RU2724585C2

RU2724585C2 - Probiotic composition for intestinal microflora restoration and for preventing the syndrome of excessive bacterial growth and diarrhea and a method for preparing it

Info

Publication number: RU2724585C2
Application number: RU2018124513A
Authority: RU
Inventors: Владимир Трофимович Ивашкин
Original assignee: Общество С Ограниченной Ответственностью "Валента - Интеллект"
Priority date: 2018-07-04
Filing date: 2018-07-04
Publication date: 2020-06-25
Also published as: RU2018124513A3; RU2018124513A

Abstract

FIELD: nutraceutical agent.SUBSTANCE: group of inventions relates to a probiotic composition for intestinal microflora restoration and for preventing the syndrome of excessive bacterial growth and diarrhea, including antibiotic-associated diarrhea and Clostridium dificile-associated diarrhea. Composition is in form of capsule, containing a dry mixture of probiotic bifidobacteria Bifidobacterium longum and Bifidobacterium bifidum and probiotic lactobacilli Lactobacillus rhamnosus in amount of 0.05 to 0.1 g, as well as Saccharomyces cerevisiae yeast lysate in amount of 0.0005 g and nutriceutically acceptable auxiliary components, including microcrystalline cellulose and a nutriceutically acceptable stearic acid salt in amount of 0.002–0.004 g, selected from calcium of stearate and magnesium stearate, wherein content in said composition of each of probiotic bifidobacteria species, including Bifidobacterium longum and Bifidobacterium bifidum, is not less than 1x10 CFU per 1 gram of dry mixture, content of probiotic lactobacilli Lactobacillus rhamnosus is also not less than 1x10 CFU per 1 gram of dry mixture. Group of inventions also relates to a method of producing a probiotic composition.EFFECT: group of inventions ensures preservation of viability and useful properties of probiotic bacteria both during manufacture and for a long period of time (for 3 years, as well as at end of 24 months of storage, the viability of the probiotic bacteria contained in the probiotic composition under the invention is maintained at a high level of at least 90 %).8 cl, 1 tbl, 1 ex

Description

Область техники:Field of Technology:

Настоящее изобретение относится к пробиотической композиции (биологически активной пищевой добавке) для восстановления микрофлоры кишечника и для профилактики синдрома избыточного бактериального роста и диарей, включая антибиотик-ассоциированный дисбактериоз и антибиотик-ассоциированную диарею, а также к технологии получения такой пробиотической композиции. The present invention relates to a probiotic composition (dietary supplement) for the restoration of intestinal microflora and for the prevention of bacterial overgrowth syndrome and diarrhea, including antibiotic-associated dysbiosis and antibiotic-associated diarrhea, as well as a technology for producing such a probiotic composition.

Уровень техники:The prior art:

Бифидобактерии являются одними из нескольких основных бактериальных культур, присутствующих в микрофлоре толстой кишки человека, и представляют собой пробиотические микроорганизмы. (Под термином «пробиотический микроорганизм» здесь и далее понимаются активные микроорганизмы, способные приносить организму-хозяину пользу в отношении здоровья в том случае, когда их введение осуществляется в достаточном количестве. См.: "Joint FAO/WHO Expert Consultation Probiotics in food." - "FAO Food and nutrition paper", №85 [1]; см. список ссылок в конце настоящего описания).Bifidobacteria are one of several major bacterial cultures present in the microflora of the human colon, and are probiotic microorganisms. (The term "probiotic microorganism" hereinafter refers to active microorganisms that can bring health benefits to the host when they are administered in sufficient quantities. See: "Joint FAO / WHO Expert Consultation Probiotics in food." - "FAO Food and nutrition paper", No. 85 [1]; see the list of links at the end of this description).

В уровне техники показано, что важнейшими для поддержания здоровья человека пробиотическими микроорганизмами являются бифидобактерии (Bifidobacterium) и лактобациллы (Lactobacillus) (Reid G., Jass J., et al., 2003 [2]). Бифидобактерии и лактобациллы широко применяются для создания пробиотических композиций, предназначенных для различных целей, в частности, для профилактики и коррекции нарушения деятельности пищеварительной системы, в том числе, для профилактики диареи. Из уровня техники хорошо известно, что диарея, связанная с применением антибиотиков, является одним из наиболее распространенных осложнений антибиотикотерапии. Показано, что с антибиотик-ассоциированной диареей сталкиваются от 5 до 39% пациентов, использующих антибиотики. Другим важным осложнением антибиотикотерапии часто бывает Clostridium dificile (С. dificile)-ассоциированная диарея. Ее развитие связано с подавлением нормальной микрофлоры кишечника под действием антибиотиков, что создает благоприятные условия для размножения C. difficile и для перехода нетоксигенных клостридий в токсинобразующие формы. Другими факторами риска для C. difficile-ассоциированной диареи являются пожилой возраст пациента (старше 65 лет), иммуносупрессивная терапия и др. In the prior art it has been shown that the most important probiotic microorganisms for maintaining human health are bifidobacterium and lactobacillus (Reid G., Jass J., et al., 2003 [2]). Bifidobacteria and lactobacilli are widely used to create probiotic compositions intended for various purposes, in particular, for the prevention and correction of disorders of the digestive system, including the prevention of diarrhea. It is well known in the art that diarrhea associated with the use of antibiotics is one of the most common complications of antibiotic therapy. It has been shown that from 5 to 39% of patients using antibiotics experience antibiotic-associated diarrhea. Another important complication of antibiotic therapy is often Clostridium dificile (C. dificile) -associated diarrhea. Its development is associated with the suppression of normal intestinal microflora under the action of antibiotics, which creates favorable conditions for the propagation of C. difficile and for the transition of non-toxigenic clostridia to toxin-forming forms. Other risk factors for C. difficile-associated diarrhea are the elderly patient (over 65), immunosuppressive therapy, etc.

В работах McFarland L.V., 2011 [3-5] показано, что лактобактерии и бифидобактерии обладают очень высоким профилактическим потенциалом, который позволяет применять их для профилактики диарей и, в частности, для профилактики антибиотик-ассоциированных и C. dificile-ассоциированных диарей. McFarland L.V., 2011 [3-5] showed that lactobacilli and bifidobacteria have a very high prophylactic potential, which allows them to be used to prevent diarrhea and, in particular, to prevent antibiotic-associated and C. dificile-associated diarrhea.

Из уровня техники известен ряд препаратов на основе пробиотических бактерий, которые могут быть использованы для профилактики диарей, в том числе, антибиотик-ассоциированных диарей и C. dificile-ассоциированный диарей. Например, из патента RU 2466185 C2, 10.11.2012 [6] известен пробиотический штамм бифидобактерий Bifidobacterium longum, депонированный в Национальных коллекциях промышленных, пищевых и морских бактерий (NCIMB), номер депонирования 41387, и пробиотическая композиция, содержащая указанный штамм Bifidobacterium longum совместно с фармацевтически приемлемым носителем, таким как капсула, таблетка или порошок для приема внутрь, или пищевым носителем, таким как сквашенное молоко, йогурт, замороженный йогурт, сухое молоко, молочный концентрат и так далее. Пробиотический штамм и пробиотическая композиция [6] могут использоваться, в частности, для профилактики и/или лечения воспалительного заболевания кишечника, синдрома раздраженного кишечника, а также диареи, включая антибиотик-ассоциированную диарею. Тем не менее, пробиотическая композиция [6] не использует пробиотический потенциал других бифидобактерий, а также лактобацилл, что ограничивает возможности ее применения.A number of drugs based on probiotic bacteria are known in the art that can be used to prevent diarrhea, including antibiotic-associated diarrhea and C. dificile-associated diarrhea. For example, from the patent RU 2466185 C2, 11/10/2012 [6], a probiotic strain of bifidobacteria Bifidobacterium longum, deposited in the National Collections of Industrial, Food and Marine Bacteria (NCIMB), deposit number 41387, and a probiotic composition containing the specified strain of Bifidobacterium longum together with a pharmaceutically acceptable carrier, such as a capsule, tablet or powder for oral administration, or a food carrier, such as fermented milk, yogurt, frozen yogurt, milk powder, milk concentrate and so on. The probiotic strain and probiotic composition [6] can be used, in particular, for the prevention and / or treatment of inflammatory bowel disease, irritable bowel syndrome, as well as diarrhea, including antibiotic-associated diarrhea. However, the probiotic composition [6] does not use the probiotic potential of other bifidobacteria, as well as lactobacilli, which limits the possibility of its use.

Из патента РФ RU 2546251 C2, 10.04.2015 [7] известен пробиотический штамм бифидобактерий Bifidobacterium longum NCIMB 41676, а также пробиотический состав, содержащий данный штамм. Штамм и состав [7] могут использоваться для профилактики и/или лечения болезни воспаленного кишечника, синдрома раздраженного кишечника, диарейных состояний, диареи, вызванной антибиотиками, детской диареи и др. заболеваний. Так же, как и композиция [6], композиция [7] не использует пробиотический потенциал других пробиотических микроорганизмов, например, лактобацилл.From the RF patent RU 2546251 C2, 04/10/2015 [7] a probiotic strain of bifidobacteria Bifidobacterium longum NCIMB 41676 is known, as well as a probiotic composition containing this strain. The strain and composition [7] can be used for the prevention and / or treatment of infectious bowel disease, irritable bowel syndrome, diarrhea, diarrhea caused by antibiotics, childhood diarrhea, and other diseases. Like composition [6], composition [7] does not use the probiotic potential of other probiotic microorganisms, for example, lactobacilli.

Из патента РФ RU 2473681 С2, 27.01.2013 [8] известен пробиотический штамм Bifidobacterium longum NCIMB 41382, и пробиотическая композиция, содержащая указанный штамм. Штамм [8] и композиция, содержащая данный штамм бифидобактерий, могут использоваться, в частности, в профилактике и/или лечении воспалительной активности, например, нежелательной воспалительной активности желудочно-кишечного тракта. В частности, штамм и композиция [8] могут использоваться для профилактики и/или лечения диареи, ассоциированной с приемом антибиотиков. Однако, аналогично композициям [6] и [7], композиция [8] не использует пробиотический потенциал других пробиотических микроорганизмов, например, лактобактерий.From the patent of the Russian Federation RU 2473681 C2, 01/27/2013 [8] a probiotic strain of Bifidobacterium longum NCIMB 41382 is known, and a probiotic composition containing the specified strain. The strain [8] and the composition containing this strain of bifidobacteria can be used, in particular, in the prevention and / or treatment of inflammatory activity, for example, undesirable inflammatory activity of the gastrointestinal tract. In particular, the strain and composition [8] can be used to prevent and / or treat diarrhea associated with taking antibiotics. However, similar to compositions [6] and [7], composition [8] does not use the probiotic potential of other probiotic microorganisms, for example, lactobacilli.

Необходимо, таким образом, создание новых пробиотических средств, использующих пробиотический потенциал различных пробиотических лактобактерий и бифидобактерий и способных обеспечивать более эффективную профилактику заболеваний органов желудочно-кишечного тракта, в частности, профилактику диареи, включая диарею, ассоциированную с приемом антибиотиков, и диарею, вызванную Clostridium dificile.Thus, it is necessary to create new probiotic agents using the probiotic potential of various probiotic lactobacilli and bifidobacteria and capable of providing more effective prophylaxis of diseases of the gastrointestinal tract, in particular, the prevention of diarrhea, including diarrhea associated with taking antibiotics, and diarrhea caused by Clostridium dificile.

Из европейского патента EP 0199535 B1, 02.01.1992 [9] известна пробиотическая композиция, содержащая штамм лактобактерий Lactobacillus acidophilus, депонированный в Американской коллекции типовых культур (ATCC) под номером 53103, совместно с фармацевтически приемлемым или пищевым носителем, предлагаемая в качестве ближайшего аналога настоящего изобретения. Согласно патенту [9], носитель, без ограничения, может представлять собой пищевой носитель, например, молочный продукт, такой как молоко или йогурт. Композиция [9] предназначена для лечения и профилактики нежелательного побочного действия антибиотиков, в первую очередь, для профилактики антибиотик-ассоциированной диареи. Пробиотическую композицию [9] используют путем приема внутрь непосредственно перед приемом антибиотиков или одновременно с антибиотиками либо в течение 24 часов после приема антибиотиков.From the European patent EP 0199535 B1, 02.01.1992 [9] a probiotic composition is known containing a strain of lactobacilli Lactobacillus acidophilus, deposited in the American type culture collection (ATCC) under the number 53103, together with a pharmaceutically acceptable or food carrier, offered as the closest analogue of the present inventions. According to the patent [9], the carrier, without limitation, may be a food carrier, for example, a dairy product, such as milk or yogurt. The composition [9] is intended for the treatment and prevention of undesirable side effects of antibiotics, primarily for the prevention of antibiotic-associated diarrhea. The probiotic composition [9] is used by ingestion immediately before taking antibiotics or simultaneously with antibiotics or within 24 hours after taking antibiotics.

По-прежнему актуальной, однако, остается задача расширения арсенала средств (пробиотических композиций), использующих живые бифидобактерии, а также усиления пробиотических свойств таких композиций за счет использования других групп пробиотических микроорганизмов, способных при попадании в организм хозяина колонизировать кишечник и положительно влиять на здоровье хозяина. Кроме того, в ряде случаев срок хранения известных пробиотических композиций существенно ограничен и составляет 1-2 месяца.However, the task of expanding the arsenal of agents (probiotic compositions) using live bifidobacteria, as well as enhancing the probiotic properties of such compositions through the use of other groups of probiotic microorganisms that can colonize the intestines and positively affect the health of the host . In addition, in some cases, the shelf life of known probiotic compositions is significantly limited and is 1-2 months.

Одной из важнейших групп пробиотических организмов, благодаря которым свойства пробиотических композиций на основе бифидо- и лактобактерий могут быть усилены, являются дрожжи (Saccharomyces), в частности, пивные дрожжи (Saccharomyces cerevisiae). В работе Middelbos I. S., Godoy M. R., et al., 2007 [10] показано, что дрожжи при попадании их в организм хозяина оказывают положительное влияние на состояние здоровья последнего, при этом соответствующий пробиотический потенциал дрожжей может быть успешно использован для лечения и профилактики антибиотик-ассоциированной диареи, диареи путешественников, симптомов геликобактерной инфекции, острой диареи взрослых, воспалительной болезни кишечника, клостридиальной инфекции, синдрома раздраженного кишечника, ВИЧ-ассоциированной диареи и лямблиоза.One of the most important groups of probiotic organisms due to which the properties of probiotic compositions based on bifidobacteria and lactobacilli can be enhanced are yeast (Saccharomyces), in particular brewer's yeast (Saccharomyces cerevisiae). Middelbos IS, Godoy MR, et al., 2007 [10] showed that yeast when it enters the host has a positive effect on the health of the latter, while the corresponding probiotic potential of the yeast can be successfully used for the treatment and prevention of antibiotic associated diarrhea, travelers' diarrhea, symptoms of Helicobacter pylori infection, adult acute diarrhea, inflammatory bowel disease, clostridial infection, irritable bowel syndrome, HIV-associated diarrhea and giardiasis.

В ряде исследований, результаты которых обобщены в обзоре Taverniti V., Guglielmetti S., 2011 [11], показано, что полезное действие на здоровье человека способны оказывать не только живые дрожжи, но и убитые клетки дрожжей и даже фрагменты клеток дрожжей, при этом для таких инактивированных клеток и фрагментов клеток дрожжей, обладающих пробиотическим действием, Taverniti V. и Guglielmetti S. [11] предложили термин «парапробиотики». In a number of studies, the results of which are summarized in the review of Taverniti V., Guglielmetti S., 2011 [11], it was shown that not only living yeast, but also killed yeast cells and even fragments of yeast cells can have a beneficial effect on human health. for such inactivated cells and fragments of yeast cells with probiotic action, Taverniti V. and Guglielmetti S. [11] proposed the term "paraprobiotic".

В работах Szajewska H., Skórka A., Dylag M., 2007 [12] и Feizizadeh S., Salehi-Abargouei A., Akbari V., 2014 [13] показан терапевтический потенциал живых дрожжей в лечении острой диареи у детей. Помимо этого, из краткого сообщения Omer Erdeve, Ulku Tiras и Yildiz Dallar, 2004 [14] известно, что живые дрожжи Saccharomyces boulardii эффективны в комплексном лечении и профилактике антибиотик-ассоциированной диареи у детей, включая диарею, вызванную комбинированными препаратами ампициллина и сульбактама, а также диарею, вызванную азитромицином. В опубликованной международной заявке WO 2006/021965 A1, 02.03.2006 [15] описана пробиотическая композиция для профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний, содержащая живые дрожжи (Saccharomyces spp., предпочтительно, Saccharomyces boulardii) и вспомогательные компоненты, выбранные из фармацевтически приемлемых и физиологически приемлемых компонентов, например, таких как стеарат магния и/или лактоза. Композиция [15] активна в отношении условно-патогенной микрофлоры кишечника, поддерживает полезное действие пробиотиков и может использоваться для профилактики диареи, такой как антибиотик-ассоциированная диарея. Однако работа [14], как и документы [12], [13] и опубликованная заявка [15], не рассматривают применение лизатов дрожжей, в частности, применение лизатов дрожжей совместно с пробиотическими бактериями, включая пробиотические лакто- или бифидобактерии, в составе комбинированных препаратов для профилактики антибиотик-ассоциированной диареи.Szajewska H., Skórka A., Dylag M., 2007 [12] and Feizizadeh S., Salehi-Abargouei A., Akbari V., 2014 [13] showed the therapeutic potential of live yeast in the treatment of acute diarrhea in children. In addition, from a brief report by Omer Erdeve, Ulku Tiras, and Yildiz Dallar, 2004 [14], it is known that live yeast Saccharomyces boulardii is effective in the complex treatment and prevention of antibiotic-associated diarrhea in children, including diarrhea caused by the combination of ampicillin and sulbactam, and also diarrhea caused by azithromycin. Published international application WO 2006/021965 A1, 02.03.2006 [15] describes a probiotic composition for the prevention and treatment of gastrointestinal diseases containing live yeast (Saccharomyces spp., Preferably Saccharomyces boulardii) and auxiliary components selected from pharmaceutically acceptable and physiologically acceptable components, for example, such as magnesium stearate and / or lactose. Composition [15] is active against opportunistic intestinal microflora, supports the beneficial effects of probiotics, and can be used to prevent diarrhea, such as antibiotic-associated diarrhea. However, the work [14], like the documents [12], [13] and the published application [15], do not consider the use of yeast lysates, in particular, the use of yeast lysates together with probiotic bacteria, including probiotic lactobacilli or bifidobacteria, as part of drugs for the prevention of antibiotic-associated diarrhea.

Несмотря на достоинства композиции [15] и возможность ее использования для профилактики антибиотик-ассоциированной диареи, она не задействует пробиотический потенциал лактобактерий и бифидобактерий и также не показывает возможность использования лизата дрожжей вместо живых дрожжей. Despite the advantages of the composition [15] and the possibility of its use for the prevention of antibiotic-associated diarrhea, it does not use the probiotic potential of lactobacilli and bifidobacteria and also does not show the possibility of using a yeast lysate instead of live yeast.

Таким образом, по-прежнему остается актуальной задача создания новых пробиотических композиций – биологически активных пищевых добавок на основе пробиотических лакто- и бифидобактерий, которые могли бы успешно использоваться для восстановления микрофлоры кишечника, особенно после прохождения курса антибиотикотерапии, в том числе, для профилактики антибиотик-ассоциированного дисбактериоза и антибиотик-ассоциированных диарей, а также смягчали бы или устраняли симптомы синдрома избыточного бактериального роста, такие как боль в животе, урчание в животе, вздутие живота, избыточное газообразование, нарушение характера и частоты стула. В то же время, технология изготовления таких пробиотических композиций должна позволять сохранить жизнеспособность и полезные свойства пробиотических бактерий как при изготовлении композиции, так и в течение длительного времени при ее хранении. В настоящем документе термин «синдром избыточного бактериального роста» включает в себя дисбактериозы любой природы. Thus, the task of creating new probiotic compositions - biologically active food additives based on probiotic lactobacilli and bifidobacteria, which could be successfully used to restore intestinal microflora, especially after undergoing antibiotic therapy, including for antibiotic prophylaxis, remains an urgent task. associated dysbacteriosis and antibiotic-associated diarrhea, as well as alleviate or eliminate the symptoms of the syndrome of excessive bacterial growth, such as abdominal pain, rumbling in the abdomen, bloating, excessive gas formation, violation of the nature and frequency of stool. At the same time, the manufacturing technology of such probiotic compositions should allow preserving the viability and useful properties of probiotic bacteria both in the manufacture of the composition and for a long time during its storage. As used herein, the term "overgrowth syndrome" includes dysbacterioses of any nature.

Задача расширения арсенала пробиотических композиций, которые могут использоваться для восстановления нарушенных функций желудочно-кишечных тракта и для нормализации микрофлоры кишечника, а также для профилактики антибиотик-ассоциированных диарей и для устранения симптомов синдрома избыточного бактериального роста, решается в рамках заявляемого изобретения путем создания пробиотической композиции, выполненной в форме капсулы и содержащей от 0,05 до 0,1 г сухой смеси (сухой бактериальной массы), содержащей пробиотические бифидобактерии Bifidobacterium longum и Bifidobacterium bifidum и пробиотические лактобациллы Lactobacillus rhamnosus, а также лизат дрожжей Saccharomyces cerevisiae (Saccharomyces cerevisiae Hansen CBS 5926) и нутрицевтически приемлемые вспомогательные компоненты, включая лактозу, микрокристаллическую целлюлозу и нутрицевтически приемлемую соль стеариновой кислоты (например, без ограничения, кальция стеарат или магния стеарат), причем содержание в композиции пробиотических лактобацилл Lactobacillus rhamnosus и каждого из видов пробиотических бифидобактерий, включая Bifidobacterium longum и Bifidobacterium bifidum, составляет не менее 1х10⁸колониеобразующих единиц (КОЕ) на 1 грамм указанной смеси (более предпочтительно, не менее 1х10⁹ КОЕ на 1 грамм смеси). Предпочтительно (без ограничения), заявляемая пробиотическая композиция выполнена в форме твердой желатиновой капсулы. Более предпочтительно, указанная капсула содержит от 0,06 до 0,08 г указанной сухой смеси, от 0,02 до 0,025 г лактозы, от 0,09 до 0,17 г микрокристаллической целлюлозы. В самом предпочтительном воплощении, заявляемая пробиотическая композиция выполнена в форме твердой желатиновой капсулы, содержащей: (а) 0,0675 г сухой бактериальной массы, включающей не менее 1х10⁹ каждого из видов пробиотических бифидобактерий Bifidobacterium longum и Bifidobacterium bifidum, не менее 1х10⁹ пробиотических лактобацилл Lactobacillus rhamnosus, а также лизат дрожжей Saccharomyces cerevisiae (Saccharomyces cerevisiae Hansen CBS 5926), (б) 0,0225 г лактозы, (в) 0,1575 г микрокристаллической целлюлозы и (г) 0,0025 г кальция стеарата.The task of expanding the arsenal of probiotic compositions that can be used to restore impaired functions of the gastrointestinal tract and to normalize the intestinal microflora, as well as to prevent antibiotic-associated diarrhea and to eliminate the symptoms of the syndrome of excessive bacterial growth, is solved within the framework of the claimed invention by creating a probiotic composition, made in the form of a capsule and containing from 0.05 to 0.1 g of a dry mixture (dry bacterial mass) containing the probiotic bifidobacteria Bifidobacterium longum and Bifidobacterium bifidum and the probiotic lactobacillus Lactobacillus rhamnosus, as well as the yeast lysate Saccharomyces cerevisiae ceresiae ceresiae ceresiaeBSe26 and nutraceutically acceptable auxiliary components, including lactose, microcrystalline cellulose and a nutraceutically acceptable salt of stearic acid (for example, without limitation, calcium stearate or magnesium stearate), and the content in the composition is probiotic lactobacilli Lactobacillus rhamnosus and each of the types of probiotic bifidobacteria, including Bifidobacterium longum and Bifidobacterium bifidum, is not less than 1x10 ⁸ colony forming units (CFU) per 1 gram of this mixture (more preferably, not less than 1x10 ⁹ CFU per 1 gram of mixture). Preferably (without limitation), the claimed probiotic composition is in the form of a hard gelatin capsule. More preferably, said capsule contains from 0.06 to 0.08 g of said dry mix, from 0.02 to 0.025 g of lactose, from 0.09 to 0.17 g of microcrystalline cellulose. In the most preferred embodiment, the inventive probiotic composition is in the form of a hard gelatin capsule containing: (a) 0.0675 g of dry bacterial mass, comprising at least 1x10 ^{9 of} each of the types of probiotic bifidobacteria Bifidobacterium longum and Bifidobacterium bifidum, at least 1x10 ⁹ probiotic lactobacids Lactobacillus rhamnosus, as well as the yeast lysate Saccharomyces cerevisiae (Saccharomyces cerevisiae Hansen CBS 5926), (b) 0.0225 g of lactose, (c) 0.1575 g of microcrystalline cellulose and (g) 0.0025 g of calcium stearate.

Задача получения биологически активных добавок (пробиотических композиций), позволяющих сохранить жизнеспособность и полезные свойства пробиотических бактерий на протяжении длительного времени, решается в рамках настоящего изобретения путем разработки способа изготовления пробиотической композиции, включающего раздельное высевание культур бифидобактерий Bifidobacterium longum и Bifidobacterium bifidum и лактобацилл Lactobacillus rhamnosus на жидкую среду МРС, разлитую по пробиркам, с последующим термостатированием в течение 24-72 часов при температуре 37±0,5°С и с последующим засеванием термостатированными культурами емкостей с жидким МРС агаром и инкубированием в течение 48-60 часов при температуре 37±0,5°С, перенос указанных культур бифидобактерий и лактобацилл в ферментер с последующим выращиванием указанных культур в указанном ферментере, причем указанное выращивание осуществляется при температуре 37±0,5°С, при избыточном давлении в полости ферментера, составляющем 0,025±0,005 МПа, без аэрации в среде инертного газа, при постоянном перемешивании и поддержании значения рН 6-7 путем титрования щелочным раствором, с последующим концентрированием указанных культур до заданного объема концентрата, добавлением защитной среды, охлаждением и последующей сублимационной сушкой, объединением сухих бактериальных масс культур бифидобактерий Bifidobacterium longum, бифидобактерий Bifidobacterium bifidum и лактобацилл Lactobacillus rhamnosus, смешиванием полученной сухой смеси, содержащей пробиотические бифидобактерии Bifidobacterium longum, Bifidobacterium bifidum и Lactobacillus rhamnosus, с лизатом клеток дрожжей Saccharomyces cerevisae и с предварительно подготовленными нутрицевтически приемлемыми вспомогательными компонентами смеси для наполнения капсул – лактозой, микрокристаллической целлюлозой и нутрицевтически приемлемой солью стеариновой кислоты, с последующим перемешиванием и формированием смеси для наполнения капсул, заполнения капсул указанной смесью. Сублимационную сушку, предпочтительно (без ограничения), осуществляют в течение 30-40 часов при температуре не выше -40°С и давлении не более 40 Па. При необходимости, способ согласно изобретению включает в себя также стадию обеспыливания капсул и стадию фасовки капсул. Фасовка капсул может осуществляться на любом счетно-фасовочном устройстве, используемом в фармацевтической отрасли, при этом капсулы фасуют в блистеры или в банки (по 10 или по 30 штук соответственно).The task of obtaining biologically active additives (probiotic compositions), allowing to preserve the viability and useful properties of probiotic bacteria for a long time, is solved in the framework of the present invention by developing a method for the manufacture of a probiotic composition, including seeding of cultures of bifidobacterium Bifidobacterium longum and Bifidobacterium bifidum and lactobacus rhamnus bactidus Lactobacus rhamnus lactobacus liquid medium of MPC, poured into test tubes, followed by incubation for 24-72 hours at a temperature of 37 ± 0.5 ° C and followed by inoculation of temperature-controlled cultures of containers with liquid MPC agar and incubation for 48-60 hours at a temperature of 37 ± 0 , 5 ° C, the transfer of these cultures of bifidobacteria and lactobacilli to the fermenter, followed by growing these cultures in the specified fermenter, and the specified cultivation is carried out at a temperature of 37 ± 0.5 ° C, with an excess pressure in the cavity of the fermenter of 0.025 ± 0.005 MPa, without aeration in an inert gas environment, with constant stirring and maintaining a pH value of 6-7 by titration with an alkaline solution, followed by concentration of these cultures to a given volume of concentrate, adding a protective medium, cooling and subsequent freeze-drying, combining dry bacterial masses of Bifidobacterium longum bifidobacterium cultures , bifidobacterium Bifidobacterium bifidum and Lactobacillus Lactobacillus rhamnosus, by mixing the resulting dry mixture containing probiotic bifidobacterium Bifidobacterium longum, Bifidobacterium bifidum and Lactobacillus cellulose-mixed yeast with pre-mixed yeast cellulose bacteria a nutraceutically acceptable salt of stearic acid, followed by stirring and forming a mixture for filling capsules, filling capsules with said mixture. Freeze-drying, preferably (without limitation), is carried out for 30-40 hours at a temperature not exceeding -40 ° C and a pressure of not more than 40 PA. If necessary, the method according to the invention also includes a dedusting step for the capsules and a step for filling the capsules. Capsule filling can be carried out on any counting and filling device used in the pharmaceutical industry, while capsules are packed in blisters or jars (10 or 30 pieces, respectively).

Термин «нутрицевтически приемлемый» для целей настоящей заявки означает, что данный компонент может в принципе использоваться при изготовлении нутрицевтических композиций, что он является безопасным для потребителя указанной пробиотической композиции и что он совместим с другими компонентами данной пробиотической композиции. The term "nutraceutically acceptable" for the purposes of this application means that this component can in principle be used in the manufacture of nutraceutical compositions, that it is safe for the consumer of the indicated probiotic composition and that it is compatible with other components of this probiotic composition.

Лизат дрожжей для целей настоящего изобретения получают, разрушая клетки дрожжей известными из уровня техники методами. Без ограничения, лизат дрожжей может быть получен путем разрушения клеток дрожжей ультразвуком, вортексирования дрожжей со стеклянными шариками, обработки дрожжей ферментами – зимолиазами и литиказами (согласно Müller F.M., Werner K.E., et al., 1998 [16]) и другими методами, известными специалисту в данной области техники и доступными в соответствующей специальной литературе.A yeast lysate for the purposes of the present invention is obtained by disrupting yeast cells by methods known in the art. Without limitation, yeast lysate can be obtained by disrupting the yeast cells with ultrasound, vortexing the yeast with glass beads, treating the yeast with zymoliasis and lithicase enzymes (according to Müller FM, Werner KE, et al., 1998 [16]) and other methods known to the specialist in the art and available in the relevant specialist literature.

Технический результат, обеспечиваемый композицией по изобретению, заключается в расширении арсенала пробиотических композиций (биологически активных пищевых добавок), предназначенных для профилактики диарей, включая антибиотик-ассоциированные диареи, и, в частности, C. dificile-ассоциированные диареи. The technical result provided by the composition according to the invention is to expand the arsenal of probiotic compositions (biologically active food additives) intended for the prevention of diarrhea, including antibiotic-associated diarrhea, and, in particular, C. dificile-associated diarrhea.

Технический результат, обеспечиваемый способом по изобретению, заключается в обеспечении пробиотической композиции, содержащей живые пробиотические бактерии, в которой жизнеспособность и полезные свойства пробиотических бактерий сохранялись бы как при изготовлении композиции, так и при ее хранении на протяжении длительного времени. The technical result provided by the method according to the invention is to provide a probiotic composition containing live probiotic bacteria, in which the viability and useful properties of probiotic bacteria would be preserved both during the manufacture of the composition and during its storage for a long time.

Предпочтительно, пробиотическая композиция согласно изобретению выполнена в виде капсулы, содержащей сухую бактериальную массу, содержащую вышеуказанные пробиотические бифидобактерии Bifidobacterium longum и Bifidobacterium bifidum, а также пробиотические лактобациллы Lactobacillus rhamnosus с лизатом дрожжей совместно с такими нутрицевтически приемлемыми вспомогательными компонентами - лактозой, микрокристаллической целлюлозой и нутрицевтически приемлемой солью стеариновой кислоты. Наиболее предпочтительно, пробиотическая композиция согласно изобретению выполнена в виде кишечнорастворимой капсулы, содержащей не более 27 масс. % указанной сухой бактериальной массы, не более 63 масс. % микрокристаллической целлюлозы и не более 1 масс. % нутрицевтически приемлемой соли стеариновой кислоты. Наиболее предпочтительно, нутрицевтически приемлемая соль стеариновой кислоты представляет собой стеарат кальция или стеарат магния.Preferably, the probiotic composition according to the invention is made in the form of a capsule containing a dry bacterial mass containing the above probiotic bifidobacteria Bifidobacterium longum and Bifidobacterium bifidum, as well as probiotic lactobacilli Lactobacillus rhamnosus with yeast lysate, nutrient-friendly, nutrient-friendly, lycrotic, and salt of stearic acid. Most preferably, the probiotic composition according to the invention is in the form of an enteric capsule containing not more than 27 masses. % of the indicated dry bacterial mass, not more than 63 mass. % microcrystalline cellulose and not more than 1 mass. % nutraceutically acceptable salt of stearic acid. Most preferably, the nutraceutically acceptable salt of stearic acid is calcium stearate or magnesium stearate.

Наиболее предпочтительно, используют лактозу, микрокристаллическую целлюлозу и стеарат кальция (или стеарат магния) фармакопейного качества. В особо предпочтительном воплощении изобретения в качестве микрокристаллической целлюлозы используют модифицированную микрокристаллическую целлюлозу фармакопейного качества, например, Prosolv^® SMCC – коммерчески доступную силикатированную микрокристаллическую целлюлозу, получаемую путем сопроцессинга микрокристаллической целлюлозы (98%) и коллоидного диоксида кремния (2%) (Prosolv^® SMCC: Silicified Microcrystalline Cellulose (The Original Silicified MCC). – «JRC Pharma Family», 13.07.2016 [17]). Благодаря равномерному распределению коллоидного диоксида кремния по поверхности частиц микрокристаллической целлюлозы, Prosolv^® SMCC по сравнению с традиционной микрокристаллической целлюлозой обладает в пять раз большей удельной поверхностью и уровнем шероховатости частиц, что обеспечивает существенно более высокую прессуемость, текучесть, смешиваемость и распадаемость Prosolv^® SMCC по сравнению с традиционной микрокристаллической целлюлозой, а также позволяет существенно повысить дисперсность активных веществ и стабильность порошковой смеси для инкапсулирования. Специалисту при этом понятно, что для осуществления настоящего изобретения может быть использованы и другие разновидности микрокристаллической целлюлозы фармакопейного качества.Most preferably, lactose, microcrystalline cellulose and calcium stearate (or magnesium stearate) of pharmacopoeial quality are used. In a particularly preferred embodiment of the invention, the microcrystalline cellulose using modified microcrystalline cellulose of pharmaceutical quality, e.g., Prosolv ^® SMCC - commercially available silicified microcrystalline cellulose obtained by soprotsessinga microcrystalline cellulose (98%), and colloidal silicon dioxide (2%) (Prosolv ^® SMCC: Silicified Microcrystalline Cellulose (The Original Silicified MCC). - "JRC Pharma Family", 07/13/2016 [17]). Due to the uniform distribution of colloidal silicon dioxide over the surface of microcrystalline cellulose particles, Prosolv ^® SMCC has a five times higher specific surface area and particle roughness than traditional microcrystalline cellulose, which provides significantly higher compressibility, fluidity, miscibility and disintegration of Prosolv ^® SMCC compared to with traditional microcrystalline cellulose, and also can significantly increase the dispersion of the active substances and the stability of the powder mixture for encapsulation. It will be appreciated by those skilled in the art that other varieties of microcrystalline cellulose of pharmacopeia quality can be used to carry out the present invention.

Предпочтительно, нутрицевтически приемлемая соль стеариновой кислоты представляет собой кальция стеарат или магния стеарат. Preferably, the nutraceutically acceptable salt of stearic acid is calcium stearate or magnesium stearate.

Нутрицевтически приемлемый наполнитель, предпочтительно, представляет собой комбинацию лактозы и микрокристаллической целлюлозы. Наиболее предпочтительно, лактоза представляет собой лактозу фармакопейного качества, а микрокристаллическая целлюлоза представляет собой модифицированную (силикатированную) микрокристаллическую целлюлозу фармакопейного качества (не более 63% от массы содержимого капсулы) и стеарат кальция (не более 1% от массы содержимого капсулы). A nutraceutically acceptable excipient is preferably a combination of lactose and microcrystalline cellulose. Most preferably, lactose is pharmacopoeial quality lactose, and microcrystalline cellulose is pharmacopoeial quality modified (silicate) microcrystalline cellulose (not more than 63% by weight of capsule contents) and calcium stearate (not more than 1% by weight of capsule contents).

Далее приводятся примеры осуществления изобретения, которые иллюстрируют отдельные предпочтительные варианты осуществления изобретения, не ограничивая при этом объем испрашиваемых притязаний. The following are examples of the invention, which illustrate certain preferred embodiments of the invention, without limiting the scope of the claimed claims.

Пример 1. Получение капсул пробиотической композиции по изобретению. Example 1. Obtaining capsules of the probiotic composition according to the invention.

Исходные культуры пробиотических бифидобактерий Bifidobacterium longum, предпочтительно штаммы, выбранные из B379M, BB46, BB536, Bl-05, DSM20219, HA-135, SD5219, BKM Ac-2775D,-и Bifidobacterium bifidum, предпочтительно штаммы, выбранные из Bb-06, DSM20239, HA-132, Idcc 4201, JCM7003, KCTC3357, L22, LMG13195, S28a, BKM Ac-2773D, и пробиотических лактобацилл Lactobacillus rhamnosus, предпочтительно штаммы, выбранные из A119, CLR2, GR-1, GG, HA-111, HN001, LB21, Lcr35, Lr-32, R0011, BKM Ac-3170D, высевают на жидкую среду МРС, разлитую по пробиркам, и выращивают в течение 2-3 суток в термостате при температуре 37°С. Затем средой из пробирок засевают бутыль объемом 3000 мл, содержащую жидкую среду МРС, выращивают культуры в течение 48-60 часов при температуре 37°С, после чего передают жидкий посевной материал на стадию ферментации. Ферментацию осуществляют в ферментере «Биор-250» или аналогичном, предварительно простерилизованном при температуре 132±2°С. В указанный ферментер вносят все компоненты питательной среды, после чего питательную среду стерилизуют глухим паром при температуре 112 - 115°С. После захолаживания в простерилизованную питательную среду стерильно добавляют посевной материал. Выращивание культур пробиотических бифидобактерий Bifidobacterium longum и Bifidobacterium bifidum и пробиотических лактобацилл Lactobacillus rhamnosus в ферментерах проводят при температуре 37±0,5°С, избыточном давлении в полости аппарата 0,025±0,005 МПа без аэрации в среде инертного газа, при постоянном перемешивании и поддержании значения рН 6-7 (путем титрования щелочным раствором). Stock cultures of probiotic bifidobacteria Bifidobacterium longum, preferably strains selected from B379M, BB46, BB536, Bl-05, DSM20219, HA-135, SD5219, BKM Ac-2775D, and Bifidobacterium bifidum, preferably strains selected from Bb-06, DS , HA-132, Idcc 4201, JCM7003, KCTC3357, L22, LMG13195, S28a, BKM Ac-2773D, and probiotic lactobacilli Lactobacillus rhamnosus, preferably strains selected from A119, CLR2, GR-1, GG, HA-111, HN, LB21, Lcr35, Lr-32, R0011, BKM Ac-3170D, seeded on liquid medium MPC, poured into tubes, and grown for 2-3 days in an incubator at a temperature of 37 ° C. Then, a 3000 ml bottle containing liquid MPC medium is seeded from the tubes with the medium, cultures are grown for 48-60 hours at a temperature of 37 ° C, after which the liquid seed is transferred to the fermentation stage. Fermentation is carried out in a Bior-250 fermenter or similar, previously sterilized at a temperature of 132 ± 2 ° C. All components of the nutrient medium are introduced into the specified fermenter, after which the nutrient medium is sterilized with blank steam at a temperature of 112 - 115 ° C. After cooling, seed is sterilized in sterilized culture medium. Cultivation of probiotic bifidobacteria Bifidobacterium longum and Bifidobacterium bifidum cultures and probiotic lactobacilli Lactobacillus rhamnosus in fermenters is carried out at a temperature of 37 ± 0.5 ° C, an overpressure in the cavity of the apparatus of 0.025 ± 0.005 MPa without aeration in an inert gas medium and maintaining a constant pH 6-7 (by titration with an alkaline solution).

По окончании ферментации культуральную жидкость с каждого ферментера поочередно концентрируют на фильтрационной установке до заданного объема концентрата. По окончанию процесса концентрирования концентраты каждой из культур отдельно сливают в реактор, в котором происходит добавление защитной среды. After fermentation, the culture fluid from each fermenter is alternately concentrated in the filtration unit to a predetermined volume of concentrate. At the end of the concentration process, the concentrates of each culture are separately poured into the reactor, in which the protective medium is added.

В качестве защитных сред применяются вещества, образующие с водой истинные и коллоидные растворы. Эти среды могут быть разделены на три группы: коллоидные среды животного, растительного и минерального происхождения; среды, содержащие растворимые вещества, такие как углеводы и продукты гидролиза белков – пептоны и аминокислоты и среды сложного состава, в которых коллоидные вещества сочетаются с растворимыми. As protective media, substances are used that form true and colloidal solutions with water. These media can be divided into three groups: colloidal media of animal, plant and mineral origin; media containing soluble substances, such as carbohydrates and protein hydrolysis products - peptones and amino acids and complex media in which colloidal substances are combined with soluble.

Для подготовки защитной среды используют либо сахарозо-желатиновый агар (СЖА) (10% сахарозы, 1,5% желатина, 0,1% агар-агара в дистиллированной воде), либо натуральное снятое молоко, сепарированное три раза, или сухое молоко для бактериологических целей (Difco, США) в концентрации 10%, либо используют иные хорошо известнве защитные среды, такие как среда Стэмпа, содержащая 10% желатина и 0,25-0,5% аскорбиновой кислоты в гидролизате натурального обезжиренного молока или минимальная среда М9 с добавлением 1% тиомочевины, либо 10% сахарозы, 10% мальтозы, 10% лактозы, 1,5% желатина.To prepare the protective medium, either sucrose-gelatin agar (SFA) (10% sucrose, 1.5% gelatin, 0.1% agar-agar in distilled water) is used, or skimmed milk, separated three times, or milk powder for bacteriological goals (Difco, USA) at a concentration of 10%, or use other well-known protective media, such as Stamp's medium containing 10% gelatin and 0.25-0.5% ascorbic acid in the hydrolyzate of skimmed milk or minimal M9 medium with the addition of 1% thiourea, or 10% sucrose, 10% maltose, 10% lactose, 1.5% gelatin.

Защитную среду разливают в стеклянные пробирки (12 мл) по 5 мл; 3 раза стерилизуют текучим паром и проверяют стерильность путем инкубации 3 суток при 37 °С Защитные среды хранят при 5 °С не более 1 месяца.The protective medium is poured into glass tubes (12 ml) of 5 ml; 3 times sterilized by flowing steam and check sterility by incubation for 3 days at 37 ° C. Protective media stored at 5 ° C for no more than 1 month.

Полученный объем технологической жидкости каждой из культур охлаждают до температуры 5°С и разливают в стерильные бутыли, которые затем передают на стадию сублимационной сушки. В процессе сублимационной сушки технологическую жидкость разливают в поддоны из нержавеющей стали с достижением толщины слоя технологической жидкости, содержащей каждую из культур Bifidobacterium longum, Bifidobacterium bifidum и Lactobacillus rhamnosus, составляющей 10±1 мм. Затем поддоны с разлитой в них технологической жидкостью помещают в камеру установки для сублимационной сушки и осуществляют в течение 30-40 часов сублимационную сушку технологической жидкости при давлении не выше 30 Па, при этом температура на протяжении всего цикла сушки меняется согласно заложенной программе от -30°С до 30°С. Полученные сухие бактериальные массы пробиотических микроорганизмов каждой из культур Bifidobacterium longum, Bifidobacterium bifidum и Lactobacillus rhamnosus смешивают с микрокристаллической целлюлозой (предпочтительно, с силикатированной микрокристаллической целлюлозой, такой как Prosolv^® SMCC) для доведения содержания каждой из культур Bifidobacterium longum, Bifidobacterium bifidum и Lactobacillus rhamnosus до не менее 1х10⁸КОЕ на 1 граммуказанной массы. Определение количества жизнеспособных бактерий проводили в соответствии с ОФС.1.7.1.0003.15 "Бифидосодержащие пробиотики". Полученные смеси пробиотических микроорганизмов Bifidobacterium longum, Bifidobacterium bifidum и Lactobacillus rhamnosus от 0,06 до 0,08 г на капсулу с микрокристаллической целлюлозой от 0,09 до 0,17 г на капсулу смешивают друг с другом и перемешивают со вспомогательными компонентами, включая предварительно измельченные и просеянные через сито лактозу от 0,02 до 0,025 г на капсулу, лубрикант от 0,002 до 0,004 г на капсулу (предпочтительно, со стеаратом кальция) и лизат дрожжей Saccharomyces cerevisiae из расчёта 0,5 мг лизата дрожжей на 250 мг конечной смеси, тщательно перемешивают на протяжении по крайней мере 10-15 минут вплоть до образования однородной смеси для наполнения капсул, после чего указанной однородной смесью наполняют желатиновые капсулы по 250 мг. При этом процесс наполнения капсул включает в себя стадию ориентирования капсул, а также стадии открытия капсул, собственно наполнения капсул и закрытия капсул. Заполненные капсулы подвергают обеспыливанию в вытяжном шкафу и фасуют в блистеры или во флаконы, по 10 штук или по 30 штук соответственно при помощи любого счетно-фасовочного устройства, используемого в фармацевтической промышленности в технологии твердых препаративных форм.The resulting volume of the process fluid of each culture is cooled to a temperature of 5 ° C and poured into sterile bottles, which are then transferred to the stage of freeze-drying. In the process of freeze-drying, the process fluid is poured into stainless steel trays to achieve a thickness of the process fluid layer containing 10 ± 1 mm of each of Bifidobacterium longum, Bifidobacterium bifidum and Lactobacillus rhamnosus cultures. Then, the pallets with the process liquid spilled in them are placed in the chamber of the freeze-drying plant and freeze-drying of the process liquid is carried out for 30-40 hours at a pressure of no higher than 30 Pa, while the temperature during the entire drying cycle varies from -30 ° according to the program laid down C to 30 ° C. The resulting dry bacterial masses of the probiotic microorganisms of each of the cultures of Bifidobacterium longum, Bifidobacterium bifidum and Lactobacillus rhamnosus are mixed with microcrystalline cellulose (preferably silicate microcrystalline cellulose such as Prosolv^® SMCC) to bring the content of each of the cultures of Bifidobacterium longum, Bifidobacterium bifidum and Lactobacillus rhamnosus to at least 1x10⁸CFU per 1 gramspecified mass. The determination of the number of viable bacteria was carried out in accordance with OFS.1.7.1.0003.15 "Bifid-containing probiotics". The resulting mixtures of probiotic microorganisms Bifidobacterium longum, Bifidobacterium bifidum and Lactobacillus rhamnosus from 0.06 to 0.08 g per capsule with microcrystalline cellulose from 0.09 to 0.17 g per capsule are mixed with each other and mixed with auxiliary components, including pre-ground and sieved through a sieve of lactose from 0.02 to 0.025 g per capsule, lubricant from 0.002 to 0.004 g per capsule (preferably with calcium stearate) and Saccharomyces cerevisiae yeast lysate based on 0.5 mg yeast lysate per 250 mg of the final mixture, carefully mix for at least 10-15 minutes until a homogeneous mixture for filling capsules is formed, after which gelatin capsules of 250 mg are filled with said homogeneous mixture. In this case, the process of filling the capsules includes the stage of orienting the capsules, as well as the stage of opening the capsules, actually filling the capsules and closing the capsules. Filled capsules are dedusted in a fume hood and packaged in blisters or vials of 10 pieces or 30 pieces, respectively, using any counting and filling device used in the pharmaceutical industry in solid formulation technology.

Жизнеспособность пробиотических лактобактерий и бифидобактерий, входящих в состав пробиотической композиции, полученной выше, по настоящему изобретению, а также сохранность полезных свойств композиции при хранении исследуют в условиях ускоренного старения. The viability of the probiotic lactobacilli and bifidobacteria, which are part of the probiotic composition obtained above, according to the present invention, as well as the preservation of the useful properties of the composition during storage, is studied under accelerated aging.

Метод «ускоренного старения» заключается в выдерживании испытуемой биологически активной добавки при температурах и влажности, превышающих температуру и влажность его хранения в процессе обращения. При повышенных температурах, как правило, ускоряются протекающие в лекарственных средствах физико-химические процессы, приводящие со временем к нежелательным изменениям качества. Таким образом, при повышенной температуре промежуток времени, в течение которого контролируемые показатели качества лекарственного средства сохраняются в допустимых пределах (экспериментальный срок годности), искусственно сокращается в сравнении со сроком годности при температуре хранения. Это позволяет значительно сократить время, необходимое для установления срока годности.The method of “accelerated aging” is to withstand the test biologically active additives at temperatures and humidity exceeding the temperature and humidity of its storage during handling. At elevated temperatures, as a rule, the physicochemical processes occurring in medicines are accelerated, leading over time to undesirable quality changes. Thus, at elevated temperatures, the period of time during which controlled quality indicators of the drug are kept within acceptable limits (experimental shelf life) is artificially reduced in comparison with the shelf life at storage temperature. This can significantly reduce the time required to establish the expiration date.

Срок годности (С) при температуре хранения (t_хр) связан с экспериментальным сроком годности (С_Э) при повышенной температуре экспериментального хранения (t_э) следующей зависимостью:Shelf life (C) at storage temperature (t _xp ) is associated with the experimental shelf life (C _E ) at elevated experimental storage temperature (t _e ) with the following relationship:

,

где коэффициент соответствия $K = A^{\frac{t_{э} - t_{х р .}}{10}}$

.where is the compliance coefficient

K = A^{\frac{t_{uh} - t_{x R .}}{ten}}

.

Температурный коэффициент скорости химической реакции (A) принят равным 2,5. Приведенная зависимость основана на правиле Вант-Гоффа о 2-4-кратном росте скоростей химических реакций при увеличении температуры на 10°С. The temperature coefficient of the chemical reaction rate (A) is taken to be 2.5. The given dependence is based on the Van Goff rule on a 2-4-fold increase in the rates of chemical reactions with an increase in temperature by 10 ° С.

Значение коэффициента соответствия (K) в зависимости от выбранного температурного интервала (t_э-t_хр), равного 25^оС, составляет 9,9. Срок экспериментального хранения при выбранном сроке годности 2 года составляет 74 суток. В качестве композиции сравнения выбрана композиция пробиотических бифидобактерий Bifidobacterium longum и Bifidobacterium bifidum и пробиотических лактобацилл Lactobacillus rhamnosus с лактозой.The value of the coefficient of compliance (K) depending on the selected temperature range (t _e -t _xp ), equal to 25 ^about With, is 9.9. The experimental storage period for the selected shelf life of 2 years is 74 days. As a comparison composition, a composition of the probiotic bifidobacteria Bifidobacterium longum and Bifidobacterium bifidum and the probiotic lactobacilli Lactobacillus rhamnosus with lactose was selected.

Таблица 1. Оценка стабильности методом ускоренного старения в сравнении с прототипом.Table 1. Assessment of stability by accelerated aging in comparison with the prototype.

время хранения при (t_э-t_хр) = 25^оС, суткиstorage time at (t _e -t _xp ) = 25 ^о С, day Содержание пробиотических бактерий в % от теоретического содержанияThe content of probiotic bacteria in% of theoretical content Пробиотическая композиции по настоящему изобретениюProbiotic compositions of the present invention Композиция сравненияComparison Composition 0 0 100,0100.0 100,0100.0 10ten 99,999.9 98,598.5 20 20 98,498.4 93,593.5 30 thirty 95,095.0 92,292.2 40 40 93,593.5 90,790.7 5050 92,892.8 88,388.3 6060 91,991.9 86,886.8 7474 90,490,4 83,083.0

В результате исследования показано, что полезные свойства пробиотической композиции по изобретению и жизнеспособность пробиотических бактерий в композиции сохраняются как при изготовлении композиции, так и на протяжении по меньшей мере 24 месяцев хранения композиции в невскрытой заводской упаковке при температуре не выше 25°С в защищенном от прямых солнечных лучей месте. В случае, если заводская упаковка уже вскрыта, пробиотическую композицию по изобретению хранят в плотно закрытом флаконе не более 24 месяцев. As a result of the study, it was shown that the beneficial properties of the probiotic composition according to the invention and the viability of the probiotic bacteria in the composition are preserved both during the preparation of the composition and for at least 24 months of storage of the composition in unopened original packaging at a temperature of no higher than 25 ° C, protected from direct sun rays spot. If the factory packaging is already opened, the probiotic composition according to the invention is stored in a tightly closed bottle for no more than 24 months.

Таким образом, биологически активная добавка в соответствии с настоящим изобретением обеспечивает расширение ассортимента пробиотических композиций (биологически активных добавок) на основе пробиотических бактерий, предназначенных для профилактики антибиотик-ассоциированных диарей. В свою очередь, способ в соответствии с настоящим изобретением обеспечивает получение указанной биологически активной добавки с минимальными экономическими затратами и затратами времени, с сохранением жизнеспособности и полезных свойств пробиотических микроорганизмов, входящих в ее состав, в течение длительного времени.Thus, the biologically active additive in accordance with the present invention provides an extension of the range of probiotic compositions (dietary supplements) based on probiotic bacteria for the prevention of antibiotic-associated diarrhea. In turn, the method in accordance with the present invention provides the specified biologically active additives with minimal economic and time costs, while maintaining the viability and useful properties of the probiotic microorganisms included in its composition for a long time.

Изобретение может быть использовано в медицине, фармакологии, химико-фармацевтической, пищевой промышленностиThe invention can be used in medicine, pharmacology, chemical-pharmaceutical, food industry

Ссылки:References:

1. "Joint FAO/WHO Expert Consultation Probiotics in food." - "FAO Food and nutrition paper", №85.1. "Joint FAO / WHO Expert Consultation Probiotics in food." - "FAO Food and nutrition paper", No. 85.

2. Reid G., Jass J., Sebulsky M.T., and McCormick J.K. Potential uses of probiotics in clinical practice. // "Clinical Microbiology Reviews", 2003; 16:658-672.2. Reid G., Jass J., Sebulsky M.T., and McCormick J.K. Potential uses of probiotics in clinical practice. // "Clinical Microbiology Reviews", 2003; 16: 658-672.

3. McFarland L.V. Epidemiology, risk factors and treatments for antibiotic-associated diarrhea. // "Digestive Diseases", 1998 Sep-Oct;16(5):292-307.3. McFarland L.V. Epidemiology, risk factors and treatments for antibiotic-associated diarrhea. // "Digestive Diseases", 1998 Sep-Oct; 16 (5): 292-307.

4. McFarland L.V. Probiotics for the Primary and Secondary Prevention of C. difficile Infections: A Meta-analysis and Systematic Review. // "Antibiotics" (Basel), 2015 Apr 13;4(2): 160-78. Публикация доступна посредством сети Интернет; режим доступа (URL): https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4790329. 4. McFarland L.V. Probiotics for the Primary and Secondary Prevention of C. difficile Infections: A Meta-analysis and Systematic Review. // "Antibiotics" (Basel), 2015 Apr 13; 4 (2): 160-78. Publication is available through the Internet; access mode (URL): https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4790329.

5. McFarland L.V. Meta-analysis of probiotics for the prevention of antibiotic associated diarrhea and the treatment of Clostridium difficile disease. // "The American journal of gastroenterology", 2006 Apr;101(4):812-22.5. McFarland L.V. Meta-analysis of probiotics for the prevention of antibiotic associated diarrhea and the treatment of Clostridium difficile disease. // "The American journal of gastroenterology", 2006 Apr; 101 (4): 812-22.

6. RU 2466185 C2 «ПРОБИОТИЧЕСКИЙ ШТАММ Bifidobacterium longum, ПРОБИОТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ ШТАММА Bifidobacterium longum», патентообладатель: Элиментари Хелт Лимитед (IE), МПК: C12N 1/20, A61K 35/74, A61P 37/02, опубликован 10.11.2012.6. RU 2466185 C2 “PROBIOTIC STRAIN of Bifidobacterium longum, PROBIOTIC COMPOSITION AND APPLICATIONS OF STRAIN of Bifidobacterium longum”, patent holder: Elimentari Helt Limited (IE), IPC: C12N 1/20, A61K 35/02, 2012, 11/61/2012, 10/02/2012. .

7. RU 2546251 C2 «ПРОБИОТИЧЕСКИЙ ШТАММ БИФИДОБАКТЕРИЙ», патентообладатели: АЛИМЕНТАРИ ХЕЛС ЛИМИТЕД (IE), ДЗЕ ПРОКТЕР ЭНД ГЭМБЛ КОМПАНИ (US), МПК: C12N 1/20, A61K 35/74, A61P 25/00, A61P 31/00, A61P 3/00, опубликован 10.04.2015.7. RU 2546251 C2 “PROBIOTIC STRAIN OF BIFIDOBACTERIA”, patent holders: ALIMENTARI HELS LIMITED (IE), DZE PROKTER AND GAMBL COMPANY (US), IPC: C12N 1/20, A61K 35/74, A61P 25/00, A61P 25/00, A61P 25/00, A61P 25/00 , A61P 3/00, published 04/10/2015.

8. RU 2473681 С2 «ПРОБИОТИЧЕСКИЙ ШТАММ Bifidobacterium longum, КОМПОЗИЦИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ ТАКОЙ ШТАММ, И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ», патентообладатель: Элиментари Хелт Лимитед (IE), МПК: C12N 1/20, A61K 35/74, опубликован 27.01.2013.8. RU 2473681 C2 “PROBIOTIC STRAIN of Bifidobacterium longum, COMPOSITION CONTAINING SUCH STRAW, AND ITS APPLICATION”, patent holder: Elimentari Helt Limited (IE), IPC: C12N 1/20, A61K 35/74, published on 27.01.2013.

9. EP 0199535 B1 «LACTOBACILLUS ACIDOPHILUS STRAINS OF BACTERIA AND COMPOSITIONS THEREOF», патентообладатели: NEW ENGLAND MEDICAL CENTER INС (GB); THE NEW ENGLAND MEDICAL CENTER HOSPITALS, INC (GB); GORBACH, SHERWOOD L (US); GOLDIN, BARRY R (US), МПК: A23L 1/30; A61K 35/74; A61P 1/04; A61P 1/12; A61P 1/14; C12N 1/20, опубликован 02.01.1992.9. EP 0199535 B1 "LACTOBACILLUS ACIDOPHILUS STRAINS OF BACTERIA AND COMPOSITIONS THEREOF", patent holders: NEW ENGLAND MEDICAL CENTER INС (GB); THE NEW ENGLAND MEDICAL CENTER HOSPITALS, INC (GB); GORBACH, SHERWOOD L (US); GOLDIN, BARRY R (US), IPC: A23L 1/30; A61K 35/74; A61P 1/04; A61P 1/12; A61P 1/14; C12N 1/20, published 02.01.1992.

Middelbos I.10. S., Godoy, M. R., et al. A dose–response evaluation of spray-dried yeast cell wall supplementation of diets fed to adult dogs: Effects on nutrient digestibility, immune indices, and fecal microbial populations. // "Journal of Animal Science", 2007; 85:3022–3032.Middelbos I.10. S., Godoy, M. R., et al. A dose – response evaluation of spray-dried yeast cell wall supplementation of diets fed to adult dogs: Effects on nutrient digestibility, immune indices, and fecal microbial populations. // "Journal of Animal Science", 2007; 85: 3022-3032.

11. Taverniti V., Guglielmetti S. The immunomodulatory properties of probiotic microorganisms beyond their viability (ghost probiotics: proposal of paraprobiotic concept). // "Genes & Nutrition", 2011 Aug; 6(3): 261–274.11. Taverniti V., Guglielmetti S. The immunomodulatory properties of probiotic microorganisms beyond their viability (ghost probiotics: proposal of paraprobiotic concept). // "Genes & Nutrition", 2011 Aug; 6 (3): 261–274.

12. Szajewska H., Skórka A., Dylag M. Meta-analysis: Saccharomyces boulardii for treating acute diarrhoea in children. // "Alimentary pharmacology & therapeutics", 2007 Feb 1;25(3):257-64.12. Szajewska H., Skórka A., Dylag M. Meta-analysis: Saccharomyces boulardii for treating acute diarrhoea in children. // "Alimentary pharmacology & therapeutics", 2007 Feb 1; 25 (3): 257-64.

13. Sahar Feizizadeh, Amin Salehi-Abargouei, Vajihe Akbari. Efficacy and Safety of Saccharomyces boulardii for Acute Diarrhea. // "Pediatrics", vol. 134, №1, July 01, 2014. Публикация доступна посредством сети Интернет; режим доступа (URL): http://pediatrics.aappublications.org/content/134/1/e176.long.13. Sahar Feizizadeh, Amin Salehi-Abargouei, Vajihe Akbari. Efficacy and Safety of Saccharomyces boulardii for Acute Diarrhea. // "Pediatrics", vol. 134, No 1, July 01, 2014. Publication is available through the Internet; access mode (URL): http://pediatrics.aappublications.org/content/134/1/e176.long.

14. Erdeve Omer, Tiras Ulku, and Dallar Yildiz. The Probiotic Effect of Saccharomyces boulardii in a Pediatric Age Group (brief report). – "Journal of Tropical Pediatrics", 2004, Vol. 50, №4, pp. 234-236. Публикация доступна посредством сети Интернет; режим доступа (URL): http://www.herbalsilnan.altervista.org/RICERCA_SCIENTIFICA/Probiotici-Prebiotici/36_pre_probiotici.pdf.14. Erdeve Omer, Tiras Ulku, and Dallar Yildiz. The Probiotic Effect of Saccharomyces boulardii in a Pediatric Age Group (brief report). - "Journal of Tropical Pediatrics", 2004, Vol. 50, No. 4, pp. 234-236. Publication is available through the Internet; access mode (URL): http://www.herbalsilnan.altervista.org/RICERCA_SCIENTIFICA/Probiotici-Prebiotici/36_pre_probiotici.pdf.

15. WO 2006/021965 A1 «EUKARYOTIC BASED SYNERGISTIC FORMULATION FOR GASTRO-INTESTINAL DISORDERS», заявители: BHARAT BIOTECH INTERNATIONAL LIMITED (IN), ELLA KRISHNA MURTHY (IN); VELLIMEDU SRINIVAS KANNAPPA (IN); SUNKARA SIVASANKARA RAO (IN), МПК: A61K 36/062, A61K 36/064, A61P 1/00, опубликована 02.03.2006.15. WO 2006/021965 A1 “EUKARYOTIC BASED SYNERGISTIC FORMULATION FOR GASTRO-INTESTINAL DISORDERS”, applicants: BHARAT BIOTECH INTERNATIONAL LIMITED (IN), ELLA KRISHNA MURTHY (IN); VELLIMEDU SRINIVAS KANNAPPA (IN); SUNKARA SIVASANKARA RAO (IN), IPC: A61K 36/062, A61K 36/064, A61P 1/00, published 02.03.2006.

16. Müller F.M., Werner K.E., et al. Rapid extraction of genomic DNA from medically important yeasts and filamentous fungi by high-speed cell disruption. - "Journal of Clinical Microbiology", 1998 Jun;36(6):1625-9. Публикация доступна посредством сети Интернет; режим доступа (URL): https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC104890.16. Müller F.M., Werner K.E., et al. Rapid extraction of genomic DNA from medically important yeasts and filamentous fungi by high-speed cell disruption. - "Journal of Clinical Microbiology", 1998 Jun; 36 (6): 1625-9. Publication is available through the Internet; access mode (URL): https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC104890.

17. Prosolv^® SMCC: Silicified Microcrystalline Cellulose (The Original Silicified MCC). – «JRC Pharma Family», 13.07.2016. Доступно посредством сети Интернет; режим доступа (URL): http://www.jrspharma.com/pharma-wAssets/docs/brochures/PROSOLV-SMCC.pdf. 17. Prosolv ^® SMCC: Silicified Microcrystalline Cellulose (The Original Silicified MCC). - “JRC Pharma Family”, 07/13/2016. Accessible via the Internet; access mode (URL): http://www.jrspharma.com/pharma-wAssets/docs/brochures/PROSOLV-SMCC.pdf.

Claims

1. A probiotic composition for restoring intestinal microflora and for the prevention of bacterial overgrowth and diarrhea syndrome, including antibiotic-associated diarrhea and Clostridium dificile-associated diarrhea, characterized in that the composition is in the form of a capsule containing a dry mixture of probiotic bifidobacterium longum bium bifidobacterium bifidobacterium bifidobacterium bifidum and probiotic lactobacilli Lactobacillus rhamnosus in an amount of from 0.05 to 0.1 g, as well as a yeast lysate Saccharomyces cerevisiae in an amount of 0.0005 g, and nutraceutically acceptable auxiliary components, including microcrystalline cellulose and a nutraceutically acceptable stearic acid salt in an amount of from 0.002 up to 0.004 g, selected from calcium stearate and magnesium stearate, and the content in each composition of each of the types of probiotic bifidobacteria, including Bifidobacterium longum and Bifidobacterium bifidum, is at least 1x10 ⁸ CFU per 1 gram of dry mix, the content the probiotic lactobacillus Lactobacillus rhamnosus is also at least 1x10 ⁸ CFU per 1 gram of dry mix.

2. The probiotic composition according to claim 1, characterized in that the amount of dry mix per capsule of said probiotic composition is from 0.06 to 0.08 g.

3. The probiotic composition according to claim 1, characterized in that the content of each of the types of probiotic bifidobacteria, including Bifidobacterium longum and Bifidobacterium bifidum, is at least 1x10 ⁹ CFU per 1 gram of dry mix.

4. The probiotic composition according to claim 1, characterized in that the content of probiotic lactobacilli Lactobacillus rhamnosus is at least 1x109 CFU per 1 gram of dry mix.

5. The probiotic composition according to claim 1, characterized in that the microcrystalline cellulose is a silicate microcrystalline cellulose.

6. The probiotic composition according to claim 1, characterized in that the amount of microcrystalline cellulose per capsule is from 0.09 to 0.17 g.

7. A method of manufacturing a probiotic composition according to any one of paragraphs. 1-6, including the separate seeding of cultures of bifidobacteria Bifidobacterium longum and Bifidobacterium bifidum and lactobacilli Lactobacillus rhamnosus on liquid medium MPC, poured into tubes, followed by incubation for 24-72 hours at a temperature of 37 ± 0.5 ° C and followed by inoculation of thermostat with subsequent culture inoculation containers with liquid MRS agar and incubation for 48-60 hours at a temperature of 37 ± 0.5 ° C, transfer of the indicated cultures of bifidobacteria and lactobacilli to the fermenter, followed by the cultivation of these cultures in the specified fermenter, and the specified cultivation is carried out at a temperature of 37 ± 0, 5 ° С, at an excess pressure in the fermenter cavity of 0.025 ± 0.005 MPa, without aeration in an inert gas medium, with constant stirring and maintaining a pH value of 6-7 by titration with an alkaline solution, followed by concentration of these cultures to a given volume of concentrate, adding protective environment, cooling and subsequent freeze-drying, volume by mixing dry bacterial masses of cultures of bifidobacterium bifidobacterium longum, bifidobacterium Bifidobacterium bifidum and lactobacillus Lactobacillus rhamnosus, mixing the resulting dry mixture containing probiotic bifidobacterium bifidobacterium lyrmobacterium britidium britidobacterium britidum bacterium bacterium bifidobacterium britidum bacterium bacterium including a nutraceutically acceptable excipient and a nutraceutically acceptable lubricant, followed by stirring and forming a mixture for filling capsules and filling capsules with said mixture.

8. The method of claim 7, further comprising the steps of dedusting the capsules and filling the capsules.