RU2722657C1 - Method of identifying substances using mass spectrometer - Google Patents
Method of identifying substances using mass spectrometer Download PDFInfo
- Publication number
- RU2722657C1 RU2722657C1 RU2019118223A RU2019118223A RU2722657C1 RU 2722657 C1 RU2722657 C1 RU 2722657C1 RU 2019118223 A RU2019118223 A RU 2019118223A RU 2019118223 A RU2019118223 A RU 2019118223A RU 2722657 C1 RU2722657 C1 RU 2722657C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- chemical compound
- mass spectrometer
- mass
- deuterating agent
- chromatograph
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
- G01N30/72—Mass spectrometers
- G01N30/7233—Mass spectrometers interfaced to liquid or supercritical fluid chromatograph
- G01N30/724—Nebulising, aerosol formation or ionisation
- G01N30/7266—Nebulising, aerosol formation or ionisation by electric field, e.g. electrospray
-
- H—ELECTRICITY
- H01—ELECTRIC ELEMENTS
- H01J—ELECTRIC DISCHARGE TUBES OR DISCHARGE LAMPS
- H01J49/00—Particle spectrometers or separator tubes
- H01J49/26—Mass spectrometers or separator tubes
Abstract
Description
Область техникиTechnical field
Изобретение относится к способам идентификации химических соединений, в частности, наркотических, отравляющих веществ или лекарственных препаратов. Особенностью изобретения является принцип идентификации химического соединения при помощи увеличенного набора структурных дескрипторов, что позволяет проводить идентификацию на разных моделях хромато-масс-спектрометров, и использовать для идентификации существующие базы данных химических соединений.The invention relates to methods for identifying chemical compounds, in particular narcotic, poisonous substances or drugs. A feature of the invention is the principle of identifying a chemical compound using an enlarged set of structural descriptors, which allows identification on different models of chromatography-mass spectrometers, and the existing database of chemical compounds is used for identification.
Уровень техникиState of the art
В настоящее время общепринятый подход для идентификации малых молекул (лекарств, метаболитов, наркотиков) основывается на применение газовой или жидкостной хроматографии в сочетании с масс-спектрометрией высокого разрешения (GC-MS/MS или LC-MS/MS) (Dettmer, K., Aronov, P. A. And Hammock, B. D. (2007), Mass spectrometry-based metabolomics. MassSpectrom. Rev., 26: 51-78). Вещество идентифицируется, если измеренные параметры такие как время выхода из хроматографической колонки, точная масса и спектр фрагментации совпадают с ранее измеренными значениями, хранящимися в базе данных (US20160231341A1). Например, решение по анализу токсинов, поставляемое компанией Брукер, требует от пользователя иметь систему идентичную той, для которой производителем создана база данных: аналитический хроматограф Elute и времяпролетный масс-спектрометр определенной марки. Соединение идентифицируется, если для него совпали время выхода, масса и три фрагментных иона из базы. Фрагментируются все ионы без изоляции. Недостатками данного подхода являются необходимость использования оборудования, идентичного тому, которое использовалось для наполнения базы данных, что приводит к несопоставляемости результатов, полученных на разных инструментах. Кроме того, небольшие, плохо контролируемые отклонения от стандартного подхода приводят к большому числу ложно-положительных или ложно-отрицательных идентификаций, что недопустимо в задачах нарко-контроля, судебно-медицинской экспертизы или допинг-контроля. Идентификация соединения также ограничена его присутствием в предоставляемой компанией-производителем базе данных, что существенно ограничивает возможность идентификации неизвестного вещества.Currently, the generally accepted approach for identifying small molecules (drugs, metabolites, drugs) is based on the use of gas or liquid chromatography in combination with high-resolution mass spectrometry (GC-MS / MS or LC-MS / MS) (Dettmer, K., Aronov, PA And Hammock, BD (2007), Mass spectrometry-based metabolomics. Mass Spectrom. Rev. 26: 51-78). The substance is identified if the measured parameters such as the exit time from the chromatographic column, the exact mass and the fragmentation spectrum coincide with previously measured values stored in the database (US20160231341A1). For example, the toxin analysis solution supplied by Brucker requires the user to have a system identical to the one for which the manufacturer has created a database: an Elute analytical chromatograph and a time-of-flight mass spectrometer of a certain brand. A compound is identified if the exit time, mass, and three fragment ions from the base coincide for it. All ions are fragmented without isolation. The disadvantages of this approach are the need to use equipment identical to that used to fill the database, which leads to incomparability of the results obtained on different tools. In addition, small, poorly controlled deviations from the standard approach lead to a large number of false-positive or false-negative identifications, which is unacceptable in the tasks of drug control, forensic examination or doping control. The identification of the compound is also limited by its presence in the database provided by the manufacturer, which significantly limits the ability to identify an unknown substance.
В настоящее время методика идентификации химических веществ в Российской Федерации регламентируется ГОСТ Р 8.795-2012. Согласно данному стандарту, А.9.5 Идентификацию проводят на основании следующих критериев идентификации: - время удерживания (определяемое на газохроматографических колонках различной полярности), с, мин;- индексы удерживания, ед.; усл. ед.; - сравнение масс-спектра при электронной ионизации с масс-спектром стандартного образца, полученным в аналогичных условиях, %;- наличие трех подтверждающих ионов при электронной ионизации в режиме селективного мониторинга ионов; - наличие молекулярных ионов при химической ионизации; - наличие, как минимум, двух m/z фрагментов в режиме мониторинга множественных реакций (ММР), так называемом режиме детектирования заданных масс, при использовании тандемной масс-спектрометрии.Currently, the methodology for identifying chemicals in the Russian Federation is regulated by GOST R 8.795-2012. According to this standard, A.9.5 Identification is carried out on the basis of the following identification criteria: - retention time (determined on gas chromatographic columns of different polarity), s, min; - retention indices, units; conv. units; - comparison of the mass spectrum during electronic ionization with the mass spectrum of a standard sample obtained under similar conditions,%; - the presence of three confirming ions during electronic ionization in the mode of selective ion monitoring; - the presence of molecular ions in chemical ionization; - the presence of at least two m / z fragments in the monitoring mode of multiple reactions (MMP), the so-called detection mode of given masses, using tandem mass spectrometry.
Таким образом, получаемые данные зависят от конкретной модели хромато-масс-спектрометра, и возможность идентификации неизвестного соединения ограничена его присутствием в предоставляемой компанией-производителем базе данных. Существует потребность в способе идентификации вещества на основе расширенного набора структурных дескрипторов, что позволит снизить зависимость эффективности идентификации от конкретной модели хромато-масс-спектрометра, а также использовать для идентификации существующие публичные базы данных химических соединений.Thus, the data obtained depends on the specific model of the chromato-mass spectrometer, and the possibility of identifying an unknown compound is limited by its presence in the database provided by the manufacturer. There is a need for a method for identifying a substance based on an extended set of structural descriptors, which will reduce the dependence of identification efficiency on a particular model of a chromato-mass spectrometer, as well as use existing public databases of chemical compounds for identification.
Сущность изобретенияSUMMARY OF THE INVENTION
Задачей настоящего изобретения является повышение эффективности идентификации неизвестных химических соединений (наркотических, лекарственных препаратов, метаболитов, липидов, пептидов и др.) с использованием хроматографа, соединенного с масс-спектрометром. Авторами предложен подход к идентификации соединения, основанный на сравнении нескольких структурных дескрипторов, характерных для этого соединения и слабо зависящих от конкретной модели используемого хромато-масс-спектрометра, с аналогичными дескрипторами из одной из доступных баз данных. Указанные дескрипторы получают, проводя реакции дейтеро/водородного и 16О/18О изотопных обменов в регламентируемых условиях, позволяющих произвести обогащение изотопами у строго определенных групп анализируемого соединения. Далее производят идентификацию посредством сопоставления масс исходного соединения, соединения, модифицированного двумя разными изотопными обменами, а также масс фрагментов этих соединений при заданном режиме фрагментации в масс-спектрометре, с соответствующими значениями масс из базы данных химических соединений.The objective of the present invention is to increase the efficiency of identification of unknown chemical compounds (drugs, drugs, metabolites, lipids, peptides, etc.) using a chromatograph connected to a mass spectrometer. The authors proposed an approach to the identification of a compound based on a comparison of several structural descriptors characteristic of this compound and weakly dependent on the specific model of the chromatograph-mass spectrometer used, with similar descriptors from one of the available databases. These descriptors are obtained by carrying out reactions of deutero / hydrogen and 16 O / 18 O isotope exchanges under regulated conditions, allowing isotope enrichment in strictly defined groups of the analyzed compound. Next, identification is made by comparing the masses of the starting compound, the compound modified by two different isotopic exchanges, as well as the masses of fragments of these compounds at a given fragmentation mode in the mass spectrometer, with the corresponding mass values from the database of chemical compounds.
Указанная задача решается путем создания способа идентификации химического соединения с использованием жидкостного хроматографа, совмещенного с ним масс-спектрометра с источником электроспрей ионизации и соединяющего их переходного тройника, включающего следующие стадии: а) вводят растворенное в полярном растворителе химическое соединение в хроматограф, после чего после выхода с колонки хроматографа соединение поступает в совмещенный с хроматографом источник электроспрей ионизации, представляющий собой полую иглу; б) подают электрическое напряжение на иглу, распыляя раствор химического соединения в спрей заряженных капель для ионизации, при этом заряженные капли, образованные химическим соединением, попадают в один из выходов нагреваемого переходного тройника, образующего Т-образное соединение с вакуумной частью масс-спектрометра и с камерой, содержащей дейтерирующий агент, при этом соединение с камерой, содержащей дейтерирующий агент, обеспечивают при помощи клапана, регулирующего пропускание дейтерирующего агента; в) удерживая клапан, регулирующий пропускание дейтерирующего агента в пространство переходного тройника, в закрытом состоянии, определяют молекулярную массу химического соединения, а также массу его фрагментов при заданном режиме фрагментации в масс-спектрометре; г) повторяют стадии а) и б) по меньшей мере один раз при закрытом клапане, регулирующем пропускание дейтерирующего агента, используя определяемое химическое соединение, модифицированное путем изотопного обмена атомов кислорода, при этом модификацию химического соединения проводят до введения в хроматограф при помощи инкубации высушенного химического соединения в тяжелой воде H2 18О; д) определяют молекулярную массу химического соединения, модифицированного изотопом 18О атома кислорода, а также массу его фрагментов при заданном режиме фрагментации в масс- спектрометре; е) повторяют стадии а) и б) по меньшей мере один раз при открытом клапане, регулирующем пропускание дейтерирующего агента, и при этом нагревают пространство переходного тройника, создавая в нем атмосферу, насыщенную дейтерирующим агентом, при этом получают заряженные капли, образованные дейтерированным химическим соединением в пространстве переходного тройника; ж) определяют молекулярную массу дейтерированного химического соединения, а также массу его фрагментов при заданном режиме фрагментации в масс-спектрометре; е) идентифицируют химическое соединение, используя полученные значения массы химического соединения, массы его фрагментов при заданном режиме фрагментации, а также полученные значения массы и массы фрагментов при заданном режиме фрагментации для дейтерированного химического соединения, а также для химического соединения, модифицированного изотопом 18О атома кислорода, при помощи сравнения этих значений со соответствующими значениями из базы данных химических соединений.This problem is solved by creating a method for identifying a chemical compound using a liquid chromatograph, a mass spectrometer combined with it, an ionization electrospray source and a transition tee connecting them, which includes the following stages: a) the chemical compound dissolved in a polar solvent is introduced into the chromatograph, after which it is released from the column of the chromatograph, the compound enters a source of electrospray ionization combined with a chromatograph, which is a hollow needle; b) apply electrical voltage to the needle by spraying a solution of a chemical compound into a spray of charged droplets for ionization, while the charged droplets formed by a chemical compound fall into one of the outputs of a heated transition tee forming a T-shaped connection with the vacuum part of the mass spectrometer and a chamber containing a deuterating agent, wherein connecting to a chamber containing a deuterating agent is provided by means of a valve controlling the transmission of the deuterating agent; c) holding the valve regulating the transmission of the deuterating agent into the space of the transition tee in the closed state, determine the molecular weight of the chemical compound, as well as the mass of its fragments under the given fragmentation mode in the mass spectrometer; d) repeat steps a) and b) at least once with the valve closed, regulating the transmission of the deuterating agent, using a detectable chemical compound modified by isotopic exchange of oxygen atoms, with the chemical compound being modified before being introduced into the chromatograph by incubation of the dried chemical compounds in heavy water H 2 18 O; e) determine the molecular weight of the chemical compound modified by the 18 O isotope of the oxygen atom, as well as the mass of its fragments under the given fragmentation mode in the mass spectrometer; e) repeat steps a) and b) at least once with the valve open, which regulates the transmission of the deuterating agent, and the space of the transition tee is heated, creating an atmosphere saturated with the deuterating agent in it, and charged drops formed by the deuterated chemical compound are obtained in the space of the transition tee; g) determine the molecular weight of the deuterated chemical compound, as well as the mass of its fragments under a given fragmentation mode in a mass spectrometer; f) identify the chemical compound using the obtained values of the mass of the chemical compound, the mass of its fragments for a given fragmentation mode, as well as the obtained values of the mass and mass of fragments for a given fragmentation mode for a deuterated chemical compound, as well as for a chemical compound modified with an 18 O isotope of the oxygen atom by comparing these values with the corresponding values from the database of chemical compounds.
В предпочтительных вариантах изобретения данный способ характеризуется тем, что в качестве дейтерирующего агента используют тяжелую воду 2H2О. В других вариантах изобретения данный способ характеризуется тем, что модификацию химического соединения путем изотопного обмена атомов кислорода проводят при помощи инкубации высушенного химического соединения в тяжелой воде H2 18О при температуре от 80 до 100°С. В других вариантах изобретения данный способ характеризуется тем, что полярным растворителем является вода, метанол, ацетонитрил или их смесь. Оптимальный тип растворителя для конкретных классов соединений может быть подобран методами, известными специалистам.In preferred embodiments of the invention, this method is characterized in that heavy water 2 H 2 O is used as the deuterating agent. In other embodiments of the invention, this method is characterized in that the modification of a chemical compound by isotopic exchange of oxygen atoms is carried out by incubation of a dried chemical compound in heavy water H 2 18 O at a temperature of from 80 to 100 ° C. In other embodiments of the invention, this method is characterized in that the polar solvent is water, methanol, acetonitrile, or a mixture thereof. The optimal type of solvent for specific classes of compounds can be selected by methods known to those skilled in the art.
Указанная задача также решается путем создания системы, состоящей из жидкостного хроматографа, совмещенного с ним масс-спектрометра с источником электроспрей ионизации и соединяющего их нагреваемого переходного тройника для осуществления вышеуказанного способа, характеризующейся тем, что нагреваемый переходной тройник образует Т-образное соединение, один из выходов которого соединен с областью поступления полученного в результате электроспрей ионизации спрея заряженных капель анализируемого вещества, другой выход соединен с вакуумной частью масс-спектрометра, а третий - с камерой, содержащей дейтерирующий агент, при этом соединение с камерой, содержащей дейтерирующий агент, происходит при помощи клапана, регулирующего пропускание дейтерирующего агента, и при этом при открытии клапана в переходном тройнике образуется атмосфера, насыщенная дейтерирующим агентом.This problem is also solved by creating a system consisting of a liquid chromatograph, a mass spectrometer combined with it, a source of electrospray ionization and a heated transition tee connecting them to implement the above method, characterized in that the heated transition tee forms a T-shaped connection, one of the outputs which is connected to the region of arrival of the spray of charged droplets of the analyte obtained as a result of the electrospray ionization spray, the other outlet is connected to the vacuum part of the mass spectrometer, and the third is connected to the chamber containing the deuterating agent, while the connection to the chamber containing the deuterating agent occurs using a valve regulating the transmission of the deuterating agent, and at the same time, when the valve is opened in the transition tee, an atmosphere saturated with the deuterating agent is formed.
Техническим результатом настоящего изобретения является повышение эффективности и достоверности идентификации неизвестных химических соединений при использовании разных моделей хромато-масс-спектрометров за счет использования для идентификации нескольких структурных дескрипторов, присущих соединению и не зависящих от модели используемого хромато-масс-спектрометра. Также, еще одним техническим результатом является повышение универсальности процедуры идентификации за счет возможности использования различных существующих баз данных химических соединений.The technical result of the present invention is to increase the efficiency and reliability of identification of unknown chemical compounds when using different models of gas chromatography-mass spectrometers by using several structural descriptors inherent in the compound and independent of the model of the gas chromatography-mass spectrometer used for identification. Also, another technical result is to increase the versatility of the identification procedure due to the possibility of using various existing databases of chemical compounds.
Краткое описание чертежейBrief Description of the Drawings
Фиг. 1. Схема модифицированного источника ионизации. 1 - масс-спектрометр, 2 - нагреваемый капилляр, с установленным тройником, 3 - контейнер с дейтерирующим агентом, 4 - источник ионизации.FIG. 1. Scheme of a modified ionization source. 1 - mass spectrometer, 2 - a heated capillary with an installed tee, 3 - a container with a deuterating agent, 4 - an ionization source.
Фиг. 2. Структура наркотического вещества МДПВ. Из структуры можно предсказать один подвижный атом кислорода и отсутствие подвижных атомов водорода.FIG. 2. The structure of the drug substance MDPV. From the structure, one mobile oxygen atom and the absence of mobile hydrogen atoms can be predicted.
Фиг. 3. Определение характеристик МДПВ. (А) Хроматограмма для пика МДВП при разделении на колонке хроматографа. (Б) Масс спектр раствора МДВП (25 нг/мл).FIG. 3. Characterization of MDPV. (A) Chromatogram for the peak of the MDL upon separation on a chromatograph column. (B) Mass spectrum of a solution of MDL (25 ng / ml).
Фиг. 4. Использование метода изотопного обмена для сокращения пространства поиска. А – Масс-спектр после реакции дейтеро-водородного обмена, Б - масс-спектр после реакции обмена 16О/18О, В - MS2 спектр вещества, хранящийся в базе MzCloud, Г - MS2 спектр после реакции обмена 16О/18О, Д - MS2 спектр после реакции дейтеро-водородного обмена.FIG. 4. Using the isotope exchange method to reduce the search space. A - Mass spectrum after the deutero-hydrogen exchange reaction, B - mass spectrum after the 16 O / 18 O exchange reaction, C - MS2 spectrum of the substance stored in the MzCloud database, D - MS2 spectrum after the 16 O / 18 O exchange reaction, D - MS2 spectrum after a deutero-hydrogen exchange reaction.
Фиг. 5. Алгоритм сокращения пространства поиска при использовании информации о количестве изотопных обменов.FIG. 5. The algorithm to reduce the search space when using information about the number of isotopic exchanges.
Подробное раскрытие изобретенияDetailed Disclosure of Invention
В описании данного изобретения термины «включает» и «включающий» интерпретируются как означающие «включает, помимо всего прочего». Указанные термины не предназначены для того, чтобы их истолковывали как «состоит только из». Если не определено отдельно, технические и научные термины в данной заявке имеют стандартные значения, общепринятые в научной и технической литературе.In the description of the present invention, the terms “includes” and “including” are interpreted as meaning “includes, among other things.” These terms are not intended to be construed as “consists of only”. Unless defined separately, technical and scientific terms in this application have standard meanings generally accepted in the scientific and technical literature.
Предлагаемая система по настоящему изобретению включает в себя хромато-масс-спектрометр, оснащенный модифицированным источником электроспрей ионизации, позволяющим проводить анализ масс соединения и его фрагментов как в стандартных условиях, так и в условиях эффективно происходящего дейтеро/водородного обмена. В уровне техники описано использование дейтеро/водородного обмена во время ионизации (RU2548387C1, JP2004028993A, Kostyukevich et.al., (2013) Anal Chem, 85(11):5330–5334; Kostyukevich et al., (2014) In-ESI source Hydrogen/Deuterium exchange of carbohydrates ions. AnalChem, 86(5):2595–2600), однако данные методы предлагают проведение обмена в условиях лимитированного времени или дейтерирующего агента, что негативно отражается на эффективности реакции.The proposed system of the present invention includes a gas chromatography mass spectrometer equipped with a modified source of electrospray ionization, which allows mass analysis of the compound and its fragments both under standard conditions and under conditions of efficiently occurring deutero / hydrogen exchange. The prior art describes the use of deutero / hydrogen exchange during ionization (RU2548387C1, JP2004028993A, Kostyukevich et.al., (2013) Anal Chem, 85 (11): 5330-5334; Kostyukevich et al., (2014) In-ESI source Hydrogen / Deuterium exchange of carbohydrates ions. AnalChem, 86 (5): 2595–2600), however, these methods suggest the exchange under conditions of a limited time or a deuterating agent, which negatively affects the efficiency of the reaction.
В настоящем изобретении используют модификацию хромато-масс-спектрометра, адаптированную для проведения эффективного дейтеро/водородного обмена в процессе ионизации образца. Модификация состоит в использовании нагреваемого переходного тройника, соединяющего выход хроматографа и вход в масс-спектрометра, характеризующегося тем, что нагреваемый переходной тройник образует Т-образное соединение, один из выходов которого соединен с областью поступления полученного в результате электроспрей ионизации спрея заряженных капель анализируемого вещества, другой выход соединен с вакуумной частью масс-спектрометра, а третий - с камерой, содержащей дейтерирующий агент, при этом соединение с камерой, содержащей дейтерирующий агент, происходит при помощи клапана, регулирующего пропускание дейтерирующего агента, и при этом при открытии клапана в переходном тройнике образуется атмосфера, насыщенная дейтерирующим агентом. Данное устройство позволяет эффективно осуществлять реакцию дейтеро/водородного обмена в газовой фазе, а также управлять эффективностью данной реакции путем изменения температуры нагреваемого тройника и температуры камеры с дейтерирующим агентом. Кроме того, установленный клапан между камерой с дейтерирующим агентом и тройником позволяет запускать или прекращать реакцию обмена.In the present invention, a modification of the chromatography-mass spectrometer is used, adapted to conduct effective deutero / hydrogen exchange during ionization of the sample. The modification consists in using a heated transition tee that connects the output of the chromatograph and the entrance to a mass spectrometer, characterized in that the heated transition tee forms a T-shaped connection, one of the outputs of which is connected to the input region of the spray of charged drops of the analyte obtained by electrospray ionization, the other outlet is connected to the vacuum part of the mass spectrometer, and the third is connected to the chamber containing the deuterating agent, while the connection to the chamber containing the deuterating agent occurs using a valve regulating the transmission of the deuterating agent, and when the valve is opened in the transition tee, an atmosphere saturated with a deuterating agent. This device allows you to effectively carry out the reaction of deutero / hydrogen exchange in the gas phase, as well as to control the effectiveness of this reaction by changing the temperature of the heated tee and the temperature of the chamber with a deuterating agent. In addition, the installed valve between the chamber with the deuterating agent and the tee allows you to start or stop the exchange reaction.
Кроме того, в данном изобретении используется методика обмена подвижных атомов кислорода в анализируемом соединении на изотоп кислорода 18О. Данный подход основывается на ранее описанном авторами способе (Kostyukevich Y, et.al., Anal Bioanal Chem. 2014 Oct;406(26):6655-64 и Kostyukevich Y, et.al., Anal Bioanal Chem (2019) 411: 3331), заключающимся в том, что предварительно высушенное соединение растворяется в тяжелой воде Н2 18О и запаивается в стеклянной ампуле и нагревается в термостате в течении 24 часов при температуре 95°С. При таких условиях подвижные атомы кислорода из групп =О, -СООН заменяются на изотоп, при этом молекулы исходных соединений не разрушаются.In addition, this invention uses a technique for exchanging mobile oxygen atoms in an analyte for an oxygen isotope of 18 O. This approach is based on the method previously described by the authors (Kostyukevich Y, et.al., Anal Bioanal Chem. 2014 Oct; 406 (26): 6655-64 and Kostyukevich Y, et.al., Anal Bioanal Chem (2019) 411: 3331), namely, that the pre-dried compound is dissolved in heavy water H 2 18 O and sealed in a glass ampoule and heated in a thermostat for 24 hours at a temperature of 95 ° C. Under such conditions, mobile oxygen atoms from the = O, -COOH groups are replaced by an isotope, while the molecules of the starting compounds are not destroyed.
Авторами были определены режимы реализации обмена подвижных атомов кислорода. Например, при работе с водорастворимыми соединениями, такими как многие лекарственные препараты, растительные и почвенные экстракты для обмена атомов кислорода из групп =О, -СООН реакция проводится в течении 24 часов при температуре от 80 до 100°С. Для обмена кислорода из спиртовых групп (-ОН) реакция проводится в течении 20 дней при температуре от 80 до 100°С.The authors determined the modes of realization of the exchange of mobile oxygen atoms. For example, when working with water-soluble compounds, such as many drugs, plant and soil extracts for the exchange of oxygen atoms from groups = O, -COOH, the reaction is carried out for 24 hours at a temperature of from 80 to 100 ° C. For the exchange of oxygen from alcohol groups (-OH), the reaction is carried out for 20 days at a temperature of 80 to 100 ° C.
При работе с водонерастворимыми соединениями, такими как нафтеновые кислоты, может применяться метод обмена в сверхкритической или околокритической воде. Для этого к соединению добавляется тяжелая вода и данная система (в общем случае несмешивающаяся) помещается в герметично закрытый автоклав и нагревается в течении часа при температуре 300-450°С. При таких температурах и давлениях вода переходит в сверхкритическое состояние и растворяет многие (в том числе неполярные) соединения. При этих условиях также происходит обмен в =О и –СООН группах.When working with water-insoluble compounds, such as naphthenic acids, the exchange method in supercritical or near-critical water can be used. To do this, heavy water is added to the compound and this system (generally immiscible) is placed in a hermetically sealed autoclave and heated for one hour at a temperature of 300-450 ° C. At such temperatures and pressures, water goes into a supercritical state and dissolves many (including non-polar) compounds. Under these conditions, there is also an exchange in = O and –COOH groups.
Эффективность реакции обмена возрастает при увеличении времени и температуры реакции, однако, также увеличивается скорость реакции гидролиза, которая разрушает исходное соединение. Таким образом, конкретные параметры реакции подбираются индивидуально для соединений различных классов.The efficiency of the exchange reaction increases with increasing reaction time and temperature; however, the hydrolysis reaction rate, which destroys the starting compound, also increases. Thus, specific reaction parameters are selected individually for compounds of various classes.
Для проведения реакции дейтеро/водородного обмена в газовой фазе могут использоваться следующие соединения: D2O, дейтерированные по гидроксильной группе спирты (MeOD, EtOD), дейтерированный аммиак. Объем дейтерирующего агента в контейнере влияет только на продолжительность устойчивой работы изобретения и не влияет на глубину реакции обмена.The following compounds can be used to carry out the deutero / hydrogen exchange reaction in the gas phase: D 2 O, hydroxyl deuterated alcohols (MeOD, EtOD), deuterated ammonia. The volume of the deuterating agent in the container affects only the duration of the stable operation of the invention and does not affect the depth of the exchange reaction.
Схема модифицированного источника ионизации показана на Фиг. 1. Геометрические размеры нагреваемого капилляра могут варьироваться в широких пределах: длина от 5 см до 50 см, и внутренний диаметр от 0.3 мм до 3 мм. Нагреваемый капилляр изготавливается из нержавеющей стали или других устойчивых к окислению сплавов.A schematic of a modified ionization source is shown in FIG. 1. The geometric dimensions of the heated capillary can vary within wide limits: length from 5 cm to 50 cm, and internal diameter from 0.3 mm to 3 mm. The heated capillary is made of stainless steel or other alloys resistant to oxidation.
Увеличение длины и внутреннего диаметра капилляра увеличивает глубину реакции обмена, однако уменьшает чувствительность из-за гибели ионов на стенках. Для эффективного прохождения реакции необходимо использовать повышенную температуру от 200 до 400°С. Более высокие значения температуры приводят к термической фрагментации ионов. В качестве клапана в настоящем изобретении используется шаровой кран с регулирующим элементом сферической формы.An increase in the length and inner diameter of the capillary increases the depth of the exchange reaction, but decreases the sensitivity due to the death of ions on the walls. For an effective reaction, it is necessary to use an elevated temperature from 200 to 400 ° C. Higher temperatures lead to thermal fragmentation of ions. As a valve in the present invention uses a ball valve with a regulating element of a spherical shape.
В настоящем изобретении для идентификации соединения используется время выхода из хроматографической колонки, точная масса, массы фрагментов, полученных с использованием фрагментации под действием столкновений, количество подвижных атомов водорода, количество подвижных атомов кислорода, определяемых путем сравнения спектров исходного и меченного соединений, а также распределение изотопов в спектре фрагментации. Использование изотопного обмена является существенной особенностью данного изобретения.In the present invention, the exit time from the chromatographic column, the exact mass, masses of fragments obtained using collision fragmentation, the number of mobile hydrogen atoms, the number of mobile oxygen atoms determined by comparing the spectra of the starting and labeled compounds, and the distribution of isotopes are used to identify the compound in the fragmentation spectrum. The use of isotope exchange is an essential feature of the present invention.
Измеренные параметры используются для идентификации соединения с использованием доступных баз данных MzCloud, Metlin, PubChem. Изобретение включает в себя специализированное программное обеспечение, обеспечивающее фильтрацию соединений по количеству обменных атомов.The measured parameters are used to identify the connection using the available databases MzCloud, Metlin, PubChem. The invention includes specialized software that filters compounds by the number of exchange atoms.
Настоящий способ включает следующие стадии:The present method includes the following steps:
1) Проведение классического хромато-масс-спектрометрического эксперимента с фрагментацией. Измерение для соединений времени выхода из хроматографической колонки, точной массы и спектра фрагментных ионов.1) Conducting a classical chromatography-mass spectrometric experiment with fragmentation. Measurement for compounds of the exit time from the chromatographic column, the exact mass and spectrum of fragment ions.
2) Проведение реакции дейтеро/водородного обмена в источнике ионизации, измерение точной массы соединения после внедрения изотопной метки, измерение спектра фрагментации после внедрения изотопной метки.2) Carrying out the deutero / hydrogen exchange reaction in the ionization source, measuring the exact mass of the compound after the introduction of the isotope tag, measuring the fragmentation spectrum after the introduction of the isotope tag.
3) Проведение реакции обмена кислорода, измерение точной массы соединения после внедрения изотопной метки, измерение спектра фрагментации после внедрения изотопной метки.3) Carrying out the oxygen exchange reaction, measuring the exact mass of the compound after the introduction of the isotope tag, measuring the fragmentation spectrum after the introduction of the isotope tag.
4) Использование точной массы и спектра фрагментации исходного соединения для предварительной идентификации в публичных базах данных MzCloud, Metlin, HMDB. Определение списка соединений, потенциально соответствующих исходному.4) Using the exact mass and fragmentation spectrum of the starting compound for preliminary identification in the public databases MzCloud, Metlin, HMDB. Defining a list of compounds potentially matching the source.
5) В случае множества кандидатов использовать информацию о количестве подвижных атомов водорода и кислорода и отфильтровать из определенного списка те соединения, которые удовлетворяют измеренным в эксперименте параметрам.5) In the case of many candidates, use information on the number of mobile hydrogen and oxygen atoms and filter out from a certain list those compounds that satisfy the parameters measured in the experiment.
6) В случае, если фильтрация по изотопным меткам по-прежнему оставляет множество кандидатов, использовать информацию о распределении изотопных меток по фрагментным ионам. Отфильтровать те соединения, для которых положение изотопных меток в фрагментных ионах удовлетворяет измеренным в эксперименте параметрам.6) If filtering by isotopic labels still leaves a lot of candidates, use information about the distribution of isotopic labels by fragment ions. Filter out those compounds for which the position of the isotopic labels in the fragment ions satisfies the parameters measured in the experiment.
7) В случае если, ни одно из соединений из данных баз данных не подходит под измеренные экспериментальные параметры, провести поиск в базе данных PubChem и отфильтровать те соединения, для которых точная масса и количество подвижных атомов кислорода и водорода удовлетворяет измеренным в эксперименте параметрам.7) If none of the compounds from these databases matches the measured experimental parameters, search the PubChem database and filter out those compounds for which the exact mass and number of mobile oxygen and hydrogen atoms satisfy the parameters measured in the experiment.
Пример фильтрации по подвижным атомам для наркотика МДПВ:Moving Atom Filtration Example for MDPV Drug:
Выгрузим из базы данных PubChem все соединения с брутто-формулой C10H21O3N. Таких соединений 20022.Unload from the PubChem database all compounds with the gross formula C 10 H 21 O 3 N. There are 20022 such compounds.
Отфильтруем все соединения, у которых нет подвижных протонов, т.е. групп –OH, -NH, -COOH и т.д. Таких уже 6179.We filter out all compounds that do not have mobile protons, i.e. groups –OH, —NH, —COOH, etc. There are already 6179 of them.
Отфильтруем все соединения, у которых есть только 1 группа =O (один кислородный обмен). Таких 2016.We filter out all compounds that have only 1 group = O (one oxygen exchange). There are 2016.
Таким образом, пространство поиска даже при использовании самой наполненной базы данных PubChem (около 100 миллионов соединений) сократилось в 10 раз.Thus, the search space even using the most populated PubChem database (about 100 million connections) was reduced by 10 times.
Нижеследующие примеры осуществления способа приведены в целях раскрытия характеристик настоящего изобретения и их не следует рассматривать как каким-либо образом ограничивающие объем изобретения.The following examples of the method are given in order to disclose the characteristics of the present invention and should not be construed as in any way limiting the scope of the invention.
Пример 1.Example 1
Пример использования данных по количеству изотопных обменов (количеству определенных функциональных групп) приведен в Таблице 1.An example of the use of data on the number of isotopic exchanges (the number of certain functional groups) is given in Table 1.
Был проведен анализ количества химических соединений, имеющих одинаковый элементный состав и одинаковое количество функциональных групп. Элементный состав может быть определен, измеряя точную массу, используя масс-спектрометр высокого разрешения. Количество различных функциональных групп может быть определено, используя заявляемый в изобретении метод.An analysis was made of the number of chemical compounds having the same elemental composition and the same number of functional groups. The elemental composition can be determined by measuring the exact mass using a high resolution mass spectrometer. The number of different functional groups can be determined using the inventive method.
Можно видеть, что применение заявляемого метода позволяет более чем в 10 раз сократить химическое пространство для поиска и идентификации соединений.You can see that the application of the proposed method allows more than 10 times to reduce the chemical space for the search and identification of compounds.
Таблица 1. Уменьшение числа потенциальных соединений, имеющих одинаковый элементный состав, при добавлении в анализ структурных дескрипторов. Столбцы: название соединения; химическая формула; количество соединений, присутствующих в базе данных PubChem/HMDB и имеющих ту же молекулярную формулу (PC1/H1); количество соединений, присутствующих в базе данных PubChem/HMDB и имеющих ту же молекулярную формулу и то же количество подвижных атомов водорода (PC2/H2); количество соединений, присутствующих в базе данных PubChem/HMDB и имеющих ту же молекулярную формулу, то же количество подвижных атомов водорода и то же количество подвижных атомов кислорода (PC3/H3); наличие или отсутствие соединения в базе HMBD; наличие спектра MS2 в базе HMDB.Table 1. A decrease in the number of potential compounds having the same elemental composition when structural descriptors are added to the analysis. Columns: name of the connection; chemical formula; the number of compounds present in the PubChem / HMDB database and having the same molecular formula (PC1 / H1); the number of compounds present in the PubChem / HMDB database and having the same molecular formula and the same number of mobile hydrogen atoms (PC2 / H2); the number of compounds present in the PubChem / HMDB database and having the same molecular formula, the same number of mobile hydrogen atoms and the same number of mobile oxygen atoms (PC3 / H3); the presence or absence of a connection in the HMBD database; the presence of the MS2 spectrum in the HMDB database.
Пример 2.Example 2
Использование заявляемого метода для анализа реального наркотического вещества МДВП приведено на Фиг. 2-4.The use of the inventive method for the analysis of a real narcotic substance MDL is shown in FIG. 2-4.
Для осуществления заявляемого метода был использован хромато-масс- спектрометр в составе хроматографа Dionex 3000 Ultimate, использовалась хроматографическая колонка Acclaim PepMap 100 C18, 50см*75млм*3мкм. Подвижная фаза A: вода, 0.05% раствор трифторуксусной кислоты (ТФУ), подвижная фаза B: 20% вода, 80% ацетонитрил, 0.04% ТФУ; растворитель для загрузки на колонку: 98% вода, 2% ацетонитрил, 0.05% ТФУ. Хроматограф был совмещен с ионным источником нано-электроспрей. Напряжение на игле электроспрея составляло 2.5 кВ. Регистрировались положительно заряженные ионы. Для детектирования ионов использовался масс-спектрометр Orbitrap Q Exactive (Бремен, Германия). Разрешающая способность прибора была установлена на значение 140 000. Фрагментация ионов осуществлялась с использованием метода диссоциации, индуцированной столкновением HCD (Higher-energy collisional dissociation). Энергия фрагментации была установлена на значении 30 ед.To implement the inventive method, a chromatography-mass spectrometer was used as part of a Dionex 3000 Ultimate chromatograph; an
Отметим, что описанная конфигурация не ограничивает сферу применения заявляемого изобретения. Изобретение может использоваться в сочетании с другими моделями хроматографов, а также с методом прямого ввода. Кроме ионизации методом электроспрей, ионы могут быть получены методами химической ионизации, методом фотоионизации, а также ионизацией, вызванной взаимодействием с бета-частицами (электронами). В качестве масс-спектрометра может использоваться любой масс- спектрометр, оснащенный источником ионизации при атмосферном давлении и специальным капилляром для транспорта ионов из области атмосферного давления в область низкого вакуума. В качестве метода фрагментации могут быть использованы методы фрагментации, индуцированной столкновениями (при высоких и низких энергиях), методы фрагментации, индуцированной поглощением фотона (или нескольких фотонов), а также фрагментация, вызванная захватом электрона.Note that the described configuration does not limit the scope of the claimed invention. The invention can be used in combination with other models of chromatographs, as well as with the direct input method. In addition to electrospray ionization, ions can be obtained by chemical ionization, photoionization, and ionization caused by interaction with beta particles (electrons). Any mass spectrometer equipped with an ionization source at atmospheric pressure and a special capillary for transporting ions from atmospheric pressure to low vacuum can be used as a mass spectrometer. As a fragmentation method, collision-induced fragmentation methods (at high and low energies), fragmentation methods induced by absorption of a photon (or several photons), and also fragmentation caused by electron capture can be used.
Структура наркотического вещества приведена на Фиг. 2; из структуры можно предвидеть отсутствие в нейтральной молекуле подвижных атомов водорода и наличие одного подвижного атома кислорода. Далее были определены характеристики МДПВ – время задержки на колонке (retention time) (Фиг. 3А) и масса вещества с помощью жидкостной хромато-масс-спектрометрии (масс спектр раствора МДВП (25 нг/мл) изображен на Фиг. 3Б). После проведения реакции изотопного обмена в протонированном ионе наблюдался один обмен водорода на дейтерий (Фиг. 4А) и один обмен 16О на 18О (Фиг. 4Б). Для идентификации соединения необходимо провести процедуру сравнения измеренного спектра фрагментации (MS2 спектра) со спектром фрагментации данного соединения, хранящимся в верифицированных базах данных (MzCloud, Metlin и др.). Спектр фрагментации соединения МДВП, хранящийся в базе MzCloud приведен на Фиг. 4В. Экспериментально измеренные спектры фрагментации для соединения МДВП после прохождения реакции обмена представлены на Фиг. 4Г и Фиг. 4Д. Видно, что данные спектры совпадают с спектром, хранящимся в базе MzCloud; кроме того, можно видеть, что некоторые фрагментные ионы несут в себе изотопную метку, что также может использоваться для повышения достоверности идентификации.The structure of the drug substance is shown in FIG. 2; from the structure, one can predict the absence of mobile hydrogen atoms in the neutral molecule and the presence of one mobile oxygen atom. Next, the characteristics of MDPV were determined - the retention time (column 3A) and the mass of the substance using liquid chromatography-mass spectrometry (the mass spectrum of the MDPA solution (25 ng / ml) is shown in Fig. 3B). After the isotope exchange reaction in the protonated ion, one exchange of hydrogen for deuterium was observed (Fig. 4A) and one exchange of 16 O for 18 O (Fig. 4B). To identify the compound, it is necessary to carry out the procedure of comparing the measured fragmentation spectrum (MS2 spectrum) with the fragmentation spectrum of this compound stored in verified databases (MzCloud, Metlin, etc.). The fragmentation spectrum of the MDAW compound stored in the MzCloud database is shown in FIG. 4B. The experimentally measured fragmentation spectra for the MDAW compound after undergoing an exchange reaction are shown in FIG. 4G and FIG. 4D. It can be seen that these spectra coincide with the spectrum stored in the MzCloud database; in addition, it can be seen that some fragment ions carry an isotopic label, which can also be used to increase the reliability of identification.
На Фиг. 5 представлен алгоритм сокращения пространства поиска, используя информацию о количестве обменов. Можно видеть, что применение заявляемого в изобретении подхода позволяет существенно сократить пространство поиска.In FIG. 5 presents an algorithm for reducing search space using information on the number of exchanges. You can see that the application of the approach claimed in the invention can significantly reduce the search space.
Данное сокращение будет особенно полезно при работе с идентификацией соединений в низких концентрациях в составе сложных биологических матриц, таких как физиологические жидкости, экстракты растений и т.д. Именно в этом случает возникают такие эффекты, как присутствие внутри хроматографического пика нескольких различных соединений, присутствие в смеси химически близких соединений, дающих близкие спектры фрагментации, а также другие эффекты, затрудняющие однозначную идентификацию. В заявляемом изобретении разработан набор дескрипторов, определяемых с использованием масс-спектрометра и реакции изотопного обмена, применение которых позволит значительно повысить достоверность идентификации.This reduction will be especially useful when working with the identification of compounds in low concentrations in complex biological matrices, such as physiological fluids, plant extracts, etc. It is in this case that such effects arise as the presence of several different compounds inside the chromatographic peak, the presence of chemically close compounds in the mixture giving similar fragmentation spectra, as well as other effects that complicate unambiguous identification. The claimed invention developed a set of descriptors determined using a mass spectrometer and isotope exchange reaction, the use of which will significantly increase the reliability of identification.
Несмотря на то, что изобретение описано со ссылкой на раскрываемые варианты воплощения, для специалистов в данной области должно быть очевидно, что конкретные подробно описанные случаи приведены лишь в целях иллюстрирования настоящего изобретения, и их не следует рассматривать как каким-либо образом ограничивающие объем изобретения. Должно быть, понятно, что возможно осуществление различных модификаций без отступления от сути настоящего изобретения.Although the invention has been described with reference to the disclosed embodiments, it should be apparent to those skilled in the art that the specific cases described in detail are for illustrative purposes only and should not be construed as limiting the scope of the invention in any way. It should be understood that various modifications are possible without departing from the gist of the present invention.
Claims (13)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2019118223A RU2722657C1 (en) | 2019-06-11 | 2019-06-11 | Method of identifying substances using mass spectrometer |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2019118223A RU2722657C1 (en) | 2019-06-11 | 2019-06-11 | Method of identifying substances using mass spectrometer |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2722657C1 true RU2722657C1 (en) | 2020-06-02 |
Family
ID=71067365
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2019118223A RU2722657C1 (en) | 2019-06-11 | 2019-06-11 | Method of identifying substances using mass spectrometer |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2722657C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115015403A (en) * | 2022-04-08 | 2022-09-06 | 浙江大学 | Rapid, comprehensive and stable identification method for unknown poison |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2548387C1 (en) * | 2013-10-09 | 2015-04-20 | Федеральное Государственное Бюджетное Учреждение Науки Институт Биохимической Физики Им. Н.М. Эмануэля Российской Академии Наук (Ибхф Ран) | Method for carrying out deutero-hydrogen exchange in ion source of mass spectrometer |
| US9150610B2 (en) * | 2009-11-16 | 2015-10-06 | Biomotif Ab | Method and apparatus to perform hydrogen-deuterium exchange |
| US9196468B2 (en) * | 2012-05-18 | 2015-11-24 | Dh Technologies Development Pte. Ltd. | Method and system for introducing make-up flow in an electrospray ion source system |
-
2019
- 2019-06-11 RU RU2019118223A patent/RU2722657C1/en active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9150610B2 (en) * | 2009-11-16 | 2015-10-06 | Biomotif Ab | Method and apparatus to perform hydrogen-deuterium exchange |
| US9196468B2 (en) * | 2012-05-18 | 2015-11-24 | Dh Technologies Development Pte. Ltd. | Method and system for introducing make-up flow in an electrospray ion source system |
| RU2548387C1 (en) * | 2013-10-09 | 2015-04-20 | Федеральное Государственное Бюджетное Учреждение Науки Институт Биохимической Физики Им. Н.М. Эмануэля Российской Академии Наук (Ибхф Ран) | Method for carrying out deutero-hydrogen exchange in ion source of mass spectrometer |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| HEMLING M.E. et al. Gas Phase Hydrogen / Deuterium Exchange in Electrospray Ionization Mass Spectrometry as a Practical Tool for Structure Elucidation // Journal of the American Society for Mass Spectrometry, 1994, V.5, pp.434-442. * |
| KOSTYUKEVICH Y. et al. Enumeration of non-labile oxygen atoms in dissolved organic matter by use of 16O/18O exchange and Fourier transform ion-cyclotron resonance mass spectrometry // Anal. Bional. Chem., 2014, V.406, pp.6655-6664. * |
| KOSTYUKEVICH Y. et al. Enumeration of non-labile oxygen atoms in dissolved organic matter by use of 16O/18O exchange and Fourier transform ion-cyclotron resonance mass spectrometry // Anal. Bional. Chem., 2014, V.406, pp.6655-6664. HEMLING M.E. et al. Gas Phase Hydrogen / Deuterium Exchange in Electrospray Ionization Mass Spectrometry as a Practical Tool for Structure Elucidation // Journal of the American Society for Mass Spectrometry, 1994, V.5, pp.434-442. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115015403A (en) * | 2022-04-08 | 2022-09-06 | 浙江大学 | Rapid, comprehensive and stable identification method for unknown poison |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Heiles | Advanced tandem mass spectrometry in metabolomics and lipidomics—methods and applications | |
| Buchanan et al. | Fourier transform mass spectrometry of high-mass biomolecules | |
| EP1220290B1 (en) | Methods and apparatus for mass spectrometry | |
| GB2571455B (en) | Mass correction | |
| US9997341B2 (en) | Unknown identification using collision cross section | |
| CA2730559A1 (en) | Glow discharge ion source | |
| WO2013169491A2 (en) | Techniques for analyzing mass spectra from thermal desorption response | |
| Donohoe et al. | A new ion mobility–linear ion trap instrument for complex mixture analysis | |
| US10408801B2 (en) | Dynamic post column addition | |
| Zhu et al. | Arc plasma-based dissociation device: fingerprinting mass spectrometric analysis realized at atmospheric condition | |
| Kumar et al. | Effects of residual water in a linear quadrupole ion trap on the protonation sites of 4-aminobenzoic acid | |
| Ahmed et al. | Ambient pressure ion funnel: Concepts, simulations, and analytical performance | |
| Nielsen et al. | Rapid screening of drug compounds in urine using a combination of microextraction by packed sorbent and rotating micropillar array electrospray ionization mass spectrometry | |
| RU2722657C1 (en) | Method of identifying substances using mass spectrometer | |
| Kong et al. | Integration of a multichannel pulsed-valve inlet system to a linear quadrupole ion trap mass spectrometer for the rapid consecutive introduction of nine reagents for diagnostic ion/molecule reactions | |
| Guo et al. | Hyphenated techniques in gas chromatography | |
| KR102314968B1 (en) | Optimized Targeted Analysis | |
| Hu et al. | Coupling corona discharge for ambient extractive ionization mass spectrometry | |
| Masselon et al. | Identification of tryptic peptides from large databases using multiplexed tandem mass spectrometry: simulations and experimental results | |
| Yang et al. | Fragmentation study and analysis of benzoylurea insecticides and their analogs by liquid chromatography–electrospray ionization-mass spectrometry | |
| Lattouf et al. | Parametric sensitivity in a generalized model for atmospheric pressure chemical ionization reactions | |
| Mishra et al. | A review on liquid chromatography-mass spectroscopy and it’s applications | |
| Tollsten | 2.7 High performance liquid chromatography (HPLC) and related techniques: 2.7. 4 HPLC/MS for drug impurity identification | |
| Mirabelli | Soft Ionization Mass Spectrometry: from Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization to Dielectric Barrier Discharge Ionization and Atmospheric Pressure Photoionization | |
| Busetti et al. | Liquid chromatography–mass spectrometry |