RU2726789C1

RU2726789C1 - Method for immunological determination of tuberculosis infection activity in children and adolescents with latent infection

Info

Publication number: RU2726789C1
Application number: RU2020101939A
Authority: RU
Inventors: Михаил Александрович Владимирский; Ирина Анатольевна Васильева; Анастасия Геннадьевна Самойлова; Ольга Александровна Рыбина; Валентина Александровна Аксенова
Priority date: 2020-01-17
Filing date: 2020-01-17
Publication date: 2020-07-15

Abstract

FIELD: medicine.SUBSTANCE: invention refers to medicine, namely immunology, and can be used for differentiation of active and latent tuberculosis infection in children and adolescents. That is ensured by determining specific antibodies to recombinant protein ESAT-6-CFP-10 in blood serum samples and determination of neopterin in patient's blood plasma samples in patients with positive skin test with allergen tuberculosis recombinant (ATR) or positive reaction to antigen-specific induction of interferon-gamma. If the positive result of determining specific antibodies to the recombinant protein ESAT-6-CFP-10 with not less than three times the optical density of the test sample compared to the control in immunoenzymometric analysis and neopterin level of at least 9 nmol/l, active tuberculosis infection in children and adolescents is stated. Control is represented by serums of non-infected healthy donors with a negative reaction to antigen-specific induction of interferon-gamma in vitro.EFFECT: using the given method enables differentiating active and latent tuberculosis infection in children and adolescents, determining a threshold level of neopterin 9 nmol/l, which was adopted for children and adolescents as a positive criterion for evaluating a cellular immune response.3 cl

Description

Область техникиTechnical field

Изобретение относится к области медицины, преимущественно к фтизиатрии и педиатрии, и может быть использовано для повышения эффективности диагностики туберкулезной инфекции у детей и подростков.The invention relates to medicine, mainly to phthisiology and pediatrics, and can be used to improve the efficiency of diagnosis of tuberculosis infection in children and adolescents.

Уровень техникиState of the art

Распространенность латентной туберкулезной инфекции в мире, по разным данным, составляет, по данным Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ), около 1,6 млрд человек. Дифференцирование активной и латентной туберкулезной инфекции у детей и подростков является одной из приоритетных задач для ВОЗ с целью достижения ликвидации туберкулеза как распространенного заболевания [World Health Organization. The End ТВ Strategy. Global Strategy and Targets for Tuberculosis Prevention, Care and Control after 2015. www.who.int/tb/post 2015_November2015. (in Russian)].The prevalence of latent tuberculosis infection in the world, according to various sources, is, according to the World Health Organization (WHO), about 1.6 billion people. Differentiation of active and latent tuberculosis infection in children and adolescents is one of the priorities for WHO in order to achieve the elimination of tuberculosis as a common disease [World Health Organization. The End TV Strategy. Global Strategy and Targets for Tuberculosis Prevention, Care and Control after 2015.www.who.int/tb/post 2015_November2015. (in Russian)].

В России все дети с положительным кожным тестом «Диаскин-тест» (тест с аллергеном туберкулезным рекомбинантным - «АТР») с целью исключения активной туберкулезной инфекции должны проходить рентгенологическое обследование -компьютерную томографию органов грудной клетки и при отсутствии очевидных рентгенологических признаков туберкулеза легких, им рекомендуют профилактические курсы химиотерапии одним-двумя противотуберкулезными препаратами: изониазид или в сочетании с пиразинамидом или этамбутолом и рифампицином [Федеральные клинические рекомендации по лечению латентно туберкулезной инфекции у детей и подростков. Москва, 2015 г.]. ВОЗ также рекомендует для стран с заболеваемостью туберкулезом (менее 100 на 100 тыс. чел. населения) проводить еще более длительные, до 6-9 месяцев, химиопрофилактические курсы лечения изониазидом пациентов с латентной туберкулезной инфекции, особенно в группах контактных по туберкулезу и у пациентов с ВИЧ-инфекцией [Getahun Н., Matteelli A., Abubakar I., Abdel Aziz М., Baddeley A., Barreira D., Den Boon S. et al. Management of latent Mycobacterium tuberculosis infection: WHO guidelines for low tuberculosis burden countries. Eur. Respir. J. 2015; 46(6): 1563-76]. В связи с этим актуальность разработки иммунологического метода определения признаков активной туберкулезной инфекции, что позволило бы выделить среди детей и подростков с латентной инфекцией группу пациентов высокого риска развития туберкулеза является особенно важной. Прежде всего, речь идет о детях, у которых при компьютерной томографии органов грудной клетки выявляются мягкотканные очаги (1-5 мм) в легочной ткани. Поскольку до сих пор во фтизиатрии нет определенного мнения о характере этих мелких очагов, иммунологические признаки активности туберкулезной инфекции, характерные для пациентов детского возраста с маловыраженными формами туберкулеза, могли бы быть важным критерием для назначения своевременного специфического лечения.In Russia, all children with a positive skin test "Diaskin-test" (a test with a recombinant tuberculosis allergen - "ATP") in order to exclude active tuberculosis infection should undergo an X-ray examination - computed tomography of the chest organs and in the absence of obvious X-ray signs of pulmonary tuberculosis, they recommend preventive courses of chemotherapy with one or two anti-tuberculosis drugs: isoniazid or in combination with pyrazinamide or ethambutol and rifampicin [Federal clinical guidelines for the treatment of latent tuberculosis infection in children and adolescents. Moscow, 2015]. WHO also recommends for countries with an incidence of tuberculosis (less than 100 per 100 thousand population) to conduct even longer, up to 6-9 months, chemoprophylactic courses of isoniazid treatment for patients with latent tuberculosis infection, especially in groups of contacts for tuberculosis and in patients with HIV infection [Getahun H., Matteelli A., Abubakar I., Abdel Aziz M., Baddeley A., Barreira D., Den Boon S. et al. Management of latent Mycobacterium tuberculosis infection: WHO guidelines for low tuberculosis burden countries. Eur. Respir. J. 2015; 46 (6): 1563-76]. In this regard, the relevance of the development of an immunological method for determining the signs of active tuberculosis infection, which would make it possible to distinguish among children and adolescents with latent infection a group of patients at high risk of developing tuberculosis is especially important. First of all, we are talking about children in whom soft tissue foci (1-5 mm) in the lung tissue are revealed by computed tomography of the chest organs. Since there is still no definite opinion in phthisiology about the nature of these small foci, the immunological signs of the activity of tuberculosis infection, characteristic of pediatric patients with mild forms of tuberculosis, could be an important criterion for prescribing timely specific treatment.

Активная туберкулезная инфекция у детей и подростков, отличается от туберкулеза органов грудной клетки у взрослых чаще всего отсутствием выраженных инфильтративно-деструктивных поражений легочной ткани, отсутствием выделяемой мокроты и, соответственно, низкой частотой выделения возбудителя - микобактерий туберкулеза (МБТ). В связи с этим иммунологические признаки активной туберкулезной инфекции, особенно в этой группе пациентов, рассматриваются в качестве актуальной задачи.Active tuberculosis infection in children and adolescents differs from tuberculosis of the chest organs in adults most often by the absence of pronounced infiltrative-destructive lesions of the lung tissue, the absence of secreted sputum and, accordingly, the low frequency of excretion of the pathogen - mycobacterium tuberculosis (MBT). In this regard, immunological signs of active tuberculosis infection, especially in this group of patients, are considered as an urgent task.

В числе известных и разрабатываемых методов в научной литературе обсуждаются отдельные или комбинированные методы дифференцирования активной и латентной туберкулезной инфекции.Among the known and developed methods in the scientific literature, separate or combined methods for differentiating active and latent tuberculosis infection are discussed.

Из уровня техники известен способ дифференцирования активной и латентной туберкулезной инфекции путем определения уровня белка IP-10 для, индуцируемом интерфероном гамма [J. Wergerland et al. IP-10 differentiated between active and latent tuberculosis irrespective HIV status and declines during therapy J. of Infection 2015, 70, 381-391]. Исследование было проведено на взрослых пациентах; при этом критерием активности признается очень высокий уровень определяемого белка IP-10 - 2547 пг/мл. Однако, по нашим данным у детей и подростков с активной туберкулезной инфекцией средний уровень антиген-индуцированного белка IP-10 составил 105 пг/мл, тогда как при латентной инфекции - 73,5 пг/мл.A method for differentiating active and latent tuberculosis infection is known from the prior art by determining the level of the IP-10 protein for, induced by interferon gamma [J. Wergerland et al. IP-10 differentiated between active and latent tuberculosis irrespective HIV status and declines during therapy J. of Infection 2015, 70, 381-391]. The study was conducted on adult patients; the activity criterion is a very high level of the determined protein IP-10 - 2547 pg / ml. However, according to our data, in children and adolescents with active tuberculosis infection, the average level of antigen-induced IP-10 protein was 105 pg / ml, while in latent infection it was 73.5 pg / ml.

Известен способ дифференцирования активной и латентной туберкулезной инфекции у взрослых с помощью количественного анализа индукции фактора некроза опухолей альфа (ФНО-альфа) в образцах крови после инкубации с антигенами ESAT-6-CFP-10 [Wang F, Hou Н, Xu L, Jane М, Peng J, et al. (2013) Mycobacterium Tuberculosis-Specific TNF-a Is a Potential Biomarker for the Rapid Diagnosis of Active Tuberculosis Disease in Chinese Population. PLoS ONE 8(11): е79431]. По данным китайских авторов у больных туберкулезом определяется существенно более высокий уровень антиген-индуцированного ФНО-альфа, по сравнению с пациентами при латентной туберкулезной инфекции. Чувствительность этого метода - 70% при специфичности - 90%. Однако, как показали проведенные исследования у детей и подростков уровень ФНО-альфа в группе детей с активной туберкулезной инфекцией был, в среднем, 223±28,6 пг\мл, тогда как при латентной инфекции 103,7±10 пг/мл, но эти различия не были статистически значимы; концентрации антиген-индуцированного ФНО-альфа при латентной инфекции были вариабельными от 20 пг/мл до 400 пг/мл. При определенной закономерности результатов этих исследований недостаточная эффективность дифференцирования пациентов с активной и латентной инфекцией не позволяет его использовать для определения признаков активности среди пациентов детско-подросткового возраста.A known method for differentiating active and latent tuberculosis infection in adults using quantitative analysis of the induction of tumor necrosis factor alpha (TNF-alpha) in blood samples after incubation with antigens ESAT-6-CFP-10 [Wang F, Hou H, Xu L, Jane M , Peng J, et al. (2013) Mycobacterium Tuberculosis-Specific TNF-a Is a Potential Biomarker for the Rapid Diagnosis of Active Tuberculosis Disease in Chinese Population. PLoS ONE 8 (11): e79431]. According to the data of the Chinese authors, a significantly higher level of antigen-induced TNF-alpha is determined in patients with tuberculosis, compared with patients with latent tuberculosis infection. The sensitivity of this method is 70% with a specificity of 90%. However, as shown by the studies conducted in children and adolescents, the level of TNF-alpha in the group of children with active tuberculosis infection was, on average, 223 ± 28.6 pg / ml, while with latent infection it was 103.7 ± 10 pg / ml, but these differences were not statistically significant; antigen-induced TNF-alpha concentrations during latent infection were variable from 20 pg / ml to 400 pg / ml. Given a certain pattern of the results of these studies, the insufficient efficiency of differentiation between patients with active and latent infection does not allow its use to determine signs of activity among patients of childhood and adolescence.

Известен также молекулярно-биологический метод дифференцирования активной и латентной туберкулезной инфекции по критерию экспрессии некоторых генов в клетках мононуклеаров периферической крови [Shih-Wei Lee, Lawrence Shih-Hsin Wu, Guan-Mau Huang, Kai-Yao Huang, Tzong-Yi Lee and Julia Tzu-Ya Weng. Gene expression profiling identifies candidate biomarkers for active and latent tuberculosis. - BMC Bioinformatics 2016, 17]. Способ заключается в определении уровня экспрессии четырех генов: PTRC, ASUN, NEMF и DHX29 в клетках периферической крови был различен у лиц с латентной и активной стадии туберкулеза и у здоровых. Однако, проведенные нами исследования по анализу экспрессии указанных генов в клетках периферической крови пациентов детско-подросткового возраста не подтвердили возможности выбора определенных критериев для дифференцирования активной и латентной туберкулезной инфекции у детей и подростков.There is also known a molecular biological method for differentiating active and latent tuberculosis infection by the criterion of expression of some genes in cells of peripheral blood mononuclear cells [Shih-Wei Lee, Lawrence Shih-Hsin Wu, Guan-Mau Huang, Kai-Yao Huang, Tzong-Yi Lee and Julia Tzu-Ya Weng. Gene expression profiling identifies candidate biomarkers for active and latent tuberculosis. - BMC Bioinformatics 2016, 17]. The method consists in determining the level of expression of four genes: PTRC, ASUN, NEMF and DHX29 in peripheral blood cells was different in persons with latent and active stages of tuberculosis and in healthy people. However, our studies on the analysis of the expression of these genes in the peripheral blood cells of children and adolescents did not confirm the possibility of choosing certain criteria for differentiating active and latent tuberculosis infection in children and adolescents.

Из уровня техники также известен способ оценки активности туберкулезной инфекции у детей и подростков, включающий внесение в пробы цельной крови пациента, специфических антигенов: ППД-Л, Rv2660c, ESAT-6, гибридного белка CFP10-ESAT-6, определение уровня ИФН-γ в пробах через 72 часа после внесения в кровь специфических антигенов, и при значимом увеличении уровня ИФН-γ - положительной реакции на ППД-Л, Rv2660c, ESAT-6 и отрицательной - отсутствие изменения уровня ИФН-γ - на гибрид CFP10-ESAT-6 диагностируют латентную туберкулезную инфекцию, при положительной на ППД-Л, Rv2660c, ESAT-6 и гибрид CFP10-ESAT-6 - активную туберкулезную инфекцию, при положительной на ППД-Л и отрицательной одновременно на Rv2660c, ESAT-6, гибрид CFP10-ESAT-6 - поствакцинальную аллергию [RU 2586279, 10.06.2016]. Данный способ дифференцирования активной и латентной туберкулезной инфекции, к сожалению, противоречит широко применяемому в мировой литературе и практике методу определения туберкулезного инфицирования, в том числе латентной инфекции, поскольку в нем утверждается, что при «отрицательной реакции на гибридный белок ESAT-6-CFP10, отсутствии изменений уровня ИФН-γ определяют латентную туберкулезную инфекцию», но именно положительные реакции на указанный гибридный белок являются основанием для определения туберкулезного инфицирования, в том числе при использовании соответствующих методов: кожного тоста с антигеном туберкулезным рекомбинатным (ATP, коммерческое наименование «Диаскинтест», и наборов реагентов"QuantiFeronTBGold" и T-SPOT-TB".A method for assessing the activity of tuberculosis infection in children and adolescents is also known from the prior art, which includes introducing specific antigens into the patient's whole blood samples: PPD-L, Rv2660c, ESAT-6, CFP10-ESAT-6 fusion protein, determining the level of IFN-γ in samples 72 hours after the introduction of specific antigens into the blood, and with a significant increase in the level of IFN-γ - a positive reaction to PPD-L, Rv2660c, ESAT-6 and negative - no change in the level of IFN-γ - the CFP10-ESAT-6 hybrid is diagnosed latent tuberculosis infection, with positive for PPD-L, Rv2660c, ESAT-6 and hybrid CFP10-ESAT-6 - active tuberculosis infection, with positive for PPD-L and negative for both Rv2660c, ESAT-6, hybrid CFP10-ESAT-6 - post-vaccination allergy [RU 2586279, 10.06.2016]. This method of differentiating active and latent tuberculosis infection, unfortunately, contradicts the method widely used in the world literature and practice for determining tuberculosis infection, including latent infection, since it states that in case of a “negative reaction to the ESAT-6-CFP10 fusion protein, the absence of changes in the level of IFN-γ determine latent tuberculosis infection ", but it is the positive reactions to the specified hybrid protein that are the basis for determining tuberculosis infection, including when using the appropriate methods: skin toast with recombinant tuberculosis antigen (ATP, commercial name" Diaskintest ", and the "QuantiFeronTBGold" and T-SPOT-TB "reagent kits.

Наиболее близким аналогом к заявляемому является способ иммунологического дифференцирования больных туберкулезом у лиц, ранее контактировавших с больными туберкулезом, которые предположительно имеют латентную форму туберкулезной инфекции по определению в сыворотке крови противотуберкулезных антител и уровню неоптерина в плазме крови [Е.В. Васильева и др. «Сравнительная ценность квантиферонового теста, неоптерина и специфических противотуберкулезных антител для клинико-лабораторной диагностики туберкулеза легких», опубликованная в журнале Клиническая лабораторная диагностика, 2013, №5, стр. 21-26]. исследования специфических антител проводились с помощью тест-системы «ИФА -анти ТУБ», производившейся в НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Пастера, которая основана на использовании в качестве антигена фильтрата культуры МБТ, т.е. туберкулина. Однако, чувствительность определения антител в этой тест-системе относительно невысока, т.е. у заведомо больных туберкулезом - 54%, а у исследуемых контактных лиц с латентной формой инфекции - только 6%.The closest analogue to the claimed is a method of immunological differentiation of patients with tuberculosis from persons who have previously been in contact with patients with tuberculosis, who presumably have a latent form of tuberculosis infection by definition in the blood serum of anti-tuberculosis antibodies and the level of neopterin in the blood plasma [E.V. Vasilyeva et al. "Comparative value of quantiferon test, neopterin and specific anti-tuberculosis antibodies for clinical and laboratory diagnostics of pulmonary tuberculosis", published in the journal Clinical laboratory diagnostics, 2013, No. 5, pp. 21-26]. studies of specific antibodies were carried out using the test system "ELISA -anti TUB", produced at the Research Institute of Epidemiology and Microbiology named after Pasteur, which is based on the use of MBT culture filtrate as antigen, i.e. tuberculin. However, the sensitivity of determining antibodies in this test system is relatively low, i.e. in known patients with tuberculosis - 54%, and in the studied contact persons with a latent form of infection - only 6%.

Туберкулезная инфекция у детей и подростков в раннем периоде ее активности чрезвычайно мало выражена, т.е. отсутствует выделение МБТ с мокротой, которую в случаях ее выделения, дети заглатывают. Ранние признаки активности туберкулезной инфекции при использовании рентгенологических методов обследования, в том числе компьютерная томография органов грудной клетки, часто имеют мало выраженный характер, например, «определяются мелкие внутрилегочные мягкотканные очаги размером 1-5 мм». Таким образом, существует потребность в разработке достоверных способов определения ранних признаков активности туберкулезной инфекции у детей и подростков при наличии латентной формы этой инфекции.Tuberculosis infection in children and adolescents in the early period of its activity is extremely low, i.e. there is no discharge of MBT with sputum, which in cases of its release, children swallow. Early signs of tuberculosis infection activity when using X-ray methods of examination, including computed tomography of the chest organs, are often poorly expressed, for example, "small intrapulmonary soft tissue foci 1-5 mm in size are determined." Thus, there is a need to develop reliable methods for determining early signs of activity of tuberculosis infection in children and adolescents in the presence of a latent form of this infection.

Техническая проблема решается путем использования комбинации двух тестов: специфического - гуморального, путем определения антител в сыворотке крови к специфическим белкам микобактерий туберкулеза ESAT-6-CFP-10 и относительно неспецифического теста - определения молекулы неоптерина в концентрации не менее 9 наномоль/мл.The technical problem is solved by using a combination of two tests: specific - humoral, by determining antibodies in the blood serum to specific proteins of mycobacterium tuberculosis ESAT-6-CFP-10 and a relatively nonspecific test - determining the neopterin molecule at a concentration of at least 9 nanomoles / ml.

Раскрытие изобретенияDisclosure of invention

Техническим результатом заявляемого изобретения является разработка иммунологического способа определения активности туберкулезной инфекции у детей и подростков с чувствительностью при минимально выраженных ее формах составляет 75,6% при специфичности 76,5%.The technical result of the claimed invention is the development of an immunological method for determining the activity of tuberculosis infection in children and adolescents with a sensitivity of 75.6% in its minimally expressed forms, with a specificity of 76.5%.

Технический результат достигается способом дифференцирования активной и латентной туберкулезной инфекции у детей и подростков, заключающимся в определении в сыворотке крови пациентов с латентной инфекцией антител, к специфическому рекомбинантному антигену ESAT-6-CFP-10, и определении в плазме крови неоптерина, при положительном результате определения специфических антител к рекомбинантному белку ESAT-6-CFP-10, определяемых с помощью иммуноферментного анализа с не менее, чем 3-кратным превышением оптической плотности опытного образца по сравнению с контрольным образцом (сыворотка не инфицированного пациента, что определяет индекс активности антител) и неоптерина на уровне не менее 9 наномоль/л делают вывод об активной форме туберкулезной инфекции у детей и подростков. При этом определение антител к рекомбинантному белку ESAT-6-CFP-10 проводят в образцах сыворотки крови, а определение неоптерина в образцах плазмы пациента. Для определения антител к рекомбинантному белку ESAT-6-CFP-10 сыворотку пациента используют в разведении 1:40, а в качестве контроля используют сыворотки неинфицированных здоровых доноров при отрицательной реакции на антиген-специфическую индукцию интерферона-гамма in vitro при использовании набора реагентов QuantiFeron TBGold ("Cellestis").The technical result is achieved by the method of differentiating active and latent tuberculosis infection in children and adolescents, which consists in determining in the blood serum of patients with latent infection of antibodies to the specific recombinant antigen ESAT-6-CFP-10, and determining neopterin in blood plasma, with a positive result of the determination specific antibodies to the recombinant ESAT-6-CFP-10 protein, determined by enzyme immunoassay with at least 3 times the optical density of the test sample compared to the control sample (serum of an uninfected patient, which determines the antibody activity index) and neopterin at a level of at least 9 nanomol / l, they conclude that the active form of tuberculosis infection in children and adolescents. In this case, the determination of antibodies to the recombinant protein ESAT-6-CFP-10 is carried out in blood serum samples, and the determination of neopterin in the patient's plasma samples. To determine antibodies to the recombinant ESAT-6-CFP-10 protein, the patient's serum is used at a dilution of 1:40, and the sera of uninfected healthy donors with a negative reaction to antigen-specific induction of interferon-gamma in vitro using the QuantiFeron TBGold reagent kit are used as a control. ("Cellestis").

Предпочтительно в качестве теста, определяющего наличие туберкулезного инфицирования использовать кожный тест или тесты in vitro, определяющие значимый уровень антиген-индуцированного интерферона-гамма при инкубации образцов крови с антигеном ESAT-6-CFP-10 с помощью наборов реагентов "Quantiferon ТВ gold" или "ТВ SPOT.TB".It is preferable to use a skin test or in vitro tests that determine a significant level of antigen-induced interferon-gamma during incubation of blood samples with ESAT-6-CFP-10 antigen using "Quantiferon TB gold" or " TV SPOT.TB ".

Определение специфических антител к специфическому для М. tuberculosis рекомбинантному белку ESAT-6-CFP-10, позволяет получать не менее 32% положительных результатов при исследовании сывороток крови у детей и подростков с латентной туберкулезной инфекцией, при 87% положительных результатах у детей и подростков с различными формами активной туберкулезной инфекции, а также количественное определение уровня неоптерина с концентрацией, характерной для пациентов детско-подросткового возраста с установленным туберкулезом, не менее 9 наномоль/л.Determination of specific antibodies to the recombinant protein ESAT-6-CFP-10, specific for M. tuberculosis, allows obtaining at least 32% of positive results in the study of blood sera in children and adolescents with latent tuberculosis infection, with 87% positive results in children and adolescents with various forms of active tuberculosis infection, as well as quantitative determination of the level of neopterin with a concentration characteristic of children and adolescents with established tuberculosis, not less than 9 nanomole / l.

Преимущества способа состоят в возможности выявить ранние признаки активной туберкулезной инфекции у детей и подростков (лица до 18 лет включительно (ст. 54 СК РФ)) при отсутствии очевидных рентгенологических признаков туберкулеза, отсутствии выделения микобактерий с мокротой или других очевидных признаков воспаления. При этом используется минимальное количество (1-3 мл) венозной крови. Результаты исследований могут рассматриваться как вероятные предикторы активной туберкулезной инфекции и служить более точным, по сравнению с традиционным, обоснованием для профилактического лечения противотуберкулезными препаратами, которые обладают побочными гепатотоксичными свойствами.The advantages of the method are the ability to detect early signs of active tuberculosis infection in children and adolescents (persons under 18 years of age inclusive (Art. 54 of the RF IC)) in the absence of obvious X-ray signs of tuberculosis, no excretion of mycobacteria with sputum or other obvious signs of inflammation. In this case, a minimum amount (1-3 ml) of venous blood is used. The research results can be considered as probable predictors of active tuberculosis infection and serve as a more accurate rationale for prophylactic treatment with anti-tuberculosis drugs, which have side hepatotoxic properties, compared to traditional ones.

Осуществление изобретенияImplementation of the invention

Проведенные исследования 75 пациентов отделения туберкулеза у детей и подростков ФГБУ «НМИЦ ФПИ» Минздрава России с признаками активной туберкулезной инфекции, в основном, с диагнозом туберкулеза внутригрудных лимфоузлов показали, что у 65 (87,2%) этих пациентов обнаруживались специфические противотуберкулезные антитела к рекомбинантному белку ESAT-6-CFP-10.Studies of 75 patients of the tuberculosis department in children and adolescents of the Federal State Budgetary Institution "NMITs FPI" of the Ministry of Health of Russia with signs of active tuberculosis infection, mainly diagnosed with tuberculosis of the intrathoracic lymph nodes, showed that 65 (87.2%) of these patients had specific anti-tuberculosis antibodies to recombinant ESAT-6-CFP-10 protein.

Повышенный уровень неоптерина в плазме крови, который составлял не менее 9 наномоль/мл у 31 пациента из 41 (75,6%), у которых в момент исследования определялся активный туберкулезный процесс в легких при среднем уровне 15,4±2,6 наномоль/мл.An increased level of neopterin in the blood plasma, which was not less than 9 nanomoles / ml in 31 out of 41 patients (75.6%), who at the time of the study had an active tuberculous process in the lungs with an average level of 15.4 ± 2.6 nanomoles / ml.

Проведенные исследования среди 149 пациентов детско-подросткового возраста с наличием латентной туберкулезной инфекции выявили 48 пациентов (32%), у которых отмечалась положительная реакция на присутствие противотуберкулезных антител, которые определяют с помощью заявленного способа к специфическому рекомбинантному белку ESAT-6-CFP-10, из которых у 17 из 48 пациентов концентрация неоптерина в образцах плазмы крови при количественном исследовании с помощью иммуноферментного анализа составляла не менее 9 нг/л. В результате клинико-рентгенологического обследования этой группы пациентов с использованием компьютерной томографии органов грудной клетки в 6 случаях был поставлен диагноз «туберкулез внутригрудных лимфоузлов»; в 6 случаях в легочной ткани этих пациентов определялись мягкотканные мелкие (1-5 мм) очаги в легочной ткани и в 5 случаях рентгенологических признаков туберкулеза обнаружено не было. На основании полученных данных можно заключить, что чувствительность иммунологического способа определения активности туберкулезной инфекции у детей и подростков при минимально выраженных ее формах составляет 75,6% при специфичности 70,6%. Однако, в отношении тех случаев, когда рентгенологических признаков не было выявлено, они могут рассматриваться как предикторы, что требует особого наблюдения и повторных исследований.Studies carried out among 149 adolescent patients with latent tuberculosis infection identified 48 patients (32%) who had a positive reaction to the presence of anti-tuberculosis antibodies, which are determined using the claimed method to a specific recombinant protein ESAT-6-CFP-10, of which, in 17 of 48 patients, the concentration of neopterin in blood plasma samples when quantitatively studied using enzyme-linked immunosorbent assay was at least 9 ng / L. As a result of clinical and X-ray examination of this group of patients with the use of computed tomography of the chest organs, in 6 cases the diagnosis was “tuberculosis of the intrathoracic lymph nodes”; in 6 cases, small soft tissue (1-5 mm) foci in the lung tissue were detected in the lung tissue of these patients, and in 5 cases no radiological signs of tuberculosis were found. Based on the data obtained, it can be concluded that the sensitivity of the immunological method for determining the activity of tuberculosis infection in children and adolescents with its minimally expressed forms is 75.6% with a specificity of 70.6%. However, in cases where radiological signs were not detected, they can be considered predictors, which requires special observation and repeated studies.

Осуществление изобретения проводится на основании положительных результатов специфического кожного теста, основанного на использовании рекомбинантного антигенного белка ESAT-6-CFP-10 (Диаскин-тест) или положительных результатов определения индукции интерферона-гамма к этому же специфическому для микобактерий туберкулеза (МБТ) белку с исследованием образцов цельной крови in vitro (наборы реагентов "QuantiFERON TBGold", "Т-SPOT.ТВ"или «Тубинферон» Россия), определении антител в сыворотке крови к приведенным выше антигенам и количественного определения молекулы неоптерина в образцах плазмы в концентрации не менее 9 наномоль/л. Заявляемый способ определения противотуберкулезных антител существенно более специфичен и чувствителен, по сравнению с ранее описанным в работе Е.В. Васильевой и сотрудников [«Клиническая лабораторная диагностика», 2013, №5, стр. 21-26), в которой использовали неспецифический антигенный продукт (фильтрат культуры МБТ)]. Заявленный способ обнаруживает антитела у детей с активной формой туберкулезной инфекции в 87,2% случаев, а при латентной форме в 32,1% случаев.The implementation of the invention is carried out on the basis of positive results of a specific skin test based on the use of the recombinant antigenic protein ESAT-6-CFP-10 (Diaskin test) or positive results of determining the induction of interferon-gamma to the same protein specific for Mycobacterium tuberculosis (MBT) with the study in vitro whole blood samples (reagent kits "QuantiFERON TBGold", "T-SPOT.TV" or "Tubinferon" Russia), determination of antibodies in blood serum to the above antigens and quantitative determination of the neopterin molecule in plasma samples at a concentration of at least 9 nanomolar / l. The inventive method for the determination of anti-tuberculosis antibodies is significantly more specific and sensitive, compared with the previously described in the work of E.V. Vasilyeva and colleagues ["Clinical laboratory diagnostics", 2013, No. 5, pp. 21-26), which used a non-specific antigenic product (MBT culture filtrate)]. The claimed method detects antibodies in children with an active form of tuberculosis infection in 87.2% of cases, and in a latent form in 32.1% of cases.

В цитируемой работе Е.В. Васильевой также описывается определение концентрации молекулы неоптерина у взрослых пациентов - больных туберкулезом легких, у большинства которых в мокроте выделялись микобактерий туберкулеза. Однако, у пациентов детско-подросткового возраста даже при наличии очевидных рентгенологических признаков активной туберкулезной инфекции микобактерий туберкулеза очень редко выделяются с мокротой.In the cited work, E.V. Vasilyeva also describes the determination of the concentration of the neopterin molecule in adult patients - patients with pulmonary tuberculosis, in most of whom mycobacterium tuberculosis was secreted in their sputum. However, in adolescent patients, even in the presence of obvious X-ray signs of active tuberculosis infection, Mycobacterium tuberculosis is very rarely excreted with sputum.

В нашем исследовании пороговым уровнем неоптерина при активной инфекции была принята концентрация в 9 ннаномоль/л. Из 41 пациента детско-подросткового возраста (3-14 лет), у которых в период исследования определялась активная форма туберкулезной инфекции, концентрация неоптерина выше 9 наномоль/л была установлена у 31 пациента (75,6%). Положительный результат определения специфических антител среди пациентов с высоким уровнем неоптерина (не менее 9 наномоль/л) определялся в 82% случаев.In our study, the threshold level of neopterin in active infection was taken as a concentration of 9 nnomol / L. Of 41 patients of childhood and adolescence (3-14 years old) in whom an active form of tuberculosis infection was determined during the study period, the concentration of neopterin above 9 nanomol / l was found in 31 patients (75.6%). A positive result for the determination of specific antibodies among patients with a high level of neopterin (at least 9 nanomol / l) was determined in 82% of cases.

В нашем исследовании были также 149 пациентов, находившихся под амбулаторным наблюдением фтизиатров Московского областного противотуберкулезного диспансера.In our study, there were also 149 patients who were under the outpatient supervision of phthisiatricians of the Moscow Regional Anti-Tuberculosis Dispensary.

Были изучены результаты продукции в цельной крови in vitro ряда антиген-индуцированных цитокинов: интерферона-гамма, белка IP-10 и фактора некроза опухолей альфа при использовании в качестве антигена-индуктора слитного белка ESAT-6-CFP-10, полученного и очищенного от липополисахаридов в нашей лаборатории. Было проведено определение антител сыворотки крови к этому же специфическому слитному белку и уровни продукции в плазме крови острофазных белков: С-реактивного белка, сывороточного амилоида А, а также неоптерина.We studied the results of in vitro whole blood production of a number of antigen-induced cytokines: interferon-gamma, IP-10 protein, and tumor necrosis factor alpha when using the ESAT-6-CFP-10 fusion protein, obtained and purified from lipopolysaccharides, as an inducer antigen. in our laboratory. The determination of serum antibodies to the same specific fusion protein and the levels of production in blood plasma of acute phase proteins: C-reactive protein, serum amyloid A, and neopterin were carried out.

Для определения специфических антител рекомбинантный белок ESAT6-CFP-10 (ООО «Мон-А») в концентрации 5 мкг/мл сорбировали в лунках поливинилхлоридного планшета и проводили исследование с помощью традиционного иммуноферментного анализа [«Иммуноферментный анализ», Москва, изд. «Мир»,1988 г. 444 стр. ; М.А. Владимирский, А.А. Приймак, Г.А. Ермолин, В.М. Должанский, «Иммуноферментный твердофазный метод выявления антител к микобактериям для серологической диагностики туберкулеза», Лабораторное дело, 1986 г. №9, стр. 558-561]. Сыворотки исследуемых пациентов исследовали при разведении фосфатно-солевым буферным раствором (2% бычьего сывороточного альбумина, РН -7,2) в соотношении 1:40; в качестве контроля использовали сыворотки неинфицированных здоровых доноров при отрицательной реакции на антиген-специфическую индукцию интерферона-гамма in vitro при использовании набора реагентов QuantiFeron TBGold ("Cellestis"). Результаты анализов измеряли по оптической плотности при 490 нм на планшетном фотометре компании БиоРад. Результаты считались положительными при не менее, чем двукратном превышении оптической плотности (ОП) в опытной пробе, по сравнению с контрольным образцом. Определение активной туберкулезной инфекции оценивается при не менее, чем трехкратном превышении ОП в опытной пробе.To determine specific antibodies, the recombinant protein ESAT6-CFP-10 (Mon-A LLC) at a concentration of 5 μg / ml was sorbed in the wells of a polyvinyl chloride plate and the study was carried out using a traditional enzyme-linked immunosorbent assay [Enzyme-linked immunosorbent assay, Moscow, ed. "The World", 1988 444 pages; M.A. Vladimirsky, A.A. Priymak, G.A. Ermolin, V.M. Dolzhansky, "An enzyme-linked immunosorbent assay for detecting antibodies to mycobacteria for serological diagnosis of tuberculosis," Laboratornoe Delo, 1986, No. 9, pp. 558-561]. The sera of the studied patients were investigated by dilution with phosphate-buffered saline (2% bovine serum albumin, pH -7.2) in a ratio of 1:40; As a control, we used sera of uninfected healthy donors with a negative reaction to antigen-specific induction of interferon-gamma in vitro using a QuantiFeron TBGold reagent kit (Cellestis). The results of the analyzes were measured by optical density at 490 nm using a BioRad plate photometer. The results were considered positive when the optical density (OD) in the experimental sample was not less than two times higher than in the control sample. Determination of active tuberculosis infection is assessed when the OD in the experimental sample is at least threefold.

Было также проведено изучение уровня неоптерина в неинкубированной плазме крови исследуемых пациентов. Концентрацию неоптерина определяли с помощью набора реагентов для иммуноферментного анализ компании «Gen Way» (Германия). В результате проведенных исследований мы определили пороговый уровень неоптерина 9 наномоль/л, который был принят для детей и подростков в качестве положительного критерия для оценки клеточного иммунного ответа. Для взрослых пороговым уровнем считается концентрация 10 наномоль /л.We also studied the level of neopterin in non-incubated blood plasma of the studied patients. The concentration of neopterin was determined using a kit of reagents for enzyme-linked immunosorbent assay (Gen Way, Germany). As a result of our studies, we determined the threshold level of neopterin of 9 nanomol / l, which was adopted for children and adolescents as a positive criterion for assessing the cellular immune response. For adults, the threshold is 10 nanomole / L.

Способ реализуется при следующих условиях:The method is implemented under the following conditions:

- положительном кожном тесте - реакции на специфический рекомбинантный антиген ESAT-6-CFP-10 («Диаскин-тест»), либо положительном результате ин-витрового теста при использовании наборов "Quantiferon TBgold" или "ТВ SPOT.ТВ", определяющих значимый уровень антиген-индуцированного интерферона-гамма,- positive skin test - reaction to a specific recombinant antigen ESAT-6-CFP-10 ("Diaskin-test"), or a positive result of an in-vitro test using the "Quantiferon TBgold" or "TV SPOT.TV" kits, which determine a significant level antigen-induced interferon-gamma,

- положительном результате определения специфических антител к рекомбинантному белку ESAT-6-CFP-10 при не менее, чем 3-х кратном превышении ОП опытной пробы по сравнению с контрольным образцом.- a positive result of the determination of specific antibodies to the recombinant protein ESAT-6-CFP-10 with at least 3-fold excess of the OD of the experimental sample in comparison with the control sample.

- определении неоптерина на уровне не менее 9 наномоль/л.- determination of neopterin at a level of at least 9 nanomol / l.

Результаты применения ESAT-6-CFP-10 для определения специфических антител у детей и подростков с активной туберкулезной инфекцией были положительными у 87,2% пациентов, а при латентной туберкулезной инфекции положительные результаты наблюдали у 32,1% детей и подростков.The results of using ESAT-6-CFP-10 for the determination of specific antibodies in children and adolescents with active tuberculosis infection were positive in 87.2% of patients, and positive results were observed in 32.1% of children and adolescents with latent tuberculosis infection.

Наиболее дифференцирующим признаком оказалось определение в качестве маркера иммунного ответа неоптерина при концентрации выше 9 наномоль/л, который определяли у 75,6% детей, у которых в период исследования определялась активная форма туберкулеза поступивших для стационарного лечения. Средний уровень неоптерина у пациентов с активной туберкулезной инфекцией - 15,4±2,6 нномоль/л. Частично пролеченные пациенты дают более низкие цифры неоптерина. Gen Way Biotech Inc.The most differentiating feature was the determination of neopterin as a marker of the immune response at a concentration above 9 nanomol / l, which was determined in 75.6% of children who had an active form of tuberculosis during the study period admitted for hospital treatment. The average level of neopterin in patients with active tuberculosis infection is 15.4 ± 2.6 nnomol / L. Partially treated patients give lower neopterin numbers. Gen Way Biotech Inc.

Из 149 пациентов с латентной формой инфекции, который определялся по результатам Диаскин-теста или при анализе антиген-специфической индукции интерферона-гамма у 49 пациентов был отмечен положительный результат определения специфических антител к белку Esat-6-CFP-10, из которых у 17 уровень неоптерина был не менее или более 9 нг/мл.Of 149 patients with a latent form of infection, which was determined by the results of the Diaskin test or by the analysis of antigen-specific induction of interferon-gamma, 49 patients showed a positive result for the determination of specific antibodies to the Esat-6-CFP-10 protein, of which 17 had a level neopterin was at least or more than 9 ng / ml.

При анализе данных компьютерной томографии органов грудной клетки у 6 из 17 пациентов этой группы определялись рентгенологические признаки активной инфекции: «туберкулез внутригрудных лимфоузлов», у 6 пациентов определялись - мелкие (1-5 мм) мягкотканные очаги субплеврально или в легочной ткани в 5 случаях данные компьютерной томографии соответствовали норме.When analyzing the data of computed tomography of the chest organs in 6 out of 17 patients in this group, X-ray signs of active infection were determined: "tuberculosis of the intrathoracic lymph nodes", in 6 patients, small (1-5 mm) soft tissue foci subpleurally or in the lung tissue in 5 cases data computed tomography was normal.

Таким образом, для дифференцирования активной и латентной туберкулезной инфекции у детей и подростков наиболее эффективной была следующая комбинация признаков:Thus, the following combination of features was most effective for differentiating active and latent tuberculosis infection in children and adolescents:

- положительная кожная реакция на специфический рекомбинантный антиген ESAT-6-CFP-10 («Диаскин-тест»), либо положительный результат ин-витрового теста при использовании наборов "Quantiferon TBgold" или "ТВ spot", определяющих значимый уровень антиген-индуцированного интерферона-гамма;- a positive skin reaction to a specific recombinant antigen ESAT-6-CFP-10 ("Diaskin test"), or a positive result of an in-vitro test when using the "Quantiferon TBgold" or "TB spot" kits, which determine a significant level of antigen-induced interferon -gamma;

- положительный результат определения специфических антител к рекомбинантному белку ESAT-6-CFP-10- positive result of the determination of specific antibodies to the recombinant protein ESAT-6-CFP-10

- определение неоптерина на уровне не менее 9 наномоль/л.- determination of neopterin at a level of at least 9 nanomol / l.

Примеры постановки диагноза заявляемым способом.Examples of diagnosis by the claimed method.

К. 2007 г.р., подросток женского пола. Положительный кожный тест с рекомбинантным специфическим антигеном («Диаскинтест»), положительный тест ин витро по индукции интерферона-гамма в цельной крови с антигеном ESAT-6-CFP-10 - 151 пг/мл, при пороговом положительном уровне - не менее 14 пг/мл;, положительный результат определения антител к этому же антигену в сыворотке крови при использовании иммуноферментного анализа (оптическая плотность в реакции в три раза превышает уровень отрицательного контроля), уровень неоптерина в плазме - 26,4 наномоль/л. При компьютерной томографии органов грудной клетки определяются мелкие кальцинированные очаги в нижних долях обеих легких. Поставлен диагноз: первичный туберкулезный комплекс.K. 2007, female teenager. Positive skin test with a recombinant specific antigen (Diaskintest), positive in vitro test for the induction of interferon-gamma in whole blood with ESAT-6-CFP-10 antigen - 151 pg / ml, with a threshold positive level - not less than 14 pg / ml ;, a positive result of the determination of antibodies to the same antigen in the blood serum using enzyme-linked immunosorbent assay (the optical density in the reaction is three times higher than the level of the negative control), the level of neopterin in plasma is 26.4 nanomole / l. With computed tomography of the chest organs, small calcified foci are determined in the lower lobes of both lungs. Diagnosed with primary tuberculosis complex.

П. 2002 г.р., подросток муж пола. Положительный кожный тест - Диаскинтест. Положительный тест ин витро по индукции интерферона-гамма с антигеном ESAT-6-CFP-10 - 26,3 пг/мл, положительный результат определения антител к этому же антигену в сыворотке крови при использовании иммуноферментного анализа (оптическая плотность в реакции более, чем в два раза превышает уровень отрицательного контроля), уровень неоптерина в плазме - 15,8 наномоль/л. По результатам компьютерной томографии - туберкулез внутригрудных лимфоузлов в фазе кальцинации.P. 2002, teenage husband of the sex. Positive skin test - Diaskintest. Positive in vitro test for the induction of interferon-gamma with the ESAT-6-CFP-10 antigen - 26.3 pg / ml, a positive result for the determination of antibodies to the same antigen in the blood serum using an enzyme-linked immunosorbent assay (the optical density in the reaction is more than in twice the level of negative control), the level of neopterin in plasma - 15.8 nanomole / l. According to the results of computed tomography - tuberculosis of the intrathoracic lymph nodes in the calcification phase.

Г. 2003 г.р., подросток женского пола. Положительный гиперергический кожный тест - Диаскинтест - 22 мм, Положительный тест ин витро по индукции интерферона-гамма с антигеном ESAT-6-CFP-10; - 24,9 пг/мл; положительный результат определения антител к этому же антигену в сыворотке крови при использовании иммуноферментного анализа (оптическая плотность в реакции в шесть раз превышает уровень отрицательного контроля), уровень неоптерина - 18 наномоль/л. При компьютерной томографии органов грудной клетки - незначительные изменения в легких - два маленьких участка фиброза 3 мм и 5 мм.Born in 2003, female teenager. Positive hyperergic skin test - Diaskintest - 22 mm, Positive in vitro test for the induction of interferon-gamma with ESAT-6-CFP-10 antigen; - 24.9 pg / ml; a positive result of the determination of antibodies to the same antigen in the blood serum using enzyme-linked immunosorbent assay (the optical density in the reaction is six times higher than the level of the negative control), the level of neopterin is 18 nmol / l. With computed tomography of the chest organs, there are minor changes in the lungs - two small areas of fibrosis, 3 mm and 5 mm.

В. 2008 г.р., ребенок женского пола. Положительный Диаскинтест. Положительный тест ин витро по индукции интерферона-гамма с антигеном ESAT-6-CFP-10; - 33,6 пг/мл; положительный результат определения антител к этому же антигену в сыворотке крови при использовании иммуноферментного анализа (оптическая плотность в реакции в шесть раз превышает уровень отрицательного контроля; уровень неоптерина - 10 наномоль/л. При компьютерной томографии органов грудной клетки - мелкие субплевральные очаги.Born in 2008, female child. Positive Diaskintest. Positive test in vitro for the induction of interferon-gamma with the ESAT-6-CFP-10 antigen; - 33.6 pg / ml; a positive result of the determination of antibodies to the same antigen in the blood serum using an enzyme-linked immunosorbent assay (the optical density in the reaction is six times higher than the level of negative control; the level of neopterin is 10 nanomol / l. Computed tomography of the chest organs shows small subpleural foci.

В. 2006 г. р., по др. муж. пола. Положительный Диаскинтест. Положительный тест ин витро по индукции интерферона-гамма с антигеном ESAT-6-CFP-10; - 128 пг/л; положительный результат определения антител к этому же антигену в сыворотке крови при использовании иммуноферментного анализа (оптическая плотность в реакции, в семь раз превышает уровень отрицательного контроля; уровень неоптерина - 11,6 наномоль/л. По результатам компьютерной томографии органов грудной клетки поставлен диагноз: туберкулез внутригрудных лимфоузлов, госпитализирован в Центральный НИИ туберкулеза.B. 2006 year of birth, according to other husband. floor. Positive Diaskintest. Positive test in vitro for the induction of interferon-gamma with the ESAT-6-CFP-10 antigen; - 128 pg / l; positive result of the determination of antibodies to the same antigen in blood serum when using enzyme immunoassay (optical density in the reaction, seven times higher than the level of negative control; neopterin level - 11.6 nanomole / l. According to the results of computed tomography of the chest organs, the diagnosis was made: tuberculosis intrathoracic lymph nodes, hospitalized at the Central Research Institute of Tuberculosis.

С. 2002 г.р., подр. муж. пола. Положительный Диаскинтест. Положительный тест ин витро по индукции интерферона-гамма с антигеном ESAT-6-CFP-10; - 24,4 пг/л; положительный результат определения антител к этому же антигену в сыворотке крови при использовании иммуноферментного анализа (оптическая плотность в реакции, в три раза превышает уровень отрицательного контроля; уровень неоптерина - 14,3 наномоль/л. При компьютерной томографии органов грудной клетки определяется мягкотканный очаг 5 мм в 9-м сегменте левого легкого.S. 2002, p. husband. floor. Positive Diaskintest. Positive test in vitro for the induction of interferon-gamma with the ESAT-6-CFP-10 antigen; - 24.4 pg / l; positive result of determining antibodies to the same antigen in blood serum using enzyme immunoassay (optical density in the reaction is three times higher than the level of negative control; the level of neopterin is 14.3 nanomole / l. Computed tomography of the chest organs determines a soft tissue focus of 5 mm in the 9th segment of the left lung.

А. Подросток мужского пола 2003 г.р. Положительный Диаскинтест, положительный результат определения специфических антител, уровень неоптерина - 9,9 наномоль/л. На компьютерной томографии органов грудной клетки патологии не отмечено. При этом другой патологии, особенно патологии аутоиммунной природы, которая могла бы быть причиной иммунологических признаков, подозрительных на наличие активно туберкулезной инфекции не обнаружено. Вывод: пациент нуждается в проведении химиопрофилактического курса. Химиопрофилактический курс проводили с использованием двух противотуберкулезных препаратов в течение 2-х месяцев. После проведения курса - положительный Диаскинтест, положительный результат определения специфических антител, уровень неоптерина в плазме крови - 4 наномоль/л. На компьютерной томографии органов грудной клетки патологии не отмечено. Вывод: у пациента латентная туберкулезная инфекция. Целесообразно повторить исследование иммунологических показателей, используемых для определения активной туберкулезной инфекции через три месяца.A. Male teenager born in 2003 Positive Diaskintest, a positive result for the determination of specific antibodies, the level of neopterin is 9.9 nanomol / l. Computed tomography of the chest organs showed no pathology. At the same time, no other pathology, especially the pathology of an autoimmune nature, which could be the cause of immunological signs suspicious of the presence of an active tuberculosis infection, was found. Conclusion: the patient needs a chemopreventive course. The chemopreventive course was carried out using two anti-tuberculosis drugs for 2 months. After the course - a positive Diaskintest, a positive result of the determination of specific antibodies, the level of neopterin in the blood plasma is 4 nanomol / l. Computed tomography of the chest organs showed no pathology. Conclusion: the patient has a latent tuberculosis infection. It is advisable to repeat the study of immunological indicators used to determine active tuberculosis infection after three months.

М. Подросток мужского пола 2006 г.р. Положительный Диаскинтест, положительный результат определения специфических антител, уровень неоптерина в плазме крови - 4 наномоль/л. На компьютерной томографии органов грудной клетки патологии не отмечено. Вывод: у пациента латентная туберкулезная инфекция. Целесообразно повторить исследование иммунологических показателей, используемых для определения активной туберкулезной инфекции через три месяца.M. Male teenager born in 2006 Positive Diaskintest, a positive result for the determination of specific antibodies, the level of neopterin in the blood plasma is 4 nanomol / l. Computed tomography of the chest organs showed no pathology. Conclusion: the patient has a latent tuberculosis infection. It is advisable to repeat the study of immunological indicators used to determine active tuberculosis infection after three months.

Claims

1. A method for differentiating active and latent tuberculosis infection in children and adolescents, characterized by the fact that in patients with a positive skin test with a recombinant tuberculosis allergen (ATP) or with a positive reaction to antigen-specific induction of interferon-gamma, specific antibodies to the recombinant ESAT-6-CFP-10 protein in blood serum samples and determination of neopterin in blood plasma samples of a patient, with a positive result of the determination of specific antibodies to the recombinant ESAT-6-CFP-10 protein with no less than three times the optical density of the test sample compared to with control in enzyme-linked immunosorbent assay and a neopterin level of at least 9 nanomol / l, they conclude that there is active tuberculosis infection in children and adolescents, while the serum of uninfected healthy donors is used as a control with a negative reaction to antigen-specific induction of interferon-gamma in vitro ...

2. The method according to claim 1, characterized in that a skin test or in vitro tests are used as a test for determining the presence of tuberculosis infection, which determine a significant level of antigen-induced interferon-gamma during incubation of blood samples with ESAT-6-CFP-10 antigen using the "Quantiferon TBgold" or "TB SPOT.TB" reagent kits.

3. The method according to claim 1, characterized in that for the determination of antibodies to the recombinant ESAT-6-CFP-10 protein, the patient's serum is used at a dilution of 1:40, and the determination of the response to antigen-specific induction of interferon-gamma in vitro is carried out using QuantiFeron TBGold reagent kit (Cellestis).