RU2710964C1 - Pregnane steroids having cytotoxic activity, and methods for preparing them - Google Patents

Pregnane steroids having cytotoxic activity, and methods for preparing them Download PDF

Info

Publication number
RU2710964C1
RU2710964C1 RU2019121480A RU2019121480A RU2710964C1 RU 2710964 C1 RU2710964 C1 RU 2710964C1 RU 2019121480 A RU2019121480 A RU 2019121480A RU 2019121480 A RU2019121480 A RU 2019121480A RU 2710964 C1 RU2710964 C1 RU 2710964C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
methoxycarbonyl
phenylpyrrolidin
acryloyl
carbonyl
acetoxy
Prior art date
Application number
RU2019121480A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Константин Викторович Кудрявцев
Михаил Николаевич Соколов
Елена Дмитриевна Свешникова
Татьяна Александровна Федотчева
Николай Львович Шимановский
Original Assignee
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО РНИМУ им. Н.И. Пирогова Минздрава России)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО РНИМУ им. Н.И. Пирогова Минздрава России) filed Critical Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО РНИМУ им. Н.И. Пирогова Минздрава России)
Priority to RU2019121480A priority Critical patent/RU2710964C1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2710964C1 publication Critical patent/RU2710964C1/en

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/57—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms, e.g. pregnane or progesterone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J43/00—Normal steroids having a nitrogen-containing hetero ring spiro-condensed or not condensed with the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton
    • C07J43/003—Normal steroids having a nitrogen-containing hetero ring spiro-condensed or not condensed with the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton not condensed
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J7/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms
    • C07J7/0005—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms not substituted in position 21
    • C07J7/001—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms not substituted in position 21 substituted in position 20 by a keto group
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J75/00—Processes for the preparation of steroids in general

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

FIELD: chemistry.SUBSTANCE: invention relates to an agent possessing cytotoxic activity of general formula (1), in which R is selected from the following group of 1-benzylpyrrolidin-3-yl; 2-methoxycarbonyl-5-phenylpyrrolidin-4-yl; 2-methoxycarbonyl-5-(2-(trifluoromethyl)phenyl)pyrrolidin-4-yl; 2-methoxycarbonyl-5-(2-bromophenyl)pyrrolidin-4-yl; 1-acryloyl-2-methoxycarbonyl-5-phenylpyrrolidin-4-yl; 1-(5-(methoxycarbonyl)-2-phenylpyrrolidine-3-carbonyl)-2-methoxycarbonyl-5-phenylpyrrolidin-4-yl; 1-(1-acryloyl-5-(methoxycarbonyl)-2-phenylpyrrolidine-3-carbonyl)-2-methoxycarbonyl-5-phenylpyrrolidin-4-yl; vinyl. Invention also relates to methods for preparing the agent.EFFECT: obtaining novel agents possessing cytotoxic activity in relation to malignant tumor cell lines – cells of human cervical cancer HeLa.7 cl, 1 tbl, 10 ex

Description

Группа изобретений относится к медицинской и органической химии и медицине, в частности к производным 17-ацетата мепрегенола.The group of inventions relates to medical and organic chemistry and medicine, in particular to derivatives of 17-acetate mepregenol.

Предлагаемые соединения обладают цитотоксической активностью, что позволяет использовать их в противоопухолевой терапии.The proposed compounds have cytotoxic activity, which allows them to be used in antitumor therapy.

Аналогами патентуемых соединений по структуре и биологической активности являются сложные эфиры 17-ацетата мепрегенола (далее АМП-17) [Зейналов О.А., Андрюшина В.А., Скрябин К.Г. Новые высокоактивные гестагены прегнанового ряда // Рос. хим. ж. (Ж. Рос. хим. об-ва им. Д.И. Менделеева). - 2005. - Т. XLIX. - №1. - С. 118-124.], которые требуют увеличения целевой активности и селективности для противораковой терапии.The analogues of patented compounds in structure and biological activity are esters of mepregenol 17-acetate (hereinafter AMP-17) [Zeynalov OA, Andryushina VA, Skryabin K.G. New highly active gestagens of the pregnane series // Ros. Chem. g. (J. Ros. Chemical. About. Va. D.I. Mendeleev). - 2005. - T. XLIX. - No. 1. - S. 118-124.], Which require an increase in target activity and selectivity for anticancer therapy.

Прототипом предлагаемых соединений является 17α-ацетокси-3β-бутаноилокси-6-метилпрегна-4,6-диен-20-он (далее бутират АМП-17), обладающий высокой гестагенной и противоопухолевой активностями с возможностью перорального применения [Зейналов О.А., Андрюшина В.А., Скрябин К.Г. Новые высокоактивные гестагены прегнанового ряда // Рос. хим. ж. (Ж. Рос. хим. об-ва им. Д.И. Менделеева). - 2005. - Т. XLIX. - №1. - С. 118-124].The prototype of the proposed compounds is 17α-acetoxy-3β-butanoyloxy-6-methylpregna-4,6-dien-20-one (hereinafter AMP-17 butyrate), which has high progestational and antitumor activities with the possibility of oral administration [Zeynalov O.A., Andryushina V.A., Scriabin K.G. New highly active gestagens of the pregnane series // Ros. Chem. g. (J. Ros. Chemical. About. Va. D.I. Mendeleev). - 2005. - T. XLIX. - No. 1. - S. 118-124].

Однако бутират АМП-17 требует улучшения параметров эффективной концентрации, расширения терапевтических показаний применения.However, AMP-17 butyrate requires improving the parameters of effective concentration, expanding the therapeutic indications of use.

Известно несколько способов получения бутирата АМП-17 [RU 2099347 С1, Биореактор, 20.12.1997; RU 2091388 С1, Андрюшина и др., 27.09.1997; RU 2091019 С1, Андрюшина и др., 27.09.1997; RU 2292209 С2, Центр Химии Лекарственных Средств и др., 27.01.2007; RU 2653507 С1, ФГБОУ ВО РНИМУ им. Н.И. Пирогова Минздрава России, 10.05.2018 (прототип)].There are several methods for producing butyrate AMP-17 [RU 2099347 C1, Bioreactor, 12.20.1997; RU 2091388 C1, Andryushina et al., September 27, 1997; RU 2091019 C1, Andryushina et al., September 27, 1997; RU 2292209 C2, Center for Chemistry of Medicinal Products, etc., 01/27/2007; RU 2653507 C1, FSBEI IN RNIMU them. N.I. Pirogova of the Ministry of Health of Russia, 05/10/2018 (prototype)].

Однако ранее известные методы синтеза, в том числе и способ-прототип, требуют применения спиртовых растворителей, кислой среды и охлаждения, что не позволяет считать известные технологические процессы соответствующими критериям «зеленой химии».However, the previously known synthesis methods, including the prototype method, require the use of alcohol solvents, an acidic environment and cooling, which does not allow us to consider the known technological processes as meeting the criteria of "green chemistry".

Техническая проблема состоит в получении новых модифицированных прегнановых гестагенов, содержащих пирролидиновый(ые) фрагмент(ы) и обладающих высокой цитотоксической активностью по отношению к злокачественным опухолевым клеточным линиям - клеткам рака шейки матки человека HeLa (нативным и эстрадиол-стимулированным); а также способы их получения.The technical problem is to obtain new modified pregnan progestogens containing pyrrolidine fragment (s) and having high cytotoxic activity against malignant tumor cell lines - human cervical cancer cells HeLa (native and estradiol-stimulated); as well as methods for their preparation.

Технический результат, достигаемый при осуществлении заявляемой группы изобретений, заключается в расширении арсенала средств, обладающих противоопухолевой (цитотоксической активностью), а также в обеспечении соответствия критериям «зеленой химии» технологии их получения за счет исключения применения спиртовых растворителей, кислой среды и охлаждения.The technical result achieved by the implementation of the claimed group of inventions is to expand the arsenal of agents with antitumor (cytotoxic activity), as well as to ensure compliance with the criteria of "green chemistry" technology for their production by eliminating the use of alcohol solvents, acidic environment and cooling.

Сущность изобретения заключается в следующем.The invention consists in the following.

Предлагается средство, обладающее цитотоксической активностью, общей формулы:A tool having cytotoxic activity of the general formula:

Figure 00000001
Figure 00000001

где R выбран из следующей группы 1-бензилпирролидин-3-ил; 2-метоксикарбонил-5-фенилпирролидин-4-ил; 2-метоксикарбонил-5-(2-(трифторметил)фенил)пирролидин-4-ил; 2-метоксикарбонил-5-(2-бромфенил)пирролидин-4-ил; 1-акрилоил-2-метоксикарбонил-5-фенилпирролидин-4-ил; 1-(5-(метоксикарбонил)-2-фенилпирролидин-3-карбонил)-2-метоксикарбонил-5-фенилпирролидин-4-ил; 1-(1-акрилоил-5-(метоксикарбонил)-2-фенилпирролидин-3-карбонил)-2-метоксикарбонил-5-фенилпирролидин-4-ил; винил.where R is selected from the following group 1-benzylpyrrolidin-3-yl; 2-methoxycarbonyl-5-phenylpyrrolidin-4-yl; 2-methoxycarbonyl-5- (2- (trifluoromethyl) phenyl) pyrrolidin-4-yl; 2-methoxycarbonyl-5- (2-bromophenyl) pyrrolidin-4-yl; 1-acryloyl-2-methoxycarbonyl-5-phenylpyrrolidin-4-yl; 1- (5- (methoxycarbonyl) -2-phenylpyrrolidin-3-carbonyl) -2-methoxycarbonyl-5-phenylpyrrolidin-4-yl; 1- (1-acryloyl-5- (methoxycarbonyl) -2-phenylpyrrolidin-3-carbonyl) -2-methoxycarbonyl-5-phenylpyrrolidin-4-yl; vinyl.

Предлагается также способ получения указанного выше средства, где R соответствует винил; 1-акрилоил-2-метоксикарбонил-5-фенилпирролидин-4-ил; 1-(1-акрилоил-5-(метоксикарбонил)-2-фенилпирролидин-3-карбонил)-2-метоксикарбонил-5-фенилпирролидин-4-ил, в котором проводят ацилирование 17-ацетата мепрегенола, либо 4-((8R,10R,13S,14S,17R)-17-ацетокси-17-ацетил-6,10,13-триметил-2,3,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-додекагидро-1Н-циклопента[а]фенантрен-3-ил)-2-метил-5-фенилпирролидин-2,4-дикарбоксилата, либо 4-((8R,10R,13S,14S,17R)-17-ацетокси-17-ацетил-6,10,13-триметил-2,3,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-додекагидро-1Н-циклопента[а]фенантрен-3-ил)-2-метил-1-(5-(метоксикарбонил)-2-фенилпирролидин-3-карбонил)-5-фенилпирролидин-2,4-дикарбоксилата акрилоилхлоридом в присутствии третичного амина.Also provided is a method of obtaining the above funds, where R corresponds to vinyl; 1-acryloyl-2-methoxycarbonyl-5-phenylpyrrolidin-4-yl; 1- (1-acryloyl-5- (methoxycarbonyl) -2-phenylpyrrolidin-3-carbonyl) -2-methoxycarbonyl-5-phenylpyrrolidin-4-yl, in which acylation of mepregenol 17-acetate is performed, or 4 - ((8R, 10R, 13S, 14S, 17R) -17-acetoxy-17-acetyl-6,10,13-trimethyl-2,3,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodecahydro -1H-cyclopenta [a] phenanthren-3-yl) -2-methyl-5-phenylpyrrolidin-2,4-dicarboxylate, or 4 - ((8R, 10R, 13S, 14S, 17R) -17-acetoxy-17- acetyl-6,10,13-trimethyl-2,3,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodecahydro-1H-cyclopenta [a] phenanthren-3-yl) -2 -methyl-1- (5- (methoxycarbonyl) -2-phenylpyrrolidine-3-carbonyl) -5-phenylpyrrolidine-2,4-dicarboxylate with acryloyl chloride in the presence of and tertiary amine.

При этом в качестве третичного амина может быть использован триэтиламин.Moreover, triethylamine can be used as a tertiary amine.

Предлагается также способ получения патентуемого средства, в котором 17-ацетат мепрегенола получают восстановлением ацетата мегестрола при комнатной температуре борогидридом натрия в тетрагидрофуране в нейтральной среде.A method for preparing a patented agent is also provided in which meprenolol 17-acetate is obtained by reducing megestrol acetate at room temperature with sodium borohydride in tetrahydrofuran in a neutral medium.

Предлагается способ получения патентуемого средства, где R соответствует 1-бензилпирролидин-3-ил, в котором проводят взаимодействие 17α-ацетокси-3β-акрилоилокси-6-метилпрегна-4,6-диен-20-она с N-метоксиметил-N-(триметилсилилметил)бензиламином в присутствии трифторуксусной кислоты.A method for the preparation of a patented agent is proposed, wherein R corresponds to 1-benzylpyrrolidin-3-yl, in which 17α-acetoxy-3β-acryloyloxy-6-methyl-pregna-4,6-dien-20-one is reacted with N-methoxymethyl-N- ( trimethylsilylmethyl) benzylamine in the presence of trifluoroacetic acid.

Предлагается способ получения патентуемого средства, где R соответствует 2-метоксикарбонил-5-фенилпирролидин-4-ил; 2-метоксикарбонил-5-(2-(трифторметил)фенил)пирролидин-4-ил; 2-метоксикарбонил-5-(2-бромфенил)пирролидин-4-ил; 1-(5-(метоксикарбонил)-2-фенилпирролидин-3-карбонил)-2-метоксикарбонил-5-фенилпирролидин-4-ил, в котором осуществляют взаимодействие 17α-ацетокси-3β-акрилоилокси-6-метилпрегна-4,6-диен-20-она либо 4-((8R,10R,13S,14S,17R)-17-ацетокси-17-ацетил-6,10,13-триметил-2,3,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-додекагидро-1Н-циклопента[а]фенантрен-3-ил)-2-метил-1-акрилоил-5-фенилпирролидин-2,4-дикарбоксилата с замещенными метил-2-(бензилиденамино)ацетатами в присутствии кислоты Льюиса и третичного амина.A method for preparing a patented agent is provided, wherein R corresponds to 2-methoxycarbonyl-5-phenylpyrrolidin-4-yl; 2-methoxycarbonyl-5- (2- (trifluoromethyl) phenyl) pyrrolidin-4-yl; 2-methoxycarbonyl-5- (2-bromophenyl) pyrrolidin-4-yl; 1- (5- (methoxycarbonyl) -2-phenylpyrrolidin-3-carbonyl) -2-methoxycarbonyl-5-phenylpyrrolidin-4-yl in which 17α-acetoxy-3β-acryloyloxy-6-methylpregna-4,6- is reacted dien-20-one or 4 - ((8R, 10R, 13S, 14S, 17R) -17-acetoxy-17-acetyl-6,10,13-trimethyl-2,3,8,9,10,11,12 , 13,14,15,16,17-dodecahydro-1H-cyclopenta [a] phenanthren-3-yl) -2-methyl-1-acryloyl-5-phenylpyrrolidin-2,4-dicarboxylate with substituted methyl 2- ( benzylidenamino) acetates in the presence of a Lewis acid and tertiary amine.

При этом в качестве кислоты Льюиса может быть использован ацетат серебра(I), а в качестве третичного амина - триэтиламин.In this case, silver (I) acetate can be used as the Lewis acid, and triethylamine as the tertiary amine.

Таким образом, разработан новый метод синтеза АМП-17, отличающийся тем, что восстановление ацетата мегестрола проводят при комнатной температуре борогидридом натрия в тетрагидрофуране в нейтральной среде.Thus, a new synthesis method for AMP-17 has been developed, characterized in that the reduction of megestrol acetate is carried out at room temperature with sodium borohydride in tetrahydrofuran in a neutral medium.

Получены новые производные АМП-17, содержащие модифицированную гидроксильную группу в 3-ем положении прегнанового каркаса, общей формулы:Received new derivatives of AMP-17 containing a modified hydroxyl group in the 3rd position of the pregnane framework, of the General formula:

Figure 00000002
Figure 00000002

где R выбран из следующей группы 1-бензилпирролидин-3-ил; 2-метоксикарбонил-5-фенилпирролидин-4-ил; 2-метоксикарбонил-5-(2-(трифторметил)фенил)пирролидин-4-ил; 2-метоксикарбонил-5-(2-бромфенил)пирролидин-4-ил; 1-акрилоил-2-метоксикарбонил-5-фенилпирролидин-4-ил; 1-(5-(метоксикарбонил)-2-фенилпирролидин-3-карбонил)-2-метоксикарбонил-5-фенилпирролидин-4-ил; 1-(1-акрилоил-5-(метоксикарбонил)-2-фенилпирролидин-3-карбонил)-2-метоксикарбонил-5-фенилпирролидин-4-ил; винил.where R is selected from the following group 1-benzylpyrrolidin-3-yl; 2-methoxycarbonyl-5-phenylpyrrolidin-4-yl; 2-methoxycarbonyl-5- (2- (trifluoromethyl) phenyl) pyrrolidin-4-yl; 2-methoxycarbonyl-5- (2-bromophenyl) pyrrolidin-4-yl; 1-acryloyl-2-methoxycarbonyl-5-phenylpyrrolidin-4-yl; 1- (5- (methoxycarbonyl) -2-phenylpyrrolidin-3-carbonyl) -2-methoxycarbonyl-5-phenylpyrrolidin-4-yl; 1- (1-acryloyl-5- (methoxycarbonyl) -2-phenylpyrrolidin-3-carbonyl) -2-methoxycarbonyl-5-phenylpyrrolidin-4-yl; vinyl.

Соединения обладают цитотоксической активностью, что позволяет использовать их в противоопухолевой терапии.The compounds have cytotoxic activity, which allows them to be used in antitumor therapy.

Предлагаемое изобретение представлено химической структурой новых соединений класса прегнановых стероидов, содержащих модифицированную гидроксильную группу в 3-ем положении прегнанового каркаса, общей формулы:The present invention is represented by the chemical structure of new compounds of the class of pregnane steroids containing a modified hydroxyl group in the 3rd position of the pregnane framework, of the general formula:

Figure 00000003
Figure 00000003

где R выбран из следующей группы 1-бензилпирролидин-3-ил; 2-метоксикарбонил-5-фенилпирролидин-4-ил; 2-метоксикарбонил-5-(2-(трифторметил)фенил)пирролидин-4-ил; 2-метоксикарбонил-5-(2-бромфенил)пирролидин-4-ил; 1-акрилоил-2-метоксикарбонил-5-фенилпирролидин-4-ил; 1-(5-(метоксикарбонил)-2-фенилпирролидин-3-карбонил)-2-метоксикарбонил-5-фенилпирролидин-4-ил; 1-(1-акрилоил-5-(метоксикарбонил)-2-фенилпирролидин-3-карбонил)-2-метоксикарбонил-5-фенилпирролидин-4-ил; винил, обладающих цитотоксической активностью.where R is selected from the following group 1-benzylpyrrolidin-3-yl; 2-methoxycarbonyl-5-phenylpyrrolidin-4-yl; 2-methoxycarbonyl-5- (2- (trifluoromethyl) phenyl) pyrrolidin-4-yl; 2-methoxycarbonyl-5- (2-bromophenyl) pyrrolidin-4-yl; 1-acryloyl-2-methoxycarbonyl-5-phenylpyrrolidin-4-yl; 1- (5- (methoxycarbonyl) -2-phenylpyrrolidin-3-carbonyl) -2-methoxycarbonyl-5-phenylpyrrolidin-4-yl; 1- (1-acryloyl-5- (methoxycarbonyl) -2-phenylpyrrolidin-3-carbonyl) -2-methoxycarbonyl-5-phenylpyrrolidin-4-yl; vinyl with cytotoxic activity.

Заявляемые соединения представляют собой бесцветные или слабоокрашенные кристаллические вещества, хорошо растворимые в хлористом метилене, хлороформе, тетрагидрофуране, спирте, диметилсульфоксиде. Структура и индивидуальность заявляемых соединений подтверждены элементным анализом, рентгеноструктурным анализом, данными ЯМР 1Н, ЯМР 13С, тонкослойной хроматографией.The inventive compounds are colorless or slightly colored crystalline substances, readily soluble in methylene chloride, chloroform, tetrahydrofuran, alcohol, dimethyl sulfoxide. The structure and personality of the claimed compounds are confirmed by elemental analysis, x-ray diffraction analysis, 1 H NMR, 13 C NMR, thin-layer chromatography.

Предложен также способ получения ранее неизвестных производных АМП-17, содержащих модифицированную фрагментом замещенной 3-пирролидинкарбоновой кислоты гидроксильную группу в 3-ем положении прегнанового каркаса, общей формулы:A method for producing previously unknown AMP-17 derivatives containing a hydroxyl group modified with a substituted 3-pyrrolidinecarboxylic acid fragment in the 3rd position of the pregnane framework, of the general formula:

Figure 00000004
Figure 00000004

где R выбран из следующей группы 1-бензилпирролидин-3-ил; 2-метоксикарбонил-5-фенилпирролидин-4-ил; 2-метоксикарбонил-5-(2-(трифторметил)фенил)пирролидин-4-ил; 2-метоксикарбонил-5-(2-бромфенил)пирролидин-4-ил, при котором раствор полученного из АМП-17 17α-ацетокси-3β-акрилоилокси-6-метилпрегна-4,6-диен-20-она:where R is selected from the following group 1-benzylpyrrolidin-3-yl; 2-methoxycarbonyl-5-phenylpyrrolidin-4-yl; 2-methoxycarbonyl-5- (2- (trifluoromethyl) phenyl) pyrrolidin-4-yl; 2-methoxycarbonyl-5- (2-bromophenyl) pyrrolidin-4-yl, in which the solution obtained from AMP-17 17α-acetoxy-3β-acryloyloxy-6-methylpregn-4,6-dien-20-one:

Figure 00000005
Figure 00000005

обрабатывают предшественником азометинового илида, последующая генерация которого приводит к целевым соединениям.treated with a precursor of azomethine ylide, the subsequent generation of which leads to the target compounds.

Предложен способ получения ранее неизвестных производных АМП-17, содержащих модифицированную гидроксильную группу в 3-ем положении прегнанового каркаса, общей формулы:A method for producing previously unknown derivatives of AMP-17 containing a modified hydroxyl group in the 3rd position of the pregnane framework, of the general formula:

Figure 00000006
Figure 00000006

где R выбран из следующей группы винил; 1-акрилоил-2-метоксикарбонил-5-фенилпирролидин-4-ил; 1-(1-акрилоил-5-(метоксикарбонил)-2-фенилпирролидин-3-карбонил)-2-метоксикарбонил-5-фенилпирролидин-4-ил, при котором 17-ацетат мепрегенола, либо 4-((8R,10R,13S,14S,17R)-17-ацетокси-17-ацетил-6,10,13-триметил-2,3,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-додекагидро-1Н-циклопента[а]фенантрен-3-ил)-2-метил-5-фенилпирролидин-2,4-дикарбоксилата, либо 4-((8R,10R,13S,14S,17R)-17-ацетокси-17-ацетил-6,10,13-триметил-2,3,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-додекагидро-1Н-циклопента[а]фенантрен-3-ил)-2-метил-1-(5-(метоксикарбонил)-2-фенилпирролидин-3-карбонил)-5-фенилпирролидин-2,4-дикарбоксилата обрабатывают акрилоилхлоридом.where R is selected from the following group of vinyl; 1-acryloyl-2-methoxycarbonyl-5-phenylpyrrolidin-4-yl; 1- (1-acryloyl-5- (methoxycarbonyl) -2-phenylpyrrolidin-3-carbonyl) -2-methoxycarbonyl-5-phenylpyrrolidin-4-yl, in which 17-mepregenol acetate, or 4 - ((8R, 10R, 13S, 14S, 17R) -17-acetoxy-17-acetyl-6,10,13-trimethyl-2,3,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodecahydro-1H -cyclopenta [a] phenanthren-3-yl) -2-methyl-5-phenylpyrrolidin-2,4-dicarboxylate, or 4 - ((8R, 10R, 13S, 14S, 17R) -17-acetoxy-17-acetyl- 6,10,13-trimethyl-2,3,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodecahydro-1H-cyclopenta [a] phenanthren-3-yl) -2-methyl -1- (5- (methoxycarbonyl) -2-phenylpyrrolidine-3-carbonyl) -5-phenylpyrrolidine-2,4-dicarboxylate is treated with acryloyl chloride.

Пример 1. Получение 17-ацетата мепрегенола (I).Example 1. Obtaining 17-acetate of mepregenol (I).

К раствору 1.000 г ацетата мегестрола в 50 мл тетрагидрофурана при перемешивании добавляют 0.100 г борогидрида натрия при комнатной температуре. Далее в реакционную смесь добавляют при перемешивании 5 мл дистиллированной воды. Через 2 ч добавляют 0.030 г борогидрида натрия. Через 1 ч при перемешивании добавляют 150 мл дистиллированной воды и перемешивают в течение 2 ч до формирования осадка. Осадок отфильтровывают, промывают дистиллированной водой и высушивают до постоянной массы. Получают 0.965 г (97%) АМП-17 в виде бесцветного твердого вещества, т.пл. 195°С. 1Н ЯМР (400 МГц; CDCl3): δ 5.55 (s, 1Н) 5.49 (s, 1H), 4.29 (br.s, 1H), 2.95 (dd, J 13.88, 11.31, 1H), 2.16-2.08 (m, 1H), 2.06 (s, 3H), 2.08-2.05 (m, 1H), 2.04 (s, 3H), 1.92 (dd, J 12.8, 4.1, 1H), 1.90-1.82 (m, 2H), 1.80 (s, 3H), 1.73 (s, 1H), 1.71-1.49 (m, 5H), 1.49-1.24 (m, 4H), 1.17-1.04 (m, 1H), 0.97 (s, 3H), 0.69 (s, 3Н). 13C ЯМР (100 МГц; CDCl3): δ 14.37, 18.08, 20.08, 20.31, 21.14, 23.29, 26.33, 28.67, 30.30, 31.24, 33.69, 35.01, 36.83, 47.55, 49.39, 51.06, 68.25, 96.60, 123.88, 128.32, 131.40, 145.16, 170.70, 204.20.To a solution of 1.000 g of megestrol acetate in 50 ml of tetrahydrofuran, 0.100 g of sodium borohydride is added at room temperature with stirring. Next, 5 ml of distilled water is added to the reaction mixture with stirring. After 2 hours, 0.030 g of sodium borohydride was added. After 1 hour, 150 ml of distilled water was added with stirring and stirred for 2 hours until a precipitate formed. The precipitate is filtered off, washed with distilled water and dried to constant weight. 0.965 g (97%) of AMP-17 is obtained as a colorless solid, mp. 195 ° C. 1 H NMR (400 MHz; CDCl 3 ): δ 5.55 (s, 1H) 5.49 (s, 1H), 4.29 (br.s, 1H), 2.95 (dd, J 13.88, 11.31, 1H), 2.16-2.08 ( m, 1H), 2.06 (s, 3H), 2.08-2.05 (m, 1H), 2.04 (s, 3H), 1.92 (dd, J 12.8, 4.1, 1H), 1.90-1.82 (m, 2H), 1.80 (s, 3H), 1.73 (s, 1H), 1.71-1.49 (m, 5H), 1.49-1.24 (m, 4H), 1.17-1.04 (m, 1H), 0.97 (s, 3H), 0.69 (s , 3H). 13 C NMR (100 MHz; CDCl 3 ): δ 14.37, 18.08, 08.08, 20.31, 21.14, 23.29, 26.33, 28.67, 30.30, 31.24, 33.69, 35.01, 36.83, 47.55, 49.39, 51.06, 68.25, 96.60, 123.88, 128.32, 131.40, 145.16, 170.70, 204.20.

Пример 2. Получение (3S,8R,9S,10R,13S,14S,17R)-17-ацетокси-17-ацетил-6,10,13-триметил-2,3,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-додекагидро-1Н-циклопента[а]фенантренил-3-ил акрилата (II).Example 2. Obtaining (3S, 8R, 9S, 10R, 13S, 14S, 17R) -17-acetoxy-17-acetyl-6,10,13-trimethyl-2,3,8,9,10,11,12, 13,14,15,16,17-dodecahydro-1H-cyclopenta [a] phenanthrenyl-3-yl acrylate (II).

К охлажденному до минус 5°С 9.60 г 17-ацетата мепрегенола (I) в 150 мл хлористого метилена добавляют 3.50 мл триэтиламина. При перемешивании в атмосфере аргона добавляют порциями раствор 2.70 г акрилоилхлорида в 30 мл хлористого метилена, не допуская повышения температуры реакционной среды. Оставляют перемешиваться по окончании добавления акрилоилхлорида при комнатной температуре на 12 ч. Промывают водой, насыщенным раствором хлорида натрия. Органическую фазу сушат безводным сульфатом натрия, растворитель удаляют при пониженном давлении на ротационном испарителе. Твердый остаток очищают колоночной хроматографией на силикагеле, элюент петролейный эфир/этилацетат 5:1. Получают 7.50 г (73%) заявленного соединения в виде бесцветного твердого вещества, т.пл. 184-185°С. Вычислено, % С27Н36О5: С, 73.61; Н, 8.24. Найдено, %: С, 73.72; Н, 8.29. 1Н ЯМР (400 МГц; CDCl3): δ 6.41 (dd, J 17.3, 1.5, 1Н), 6.13 (dd, J 17.3, 10.4, 1H), 5.82 (dd, J 10.4, 1.5, 1H), 5.49 (s, 1H), 5.46 (d, J 3.1, 1H), 2.96 (dd, J 15.2, 1.3, 1H), 2.93 (dd, J 15.8, 2.4, 1H), 2.15-2.07 (m, 2H), 2.06 (s, 3H), 2.02 (s, 3H), 1.94 (td, J 12.7, 4.2, 1H), 1.90-1.79 (m, 3Н), 1.77 (dd, J 1.9, 1.3, 3H), 1.75-1.67 (m, 2H), 1.64-1.57 (m, 1H), 1.56-1.50 (m, 1H), 1.46-1.33 (m, 2H), 1.30 (ddd, J 16.5, 10.8, 3.7, 1H), 1.16-1.06 (m, 1H), 0.97 (s, 3H), 0.67 (s, 3Н). 13C ЯМР (100 МГц; CDCl3): δ 198.92, 165.51, 160.91, 141.72, 126.07, 125.40, 123.72, 123.63, 114.25, 66.04, 45.72, 44.19, 42.38, 31.65, 29.83, 28.25, 26.08, 25.15, 21.15, 19.16, 18.14, 15.99.To cooled to minus 5 ° C 9.60 g of 17-acetate of mepregenol (I) in 150 ml of methylene chloride add 3.50 ml of triethylamine. While stirring in an argon atmosphere, a solution of 2.70 g of acryloyl chloride in 30 ml of methylene chloride is added in portions, preventing the temperature of the reaction medium from rising. Leave to mix after the addition of acryloyl chloride at room temperature for 12 hours. Rinse with water, saturated sodium chloride solution. The organic phase is dried with anhydrous sodium sulfate, the solvent is removed under reduced pressure on a rotary evaporator. The solid residue was purified by silica gel column chromatography, eluent: petroleum ether / ethyl acetate 5: 1. 7.50 g (73%) of the subject compound are obtained in the form of a colorless solid, mp. 184-185 ° C. Calculated,% C 27 H 36 O 5 : C, 73.61; H, 8.24. Found,%: C, 73.72; H, 8.29. 1 H NMR (400 MHz; CDCl 3 ): δ 6.41 (dd, J 17.3, 1.5, 1H), 6.13 (dd, J 17.3, 10.4, 1H), 5.82 (dd, J 10.4, 1.5, 1H), 5.49 ( s, 1H), 5.46 (d, J 3.1, 1H), 2.96 (dd, J 15.2, 1.3, 1H), 2.93 (dd, J 15.8, 2.4, 1H), 2.15-2.07 (m, 2H), 2.06 ( s, 3H), 2.02 (s, 3H), 1.94 (td, J 12.7, 4.2, 1H), 1.90-1.79 (m, 3H), 1.77 (dd, J 1.9, 1.3, 3H), 1.75-1.67 (m , 2H), 1.64-1.57 (m, 1H), 1.56-1.50 (m, 1H), 1.46-1.33 (m, 2H), 1.30 (ddd, J 16.5, 10.8, 3.7, 1H), 1.16-1.06 (m , 1H), 0.97 (s, 3H), 0.67 (s, 3H). 13 C NMR (100 MHz; CDCl 3 ): δ 198.92, 165.51, 160.91, 141.72, 126.07, 125.40, 123.72, 123.63, 114.25, 66.04, 45.72, 44.19, 42.38, 31.65, 29.83, 28.25, 26.08, 25.15, 21.15, 19.16, 18.14, 15.99.

Пример 3. Получение (8R,10R,13S,14S,17R)-17-ацетокси-17-ацетил-6,10,13-триметил-2,3,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-додекагидро-1Н-циклопента[а]фенантрен-3-ил-1-бензилпирролидин-3-карбоксилата (III).Example 3. Obtaining (8R, 10R, 13S, 14S, 17R) -17-acetoxy-17-acetyl-6,10,13-trimethyl-2,3,8,9,10,11,12,13,14, 15,16,17-dodecahydro-1H-cyclopenta [a] phenanthren-3-yl-1-benzylpyrrolidine-3-carboxylate (III).

К охлажденному до 0°С 1.000 г акрилата II, полученному из 17-ацетата мепрегенола (I), в 100 мл толуола, в атмосфере аргона при перемешивании добавляют последовательно 0.670 г N-метоксиметил-N-(триметилсилилметил)бензиламина, 0.1 мл 1 М раствора трифторуксусной кислоты в хлористом метилене. Через 30 мин снимают охлаждение и оставляют перемешиваться при комнатной температуре в течение 12 ч. Растворитель удаляют при пониженном давлении на ротационном испарителе. Остаток очищают колоночной хроматографией на силикагеле, элюент хлористый метилен/метанол от 100:1 до 50:1. Получают 1.140 г (88%) заявленного соединения в виде бесцветного маслообразного вещества. Вычислено, % C36H47NO5: С, 75.36; Н, 8.26; N, 2.44. Найдено, %: С, 75.48; Н, 8.29; N, 2.51. 1Н ЯМР (400 МГц; CDCl3): 7.41-7.17 (m, 5Н), 5.51 (s, 1Н), 5.41 (d, J 2.9, 1H), 3.64 (d, J 6.1, 1H), 3.13-2.85 (m, 3H), 2.67 (dd, J 14.1, 7.0, 1H), 2.56 (d, J 9.0, 1H), 2.06 (d, J 14.9, 8H), 2.22-2.01 (m, 4H), 1.96 (d, J 4.2, 1H), 1.92-1.63 (m, 10H), 1.57 (t, J 3.2, 1H), 1.54 (d, J 3.9, 1H), 1.50-1.22 (m, 4H), 1.12 (br. s, 1H), 0.98 (s, 3H), 0.69 (s, 3Н). 13C ЯМР (100 МГц; CDCl3): δ 204.14, 174.98, 170.71, 146.79, 131.26, 128.85, 128.69, 128.39, 128.22, 126.94, 119.52, 96.62, 71.18, 60.02, 56.78, 56.68, 53.80, 50.89, 49.38, 47.57, 47.41, 42.29, 36.83, 35.01, 33.43, 31.26, 30.34, 27.76, 27.59, 26.34, 24.32, 23.32, 21.18, 21.03, 20.27, 20.07, 17.93, 14.38.To cooled to 0 ° C 1.000 g of acrylate II, obtained from 17-acetate of mepregenol (I), in 100 ml of toluene, in the atmosphere of argon, successively add 0.670 g of N-methoxymethyl-N- (trimethylsilylmethyl) benzylamine, 0.1 ml 1 M a solution of trifluoroacetic acid in methylene chloride. After 30 minutes, the cooling was removed and allowed to stir at room temperature for 12 hours. The solvent was removed under reduced pressure on a rotary evaporator. The residue was purified by silica gel column chromatography, eluent methylene chloride / methanol from 100: 1 to 50: 1. 1.140 g (88%) of the subject compound are obtained in the form of a colorless oily substance. Calculated,% C 36 H 47 NO 5 : C, 75.36; H, 8.26; N, 2.44. Found,%: C, 75.48; H, 8.29; N, 2.51. 1 H NMR (400 MHz; CDCl 3 ): 7.41-7.17 (m, 5H), 5.51 (s, 1H), 5.41 (d, J 2.9, 1H), 3.64 (d, J 6.1, 1H), 3.13-2.85 (m, 3H), 2.67 (dd, J 14.1, 7.0, 1H), 2.56 (d, J 9.0, 1H), 2.06 (d, J 14.9, 8H), 2.22-2.01 (m, 4H), 1.96 (d , J 4.2, 1H), 1.92-1.63 (m, 10H), 1.57 (t, J 3.2, 1H), 1.54 (d, J 3.9, 1H), 1.50-1.22 (m, 4H), 1.12 (br. S , 1H), 0.98 (s, 3H), 0.69 (s, 3H). 13 C NMR (100 MHz; CDCl 3 ): δ 204.14, 174.98, 170.71, 146.79, 131.26, 128.85, 128.69, 128.39, 128.22, 126.94, 119.52, 96.62, 71.18, 60.02, 56.78, 56.68, 53.80, 50.89, 49.38, 47.57, 47.41, 42.29, 36.83, 35.01, 33.43, 31.26, 30.34, 27.76, 27.59, 26.34, 24.32, 23.32, 21.18, 21.03, 20.27, 20.07, 17.93, 14.38.

Пример 4. Получение 4-((8R,10R,13S,14S,17R)-17-ацетокси-17-ацетил-6,10,13-триметил-2,3,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-додекагидро-1Н-циклопента[а]фенантрен-3-ил)-2-метил-5-фенилпирролидин-2,4-дикарбоксилата (IV).Example 4. Obtaining 4 - ((8R, 10R, 13S, 14S, 17R) -17-acetoxy-17-acetyl-6,10,13-trimethyl-2,3,8,9,10,11,12,13 , 14,15,16,17-dodecahydro-1H-cyclopenta [a] phenanthren-3-yl) -2-methyl-5-phenylpyrrolidin-2,4-dicarboxylate (IV).

К раствору 1.000 г акрилата II, полученному из 17-ацетата мепрегенола (I), в 100 мл толуола в атмосфере аргона при перемешивании добавляют последовательно 0.483 г метил-2-(бензилиденамино)ацетата, 0.568 г ацетата серебра(I), 0.344 г триэтиламина. Перемешивают в темноте 48 ч. Реакционную смесь фильтруют, фильтрат упаривают при пониженном давлении на ротационном испарителе. Остаток очищают колоночной хроматографией на силикагеле, элюент петролейный эфир/этилацетат от 3:1 до 1:1 до 0:1. Получают 1.200 г (88%) заявленного соединения в виде бесцветного твердого вещества, т.пл. 188°С. Вычислено, % C37H47NO7: С, 71.94; Н, 7.67; N, 2.27. Найдено, %: С, 72.12; Н, 7.59; N, 2.47. 1Н ЯМР (400 МГц; CDCl3): δ 7.21-7.40 (m, 5Н), 5.43 (s, 1Н), 5.27 (s, 1Н), 5.09 (s, 1Н), 4.92 (dt, J 32.1, 7.4, 1H), 4.52 (dd, J 7.4, 1.9, 1Н), 3.97 (t, J 8.1, 1H), 3.80 (s, 2H), 3.30 (dtd, J 19.3, 7.5, 5.9, 1H), 2.97-2.87 (m, 1H), 2.47-2.40 (m, 2H), 2.03 (s, 3H), 2.00 (s, 3H), 1.93-1.71 (m, 6H), 1.66 (ddd, J 21.9, 1.6, 1.2, 3H), 1.56-1.26 (m, 6H), 1.26-1.03 (m, 3H), 1.02-0.93 (m, 2H), 0.84 (d, J 8.0, 3H), 0.64 (s, 3H). 13C ЯМР (100 МГц; CDCl3): δ 204.10, 173.68, 172.62, 172.60, 170.68, 146.57, 138.97, 131.19, 128.75, 128.61, 128.22, 128.18, 127.63, 127.48, 127.07, 126.95, 119.33, 96.61, 71.02, 65.89, 59.90, 52.27, 50.77, 49.76, 49.66, 49.34, 47.52, 36.73, 34.82, 33.88, 33.72, 33.25, 31.21, 30.31, 26.31, 24.13, 23.30, 21.16, 20.20, 20.05, 17.80, 14.35.To a solution of 1.000 g of acrylate II, obtained from 17-acetate of mepregenol (I), in 100 ml of toluene in an argon atmosphere, 0.483 g of methyl 2- (benzylidenamino) acetate, 0.568 g of silver (I) acetate, 0.344 g of triethylamine are successively added with stirring. . Stirred in the dark for 48 hours. The reaction mixture was filtered, the filtrate was evaporated under reduced pressure on a rotary evaporator. The residue was purified by silica gel column chromatography, eluent petroleum ether / ethyl acetate 3: 1 to 1: 1 to 0: 1. Receive 1,200 g (88%) of the claimed compound as a colorless solid, so pl. 188 ° C. Calculated,% C 37 H 47 NO 7 : C, 71.94; H, 7.67; N, 2.27. Found,%: C, 72.12; H, 7.59; N, 2.47. 1 H NMR (400 MHz; CDCl 3 ): δ 7.21-7.40 (m, 5H), 5.43 (s, 1H), 5.27 (s, 1H), 5.09 (s, 1H), 4.92 (dt, J 32.1, 7.4 , 1H), 4.52 (dd, J 7.4, 1.9, 1H), 3.97 (t, J 8.1, 1H), 3.80 (s, 2H), 3.30 (dtd, J 19.3, 7.5, 5.9, 1H), 2.97-2.87 (m, 1H), 2.47-2.40 (m, 2H), 2.03 (s, 3H), 2.00 (s, 3H), 1.93-1.71 (m, 6H), 1.66 (ddd, J 21.9, 1.6, 1.2, 3H ), 1.56-1.26 (m, 6H), 1.26-1.03 (m, 3H), 1.02-0.93 (m, 2H), 0.84 (d, J 8.0, 3H), 0.64 (s, 3H). 13 C NMR (100 MHz; CDCl 3 ): δ 204.10, 173.68, 172.62, 172.60, 170.68, 146.57, 138.97, 131.19, 128.75, 128.61, 128.22, 128.18, 127.63, 127.48, 127.07, 126.95, 119.33, 96.61, 71.02, 65.89, 59.90, 52.27, 50.77, 49.76, 49.66, 49.34, 47.52, 36.73, 34.82, 33.88, 33.72, 33.25, 31.21, 30.31, 26.31, 24.13, 23.30, 21.16, 20.20, 20.05, 17.80, 14.35.

Пример 5. Получение 4-((8R,10R,13S,14S,17R)-17-ацетокси-17-ацетил-6,10,13-триметил-2,3,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-додекагидро-1Н-циклопента[а]фенантрен-3-ил)-2-метил-5-(2-(трифторметил)фенил)пирролидин-2,4-дикарбоксилата (V).Example 5. Obtaining 4 - ((8R, 10R, 13S, 14S, 17R) -17-acetoxy-17-acetyl-6,10,13-trimethyl-2,3,8,9,10,11,12,13 , 14,15,16,17-dodecahydro-1H-cyclopenta [a] phenanthren-3-yl) -2-methyl-5- (2- (trifluoromethyl) phenyl) pyrrolidin-2,4-dicarboxylate (V).

К раствору 0.500 г акрилата II, полученному из 17-ацетата мепрегенола (I), в 100 мл толуола в атмосфере аргона при перемешивании добавляют последовательно 0.306 г метил-2-((2-(трифторметил)бензилиден)амино)ацетата, 0.284 г ацетата серебра(I), 0.172 г триэтиламина. Перемешивают в темноте 48 ч. Реакционную смесь фильтруют, фильтрат упаривают при пониженном давлении на ротационном испарителе. Остаток очищают колоночной хроматографией на силикагеле, элюент петролейный эфир/этилацетат от 3:1 до 1:1 до 0:1. Получают 0.550 г (71%) заявленного соединения в виде бесцветного твердого вещества, т.пл. 117°С. Вычислено, % C38H46F3NO7: С, 66.55; Н, 6.76; N, 2.04. Найдено, %: С, 66.42; Н, 6.59; N, 2.17. 1Н ЯМР (400 МГц; CDCl3): δ 7.81 (d, J 7.9, 1Н), 7.62 (t, J 7.4, 1H), 7.50 (td, J 7.5, 3.8, 1H), 7.35 (td, J 8.0, 2.3, 1H), 5.42 (d, J 4.3, 1H), 5.27 (s, 1H), 5.21 (d, J 1.9, 1H),4.87 (d, J 8.2, 1H), 4.73 (t, J 7.5, 1H), 4.22 (s, 1H), 3.99-3.92 (m, 1H), 3.80 (d, J 1.6, 2H), 3.31 (dtd, J 19.9, 7.7, 4.5, 1H), 2.98-2.85 (m, 1H), 2.63-2.53 (m, 1H), 2.43 (dtd, J 13.3, 8.4, 2.3, 1H), 2.03 (s, 3H), 2.00 (d, J 1.1, 3H), 1.97-1.71 (m, 5H), 1.70-1.57 (m, 3H), 1.57-1.30 (m, 4H), 1.28-0.84 (m, 5H), 0.81 (d, J 17.0, 3H), 0.64 (s, 3H). 13C ЯМР (100 МГц, CDCl3): δ 204.12, 173.48, 172.45, 170.65, 146.15, 131.87, 131.20, 128.75, 128.60, 128.55, 128.15, 127.65, 127.52, 119.18, 71.41, 71.05, 59.33, 52.23, 50.79, 49.35, 47.53, 36.74, 36.72, 34.77, 33.24, 33.03, 32.82, 31.21, 30.31, 26.32, 24.20, 23.29, 21.15, 20.17, 20.00, 17.78, 17.71, 14.35.To a solution of 0.500 g of acrylate II, obtained from 17-acetate of mepregenol (I), in 100 ml of toluene in an argon atmosphere, 0.306 g of methyl 2 - ((2- (trifluoromethyl) benzylidene) amino) acetate, 0.284 g of acetate are successively added with stirring. silver (I), 0.172 g of triethylamine. Stirred in the dark for 48 hours. The reaction mixture was filtered, the filtrate was evaporated under reduced pressure on a rotary evaporator. The residue was purified by silica gel column chromatography, eluent petroleum ether / ethyl acetate 3: 1 to 1: 1 to 0: 1. Obtain 0.550 g (71%) of the claimed compound as a colorless solid, so pl. 117 ° C. Calculated,% C 38 H 46 F 3 NO 7 : C, 66.55; H, 6.76; N, 2.04. Found,%: C, 66.42; H, 6.59; N, 2.17. 1 H NMR (400 MHz; CDCl 3 ): δ 7.81 (d, J 7.9, 1H), 7.62 (t, J 7.4, 1H), 7.50 (td, J 7.5, 3.8, 1H), 7.35 (td, J 8.0 , 2.3, 1H), 5.42 (d, J 4.3, 1H), 5.27 (s, 1H), 5.21 (d, J 1.9, 1H), 4.87 (d, J 8.2, 1H), 4.73 (t, J 7.5, 1H), 4.22 (s, 1H), 3.99-3.92 (m, 1H), 3.80 (d, J 1.6, 2H), 3.31 (dtd, J 19.9, 7.7, 4.5, 1H), 2.98-2.85 (m, 1H ), 2.63-2.53 (m, 1H), 2.43 (dtd, J 13.3, 8.4, 2.3, 1H), 2.03 (s, 3H), 2.00 (d, J 1.1, 3H), 1.97-1.71 (m, 5H) , 1.70-1.57 (m, 3H), 1.57-1.30 (m, 4H), 1.28-0.84 (m, 5H), 0.81 (d, J 17.0, 3H), 0.64 (s, 3H). 13 C NMR (100 MHz, CDCl 3 ): δ 204.12, 173.48, 172.45, 170.65, 146.15, 131.87, 131.20, 128.75, 128.60, 128.55, 128.15, 127.65, 127.52, 119.18, 71.41, 71.05, 59.33, 52.23, 50.79, 49.35, 47.53, 36.74, 36.72, 34.77, 33.24, 33.03, 32.82, 31.21, 30.31, 26.32, 24.20, 23.29, 21.15, 20.17, 20.00, 17.78, 17.71, 14.35.

Пример 6. Получение 4-((8R,10R,13S,14S,17R)-17-ацетокси-17-ацетил-6,10,13-триметил-2,3,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-додекагидро-1Н-циклопента[а]фенантрен-3-ил)-2-метил-5-(2-бромфенил)пирролидин-2,4-дикарбоксилата (VI).Example 6. Obtaining 4 - ((8R, 10R, 13S, 14S, 17R) -17-acetoxy-17-acetyl-6,10,13-trimethyl-2,3,8,9,10,11,12,13 , 14,15,16,17-dodecahydro-1H-cyclopenta [a] phenanthren-3-yl) -2-methyl-5- (2-bromophenyl) pyrrolidin-2,4-dicarboxylate (VI).

К раствору 0.500 г акрилата II, полученному из 17-ацетата мепрегенола (I), в 100 мл толуола в атмосфере аргона при перемешивании добавляют последовательно 0.321 г метил-2-((2-бромбензилиден)амино)ацетата, 0.284 г ацетата серебра(I), 0.172 г триэтиламина. Перемешивают в темноте 48 ч. Реакционную смесь фильтруют, фильтрат упаривают при пониженном давлении на ротационном испарителе. Остаток очищают колоночной хроматографией на силикагеле, элюент петролейный эфир/этилацетат от 3:1 до 1:1 до 0:1. Получают 0.702 г (89%) заявленного соединения в виде бесцветного твердого вещества, т.пл. 129°С. Вычислено, % C37H46BrNO7: С, 63.79; Н, 6.66; N, 2.01. Найдено, %: С, 63.92; Н, 6.69; N, 2.15. 1Н ЯМР (400 МГц; CDCl3): δ 7.57-7.51 (m, 2Н), 7.32-7.27 (m, 1Н), 7.15-7.10 (m, 1Н), 5.45 (s, 1Н), 5.22 (d, J 2.1, 1Н), 4.91 (t, J 7.1, 1Н), 4.80 (dd, J 12.0, 7.6, 1Н), 4.47 (d, J 1.6, 1Н), 4.01-3.94 (m, 1Н), 3.82 (s, 3Н), 3.64-3.51 (m, 1H), 2.98-2.88 (m, 1H), 2.50 (m, 2H), 2.05 (s, 3H), 2.02 (d, J 1.1, 3H), 1.95-1.84 (m, 2H), 1.84-1.05 (m, 14H), 1.04-0.92 (m, 1H), 0.86 (d, J 12.2, 3H), 0.66 (s, 3Н). 13C ЯМР (101 МГц, CDCl3): δ 203.73, 173.11, 172.34, 170.29, 146.11, 137.58, 132.08, 130.85, 128.34, 128.17, 127.61, 127.33, 123.78, 119.04, 70.63, 64.50, 58.81, 51.87, 50.36, 48.94, 47.14, 36.37, 34.41, 33.00, 32.84, 32.77, 30.82, 29.92, 25.94, 22.90, 20.77, 19.88, 19.81, 19.65, 17.44, 17.42, 14.86.To a solution of 0.500 g of acrylate II obtained from 17-acetate of mepregenol (I) in 100 ml of toluene in an argon atmosphere, 0.321 g of methyl 2 - ((2-bromobenzylidene) amino) acetate, 0.284 g of silver acetate (I ), 0.172 g of triethylamine. Stirred in the dark for 48 hours. The reaction mixture was filtered, the filtrate was evaporated under reduced pressure on a rotary evaporator. The residue was purified by silica gel column chromatography, eluent petroleum ether / ethyl acetate 3: 1 to 1: 1 to 0: 1. Obtain 0.702 g (89%) of the claimed compound as a colorless solid, so pl. 129 ° C. Calculated,% C 37 H 46 BrNO 7 : C, 63.79; H, 6.66; N, 2.01. Found,%: C, 63.92; H, 6.69; N, 2.15. 1 H NMR (400 MHz; CDCl 3 ): δ 7.57-7.51 (m, 2H), 7.32-7.27 (m, 1H), 7.15-7.10 (m, 1H), 5.45 (s, 1H), 5.22 (d, J 2.1, 1H), 4.91 (t, J 7.1, 1H), 4.80 (dd, J 12.0, 7.6, 1H), 4.47 (d, J 1.6, 1H), 4.01-3.94 (m, 1H), 3.82 (s , 3H), 3.64-3.51 (m, 1H), 2.98-2.88 (m, 1H), 2.50 (m, 2H), 2.05 (s, 3H), 2.02 (d, J 1.1, 3H), 1.95-1.84 ( m, 2H), 1.84-1.05 (m, 14H), 1.04-0.92 (m, 1H), 0.86 (d, J 12.2, 3H), 0.66 (s, 3H). 13 C NMR (101 MHz, CDCl 3 ): δ 203.73, 173.11, 172.34, 170.29, 146.11, 137.58, 132.08, 130.85, 128.34, 128.17, 127.61, 127.33, 123.78, 119.04, 70.63, 64.50, 58.81, 51.87, 50.36, 48.94, 47.14, 36.37, 34.41, 33.00, 32.84, 32.77, 30.82, 29.92, 25.94, 22.90, 20.77, 19.88, 19.81, 19.65, 17.44, 17.42, 14.86.

Пример 7. Получение 4-((8R,10R,13S,14S,17R)-17-ацетокси-17-ацетил-6,10,13-триметил-2,3,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-додекагидро-1Н-циклопента[а]фенантрен-3-ил)-2-метил-1-акрилоил-5-фенилпирролидин-2,4-дикарбоксилата (VII).Example 7. Obtaining 4 - ((8R, 10R, 13S, 14S, 17R) -17-acetoxy-17-acetyl-6,10,13-trimethyl-2,3,8,9,10,11,12,13 , 14,15,16,17-dodecahydro-1H-cyclopenta [a] phenanthren-3-yl) -2-methyl-1-acryloyl-5-phenylpyrrolidin-2,4-dicarboxylate (VII).

К охлажденному до минус 5°С раствору 1.160 г соединения IV в 100 мл хлористого метилена добавляют 0.285 г триэтиламина. При перемешивании в инертной атмосфере добавляют порциями раствор 0.205 г акрилоилхлорида в 20 мл хлористого метилена, не допуская повышения температуры реакционной среды. Оставляют перемешиваться по окончании добавления акрилоилхлорида при комнатной температуре на 12 ч. Промывают водой, насыщенным раствором хлорида натрия. Органическую фазу сушат безводным сульфатом натрия, растворитель удаляют при пониженном давлении на ротационном испарителе. Твердый остаток очищают колоночной хроматографией на силикагеле, элюент петролейный эфир/этилацетат 1:1. Получают 1.120 г (89%) заявленного соединения в виде бесцветного твердого вещества, т.пл. 145°С. Вычислено, % C40H49NO8: С, 71.51; Н, 7.35; N, 2.08. Найдено, %: С, 71.62; Н, 7.39; N, 2.19. 1Н ЯМР (400 МГц; CDCl3): δ 7.65 (d, J 7.3, 2Н), 7.37-7.24 (m, 3Н), 6.37-6.28 (m, 1H), 6.05 (ddd, J 16.7, 10.3, 1.7, 1H), 5.51 (ddd, J 10.4, 3.0, 1.9, 1H), 5.48 (d, J 13.6, 1H), 5.32 (d, J 8.6, 1H), 5.27 (s, 1H), 5.17 (s, 1H), 5.03 (t, J 8.3, 1H), 4.49 (ddd, J 11.3, 6.7, 1.8, 1Н), 3.84 (s, 1H), 3.58-3.44 (m, 1H), 2.97-2.89 (m, 1H), 2.56 (ddd, J 24.4, 12.9, 3.5, 1H), 2.39 (dtd, J 10.7, 6.5, 4.2, 1H), 2.12-2.05 (m, 1H), 2.04 (d, J 1.0, 3H), 2.01 (d, J 5.2, 3H), 1.96-1.15 (m, 16H), 1.05-0.97 (m, 1H), 0.90 (d, J 9.4, 3H), 0.65 (s, 3Н). 13C ЯМР (100 МГц, CDCl3) δ 204.08, 171.94, 170.67, 168.53, 165.44, 146.88, 138.23, 131.11, 129.43, 129.28, 129.03, 128.55, 128.53, 128.40, 128.36, 127.84, 127.75, 127.59, 118.90, 71.97, 63.13, 59.26, 52.44, 50.79, 49.32, 47.53, 36.77, 34.86, 33.24, 31.21, 30.32, 28.60, 26.34, 23.30, 21.16, 20.21, 20.16, 17.88, 17.83, 14.36.0.285 g of triethylamine is added to a solution of 1.160 g of compound IV in 100 ml of methylene chloride cooled to minus 5 ° C. While stirring in an inert atmosphere, a solution of 0.205 g of acryloyl chloride in 20 ml of methylene chloride is added in portions, preventing the temperature of the reaction medium from rising. Leave to mix after the addition of acryloyl chloride at room temperature for 12 hours. Rinse with water, saturated sodium chloride solution. The organic phase is dried with anhydrous sodium sulfate, the solvent is removed under reduced pressure on a rotary evaporator. The solid residue was purified by silica gel column chromatography, eluent: petroleum ether / ethyl acetate 1: 1. 1.120 g (89%) of the title compound are obtained as a colorless solid, mp. 145 ° C. Calculated,% C 40 H 49 NO 8 : C, 71.51; H, 7.35; N, 2.08. Found,%: C, 71.62; H, 7.39; N, 2.19. 1 H NMR (400 MHz; CDCl 3 ): δ 7.65 (d, J 7.3, 2H), 7.37-7.24 (m, 3H), 6.37-6.28 (m, 1H), 6.05 (ddd, J 16.7, 10.3, 1.7 , 1H), 5.51 (ddd, J 10.4, 3.0, 1.9, 1H), 5.48 (d, J 13.6, 1H), 5.32 (d, J 8.6, 1H), 5.27 (s, 1H), 5.17 (s, 1H ), 5.03 (t, J 8.3, 1H), 4.49 (ddd, J 11.3, 6.7, 1.8, 1H), 3.84 (s, 1H), 3.58-3.44 (m, 1H), 2.97-2.89 (m, 1H) , 2.56 (ddd, J 24.4, 12.9, 3.5, 1H), 2.39 (dtd, J 10.7, 6.5, 4.2, 1H), 2.12-2.05 (m, 1H), 2.04 (d, J 1.0, 3H), 2.01 ( d, J 5.2, 3H), 1.96-1.15 (m, 16H), 1.05-0.97 (m, 1H), 0.90 (d, J 9.4, 3H), 0.65 (s, 3H). 13 C NMR (100 MHz, CDCl 3 ) δ 204.08, 171.94, 170.67, 168.53, 165.44, 146.88, 138.23, 131.11, 129.43, 129.28, 129.03, 128.55, 128.53, 128.40, 128.36, 127.84, 127.75, 127.59, 118.90, 71.97 , 63.13, 59.26, 52.44, 50.79, 49.32, 47.53, 36.77, 34.86, 33.24, 31.21, 30.32, 28.60, 26.34, 23.30, 21.16, 20.21, 20.16, 17.88, 17.83, 14.36.

Пример 8. Получение 4-((8R,10R,13S,14S,17R)-17-ацетокси-17-ацетил-6,10,13-триметил-2,3,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-додекагидро-1Н-циклопента[а]фенантрен-3-ил)-2-метил-1-(5-(метоксикарбонил)-2-фенилпирролидин-3-карбонил)-5-фенилпирролидин-2,4-дикарбоксилата (VIII).Example 8. Obtaining 4 - ((8R, 10R, 13S, 14S, 17R) -17-acetoxy-17-acetyl-6,10,13-trimethyl-2,3,8,9,10,11,12,13 , 14,15,16,17-dodecahydro-1H-cyclopenta [a] phenanthren-3-yl) -2-methyl-1- (5- (methoxycarbonyl) -2-phenylpyrrolidin-3-carbonyl) -5-phenylpyrrolidin- 2,4-dicarboxylate (VIII).

К раствору 0.660 г акриламида VII в 100 мл толуола в атмосфере аргона при перемешивании добавляют последовательно 0.209 г метил-2-(бензилиденамино)ацетата, 0.246 г ацетата серебра(I), 0.162 г триэтиламина. Перемешивают в темноте 48 ч. Реакционную смесь фильтруют, фильтрат упаривают при пониженном давлении на ротационном испарителе. Остаток очищают колоночной хроматографией на силикагеле, элюент петролейный эфир/этилацетат от 2:1 до 1:1 до 0:1. Получают 0.660 г (79%) заявленного соединения в виде бесцветного твердого вещества, т.пл. 213°С. Вычислено, % C50H60N2O10: С, 70.73; Н, 7.12; N, 3.30. Найдено, %: С, 70.52; Н, 7.19; N, 3.47. 1Н ЯМР (400 МГц; CDCl3): δ 7.50 (d, J 7.0, 2Н), 7.42 (d, J 4.3, 3Н), 7.37-7.21 (m, 5Н), 5.46 (d, J 10.2, 1H), 5.06 (d, J 2.3, 1H), 4.97-4.86 (m, 1H), 4.56 (dd, J 8.1, 1.6, 1H), 4.31 (d, J 7.3, 1H), 3.86-3.80 (m, 1H), 3.76 (s, 3H), 3.74 (s, 3H), 2.99-2.87 (m, 2H), 2.42-2.33 (m, 1H), 2.32-2.13 (m, 2H), 2.11-2.04 (m, 2H), 2.03 (s, 3H), 2.00 (s, 3H), 1.99-1.14 (m, 17H), 1.00 (t, J 10.7, 1H), 0.88 (d, J 5.4, 3H), 0.65 (s, 3Н). 13C ЯМР (100 МГц; CDCl3): δ 204.08, 173.33, 172.28, 171.96, 170.66, 168.48, 146.93, 146.69, 138.21, 137.74, 131.07, 130.98, 129.20, 128.97, 128.68, 128.49, 128.45, 128.37, 128.28, 128.23, 127.82, 127.69, 127.38, 118.93, 71.68, 67.14, 62.75, 60.14, 58.79, 52.28, 52.14, 50.76, 49.32, 47.66, 47.52, 36.74, 34.33, 33.26, 33.21, 31.20, 30.32, 28.17, 26.34, 23.30, 21.16, 20.19, 20.06, 17.91, 17.87, 14.36.To a solution of 0.660 g of acrylamide VII in 100 ml of toluene in an argon atmosphere, 0.209 g of methyl 2- (benzylidenamino) acetate, 0.246 g of silver (I) acetate, 0.162 g of triethylamine are successively added with stirring. Stirred in the dark for 48 hours. The reaction mixture was filtered, the filtrate was evaporated under reduced pressure on a rotary evaporator. The residue was purified by silica gel column chromatography, eluent petroleum ether / ethyl acetate 2: 1 to 1: 1 to 0: 1. Obtain 0.660 g (79%) of the claimed compound as a colorless solid, so pl. 213 ° C. Calculated,% C 50 H 60 N 2 O 10 : C, 70.73; H, 7.12; N, 3.30. Found,%: C, 70.52; H, 7.19; N, 3.47. 1 H NMR (400 MHz; CDCl 3 ): δ 7.50 (d, J 7.0, 2H), 7.42 (d, J 4.3, 3H), 7.37-7.21 (m, 5H), 5.46 (d, J 10.2, 1H) , 5.06 (d, J 2.3, 1H), 4.97-4.86 (m, 1H), 4.56 (dd, J 8.1, 1.6, 1H), 4.31 (d, J 7.3, 1H), 3.86-3.80 (m, 1H) , 3.76 (s, 3H), 3.74 (s, 3H), 2.99-2.87 (m, 2H), 2.42-2.33 (m, 1H), 2.32-2.13 (m, 2H), 2.11-2.04 (m, 2H) , 2.03 (s, 3H), 2.00 (s, 3H), 1.99-1.14 (m, 17H), 1.00 (t, J 10.7, 1H), 0.88 (d, J 5.4, 3H), 0.65 (s, 3H) . 13 C NMR (100 MHz; CDCl 3 ): δ 204.08, 173.33, 172.28, 171.96, 170.66, 168.48, 146.93, 146.69, 138.21, 137.74, 131.07, 130.98, 129.20, 128.97, 128.68, 128.49, 128.45, 128.37, 128.28, 128.23, 127.82, 127.69, 127.38, 118.93, 71.68, 67.14, 62.75, 60.14, 58.79, 52.28, 52.14, 50.76, 49.32, 47.66, 47.52, 36.74, 34.33, 33.26, 33.21, 31.20, 30.32, 28.17, 26.34, 23.30, 21.16, 20.19, 20.06, 17.91, 17.87, 14.36.

Пример 9. Получение 4-((8R,10R,13S,14S,17R)-17-ацетокси-17-ацетил-6,10,13-триметил-2,3,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-додекагидро-1Н-циклопента[а]фенантрен-3-ил)-2-метил-1-(1-акрилоил-5-(метоксикарбонил)-2-фенилпирролидин-3-карбонил)-5-фенилпирролидин-2,4-дикарбоксилата (IX).Example 9. Obtaining 4 - ((8R, 10R, 13S, 14S, 17R) -17-acetoxy-17-acetyl-6,10,13-trimethyl-2,3,8,9,10,11,12,13 , 14,15,16,17-dodecahydro-1H-cyclopenta [a] phenanthren-3-yl) -2-methyl-1- (1-acryloyl-5- (methoxycarbonyl) -2-phenylpyrrolidine-3-carbonyl) - 5-phenylpyrrolidine-2,4-dicarboxylate (IX).

К охлажденному до минус 5°С раствору 0.510 г соединения VIII в 50 мл хлористого метилена добавляют 0.091 г триэтиламина. При перемешивании в инертной атмосфере добавляют порциями раствор 0.065 г акрилоилхлорида в 15 мл хлористого метилена, не допуская повышения температуры реакционной среды. Оставляют перемешиваться по окончании добавления акрилоилхлорида при комнатной температуре на 4 ч. Промывают водой, насыщенным раствором хлорида натрия. Органическую фазу сушат безводным сульфатом натрия, растворитель удаляют при пониженном давлении на ротационном испарителе. Твердый остаток очищают колоночной хроматографией на силикагеле, элюент петролейный эфир/этилацетат 1:1. Получают 0.470 г (87%) заявленного соединения в виде бесцветного твердого вещества, т.пл. 165°С. Вычислено, % C53H62N2O11: С, 70.49; Н, 6.92; N, 3.10. Найдено, %: С, 70.45; Н, 6.95; N, 3.19. 1Н ЯМР (400 МГц; CDCl3): δ 7.69 (d, J 7.3, 2Н), 7.51 (d, J 7.2, 2Н), 7.35 (m, 4Н), 7.26-7.21 (m, 2Н), 6.35 (d, J 17.0, 1H), 6.09 (dd, J 16.8, 10.4, 1H), 5.56 (d, J 10.3, 1H), 5.50 (d, J 11.1, 1H) 5.43 (d, J 8.4, 1H), 5.28 (s, J 5.7, 1H), 5.26 (s, 1H),4.26 (dd, J 10.3, 7.2, 1H), 3.88 (ddd, J 23.0, 13.0, 7.0, 1H), 3.77 (s, 3H), 3.71 (s, 3H), 3.67-3.01 (m, 3H), 2.94 (dd, J 15.3, 10.1, 1H), 2.65-2.41 (m, 1H), 2.34 (s, 3H), 2.05 (d, J 0.5, 3H), 2.02 (s, 3H), 1.99-1.16 (m, 16H), 1.03 (ddd, J 13.4, 10.2, 3.2, 1H), 0.91 (d, J 12.2, 3H), 0.66 (s, 3Н). 13C ЯМР (100 МГц; CDCl3): δ 14.33, 17.84, 17.90, 20.05, 20.17, 21.14, 23.27, 24.10, 26.32, 28.32, 29.30, 30.30, 31.18, 33.19, 33.26, 34.86, 34.89, 36.75, 47.51, 48.05, 49.29, 50.77, 52.34, 53.40, 59.00, 59.34, 62.44, 62.90, 96.54, 118.33, 118.64, 126.68, 127.46, 127.61, 127.68, 127.71, 128.16, 128.66, 128.84, 128.86, 128.89, 129.26, 129.59, 137.44, 138.34, 138.36, 165.38, 167.34, 168.27, 168.29, 170.64, 171.66, 204.06.0.091 g of triethylamine is added to a solution of 0.510 g of compound VIII in 50 ml of methylene chloride cooled to minus 5 ° C. While stirring in an inert atmosphere, a solution of 0.065 g of acryloyl chloride in 15 ml of methylene chloride is added in portions, preventing the temperature of the reaction medium from rising. Leave to mix after the addition of acryloyl chloride at room temperature for 4 hours. Rinse with water, saturated sodium chloride solution. The organic phase is dried with anhydrous sodium sulfate, the solvent is removed under reduced pressure on a rotary evaporator. The solid residue was purified by silica gel column chromatography, eluent: petroleum ether / ethyl acetate 1: 1. Obtain 0.470 g (87%) of the claimed compound as a colorless solid, so pl. 165 ° C. Calculated,% C 53 H 62 N 2 O 11 : C, 70.49; H, 6.92; N, 3.10. Found,%: C, 70.45; H, 6.95; N, 3.19. 1 H NMR (400 MHz; CDCl 3 ): δ 7.69 (d, J 7.3, 2H), 7.51 (d, J 7.2, 2H), 7.35 (m, 4H), 7.26-7.21 (m, 2H), 6.35 ( d, J 17.0, 1H), 6.09 (dd, J 16.8, 10.4, 1H), 5.56 (d, J 10.3, 1H), 5.50 (d, J 11.1, 1H) 5.43 (d, J 8.4, 1H), 5.28 (s, J 5.7, 1H), 5.26 (s, 1H), 4.26 (dd, J 10.3, 7.2, 1H), 3.88 (ddd, J 23.0, 13.0, 7.0, 1H), 3.77 (s, 3H), 3.71 (s, 3H), 3.67-3.01 (m, 3H), 2.94 (dd, J 15.3, 10.1, 1H), 2.65-2.41 (m, 1H), 2.34 (s, 3H), 2.05 (d, J 0.5, 3H), 2.02 (s, 3H), 1.99-1.16 (m, 16H), 1.03 (ddd, J 13.4, 10.2, 3.2, 1H), 0.91 (d, J 12.2, 3H), 0.66 (s, 3H). 13 C NMR (100 MHz; CDCl 3 ): δ 14.33, 17.84, 17.90, 20.05, 20.17, 21.14, 23.27, 24.10, 26.32, 28.32, 29.30, 30.30, 31.18, 33.19, 33.26, 34.86, 34.89, 36.75, 47.51, 48.05, 49.29, 50.77, 52.34, 53.40, 59.00, 59.34, 62.44, 62.90, 96.54, 118.33, 118.64, 126.68, 127.46, 127.61, 127.68, 127.71, 128.16, 128.66, 128.84, 128.86, 128.89, 129.26, 129.59, 137.44, 138.34, 138.36, 165.38, 167.34, 168.27, 168.29, 170.64, 171.66, 204.06.

Пример 10. Определение цитотоксической активности на опухолевых клетках HeLa.Example 10. Determination of cytotoxic activity on HeLa tumor cells.

Культивирование клеток HeLa осуществлялось в стерильных условиях с использованием ламинарбокса Jouan (класс защиты II). Клетки культивировали на среде DMEM с глутамином («ПанЭко», Россия) с добавлением эмбриональной телячьей сыворотки (Invitrogen) в концентрации 10% и антибиотика-антимикотика пенициллина-стрептомицина-амфотерицина B в концентрации 100 мкг/мл (Sigma Aldrich) до получения конфлуэнтного монослоя. Инкубация осуществлялась при 37°С в условиях 5% продувки CO2. Культивировались параллельно 2 вида клеточной линии HeLa - с добавлением эстрадиола 10-8 и без добавления. Эстрадиол добавляли для создания модели гормонозависимого рака шейки матки. Клетки культивировались и пересевались с постоянной концентрацией эстрадиола за 4 недели до эксперимента.HeLa cells were cultured under sterile conditions using a Jouan laminar box (protection class II). Cells were cultured in glutamine-based DMEM (PanEco, Russia) supplemented with fetal calf serum (Invitrogen) at a concentration of 10% and antibiotic-antimycotic penicillin-streptomycin-amphotericin B at a concentration of 100 μg / ml (Sigma Aldrich) to obtain confluent monos . Incubation was carried out at 37 ° C under conditions of 5% purge of CO 2 . Two types of the HeLa cell line were cultivated in parallel - with the addition of estradiol 10 -8 and without it. Estradiol was added to create a model of hormone-dependent cervical cancer. Cells were cultured and reseeded with a constant concentration of estradiol 4 weeks before the experiment.

Пересев клеток (каждые 3-4 дня) осуществлялся в стерильных условиях следующим образом:Reseeding of cells (every 3-4 days) was carried out under sterile conditions as follows:

1. Удаление культуральной среды из флакона.1. Removing the culture medium from the vial.

2. Внесение 10 мл фосфатно-солевого буфера PBS (Sigma Aldrich) с последующей промывкой клеточного монослоя покачиванием флакона для вымывания ионов Са2+, дебриса и остатков сыворотки. Процедура повторялась 3 раза.2. Pipette 10 ml of PBS phosphate-buffered saline (Sigma Aldrich), followed by washing the cell monolayer by shaking the vial to wash out Ca 2+ ions , debris and serum residues. The procedure was repeated 3 times.

3. Внесение во флакон 1 мл концентрированного трипсина с последующим покачиванием флакона, и его быстрое удаление.3. The introduction into the vial of 1 ml of concentrated trypsin, followed by shaking of the vial, and its rapid removal.

4. Контроль перехода клеток из монослоя в суспензию под инвертированным микроскопом с параллельным равномерным постукиванием стенок флакона.4. Monitoring the transition of cells from the monolayer to the suspension under an inverted microscope with parallel uniform tapping of the walls of the vial.

5. Внесение 5-10 мл полной среды.5. The introduction of 5-10 ml of complete medium.

6. Из общего объема отобрать 1 мл клеточной суспензии перенести в новый стерильный флакон с полной средой для культивирования.6. From the total volume, select 1 ml of the cell suspension and transfer to a new sterile vial with complete culture medium.

7. Для дальнейшего культивирования клеток в культуральный флакон вносили среду (DMEM) 7-10 мл и помещали в термостат (37°C при 5% содержании CO2 в воздухе).7. For further cell culture, 7-10 ml of medium (DMEM) was added to the culture flask and placed in a thermostat (37 ° C at 5% CO 2 in air).

Проведение МТТ-теста оценки жизнеспособности клеток.Conducting MTT test for assessing cell viability.

Для оценки цитотоксического действия исследуемых соединений клетки высевали в 96-луночные планшеты в количестве 10 тыс.клеток на лунку. Соединения добавляли в диапазоне концентраций 10-9-10-2 М через 24 ч после высевания клеток, предварительно удалив среду инкубации и заменив ее средой без сыворотки для предотвращения лишней стимуляции факторами роста. На каждую концентрацию каждого соединения приходилось 4 лунки (4 повтора). Было проведено 3 независимых эксперимента. Через 72 ч с помощью реагента МТТ оценивалось количество жизнеспособных клеток спектрофотометрическим методом. Проводили оценку оптической плотности образцов на планшетном сканере Униплан-2000 версия 1.01 (Россия) при длине волны λ=530 нм. Отношение средней оптической плотности для данной концентрации вещества к средней оптической плотности в контроле принималось как доля выживших клеток.To assess the cytotoxic effect of the studied compounds, the cells were sown in 96-well plates in the amount of 10 thousand cells per well. Compounds were added in a concentration range of 10 -9 -10 -2 M 24 hours after seeding, previously removing the incubation medium and replacing it with serum-free medium to prevent excessive growth factor stimulation. For each concentration of each compound there were 4 wells (4 replicates). 3 independent experiments were conducted. After 72 hours, using MTT reagent, the number of viable cells was estimated by spectrophotometric method. The optical density of the samples was evaluated on a Uniplan-2000 flatbed scanner version 1.01 (Russia) at a wavelength of λ = 530 nm. The ratio of the average optical density for a given concentration of the substance to the average optical density in the control was taken as the proportion of surviving cells.

Оптическую плотность контрольных образцов принимали за 100% выживаемость клеток. Среднюю ингибиторную концентрацию (IC50, концентрацию вещества, при которой доля жизнеспособных клеток составляла 50%) рассчитывали по формуле IC50=a+b*arctg(1+(d-1)/2c) после аппроксимации кривой Доза/Эффект логистической функцией y=c*(1-tg((x-a)/b))+d, где x - концентрация вещества, методом наименьших квадратов по коэффициентам a, b, c и d.The optical density of the control samples was taken as 100% cell survival. The average inhibitory concentration (IC 50 , the concentration of the substance at which the proportion of viable cells was 50%) was calculated by the formula IC50 = a + b * arctg (1+ (d-1) / 2c) after approximating the Dose / Effect curve by the logistic function y = c * (1-tg ((xa) / b)) + d, where x is the concentration of the substance using the least squares method with respect to the coefficients a, b, c and d.

При обсчете результатов МТТ-теста достоверность отличия образцов от контроля оценивалась с помощью непараметрического критерия Манна-Уитни-Вилкоксона.When calculating the results of the MTT test, the reliability of the difference between the samples and the control was evaluated using the non-parametric Mann-Whitney-Wilcoxon test.

Результаты МТТ-тестов выявили цитотоксическую активность предлагаемых прегнановых стероидов по отношению к опухолевым клеткам человека линии Hela, нативным и эстрадиол-стимулированным. Значения IC50 представлены в Таблице 1The results of MTT tests revealed the cytotoxic activity of the proposed pregnan steroids in relation to Hela human tumor cells, native and estradiol-stimulated. IC 50 values are shown in Table 1

Figure 00000007
Figure 00000007

Figure 00000008
Figure 00000008

Figure 00000009
Figure 00000009

Claims (9)

1. Средство, обладающее цитотоксической активностью, общей формулы:1. A tool with cytotoxic activity of the General formula:
Figure 00000010
Figure 00000010
 где R выбран из следующей группы 1-бензилпирролидин-3-ил; 2-метоксикарбонил-5-фенилпирролидин-4-ил; 2-метоксикарбонил-5-(2-(трифторметил)фенил)пирролидин-4-ил; 2-метоксикарбонил-5-(2-бромфенил)пирролидин-4-ил; 1-акрилоил-2-метоксикарбонил-5-фенилпирролидин-4-ил; 1-(5-(метоксикарбонил)-2-фенилпирролидин-3-карбонил)-2-метоксикарбонил-5-фенилпирролидин-4-ил; 1-(1-акрилоил-5-(метоксикарбонил)-2-фенилпирролидин-3-карбонил)-2-метоксикарбонил-5-фенилпирролидин-4-ил; винил.where R is selected from the following group 1-benzylpyrrolidin-3-yl; 2-methoxycarbonyl-5-phenylpyrrolidin-4-yl; 2-methoxycarbonyl-5- (2- (trifluoromethyl) phenyl) pyrrolidin-4-yl; 2-methoxycarbonyl-5- (2-bromophenyl) pyrrolidin-4-yl; 1-acryloyl-2-methoxycarbonyl-5-phenylpyrrolidin-4-yl; 1- (5- (methoxycarbonyl) -2-phenylpyrrolidin-3-carbonyl) -2-methoxycarbonyl-5-phenylpyrrolidin-4-yl; 1- (1-acryloyl-5- (methoxycarbonyl) -2-phenylpyrrolidin-3-carbonyl) -2-methoxycarbonyl-5-phenylpyrrolidin-4-yl; vinyl. 2. Способ получения средства по п. 1, где R соответствует винил; 1-акрилоил-2-метоксикарбонил-5-фенилпирролидин-4-ил; 1-(1-акрилоил-5-(метоксикарбонил)-2-фенилпирролидин-3-карбонил)-2-метоксикарбонил-5-фенилпирролидин-4-ил, в котором проводят ацилирование 17-ацетата мепрегенола, либо 4-((8R,10R,13S,14S,17R)-17-ацетокси-17-ацетил-6,10,13-триметил-2,3,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-додекагидро-1Н-циклопента[а]фенантрен-3-ил)-2-метил-5-фенилпирролидин-2,4-дикарбоксилата, либо 4-((8R,10R,13S,14S,17R)-17-ацетокси-17-ацетил-6,10,13-триметил-2,3,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-додекагидро-1Н-циклопента[а]фенантрен-3-ил)-2-метил-1-(5-(метоксикарбонил)-2-фенилпирролидин-3-карбонил)-5-фенилпирролидин-2,4-дикарбоксилата акрилоилхлоридом в присутствии третичного амина.2. The method of obtaining funds according to claim 1, where R corresponds to vinyl; 1-acryloyl-2-methoxycarbonyl-5-phenylpyrrolidin-4-yl; 1- (1-acryloyl-5- (methoxycarbonyl) -2-phenylpyrrolidin-3-carbonyl) -2-methoxycarbonyl-5-phenylpyrrolidin-4-yl, in which acylation of mepregenol 17-acetate is performed, or 4 - ((8R, 10R, 13S, 14S, 17R) -17-acetoxy-17-acetyl-6,10,13-trimethyl-2,3,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodecahydro -1H-cyclopenta [a] phenanthren-3-yl) -2-methyl-5-phenylpyrrolidin-2,4-dicarboxylate, or 4 - ((8R, 10R, 13S, 14S, 17R) -17-acetoxy-17- acetyl-6,10,13-trimethyl-2,3,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-dodecahydro-1H-cyclopenta [a] phenanthren-3-yl) -2 -methyl-1- (5- (methoxycarbonyl) -2-phenylpyrrolidine-3-carbonyl) -5-phenylpyrrolidine-2,4-dicarboxylate with acryloyl chloride in the presence of and tertiary amine. 3. Способ получения по п. 2, в котором в качестве третичного амина используют триэтиламин.3. The production method according to claim 2, in which triethylamine is used as a tertiary amine. 4. Способ получения по п. 2, в котором 17-ацетат мепрегенола получают восстановлением ацетата мегестрола при комнатной температуре борогидридом натрия в тетрагидрофуране в нейтральной среде.4. The production method according to claim 2, in which mepregenol 17-acetate is obtained by reducing megestrol acetate at room temperature with sodium borohydride in tetrahydrofuran in a neutral medium. 5. Способ получения средства по п. 1, где R соответствует 1-бензилпирролидин-3-ил, в котором проводят взаимодействие 17α-ацетокси-3β-акрилоилокси-6-метилпрегна-4,6-диен-20-она с N-метоксиметил-N-(триметилсилилметил)бензиламином в присутствии трифторуксусной кислоты.5. The method of obtaining funds according to claim 1, where R corresponds to 1-benzylpyrrolidin-3-yl, in which the interaction of 17α-acetoxy-3β-acryloyloxy-6-methylpregn-4,6-dien-20-one with N-methoxymethyl -N- (trimethylsilylmethyl) benzylamine in the presence of trifluoroacetic acid. 6. Способ получения средства по п. 1, где R соответствует 2-метоксикарбонил-5-фенилпирролидин-4-ил; 2-метоксикарбонил-5-(2-(трифторметил)фенил)пирролидин-4-ил; 2-метоксикарбонил-5-(2-бромфенил)пирролидин-4-ил; 1-(5-(метоксикарбонил)-2-фенилпирролидин-3-карбонил)-2-метоксикарбонил-5-фенилпирролидин-4-ил, в котором осуществляют взаимодействие 17α-ацетокси-3β-акрилоилокси-6-метилпрегна-4,6-диен-20-она либо 4-((8R,10R,13S,14S,17R)-17-ацетокси-17-ацетил-6,10,13-триметил-2,3,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-додекагидро-1Н-циклопента[а]фенантрен-3-ил)-2-метил-1-акрилоил-5-фенилпирролидин-2,4-дикарбоксилата с замещенными метил-2-(бензилиденамино)ацетатами в присутствии кислоты Льюиса и третичного амина.6. The method of obtaining funds according to claim 1, where R corresponds to 2-methoxycarbonyl-5-phenylpyrrolidin-4-yl; 2-methoxycarbonyl-5- (2- (trifluoromethyl) phenyl) pyrrolidin-4-yl; 2-methoxycarbonyl-5- (2-bromophenyl) pyrrolidin-4-yl; 1- (5- (methoxycarbonyl) -2-phenylpyrrolidin-3-carbonyl) -2-methoxycarbonyl-5-phenylpyrrolidin-4-yl in which 17α-acetoxy-3β-acryloyloxy-6-methylpregna-4,6- is reacted dien-20-one or 4 - ((8R, 10R, 13S, 14S, 17R) -17-acetoxy-17-acetyl-6,10,13-trimethyl-2,3,8,9,10,11,12 , 13,14,15,16,17-dodecahydro-1H-cyclopenta [a] phenanthren-3-yl) -2-methyl-1-acryloyl-5-phenylpyrrolidin-2,4-dicarboxylate with substituted methyl 2- ( benzylidenamino) acetates in the presence of a Lewis acid and tertiary amine. 7. Способ получения по п. 6, в котором в качестве кислоты Льюиса используют ацетат серебра(I), а в качестве третичного амина - триэтиламин.7. The production method according to claim 6, in which silver (I) acetate is used as the Lewis acid, and triethylamine is used as the tertiary amine.
RU2019121480A 2019-07-09 2019-07-09 Pregnane steroids having cytotoxic activity, and methods for preparing them RU2710964C1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2019121480A RU2710964C1 (en) 2019-07-09 2019-07-09 Pregnane steroids having cytotoxic activity, and methods for preparing them

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2019121480A RU2710964C1 (en) 2019-07-09 2019-07-09 Pregnane steroids having cytotoxic activity, and methods for preparing them

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2710964C1 true RU2710964C1 (en) 2020-01-14

Family

ID=69171481

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2019121480A RU2710964C1 (en) 2019-07-09 2019-07-09 Pregnane steroids having cytotoxic activity, and methods for preparing them

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2710964C1 (en)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2292209C2 (en) * 2004-06-30 2007-01-27 Центр Химии Лекарственных Средств - Всероссийский Научно-Исследовательский Химико-Фармацевтический Институт Antitumor remedy taken per os and method for producing the remedy
RU2653507C1 (en) * 2017-07-12 2018-05-10 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО РНИМУ им. Н.И. Пирогова Минздрава России) METHOD OF PREPARATION OF 17α-ACETOXY-3β-BUTANOYLOXY-6-METHYL-PREGNA-4,6-DIEN-20-ONE FROM MEGESTROL ACETATE

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2292209C2 (en) * 2004-06-30 2007-01-27 Центр Химии Лекарственных Средств - Всероссийский Научно-Исследовательский Химико-Фармацевтический Институт Antitumor remedy taken per os and method for producing the remedy
RU2653507C1 (en) * 2017-07-12 2018-05-10 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО РНИМУ им. Н.И. Пирогова Минздрава России) METHOD OF PREPARATION OF 17α-ACETOXY-3β-BUTANOYLOXY-6-METHYL-PREGNA-4,6-DIEN-20-ONE FROM MEGESTROL ACETATE

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Е. В. Одинцова и др. "Исследование механизмов сенсибилизации опухолевых клеток новым синтетическим гестагеном бутеролом" Вестник РГМУ, N4, 2012, 69-74. *
К. А. Атрошкин и др. "Сочетанное действие гестагенов и доксорубицина на клетки культур опухолевых линий HeLa и MCF-7" Вестник РГМУ, N1, 2009, 57-61 *
О. А. Зейналов и др. "Новые высокоактивные гестагены прегнанового ряда" Российский химический журнал, т.XLIX, N1, 2005,118-124. *
П. В. Сергеев и др. "Изучение противоопухолевой активности нового гестагена 17α-ацетокси-3β-бутаноилокси-6-метил-прегна-4,6-диен-20-она" Экспериментальная и клиническая фармакология, т.67, N4, 2004, 54-56. О. А. Зейналов и др. "Новые высокоактивные гестагены прегнанового ряда" Российский химический журнал, т.XLIX, N1, 2005,118-124. К. А. Атрошкин *
П. В. Сергеев и др. "Изучение противоопухолевой активности нового гестагена 17α-ацетокси-3β-бутаноилокси-6-метил-прегна-4,6-диен-20-она" Экспериментальная и клиническая фармакология, т.67, N4, 2004, 54-56. О. А. Зейналов и др. "Новые высокоактивные гестагены прегнанового ряда" Российский химический журнал, т.XLIX, N1, 2005,118-124. К. А. Атрошкин и др. "Сочетанное действие гестагенов и доксорубицина на клетки культур опухолевых линий HeLa и MCF-7" Вестник РГМУ, N1, 2009, 57-61. Е. В. Одинцова и др. "Исследование механизмов сенсибилизации опухолевых клеток новым синтетическим гестагеном бутеролом" Вестник РГМУ, N4, 2012, 69-74. *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP0041355B1 (en) Novel erythromycin compounds
CN102883608A (en) Derivatives of betulin
KR20210032950A (en) Chemical method for preparing phenylpiperidinyl indole derivatives
HUT76343A (en) Sterol derivatives which applicable for regulation of meiosis
RU2410390C1 (en) 2,3-seco-derivatives of betulonic acid
Boto et al. One-pot synthesis of α-amino phosphonates from α-amino acids and β-amino alcohols
EP3464317B1 (en) Aminosteroid derivatives and process for producing same
RU2710964C1 (en) Pregnane steroids having cytotoxic activity, and methods for preparing them
US20100179108A1 (en) Synthesis of Sodium Narcistatin and Related Compounds
Powell et al. Sesbanine, a novel cytotoxic alkaloid from Sesbania drummondii
Bianchi et al. Neo-glycoconjugates: stereoselective synthesis of α-glycosyl amides via Staudinger ligation reactions
JP5759983B2 (en) Cycloartanone derivatives having anticancer activity
RU2358904C2 (en) Water-soluble aminofullerenes and methods of obtaining them
US4279898A (en) In vivo inhibitors of cholesterol biosynthesis
Curphey et al. New synthesis of azaserine
WO2006092326A2 (en) Mimetic peptides and the use thereof in the form of 20s, 26s and immunoproteasome inhibitors
US4215070A (en) N-(Phosphonoacetyl)-L-aspartic acid compounds and methods for their preparation
CS212221B2 (en) Method of making the (+) 3a, 7a-trans-4-/7,7-/ethylenedioxy /-oxooktyl/-7a beta-methylperhydroindane-1,5-dion
SU1450734A3 (en) Method of producing derivatives of benzoic acid
Sternson et al. Further evidence for nitrenium ion intermediacy in N-phenylhydroxylamine rearrangement to aminophenol
CN114907437B (en) Androstanol derivative with anti-tumor activity and preparation method and application thereof
CN110878074B (en) 2-amido-3, 4-dihydropyran-3-formamide analogue and preparation method and application thereof
US4267126A (en) N-(Phosphonoacetyl)-L-aspartic acid compounds
CN115536511A (en) 1, 4-dialdehyde ketone compound, and synthesis method and application thereof
CN112175032A (en) Rapid synthesis method of 5-substituted-4-sulfur-2 ', 3' -O-di-tert-butyldisilyl deoxynucleoside compound