RU2714380C1 - Способ получения цитотоксических т-лимфоцитов, экспрессирующих химерные рецепторы - Google Patents

Способ получения цитотоксических т-лимфоцитов, экспрессирующих химерные рецепторы Download PDF

Info

Publication number
RU2714380C1
RU2714380C1 RU2018147202A RU2018147202A RU2714380C1 RU 2714380 C1 RU2714380 C1 RU 2714380C1 RU 2018147202 A RU2018147202 A RU 2018147202A RU 2018147202 A RU2018147202 A RU 2018147202A RU 2714380 C1 RU2714380 C1 RU 2714380C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
cell
cells
virus
lymphocytes
expression
Prior art date
Application number
RU2018147202A
Other languages
English (en)
Inventor
Степан Петрович Чумаков
Юлия Евгеньевна Кравченко
Дмитрий Сергеевич Кравченко
Елена Ивановна Фролова
Original Assignee
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской академии наук (ИБХ РАН)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное бюджетное учреждение науки институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской академии наук (ИБХ РАН) filed Critical Федеральное государственное бюджетное учреждение науки институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской академии наук (ИБХ РАН)
Priority to RU2018147202A priority Critical patent/RU2714380C1/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2714380C1 publication Critical patent/RU2714380C1/ru

Links

Images

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/67General methods for enhancing the expression
    • C12N15/69Increasing the copy number of the vector
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86Viral vectors
    • C12N15/867Retroviral vectors
    • C12N15/8673Special methods for packaging systems
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602Vertebrate cells
    • C12N5/0634Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0636T lymphocytes
    • C12N5/0638Cytotoxic T lymphocytes [CTL] or lymphokine activated killer cells [LAK]
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • C12N7/02Recovery or purification
    • C12N7/025Packaging cell lines, e.g. transcomplementing cell lines, for production of virus

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

Настоящее изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ получения цитотоксических Т-лимфоцитов, экспрессирующих химерный рецептор. Согласно представленному способу для трансдукции Т-лимфоцитов используют рекомбинантные лентивирусные частицы, псевдотипированные поверхностными гликопротеинами вакцинного штамма вируса кори, а наработку лентивирусных частиц осуществляют с помощью CD46-дефицитной линии-упаковщика, полученной с помощью экспрессионной конструкции для экспрессии фермента CRISPR/Cas9 и направляющей РНК (sgРНК), комплементарной участку одного из экзонов гена CD46. Преимущество способа обусловлено эффективностью наработки лентивирусных частиц за счет сведения к минимуму негативных эффектов формирования синцития и реабсорбции вируса клетками упаковывающей линии. 7 ил., 2 табл.

Description

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в иммунотерапевтических и исследовательских целях для эффективного получения генетически модифицированных цитотоксических Т-клеток, экспрессирующих химерные рецепторы к заданному антигену.
Псевдотипирование лентивирусных векторов - широко используемая в генной инженерии практика, позволяющая повысить тропизм вирусных частиц к специфическим антигенам и увеличить эффективность трансдукции отдельных типов клеток. Особую актуальность данный метод приобретает при введении генетических конструкций в лимфоциты, в силу неспособности лентивирусов инфицировать так называемые «спящие» Т-лимфоциты покоя, не имеющие антигенной специфичности. Псевдотипирование лентивирусных векторов путем замены гликопротеина Env на гетерологичные гликопротеины вируса кори позволяет обойти это ограничение и добиться эффективной трансдукции Т-клеток, независимо от фазы клеточного цикла.
Проникновение в клетку вакцинного штамма вируса кори опосредовано двумя поверхностными гликопротеинами: гемаглютинином Н, специфично взаимодействующим с рецепторами заражаемой клетки (SLAM, CD46 и проч.) и белком слияния F, обеспечивающим связывание оболочки вируса с плазматической мембраной. Присутствие CD46 и SLAM рецепторов на поверхности Т-лимфоцитов обеспечивает эффективность трансдукции клеток этого типа Н- и F-псевдотипированными лентивирусными частицами.
В настоящее время разработаны различные алгоритмы доставки генетических конструкций при помощи лентивирусных векторов, псевдотипированных гликопротеинами вируса кори, наиболее близким к заявленному изобретению по технической сущности и результатам, достигаемым аналогами, являются технические решения, описанные в заявках: WO 2000055335 A1, WO 2011085247 A2 и ЕР 2615176 А1.
Применение существующих на сегодняшний день методик сопряжено с рядом ограничений, обусловленных, главным образом, спецификой наработки вируса. Основная проблема возникает в силу того, что, то время как спектр экспрессии SLAM (CD150/SLAM) ограничен незрелыми тимоцитами, Т- и В-лимфоцитами, макрофагами и дендритными клетками, рецептор CD46 присутствует на поверхности всех ядерных клеток в организме человека. На практике это приводит к тому, что заражению вирусом оказываются подвержены эукариотические упаковывающие клетки, используемые в ходе лабораторных методик наработки лентивирусных вирионов, псевдотипированных гликопротеинами Н и F. После трансдукции клеток-упаковщиков белок F вируса кори, экспрессирующийся на цитоплазматической мембране зараженной клетки, опосредует ее слияние с окружающими клетками, в результате приводя к формированию синцития - многоядерного клеточного образования, препятствующего дальнейшей пролиферации клеток и приводящее к их гибели. Заражение рекомбинантным вирусом CD46-позитивных клеток упаковывающей линии также приводит к значительному снижению титра вируса в силу его повторной реабсорбции из культуральной среды клетками упаковывающей линии.
Альтернативным решением проблемы заражения клеток линии-упаковщика нарабатываемым вирусом является техническое решение, приведенное в заявке ЕР 2615176 А1 являющейся одним из ближайших аналогов изобретения и описывающей использование лентивирусного вектора, псевдотипированного F и Н белками парамиксовирусов. Указанная проблема решается за счет таргетного изменения аминокислотной последовательности Н белка, делающего невозможным его взаимодействие с соответствующими лигандами (CD46, SLAM, nectin4). Вместе с тем, методика, реализуемая данным аналогом, ограничивает дальнейшее применение нарабатываемого вируса, не позволяя использовать ее для решения задач, решаемых заявленным изобретением, в частности, для трансдукции CD46-позитивных лимфоцитов, являющихся ключевым инструментом иммунотерапии.
Известно техническое решение WO 2000055335 A1, раскрывающее способ получения псевдотипированных лентивирусных векторов, которые могут быть использованы для доставки целевых генов (в частности, генетических последовательностей, кодирующих структуру CAR) в клетки широкого спектра клеточных культур, предусматривают использование в качестве линии-упаковщика для наработки лентивирусных частиц, псевдотипированных гликопротеинами вируса кори, линий HEK293 (primary human embryonic kidney cells) и PMK (primary monkey kidney cells), не предполагая их генетической модификации с целью подавления экспрессии CD46.
Задачей, на решение которой было направлено заявленное изобретение, является создание эффективного метода наработки рекомбинантных лентивирусных частиц, псевдотипированных поверхностными гликопротеинами вакцинного штамма вируса кори, в ходе которого не происходило бы заражения рекомбинантным вирусом клеток упаковывающей линии.
Решением данной задачи является разработка методики получения цитотоксических Т-лимфоцитов, включающей этап создания клеточной линии упаковщика с нарушенной экспрессией рецептора CD46. Трансгенные CD46-дефицитные клетки не будут подвержены заражению лентивирусными частицами, псевдотипированными гетерологичными гликопротеинами вируса кори, что позволит добиться высокой эффективности получения рекомбинантного вируса, используемого для получения цитотоксических Т-лимфоцитов, экспрессирующих химерный рецептор.
Технической задачей изобретения является оптимизация процесса получения цитотоксических Т-лимфоцитов, имеющих потенциал использования в терапевтических и исследовательских целях, с помощью повышения эффективности наработки рекомбинантных лентивирусных частиц, за счет сведения к минимуму негативных эффектов формирования синцития и реабсорбции вируса клетками упаковывающей линии. Заявленное техническое решение характеризуется научной новизной, не имеет полных аналогов и обладает конкурентными преимуществами для получения цитотоксических Т-лимфоцитов, экспрессирующих химерные рецепторы.
Разработанная методика получения цитотоксических Т-лимфоцитов, включающая этап создания клеточной линии упаковщика с нарушенной экспрессией клеточного рецептора CD46
1. Получение CD46-дефицитной линии HEK293T.
a. Подбор in silico и последующий синтез (приобретение) короткой последовательности направляющей РНК (sgPHK), обладающей уникальным сродством к 5' экзонам CD46.
b. Клонирование подобранной короткой последовательности направляющей РНК в генетический вектор, кодирующий последовательность эндонуклеазы Cas9 и репортерный ген (tag GFP).
c. Оценка эффективности клонирования в ходе секвенирования по Сэнгеру.
d. Трансфекция клеток линии HEK293T полученной генетической конструкцией.
e. Анализ флуоресценции, отбор и экспансия RFP-позитивных клонов.
f. Оценка эффективности нокаута CD46 в ходе иммуноферментного анализа.
2. Получение лентивируса, псевдотипированного поверхностными гликопротеинами вакцинного штамма вируса кори.
g. Трансфекция CD46-дефицитной линии HEK293T генетическими конструкциями, кодирующими структуру Т-клеточного химерного рецептора и двумя упаковочными плазмидами, несущими гены гликопротеинов F и Н.
h. Наработка и выделение вируса
i. Определение титра вируса
3. Трансдукция Т-клеток наработанным рекомбинантным лентивирусом, псевдотипированным поверхностными гликопротеинами вакцинного штамма вируса кори.
Осуществление изобретения
I. Получение CD46-дефицитной линии HEK293T
Первым этапом достижения технического результата стало создание экспрессионной конструкции для экспрессии фермента CRISPR/Cas9 и направляющей РНК (sgРНК), комплементарной участку экзона-1 гена CD46 для эффективного подавления экспрессии рецептора CD46 (Фиг. 1, 2).
Подобранная последовательность направляющей РНК была клонирована в вектор pCas-Guide-PVR1-P2A-tagRFP под контроль промотора U6 (Фиг. 3).
Анализ нуклеотидной последовательности полученной генетической конструкции анализировали методом секвенирования по Сэнгеру, доказавшим успешность проведенного клонирования.
Полученной генетической конструкцией были трансфицированы клетки линии HEK293T. Изоляция и экспансия успешно трансфицированных клонов была проведена на основе уровня флуоресценции репортерного гена tagRFP, входящего в состав вектора pCas-Guide-PVR1-P2A-tagRFP.
II. Получение лентивирусных частиц, псевдотипированных поверхностными гликопротеинами вакцинного штамма вируса кори
Клетки CD46-дефицитной линии HEK293T были котрансфецированы тремя плазмидами: генетической конструкцией, кодирующей структуру Т-клеточного химерного рецептора (Фиг. 4) и двумя упаковочными плазмидами, несущими гены гликопротеинов F и Н (Фиг. 5 и 6, соответственно).
Ростовую среду с трансфицированных клеток, содержащую рекомбинантные вирионы, собирали через 36 часов, фильтровали через 0.44 мкм стерильные фильтры (Millipore) и использовали для трансдукции Т-лимфоцитов.
III. Трансдукция Т-клеток наработанным рекомбинантным лентивирусом
Заражение Т-лимфоцитов проводили из расчета 10 вирусных частиц на 1 клетку. Процесс заражения проводили в течение 8 часов, в бессывороточной питательной среде AIM-V, после чего клетки осаждали центрифугированием и рассаживали на свежую порцию питательной среды AIM-V. В результате работ получали популяцию цитотоксических Т-лимфоцитов, экспрессирующих химерный рецептор.
Анализ эффективности разработанной методики получения цитотоксических Т-лимфоцитов
Конкурентное преимущество предложенной методики базируется на возможности получения высокого титра рекомбинантного вируса, нарабатываемого в CD46-дефицитной линии HEK293T. Соответственно, анализ эффективности изобретения включал в себя оценку нокаута CD46 в HEK293T и последующий расчет титра вируса, нарабатываемого трансгенными клетками этой линии в сравнении с CD46-позитивной линией HEK293T, используемой в качестве упаковщика ближайшими аналогами заявленной разработки.
Эффективность нокаута CD46 была подтверждена в ходе иммуноферментного анализа (Фиг. 7).
Определение титра вирусных частиц проводили методом предельных разведений с последующим анализом количества зараженных клеток в ходе проточной цитометрии. Последовательность работ включала наработку препаратов рекомбинантного лентивируса, псевдотипированного гетерологичными гликопротеинами вируса кори в CD46 (-) и исходной CD46 (+) линиях HEK293T, и дальнейшее заражение различными разведениями сопоставляемых препаратов модельной культуры клеток. Через 48 часов после заражения, осуществляли цитометрический анализ клеточных культур. Расчет титра вируса проводился с использованием следующей формулы: титр={(F × Cn) /V} × DF, где F - количество флуоресцирующих клеток, Cn - общее количество клеток, V - объем добавленного препарата, DF - фактор разведения вируса.
Результаты определения титра вирусных частиц, полученных при наработке вируса в клетках в CD46-дефицитной линии HEK293T, представлены в табл.1, соответствующие результаты для исходной линии HEK293T обобщены в табл. 2.
На основе представленных данных был рассчитан титр вируса, составивший:
- 2×108 вирусных частиц/мл для CD46-дефицитной линии HEK293T и
- 2,8×107 вирусных частиц/мл для исходной линии HEK293T.
Значительный прирост титра наработанного вируса в случае использовании CD46-дефицитной линии HEK293T подтверждает конкурентное преимущество разработанной методики и позволяют рекомендовать ее для эффективного получения цитотоксических Т-лимфоцитов.
Изобретение иллюстрировано следующим графическим материалом:
Фиг. 1 - Нуклеотидная последовательность CD46-специфичной направляющей РНК
Фиг. 2 - Схема участка экзона-1 гена CD46, комплементарного подобранной направляющей РНК
Фиг. 3 - Схематичное изображение вектора pCas-Guide-PVR1-P2A-tagRFP
Фиг. 4 - Схематичное изображение генетической конструкции, кодирующей структуру
Т-клеточного химерного рецептора на основе одноцепочечных VHH-антител, специфичных к опухолевому рецептору CD47
Фиг. 5 - Схематическое изображение генетической конструкции pMD2-Fd30
Фиг. 6 - Схематическое изображение генетической конструкции pCD-4AHcd24
Фиг. 7 - Результаты иммуноферментного анализа эффективности нокаута CD46 в клетках линии HEK293T
Табл. 1 - Результаты определения титра вирусных частиц, полученные при наработке вируса в клетках в CD46-дефицитной линии HEK293T
Табл. 2 - Результаты определения титра вирусных частиц, полученные при наработке вируса в клетках в CD46-позитивной линии HEK293T
Figure 00000001
Figure 00000002

Claims (4)

  1. Способ получения цитотоксических Т-лимфоцитов, экспрессирующих химерный рецептор, включающий стадии, на которых:
  2. 1) получают клеточную линию-упаковщик HEK293T с подавленной экспрессией клеточного рецептора CD46 путем введения экспрессионной конструкции для экспрессии фермента CRISP/Cas9 и направляющей РНК (sgРНК), комплементарной участку одного из экзонов гена CD46;
  3. 2) трансфицируют клеточную линию-упаковщик с подавленной экспрессией CD46, полученную на стадии (1), лентивирусной генетической конструкцией, кодирующей Т-клеточный химерный рецептор, и двумя упаковочными плазмидами, несущими гены гликопротеинов F и Н вируса кори, нарабатывают и выделяют рекомбинантный лентивирус;
  4. 3) трансдуцируют цитотоксические Т-лимфоциты наработанным рекомбинантным лентивирусом, полученным на стадии (2).
RU2018147202A 2018-12-28 2018-12-28 Способ получения цитотоксических т-лимфоцитов, экспрессирующих химерные рецепторы RU2714380C1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2018147202A RU2714380C1 (ru) 2018-12-28 2018-12-28 Способ получения цитотоксических т-лимфоцитов, экспрессирующих химерные рецепторы

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2018147202A RU2714380C1 (ru) 2018-12-28 2018-12-28 Способ получения цитотоксических т-лимфоцитов, экспрессирующих химерные рецепторы

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2714380C1 true RU2714380C1 (ru) 2020-02-14

Family

ID=69625889

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2018147202A RU2714380C1 (ru) 2018-12-28 2018-12-28 Способ получения цитотоксических т-лимфоцитов, экспрессирующих химерные рецепторы

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2714380C1 (ru)

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2008037458A2 (en) * 2006-09-27 2008-04-03 Bundesrepublik Deutschland, Letztvertreten Durch Den Präsidenten Des Paul-Ehrlich-Instituts Pseudotyping of retroviral vectors, methods for production and use thereof for targeted gene transfer and high throughput screening
WO2011085247A2 (en) * 2010-01-08 2011-07-14 Immusoft Corporation Vectors and methods for transducing b cells
EP2615176A1 (en) * 2012-01-11 2013-07-17 Paul-Ehrlich-Institut Bundesamt für Sera und Impfstoffe Novel pseudotyped lentiviral particles and their use in the in vitro targeted transduction of undifferentiated pluripotent human embryonic stem cells and induced pluripotent stem cells
RU2662932C2 (ru) * 2013-03-14 2018-07-31 Карибо Биосайенсиз, Инк. Композиции и способы с участием нуклеиновых кислот, нацеленных на нуклеиновые кислоты

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2008037458A2 (en) * 2006-09-27 2008-04-03 Bundesrepublik Deutschland, Letztvertreten Durch Den Präsidenten Des Paul-Ehrlich-Instituts Pseudotyping of retroviral vectors, methods for production and use thereof for targeted gene transfer and high throughput screening
WO2011085247A2 (en) * 2010-01-08 2011-07-14 Immusoft Corporation Vectors and methods for transducing b cells
EP2615176A1 (en) * 2012-01-11 2013-07-17 Paul-Ehrlich-Institut Bundesamt für Sera und Impfstoffe Novel pseudotyped lentiviral particles and their use in the in vitro targeted transduction of undifferentiated pluripotent human embryonic stem cells and induced pluripotent stem cells
RU2662932C2 (ru) * 2013-03-14 2018-07-31 Карибо Биосайенсиз, Инк. Композиции и способы с участием нуклеиновых кислот, нацеленных на нуклеиновые кислоты

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
FRECHA, Cecilia, et al. "Measles virus glycoprotein-pseudotyped lentiviral vector-mediated gene transfer into quiescent lymphocytes requires binding to both SLAM and CD46 entry receptors." Journal of virology, 2011, 85(12): 5975-5985. *
FRECHA, Cecilia, et al. "Measles virus glycoprotein-pseudotyped lentiviral vector-mediated gene transfer into quiescent lymphocytes requires binding to both SLAM and CD46 entry receptors." Journal of virology, 2011, 85(12): 5975-5985. THIELEN, Astrid JF, et al. "CRISPR/Cas9 generated human CD46, CD55 and CD59 knockout cell lines as a tool for complement research." Journal of immunological methods 2018 (Available online 12 February 2018), 456:15-22. *
THIELEN, Astrid JF, et al. "CRISPR/Cas9 generated human CD46, CD55 and CD59 knockout cell lines as a tool for complement research." Journal of immunological methods 2018 (Available online 12 February 2018), 456:15-22. *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Carnero et al. Optimization of human immunodeficiency virus gag expression by newcastle disease virus vectors for the induction of potent immune responses
JP7105875B2 (ja) レトロウイルスベクター
Grasso et al. Successful therapeutic vaccination with integrase defective lentiviral vector expressing nononcogenic human papillomavirus E7 protein
US20190300902A1 (en) Stable pseudotyped lentiviral particles and uses thereof
Publicover et al. Characterization of nonpathogenic, live, viral vaccine vectors inducing potent cellular immune responses
JP2024503027A (ja) Cd8標的ウイルスベクターの使用方法
Negri et al. Simian immunodeficiency virus-Vpx for improving integrase defective lentiviral vector-based vaccines
WO2021046143A1 (en) Cd24-associated particles and related methods and uses thereof
RU2714380C1 (ru) Способ получения цитотоксических т-лимфоцитов, экспрессирующих химерные рецепторы
CN113652452A (zh) 靶向卵巢癌细胞特异性高表达蛋白b7-h3的car载体及其构建方法和应用
CN113604507A (zh) 靶向胃癌细胞特异性高表达蛋白msln的car载体及其构建方法和应用
WO2000015819A1 (en) Packaging cell lines for hiv-derived retroviral vector particles
TW202140779A (zh) 唾液酸酶至癌細胞、免疫細胞及腫瘤微環境之輸送
Buffa et al. A single administration of lentiviral vectors expressing either full-length human immunodeficiency virus 1 (HIV-1) HXB2 Rev/Env or codon-optimized HIV-1JR-FL gp120 generates durable immune responses in mice
Zhang et al. Pseudotyping lentiviral vectors with lymphocytic choriomeningitis virus glycoproteins for transduction of dendritic cells and in vivo immunization
WO2023115039A2 (en) Modified paramyxoviridae fusion glycoproteins
JP2022170641A (ja) レンチウイルスパッケージングシステム、それにより製造されたレンチウイルス、及び、該レンチウイルスで形質導入された細胞、並びに、それを使用して宿主細胞のレンチウイルスの収率を向上させる方法
Ponniah et al. Selective response of gamma delta T-cell hybridomas to orthomyxovirus-infected cells
MX2014002953A (es) Genomas lentivirales quimericos no integrativos como vacunas innovadoras contra el virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 (vih-1).
Mühlebach et al. Development of Entry-Targeted Oncolytic Measles Viruses
JP5778147B2 (ja) 遺伝子導入方法
Makarova et al. Antibody responses against xenotropic murine leukemia virus-related virus envelope in a murine model
Bao et al. High-titer lentiviral vectors stimulate fetal calf serum-specific human CD4 T-cell responses: implications in human gene therapy
Yu et al. Comparison of the expression and immunogenicity of wild-type and sequence-modified HIV-1 gag genes in a recombinant Sendai virus vector
WO2022147481A1 (en) Combination therapy of an oncolytic virus delivering a foreign antigen and an engineered immune cell expressing a chimeric receptor targeting the foreign antigen

Legal Events

Date Code Title Description
QB4A Licence on use of patent

Free format text: LICENCE FORMERLY AGREED ON 20210628

Effective date: 20210628