3). 1,3-diaza-2-oxophenoxazine 12 is prepared by cleavage of the glycosidic bond in compound 2a by treating it with conc. HCl in water (Fig. 3).

Производные 2а-с, 3а-с, 5b, 6b, 7a-b, 8b, 9а-b, 10, 11 и 12 тестировали на активность относительно вируса варицелла-зостер (штамм OKA (TK+), АТСС VR-795; штамм 07-1 (TK-), предоставлен Shiro Shigeta, Fukushima Medical Center, Japan) и цитомегаловируса (штамм AD-169, АТСС VR-538; штамм Davis, АТСС VR-807) (Таблица).Derivatives 2a-c, 3a-c, 5b, 6b, 7a-b, 8b, 9a-b, 10, 11 and 12 were tested for activity against varicella-zoster virus (strain OKA (TK + ), ATCC VR-795; strain 07-1 (TK - ), provided by Shiro Shigeta, Fukushima Medical Center, Japan) and cytomegalovirus (strain AD-169, ATCC VR-538; Davis strain, ATCC VR-807) (Table).

Относительно вируса варицелла-зостер активность в микромолярных концентрациях проявляют соединения 2а, 3а, 3b, 7а, 9а и 10 (Таблица). При этом на штамме OKA (TK+) производное 2а является самым активным с ЕС50=0.06 мкМ, что в 42 раза больше активности контрольного ацикловира. Цитотоксического или цитостатического эффекта соединения 2а в максимальной исследуемой концентрации (100 мкМ) на клетках HEL не наблюдают.Compounds 2a, 3a, 3b, 7a, 9a and 10 exhibit activity in micromolar concentrations with respect to the varicella-zoster virus (Table). At the same time, on strain OKA (TK + ), derivative 2а is the most active with EC 50 = 0.06 μM, which is 42 times higher than the activity of the control acyclovir. No cytotoxic or cytostatic effect of compound 2а at the maximum tested concentration (100 μM) was observed on HEL cells.

Против цитомегаловируса (штамм Davis) умеренную активность показывают соединения 3а, 3с, 7b, 8b, 9а и 10 (Таблица), сравнимую с активностью ганцикловира. Некоторые соединения проявляют незначительную цитотоксичность на клетках HEL.Compounds 3a, 3c, 7b, 8b, 9a and 10 (Table) show moderate activity against cytomegalovirus (Davis strain), comparable to the activity of ganciclovir. Several compounds show little cytotoxicity on HEL cells.

Таким образом, был получен ряд производных 1,3-диаза-2-оксофеноксазина и исследована их активность относительно представителей семейства герпесвирусов: вируса варицелла-зостер и цитомегаловируса. Производное 2а показывает наибольшую активность относительно вируса варицелла-зостер с ЕС50=0.06 мкМ (штамм OKA (TK+)).Thus, a number of 1,3-diaza-2-oxophenoxazine derivatives were obtained and their activity was investigated against members of the herpesvirus family: varicella-zoster virus and cytomegalovirus. Derivative 2a shows the highest activity against varicella-zoster virus with EC 50 = 0.06 μM (strain OKA (TK + )).

Описание чертежейDescription of drawings

Предлагаемое изобретение иллюстрируют следующие графические материалы:The invention is illustrated by the following graphic materials:

На Фиг. 1 изображена схема химического синтеза соединений 2а-с и 3а-с (реагенты и условия: (a) PPh3, CCl4, CH2Cl2, кипячение; затем 2-аминофенол, DIPEA, комнатная температура; (b) DIPEA, С2Н5ОН, кипячение, затем водн. NH3, комнатная температура; (с) DMTr-Cl, Ру, комнатная температура).FIG. 1 shows the scheme of the chemical synthesis of compounds 2а-с and 3а-с (reagents and conditions: (a) PPh 3 , CCl 4 , CH 2 Cl 2 , reflux; then 2-aminophenol, DIPEA, room temperature; (b) DIPEA, C 2 H 5 OH, reflux, then aq NH 3 , room temperature; (c) DMTr-Cl, Py, room temperature).

На Фиг. 2 изображена схема химического синтеза соединений 5b, 6b, 7a-b, 8b, 9а-b (реагенты и условия: (а) PPh3, CCl4, CH2Cl2, кипячение; затем 2-аминорезорцин, DBU, комнатная температура; (b) бензил-N-(2-гидроксиэтил)карбамат, DEAD, PPh3, CH2Cl2, комнатная температура; (с) DIPEA, С2Н5ОН, кипячение, затем водн. NH3, комнатная температура; (d) Н2/Pd, СН3ОН, комнатная температура; (е) DMTr-Cl, Ру, комнатная температура).FIG. 2 shows a scheme for the chemical synthesis of compounds 5b, 6b, 7a-b, 8b, 9a-b (reagents and conditions: (a) PPh 3 , CCl 4 , CH 2 Cl 2 , reflux; then 2-aminoresorcinol, DBU, room temperature; (b) benzyl-N- (2-hydroxyethyl) carbamate, DEAD, PPh 3 , CH 2 Cl 2 , room temperature; (c) DIPEA, C 2 H 5 OH, reflux, then aq NH 3 , room temperature; ( d) H 2 / Pd, CH 3 OH, room temperature; (f) DMTr-Cl, Py, room temperature).

На Фиг. 3 изображена схема химического синтеза соединений 10, 11 и 12 (реагенты и условия: (а) йодацетамид, DBU, CH2Cl2, комнатная температура; (b) уксусная кислота/H2O, 50°С; (с) конц. HCl/H2O, 60°С).FIG. 3 shows a scheme for the chemical synthesis of compounds 10, 11 and 12 (reagents and conditions: (a) iodoacetamide, DBU, CH 2 Cl 2 , room temperature; (b) acetic acid / H 2 O, 50 ° C; (c) conc. HCl / H 2 O, 60 ° C).

В таблице показаны антигерпетическая активность и цитотоксичность производных 1,3-диаза-2-оксофеноксазина.The table shows the antiherpetic activity and cytotoxicity of 1,3-diaza-2-oxophenoxazine derivatives.

Осуществление изобретенияImplementation of the invention

Изобретение иллюстрируют следующие примеры.The invention is illustrated by the following examples.

Пример 1. 3-(2'-дезокси-β-D-рибофуранозил)-1,3-диаза-2-оксофеноксазин (2а)Example 1.3- (2'-deoxy-β-D-ribofuranosyl) -1,3-diaza-2-oxophenoxazine (2a)

К раствору 1-(3',5'-ди-O-ацетил-2'-дезокси-β-D-рибофуранозил)-5-бромурацила 1а (1,96 г, 5,0 ммоль) и PPh3 (2,63 г, 10 ммоль) в CH2Cl2 (50 мл) добавляют тетрахлорид углерода (10 мл), и полученный в результате раствор кипятят с обратным холодильником в течение 5 часов. Затем, реакционную смесь упаривают до пены в вакууме, растворяют в CH2Cl2 (50 мл) и добавляют 2-аминофенол (0,82 г, 7,5 ммоль), с последующим добавлением DIPEA (1,3 мл, 7,5 ммоль). После 3 часов выдерживания при комнатной температуре реакционную смесь концентрируют до коричневой пены. Пену растворяют в смеси абсолютного C2H5OH (40 мл) и DIPEA (10 мл) и кипятят с обратным холодильником в атмосфере N2 в течение 72 часов. После охлаждения до комнатной температуры добавляют водный NH3 (5 мл), и смесь нагревают при 40°С в течение 3 часов, с последующим упариванием в вакууме. Полученный остаток очищают колоночной хроматографией на силикагеле (0-6% МеОН в CH2Cl2), получая требуемый продукт 2а; выход 21% (0,34 г, 1,07 ммоль); 1Н ЯМР (600 МГц, DMSO-d6) δ 10,61 (уш с, 1Н), 7,55 (с, 1Н), 6,89-6,77 (м, 4Н), 6,13 (т, 1Н, J=6,6 Гц), 5,19 (д, 1H, J=4,2 Гц), 5,07 (т, 1Н, J=5,1 Гц), 4,24-4,20 (м, 1H), 3,79-3,75 (м, 1Н), 3,63-3,53 (м, 2Н), 2,11-2,05 (м, 1H), 2,04-1,97 (м, 1H). HRMS (ESI) m/z: рассчитано для C15H14N3O5 - [М-Н]-: 316,0939; найдено 316,0894.To a solution of 1- (3 ', 5'-di-O-acetyl-2'-deoxy-β-D-ribofuranosyl) -5-bromouracil 1а (1.96 g, 5.0 mmol) and PPh 3 (2, 63 g, 10 mmol) in CH 2 Cl 2 (50 ml), carbon tetrachloride (10 ml) was added and the resulting solution was refluxed for 5 hours. Then, the reaction mixture was evaporated to a foam in vacuo, dissolved in CH 2 Cl 2 (50 ml) and 2-aminophenol (0.82 g, 7.5 mmol) was added, followed by the addition of DIPEA (1.3 ml, 7.5 mmol). After 3 hours at room temperature, the reaction mixture is concentrated to a brown foam. The foam was dissolved in a mixture of absolute C 2 H 5 OH (40 ml) and DIPEA (10 ml) and refluxed under N 2 for 72 hours. After cooling to room temperature, aqueous NH 3 (5 ml) was added and the mixture was heated at 40 ° C for 3 hours, followed by evaporation in vacuo. The resulting residue was purified by silica gel column chromatography (0-6% MeOH in CH 2 Cl 2 ) to give the desired product 2a; yield 21% (0.34 g, 1.07 mmol); 1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.61 (br s, 1H), 7.55 (s, 1H), 6.89-6.77 (m, 4H), 6.13 (t , 1H, J = 6.6 Hz), 5.19 (d, 1H, J = 4.2 Hz), 5.07 (t, 1H, J = 5.1 Hz), 4.24-4.20 (m, 1H), 3.79-3.75 (m, 1H), 3.63-3.53 (m, 2H), 2.11-2.05 (m, 1H), 2.04-1 , 97 (m, 1H). HRMS (ESI) m / z: calculated for C 15 H 14 N 3 O 5 - [M-H] - : 316.0939; found 316.0894.

Пример 2. 3-(β-D-рибофуранозил)-1,3-диаза-2-оксофеноксазин (2b)Example 2. 3- (β-D-ribofuranosyl) -1,3-diaza-2-oxophenoxazine (2b)

К раствору 1-(2',3',5'-три-O-ацетил-β-D-рибофуранозил)-5-бромурацила 1b (2,25 г, 5,0 ммоль) и PPh3 (2,63 г, 10 ммоль) в CH2Cl2 (50 мл) добавляют тетрахлорид углерода (10 мл), и полученный в результате раствор кипятят с обратным холодильником в течение 5 часов. Затем, реакционную смесь упаривают до пены в вакууме, растворяют в CH2Cl2 (50 мл) и добавляют 2-аминофенол (0,82 г, 7,5 ммоль), с последующим добавлением DIPEA (1,3 мл, 7,5 ммоль). После 3 часов выдерживания при комнатной температуре реакционную смесь концентрируют до коричневой пены. Пену растворяют в смеси абсолютного С2Н5ОН (40 мл) и DIPEA (10 мл) и кипятят с обратным холодильником в атмосфере N2 в течение 72 часов. После охлаждения до комнатной температуры добавляют водный NH3 (5 мл), и смесь нагревают при 40°С в течение 3 часов, с последующим упариванием в вакууме. Полученный остаток очищают колоночной хроматографией на силикагеле (0-6% МеОН в CH2Cl2), получая требуемый продукт 2b; выход 19% (0,32 г, 0,96 ммоль); 1Н ЯМР (600 МГц, DMSO-d6) δ 10,60 (уш с, 1Н), 7,61 (с, 1Н), 6,89-6,77 (м, 4Н), 5,75 (д, 1Н, J=4,0 Гц), 5,27 (д, 1H, J=5,2 Гц), 5,15 (т, 1Н, J=4,9 Гц), 4,97 (д, 1Н, J=4,8 Гц), 3,99-3,94 (м, 2Н), 3,84-3,81 (м, 1H), 3,69-3,64 (м, 1Н), 3,59-3,54 (м, 1Н). HRMS (ESI) m/z: рассчитано для C15H14N3O6 - [М-Н]-: 332,0888; найдено 332,0843.To a solution of 1- (2 ', 3', 5'-tri-O-acetyl-β-D-ribofuranosyl) -5-bromouracil 1b (2.25 g, 5.0 mmol) and PPh 3 (2.63 g , 10 mmol) in CH 2 Cl 2 (50 ml), carbon tetrachloride (10 ml) was added and the resulting solution was refluxed for 5 hours. Then, the reaction mixture was evaporated to a foam in vacuo, dissolved in CH 2 Cl 2 (50 ml) and 2-aminophenol (0.82 g, 7.5 mmol) was added, followed by the addition of DIPEA (1.3 ml, 7.5 mmol). After 3 hours at room temperature, the reaction mixture is concentrated to a brown foam. The foam was dissolved in a mixture of absolute C 2 H 5 OH (40 ml) and DIPEA (10 ml) and refluxed under N 2 for 72 hours. After cooling to room temperature, aqueous NH 3 (5 ml) was added and the mixture was heated at 40 ° C for 3 hours, followed by evaporation in vacuo. The resulting residue was purified by silica gel column chromatography (0-6% MeOH in CH 2 Cl 2 ) to give the desired product 2b; yield 19% (0.32 g, 0.96 mmol); 1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.60 (br s, 1H), 7.61 (s, 1H), 6.89-6.77 (m, 4H), 5.75 (d , 1H, J = 4.0 Hz), 5.27 (d, 1H, J = 5.2 Hz), 5.15 (t, 1H, J = 4.9 Hz), 4.97 (d, 1H , J = 4.8 Hz), 3.99-3.94 (m, 2H), 3.84-3.81 (m, 1H), 3.69-3.64 (m, 1H), 3, 59-3.54 (m, 1H). HRMS (ESI) m / z: calculated for C 15 H 14 N 3 O 6 - [M-H] - : 332.0888; found 332.0843.

Пример 3. 3-(2'-O-метил-β-D-рибофуранозил)-1,3-диаза-2-оксофеноксазин (2с)Example 3. 3- (2'-O-methyl-β-D-ribofuranosyl) -1,3-diaza-2-oxophenoxazine (2c)

К раствору 1-(3',5'-ди-O-ацетил-2'-O-метил-β-D-рибофуранозил)-5-бромурацила 1с (2,11 г, 5,0 ммоль) и PPh3 (2,63 г, 10 ммоль) в CH2Cl2 (50 мл) добавляют тетрахлорид углерода (10 мл), и полученный в результате раствор кипятят с обратным холодильником в течение 5 часов. Затем, реакционную смесь упаривают до пены в вакууме, растворяют в CH2Cl2 (50 мл) и добавляют 2-аминофенол (0,82 г, 7,5 ммоль), с последующим добавлением DIPEA (1,3 мл, 7,5 ммоль). После 3 часов выдерживания при комнатной температуре реакционную смесь концентрируют до коричневой пены. Пену растворяют в смеси абсолютного С2Н5ОН (40 мл) и DIPEA (10 мл) и кипятят с обратным холодильником в атмосфере N2 в течение 72 часов. После охлаждения до комнатной температуры добавляют водный NH3 (5 мл), и смесь нагревают при 40°С в течение 3 часов, с последующим упариванием в вакууме. Полученный остаток очищают колоночной хроматографией на силикагеле (0-6% МеОН в CH2Cl2), получая требуемый продукт 2с; выход 18% (0,32 г, 0,92 ммоль); 1Н ЯМР (600 МГц, DMSO-d6) δ 10,62 (уш с, 1Н), 7,67 (с, 1Н), 6,90-6,77 (м, 4Н), 5,82 (д, 1Н, J=4,3 Гц), 5,40-4,96 (м, 2Н), 4,12-4,09 (м, 1H), 3,84-3,81 (м, 1Н), 3,72-3,66 (м, 2Н), 3,60-3,56 (м, 1Н), 3,39 (с, 3Н). HRMS (ESI) m/z: рассчитано для C16H16N3O6 - [М-Н]-: 346,1045; найдено 346,1008.To a solution of 1- (3 ', 5'-di-O-acetyl-2'-O-methyl-β-D-ribofuranosyl) -5-bromouracil 1c (2.11 g, 5.0 mmol) and PPh 3 ( 2.63 g, 10 mmol) in CH 2 Cl 2 (50 ml), carbon tetrachloride (10 ml) was added and the resulting solution was refluxed for 5 hours. Then, the reaction mixture was evaporated to a foam in vacuo, dissolved in CH 2 Cl 2 (50 ml) and 2-aminophenol (0.82 g, 7.5 mmol) was added, followed by the addition of DIPEA (1.3 ml, 7.5 mmol). After 3 hours at room temperature, the reaction mixture is concentrated to a brown foam. The foam was dissolved in a mixture of absolute C 2 H 5 OH (40 ml) and DIPEA (10 ml) and refluxed under N 2 for 72 hours. After cooling to room temperature, aqueous NH 3 (5 ml) was added and the mixture was heated at 40 ° C for 3 hours, followed by evaporation in vacuo. The resulting residue was purified by silica gel column chromatography (0-6% MeOH in CH 2 Cl 2 ) to give the desired product 2c; yield 18% (0.32 g, 0.92 mmol); 1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.62 (br s, 1H), 7.67 (s, 1H), 6.90-6.77 (m, 4H), 5.82 (d , 1H, J = 4.3 Hz), 5.40-4.96 (m, 2H), 4.12-4.09 (m, 1H), 3.84-3.81 (m, 1H), 3.72-3.66 (m, 2H), 3.60-3.56 (m, 1H), 3.39 (s, 3H). HRMS (ESI) m / z: calculated for C 16 H 16 N 3 O 6 - [M-H] - : 346.1045; found 346.1008.

Пример 4. 3-(5'-O-диметокситритил-2'-дезокси-β-D-рибофуранозил)-1,3-диаза-2-оксофеноксазин (3a)Example 4 3- (5'-O-dimethoxytrityl-2'-deoxy-β-D-ribofuranosyl) -1,3-diaza-2-oxophenoxazine (3a)

Соединение 2а (0,13 г, 0,40 ммоль) упаривают с безводным пиридином (10 мл), затем растворяют его в безводном пиридине (10 мл) и добавляют одной порцией при комнатной температуре 4,4'-диметокситритилхлорид (0,18 г, 0,50 ммоль). После 3 часов выдерживания при комнатной температуре реакцию прекращают добавлением 5% водного раствора NaHCO3 (5 мл), и продукт экстрагируют CH2Cl2 (2×20 мл). Объединенные органические слои сушат над Na2SO4, фильтруют, концентрируют и упаривают с толуолом (3×10 мл). Очистку осуществляют колоночной хроматографией на силикагеле (0-3% МеОН в CH2Cl2 в присутствии 0,1% TEA), получая требуемый продукт 3а; выход 77% (0,19 г, 0,30 ммоль); 1Н ЯМР (600 МГц, DMSO-d6) δ 10,61 (уш с, 1Н), 7,45-7,19 (м, 10Н, DMTr), 6,93-6,78 (м, 7Н), 6,56 (д, 1Н, J=7,3 Гц), 6,12 (т, 1Н, J=6,4 Гц), 5,29 (д, 1Н, J=4,3 Гц), 4,31-4,26 (м, 1Н), 3,92-3,87 (м, 1H), 3,71 (с, 3Н), 3,70 (с, 3Н), 3,29-3,25 (м, 1H), 3,15-3,11 (м, 1Н), 2,20-2,12 (м, 2Н). HRMS (ESI) m/z: рассчитано для C36H32N3O7 - [М-Н]-: 618,2246; найдено 618,2164.Compound 2a (0.13 g, 0.40 mmol) was evaporated with anhydrous pyridine (10 ml), then dissolved in anhydrous pyridine (10 ml) and 4,4'-dimethoxytrityl chloride (0.18 g) was added in one portion at room temperature , 0.50 mmol). After 3 hours at room temperature, the reaction was terminated by the addition of 5% aqueous NaHCO 3 solution (5 ml) and the product was extracted with CH 2 Cl 2 (2 × 20 ml). The combined organic layers are dried over Na 2 SO 4 , filtered, concentrated and evaporated with toluene (3 × 10 ml). Purification is carried out by column chromatography on silica gel (0-3% MeOH in CH 2 Cl 2 in the presence of 0.1% TEA) to give the desired product 3a; yield 77% (0.19 g, 0.30 mmol); 1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.61 (br s, 1H), 7.45-7.19 (m, 10H, DMTr), 6.93-6.78 (m, 7H) , 6.56 (d, 1H, J = 7.3 Hz), 6.12 (t, 1H, J = 6.4 Hz), 5.29 (d, 1H, J = 4.3 Hz), 4 , 31-4.26 (m, 1H), 3.92-3.87 (m, 1H), 3.71 (s, 3H), 3.70 (s, 3H), 3.29-3.25 (m, 1H), 3.15-3.11 (m, 1H), 2.20-2.12 (m, 2H). HRMS (ESI) m / z: calculated for C 36 H 32 N 3 O 7 - [M-H] - : 618.2246; found 618.2164.

Пример 5. 3-(5'-O-диметокситритил-β-D-рибофуранозил)-1,3-диаза-2-оксофеноксазин (3b)Example 5. 3- (5'-O-dimethoxytrityl-β-D-ribofuranosyl) -1,3-diaza-2-oxophenoxazine (3b)

Соединение 2b (0,13 г, 0,40 ммоль) упаривают с безводным пиридином (10 мл), затем растворяют его в безводном пиридине (10 мл) и добавляют одной порцией при комнатной температуре 4,4'-диметокситритилхлорид (0,18 г, 0,50 ммоль). После 3 часов выдерживания при комнатной температуре реакцию прекращают добавлением 5% водного раствора NaHCO3 (5 мл), и продукт экстрагируют CH2Cl2 (2×20 мл). Объединенные органические слои сушат над Na2SO4, фильтруют, концентрируют и упаривают с толуолом (3×10 мл). Очистку осуществляют колоночной хроматографией на силикагеле (0-3% МеОН в CH2Cl2 в присутствии 0,1% TEA), получая требуемый продукт 3b; выход 67% (0,17 г, 0,27 ммоль); 1Н ЯМР (600 МГц, DMSO-d6) δ 10,62 (уш с, 1H), 7,45-7,20 (м, 10Н), 6,92-6,88 (м, 4Н), 6,88-6,79 (м, 3Н), 6,48 (дд, 1Н, J=1,5 Гц, J=7,7 Гц), 5,72 (д, 1Н, J=3,8 Гц), 5,41 (д, 1H, J=5,3 Гц), 5,08 (д, 1Н, J=6,1 Гц), 4,13-4,09 (м, 1Н), 4,09-4,05 (м, 1Н), 3,98-3,95 (м, 1Н), 3,71 (с, 3Н), 3,70 (с, 3Н), 3,32-3,29 (м, 1Н), 3,20-3,16 (м, 1Н). HRMS (ESI) m/z: рассчитано для C36H32N3O8 -[М-Н]-: 634,2195; найдено 634,2110.Compound 2b (0.13 g, 0.40 mmol) was evaporated with anhydrous pyridine (10 ml), then it was dissolved in anhydrous pyridine (10 ml) and 4,4'-dimethoxytrityl chloride (0.18 g) was added in one portion at room temperature , 0.50 mmol). After 3 hours at room temperature, the reaction was terminated by the addition of 5% aqueous NaHCO 3 solution (5 ml) and the product was extracted with CH 2 Cl 2 (2 × 20 ml). The combined organic layers are dried over Na 2 SO 4 , filtered, concentrated and evaporated with toluene (3 × 10 ml). Purification is carried out by column chromatography on silica gel (0-3% MeOH in CH 2 Cl 2 in the presence of 0.1% TEA) to give the desired product 3b; yield 67% (0.17 g, 0.27 mmol); 1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.62 (br s, 1H), 7.45-7.20 (m, 10H), 6.92-6.88 (m, 4H), 6 , 88-6.79 (m, 3H), 6.48 (dd, 1H, J = 1.5 Hz, J = 7.7 Hz), 5.72 (d, 1H, J = 3.8 Hz) , 5.41 (d, 1H, J = 5.3 Hz), 5.08 (d, 1H, J = 6.1 Hz), 4.13-4.09 (m, 1H), 4.09- 4.05 (m, 1H), 3.98-3.95 (m, 1H), 3.71 (s, 3H), 3.70 (s, 3H), 3.32-3.29 (m, 1H), 3.20-3.16 (m, 1H). HRMS (ESI) m / z: calculated for C 36 H 32 N 3 O 8 - [M-H] - : 634.2195; found 634.2110.

Пример 6. 3-(5'-O-диметокситритил-2'-O-метил-β-D-рибофуранозил)-1,3-диаза-2-оксофеноксазин (3с)Example 6 3- (5'-O-dimethoxytrityl-2'-O-methyl-β-D-ribofuranosyl) -1,3-diaza-2-oxophenoxazine (3c)

Соединение 2с (0,14 г, 0,40 ммоль) упаривают с безводным пиридином (10 мл), затем растворяют его в безводном пиридине (10 мл) и добавляют одной порцией при комнатной температуре 4,4'-диметокситритилхлорид (0,18 г, 0,50 ммоль). После 3 часов выдерживания при комнатной температуре реакцию прекращают добавлением 5% водного раствора NaHCO3 (5 мл), и продукт экстрагируют CH2Cl2 (2×20 мл). Объединенные органические слои сушат над Na2SO4, фильтруют, концентрируют и упаривают с толуолом (3×10 мл). Очистку осуществляют колоночной хроматографией на силикагеле (0-3% МеОН в CH2Cl2 в присутствии 0,1% TEA), получая требуемый продукт 3с; выход 73% (0,19 г, 0,30 ммоль); 1Н ЯМР (600 МГц, DMSO-d6) δ 10,65 (уш с, 1Н), 7,45-7.20 (м, 10H), 6.92-6,88 (м, 4Н), 6,88-6,78 (м, 3Н), 6,46 (дд, 1H, J=1,4 Гц, J=7,8 Гц), 5,77 (д, 1Н, J=3,3 Гц), 5,15 (д, 1Н, J=6,9 Гц), 4,24-4,20 (м, 1H), 3,97-3,94 (м, 1Н), 3,78-3,76 (м, 1Н), 3,71 (с, 3Н), 3,70 (с, 3Н), 3,44 (с, 3Н), 3,36-3,32 (м, 1Н), 3,21-3,17 (м, 1Н). HRMS (ESI) m/z: рассчитано для C37H34N3O8 -[М-Н]-: 648,2351; найдено 648,2303.Compound 2c (0.14 g, 0.40 mmol) was evaporated with anhydrous pyridine (10 ml), then dissolved in anhydrous pyridine (10 ml) and 4,4'-dimethoxytrityl chloride (0.18 g) was added in one portion at room temperature , 0.50 mmol). After 3 hours at room temperature, the reaction was terminated by the addition of 5% aqueous NaHCO 3 solution (5 ml) and the product was extracted with CH 2 Cl 2 (2 × 20 ml). The combined organic layers are dried over Na 2 SO 4 , filtered, concentrated and evaporated with toluene (3 × 10 ml). Purification is carried out by column chromatography on silica gel (0-3% MeOH in CH 2 Cl 2 in the presence of 0.1% TEA) to give the desired product 3c; yield 73% (0.19 g, 0.30 mmol); 1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.65 (br s, 1H), 7.45-7.20 (m, 10H), 6.92-6.88 (m, 4H), 6.88-6 , 78 (m, 3H), 6.46 (dd, 1H, J = 1.4 Hz, J = 7.8 Hz), 5.77 (d, 1H, J = 3.3 Hz), 5.15 (d, 1H, J = 6.9 Hz), 4.24-4.20 (m, 1H), 3.97-3.94 (m, 1H), 3.78-3.76 (m, 1H ), 3.71 (s, 3H), 3.70 (s, 3H), 3.44 (s, 3H), 3.36-3.32 (m, 1H), 3.21-3.17 ( m, 1H). HRMS (ESI) m / z: calculated for C 37 H 34 N 3 O 8 - [M-H] - : 648.2351; found 648.2303.

Пример 7. 3',5'-O-дипропионил-4-N-(2,6-дигидроксифенил)-5-бром-2'-дезоксицитозин (5а)Example 7 3 ', 5'-O-dipropionyl-4-N- (2,6-dihydroxyphenyl) -5-bromo-2'-deoxycytosine (5а)

К раствору 1-(3',5'-ди-O-пропионил-2'-дезокси-β-D-рибофуранозил)-5-бромурацила 4а (2,10 г, 5 ммоль) и PPh3 (2,63 г, 10 ммоль) в CH2Cl2 (50 мл) добавляют тетрахлорид углерода (10 мл), и полученный в результате раствор кипятят с обратным холодильником в течение 5 часов. Затем, реакционную смесь упаривают до пены в вакууме, растворяют в CH2Cl2 (50 мл) и добавляют 2-аминорезорцин (1,38 г, 11 ммоль), с последующим добавлением DBU (1,65 мл, 11 ммоль) при 0°С. Полученную в результате смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре и промывают 2% раствором лимонной кислоты (50 мл). Органический слой отделяют, сушат (Na2SO4), фильтруют и концентрируют в вакууме. Остаток очищают колоночной хроматографией на силикагеле (0-10% EtOAc в CH2Cl2). Фракции, содержащие продукт, объединяют и концентрируют в вакууме. Полученный остаток растирают с горячим толуолом, фильтруют и сушат в вакууме, получая требуемый продукт 5а; выход 80% (2,11 г, 4,01 ммоль); 1Н ЯМР (600 МГц, DMSO-d6) δ 9,67 (с, 2Н), 8,22 (с, 1Н), 8,01 (с, 1H), 6,92 (т, J=8,1 Гц, 1Н), 6,36 (д, J=8,1 Гц, 1Н), 6,12 (т, J=6,9 Гц, 1Н), 5,24-5,17 (м, 1Н), 4,34-4,25 (м, 2Н), 4,25-4,18 (м, 1H), 2,45-2,29 (м, 6Н), 1,06 (т, J=7,5 Гц, 3Н), 1,03 (т, J=7,5 Гц, 3Н). HRMS (ESI) m/z: рассчитано для C21H23BrN3O8 - [М-Н]-:524,0674; найдено 524,0621.To a solution of 1- (3 ', 5'-di-O-propionyl-2'-deoxy-β-D-ribofuranosyl) -5-bromouracil 4а (2.10 g, 5 mmol) and PPh 3 (2.63 g , 10 mmol) in CH 2 Cl 2 (50 ml), carbon tetrachloride (10 ml) was added and the resulting solution was refluxed for 5 hours. Then, the reaction mixture was evaporated to foam in vacuo, dissolved in CH 2 Cl 2 (50 ml) and 2-aminoresorcinol (1.38 g, 11 mmol) was added, followed by the addition of DBU (1.65 ml, 11 mmol) at 0 ° C. The resulting mixture was stirred overnight at room temperature and washed with 2% citric acid solution (50 ml). The organic layer is separated, dried (Na 2 SO 4 ), filtered and concentrated in vacuo. The residue was purified by column chromatography over silica gel (0-10% EtOAc in CH 2 Cl 2 ). The fractions containing the product are combined and concentrated in vacuo. The resulting residue is triturated with hot toluene, filtered and dried under vacuum to give the desired product 5a; 80% yield (2.11 g, 4.01 mmol); 1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.67 (s, 2H), 8.22 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 6.92 (t, J = 8, 1 Hz, 1H), 6.36 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.12 (t, J = 6.9 Hz, 1H), 5.24-5.17 (m, 1H) , 4.34-4.25 (m, 2H), 4.25-4.18 (m, 1H), 2.45-2.29 (m, 6H), 1.06 (t, J = 7, 5 Hz, 3H), 1.03 (t, J = 7.5 Hz, 3H). HRMS (ESI) m / z: calculated for C 21 H 23 BrN 3 O 8 - [M-H] - : 524.0674; found 524.0621.

Пример 8. 2',3',5'-O-триацетил-4-N-(2,6-дигидроксифенил)-5-бромцитозин (5b)Example 8 2 ', 3', 5'-O-triacetyl-4-N- (2,6-dihydroxyphenyl) -5-bromocytosine (5b)

К раствору 1-(2',3',5'-три-O-ацетил-β-D-рибофуранозил)-5-бромурацила 4b (2,25 г, 5 ммоль) и PPh3 (2,63 г, 10 ммоль) в CH2Cl2 (50 мл) добавляют тетрахлорид углерода (10 мл), и полученный в результате раствор кипятят с обратным холодильником в течение 5 часов. Затем, реакционную смесь упаривают до пены в вакууме, растворяют в CH2Cl2 (50 мл) и добавляют 2-аминорезорцин (1,38 г, 11 ммоль), с последующим добавлением DBU (1,65 мл, 11 ммоль) при 0°С. Полученную в результате смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре и промывают 2% раствором лимонной кислоты (50 мл). Органический слой отделяют, сушат (Na2SO4), фильтруют и концентрируют в вакууме. Остаток очищают колоночной хроматографией на силикагеле (0-10% EtOAc в CH2Cl2). Фракции, содержащие продукт, объединяют и концентрируют в вакууме. Полученный остаток растирают с горячим толуолом, фильтруют и сушат в вакууме, получая требуемый продукт 5b; выход 82% (2,29 г, 4,12 ммоль); 1Н ЯМР (600 МГц, DMSO-d6) δ 9,59 (с, 2Н), 8,29 (уш с, 1Н), 8,16 (с, 1Н), 6,92 (т, J=8,1 Гц, 1H), 6,36 (д, J=8,1 Гц, 1Н), 5,87(д, J=4,6 Гц, 1Н), 5,48 (дд, J=4,7 Гц, J=6,3 Гц, 1Н), 5,36-5,33 (м, 1H), 4,36-4,31 (м, 1Н), 4,27-4,21 (м, 3Н), 2,07 (с, 3Н), 2,06 (с, 3Н), 2,06 (с, 3Н). HRMS (ESI) m/z: рассчитано для C21H21BrN3O10 - [М-Н]-: 554,0416; найдено 554,0359.To a solution of 1- (2 ', 3', 5'-tri-O-acetyl-β-D-ribofuranosyl) -5-bromouracil 4b (2.25 g, 5 mmol) and PPh 3 (2.63 g, 10 mmol) in CH 2 Cl 2 (50 ml), carbon tetrachloride (10 ml) is added and the resulting solution is refluxed for 5 hours. Then, the reaction mixture was evaporated to foam in vacuo, dissolved in CH 2 Cl 2 (50 ml) and 2-aminoresorcinol (1.38 g, 11 mmol) was added, followed by the addition of DBU (1.65 ml, 11 mmol) at 0 ° C. The resulting mixture was stirred overnight at room temperature and washed with 2% citric acid solution (50 ml). The organic layer is separated, dried (Na 2 SO 4 ), filtered and concentrated in vacuo. The residue was purified by column chromatography over silica gel (0-10% EtOAc in CH 2 Cl 2 ). The fractions containing the product are combined and concentrated in vacuo. The resulting residue is triturated with hot toluene, filtered and dried under vacuum to give the desired product 5b; yield 82% (2.29 g, 4.12 mmol); 1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.59 (s, 2H), 8.29 (br s, 1H), 8.16 (s, 1H), 6.92 (t, J = 8 , 1 Hz, 1H), 6.36 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 5.87 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 5.48 (dd, J = 4.7 Hz, J = 6.3 Hz, 1H), 5.36-5.33 (m, 1H), 4.36-4.31 (m, 1H), 4.27-4.21 (m, 3H) , 2.07 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 2.06 (s, 3H). HRMS (ESI) m / z: calculated for C 21 H 21 BrN 3 O 10 - [M-H] - : 554.0416; found 554.0359.

Пример 9. 3-(2'-дезокси-β-D-рибофуранозил)-9-(2-N-бензилкарбамилэтокси)-1,3-диаза-2-оксофеноксазин (6а)Example 9 3- (2'-deoxy-β-D-ribofuranosyl) -9- (2-N-benzylcarbamylethoxy) -1,3-diaza-2-oxophenoxazine (6а)

К соединению 5а (1,58 г, 3,00 ммоль) последовательно добавляют CH2Cl2 (20 мл), PPh3 (1,18 г; 4,5 ммоль), бензил N-(2-гидроксиэтил)карбамат (0,76 г; 3,90 ммоль) и DEAD (720 мкл; 4,5 ммоль) при 0°С в атмосфере N2, и полученный в результате раствор перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. После упаривания полученную пену растворяют в смеси абсолютного С2Н5ОН (25 мл) и DIPEA (5 мл) и кипятят с обратным холодильником в атмосфере N2 в течение 72 часов. Затем, добавляют водный NH3 (3 мл), и смесь нагревают при 40°С в течение 3 часов. После концентрирования в вакууме остаток очищают колоночной хроматографией на силикагеле (0-6% МеОН в CH2Cl2), получая 6а; выход 37% (0,57 г, 1,11 ммоль); 1Н ЯМР (600 МГц, DMSO-d6) δ 7,73 (т, J=5,2 Гц, 1Н), 7,65 (с, 1Н), 7,39-7,27 (м, 5Н), 6,80 (дд, J=8,3 Гц, J=8,2 Гц, 1Н), 6,61 (д, J=8,3 Гц, 1Н), 6,45 (д, J=8,2 Гц, 1H), 6,13 (т, J=6,7 Гц, 1Н), 5,05 (с, 2Н), 4,26-4,20 (м, 1Н), 4,19-3,99 (м, 3Н), 3,94 (т, J=4,8 Гц, 2Н), 3,80-3,77 (м, 1H), 3,63-3,59 (м, 1Н), 3,59-3,55 (м, 1Н), 3,42 (дт, J=5,2 Гц, J=4,8 Гц, 2Н). HRMS (ESI) m/z: рассчитано для C25H27N4O8 + [М+Н]+: 511,1823; найдено 511,1801.To compound 5а (1.58 g, 3.00 mmol) CH 2 Cl 2 (20 ml), PPh 3 (1.18 g; 4.5 mmol), benzyl N- (2-hydroxyethyl) carbamate (0 , 76 g; 3.90 mmol) and DEAD (720 μl; 4.5 mmol) at 0 ° C under N 2 , and the resulting solution was stirred overnight at room temperature. After evaporation, the resulting foam was dissolved in a mixture of absolute C 2 H 5 OH (25 ml) and DIPEA (5 ml) and refluxed under N 2 for 72 hours. Then, aqueous NH 3 (3 ml) was added and the mixture was heated at 40 ° C for 3 hours. After concentration in vacuo, the residue was purified by silica gel column chromatography (0-6% MeOH in CH 2 Cl 2 ) to give 6a; yield 37% (0.57 g, 1.11 mmol); 1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.73 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.39-7.27 (m, 5H) , 6.80 (dd, J = 8.3 Hz, J = 8.2 Hz, 1H), 6.61 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.45 (d, J = 8, 2 Hz, 1H), 6.13 (t, J = 6.7 Hz, 1H), 5.05 (s, 2H), 4.26-4.20 (m, 1H), 4.19-3, 99 (m, 3H), 3.94 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.80-3.77 (m, 1H), 3.63-3.59 (m, 1H), 3 , 59-3.55 (m, 1H), 3.42 (dt, J = 5.2 Hz, J = 4.8 Hz, 2H). HRMS (ESI) m / z: calculated for C 25 H 27 N 4 O 8 + [M + H] + : 511.1823; found 511.1801.

Пример 10. 3-(β-D-рибофуранозил)-9-(2-N-бензилкарбамилэтокси)-1,3-диаза-2-оксофеноксазин (6b)Example 10 3- (β-D-ribofuranosyl) -9- (2-N-benzylcarbamylethoxy) -1,3-diaza-2-oxophenoxazine (6b)

К соединению 5b (1,66 г, 3,00 ммоль) последовательно добавляют CH2Cl2 (20 мл), PPh3 (1,18 г; 4,5 ммоль), бензил N-(2-гидроксиэтил)карбамат (0,76 г; 3,90 ммоль) и DEAD (720 мкл; 4,5 ммоль) при 0°С в атмосфере N2, и полученный в результате раствор перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. После упаривания полученную пену растворяют в смеси абсолютного С2Н5ОН (25 мл) и DIPEA (5 мл) и кипятят с обратным холодильником в атмосфере N2 в течение 72 часов. Затем, добавляют водный NH3 (3 мл), и смесь нагревают при 40°С в течение 3 часов. После концентрирования в вакууме остаток очищают колоночной хроматографией на силикагеле (0-6% МеОН в CH2Cl2), получая 6b; выход 34% (0,54 г, 1,02 ммоль); 1Н ЯМР (600 МГц, DMSO-d6) δ 9,81 (уш с, 1Н), 7,74 (уш с, 2Н), 7,37-7,28 (м, 5Н), 6,80 (дд, J=8,3 Гц, J=8,1 Гц, 1Н), 6,61 (д, J=8,3 Гц, 1Н), 6,45 (д, J=8,1 Гц, 1Н), 5,76 (д, J=3,6 Гц, 1Н), 5,28 (д, J=5,0 Гц, 1Н), 5,16 (т, J=4,9 Гц, 1Н), 5,05 (с, 2Н), 4,98 (д, J=5,0 Гц, 1Н), 3,99-3,92 (м, 4Н), 3,85-3,81 (м, 1Н), 3,70-3,65 (м, 1Н), 3,59-3,55 (м, 1Н), 3,45-3,40 (м, 2Н). HRMS (ESI) m/z: рассчитано для C25H27N4O9 + [М+Н]+: 527,1773; найдено 527,1758.To compound 5b (1.66 g, 3.00 mmol) CH 2 Cl 2 (20 ml), PPh 3 (1.18 g; 4.5 mmol), benzyl N- (2-hydroxyethyl) carbamate (0 , 76 g; 3.90 mmol) and DEAD (720 μl; 4.5 mmol) at 0 ° C under N 2 , and the resulting solution was stirred overnight at room temperature. After evaporation, the resulting foam was dissolved in a mixture of absolute C 2 H 5 OH (25 ml) and DIPEA (5 ml) and refluxed under N 2 for 72 hours. Then, aqueous NH 3 (3 ml) was added and the mixture was heated at 40 ° C for 3 hours. After concentration in vacuo, the residue was purified by silica gel column chromatography (0-6% MeOH in CH 2 Cl 2 ) to give 6b; yield 34% (0.54 g, 1.02 mmol); 1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.81 (br s, 1H), 7.74 (br s, 2H), 7.37-7.28 (m, 5H), 6.80 ( dd, J = 8.3 Hz, J = 8.1 Hz, 1H), 6.61 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.45 (d, J = 8.1 Hz, 1H) , 5.76 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 5.28 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 5.16 (t, J = 4.9 Hz, 1H), 5 , 05 (s, 2H), 4.98 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 3.99-3.92 (m, 4H), 3.85-3.81 (m, 1H), 3.70-3.65 (m, 1H), 3.59-3.55 (m, 1H), 3.45-3.40 (m, 2H). HRMS (ESI) m / z: calculated for C 25 H 27 N 4 O 9 + [M + H] + : 527.1773; found 527.1758.

Пример 11. 3-(5'-O-диметокситритил-2'-дезокси-β-D-рибофуранозил)-9-(2-N-бензилкарбамилэтокси)-1,3-диаза-2-оксофеноксазин (8а)Example 11 3- (5'-O-dimethoxytrityl-2'-deoxy-β-D-ribofuranosyl) -9- (2-N-benzylcarbamylethoxy) -1,3-diaza-2-oxophenoxazine (8а)

Соединение 6а (0,20 г, 0,4 ммоль) упаривают с безводным пиридином (10 мл), затем растворяют его в безводном пиридине (10 мл) и добавляют одной порцией 4,4'-диметокситритилхлорид (0,17 г, 0,50 ммоль) при комнатной температуре. После выдерживания в течение 3 часов при комнатной температуре реакцию прекращают добавлением 5% водного раствора NaHCO3 (10 мл), и продукт экстрагируют CH2Cl2 (2×15 мл). Объединенные органические слои сушат над Na2SO4, фильтруют, концентрируют и упаривают с толуолом (3×10 мл). Очистку осуществляют колоночной хроматографией на силикагеле (0-4% МеОН в CH2Cl2 в присутствии 0,1% TEA), получая требуемый продукт 8а; выход 77% (0,25 г, 0,31 ммоль); 1Н ЯМР (600 МГц, DMSO-d6) δ 9,82 (уш с, 1Н), 7,75 (уш с, 1H), 7,44-7,19 (м, 15Н), 6,93-6,85 (м, 4Н), 6,79 (дд, J=8,2 Гц, J=8,1 Гц, 1Н), 6,60 (д, J=8,2 Гц, 1Н), 6,23 (д, J=8,1 Гц, 1Н), 6,13 (т, J=6,2 Гц, 1Н), 5,30 (д, J=3,9 Гц, 1Н), 5,05 (с, 2Н), 4,32-4,27 (м, 1Н), 3,96-3,89 (м, 3Н), 3,71 (с, 3Н), 3,70 (с, 3Н), 3,46-3,40 (м, 2Н), 3,30-3,25 (м, 1Н), 3,16-3,11 (м, 1Н), 2,23-2,11 (м, 2Н). HRMS (ESI) m/z: рассчитано для C46H45N4O10 + [М+Н]+: 813,3130; найдено 813,3097.Compound 6а (0.20 g, 0.4 mmol) was evaporated with anhydrous pyridine (10 ml), then it was dissolved in anhydrous pyridine (10 ml) and 4,4'-dimethoxytrityl chloride (0.17 g, 0, 50 mmol) at room temperature. After standing for 3 hours at room temperature, the reaction was stopped by the addition of 5% aqueous NaHCO 3 (10 ml) and the product was extracted with CH 2 Cl 2 (2 × 15 ml). The combined organic layers are dried over Na 2 SO 4 , filtered, concentrated and evaporated with toluene (3 × 10 ml). Purification is carried out by column chromatography on silica gel (0-4% MeOH in CH 2 Cl 2 in the presence of 0.1% TEA) to give the desired product 8a; yield 77% (0.25 g, 0.31 mmol); 1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.82 (br s, 1H), 7.75 (br s, 1H), 7.44-7.19 (m, 15H), 6.93- 6.85 (m, 4H), 6.79 (dd, J = 8.2 Hz, J = 8.1 Hz, 1H), 6.60 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6, 23 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.13 (t, J = 6.2 Hz, 1H), 5.30 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 5.05 ( s, 2H), 4.32-4.27 (m, 1H), 3.96-3.89 (m, 3H), 3.71 (s, 3H), 3.70 (s, 3H), 3 , 46-3.40 (m, 2H), 3.30-3.25 (m, 1H), 3.16-3.11 (m, 1H), 2.23-2.11 (m, 2H) ... HRMS (ESI) m / z: calculated for C 46 H 45 N 4 O 10 + [M + H] + : 813.3130; found 813.3097.

Пример 12. 3-(5'-O-диметокситритил-β-D-рибофуранозил)-9-(2-N-бензилкарбамилэтокси)-1,3-диаза-2-оксофеноксазин (8b)Example 12 3- (5'-O-dimethoxytrityl-β-D-ribofuranosyl) -9- (2-N-benzylcarbamylethoxy) -1,3-diaza-2-oxophenoxazine (8b)

Соединение 6b (0,21 г, 0,4 ммоль) упаривают с безводным пиридином (10 мл), затем растворяют его в безводном пиридине (10 мл) и добавляют одной порцией 4,4'-диметокситритилхлорид (0,17 г, 0,50 ммоль) при комнатной температуре. После выдерживания в течение 3 часов при комнатной температуре реакцию прекращают добавлением 5% водного раствора NaHCO3 (10 мл), и продукт экстрагируют CH2Cl2 (2×15 мл). Объединенные органические слои сушат над Na2SO4, фильтруют, концентрируют и упаривают с толуолом (3×10 мл). Очистку осуществляют колоночной хроматографией на силикагеле (0-4% МеОН в CH2Cl2 в присутствии 0,1% TEA), получая требуемый продукт 8b; выход 72% (0,24 г, 0,29 ммоль); 1Н ЯМР (600 МГц, DMSO-d6) δ 9,84 (уш с, 1Н), 7,74 (уш с, 1H), 7,47-7,19 (м, 15Н), 6,92-6,85 (м, 5Н), 6,78 (дд, J=8,4 Гц, J=8,2 Гц, 1Н), 6,60 (д, J=8,4 Гц, 1H), 6,14 (д, J=8,2 Гц, 1Н), 5,73 (д, J=3,5 Гц, 1Н), 5,41 (д, J=5,2 Гц, 1Н), 5,08 (д, J=6,2 Гц, 1Н), 5,05 (с, 2Н), 4,14-4,09 (м, 1Н), 4,00-3,92 (м, 3Н), 3,71 (с, 3Н), 3,70 (с, 3Н), 3,46-3,39 (м, 2Н), 3,32-3,26 (м, 1Н), 3,20-3,16 (м, 1Н). HRMS (ESI) m/z: рассчитано для C46H45N4O11 + [М+Н]+: 829,3079; найдено 829,3040.Compound 6b (0.21 g, 0.4 mmol) was evaporated with anhydrous pyridine (10 ml), then it was dissolved in anhydrous pyridine (10 ml) and 4,4'-dimethoxytrityl chloride (0.17 g, 0, 50 mmol) at room temperature. After standing for 3 hours at room temperature, the reaction was stopped by the addition of 5% aqueous NaHCO 3 (10 ml) and the product was extracted with CH 2 Cl 2 (2 × 15 ml). The combined organic layers are dried over Na 2 SO 4 , filtered, concentrated and evaporated with toluene (3 × 10 ml). Purification is carried out by column chromatography on silica gel (0-4% MeOH in CH 2 Cl 2 in the presence of 0.1% TEA) to give the desired product 8b; yield 72% (0.24 g, 0.29 mmol); 1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.84 (br s, 1H), 7.74 (br s, 1H), 7.47-7.19 (m, 15H), 6.92- 6.85 (m, 5H), 6.78 (dd, J = 8.4 Hz, J = 8.2 Hz, 1H), 6.60 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6, 14 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 5.73 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 5.41 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 5.08 ( d, J = 6.2 Hz, 1H), 5.05 (s, 2H), 4.14-4.09 (m, 1H), 4.00-3.92 (m, 3H), 3.71 (s, 3H), 3.70 (s, 3H), 3.46-3.39 (m, 2H), 3.32-3.26 (m, 1H), 3.20-3.16 (m , 1H). HRMS (ESI) m / z: calculated for C 46 H 45 N 4 O 11 + [M + H] + : 829.3079; found 829.3040.

Пример 13. 3-(2'-дезокси-β-D-рибофуранозил)-9-(2-аминоэтокси)-1,3-диаза-2-оксофеноксазин (7а)Example 13 3- (2'-deoxy-β-D-ribofuranosyl) -9- (2-aminoethoxy) -1,3-diaza-2-oxophenoxazine (7а)

К раствору 6а (0,13 г, 0,25 ммоль) в смеси CH2Cl2 (10 мл) и СН3ОН (10 мл) добавляют 10% Pd/C (20 мг), и полученную в результате суспензию дегазируют и перемешивают в течение ночи в атмосфере водорода. После упаривания добавляют к остатку С2Н5ОН (10 мл), и катализатор отфильтровывают. Раствор концентрируют в вакууме, и полученный твердый остаток растирают с ацетонитрилом, фильтруют и сушат, получая требуемый продукт 7а; выход 85% (0,08 г, 0,21 ммоль); 1Н ЯМР (600 МГц, DMSO-d6) δ 8,53 (уш с, 3Н), 7,67 (с, 1H), 6,84 (дд, 1Н, J=8,3 Гц, J=8,2 Гц), 6,67 (д, 1H, J=8,3 Гц), 6,50 (д, 1H, J=8,2 Гц); 6,13 (т, 1Н, J=6,7 Гц), 5,41-4,90 (м, 2Н), 4,25-4,22 (м, 1H), 4,19-4,14 (м, 2Н), 3,80-3,77 (м, 1Н), 3,63-3,59 (м, 1Н), 3,59-3,55 (м, 1Н), 3,26-3,22 (м, 2Н), 2,14-2,07 (м, 1Н), 2,05-1,98 (м, 1Н). HRMS (ESI) m/z: рассчитано для C17H19N4O6 - [М-Н]-: 375,1310; найдено 375,1258.To a solution of 6a (0.13 g, 0.25 mmol) in a mixture of CH 2 Cl 2 (10 ml) and CH 3 OH (10 ml) was added 10% Pd / C (20 mg), and the resulting suspension was degassed and stirred overnight under a hydrogen atmosphere. After evaporation, C 2 H 5 OH (10 ml) was added to the residue and the catalyst was filtered off. The solution was concentrated in vacuo and the resulting solid was triturated with acetonitrile, filtered and dried to give the desired product 7a; yield 85% (0.08 g, 0.21 mmol); 1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.53 (br s, 3H), 7.67 (s, 1H), 6.84 (dd, 1H, J = 8.3 Hz, J = 8 , 2 Hz), 6.67 (d, 1H, J = 8.3 Hz), 6.50 (d, 1H, J = 8.2 Hz) ; 6.13 (t, 1H, J = 6.7Hz), 5.41-4.90 (m, 2H), 4.25-4.22 (m, 1H), 4.19-4.14 ( m, 2H), 3.80-3.77 (m, 1H), 3.63-3.59 (m, 1H), 3.59-3.55 (m, 1H), 3.26-3, 22 (m, 2H), 2.14-2.07 (m, 1H), 2.05-1.98 (m, 1H). HRMS (ESI) m / z: calculated for C 17 H 19 N 4 O 6 - [M-H] - : 375.1310; found 375.1258.

Пример 14. 3-(5'-O-диметокситритил-2'-дезокси-β-D-рибофуранозил)-9-(2-аминоэтокси)-1,3-диаза-2-оксофеноксазин (9а)Example 14 3- (5'-O-dimethoxytrityl-2'-deoxy-β-D-ribofuranosyl) -9- (2-aminoethoxy) -1,3-diaza-2-oxophenoxazine (9а)

К раствору 8а (0,20 г, 0,25 ммоль) в смеси CH2Cl2 (10 мл) и СН3ОН (10 мл) добавляют 10% Pd/C (20 мг), и полученную в результате суспензию дегазируют и перемешивают в течение ночи в атмосфере водорода. После упаривания добавляют к остатку С2Н5ОН (10 мл), и катализатор отфильтровывают. Раствор концентрируют в вакууме, и полученный твердый остаток растирают с ацетонитрилом, фильтруют и сушат, получая требуемый продукт 9а; выход 80% (0,14 г, 0,20 ммоль); 1Н ЯМР (600 МГц, DMSO-d6) δ 7,43-7,19 (м, 12Н), 6,91-6,87 (м, 4Н), 6,83 (дд, 1H, J=8,4 Гц, J=8,2 Гц), 6,65 (д, 1Н, J=8,4 Гц), 6,27 (дд, 1Н, J=0,8 Гц, J=8,2 Гц), 6,12 (т, 1H, J=6,5 Гц), 4,31-4,27 (м, 1H), 4,18-4,13 (м, 2H), 3,93-3,90 (м, 1H), 3,71 (с, 3Н), 3,70 (с, 3Н), 3,29-3,25 (м, 1Н), 3,24-3,20 (м, 2Н), 3,14-3,11 (м, 1Н), 2.22-2,13 (м, 2Н). HRMS (ESI) m/z: рассчитано для C38H37N4O8 - [М-Н]-: 677,2617; найдено 677,2527.To a solution of 8a (0.20 g, 0.25 mmol) in a mixture of CH 2 Cl 2 (10 ml) and CH 3 OH (10 ml) was added 10% Pd / C (20 mg), and the resulting suspension was degassed and stirred overnight under a hydrogen atmosphere. After evaporation, C 2 H 5 OH (10 ml) was added to the residue and the catalyst was filtered off. The solution is concentrated in vacuo and the resulting solid is triturated with acetonitrile, filtered and dried to give the desired product 9a; 80% yield (0.14 g, 0.20 mmol); 1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.43-7.19 (m, 12H), 6.91-6.87 (m, 4H), 6.83 (dd, 1H, J = 8 , 4 Hz, J = 8.2 Hz), 6.65 (d, 1H, J = 8.4 Hz), 6.27 (dd, 1H, J = 0.8 Hz, J = 8.2 Hz) , 6.12 (t, 1H, J = 6.5 Hz), 4.31-4.27 (m, 1H), 4.18-4.13 (m, 2H), 3.93-3.90 (m, 1H), 3.71 (s, 3H), 3.70 (s, 3H), 3.29-3.25 (m, 1H), 3.24-3.20 (m, 2H), 3.14-3.11 (m, 1H), 2.22-2.13 (m, 2H). HRMS (ESI) m / z: calculated for C 38 H 37 N 4 O 8 - [M-H] - : 677.2617; found 677.2527.

Пример 15. 3-(β-D-рибофуранозил)-9-(2-N-аминоэтокси)-1,3-диаза-2-оксофеноксазин (7b)Example 15 3- (β-D-ribofuranosyl) -9- (2-N-aminoethoxy) -1,3-diaza-2-oxophenoxazine (7b)

К раствору 6b (0,13 г, 0,25 ммоль) в смеси CH2Cl2 (10 мл) и СН3ОН (10 мл) добавляют 10% Pd/C (20 мг), и полученную в результате суспензию дегазируют и перемешивают в течение ночи в атмосфере водорода. После упаривания добавляют к остатку С2Н5ОН (10 мл), и катализатор отфильтровывают. Раствор концентрируют в вакууме, и полученный твердый остаток растирают с ацетонитрилом, фильтруют и сушат, получая требуемый продукт 7b; выход 82% (0,08 г, 0,21 ммоль); 1Н ЯМР (600 МГц, DMSO-d6) δ 8,32 (уш с, 3Н), 7,74 (с, 1Н), 6,84 (дд, 1Н, J=8,2 Гц, J=8,3 Гц), 6,67 (д, 1Н, J=8,2 Гц), 6,14 (дд, 1Н, J=0,8 Гц, J=8,3 Гц), 5,76 (д, 1Н, J=3,9 Гц), 5,29 (м, 1H), 5,20 (м, 1Н), 5,07 (м, 1Н), 4,22-4,14 (м, 2Н), 4,01-3,94 (м, 2Н), 3,86-3,81 (м, 1Н), 3,69-3,64 (м, 1H), 3,60-3,55 (м, 1H), 3,26-3,22 (м, 2Н). HRMS (ESI) m/z: рассчитано для C17H21N4O7 + [M+H]+: 393,1405; найдено 393,1392.To a solution of 6b (0.13 g, 0.25 mmol) in a mixture of CH 2 Cl 2 (10 ml) and CH 3 OH (10 ml) was added 10% Pd / C (20 mg), and the resulting suspension was degassed and stirred overnight under a hydrogen atmosphere. After evaporation, C 2 H 5 OH (10 ml) was added to the residue and the catalyst was filtered off. The solution was concentrated in vacuo and the resulting solid was triturated with acetonitrile, filtered and dried to give the desired product 7b; yield 82% (0.08 g, 0.21 mmol); 1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.32 (br s, 3H), 7.74 (s, 1H), 6.84 (dd, 1H, J = 8.2 Hz, J = 8 , 3 Hz), 6.67 (d, 1H, J = 8.2 Hz), 6.14 (dd, 1H, J = 0.8 Hz, J = 8.3 Hz), 5.76 (d, 1H, J = 3.9Hz), 5.29 (m, 1H), 5.20 (m, 1H), 5.07 (m, 1H), 4.22-4.14 (m, 2H), 4.01-3.94 (m, 2H), 3.86-3.81 (m, 1H), 3.69-3.64 (m, 1H), 3.60-3.55 (m, 1H ), 3.26-3.22 (m, 2H). HRMS (ESI) m / z: calculated for C 17 H 21 N 4 O 7 + [M + H] + : 393.1405; found 393.1392.

Пример 16. 3-(5'-O-диметокситритил-β-D-рибофуранозил)-9-(2-аминоэтокси)-1,3-диаза-2-оксофеноксазин (9b)Example 16 3- (5'-O-dimethoxytrityl-β-D-ribofuranosyl) -9- (2-aminoethoxy) -1,3-diaza-2-oxophenoxazine (9b)

К раствору 8b (0,21 г, 0,25 ммоль) в смеси CH2Cl2 (10 мл) и СН3ОН (10 мл) добавляют 10% Pd/C (20 мг), и полученную в результате суспензию дегазируют и перемешивают в течение ночи в атмосфере водорода. После упаривания добавляют к остатку С2Н5ОН (10 мл), и катализатор отфильтровывают. Раствор концентрируют в вакууме, и полученный твердый остаток растирают с ацетонитрилом, фильтруют и сушат, получая требуемый продукт 9b; выход 80% (0,14 г, 0,20 ммоль); 1Н ЯМР (600 МГц, DMSO-d6) δ 8,25 (уш с, 2Н), 7,46-7,16 (м, 12Н), 6,93-6,85 (м, 4Н), 6,82 (дд, 1H, J=8,3 Гц, J=8,2 Гц), 6,66 (д, 1Н, J=8,3 Гц), 6,19 (д, 1Н, J=8,2 Гц), 5,73 (д, 1Н, J=3,4 Гц), 5,50-5,33 (м, 1Н), 5,19-5,04 (м, 1Н), 4,23-4,14 (м, 2Н), 4,14-4,09 (м, 1Н), 4,09-4,05 (м, 1Н), 4,00-3,93 (м, 1Н), 3,78-3,62 (м, 8Н), 3,28-3,20 (м, 2Н). HRMS (ESI) m/z: рассчитано для C38H39N4O9 + [М+Н]+: 695,2712; найдено 695,2681.To a solution of 8b (0.21 g, 0.25 mmol) in a mixture of CH 2 Cl 2 (10 ml) and CH 3 OH (10 ml) was added 10% Pd / C (20 mg), and the resulting suspension was degassed and stirred overnight under a hydrogen atmosphere. After evaporation, C 2 H 5 OH (10 ml) was added to the residue and the catalyst was filtered off. The solution was concentrated in vacuo and the resulting solid was triturated with acetonitrile, filtered and dried to give the desired product 9b; 80% yield (0.14 g, 0.20 mmol); 1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.25 (br s, 2H), 7.46-7.16 (m, 12H), 6.93-6.85 (m, 4H), 6 , 82 (dd, 1H, J = 8.3 Hz, J = 8.2 Hz), 6.66 (d, 1H, J = 8.3 Hz), 6.19 (d, 1H, J = 8, 2 Hz), 5.73 (d, 1H, J = 3.4 Hz), 5.50-5.33 (m, 1H), 5.19-5.04 (m, 1H), 4.23- 4.14 (m, 2H), 4.14-4.09 (m, 1H), 4.09-4.05 (m, 1H), 4.00-3.93 (m, 1H), 3, 78-3.62 (m, 8H), 3.28-3.20 (m, 2H). HRMS (ESI) m / z: calculated for C 38 H 39 N 4 O 9 + [M + H] + : 695.2712; found 695.2681.

Пример 17. 3-(5'-O-диметокситритил-2'-дезокси-β-D-рибофуранозил)-5-(2-амино-2-оксоэтил)-1,3-диаза-2-оксофеноксазин (10)Example 17 3- (5'-O-dimethoxytrityl-2'-deoxy-β-D-ribofuranosyl) -5- (2-amino-2-oxoethyl) -1,3-diaza-2-oxophenoxazine (10)

К раствору 3а (0,19 г, 0,3 ммоль) в CH2Cl2 (10 мл) добавляют DBU (75 мкл, 0,5 ммоль) при комнатной температуре. Через 15 мин добавляют одной порцией йодацетамид (0,08 г, 0,4 ммоль), и полученную в результате смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа, и затем промывают 5% водным раствором NaHCO3 (10 мл). Органический слой отделяют, сушат (Na2SO4), фильтруют и концентрируют в вакууме. Остаток очищают колоночной хроматографией на силикагеле (0-4% МеОН в CH2Cl2), получая требуемый продукт 10 в виде желтоватой пены (0,13 г, 0,18 ммоль, 61%). 1Н ЯМР (600 МГц, DMSO-d6) δ 7,68 (уш с, 1H), 7,49 (с, 1H), 7,44-7,41 (м, 2Н), 7,35-7,29 (м, 6Н), 7,26-7,21 (м, 2Н), 6,95-6,92 (м, 2Н), 6,92-6,89 (м, 4Н), 6,79-6,77 (м, 1Н), 6,60-6,58 (м, 1H), 6,12 (т, 1Н, J=6,5 Гц), 5,31 (уш с, 1Н), 4,53 (уш с, 2Н), 4,33-4,29 (м, 1Н), 3,93-3,90 (м, 1Н), 3,72 (с, 3Н), 3,71 (с, 3Н), 3,16-3,12 (м, 1Н), 3,12-3,07 (м, 1Н), 2,24-2,19 (м, 1H), 2,18-2,12 (м, 1Н). HRMS (ESI) m/z: рассчитано для C38H35N4O8 - [М-Н]-: 675,2460; найдено 675,2414.To a solution of 3a (0.19 g, 0.3 mmol) in CH 2 Cl 2 (10 ml) was added DBU (75 μl, 0.5 mmol) at room temperature. After 15 minutes, iodoacetamide (0.08 g, 0.4 mmol) was added in one portion and the resulting mixture was stirred at room temperature for 1 hour and then washed with 5% aqueous NaHCO 3 (10 ml). The organic layer is separated, dried (Na 2 SO 4 ), filtered and concentrated in vacuo. The residue was purified by silica gel column chromatography (0-4% MeOH in CH 2 Cl 2 ) to afford the desired product 10 as a yellowish foam (0.13 g, 0.18 mmol, 61%). 1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.68 (br s, 1H), 7.49 (s, 1H), 7.44-7.41 (m, 2H), 7.35-7 , 29 (m, 6H), 7.26-7.21 (m, 2H), 6.95-6.92 (m, 2H), 6.92-6.89 (m, 4H), 6.79 -6.77 (m, 1H), 6.60-6.58 (m, 1H), 6.12 (t, 1H, J = 6.5 Hz), 5.31 (br s, 1H), 4 , 53 (br s, 2H), 4.33-4.29 (m, 1H), 3.93-3.90 (m, 1H), 3.72 (s, 3H), 3.71 (s, 3H), 3.16-3.12 (m, 1H), 3.12-3.07 (m, 1H), 2.24-2.19 (m, 1H), 2.18-2.12 ( m, 1H). HRMS (ESI) m / z: calculated for C 38 H 35 N 4 O 8 - [M-H] - : 675.2460; found 675.2414.

Пример 18. 3-(2'-дезокси-β-D-рибофуранозил)-5-(2-амино-2-оксоэтил)-1,3-диаза-2-оксофеноксазин (11)Example 18 3- (2'-deoxy-β-D-ribofuranosyl) -5- (2-amino-2-oxoethyl) -1,3-diaza-2-oxophenoxazine (11)

Соединение 10 (0,10 Г, 0,15 ммоль) растворяют в смеси уксусной кислоты (3 мл) и H2O (0,3 мл), и полученный в результате раствор нагревают при 50°С в течение ночи. Остаток распределяют между CH2Cl2 (15 мл) и Н2О (15 мл). Водный слой отделяют, концентрируют и упаривают с толуолом (3×10 мл). Полученный остаток растирают с ацетонитрилом, фильтруют и сушат, получая 11 в виде бежевого твердого остатка (0,043 г, 0,12 ммоль, 77%). 1Н ЯМР (600 МГц, DMSO-d6) δ 7,73 (с, 1Н), 7,67 (уш с, 1H), 7,24 (уш с, 1Н), 6,97-6,91 (м, 2Н), 6,88-6,85 (м, 1Н), 6,80-6,76 (м, 1H), 6,12 (т, 1Н, J=6,6 Гц), 5,21 (уш с, 1Н), 5,10 (уш с, 1H), 4,53 (с, 2Н), 4,27-4,19 (м, 1Н), 3,82-3,78 (м, 1Н), 3,66-3,60 (м, 1H), 3,60-3,55 (м, 1Н), 2,17-2,11 (м, 1Н), 2,05-1,98 (м, 1H). HRMS (ESI) m/z: рассчитано для C17H17N4O6 - [М-Н]-: 373,1154; найдено 373,1100.Compound 10 (0.10 G, 0.15 mmol) was dissolved in a mixture of acetic acid (3 ml) and H 2 O (0.3 ml) and the resulting solution was heated at 50 ° C overnight. The residue is partitioned between CH 2 Cl 2 (15 ml) and H 2 O (15 ml). The aqueous layer was separated, concentrated and evaporated with toluene (3 x 10 ml). The resulting residue was triturated with acetonitrile, filtered and dried to give 11 as a beige solid (0.043 g, 0.12 mmol, 77%). 1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.73 (s, 1H), 7.67 (br s, 1H), 7.24 (br s, 1H), 6.97-6.91 ( m, 2H), 6.88-6.85 (m, 1H), 6.80-6.76 (m, 1H), 6.12 (t, 1H, J = 6.6 Hz), 5.21 (br s, 1H), 5.10 (br s, 1H), 4.53 (s, 2H), 4.27-4.19 (m, 1H), 3.82-3.78 (m, 1H ), 3.66-3.60 (m, 1H), 3.60-3.55 (m, 1H), 2.17-2.11 (m, 1H), 2.05-1.98 (m , 1H). HRMS (ESI) m / z: calculated for C 17 H 17 N 4 O 6 - [M-H] - : 373.1154; found 373.1100.

Пример 19. 1,3-диаза-2-оксофеноксазин (12)Example 19 1,3-diaza-2-oxophenoxazine (12)

К суспензии 2а (0,140 г, 0,44 ммоль) в воде (10 мл) добавляют одной порцией концентрированную соляную кислоту HCl (1,0 мл) при комнатной температуре, и полученную в результате смесь нагревают при 60°С в течение 24 часов. Раствор концентрируют в вакууме и упаривают с водой (5×10 мл). Остаток растворяют в воде (5 мл) при кипячении, охлаждают до комнатной температуры и помещают на ночь в холодильник. Образовавшийся осадок фильтруют, промывают водой и сушат в вакууме, получая 12 в виде бежевого твердого остатка (0,11 мг, 0,23 ммоль, 52%). 1Н ЯМР (600 МГц, DMSO-d6) δ 10,31 (уш с, 1Н), 10,23 (уш с, 1Н), 6,99 (с, 1Н), 6,86-6,80 (м, 2Н), 6,78 (дд, 1Н, J=7,2 Гц, J=2,0 Гц), 6,73 (дд, 1Н, J=7,6 Гц, J=1,6 Гц). HRMS (ESI) m/z: рассчитано для C10H8N3O2 + [М+Н]+: 202,0611; найдено 202,0607.To a suspension of 2a (0.140 g, 0.44 mmol) in water (10 ml), concentrated hydrochloric acid HCl (1.0 ml) was added in one portion at room temperature, and the resulting mixture was heated at 60 ° C. for 24 hours. The solution was concentrated in vacuo and evaporated with water (5 x 10 ml). The residue was dissolved in water (5 ml) while boiling, cooled to room temperature and placed in a refrigerator overnight. The resulting precipitate was filtered, washed with water and dried in vacuo to give 12 as a beige solid (0.11 mg, 0.23 mmol, 52%). 1 H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 10.31 (br s, 1H), 10.23 (br s, 1H), 6.99 (s, 1H), 6.86-6.80 ( m, 2H), 6.78 (dd, 1H, J = 7.2 Hz, J = 2.0 Hz), 6.73 (dd, 1H, J = 7.6 Hz, J = 1.6 Hz) ... HRMS (ESI) m / z: calculated for C 10 H 8 N 3 O 2 + [M + H] + : 202.0611; found 202.0607.

Пример 20. Оценка клеточной цитотоксичности на HEL клеткахExample 20. Evaluation of cellular cytotoxicity on HEL cells

Цитотоксичность тестируемых соединений представлена в виде минимальной цитотоксической концентрации (МСС) или концентрации соединения, которая вызывает наблюдаемое под микроскопом изменение морфологии клеток. Альтернативно, цитостатическую активность исследуемых соединений измеряют по ингибированию роста клеток. Клетки HEL высевают по 5×103 клеток/лунка в 96-луночные планшеты и оставляют для пролиферации в течение 24 часов. Затем добавляют среду, содержащую тестируемые соединения в разных концентрациях, начиная с 100 мкМ. Через 3 дня инкуоации при 37°С количество клеток определяют с помощью счетчика Коултера. Цитостатическую концентрацию рассчитывают как СС50 (концентрация соединения, при которой пролиферация клеток снижается на 50%).The cytotoxicity of the test compounds is presented as the minimum cytotoxic concentration (MCC) or the concentration of a compound that causes a change in cell morphology observed under a microscope. Alternatively, the cytostatic activity of test compounds is measured by inhibition of cell growth. HEL cells are seeded at 5 × 10 3 cells / well in 96-well plates and allowed to proliferate for 24 hours. Then add the medium containing the test compounds at different concentrations, starting at 100 μM. After 3 days of incuoation at 37 ° C, the number of cells is determined using a Coulter counter. The cytostatic concentration is calculated as CC 50 (the concentration of the compound at which cell proliferation is reduced by 50%).

Пример 21. Цитопатичность герпесвирусов или реакция уменьшения количества бляшекExample 21. Herpesvirus cytopathicity or plaque reduction response

Монослой клеток культуры HEL в 96-луночных планшетах инокулируют вирусом в дозе 100 CCID50 (CCID50 - это доза вируса для заражения 50% клеточных культур) (ЦМВ) или 20 бляшкообразующими единицами (БОЕ) (ВЗВ), и клеточные культуры инкубируют в присутствии тестируемых соединений в разных концентрациях, начиная с 100 мкМ. Вирусную цитопатичность (ЦМВ) или бляшкообразование (ВЗВ) регистрируют, как только достигается завершение в контрольных культурах клеток, которые не обрабатывают тестируемыми соединениями. Противовирусную активность выражают в виде ЕС50 (концентрация соединения, при которой снижается цитопатичность вируса (ЦМВ) или бляшкообразование (ВЗВ) на 50%).A monolayer of HEL culture cells in 96-well plates is inoculated with the virus at a dose of 100 CCID 50 (CCID 50 is the virus dose to infect 50% of cell cultures) (CMV) or 20 plaque forming units (PFU) (VZV), and the cell cultures are incubated in the presence of test compounds in different concentrations starting from 100 μM. Viral cytopathicity (CMV) or plaque formation (VZV) is recorded as soon as completion is achieved in control cell cultures that are not treated with test compounds. Antiviral activity is expressed as EC 50 (the concentration of the compound at which the cytopathicity of the virus (CMV) or plaque formation (VZV) decreases by 50%).

Таблица. Антигерпетическая активность и цитотоксичность производных 1,3-диаза-2оксофеноксазина Table. Antiherpetic activity and cytotoxicity of 1,3-diaza-2oxophenoxazine derivatives

Соединение Compound
##

- -
2a2a ВЗВ EC50 (мкМ)VZV EC50 (μM) ЦМВ EC50 (мкМ)CMV EC50 (μM) Клетки легких эмбриона человека (HEL) Human embryonic lung cells (HEL)
Цитотоксичность (мкМ)Cytotoxicity (μM) штамм OKA
(TK+)
0,06 ± 0,01 strain OKA
(TK +)
0.06 ± 0.01 штамм
07-1
(TK - )
10 ± 5 strain
07-1
(TK - )
10 ± 5 штамм
AD-169
n/aa strain
AD-169
n / a a штамм
Davis
n/a strain
Davis
n / a Клеточная морфология
(MCC)
>100 Cell morphology
(MCC)
> 100 Клеточный
рост
(CC 50 )
>100 Cellular
growth
(CC 50 )
> 100 2c2c 5555 4747 n/an / a 4949 >100 > 100 NDND 3a3a 1,5 ± 0,3 1.5 ± 0.3 1,2 ± 0,5 1.2 ± 0.5 44 44 2020 12,2 ± 0,812.2 ± 0.8 3b3b 2,7 ± 1,32.7 ± 1.3 1,81.8 n/an / a n/an / a 9 ± 59 ± 5 9,7 ± 1,59.7 ± 1.5 3c3c n/a n / a n/an / a n/an / a 2,92.9 2020 NDND 7a7a 2,232.23 1,461.46 n/an / a n/an / a 44 NDND 7b7b n/an / a 3,573.57 n/an / a 2,192.19 2020 NDND 8b8b n/an / a n/a n / a n/an / a 10,910.9 60 ± 4060 ± 40 NDND 9a9a 1,66 ± 0,081.66 ± 0.08 n/an / a n/an / a 1,271.27 9 ± 59 ± 5 14,4 ± 0,714.4 ± 0.7 10ten
1212 8,94
678.94
67 4,63
n/a4.63
n / a n/a
n/an / a
n / a 4
n/a4
n / a 47 ± 27
>10047 ± 27
> 100 37 ± 5
ND37 ± 5
ND

EC50 – эффективная концентрация соединения, при которой снижается цитопатичность вируса (ЦМВ) или бляшкообразование (ВЗВ) на 50% EC 50 - the effective concentration of a compound that reduces viral cytopathicity (CMV) or plaque formation (VZV) by 50%

MCC – минимальная цитотоксическая концентрация, которая вызывает изменения клеточной морфологии, обнаруживаемые с помощью микроскопа MCC - minimum cytotoxic concentration that causes changes in cell morphology detectable with a microscope

CC50 – цитотоксическая концентрация, при которой рост клеток снижается на 50% CC50 - cytotoxic concentration at which cell growth is reduced by 50%

an/a – неактивно относительно соответствующего вируса при нетоксичных концентрациях a n / a - inactive against the corresponding virus at non-toxic concentrations

bND – не определяли. b ND - not determined.

Claims (16)

1. Применение производных 1,3-диаза-2-оксофеноксазина, которые имеют формулу 1:1. The use of derivatives of 1,3-diaza-2-oxophenoxazine, which have the formula 1:
Figure 00000002
Figure 00000002
 в которой:wherein: R1 представляет собой Н, R2 представляет собой Н и R3 представляет собой Н; илиR 1 is H, R 2 is H and R 3 is H; or R1 представляет собой Н, R2 представляет собой Н и R3 представляет собой OCH3; илиR 1 is H, R 2 is H and R 3 is OCH 3 ; or R1 представляет собой Н, R2 представляет собой DMTr и R3 представляет собой Н; илиR 1 is H, R 2 is DMTr and R 3 is H; or R1 представляет собой Н, R2 представляет собой DMTr и R3 представляет собой ОН; илиR 1 is H, R 2 is DMTr and R 3 is OH; or R1 представляет собой Н, R2 представляет собой DMTr и R3 представляет собой ОСН; илиR 1 is H, R 2 is DMTr and R 3 is OCH; or R1 представляет собой OCH2CH2NH2, R2 представляет собой Н и R3 представляет собой Н; илиR 1 is OCH 2 CH 2 NH 2 , R 2 is H and R 3 is H; or R1 представляет собой OCH2CH2NH2, R2 представляет собой Н и R3 представляет собой ОН; илиR 1 is OCH 2 CH 2 NH 2 , R 2 is H and R 3 is OH; or R1 представляет собой OCH2CH2NH-CBz, R2 представляет собой DMTr и R3 представляет собой ОН; илиR 1 is OCH 2 CH 2 NH-CBz, R 2 is DMTr and R 3 is OH; or R1 представляет собой OCH2CH2NH2, R2 представляет собой DMTr и R3 представляет собой НR 1 is OCH 2 CH 2 NH 2 , R 2 is DMTr and R 3 is H в качестве ингибиторов репродукции герпесвирусов, включая вирус варицелла-зостер и цитомегаловирус.as inhibitors of the reproduction of herpes viruses, including varicella-zoster virus and cytomegalovirus. 2. Применение производных 1,3-диаза-2-оксофеноксазина, которые имеют формулы 2 и 3:2. The use of derivatives of 1,3-diaza-2-oxophenoxazine, which have formulas 2 and 3:
Figure 00000003
Figure 00000003
 в качестве ингибиторов репродукции герпесвирусов, включая вирус варицелла-зостер и цитомегаловирус.as inhibitors of the reproduction of herpes viruses, including varicella-zoster virus and cytomegalovirus.
RU2019112842A 2019-04-26 2019-04-26 Nucleoside derivatives of 1,3-diaza-2-oxophenoxazine as herpesvirus replication inhibitors RU2731381C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2019112842A RU2731381C1 (en) 2019-04-26 2019-04-26 Nucleoside derivatives of 1,3-diaza-2-oxophenoxazine as herpesvirus replication inhibitors

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2019112842A RU2731381C1 (en) 2019-04-26 2019-04-26 Nucleoside derivatives of 1,3-diaza-2-oxophenoxazine as herpesvirus replication inhibitors

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2731381C1 true RU2731381C1 (en) 2020-09-02

Family

ID=72421585

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2019112842A RU2731381C1 (en) 2019-04-26 2019-04-26 Nucleoside derivatives of 1,3-diaza-2-oxophenoxazine as herpesvirus replication inhibitors

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2731381C1 (en)

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999024452A2 (en) * 1997-11-07 1999-05-20 Isis Pharmaceuticals, Inc. Pyrimidine derivatives for labeled binding partners
WO2003004602A2 (en) * 2001-07-03 2003-01-16 Isis Pharmaceuticals, Inc. Nuclease resistant chimeric oligonucleotides
US20110130440A1 (en) * 2008-03-26 2011-06-02 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Non-natural ribonucleotides, and methods of use thereof
RU2487884C1 (en) * 2012-07-13 2013-07-20 Общество с ограниченной ответственностью "Дакор" (ООО "Дакор") Agent having anti-oxidant, anti-inflammatory, neuroprotective, hypolipidemic, hypocholesterolemic, hypoglycemic, hepatoprotective and immunosuppressive activity
US20180305522A1 (en) * 2017-04-19 2018-10-25 Canon Kabushiki Kaisha Polymer

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999024452A2 (en) * 1997-11-07 1999-05-20 Isis Pharmaceuticals, Inc. Pyrimidine derivatives for labeled binding partners
WO2003004602A2 (en) * 2001-07-03 2003-01-16 Isis Pharmaceuticals, Inc. Nuclease resistant chimeric oligonucleotides
US20110130440A1 (en) * 2008-03-26 2011-06-02 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Non-natural ribonucleotides, and methods of use thereof
RU2487884C1 (en) * 2012-07-13 2013-07-20 Общество с ограниченной ответственностью "Дакор" (ООО "Дакор") Agent having anti-oxidant, anti-inflammatory, neuroprotective, hypolipidemic, hypocholesterolemic, hypoglycemic, hepatoprotective and immunosuppressive activity
US20180305522A1 (en) * 2017-04-19 2018-10-25 Canon Kabushiki Kaisha Polymer

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
). База данных STN on line (CAS *
Holmes, Stephen C. Et al, Nucleic Acids Research, 2003, 31(11), 2759-2768. *
Holmes, Stephen C. Et al, Nucleic Acids Research, 2003, 31(11), 2759-2768. Sandin, Peter et al, Nucleic Acids Research, 2008, 36(1), 157-167. База данных STN on line (CAS *
Sandin, Peter et al, Nucleic Acids Research, 2008, 36(1), 157-167. *
База данных STN on line (CAS RN 1178552-79-8 31.08.2009). *
База данных STN on line (CAS RN 401901-98-2 20.03.2002). *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Verheggen et al. Synthesis and antiherpes virus activity of 1, 5-anhydrohexitol nucleosides
DK170646B1 (en) N-phosphonylmethoxyalkyl derivatives of pyrimidine bases and purine bases, processes for their preparation, as well as drug preparations having antiviral action containing such derivative
Harnden et al. Synthesis and antiviral activity of 9-[4-hydroxy-3-(hydroxymethyl) but-1-yl] purines
AU2020203892A1 (en) Methods for treating Filoviridae virus infections
US6653296B1 (en) Antiretroviral enantiomeric nucleotide analogs
Tino et al. Synthesis and antiviral activity of novel isonucleoside analogs
WO2003062256A1 (en) 2'-beta-modified-6-substituted adenosine analogs and their use as antiviral agents
FI93546B (en) Method for preparing therapeutically useful dideoxycarbocyclic nucleoside analogs
NO158539B (en) ANALOGUE PROCEDURE FOR PREPARING A THERAPEUTIC ACTIVE 2,6-DIAMINOPURINE COMPOUND.
SG174624A1 (en) Compounds with the bicyclo[4.2.1]nonane system for the treatment of flaviviridae infections
JPH08501071A (en) 1,5-anhydrohexitol nucleoside analogues and the use of the analogues as medicaments
Głowacka et al. Design, synthesis, antiviral and cytostatic activity of ω-(1H-1, 2, 3-triazol-1-yl)(polyhydroxy) alkylphosphonates as acyclic nucleotide analogues
EP1504004A2 (en) Substituted pyrazolopyrimidines
US5547976A (en) Further indole derivatives with antiviral activity
KR20000029952A (en) Phosphonate nucleotide compounds
IE912503A1 (en) Pharmaceuticals
EP0242482B1 (en) Antiviral purine derivatives and process for their preparation
Vandenriessche et al. Synthesis and antiviral activity of acyclic nucleosides with a 3 (S), 5-dihydroxypentyl or 4 (R)-methoxy-3 (S), 5-dihydroxypentyl sidechain
US5646155A (en) Drugs to prevent recurrent herpes virus infections
RU2731381C1 (en) Nucleoside derivatives of 1,3-diaza-2-oxophenoxazine as herpesvirus replication inhibitors
NZ502994A (en) 9-[3-Hydroxy-2-hydroxymethyl-prop-1-yl]-purine derivatives useful as antiviral agents
RU2644351C1 (en) -4-[6-(purine-6-ylamino)hexanoyl]-3,4-dihydro-3-methyl-7,8-difluor-2h-[1,4]benzoxazine and (3r)-4-[6-(purine-6-ylamino)hexanoyl]-3,4-dihydro-3-methyl-7,8-difluor-2h-[1,4]benzoxazine with antiviral activity
Pomeisl et al. Synthesis of fluorinated acyclic nucleoside phosphonates with 5-azacytosine base moiety
US6825348B2 (en) Antiviral compounds
US7217815B2 (en) 2-beta -modified-6-substituted adenosine analogs and their use as antiviral agents