RU2710160C1 - Nutrient medium for extracting pseudomonas aeruginosa from water bodies - Google Patents
Nutrient medium for extracting pseudomonas aeruginosa from water bodies Download PDFInfo
- Publication number
- RU2710160C1 RU2710160C1 RU2019119321A RU2019119321A RU2710160C1 RU 2710160 C1 RU2710160 C1 RU 2710160C1 RU 2019119321 A RU2019119321 A RU 2019119321A RU 2019119321 A RU2019119321 A RU 2019119321A RU 2710160 C1 RU2710160 C1 RU 2710160C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- aeruginosa
- medium
- nutrient medium
- water
- pseudomonas aeruginosa
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/38—Pseudomonas
- C12R2001/385—Pseudomonas aeruginosa
Abstract
Description
Изобретение относится к санитарной микробиологии, в частности, к разработке селективной питательной среды для выделения Pseudomonas aeruginosa из воды и может быть использовано при осуществлении контроля за качеством воды поверхностных водоемов, зон рекреации, сточных и питьевых вод.The invention relates to sanitary microbiology, in particular, to the development of a selective nutrient medium for the isolation of Pseudomonas aeruginosa from water and can be used in monitoring the quality of water in surface water bodies, recreation areas, wastewater and drinking water.
Pseudomonas aeruginosa (синегнойная палочка) - грамотрицательная свободноживущая бактерия, обитающая в воде и почве. Синегнойная палочка - условно-патогенный микроорганизм, возбудитель нозокомиальных инфекций, обладающий высокой устойчивостью к антибиотикам. Одним из характерных биологических признаков, отличающих синегнойную палочку от других микроорганизмов, является способность синтезировать водорастворимый пигмент - пиоцианин (производное феназинов), регистрация которого используется в рутинной практике при идентификации P. aeruginosa. Встречаются беспигментные штаммы P. aeruginosa, которые, по литературным данным, играют особую роль в синегнойно-кандидозных ассоциациях - распространенной этиологической причине полимикробных инфекций (А.В. Лазарева и соавт. Pseudomonas aeruginosa: патогенность, патогенез и патология. - Клин микробиол антимикроб химиотер. - 2015. - Том 17, №3.- С. 171, 180).Pseudomonas aeruginosa (Pseudomonas aeruginosa) is a gram-negative free-living bacterium that lives in water and soil. Pseudomonas aeruginosa is a conditionally pathogenic microorganism, a causative agent of nosocomial infections, which is highly resistant to antibiotics. One of the characteristic biological features that distinguish Pseudomonas aeruginosa from other microorganisms is the ability to synthesize a water-soluble pigment - pyocyanin (a phenazine derivative), the registration of which is used in routine practice to identify P. aeruginosa. Pigment-free P. aeruginosa strains are found, which, according to published data, play a special role in Pseudomonas candidiasis associations, a common etiological cause of polymicrobial infections (A.V. Lazareva et al. Pseudomonas aeruginosa: pathogenicity, pathogenesis and pathology. - Wedge microbiol antimicrobim . - 2015. - Volume 17, No. 3.- S. 171, 180).
Выделение P. aeruginosa из воды исследуемых водных объектов осуществляют в 2 этапа. На 1 этапе проводят посев воды в среду накопления, в которой могут расти не только P.aeruginosa, но и другие грамположительные и грамотрицательные микроорганизмы, обитающие в воде. На 2 этапе проводят высев из среды накопления на твердые дифференциально - диагностические среды, так как выделение штаммов P. aeruginosa на простых питательных средах (МПА, кровяной агар) затруднено в связи с обильным ростом сопутствующих бактерий, угнетающих рост синегнойной палочки.Isolation of P. aeruginosa from the water of the studied water bodies is carried out in 2 stages. At the 1st stage, water is sown in the accumulation medium, in which not only P.aeruginosa, but also other gram-positive and gram-negative microorganisms living in the water can grow. At stage 2, they are seeded from the accumulation medium onto solid differential diagnostic media, since the isolation of P. aeruginosa strains on simple nutrient media (MPA, blood agar) is difficult due to the abundant growth of concomitant bacteria that inhibit the growth of Pseudomonas aeruginosa.
В микробиологической практике для выделения P. aeruginosa из воды используют среду «Блеск», в состав которой входят питательный агар, обезжиренное молоко, L-аргинин, селективный агент - трифенилтетразолий хлорид (ТТХ). Данная среда обеспечивает подавление роста сопутствующих микроорганизмов, но не дает возможности визуального наблюдения выработки синегнойными бактериями пигмента пиоцианина. Использование в составе среды молока требует дополнительной термической обработки при ее изготовлении (Руководство по медицинской микробиологии. Общая и санитарная микробиология. Книга I / под ред. Лабинской А.С., Волиной Е.Г. - М.: БИНОМ, 2008. - С. 1017).In microbiological practice, “Gloss” medium is used to isolate P. aeruginosa from water, which includes nutrient agar, skim milk, L-arginine, and a selective agent, triphenyltetrazolium chloride (TTX). This environment provides suppression of the growth of concomitant microorganisms, but does not provide the possibility of visual observation of the production of pyocyanin pigment by pseudomonas bacteria. The use of milk as a part of the medium requires additional heat treatment during its manufacture (Manual of Medical Microbiology. General and Sanitary Microbiology. Book I / edited by Labinskaya AS, Volina EG - M .: BINOM, 2008. - С . 1017).
Известна среда Кинг А для обнаружения и дифференциации P. aeruginosa от других Pseudomonas на основе выделения пиоцианина. Среда содержит панкреатический гидролизат желатина в качестве источника азота, глицерин - источника углерода, другие питательные вещества. Сульфат калия и хлорид магния обеспечивают активацию выделения пиоцианина (Руководство по медицинской микробиологии. Общая и санитарная микробиология. Книга I / под ред. Лабинской А.С., Волиной Е.Г. - М.: БИНОМ, 2008. - С. 1016).King A medium is known for the detection and differentiation of P. aeruginosa from other Pseudomonas based on the isolation of pyocyanin. The medium contains pancreatic hydrolyzate of gelatin as a nitrogen source, glycerin as a carbon source, and other nutrients. Potassium sulfate and magnesium chloride provide activation of the release of pyocyanin (Guide to medical microbiology. General and sanitary microbiology. Book I / edited by Labinskaya AS, Volina EG - M .: BINOM, 2008. - P. 1016) .
Для выделения P. aeruginosa из клинических образцов и дифференциации их от других псевдомонад на основании формирования пигмента пиоцианина используют BD Pseudomonas Isolation Agar. Агар содержит пептон Bacto (источник углерода и азота), противомикробный агент иргазан (Irgasan), избирательно ингибирующий сопутствующие грамположительные и грамотрицательные микроорганизмы, глицерин в качестве источника энергии, а также сульфат калия и хлорид магния - для активации выделения пиоцианина (Инструкция по применению - готовая к использованию среда в чашках РА-257002.04 Ред.: April 2013 http//www.bd.com/resource.aspx?IDX=25359).To isolate P. aeruginosa from clinical samples and differentiate them from other pseudomonads based on the formation of the pyocyanin pigment, BD Pseudomonas Isolation Agar is used. Agar contains Bacto peptone (a source of carbon and nitrogen), an antimicrobial agent, irgasan (Irgasan), which selectively inhibits concomitant gram-positive and gram-negative microorganisms, glycerin as an energy source, and potassium sulfate and magnesium chloride to activate the release of pyocyanin (Instructions for use - ready for use, medium in cups RA-257002.04 Ed .: April 2013 http // www.bd.com / resource.aspx? IDX = 25359).
Ведущими зарубежными фирмами выпускаются твердые питательные среды на основе панкреатического гидролизата желатина, мясного пептона и лактозы, содержащие цетримид для подавления роста сопутствующих микроорганизмов, калий сернокислый и магний хлористый для активации выделения пиоцианина и глицерин. Среды предназначены для селективного выделения и идентификации бактерий P. aeruginosa из клинического материала: Cetrimide Agar - Pseudomonas Selective Agar Base, фирмы Fluka (Scientific research 2003/2004, стр. 361) и ООО «ГЕМ» (Среды бактериологические. Каталог 2012); Cetrimide Agar Base HiMedia (HiMedia Laboratories Pvt. Limited (Индия), http:www.himedialabs.com).Leading foreign companies produce solid nutrient media based on pancreatic hydrolyzate of gelatin, meat peptone and lactose, containing cetrimide to inhibit the growth of concomitant microorganisms, potassium sulfate and magnesium chloride to activate the release of pyocyanin and glycerin. The media are intended for the selective isolation and identification of P. aeruginosa bacteria from clinical material: Cetrimide Agar - Pseudomonas Selective Agar Base, Fluka (Scientific research 2003/2004, p. 361) and GEM LLC (Bacteriological media. Catalog 2012); Cetrimide Agar Base HiMedia (HiMedia Laboratories Pvt. Limited (India), http://www.himedialabs.com).
Недостатком вышеуказанных сред является то, что, наряду с угнетением сопутствующей грамположительной и грамотрицательной микрофлоры ингибиторами, входящими в их состав, происходит одновременное угнетение роста ряда штаммов синегнойной палочки. Кроме того, селективное действие данных сред основано на активации пигментообразования, что затрудняет выделение и диагностику атипичных, не образующих пигмент штаммов синегнойной палочки, особенно при проведении широкомасштабного эпидемиологического мониторинга. При этом указанные отечественные и зарубежные питательные среды многокомпонентны, имеют сложный состав, включающий дорогостоящие компоненты, не всегда доступны.The disadvantage of the above environments is that, along with the inhibition of the concomitant gram-positive and gram-negative microflora by the inhibitors included in their composition, there is a simultaneous inhibition of the growth of a number of strains of Pseudomonas aeruginosa. In addition, the selective effect of these media is based on the activation of pigmentation, which makes it difficult to isolate and diagnose atypical non-pigment strains of Pseudomonas aeruginosa, especially when conducting large-scale epidemiological monitoring. Moreover, these domestic and foreign nutrient media are multicomponent, have a complex composition, including expensive components, are not always available.
Наиболее близким аналогом является Основа агара с цетримидом Cetrimide Agar Base (Pseudomonas Selective Agar Base), которая в настоящее время используется в практических лабораториях для выделения P. aeruginosa при исследовании как клинического материала, так и объектов внешней среды, пищевых продуктов и др. (Государственная Фармакопея Российской Федерации. XIII издание - М.: ФЭМБ, 2015. - 1.1.2.4. Методы биологического анализа; ГОСТ 54755-2011 «Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества бактерий вида Pseudomonas aeruginosa». М.: Стандартинформ, 2012 г.).The closest analogue is the Agar Base with cetrimide Cetrimide Agar Base (Pseudomonas Selective Agar Base), which is currently used in practical laboratories to isolate P. aeruginosa in the study of both clinical material and environmental objects, food products, etc. (State Pharmacopoeia of the Russian Federation. XIII edition - M .: FEMB, 2015. - 1.1.2.4. Methods of biological analysis; GOST 54755-2011 "Food products. Methods for detecting and determining the number of bacteria of the species Pseudomonas aeruginosa." M: Standardartinform, 2012 )
Данная среда имеет следующий состав, г/л:This medium has the following composition, g / l:
Готовят среду с цетримидом по нижеследующей прописи: навеску питательной среды с цетримидом (согласно прописи на этикетке) тщательно размешивают в 1,0 л дистиллированной воды, содержащей 10 мл глицерина. Нагревают и кипятят 2 мин для полного расплавления агара, фильтруют через ватно-марлевый фильтр. Стерилизуют автоклавированием при 1,1 атм (120±2°С) в течение 15 мин. Среду охлаждают до температуры 45-50°С, разливают в стерильные чашки Петри. После застывания среды чашки подсушивают. Готовая среда опалесцирующая, светло-янтарного цвета.Prepare the medium with cetrimide according to the following recipe: a weighed sample of the nutrient medium with cetrimide (according to the recipe on the label) is thoroughly mixed in 1.0 l of distilled water containing 10 ml of glycerol. Heated and boiled for 2 minutes to completely melt the agar, filtered through a cotton-gauze filter. Sterilize by autoclaving at 1.1 atm (120 ± 2 ° C) for 15 minutes. The medium is cooled to a temperature of 45-50 ° C, poured into sterile Petri dishes. After the medium has solidified, the plates are dried. Ready medium opalescent, light amber color.
Недостатком данной среды является то, что, во-первых, все-таки происходит угнетение роста ряда штаммов синегнойной палочки, и, во-вторых, на данной среде не всегда возможно выделить и диагностировать атипичные беспигментные штаммы синегнойной палочки. Кроме того, среда многокомпонентная, производится зарубежными фирмами, дорогостоящая.The disadvantage of this environment is that, firstly, growth of a number of Pseudomonas aeruginosa strains is still inhibited, and secondly, it is not always possible to isolate and diagnose atypical pigmentless Pseudomonas aeruginosa strains on this medium. In addition, the environment is multicomponent, produced by foreign companies, expensive.
Целью предлагаемого изобретения является дифференциально-диагностическая питательная среда для выделения P. aeruginosa из воды, которая обеспечит преимущественный рост синегнойной палочки при максимальном подавлении роста сопутствующей микрофлоры, а также позволит выделить атипичные беспигментные штаммы синегнойной палочки.The aim of the invention is a differential diagnostic nutrient medium for the isolation of P. aeruginosa from water, which will ensure the preferential growth of Pseudomonas aeruginosa while maximally suppressing the growth of concomitant microflora, and also allow isolation of atypical pigmentless strains of Pseudomonas aeruginosa.
Поставленная задача достигается введением в состав мясо-пептонного агара глюкозы, сульфата меди - CuSO4×5H2O и глицерина в определенных концентрациях. В предлагаемой питательной среде МПА и глюкоза являются источником углерода и азота, необходимых для роста бактерий. Сульфат меди - CuSO4×5H2O (медный купорос, выпускаемый отечественной промышленностью в виде сухого кристаллического порошка синего цвета и применяемый как асептическое и фунгицидное средство) ингибирует рост грамположительных и грамотрицательных бактерий, отличных от Pseudomonas. Глицерин служит источником энергии и способствует выработке пигмента пиоцианина.The problem is achieved by introducing glucose, copper sulfate - CuSO 4 × 5H 2 O and glycerol in certain concentrations into the meat-peptone agar. In the proposed nutrient medium, MPA and glucose are the source of carbon and nitrogen necessary for bacterial growth. Copper sulfate - CuSO 4 × 5H 2 O (blue vitriol produced by the domestic industry as a dry crystalline powder of blue color and used as an aseptic and fungicidal agent) inhibits the growth of gram-positive and gram-negative bacteria other than Pseudomonas. Glycerin serves as a source of energy and promotes the production of the pigment pyocyanin.
При высеве из среды накопления на предлагаемую дифференциально-диагностическую среду достигается максимальное подавление роста сопутствующей микрофлоры без угнетения роста P. aeruginosa, что обеспечивает также возможность выделения и диагностики беспигментных штаммов синегнойной палочки за счет преимущественного роста P. aeruginosa.When plating from the accumulation medium onto the proposed differential diagnostic medium, the maximum suppression of the growth of concomitant microflora without growth inhibition of P. aeruginosa is achieved, which also provides the possibility of isolation and diagnosis of pigmentless Pseudomonas aeruginosa strains due to the predominant growth of P. aeruginosa.
Предлагаемая питательная среда состоит (г/л):The proposed culture medium consists (g / l):
рН - 7,0±0,2pH - 7.0 ± 0.2
Данная среда при температуре инкубации 42°С в термостате в течение 18-24 час позволяет изолировать из микробных ассоциаций синегнойные бактерии при максимальном подавлении роста других микроорганизмов.This medium at an incubation temperature of 42 ° C in a thermostat for 18-24 hours allows isolating Pseudomonas bacteria from microbial associations with maximum suppression of the growth of other microorganisms.
Способ приготовления питательной среды: Предварительно готовят мясо-пептонный агар с 1% глюкозы. Для этого 20 г агара микробиологического и 10 г глюкозы растворяют в 1000 мл дистиллированной воды, нагревают и кипятят 2 мин до полного растворения агара, разливают в стерильные флаконы по 100 мл и стерилизуют автоклавированием при 1,1 атм (120±2°С) в течение 20 мин. К 100 мл стерильного, расплавленного мясо-пептонного агара с глюкозой, охлажденного до 60°С, добавляют 0,014 г сульфата меди (CuSO4×5H2O) и 1,0 мл глицерина. Содержимое энергично перемешивают до полного растворения и разливают в стерильные чашки Петри (не менее 20-25 мл). Перед посевом чашки с. питательной средой подсушивают. Среду готовят в лаборатории непосредственно перед использованием. Готовая среда слегка зеленоватого цвета.The method of preparation of the nutrient medium: Pre-cooked meat-peptone agar with 1% glucose. For this, 20 g of microbiological agar and 10 g of glucose are dissolved in 1000 ml of distilled water, heated and boiled for 2 minutes until the agar is completely dissolved, poured into sterile 100 ml vials and sterilized by autoclaving at 1.1 atm (120 ± 2 ° С) in within 20 minutes To 100 ml of sterile, molten meat-peptone agar with glucose, cooled to 60 ° C, add 0.014 g of copper sulfate (CuSO 4 × 5H 2 O) and 1.0 ml of glycerol. The contents are vigorously stirred until completely dissolved and poured into sterile Petri dishes (at least 20-25 ml). Before sowing a cup with. the nutrient medium is dried. The medium is prepared in the laboratory immediately before use. Ready medium is slightly greenish.
На данной среде формируются крупные или средние полупрозрачные колонии P. aeruginosa (1,5-3 мм) серо-зеленого или сине-зеленого цвета, с выделением специфического сладковатого запаха жасмина.On this medium, large or medium translucent colonies of P. aeruginosa (1.5-3 mm) of gray-green or blue-green color are formed, with the release of a specific sweetish smell of jasmine.
Пример 1. Подбор концентраций ингредиентов в составе предлагаемой питательной средыExample 1. The selection of concentrations of ingredients in the composition of the proposed nutrient medium
Питательную среду готовят по вышеуказанному способу, используя разные концентрации сульфата меди (Таблица 1).The nutrient medium is prepared according to the above method, using different concentrations of copper sulfate (table 1).
При подборе концентраций ингредиентов использовали тест-штаммы: P. aeruginosa 10145; S. paratyphi В 506; E. coli 3912/41.When selecting the concentrations of the ingredients used test strains: P. aeruginosa 10145; S. paratyphi B 506; E. coli 3912/41.
Приготовление микробных взвесей. Суточные агаровые культуры тест-штаммов смывают 0,9% стерильным изотоническим раствором хлорида натрия, доводят взвеси до 10 ед. по оптическому стандарту мутности, что соответствует 109 микробных клеток в 1 мл. Затем серийными десятикратными разведениями доводят до содержания 100 тыс. (10-4), 10 тыс. (10-5) и 1 тыс. (10-6) микробных клеток в 1 мл взвеси. Высев производят из разведений 10-4, 10-5, 10-6 по 0,1 мл на чашки со средой, содержащей разные концентрации сульфата меди и инкубируют при температуре 37 и 42°С в течение 18-24 час.Preparation of microbial suspensions. The daily agar cultures of the test strains were washed off with 0.9% sterile isotonic sodium chloride solution, and the suspension was adjusted to 10 units. according to the optical turbidity standard, which corresponds to 10 9 microbial cells in 1 ml. Then, serial ten-fold dilutions are adjusted to the content of 100 thousand (10 -4 ), 10 thousand (10 -5 ) and 1 thousand (10 -6 ) microbial cells in 1 ml of suspension. Sowing is carried out from dilutions of 10 -4 , 10 -5 , 10 -6 of 0.1 ml per cup with a medium containing different concentrations of copper sulfate and incubated at a temperature of 37 and 42 ° C for 18-24 hours.
Данные по ростовым свойствам среды представлены в таблицах 2 и 3.Data on the growth properties of the medium are presented in tables 2 and 3.
Рост P. aeruginosa в количестве, соответствующем посевной дозе микроорганизма, отмечен на среде с минимальным и оптимальным содержанием сульфата меди. При этом преимущественный рост псевдомонад регистрировали при температуре 42°С. На питательной среде с максимальным содержанием сульфата меди наблюдали угнетение роста синегнойных бактерий (единичные колонии, отсутствие роста).The growth of P. aeruginosa in an amount corresponding to the seed dose of the microorganism was noted on a medium with a minimum and optimal content of copper sulfate. In this case, the predominant growth of pseudomonads was recorded at a temperature of 42 ° C. On a nutrient medium with a maximum content of copper sulfate, growth inhibition of Pseudomonas bacteria was observed (single colonies, lack of growth).
Рост других микроорганизмов (E. coli и S. paratyphi В) зависит от посевной дозы микроорганизма и на среде с оптимальным содержанием сульфата меди наблюдали значительное угнетение роста. При максимальном содержании сульфата меди рост сопутствующих бактерий отсутствует. При температуре 42°С на данной среде растут только синегнойные палочки.The growth of other microorganisms (E. coli and S. paratyphi B) depends on the seed dose of the microorganism and significant growth inhibition was observed on the medium with the optimal content of copper sulfate. At the maximum content of copper sulfate, the growth of concomitant bacteria is absent. At a temperature of 42 ° C, only Pseudomonas aeruginosa grow on this medium.
При необходимости, принадлежность колоний к P. aeruginosa подтверждают дополнительными видоспецифическими тестами (образование цитохромоксидазы, флуоресцирующих пигментов и др.).If necessary, the colonies belonging to P. aeruginosa is confirmed by additional species-specific tests (the formation of cytochrome oxidase, fluorescent pigments, etc.).
Пример 2. Определение ростовых и морфологических характеристик референс-штаммов на предлагаемой питательной среде (в зависимости от температурных условий культивирования)Example 2. Determination of growth and morphological characteristics of reference strains on the proposed nutrient medium (depending on the temperature conditions of cultivation)
Для оценки предлагаемой питательной среды использовали культуры музейных штаммов: P. aeruginosa 10145; S. aureus 209-Р 6538; E. coli 3912/41; Sh. sonnei (S-форм); S. paratyphi В 506; K. pneumoniae 79. Референс-штаммы готовят вышеуказанным способом. Высев производят из разведения 10-6. Посевы инкубируют аэробно при температуре 37±1°С и 42±1°С в течение 18-24 час. Учитывают форму и характер роста колоний. Ростовые и морфологические характеристики референс-штаммов на предлагаемой питательной среде в зависимости от температурных условий культивирования представлены в таблице 4.To assess the proposed nutrient medium used culture museum strains: P. aeruginosa 10145; S. aureus 209-P 6538; E. coli 3912/41; Sh. sonnei (S-forms); S. paratyphi B 506; K. pneumoniae 79. Reference strains are prepared by the above method. Sowing is produced from a breeding of 10 -6 . Crops are incubated aerobically at a temperature of 37 ± 1 ° C and 42 ± 1 ° C for 18-24 hours. Take into account the shape and nature of the growth of the colonies. Growth and morphological characteristics of reference strains on the proposed nutrient medium depending on the temperature conditions of cultivation are presented in table 4.
Предлагаемая питательная среда для выделения псевдомонад, содержащая мясо-пептонный агар, глюкозу, сульфат меди и глицерин в соответствующих концентрациях, обеспечивает рост P. aeruginosa в виде колоний серо-зеленого или сине-зеленого цвета (1,5-3 мм в диаметре). Рост сопутствующих грамположительных и грамотрицательных бактерий при 37±1°С в значительной степени ингибируется, при 42±1°С - рост сопутствующих бактерий отсутствовал.The proposed nutrient medium for the isolation of pseudomonads, containing meat-peptone agar, glucose, copper sulfate and glycerin in appropriate concentrations, provides the growth of P. aeruginosa in the form of colonies of gray-green or blue-green color (1.5-3 mm in diameter). The growth of concomitant gram-positive and gram-negative bacteria at 37 ± 1 ° С is significantly inhibited, at 42 ± 1 ° С - there was no growth of concomitant bacteria.
Пример 3. Сравнение эффективности предлагаемой питательной среды и прототипа при выделении P. aeruginosa из объектов водной средыExample 3. Comparison of the effectiveness of the proposed nutrient medium and prototype in the selection of P. aeruginosa from objects of the aquatic environment
Изучена сравнительная эффективность предлагаемой питательной среды и прототипа для выделения P. aeruginosa из воды поверхностных водоемов и сточных вод.The comparative effectiveness of the proposed nutrient medium and prototype for the isolation of P. aeruginosa from surface water and wastewater was studied.
Исследование объектов окружающей среды на P. aeruginosa состояло из двух этапов: накопления P. aeruginosa в жидкой питательной среде для обогащения, выделения P. aeruginosa на плотной питательной дифференциально-диагностической среде с последующей идентификацией Р. aeruginosa с использованием ограниченного набора наиболее надежных тестов.The study of environmental objects on P. aeruginosa consisted of two stages: accumulation of P. aeruginosa in a liquid nutrient medium for enrichment, isolation of P. aeruginosa in a dense nutrient differential diagnostic medium, followed by identification of P. aeruginosa using a limited set of the most reliable tests.
Посев проб воды реки Дон и сточной воды производили в одну из общепринятых сред накопления: Магниевую среду или Жидкую питательную среду накопления (MP 01-19/98-17 от 06.11.1995 г.) и культивировали при температуре 42°С в течение 18-24 час. Высев из среды накопления на предлагаемую питательную среду производили бактериологической петлей штрихами для получения изолированных колоний. Изучено 45 проб воды реки Дон и 45 проб сточной воды (таблица 4).Sowing samples of water from the Don River and wastewater was carried out in one of the generally accepted storage media: Magnesium medium or Liquid nutrient storage medium (MP 01-19 / 98-17 of November 6, 1995) and cultivated at a temperature of 42 ° C for 18- 24 hours Sowing from the accumulation medium onto the proposed nutrient medium was carried out using a bacteriological loop with strokes to obtain isolated colonies. 45 samples of water from the Don River and 45 samples of wastewater were studied (table 4).
При использовании предлагаемой питательной среды с сульфатом меди P.aeruginosa изолирована из воды реки Дон в 86,7±5,1% проб, из сточной воды - в 93,3±3,7% проб. Полученные результаты значительно превысили выявляемость данного микроорганизма при использовании агара с цетримидом: из воды реки Дон - 71,1±6,8%, из сточных вод - 77,8±6,2%. Рост других микроорганизмов не наблюдали.When using the proposed nutrient medium with copper sulfate, P.aeruginosa was isolated from the water of the Don River in 86.7 ± 5.1% of samples, from wastewater - in 93.3 ± 3.7% of samples. The results obtained significantly exceeded the detectability of this microorganism when using agar with cetrimide: from the water of the Don River - 71.1 ± 6.8%, from wastewater - 77.8 ± 6.2%. The growth of other microorganisms was not observed.
Принадлежность колоний к P. aeruginosa, а также выявление атипичных беспигментных штаммов данного микроорганизма на предлагаемой питательной среде подтверждали дополнительными видоспецифическими тестами (образование цитохромоксидазы, флуоресцирующих пигментов и др.).The belonging of the colonies to P. aeruginosa, as well as the identification of atypical pigment-free strains of this microorganism on the proposed nutrient medium was confirmed by additional species-specific tests (the formation of cytochrome oxidase, fluorescent pigments, etc.).
При использовании предлагаемой питательной среды с сульфатом меди P. aeruginosa изолирована из воды реки Дон в 86,7±5,1% проб, из сточной воды - в 93,3±3,7% проб, что значительно превысило выявляемость данного микроорганизма при использовании агара с цетримидом: из воды реки Дон - 71,1±6,8%, из сточных вод - 77,8±6,2%. Роста других микроорганизмов не наблюдали. Принадлежность колоний к P. aeruginosa, а также выявление атипичных беспигментных штаммов микроорганизма на предлагаемой питательной среде, подтверждали дополнительными видоспецифическими тестами (образование цитохромоксидазы, флуоресцирующих пигментов и др.).When using the proposed nutrient medium with copper sulfate, P. aeruginosa was isolated from the Don river in 86.7 ± 5.1% of samples, from wastewater - in 93.3 ± 3.7% of samples, which significantly exceeded the detection of this microorganism when using agar with cetrimide: from the water of the Don River - 71.1 ± 6.8%, from wastewater - 77.8 ± 6.2%. No growth of other microorganisms was observed. The belonging of the colonies to P. aeruginosa, as well as the identification of atypical pigment-free microorganism strains on the proposed nutrient medium, was confirmed by additional species-specific tests (the formation of cytochrome oxidase, fluorescent pigments, etc.).
Результаты проведенных исследований показали преимущества предлагаемой питательной среды с сульфатом меди при выделении P. aeruginosa из воды различной степени биологического загрязнения. Использование данной среды в практике санитарно-бактериологических исследований позволит адекватно оценить степень эпидемической опасности водных объектов.The results of the studies showed the advantages of the proposed nutrient medium with copper sulfate in the isolation of P. aeruginosa from water of varying degrees of biological pollution. The use of this medium in the practice of sanitary-bacteriological research will adequately assess the degree of epidemic hazard of water bodies.
Claims (2)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2019119321A RU2710160C1 (en) | 2019-06-19 | 2019-06-19 | Nutrient medium for extracting pseudomonas aeruginosa from water bodies |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2019119321A RU2710160C1 (en) | 2019-06-19 | 2019-06-19 | Nutrient medium for extracting pseudomonas aeruginosa from water bodies |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2710160C1 true RU2710160C1 (en) | 2019-12-24 |
Family
ID=69022765
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2019119321A RU2710160C1 (en) | 2019-06-19 | 2019-06-19 | Nutrient medium for extracting pseudomonas aeruginosa from water bodies |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2710160C1 (en) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2076530C1 (en) * | 1994-02-28 | 1997-03-27 | Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии | NUTRITION FOR ISOLATING PSEUDOMONAS AERUGINOSA |
| RU2076529C1 (en) * | 1994-02-28 | 1997-03-27 | Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии | NUTRIENT ENVIRONMENT FOR ISSUING PSEUDOMONAD |
| RU2387714C2 (en) * | 2008-03-26 | 2010-04-27 | Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Кубанский государственный аграрный университет" | Method of preparing growing medium for revealing blue pus bacillus |
| RU2530549C1 (en) * | 2013-05-23 | 2014-10-10 | Федеральное бюджетное учреждение науки Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии (ФБУН ГНЦ ПМБ) | Dry selective nutrient medium for isolation of pseudomonades |
-
2019
- 2019-06-19 RU RU2019119321A patent/RU2710160C1/en active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2076530C1 (en) * | 1994-02-28 | 1997-03-27 | Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии | NUTRITION FOR ISOLATING PSEUDOMONAS AERUGINOSA |
| RU2076529C1 (en) * | 1994-02-28 | 1997-03-27 | Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии | NUTRIENT ENVIRONMENT FOR ISSUING PSEUDOMONAD |
| RU2387714C2 (en) * | 2008-03-26 | 2010-04-27 | Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Кубанский государственный аграрный университет" | Method of preparing growing medium for revealing blue pus bacillus |
| RU2530549C1 (en) * | 2013-05-23 | 2014-10-10 | Федеральное бюджетное учреждение науки Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии (ФБУН ГНЦ ПМБ) | Dry selective nutrient medium for isolation of pseudomonades |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Michel et al. | Production of viable cultures of Flavobacterium psychrophilum: approach and control | |
| Islam et al. | Isolation and identification of Escherichia coli and Salmonella from poultry litter and feed | |
| Rodrigues et al. | Rapid selective enumeration of bacteria in foods using a microcolony epifluorescence microscopy technique | |
| Waseem et al. | Isolation and identification of major mastitis causing bacteria from clinical cases of bovine mastitis in Kashmir Valley | |
| RU2710160C1 (en) | Nutrient medium for extracting pseudomonas aeruginosa from water bodies | |
| Adamu et al. | Prevalence of bacteria isolates in water and some biota of Lapai-Agaie Dam, Nigeria | |
| WO2010035458A1 (en) | Culture medium for determining total viable cell count | |
| Godwin et al. | Comparative study on bacterial load in intestine, gills and skin of cultured African catfish (Clarias gariepinus) from different locations in Rivers State, Nigeria | |
| Chauhan et al. | Microbiological Methods for Water, Soil and Air Analysis | |
| Sarkar et al. | A brief research study on novel antibiotic producing isolate from VIT Lake, Vellore, Tamil Nadu | |
| RU2709136C1 (en) | Nutrient medium for pseudomonas aeruginosa release | |
| RU2715329C1 (en) | Nutrient medium for separation and identification of non-fermenting bacteria | |
| RU2510416C1 (en) | Nutritive medium for extraction of lactobacteria | |
| Choudhary et al. | Antimicrobial activity of certain drugs against the different isolates found in bovine fecal samples | |
| Kaur et al. | Bacteriological analysis of fruits and vegetables from local market of Chunni Kalan, Fatehgarh Sahib Punjab | |
| JP6417866B2 (en) | Campylobacter detection medium | |
| Kumar et al. | Antagonistic activity of bacterial species isolated from soil against fungi | |
| Fatima | Isolation of antibiotic producing bacteria from soil and identification by 16S rRNA gene sequencing | |
| Okorie et al. | Assessment of Antibacterial Activity of Exopolysaccharide Produced from Pseudomonas aeruginosa strain S16 on Environmental and Clinical Bacteria | |
| AL-Fatlawi et al. | Production Pyocyanin from Pseudomonas Aeruginosa and the Inhibitory Effect of the against a Number of Pathogenic Bacteria | |
| RU2340676C2 (en) | Method of allocation and identification of enterohemorraghic intestinal bacterium e coli o157:h7 in biological material from animals | |
| Alagoa et al. | Surface bacterial flora of Tilapia (Oreochromis niloticus) in open markets of Yenagoa, Bayelsa state | |
| Iduh et al. | Antimicrobial Activities of Sokoto Prepared Black Soap (Sabulun Salo) on Clinical Isolates of Candida albicans, Staphylococcus aureus and Escherichia coli. | |
| Hadke et al. | Anti-Microbial Activity of Antibiotic Produced From Fungi by Fermentation Process. | |
| Sawarkar et al. | Morphological and Biochemical Characterization of Endophytic Bacteria from Leaves of Tamarind (Tamarindus indica) |