RU2705290C1 - Microbial preparation for bioremediation of soil contaminated with oil and oil products - Google Patents
Microbial preparation for bioremediation of soil contaminated with oil and oil products Download PDFInfo
- Publication number
- RU2705290C1 RU2705290C1 RU2019114526A RU2019114526A RU2705290C1 RU 2705290 C1 RU2705290 C1 RU 2705290C1 RU 2019114526 A RU2019114526 A RU 2019114526A RU 2019114526 A RU2019114526 A RU 2019114526A RU 2705290 C1 RU2705290 C1 RU 2705290C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- oil
- microorganisms
- soil
- strains
- bioremediation
- Prior art date
Links
Abstract
Description
Изобретение относится к экологии и биотехнологии, а именно к технологическому использованию ассоциации микроорганизмов для очистки почв, загрязненных нефтью и нефтепродуктами.The invention relates to ecology and biotechnology, and in particular to the technological use of the association of microorganisms for cleaning soils contaminated with oil and oil products.
Нефть и нефтепродукты являются одними из самых распространенных загрязнителей окружающей среды. Разливы нефти, вызываемые авариями при ее добыче и переработке, при разгерметизации нефтепроводов наносят ощутимый вред экосистеме. Ежегодные потери составляют около 5% от всей добытой нефти. При этом основную техногенную нагрузку испытывает почва. За счет своей значительной адсорбирующей поверхности она способна аккумулировать загрязнения в больших количествах, что приводит к изменению агрохимических, физических, микробиологических характеристик и утрате плодородия. В связи с тем, что процесс естественного восстановления почвы загрязненной нефтью очень долгий и может составлять от 10 до 30 лет, особенно в условиях Сибири, где продолжительное время сохраняется пониженная температура, необходима разработка технологий очистки почвы от нефти. В настоящее время наиболее эффективным, экономичным, экологически безопасным методом по очистке нефтезагрязненных территорий является биоремедиация на основе микроорганизмов, способных разлагать углеводороды нефти. Для ликвидации последствий разливов нефти необходим поиск и выделение аборигенных штаммов, поскольку они адаптированы к региональным почвенно-климатическим условиям. Есть сведения, указывающие, что у эндофитных микроорганизмов встречаемость плазмид, ответственных за деградацию нефти, выше, чем у свободноживущих почвенных микроорганизмов. А в ризосфере растений численность микроорганизмов, способных к деструкции загрязнителя, больше, чем в отдаленных от нее слоях почвы. Поэтому целесообразно при биоремедиации нефтезагрязненной территории использовать эндофитные и ризосферные бактерии как перспективные нефтедеструкторы.Oil and petroleum products are among the most common environmental pollutants. Oil spills caused by accidents during its production and refining, during depressurization of oil pipelines, cause significant damage to the ecosystem. Annual losses account for about 5% of all oil produced. In this case, the main technogenic load is experienced by the soil. Due to its significant adsorbing surface, it is able to accumulate pollution in large quantities, which leads to a change in agrochemical, physical, microbiological characteristics and loss of fertility. Due to the fact that the process of natural restoration of soil with contaminated oil is very long and can take from 10 to 30 years, especially in Siberia, where the temperature remains for a long time, it is necessary to develop technologies for cleaning the soil from oil. Currently, the most effective, economical, environmentally friendly method for cleaning oil-contaminated areas is bioremediation based on microorganisms that can decompose oil hydrocarbons. To eliminate the consequences of oil spills, it is necessary to search for and isolate indigenous strains, since they are adapted to regional soil and climatic conditions. There is evidence indicating that the occurrence of plasmids responsible for oil degradation in endophytic microorganisms is higher than in free-living soil microorganisms. And in the rhizosphere of plants, the number of microorganisms capable of degradation of the pollutant is greater than in the soil layers remote from it. Therefore, it is advisable to use endophytic and rhizospheric bacteria as promising oil destructors during bioremediation of oil-contaminated territory.
Известен способ получения и применения биопрепарата для очистки почв от загрязнений нефтью и нефтепродуктами (патент РФ №2378060, МПК В09С 1/10 C12N 1/26, опубликован 10.01.2010), Биопрепарат содержит биомассу следующих штаммов бактерий: Pseudomonas sp. BKM В-2387Д, Pseudomonas putida BKM В-2380Д, Rhodococcus sp. BKM Ас-2532Д и Rhodococcus sp. BKM Ас-2533Д в равных соотношениях для жидкой формы и сухой формы биопрепарата. Для сухой формы биопрепарата он дополнительно содержит защитную среду при соотношении биомасса: защитная среда, равном 1:(1-1,5). Данный препарат получен путем глубинного культивирования смешанной бактериальной ассоциации штаммов бактерий на полусинтетической питательной среде. Общими признаками является наличие в препарате микроорганизмов, в том числе относящихся к роду Rhodococcus sp. Недостатками способа является невозможность разлагать высокие концентрации нефти, присутствие музейных культур микроорганизмов, неадаптированных под конкретные почвенно-климатические условия.There is a method of producing and using a biological product for cleaning soils from oil and oil products pollution (RF patent No. 2378060, IPC B09C 1/10 C12N 1/26, published January 10, 2010). The biological product contains biomass of the following bacterial strains: Pseudomonas sp. BKM B-2387D, Pseudomonas putida BKM B-2380D, Rhodococcus sp. BKM Ac-2532D and Rhodococcus sp. BKM Ac-2533D in equal proportions for the liquid form and the dry form of the biological product. For a dry form of a biological product, it additionally contains a protective environment with a ratio of biomass: protective environment equal to 1: (1-1.5). This drug was obtained by deep cultivation of a mixed bacterial association of bacterial strains in a semi-synthetic nutrient medium. Common signs are the presence of microorganisms in the preparation, including those belonging to the genus Rhodococcus sp. The disadvantages of the method is the inability to decompose high concentrations of oil, the presence of museum cultures of microorganisms that are not adapted to specific soil and climatic conditions.
Известен способ получения биопрепарата для очистки почвы и воды от нефти и нефтепродуктов (патент РФ 2361686, МПК В09С 1/10 C02F 3/34 C12N 1/26, опубликован 20.07.2009). Биопрепарат включает аэробные нефтеокисляющие микроорганизмы, минеральный питательный субстрат, нормальные парафины С12-С18 и твердый субстрат-носитель. В качестве аэробных нефтеокисляющих микроорганизмов он содержит ассоциацию представителей 4 родов и 8 видов: Bacillus cereus, В. subtilis, Actinomyces griseus, Act. glaucus, Pseudomonas fluorescens, Ps. mesentericus, Ps. denitrificans, Arthrobacter globiformis, выделенных из нефти Советского месторождения Западной Сибири в концентрации 2,5×109 КОЕ/г. В качестве субстрата-носителя содержит сферозолу и дополнительно содержит глюкозу. Общими признаками является наличие в препарате микроорганизмов, выделенных из нефти. Недостатком способа является большое количество видов микроорганизмов, что усложняет процесс производства препарата.A known method of producing a biological product for cleaning soil and water from oil and oil products (RF patent 2361686, IPC B09C 1/10 C02F 3/34 C12N 1/26, published on July 20, 2009). The biological product includes aerobic oil-oxidizing microorganisms, a mineral nutrient substrate, normal C12-C18 paraffins and a solid carrier substrate. As an aerobic oil-oxidizing microorganism, it contains an association of representatives of 4 genera and 8 species: Bacillus cereus, B. subtilis, Actinomyces griseus, Act. glaucus, Pseudomonas fluorescens, Ps. mesentericus, Ps. denitrificans, Arthrobacter globiformis isolated from oil from the Soviet field of Western Siberia at a concentration of 2.5 × 10 9 CFU / g. As a carrier substrate contains spherozole and additionally contains glucose. Common signs are the presence in the preparation of microorganisms isolated from oil. The disadvantage of this method is a large number of types of microorganisms, which complicates the production process of the drug.
Известен способ получения биопрепарата для очистки почвы и воды от нефти и нефтепродуктов (патент РФ 2337069, МПК C02F 3/34 В09С 1/10 C12N 1/26, опубликован 27.10.2008). Препарат включает в качестве нефтеразрушающих микроорганизмов ассоциацию четырех штаммов: Saccharomyces sp. ККМ ГНЦ ВБ «Вектор» № Y-1036, Bacillus sp. KKM ГНЦ ВБ «Вектор» № В-1040, Bacillus sp. ККМ ГНЦ ВБ «Вектор» № В-1039, Enterobacter sp. ККМ ГНЦ ВБ «Вектор» № В-1038 в виде смеси их равных объемов с содержанием каждого компонента не менее 2×1012 микробных тел/мл, а в качестве наполнителя - смесь равных количеств сахарозы, желатина и агарозы, при следующем соотношении компонентов, мас %: ассоциация четырех штаммов - 40-60, смесь сахарозы, желатина и агарозы - остальное. Общими признаками является то, что предлагаемый препарат работает при температуре от 4°С и выше. Недостатками способа являются высокая себестоимость и сложность наполнителя.A known method of obtaining a biological product for cleaning soil and water from oil and oil products (RF patent 2337069, IPC C02F 3/34 B09C 1/10 C12N 1/26, published October 27, 2008). The drug includes the association of four strains as oil-destroying microorganisms: Saccharomyces sp. KKM SSC WB "Vector" No. Y-1036, Bacillus sp. KKM SSC WB “Vector” No. B-1040, Bacillus sp. KKM SSC WB "Vector" No. В-1039, Enterobacter sp. KKM SSC VB "Vector" No. В-1038 in the form of a mixture of their equal volumes with each component containing at least 2 × 10 12 microbial bodies / ml, and as a filler, a mixture of equal amounts of sucrose, gelatin and agarose, in the following ratio of components, wt%: the association of four strains - 40-60, a mixture of sucrose, gelatin and agarose - the rest. Common signs is that the proposed drug works at a temperature of 4 ° C or higher. The disadvantages of the method are the high cost and complexity of the filler.
Известен способ получения и применения биопрепарата для очистки почв и воды от загрязнений нефтью и нефтепродуктами (патент РФ №2428469, МПК C12N 1/20 C02F 3/34 C09K 3/32 В09С 1/10, опубликован 10.09.2011). Биопрепарат содержит, мас. %: нормальные парафины С12-С18 - 1,0-1,5, щавелевокислый аммоний - 0,05-0,1, хлористый калий - 0,1-0,5, водосодержащую культуральную жидкость на основе аэробных нефтеокисляющих бактерий - до 100. В качестве аэробных нефтеокисляющих бактерий он содержит бактерии Mycobacterium phlei. Увеличение срока годности препарата до 3-х месяцев достигается за счет введения в препарат хлористого калия, который подавляет вредное воздействие продуктов жизнедеятельности бактерий на сами бактерии.A known method of producing and using a biological product for cleaning soils and water from oil and oil products pollution (RF patent No. 2428469, IPC C12N 1/20 C02F 3/34 C09K 3/32 B09C 1/10, published on 09/10/2011). The biological product contains, by weight. %: normal C12-C18 paraffins - 1.0-1.5, ammonium oxalate - 0.05-0.1, potassium chloride - 0.1-0.5, water-containing culture fluid based on aerobic oil-oxidizing bacteria - up to 100. As an aerobic oil-oxidizing bacteria, it contains the bacteria Mycobacterium phlei. An increase in the shelf life of the drug up to 3 months is achieved by introducing potassium chloride into the preparation, which suppresses the harmful effects of bacteria vital products on the bacteria themselves.
Общим признаком является наличие в препарате нефтеокисляющего микроорганизма.A common sign is the presence of an oil-oxidizing microorganism in the preparation.
Недостатком способа является жидкая форма препарата, что сокращает срок его годности и неудобно для транспортировки.The disadvantage of this method is the liquid form of the drug, which reduces its shelf life and is inconvenient for transportation.
Известен способ получения и применения биопрепарата для очистки почв и воды от загрязнений нефтью и нефтепродуктами (патент РФ №2365438, МПК В09С 1/10 C02F 3/34 C12N 1/26, опубликован 27.08.2009). Биопрепарат содержит в (мас. %): глицерин - 8-10, KNO3 - 0.360-0.367, KH2PO4 - 0.054-0.055, Na2HPO4⋅12H2O - 0.126-0.128, нефтеокисляющие микроорганизмы - не менее 3-1010 кл/мл препарата, вода - остальное. Общими признаками является отсутствие фитотоксичности биопрепарата, что позволяет применять фиторемедиацию на завершающих стадиях очистки. Недостатком способа является жидкая форма препарата, что сокращает срок его годности и неудобно для транспортировки.There is a method of producing and using a biological product for cleaning soils and water from oil and oil products pollution (RF patent No. 2365438, IPC B09C 1/10 C02F 3/34 C12N 1/26, published August 27, 2009). The biological product contains (wt.%): Glycerol - 8-10, KNO 3 - 0.360-0.367, KH 2 PO 4 - 0.054-0.055, Na 2 HPO 4 ⋅12H 2 O - 0.126-0.128, oil-oxidizing microorganisms - not less than 3 -10 10 cells / ml of the drug, water - the rest. Common signs are the lack of phytotoxicity of the biological product, which allows the use of phytoremediation at the final stages of purification. The disadvantage of this method is the liquid form of the drug, which reduces its shelf life and is inconvenient for transportation.
На сегодняшний день не существует микробного препарата, который был бы адаптирован для условий Восточной Сибири, эффективно разлагал нефть и нефтепродукты при высокой их концентрации и низких положительных температурах почвы.To date, there is no microbial preparation that would be adapted to the conditions of Eastern Siberia, effectively decompose oil and oil products at high concentrations and low positive soil temperatures.
Наиболее близким к предлагаемому является способ очистки и восстановления плодородия почвогрунтов, загрязненных нефтепродуктами (патент RU 2529735 МПК В09С 1/10, опубликован 27.09.2014), согласно которому готовят смесь из жидких бактериальных культур, в качестве которых берут штаммы Pseudomonas fluorescens ВКГ RCAM00538 с титром 10-13, КОА-4 Pseudomonas fluorescens ND-610 ВНИИСХМ с титром 10-10, Azotobacter chroococcum АИН RCAM00539 с титром 10-12, в соотношении соответственно 3:1,5:0,5-3:2:1, и осуществляют обработку отходов обогащения бурого угля путем добавления к ним полученной жидкой смеси штаммов с последующим перемешиванием и высушиванием приготовленной смеси в течение не менее 2,5 суток при комнатной температуре, при этом отходы обогащения бурого угля и предварительно подготовленную смесь штаммов берут в соответственно соотношении, масс. %: 40-50:50-60. Общими признаками является присутствие в препарате нескольких микроорганизмов разных видов, а также высушивание препарата без использования сушилок. Недостатком способа являются высокие титры микроорганизмов, применение индивидуальных питательных сред для культивирования каждого вида микроорганизмов.Closest to the proposed one is a method of cleaning and restoring fertility of soil contaminated with oil products (patent RU 2529735 IPC B09C 1/10, published September 27, 2014), according to which a mixture of liquid bacterial cultures is prepared, which are taken as strains of Pseudomonas fluorescens VKH RCAM00538 with a titer 10 -13 , KOA-4 Pseudomonas fluorescens ND-610 VNIISCH with a titer of 10 -10 , Azotobacter chroococcum AIN RCAM00539 with a titer of 10 -12 , in a ratio of 3: 1.5: 0.5-3: 2: 1, respectively, and carry out treatment of brown coal enrichment waste by adding to them the obtained liquid mixture of strains with following by stirring and drying the prepared mixture for at least 2.5 days at room temperature, the brown coal beneficiation waste and a previously prepared mixture of strains respectively taken in ratio by weight. %: 40-50: 50-60. Common signs are the presence in the preparation of several microorganisms of various species, as well as the drying of the preparation without the use of dryers. The disadvantage of this method is the high titers of microorganisms, the use of individual culture media for the cultivation of each type of microorganism.
Задачей предлагаемого технического решения является микробная очистка почвы от нефти и нефтепродуктов, производимая в течение теплого сезона без выемки почвы с места загрязнения.The objective of the proposed technical solution is the microbial cleaning of the soil from oil and oil products, produced during the warm season without excavation from the place of contamination.
Техническим результатом является повышение степени очистки почв от нефтезагрязнения, возвращение ее сельскохозяйственной ценности.The technical result is to increase the degree of soil purification from oil pollution, the return of its agricultural value.
Технический результат достигается тем, что микробный препарат на основе смеси бактериальных культур для биоремедиации почвы, загрязненной нефтью и нефтепродуктами, согласно изобретению, в качестве нефтеразрушающих микроорганизмов содержит ассоциацию трех штаммов: Rhodococcus erythropolis BKM Ac-2784D, Acinetobacter guillouiae B-3216D, Acinetobacter guillouiae B-3217D в виде смеси их равных объемов с содержанием каждого компонента не менее 1×105 КОЕ/г, предварительно высушенных до влажности не более 10%.The technical result is achieved by the fact that a microbial preparation based on a mixture of bacterial cultures for bioremediation of soil contaminated with oil and oil products, according to the invention, contains three strains as oil-destroying microorganisms: Rhodococcus erythropolis BKM Ac-2784D, Acinetobacter guillouiae B-3216D, Acinetobacter gu -3217D in the form of a mixture of their equal volumes with the content of each component of at least 1 × 10 5 CFU / g, pre-dried to a moisture content of not more than 10%.
При получении биопрепарата для биоремедиации почвы, загрязненной нефтью и нефтепродуктами, согласно изобретению, готовят смесь из жидких бактериальных культур, в качестве которых берут штаммы Rhodococcus erythropolis ВКМ Ac-2784D, Acinetobacter guillouiae ВКМ B-3216D, Acinetobacter guillouiae ВКМ B-3217D, выращиваемые глубинно на питательной среде следующего состава: NaNO3-3.0, KH2PO4⋅3H2O - 1.0, MgSO4⋅7H2O - 0.5, KCl - 0.5, FeSO4⋅7H2O - 0.01, C6H12O6 - 5.0, с добавлением сырой нефти или гексадекана в концентрации 2% в качестве единственного источника углерода. Для удобства использования, транспортировки, а также для увеличения срока годности биомасса микроорганизмов наносится на стерильный носитель, в качестве которого можно использовать цеолит с гранулами 1-3 мм. Высушивание приготовленной смеси происходит нестерильно при комнатной температуре в течение 1-3 суток до влажности не более 10%.Upon receipt of a biological product for bioremediation of soil contaminated with oil and oil products, according to the invention, a mixture of liquid bacterial cultures is prepared, for which strains of Rhodococcus erythropolis VKM Ac-2784D, Acinetobacter guillouiae VKM B-3216D, Acinetobacter guillouiae VKM B-32in are taken on a nutrient medium of the following composition: NaNO 3 -3.0, KH 2 PO 4 ⋅ 3H 2 O - 1.0, MgSO 4 ⋅ 7H 2 O - 0.5, KCl - 0.5, FeSO 4 ⋅ 7H 2 O - 0.01, C 6 H 12 O 6 - 5.0, with the addition of crude oil or hexadecane at a concentration of 2% as the sole carbon source. For ease of use, transportation, as well as to increase the shelf life, the biomass of microorganisms is applied to a sterile carrier, which can be used as a zeolite with granules 1-3 mm. Drying of the prepared mixture occurs unsterile at room temperature for 1-3 days to a moisture content of not more than 10%.
Штамм Rhodococcus erythropolis депонирован в коллекции ФБГУН ВКМ (г. Пущино) 12 октября 2017 г. под регистрационным номером ВКМ Ас-2784D.The strain Rhodococcus erythropolis was deposited in the collection of FBGUN VKM (Pushchino) on October 12, 2017 under registration number VKM Ac-2784D.
Штамм Acinetobacter guillouiae 1 депонирован в коллекции ФБГУН ВКМ (г. Пущино) 12 октября 2017 г. под регистрационным номером ВКМ В-3216D.The strain Acinetobacter guillouiae 1 was deposited in the collection of FBSI VKM (Pushchino) on October 12, 2017 under registration number VKM B-3216D.
Штамм Acinetobacter guillouiae 2 депонирован в коллекции ФБГУН ВКМ (г.Пущино) 12 октября 2017 г. под регистрационным номером ВКМ В-3217D.The strain Acinetobacter guillouiae 2 was deposited in the collection of FBGUN VKM (Pushchino) on October 12, 2017 under registration number VKM B-3217D.
Наличие в предлагаемом решении признаков, отличительных от признаков, характеризующих решение, принятое в качестве прототипа, позволяет сделать вывод о соответствии предлагаемого технического решения условию патентоспособности «новизна».The presence in the proposed solution of signs that are distinctive from the signs characterizing the decision made as a prototype allows us to conclude that the proposed technical solution meets the patentability condition of "novelty."
Сравнение предлагаемого технического решения с другими известными решениями в данной области, показывает следующее.Comparison of the proposed technical solutions with other known solutions in this field, shows the following.
Не выявлено в результате поиска и сравнительного анализа технических решений, характеризующихся аналогичной с предлагаемым решением совокупностью признаков, обеспечивающих при использовании достижение аналогичных результатов, что позволяет сделать вывод о соответствии предлагаемого технического решения условию патентоспособности «изобретательский уровень».It was not revealed as a result of a search and comparative analysis of technical solutions that are characterized by a combination of features that are similar to the proposed solution, which ensure the achievement of similar results when used, which allows us to conclude that the proposed technical solution meets the patentability condition of "inventive step".
Пример 1. Для получения биопрепарата брали штаммы Rhodococcus erythropolis BKM Ac-2784D, Acinetobacter guillouiae B-3216D, Acinetobacter guillouiae B-3217D.Example 1. To obtain a biological product, strains of Rhodococcus erythropolis BKM Ac-2784D, Acinetobacter guillouiae B-3216D, Acinetobacter guillouiae B-3217D were taken.
Штаммы микроорганизмов предварительно выделяли из эндо- и ризосферы растений нефтезагрязненной территории Заларинского района Иркутской области. Микроорганизмы адаптированы к почвенно-климатическим условиям Восточной Сибири. Микроорганизмы выращивали на питательной среде следующего состава (г/л): NaNO3-3.0, KH2PO4⋅3H2O - 1.0, MgSO4⋅7H2O - 0.5, KCl - 0.5, FeSO4⋅7H2O - 0.01, C6H12O6 - 5.0.Strains of microorganisms were previously isolated from the endo- and rhizosphere of plants of oil-contaminated territory of the Zalarinsky district of the Irkutsk region. Microorganisms are adapted to the soil and climatic conditions of Eastern Siberia. Microorganisms were grown on a nutrient medium of the following composition (g / l): NaNO 3 -3.0, KH 2 PO 4 ⋅3H 2 O - 1.0, MgSO4⋅7H 2 O - 0.5, KCl - 0.5, FeSO 4 ⋅7H 2 O - 0.01, C 6 H 12 O 6 - 5.0.
Приготовленную и простерилизованную в автоклаве при 1 атм. в течение 30 минут питательную среду вышеуказанного состава индивидуально инокулировали бактериальными штаммами Rhodococcus erythropolis BKM Ac-2784D, Acinetobacter guillouiae B-3216D, Acinetobacter guillouiae B-3217D в количестве 1 мл с титром 10-7 и ставили в термостат при температуре 26°С. Через 2 суток бактериальные культуры штаммов Rhodococcus erythropolis BKM Ac-2784D, Acinetobacter guillouiae B-3216D, Acinetobacter guillouiae B-3217D, B-3217D с титром 10-8 готовы для использования.Cooked and sterilized in an autoclave at 1 atm. within 30 minutes, the nutrient medium of the above composition was individually inoculated with bacterial strains of Rhodococcus erythropolis BKM Ac-2784D, Acinetobacter guillouiae B-3216D, Acinetobacter guillouiae B-3217D in an amount of 1 ml with a titer of 10 -7 and placed in a thermostat at a temperature of 26 ° C. After 2 days, the bacterial cultures of strains of Rhodococcus erythropolis BKM Ac-2784D, Acinetobacter guillouiae B-3216D, Acinetobacter guillouiae B-3217D, B-3217D with a titer of 10 -8 are ready for use.
Пример 2. Для получения биопрепарата заявленным способом брали полученные жидкие штаммы Rhodococcus erythropolis BKM Ac-2784D, Acinetobacter guillouiae B-3216D, Acinetobacter guillouiae B-3217D с титром 10-8 в соотношении 1:1:1 и смешивали между собой. Полученную жидкую смесь вышеуказанных штаммов приливали к стерильному носителю, в качестве которого использовали цеолит с размером частиц 1-3 мм. Полученную смесь перемешивали, раскладывали на горизонтальной поверхности и сушили при комнатной температуре в течение 2 суток.Example 2 For a biological product obtained by the inventive process taken liquid strains Rhodococcus erythropolis BKM Ac-2784D, Acinetobacter guillouiae B-3216D, Acinetobacter guillouiae B-3217D with a titer of 10 -8 in the ratio 1: 1: 1 and mixed together. The resulting liquid mixture of the above strains was poured onto a sterile carrier, which was used as a zeolite with a particle size of 1-3 mm The resulting mixture was stirred, laid out on a horizontal surface and dried at room temperature for 2 days.
Пример 3. Приготовленную вышеуказанным способом суспензию микроорганизмов 10-7 КОЕ/мл добавляли в питательную среду состава: (г/л): NaNO3 - 3.0, KH2PO4⋅3H2O - 1.0, MgSO4⋅7H2O - 0.5, KCl - 0.5, FeSO4⋅7H2O - 0.01, С6Н12О6 - 5.0. в количестве 1 мл. Туда же вносили сырую нефть в концентрации 5, 10, 20 и 50%. Смесь инкубировали при температуре 26°С на качалке. Через два месяца культивирования оценивали выживаемость микроорганизмов и степень деструкции нефти. Результаты приведены в таблице.Example 3. The suspension of microorganisms prepared by the above method 10 -7 CFU / ml was added to the nutrient medium of the composition: (g / l): NaNO 3 - 3.0, KH 2 PO 4 ⋅ 3H 2 O - 1.0, MgSO 4 ⋅ 7H 2 O - 0.5 , KCl - 0.5, FeSO 4 ⋅ 7H 2 O - 0.01, С 6 Н 12 О 6 - 5.0. in an amount of 1 ml. Crude oil was added there at a concentration of 5, 10, 20 and 50%. The mixture was incubated at a temperature of 26 ° C on a rocking chair. After two months of cultivation, the survival of microorganisms and the degree of degradation of the oil were evaluated. The results are shown in the table.
Пример 4. Приготовленную вышеуказанным способом суспензию микроорганизмов вносили в модельную почву, искусственно загрязненную нефтью в концентрации 10% (масс). В контейнеры помещали по 200 г почвы, затем загрязняли ее сырой нефтью, инокулировали суспензией микроорганизмов-деструкторов с титром 107 КОЕ/мл и тщательно перемешивали стерильным шпателем. Контролем служила загрязненная почва без внесения микроорганизмов. Инкубирование почвы проводили в течение 60 суток при температуре 25°С. Через два месяца в пробах почвы определяли убыль нефти. Для заявленного препарата она составляла 70%.Example 4. Prepared by the above method, a suspension of microorganisms was introduced into model soil artificially contaminated with oil at a concentration of 10% (mass). 200 g of soil was placed in containers, then contaminated with crude oil, inoculated with a suspension of destructive microorganisms with a titer of 10 7 CFU / ml and thoroughly mixed with a sterile spatula. The control was contaminated soil without the introduction of microorganisms. Incubation of the soil was carried out for 60 days at a temperature of 25 ° C. Two months later, oil loss was determined in soil samples. For the claimed drug, it was 70%.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2019114526A RU2705290C1 (en) | 2019-05-13 | 2019-05-13 | Microbial preparation for bioremediation of soil contaminated with oil and oil products |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2019114526A RU2705290C1 (en) | 2019-05-13 | 2019-05-13 | Microbial preparation for bioremediation of soil contaminated with oil and oil products |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2705290C1 true RU2705290C1 (en) | 2019-11-06 |
Family
ID=68500723
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2019114526A RU2705290C1 (en) | 2019-05-13 | 2019-05-13 | Microbial preparation for bioremediation of soil contaminated with oil and oil products |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2705290C1 (en) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2744094C1 (en) * | 2020-07-16 | 2021-03-02 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки СИБИРСКИЙ ИНСТИТУТ ФИЗИОЛОГИИ И БИОХИМИИ РАСТЕНИЙ СИБИРСКОГО ОТДЕЛЕНИЯ РОССИЙСКОЙ АКАДЕМИИ НАУК | Microbial preparation for protecting plants growing on oil-contaminated soils |
| RU2749108C1 (en) * | 2020-06-09 | 2021-06-04 | Ооо "Орбинокс" | Biological product for cleaning contaminated soil of railway track |
| RU2808248C1 (en) * | 2023-03-17 | 2023-11-28 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Санкт-Петербургский горный университет императрицы Екатерины II" | Composition for bioremediation of soil contaminated with oil and petroleum products |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2191752C2 (en) * | 1999-09-27 | 2002-10-27 | Государственный научный центр прикладной микробиологии | Biological preparation for removing crude oil and petroleum products from ground |
| RU2365438C2 (en) * | 2006-06-21 | 2009-08-27 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Кубанский государственный университет" | Biopreparation for soil and water purification from oil and oil products |
| RU2499636C1 (en) * | 2012-03-20 | 2013-11-27 | Общество с ограниченной ответственностью "Уралэкоресурс" (ООО "Уралэкоресурс") | Method of biological reclamation of oil-contaminated soils |
| RU2529735C1 (en) * | 2013-01-30 | 2014-09-27 | Общество с ограниченной ответственностью "Уралэкоресурс" (ООО "Уралэкоресурс") | Method of producing biopreparation for cleaning and restoring fertility of soil contaminated with petroleum products |
| RU2565549C2 (en) * | 2013-12-17 | 2015-10-20 | Общество с ограниченной ответственностью "Транснефть-Восток" (ООО "Транснефть-Восток") | Biopreparation for bioremediation of oil-contaminated soils for climatic conditions of far north |
-
2019
- 2019-05-13 RU RU2019114526A patent/RU2705290C1/en active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2191752C2 (en) * | 1999-09-27 | 2002-10-27 | Государственный научный центр прикладной микробиологии | Biological preparation for removing crude oil and petroleum products from ground |
| RU2365438C2 (en) * | 2006-06-21 | 2009-08-27 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Кубанский государственный университет" | Biopreparation for soil and water purification from oil and oil products |
| RU2499636C1 (en) * | 2012-03-20 | 2013-11-27 | Общество с ограниченной ответственностью "Уралэкоресурс" (ООО "Уралэкоресурс") | Method of biological reclamation of oil-contaminated soils |
| RU2529735C1 (en) * | 2013-01-30 | 2014-09-27 | Общество с ограниченной ответственностью "Уралэкоресурс" (ООО "Уралэкоресурс") | Method of producing biopreparation for cleaning and restoring fertility of soil contaminated with petroleum products |
| RU2565549C2 (en) * | 2013-12-17 | 2015-10-20 | Общество с ограниченной ответственностью "Транснефть-Восток" (ООО "Транснефть-Восток") | Biopreparation for bioremediation of oil-contaminated soils for climatic conditions of far north |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2749108C1 (en) * | 2020-06-09 | 2021-06-04 | Ооо "Орбинокс" | Biological product for cleaning contaminated soil of railway track |
| RU2744094C1 (en) * | 2020-07-16 | 2021-03-02 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки СИБИРСКИЙ ИНСТИТУТ ФИЗИОЛОГИИ И БИОХИМИИ РАСТЕНИЙ СИБИРСКОГО ОТДЕЛЕНИЯ РОССИЙСКОЙ АКАДЕМИИ НАУК | Microbial preparation for protecting plants growing on oil-contaminated soils |
| RU2808248C1 (en) * | 2023-03-17 | 2023-11-28 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Санкт-Петербургский горный университет императрицы Екатерины II" | Composition for bioremediation of soil contaminated with oil and petroleum products |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Mnif et al. | Biodegradation of diesel oil by a novel microbial consortium: comparison between co-inoculation with biosurfactant-producing strain and exogenously added biosurfactants | |
| Li et al. | Waste water produced from an oilfield and continuous treatment with an oil-degrading bacterium | |
| Das et al. | Crude petroleum-oil biodegradation efficiency of Bacillus subtilis and Pseudomonas aeruginosa strains isolated from a petroleum-oil contaminated soil from North-East India | |
| Vecchioli et al. | Use of selected autochthonous soil bacteria to enhanced degradation of hydrocarbons in soil | |
| Liu et al. | Bioremediation of petroleum-contaminated soil using aged refuse from landfills | |
| Mukherjee et al. | Bioremediation and reclamation of soil contaminated with petroleum oil hydrocarbons by exogenously seeded bacterial consortium: a pilot-scale study | |
| Prakash et al. | Biodegradation potential of petroleum hydrocarbons by bacteria and mixed bacterial consortium isolated from contaminated sites | |
| Rezaei Somee et al. | Bioremediation of oil-based drill cuttings by a halophilic consortium isolated from oil-contaminated saline soil | |
| Cubitto et al. | Bioremediation of crude oil–contaminated soil by immobilized bacteria on an agroindustrial waste—sunflower seed husks | |
| Bidja Abena et al. | Crude oil biodegradation by newly isolated bacterial strains and their consortium under soil microcosm experiment | |
| Bilen Ozyurek et al. | Biodegradation of petroleum by Klebsiella pneumoniae isolated from drilling fluid | |
| Atagana | Biodegradation of phenol, o-cresol, m-cresol and p-cresol by indigenous soil fungi in soil contaminated with creosote | |
| RU2705290C1 (en) | Microbial preparation for bioremediation of soil contaminated with oil and oil products | |
| El Mahdi et al. | Isolation and characterization of Pseudomonas sp. NAF1 and its application in biodegradation of crude oil | |
| Shiri et al. | Isolation and characterization of an n-hexadecane degrading Acinetobacter baumannii KSS1060 from a petrochemical wastewater treatment plant | |
| Hocinat et al. | Aerobic degradation of BTEX compounds by Streptomyces species isolated from activated sludge and agricultural soils | |
| Singh et al. | Pyrene degradation by biosurfactant producing bacterium Stenotrophomonas maltophilia | |
| Wemedo et al. | Biodegradation potential of bacteria isolated from crude oil polluted site in South South, Nigeria | |
| JP2006217819A (en) | Method for biologically decomposing organic chlorine compound/polycyclic aromatic compound | |
| Farajzadeh et al. | Isolation and characterization of a new Achromobacter sp. strain CAR1389 as a carbazole-degrading bacterium | |
| Baryshnikova et al. | Biodegradation of oil products by individual degrading strains and their associations in liquid media | |
| RU2636343C2 (en) | Method for production of biopreparation for soil purification from oil and oil products | |
| RU2615464C1 (en) | Preparation for soils and water bodies purification from oil products | |
| Shkidchenko et al. | Biodegradation of black oil by microflora of the Bay of Biscay and biopreparations | |
| RU2675940C1 (en) | Bacillus species vkm b-2815d bacteria strain - oil and petroleum product decomposer |