RU2717539C1 - Способ определения ботанического происхождения мёда - Google Patents
Способ определения ботанического происхождения мёда Download PDFInfo
- Publication number
- RU2717539C1 RU2717539C1 RU2019110713A RU2019110713A RU2717539C1 RU 2717539 C1 RU2717539 C1 RU 2717539C1 RU 2019110713 A RU2019110713 A RU 2019110713A RU 2019110713 A RU2019110713 A RU 2019110713A RU 2717539 C1 RU2717539 C1 RU 2717539C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- honey
- pollen grains
- determining
- botanical origin
- sample
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/02—Food
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Изобретение относится к пищевой промышленности, пчеловодству, а именно к способам установления ботанического происхождения меда для подтверждения его натуральности. Способ определения ботанического происхождения меда предусматривает исследование структурных особенностей пыльцевых зерен под микроскопом при увеличении 400 взятого из образца свежего центробежного меда объемом не менее 200 мл. Способ включает подсчет количественного присутствия каждого морфологического типа пыльцевых зерен при увеличении 100, подсчет суммы среднеарифметических значений общего количества подсчитанных пыльцевых зерен каждого идентифицированного типа по формуле ∑и вычисление частоты встречаемости по формуле K=i/∑, где i - выявленные типы пыльцевых зерен. Ботаническое происхождение меда определяется исходя из процентного присутствия пыльцевых зерен. При этом исследование морфологических особенностей пыльцевых зерен проводится в одной естественной капле меда из образца, не подвергнутого центрифугированию и тепловой обработке. Способ является объективным, простым в исполнении и воспроизводстве, позволяет определить истинное содержание пыльцевых зерен и одновременно значительно снизить трудоемкость исследований и материальные затраты. 2 з.п. ф-лы, 3 ил., 1 табл.
Description
Изобретение относится к пищевой промышленности, пчеловодству, а именно к способам установления ботанического происхождения меда для подтверждения его натуральности. Проблема фальсификации меда в настоящее время является актуальной для всех потребителей. Применение фальсификата в лучшем случае не окажет никакого положительного влияния на здоровье человека, а в худшем - может ему навредить.
Известен органолептический способ оценки качества меда (по профилям: вкус, аромат, цвет), который не гарантирует достоверность натуральности происхождения меда, так как является, во-первых, субъективным (сколько людей столько и мнений). Кроме того, на сегодняшний день используют массу ароматических веществ высокого качества для фальсификации меда.
Существуют способы определения ботанического происхождения медов, основанные на известном факте, что в нектарах собранных с цветков растений медоносными пчелами присутствуют пыльцевые зерна [1]
Предложен способ определения ботанического происхождения меда с помощью анализа ДНК (заявка RU 2015148090 от 09.11.2015) [2]. Для выделения ДНК используется специальный лизирующий буфер, содержащий детергент цетилтриметиламмония бромид, антиоксидантдитиотреитол, связывающий фенольные соединения поливинилтирролидон, высокую концентрацию хлорида натрия, комплексообразователь N, N, N1, N1 -этилендиаминтетраусусную кислоту, буферную соль трис-гидрохлорид, процесс разрушения (лизиса) совмещается с ультразвуковой обработкой препарата, а непосредственное определение индивидуального медоноса-источника нектара при сборе меда осуществляется с помощью полимеразной цепной реакции методом гель-электрофореза.
Недостатками данного способа является использование дорогостоящих реактивов, его трудоемкость для установления всех индивидуальных медоносов - источников нектара.
Известен ГОСТ 31769-2012 [3], в котором предложен метод определения частоты встречаемости пыльцевых зерен. Он предусматривает использование 10 г меда растворенного в 20 мл дистиллированной воды, при температуре 40°С, центрифугирование раствора в течение 10 мин при ускорении 1000g, слив надосадочной жидкости добавление к осадку 20 мл дистиллированной воды, повторное центрифугирование в течение 5 мин при ускорении 1000g. Затем надосадочную жидкость декантируют, центрифужную пробирку помещают на фильтровальную бумагу под углом 45° для удаления остатков жидкости, осадок перемешивают микробиологической петлей и переносят на предварительно прогретое 40°С предметное стекло и равномерно распределяют по площади 22×22 мм микрошпателем. Каплю глицеринового желатина, разогретого до 40°С, распределяют крестообразно (по диагонали) на покровном стекле и медленно опускают на высушенный осадок, который для оптимального набухания пыльцы добавочно подогревают в течение 5 мин при 40°С. Микроскопирование препарата проводят после застывания глицеринового желатина. Вычисляют среднеарифметическое значение каждого выявленного морфологического типа пыльцы, сумму среднеарифметических значений и частоту их встречаемости.
Недостатками данного способа в результате центрифугирования раствора меда происходит деформирование пыльцевых зерен, что в значительной мере затрудняет их последующую идентификацию, а также образование сгустков слипшихся зерен пыльцы, которые невозможно разъединить и равномерно распределить по предметному стеклу петлей. (Фиг. 1, 2).
Наиболее близкой к предлагаемому способу является методика определения пыльцы в меде [4], принятая нами в качестве прототипа. Исследуемую пробу 9 не менее 200 г) отбирают по ГОСТ 31766-20-12, ГОСТ 19792-2001. Закристаллизовавшийся мед декристаллизуют на водяной бане. Сотовый незакристаллизовавшийся мед отделяют от сотов фильтрацией без нагрева. Сотовый закристаллизовавшийся мед декристаллизуют в термостате, затем отделяют от сотов фильтрацией. Пробу тщательно перемешивают. В мерную колбу объемом 150 мл наливают 100 мл пробы меда, нагретой до температуры 50…60°С.
Суть методики заключается в том, что из пробы микропипеткой берут каплю меда, объем которой составляет около 100 мкл) и готовят препарат для световой микроскопии. Пыльцевые зерна идентифицируют, затем высчитывают количественное и процентное отношение отдельных их видов из числа учтенных. Дозаторной пипеткой отбирают 100 мкл меда из мерной колбы (глубина 40 мл), переносят его на предметное стекло и равномерно распределяют гранью покровного стекла по площади 18×18 мм. Далее покровное стекло медленно во избежание воздушных пузырьков опускают на мед.
Для проведения анализа используют лабораторные весы с пределом абсолютной погрешности не более 0,01 г, пипеточный одноканальный дозатор переменного объема по ТУ 9452-002-33189998-2002, световой биологический микроскоп с увеличением 100-600, фотокамеру, адаптированную к микроскопу и компьютер, конусный матерчатый фильтр, термостат и водяную баню.
Просмотр и подсчет пыльцевых зерен под микроскопом проводят при увеличении 100. идентифицируют пыльцевые зерна под микроскопом при увеличении 400 и 600. За результат испытаний принимается среднеарифметическое значение трех проб, взятых с различной глубины образца.
Недостатками рассматриваемой методики являются: невозможность обнаружения пыльцевых зерен в предложенном объеме, в частности, в акациевом и липовых медах, в которых количество пыльцевых зерен в 1 г не превышает 15 единиц, а в кипрейном - 1-2 единиц. В этом случае во взятом объеме 100 мкл (0,1 мл), их можно вообще не обнаружить, что ставит под сомнение достоверность полученных результатов; далее по методике, нанесение на предметное стекло путем физического вытеснения из капиллярной трубки объемом 100 мкл сомнительно, так как в любом случае часть меда, включая и пыльцевые зерна, останется на стенках трубки; нагревание образца меда до температуры 50-60°С неизбежно приведет к деформации пыльцевых зерен (тепловая денатурация белков) [5], что затруднит их идентификацию.
В силу вышеизложенных недостатков достоверность получаемых результатов по данной методике вызывает сомнение, и она не приемлема для определения истинного соотношения пыльцевых зерен, которое определяет ботаническое происхождение меда.
Задачей изобретения является разработка объективного, простого в исполнении и воспроизводстве способа определения ботанического происхождения меда, основанного на сохранении морфологических особенностей пыльцевых зерен и их пространственного расположения, что позволит определить истинное содержание их и одновременно значительно снизить трудоемкость исследований и материальные затраты.
Сущность метода заключается в том, что центробежный образец меда объемом не менее 200 мл свежий или разогретый на водяной бане, в случае, если мед закристаллизован, до температуры, не превышающей 30°С во избежание деформации пыльцевых зерен, размешивается и наносится стеклянной палочкой на предметное стекло в количестве одной естественной капли, которую закрывают покровным стеклом и исследуют под микроскопом при увеличении 400 для изучения морфологических особенностей (борозд, ор, пор, характер апертур, текстура, скульптура, замер полярной оси и экваториального диаметра пыльцевого зерна), идентифицируют для дальнейшего подсчета пыльцевых зерен. Естественная капля - это относительно небольшой объем жидкого вещества, ограниченный поверхностью, обусловленной преимущественно действием сил поверхностного натяжения. Капля образуется при медленном истечении жидкости из небольшого отверстия или стекании ее с края поверхности [7].
На следующем этапе подсчитывают количественное присутствие каждого типа пыльцевых зерен при увеличении 100 в 10 полях зрения (Фиг. 3) в 5 каплях исследуемого образца. Многократная повторность (50) позволяет статистически точно определить средневзвешенное число идентифицированных типов пыльцевых зерен с минимальной ошибкой.
Экспериментальные данные обрабатывают с использованием пакета прикладных программ Snedecor V4 [8]. За результат испытаний принимают среднеарифметическое значение результатов пяти параллельных определений (5 капель), полученных в условиях повторяемости согласно ГОСТ ISO 5724-6 [6], где ∑(1+2+…i) - сумма среднеарифметических значений общего количества подсчитанных пыльцевых зерен каждого идентифицированного типа и вычисляют частоту встречаемости рассчитывают по формуле: К=i/∑(1+2+…i), где i - выявленные типы пыльцевых зерен.
Ботаническое происхождение меда определяют исходя из процентного присутствия пыльцевых зерен: в случае присутствия пыльцевых зерен одного морфологического типа превышающего 45%, исследуемый образец меда считается монофлерным, от 16 до 45% -составной частью смешанного меда (полифлерный), от 0 до 16% не принимается в расчет.
Пример
Образец объемом 200 мл свежего центробежного меда тщательно перемешивается стеклянной палочкой и наносится в размере одной естественной капли на предметное стекло, закрывается покровным стеклом и далее исследуется под микроскопом при увеличении 400 морфологическое строение пыльцевых зерен.
Экспериментальные данные обработаны с использованием пакета прикладных программ Snedecor V4 [8]. Результат вычислений представляли в виде значения, округленного до сотых долей в диапазоне частоты встречаемости от 0,1 до 1,0; десятых долей от 1,0 до 10,0; целых чисел от 10,0 до 100,0.
Подсчитывается общее количество пыльцевых зерен каждого морфологического типа, встреченных в 10 счетных полях при увеличении 100, в одной капле меда:
пыльцевые зерна дягиля в первой капле 251,2±11,91, во второй капле 283,0±22,22, в третьей капле 288,5±11,02, в четвертой капле 240,8±14,01, в пятой капле 241,5±1,68;
пыльцевые зерна борщевика сибирского - 24,5±6,21, 29,3±5,21, 24,9±4,20, 28,7±4,27, 28,9±3,14 соответственно;
пыльцевые зерна купыря лесного: 16,2±0,70, 9,1±0,67, 10,7±0,70,10,1±0,89, 10,1±0,71, т.д. в соответствии с таблицей.
Затем определяется среднеарифметическое значение каждого морфологического типа пыльцы 10 счетных полей в 5 каплях меда, где среднеарифметическое значение пыльцевых зерен дягиля составило 261,0±10,31, борщевика сибирского - 27,1±1,12, купыря лесного -11,2±1,27 и т.д. (табл.). Многократная повторность (50) позволила статистически точно определить средневзвешенное число идентифицированных типов пыльцевых зерен с минимальной ошибкой.
Подсчитывается сумма среднеарифметических значений общего количества пыльцевых зерен во всех счетных полях, всех встреченных морфологических типов, которая составила 341,5 и определяется частота встречаемости, т.е. процентное соотношение пыльцевых зерен, где частота встречаемости пыльцевых зерен дягиля составила К=(261,0/341,5) ×100=76,42%, частота встречаемости пыльцевых зерен борщевика сибирского К=(27,1/341,5)×100=7,93%, частота встречаемости пыльцевых зерен купыря лесного К=(11,2/341,5)×100=3,27% и т.д. (табл.).
Ботаническое происхождение меда определили исходя из процентного присутствия пыльцевых зерен дягиля, частота встречаемости которых составила 76,42%. Результаты анализа показали, что исследуемый мед является монофлерным, собранным в основном с дягиля.
Многократная повторность (50) позволила статистически точно определить средневзвешенное число идентифицированных типов пыльцевых зерен с минимальной ошибкой.
Предлагаемый нами способ определения ботанического происхождения меда является объективным, простым в исполнении и воспроизводстве способом, основанным на сохранении морфологических особенностей пыльцевых зерен, что позволяет определить истинное содержание их и одновременно значительно снизить трудоемкость исследований и материальные затраты.
Список используемой литературы
1. Демианович, З. Вклад польских ученых в исследование в развитие пчелоботаники // Докл. XXIV Междунар. конгр. по пчеловодству. - Буэнос-Айрес (Аргентина), 1973. - С. 469-471.
2. Заявка на изобретение РФ 2015148090 Опубликовано 11.05.2015, Бюл. 14. Способ определения ботанического происхождения меда с помощью анализа ДНК
3. ГОСТ 31769-2012. Мед. Метод определения частоты встречаемости пыльцевых зерен. Москва: Стандартинформ, 2014 - 15 с. Введен 2013-07-01
4. Халько А.Н. Методика определения пыльцы в меде. Пчеловодство. 2014. №5.
5. Поттхаст К, Ферментативная реакция в пищевых продуктах с низким содержанием влаги / К Поттхаст, Р. Хамм, Л. Аккер Вода в пищевых продуктах 1980, Москва: Пищевая промышленность. - С. 222-231
6. ГОСТ ISO 5725-6. Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Ч. 6. Использование значений точности на практике. Госстандарт России. 2002.
7. Многоликая планета: Вода. Бук Хаус.2005, 296 с., ISBN 5-98641-008-4
8. Сорокин, О.Д. Прикладная статистика на компьютере. - Краснообск, ГУП РПО СО РАСХН, 2004. - 162 с.
Claims (3)
1. Способ определения ботанического происхождения меда, предусматривающий исследование структурных особенностей пыльцевых зерен под микроскопом при увеличении 400, взятого из образца свежего центробежного меда объемом не менее 200 мл, подсчет количественного присутствия каждого морфологического типа пыльцевых зерен при увеличении 100, подсчет суммы среднеарифметических значений общего количества подсчитанных пыльцевых зерен каждого идентифицированного типа по формуле ∑(1+2+…i) и вычисление частоты встречаемости по формуле K=i/∑(1+2+…i), где i - выявленные типы пыльцевых зерен, ботаническое происхождение меда определяется исходя из процентного присутствия пыльцевых зерен, отличающийся тем, что исследование морфологических особенностей пыльцевых зерен проводится в одной естественной капле меда, из образца, не подвергнутого центрифугированию и тепловой обработке.
2. Способ определения ботанического происхождения меда по п. 1, отличающийся тем, что подсчет пыльцевых зерен проводится в 10 полях зрения в 5 каплях исследуемого образца.
3. Способ определения ботанического происхождения меда по п. 1, отличающийся тем, что испытуемый закристаллизовавшийся мед нагревают до температуры, не превышающей 30°С.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2019110713A RU2717539C1 (ru) | 2019-04-10 | 2019-04-10 | Способ определения ботанического происхождения мёда |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2019110713A RU2717539C1 (ru) | 2019-04-10 | 2019-04-10 | Способ определения ботанического происхождения мёда |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2717539C1 true RU2717539C1 (ru) | 2020-03-23 |
Family
ID=69943270
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2019110713A RU2717539C1 (ru) | 2019-04-10 | 2019-04-10 | Способ определения ботанического происхождения мёда |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2717539C1 (ru) |
Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102192901A (zh) * | 2011-03-10 | 2011-09-21 | 山东理工大学 | 一种基于激光扫描共聚焦显微镜的花粉表面纹饰成像方法 |
CN102830119A (zh) * | 2011-06-14 | 2012-12-19 | 安徽出入境检验检疫局检验检疫技术中心 | 一种鉴定蜂蜜中主要转基因蜜源植物花粉的形态学方法 |
RU2477469C1 (ru) * | 2012-03-16 | 2013-03-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт химической физики им. Н.Н. Семенова Российской академии наук (ИХФ РАН) | Способ контроля качества меда |
RU2015148090A (ru) * | 2015-11-09 | 2017-05-11 | Федеральное государственное бюджетное учреждение Институт биохимии и генетики Уфимского научного центра Российской академии наук (ИБГ УНЦ РАН) | Способ определения ботанического происхождения меда с помощью анализа днк |
RU2646824C1 (ru) * | 2017-01-10 | 2018-03-07 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Башкирский государственный университет" | Способ определения подлинности пчелиного мёда |
CN108680418A (zh) * | 2018-06-01 | 2018-10-19 | 广东金作农业科技有限公司 | 一种十字花科作物花粉的快速荧光染色方法 |
-
2019
- 2019-04-10 RU RU2019110713A patent/RU2717539C1/ru active
Patent Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102192901A (zh) * | 2011-03-10 | 2011-09-21 | 山东理工大学 | 一种基于激光扫描共聚焦显微镜的花粉表面纹饰成像方法 |
CN102830119A (zh) * | 2011-06-14 | 2012-12-19 | 安徽出入境检验检疫局检验检疫技术中心 | 一种鉴定蜂蜜中主要转基因蜜源植物花粉的形态学方法 |
RU2477469C1 (ru) * | 2012-03-16 | 2013-03-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт химической физики им. Н.Н. Семенова Российской академии наук (ИХФ РАН) | Способ контроля качества меда |
RU2015148090A (ru) * | 2015-11-09 | 2017-05-11 | Федеральное государственное бюджетное учреждение Институт биохимии и генетики Уфимского научного центра Российской академии наук (ИБГ УНЦ РАН) | Способ определения ботанического происхождения меда с помощью анализа днк |
RU2646824C1 (ru) * | 2017-01-10 | 2018-03-07 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Башкирский государственный университет" | Способ определения подлинности пчелиного мёда |
CN108680418A (zh) * | 2018-06-01 | 2018-10-19 | 广东金作农业科技有限公司 | 一种十字花科作物花粉的快速荧光染色方法 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Халько А.Н. Методика определения пыльцы в меде / Пчеловодство. - 2014. - N5. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Bicudo de Almeida-Muradian et al. | Standard methods for Apis mellifera honey research | |
Glei et al. | Comet assay: an essential tool in toxicological research | |
Barnett et al. | A rapid method for the determination of lactose in milk and cheese | |
RU2717539C1 (ru) | Способ определения ботанического происхождения мёда | |
Pearson et al. | A study of methods for estimating the cell content of bulk milk | |
RU2589680C1 (ru) | Способ окраски тромбоцитов после ультразвукового воздействия | |
CN107271241A (zh) | 一种高尔基银染神经组织的冰冻切片方法 | |
Winkler et al. | Sweet cherry fruit: ideal osmometers? | |
Kiełbasa et al. | PAHs in animal tissues–the analytics of PAHs in new reference materials and their homogeneity | |
JPS63168562A (ja) | 細胞固定・保存液 | |
Teixeira et al. | Methacrylate: An alternative fixing agent for identifying the botanical origin of propolis | |
Khamrokulov et al. | RESEARCH OF NATURAL HONEY BY SENSOR AND PHYSICO-CHEMICAL METHODS. | |
RU2801102C1 (ru) | Способ оценки полноты протравливания семян | |
Sturtevant | Quantitative demonstration of the presence of spores of Bacillus larvae in honey con-taminated by contact with American foulbrood | |
RU201746U1 (ru) | Матричный блок для изготовления тканевых микрочипов | |
CN110055298A (zh) | 一种大田甜樱桃矮化砧木染色体倍性的检测方法 | |
RU196594U1 (ru) | Матричный блок для изготовления тканевых микрочипов | |
SU116573A1 (ru) | Способ колориметрического определени содержани в растении азота, фосфора и кали | |
RU2645083C1 (ru) | Способ определения содержания пальмового масла в спреде со сливочным маслом | |
Qiu et al. | A simple dry sectioning method for obtaining whole-seed-sized resin section and its applications | |
RU2536629C1 (ru) | Способ диагностики паразитозов индеек | |
Muradian et al. | Standard methods for Apis mellifera honey research | |
JP5180113B2 (ja) | プロポリスの品質評価方法 | |
WO2022146342A2 (en) | Method for determining the origin of honey | |
HAMMED et al. | New and ModifiedStaining TechniquesforRapid Diagnosis of Hemoparasites in Blood Smears of Cows |