RU2696099C1 - Chemoenzymatic synthesis of 2,5-diketomorfoline derivatives - Google Patents
Chemoenzymatic synthesis of 2,5-diketomorfoline derivatives Download PDFInfo
- Publication number
- RU2696099C1 RU2696099C1 RU2019100644A RU2019100644A RU2696099C1 RU 2696099 C1 RU2696099 C1 RU 2696099C1 RU 2019100644 A RU2019100644 A RU 2019100644A RU 2019100644 A RU2019100644 A RU 2019100644A RU 2696099 C1 RU2696099 C1 RU 2696099C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- reaction mixture
- amino acid
- precipitate
- synthesis
- reaction
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
- A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D265/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one nitrogen atom and one oxygen atom as the only ring hetero atoms
- C07D265/28—1,4-Oxazines; Hydrogenated 1,4-oxazines
- C07D265/30—1,4-Oxazines; Hydrogenated 1,4-oxazines not condensed with other rings
- C07D265/32—1,4-Oxazines; Hydrogenated 1,4-oxazines not condensed with other rings with oxygen atoms directly attached to ring carbon atoms
Abstract
Description
Область техникиTechnical field
Изобретение относится к синтезу производных 2,5-дикетоморфолина, представляющих собой мономеры для получения биоразлагаемых полимеров полидепсипептидов (полиэфирамидов). Полимеры этого типа находят применение в медицине и могут быть использованы при хирургическом сшивании тканей, в качестве костных пластин, а также носителей для контролируемого высвобождения лекарственных веществ. Производные 2,5-дикетоморфолина представляют интерес как биологически активные соединения: они обладают антибиотической, антиоксидантной, антикоагулянтной, а также иммуностимулирующей активностью, проявляют ингибиторное действие по отношению к различным ферментам.The invention relates to the synthesis of derivatives of 2,5-diketomorpholine, which are monomers for the preparation of biodegradable polymers of polydepsipeptides (polyetheramides). Polymers of this type are used in medicine and can be used in surgical stitching of tissues, as bone plates, as well as carriers for the controlled release of drugs. Derivatives of 2,5-diketomorpholine are of interest as biologically active compounds: they have antibiotic, antioxidant, anticoagulant, as well as immunostimulatory activity, and exhibit inhibitory effects against various enzymes.
Уровень техникиState of the art
В научной и патентной литературе известны способы получения производных 2,5-дикетоморфолина методами классического органического многостадийного синтеза, включающие стадии постановки и снятия защитных групп и использующие активированные производные амино- и оксикислот. Все известные способы можно свести к двум основным подходам: первоначальное образование амидной связи, а затем циклизация в лактон, и наоборот, этерификация с последующей циклизацией в лактам [Smelcerovic A. et al. J. of Amino Acids. 2014, 46, P. 825.]. Чаще всего авторами используются альфа-галогензамещенные производные галогенангидридов карбоновых кислот [CN 108299332, 20-07-2018; Cook A. et al. J. Chem. Soc. 1949, P. 2347.; Smelcerovic A et al. J. Mol. Struct. 2011, 985, P. 397.], N-защищенные производные аминокислот [Pedras M. et al. Org. Lett. 2004, 6, P. 4615.; Kagamizono T. et al. J. Antibiot. 1995, 48, P. 1407.], O-защищенные производные аминокислот [Hughes A. et al. J. Org. Chem. 2005, 70, P. 3079.]. В патентном документе [US 005817751, 06-10-1998] сообщается о применении для синтеза предшественника производного 2,5-дикетоморфолина реакции Уги, заключающейся в создании N-замещенной амидной связи путем конденсации четырех компонентов: оксикислоты, аминокислоты, альдегида или кетона и изонитрила, причем аминокислота ковалентно связана сложноэфирной связью через карбоксигруппу с твердой подложкой, содержащей гидроксильные группы. Последующая циклизация предшественника приводит к образованию целевого продукта с регенерацией подложки.In the scientific and patent literature, there are known methods for the preparation of 2,5-diketomorpholine derivatives by the methods of classical organic multistage synthesis, including the steps of setting and removing protective groups and using activated derivatives of amino and hydroxy acids. All known methods can be reduced to two main approaches: the initial formation of an amide bond, and then cyclization to lactone, and vice versa, esterification followed by cyclization to lactam [Smelcerovic A. et al. J. of Amino Acids. 2014, 46, P. 825.]. Most often, the authors use alpha-halogen-substituted derivatives of carboxylic acid halides [CN 108299332, 20-07-2018; Cook A. et al. J. Chem. Soc. 1949, P. 2347 .; Smelcerovic A et al. J. Mol. Struct. 2011, 985, P. 397.], N-protected derivatives of amino acids [Pedras M. et al. Org. Lett. 2004, 6, P. 4615 .; Kagamizono T. et al. J. Antibiot. 1995, 48, P. 1407.], O-protected derivatives of amino acids [Hughes A. et al. J. Org. Chem. 2005, 70, P. 3079.]. In the patent document [US 005817751, 06-10-1998], the use of the Ugi reaction for the creation of an N-substituted amide bond by condensation of four components: hydroxy acid, amino acid, aldehyde or ketone and isonitrile is used for the synthesis of a precursor of a derivative of 2,5-diketomorpholine wherein the amino acid is covalently linked via an ester bond through a carboxy group to a solid support containing hydroxyl groups. Subsequent cyclization of the precursor leads to the formation of the target product with the regeneration of the substrate.
Известные способы получения производных 2,5-дикетоморфолина имеют существенные ограничения. При необходимости получения энантиомерно чистых соединений нужно использовать оптически чистые исходные вещества. Для региоселективного превращения необходимы активированные реагенты. В связи с полифункциональностью исходных реагентов возникает необходимость использования защитных групп, что значительно усложняет синтез и делает его многостадийным, вследствие чего общий выход конечного продукта не превышает 50%, несмотря на довольно высокие выходы конкретных стадий синтеза. Применение биокатализа для синтеза подобных соединений позволяет преодолеть указанные ограничения и получить конечный продукт со значительно более высоким выходом и энантиомерной чистотой более 99,9%.Known methods for producing derivatives of 2,5-diketomorpholine have significant limitations. If it is necessary to obtain enantiomerically pure compounds, optically pure starting materials must be used. Activated reagents are required for regioselective conversion. Due to the multifunctionality of the starting reagents, the need arises to use protective groups, which greatly complicates the synthesis and makes it multi-stage, as a result of which the total yield of the final product does not exceed 50%, despite the rather high yields of specific stages of the synthesis. The use of biocatalysis for the synthesis of such compounds allows one to overcome these limitations and obtain the final product with a significantly higher yield and enantiomeric purity of more than 99.9%.
Наиболее близким к заявленному решению является способ, описанный в патентном документе [CN 108299332, 20-07-2018], авторы которого синтезировали (3R,6R и 3S,6S)-3-(бензилоксикарбонил-этилен)-6-метил-морфолин-2,5-дион в две стадии исходя из 2-бромпропионилхлорида и гамма-бензил-глутаминовой кислоты, причем в зависимости от способа очистки общий выход продукта оказался невелик и составил 3,4-34,8%. Кроме того, получение 2-бромпропионилхлорида также потребует проведения реакций с участием опасных и агрессивных реагентов. Способ синтеза 2,5-дикетоморфолинов, указанный в патентном документе [US 005817751, 06-10-1998], с применением реакции Уги описан выше и имеет сходные ограничения.Closest to the claimed solution is the method described in the patent document [CN 108299332, 20-07-2018], the authors of which synthesized (3R, 6R and 3S, 6S) -3- (benzyloxycarbonyl-ethylene) -6-methyl-morpholine- 2,5-dione in two stages based on 2-bromopropionyl chloride and gamma-benzyl-glutamic acid, and depending on the purification method, the total yield of the product was small and amounted to 3.4-34.8%. In addition, the preparation of 2-bromopropionyl chloride will also require reactions involving hazardous and aggressive reagents. The method for the synthesis of 2,5-diketomorpholines specified in the patent document [US 005817751, 06-10-1998] using the Ugi reaction is described above and has similar limitations.
Раскрытие изобретенияDisclosure of invention
Технической проблемой, на решение которой направлено изобретение, является разработка простого в исполнении способа синтеза производных 2,5-дикетоморфолина, обеспечивающего высокий выход целевого продукта и его энантиомерную чистоту.The technical problem to which the invention is directed is the development of a simple-to-execute method for the synthesis of derivatives of 2,5-diketomorpholine, providing a high yield of the target product and its enantiomeric purity.
Заявлен способ синтеза производных 2,5-дикетоморфолина, общей формулыThe claimed method of synthesis of derivatives of 2,5-diketomorpholine, General formula
где R1=Н, СН3, арил; R2=Н, СН3, арил, CH2-арил, изопропил, пропил, бутил, оксиметил, меткаптометил, 1-оксиэтил, 1-метилпропил, 2-метилпропил, индол-3-ил-метил, карбамоилметил, карбамоилэтил, карбоксиметил, карбоксиэтил, 4-аминобутил, 3-гуанидилпропил, 2-(метилсульфанил)-этил исходя из аминокислот и амидов оксикислот, включающий стадию образования амидной связи с использованием пенициллинацилазы и последующую циклизацию под действием активирующего агента, например, N,N'-дициклогексилкарбодиимида. Способ заключается в том, что готовят насыщенные водные растворы аминокислоты, являющейся нуклеофилом, и амида оксикислоты, являющегося ацильным донором, в мольном соотношении компонентов от 5:1 до 1:3, доводят рН до 9-11, добавляют биокатализатор - растворимую, иммобилизованную или мутантную форму пенициллинацилазы для обеспечения необходимого превращения, выдерживают реакционную смесь при 10-35°С до достижения максимального выхода N-оксиацил-аминокислоты, доводят рН до 2-3, полученную N-оксиацил-аминокислоту экстрагируют органическим растворителем, добавляют эквимолярное количество N,N'-дициклогексилкарбодиимида, смесь выдерживают до образования осадка N,N'-дициклогексилмочевины, осадок отделяют, оставшийся раствор упаривают и выделяют твердый остаток целевого продукта. При этом количество биокатализатора для оптимального превращения определяют эмпирически при отборе проб реакционной смеси в модельном эксперименте, проводимом в малом объеме с соблюдением аналогичных экспериментальных условий и концентраций, и слежении за накоплением целевого продукта. Время, необходимое для достижения максимального выхода N-оксиацил-аминокислоты определяют эмпирически в модельном эксперименте, проводимом в малом объеме с соблюдением аналогичных экспериментальных условий и концентраций, при слежении за накоплением целевого продукта. Для осуществления синтеза в качестве органического растворителя используют этилацетат, бутилацетат, изобутилацетат, гептан, четыреххлористый углерод, хлороформ, дихлорметан, ацетонитрил, циклопентилметиловый эфир или их смеси, при этом удаление растворителя осуществляют отгонкой или в вакууме. Отделение осадка проводят фильтрацией через фильтровальную бумагу, ткань или пористый фильтр, а также декантацией.where R 1 = H, CH 3 , aryl; R 2 = H, CH 3 , aryl, CH 2 -aryl, isopropyl, propyl, butyl, hydroxymethyl, methaptomethyl, 1-hydroxyethyl, 1-methylpropyl, 2-methylpropyl, indol-3-yl-methyl, carbamoylmethyl, carbamoylethyl, carboxymethyl , carboxyethyl, 4-aminobutyl, 3-guanidylpropyl, 2- (methylsulfanyl) ethyl starting from amino acids and amides of hydroxyacids, which includes the step of forming an amide bond using penicillin acylase and subsequent cyclization under the action of an activating agent, for example, N, N'-dicyclohexylcarbodiimide. The method consists in preparing saturated aqueous solutions of the amino acid, which is the nucleophile, and the hydroxy acid amide, which is the acyl donor, in a molar ratio of components from 5: 1 to 1: 3, adjust the pH to 9-11, add a biocatalyst — soluble, immobilized or a mutant form of penicillin acylase to ensure the necessary conversion, the reaction mixture is maintained at 10-35 ° С until the maximum yield of N-hydroxyacyl amino acid is reached, the pH is adjusted to 2-3, the obtained N-hydroxyacyl amino acid is extracted with an organic solution Ithel added an equimolar amount of N, N'-dicyclohexylcarbodiimide, the mixture was allowed to stand until a precipitate N, N'-dicyclohexylurea precipitate is separated, the remaining solution is evaporated and the solid residue was isolated the title product. In this case, the amount of biocatalyst for optimal conversion is determined empirically when sampling the reaction mixture in a model experiment conducted in a small volume, observing similar experimental conditions and concentrations, and monitoring the accumulation of the target product. The time required to achieve the maximum yield of N-hydroxyacyl amino acids is determined empirically in a model experiment conducted in a small volume, observing similar experimental conditions and concentrations, while monitoring the accumulation of the target product. To carry out the synthesis, ethyl acetate, butyl acetate, isobutyl acetate, heptane, carbon tetrachloride, chloroform, dichloromethane, acetonitrile, cyclopentyl methyl ether or mixtures thereof are used as an organic solvent, while the solvent is removed by distillation or in vacuum. The sediment is separated by filtration through filter paper, cloth or a porous filter, as well as by decantation.
В качестве биокатализатора могут быть использованы различные формы (растворимые, иммобилизованные, мутантные) бактериального фермента пенициллинацилазы из Escherichia coli, Alcaligenes faecalis, Kluyvera citrophila, Providencia rettgeri, Arthrobacter viscosus, Bacillus megaterium и других источников сходные по свойствам и способные катализировать образование амидной связи между аминогруппой аминокислоты и карбоксильной группой оксикислоты (схема 1). Известно, что многочисленные методы иммобилизации пенициллинацилаз, как и других ферментов, позволяют сохранить каталитические свойства фермента, а также делают возможным повторное применение биокатализатора, часто приводят к его стабилизации, а также позволяют улучшить эффективность процесса и его экономические показатели [R.A. Sheldon et al. Chem. Soc. Rev. 2013, 42, P. 6223; A.I. Kallenberg et al. Adv. Synth. Catal. 2005, 347, P. 905; N.A. Pchelintsev et al. J. Mol. Catal. B: Enzymatic 2009, 56, Р. 202]. Биокаталитическая реакция ацильного переноса протекает стереоселективно: ацилированию преимущественно подвергается L-энантиомер аминокислоты, что позволяет включать в реакцию рацемическую смесь аминокислоты, а не индивидуальный энантиомер. Кроме того, биокаталитическая реакция протекает в диапазоне температур от 10 до 35°С в мягких условиях в водной среде, без использования органических растворителей и образования токсичных отходов. В качестве ацильного донора используется амид оксикислоты в виде рацемической смеси или индивидуального энантиомера, в качестве нуклеофила - аминокислота в виде рацемической смеси или индивидуального энантиомера, мольное соотношение ацильного донора и нуклеофила варьируется от 1:5 до 3:1, соответственно. Значение рН реакционной смеси варьируется от 9 до 11. Время проведения реакции пропорционально содержанию фермента в реакционной смеси и обеспечивается использованием определенного количества биокатализатора, которое подбирается эмпирически для каждой пары реагентов исходя из потребности провести реакцию за необходимый промежуток времени по технологическим, экономическим или иным соображениям, например, по результатам предварительного кинетического эксперимента, проводимого в тех же условиях, что и препаративный синтез, но в небольшом масштабе, например, в 1-2 мл реакционной смеси со слежением за кинетикой реакции, заключающимся в отборе проб и определении концентрации компонентов в каждый момент времени, например, с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии. Выбор оптимальных условий, концентраций реагентов и количества биокатализатора возможен также при использовании других подходов, например, микрореакторов или расчетов, основанных на фундаментальном понимании кинетических закономерностей процесса [R. Wohlgemuth et al. Trends Biotechnol. 2015, 33, P. 302; J.L. van Roon et al. Biotechnol. Adv. 2007, 25, Р. 137]. Применение биокатализа позволяет достичь очень высокого выхода N-оксиацил-аминокислоты. Продукт реакции выделяется из реакционной смеси экстракцией органическим растворителем, например, этилацетатом в кислой среде, например, при рН 2-3. При необходимости отделения непрореагировавшего ацильного донора после биокаталитического превращения, например, в случае проведения процесса при соотношениях ацильного донора по отношению к нуклеофилу больше чем 1:1, рН реакционной смеси доводят до 12±1 и извлекают непрореагировавший ацильный донор экстракцией органическим растворителем.As a biocatalyst, various forms (soluble, immobilized, mutant) of the bacterial enzyme penicillin acylase from Escherichia coli, Alcaligenes faecalis, Kluyvera citrophila, Providencia rettgeri, Arthrobacter viscosus, Bacillus megaterium and other sources of amide amino acids and the carboxy group of hydroxy acids (Scheme 1). It is known that numerous methods of immobilization of penicillin acylases, as well as other enzymes, allow preserving the catalytic properties of the enzyme, and also make it possible to reuse the biocatalyst, often lead to its stabilization, and also improve the efficiency of the process and its economic indicators [R.A. Sheldon et al. Chem. Soc. Rev. 2013, 42, p. 6223; A.I. Kallenberg et al. Adv. Synth. Catal. 2005, 347, p. 905; N.A. Pchelintsev et al. J. Mol. Catal. B: Enzymatic 2009, 56, P. 202]. The biocatalytic acyl transfer reaction proceeds stereoselectively: the amino acid L-enantiomer is predominantly acylated, which allows the racemic mixture of amino acids to be included in the reaction, rather than the individual enantiomer. In addition, the biocatalytic reaction proceeds in the temperature range from 10 to 35 ° C under mild conditions in the aquatic environment, without the use of organic solvents and the formation of toxic waste. The hydroxy acid amide in the form of a racemic mixture or an individual enantiomer is used as the acyl donor, the amino acid in the form of a racemic mixture or an individual enantiomer as the nucleophile, the molar ratio of the acyl donor and nucleophile varies from 1: 5 to 3: 1, respectively. The pH of the reaction mixture varies from 9 to 11. The reaction time is proportional to the enzyme content in the reaction mixture and is ensured by using a certain amount of biocatalyst, which is selected empirically for each pair of reagents based on the need to conduct the reaction for the required period of time for technological, economic or other reasons, for example, according to the results of a preliminary kinetic experiment conducted under the same conditions as preparative synthesis, but not in pain on a large scale, for example, in 1-2 ml of a reaction mixture with tracking of the kinetics of the reaction, which consists in sampling and determining the concentration of components at each time point, for example, using high performance liquid chromatography. The choice of optimal conditions, concentrations of reagents and the amount of biocatalyst is also possible using other approaches, for example, microreactors or calculations based on a fundamental understanding of the kinetic laws of the process [R. Wohlgemuth et al. Trends Biotechnol. 2015, 33, P. 302; J.L. van Roon et al. Biotechnol. Adv. 2007, 25, R. 137]. The use of biocatalysis allows you to achieve a very high yield of N-hydroxyacyl amino acids. The reaction product is isolated from the reaction mixture by extraction with an organic solvent, for example, ethyl acetate in an acidic medium, for example, at pH 2-3. If it is necessary to separate an unreacted acyl donor after a biocatalytic conversion, for example, in the case of a process with an acyl donor to nucleophile ratio greater than 1: 1, the pH of the reaction mixture is adjusted to 12 ± 1 and the unreacted acyl donor is extracted by extraction with an organic solvent.
На второй стадии N-оксиацил-аминокислота подвергается реакции внутримолекулярной этерификации с образованием производного 2,5-дикетоморфолина. Циклизация протекает в органическом растворителе при добавлении активирующего реагента, например, N,N'-дициклогексилкарбодиимида в количестве эквимолярном N-оксиацил-аминокислоте. В процессе реакции образуется N,N'-дициклогексилмочевина, выпадающая в осадок. Выход реакции циклизации также очень высокий, поскольку образуется термодинамически устойчивый шестичленный цикл. Очистка целевого продукта заключается в отделении осадка N,N'-дициклогексилмочевины, например, декантацией, центрифугированием или фильтрованием через фильтровальную бумагу, ткань или пористый фильтр и последующем удалении (отгонкой) растворителя, например, в вакууме или с помощью роторного испарителя.In the second stage, the N-hydroxyacyl amino acid undergoes an intramolecular esterification reaction to form a 2,5-diketomorpholine derivative. The cyclization takes place in an organic solvent with the addition of an activating reagent, for example, N, N'-dicyclohexylcarbodiimide in an amount of an equimolar N-hydroxyacyl amino acid. During the reaction, N, N'-dicyclohexylurea is formed, which precipitates. The yield of the cyclization reaction is also very high, since a thermodynamically stable six-membered cycle is formed. Purification of the target product consists in separating the precipitate of N, N'-dicyclohexylurea, for example, by decantation, centrifugation or filtration through filter paper, cloth or a porous filter and subsequent removal (distillation) of the solvent, for example, in vacuum or using a rotary evaporator.
Структура и состав всех синтезированных соединений подтверждены методами 1Н ЯМР и масс-спектрометрии, химическая чистота подтверждена методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.The structure and composition of all synthesized compounds were confirmed by 1 H NMR and mass spectrometry, chemical purity was confirmed by high performance liquid chromatography.
Техническим результатом заявленного способа является производное 2,5-дикетоморфолина, синтезированное с участием пенициллинацилазы как высокоэффективного биокатализатора, позволяющего стереоселективно создавать амидную связь в одну стадию. Последующая циклизация приводит к получению целевого продукта с общим выходом не менее 80 масс. % по отношению к исходному компоненту (нуклеофилу или ацильному донору), взятому в меньшем количестве. Прикладным аспектом настоящего изобретения является то, что производные 2,5-дикетоморфолина являются мономерами для получения полидепсипептидов - перспективных биоразлагаемых полимеров биомедицинского назначения [Feng Y. et al. Int. J. Mol. Sci. 2009, 10, P. 589], а также обладают биологической активностью.The technical result of the claimed method is a derivative of 2,5-diketomorpholine, synthesized with the participation of penicillin acylase as a highly effective biocatalyst that allows stereoselectively creating an amide bond in one stage. Subsequent cyclization leads to the desired product with a total yield of at least 80 mass. % in relation to the starting component (nucleophile or acyl donor), taken in smaller quantities. An applied aspect of the present invention is that 2,5-diketomorpholine derivatives are monomers for producing polydepsipeptides, promising biodegradable biomedical polymers [Feng Y. et al. Int. J. Mol. Sci. 2009, 10, P. 589], and also have biological activity.
Осуществление изобретенияThe implementation of the invention
Ниже представлено более детальное описание заявляемого способа, которое не ограничивает объем притязаний заявляемого изобретения, а демонстрирует возможность осуществления изобретения с достижением заявляемого технического результата.Below is a more detailed description of the proposed method, which does not limit the scope of claims of the claimed invention, but demonstrates the possibility of carrying out the invention with the achievement of the claimed technical result.
Все используемые реагенты являются коммерчески доступными, все процедуры, если не оговорено особо, осуществляли в диапазоне температур от 10 до 35°С.All reagents used are commercially available, all procedures, unless otherwise specified, were carried out in the temperature range from 10 to 35 ° C.
Пример 1. Синтез (3S,6S)-3-бензил-6-фенил-морфолин-2,5-диона.Example 1. Synthesis of (3S, 6S) -3-benzyl-6-phenyl-morpholine-2,5-dione.
Амид (S)-миндальной кислоты и D,L-фенилаланин (до конечных концентраций 0,2 и 0,1 М соответственно) растворили в дистиллированной воде, 5 М раствором гидроксида калия довели рН до 11 и начали реакцию добавлением аликвоты исходного концентрированного раствора пенициллинацилазы из Alcaligenes faecalis, создавая концентрацию активных центров фермента в реакционной смеси 1 мкМ. Реакцию проводили в термостатируемой ячейке рН-стата Titrino 719 (Metrohm, Швейцария) при 15°С. По истечении 25 минут рН реакционной смеси довели 5 М раствором KOH до 12, экстрагировали три раза этилацетатом непрореагировавший амид (S)-миндальной кислоты, при этом объем этилацетата при каждой экстракции был равен объему реакционной смеси. Для извлечения N-(S)-манделил-(S)-фенилаланина концентрированной HCl рН довели до 2, продут экстрагировали три раза этилацетатом, при этом объем этилацетата при каждой экстракции был равен объему реакционной смеси. Этилацетат упарили на роторном испарителе до образования 0,5 М раствора, добавили N,N'-дициклогексилкарбодиимид до конечной концентрации 0,5 М. Осадок N,N'-дициклогексилмочевины отфильтровали через пористый фильтр с диаметром пор 40 мкм, фильтрат упарили на роторном испарителе, твердый остаток высушили в вакууме до постоянной массы. Выход (3S,6S)-3-бензил-6-фенил-морфолин-2,5-диона составил 94% в пересчете на L-энантиомер фенилаланина. Структура и состав синтезированного соединения подтверждены методами 1Н ЯМР и масс-спектрометрии, химическая чистота по результатам анализа методом высокоэффективной жидкостной хроматографии составила 99,1%.Amide of (S) -indical acid and D, L-phenylalanine (to final concentrations of 0.2 and 0.1 M, respectively) were dissolved in distilled water, the pH was adjusted to 11 with a 5 M potassium hydroxide solution, and the reaction was started by adding an aliquot of the initial concentrated penicillin acylase solution from Alcaligenes faecalis, creating a concentration of active sites of the enzyme in the reaction mixture of 1 μM. The reaction was carried out in a thermostatic cell of a pH stat Titrino 719 (Metrohm, Switzerland) at 15 ° С. After 25 minutes, the pH of the reaction mixture was adjusted to 12 with a 5 M KOH solution, the unreacted (S) -mindal acid amide was extracted three times with ethyl acetate, and the volume of ethyl acetate at each extraction was equal to the volume of the reaction mixture. To extract N- (S) -mandelil- (S) -phenylalanine with concentrated HCl, the pH was adjusted to 2, the product was extracted three times with ethyl acetate, and the volume of ethyl acetate at each extraction was equal to the volume of the reaction mixture. Ethyl acetate was evaporated on a rotary evaporator to form a 0.5 M solution, N, N'-dicyclohexylcarbodiimide was added to a final concentration of 0.5 M. The precipitate of N, N'-dicyclohexylurea was filtered through a porous filter with a pore diameter of 40 μm, and the filtrate was evaporated on a rotary evaporator , the solid residue was dried in vacuo to constant weight. The yield of (3S, 6S) -3-benzyl-6-phenyl-morpholine-2,5-dione was 94%, calculated on the L-enantiomer of phenylalanine. The structure and composition of the synthesized compound were confirmed by 1 H NMR and mass spectrometry; chemical purity by analysis by high performance liquid chromatography was 99.1%.
Пример 2. Синтез (3S,6S)-3-бензил-6-фенил-морфолин-2,5-диона.Example 2. Synthesis of (3S, 6S) -3-benzyl-6-phenyl-morpholine-2,5-dione.
Амид (S)-миндальной кислоты и D,L-фенилаланин (до конечных концентраций 0,1 и 0,3 М соответственно) растворили в дистиллированной воде, 5 М раствором гидроксида калия довели рН до 10 и начали реакцию добавлением аликвоты исходного концентрированного раствора пенициллинацилазы из Alcaligenes faecalis, создавая концентрацию активных центров фермента в реакционной смеси 1 мкМ. Реакцию проводили в термостатируемой ячейке рН-стата Titrino 719 (Metrohm, Швейцария) при 20°С. По истечении 30 минут рН реакционной смеси довели до 2, экстрагировали продукт бути л ацетатом, при этом объем бутилацетата был равен одной трети объема реакционной смеси, добавили эквимолярное N-(S)-манделил-(S)-фенилаланину количество N,N'-дициклогексилкарбодиимида, после образования осадка N,N'-дициклогексилмочевины его отделили при помощи пористого фильтра, фильтрат упарили на роторном испарителе, твердый остаток высушили в вакууме до постоянной массы. Выход (3S,6S)-3-бензил-6-фенил-морфолин-2,5-диона составил 91% в пересчете на амид (S)-миндальной кислоты. Структура и состав синтезированного соединения подтверждены методами 1Н ЯМР и масс-спектрометрии, химическая чистота по результатам анализа методом высокоэффективной жидкостной хроматографии составила 99%.Amide of (S) -indic acid and D, L-phenylalanine (to final concentrations of 0.1 and 0.3 M, respectively) were dissolved in distilled water, the pH was adjusted to 10 with a 5 M potassium hydroxide solution and the reaction was started by adding an aliquot of the initial concentrated penicillin acylase solution from Alcaligenes faecalis, creating a concentration of active sites of the enzyme in the reaction mixture of 1 μM. The reaction was carried out in a thermostatic cell of a pH stat Titrino 719 (Metrohm, Switzerland) at 20 ° С. After 30 minutes, the pH of the reaction mixture was brought to 2, the product was extracted with butyl acetate, the volume of butyl acetate being equal to one third of the volume of the reaction mixture, an equimolar N- (S) -mandelyl- (S) -phenylalanine was added, the amount of N, N'- dicyclohexylcarbodiimide, after the formation of a precipitate of N, N'-dicyclohexylurea, it was separated using a porous filter, the filtrate was evaporated on a rotary evaporator, the solid residue was dried in vacuum to constant weight. The yield of (3S, 6S) -3-benzyl-6-phenyl-morpholine-2,5-dione was 91%, calculated on the basis of the amide of (S) -mindal acid. The structure and composition of the synthesized compound were confirmed by 1 H NMR and mass spectrometry; chemical purity according to the analysis by high performance liquid chromatography was 99%.
Пример 3. Синтез (3S,6R)-3-метил-6-фенил-морфолин-2,5-дионаExample 3. Synthesis of (3S, 6R) -3-methyl-6-phenyl-morpholine-2,5-dione
Амид (R)-миндальной кислоты и D,L-аланин (до конечных концентраций 0,2 и 0,5 М соответственно) растворили в дистиллированной воде, 5 М раствором гидроксида калия довели рН до 9,0 и начали реакцию добавлением аликвоты исходного концентрированного раствора мутантной формы бeтaD484N пенициллинацилазы из Escherichia coli, создавая концентрацию активных центров фермента в реакционной смеси 1 мкМ. Реакцию проводили в термостатируемой ячейке рН-стата Titrino 719 (Metrohm, Швейцария) при 10°С. По истечении 40 минут рН реакционной смеси концентрированной HCl довели до 2 и экстрагировали два раза этилацетатом продукт, при этом объем этилацетата при каждой экстракции был равен объему реакционной смеси. Этил ацетат упарили на роторном испарителе до образования 0,5 М раствора, добавили N,N'-дициклогексилкарбодиимид до конечной концентрации 0,5 М. Осадок N,N'-дициклогексилмочевины отфильтровали через стеклянный пористый фильтр с диаметром пор 40 мкм, фильтрат упарили на роторном испарителе, твердый остаток высушили в вакууме до постоянной массы. Выход (3S,6R)-3-метил-6-фенил-морфолин-2,5-диона составил 86% в пересчете на амид (R)-миндальной кислоты. Структура и состав синтезированного соединения подтверждены методами 1Н ЯМР и масс-спектрометрии, химическая чистота по результатам анализа методом высокоэффективной жидкостной хроматографии составила 99,5%.Amide of (R) -mindal acid and D, L-alanine (to final concentrations of 0.2 and 0.5 M, respectively) were dissolved in distilled water, the pH was adjusted to 9.0 with a 5 M potassium hydroxide solution and the reaction was started by adding an aliquot of the initial concentrated a solution of the mutant form of beta D484N penicillin acylase from Escherichia coli, creating a concentration of active sites of the enzyme in the reaction mixture of 1 μM. The reaction was carried out in a thermostatic cell of a pH stat Titrino 719 (Metrohm, Switzerland) at 10 ° С. After 40 minutes, the pH of the reaction mixture with concentrated HCl was adjusted to 2 and the product was extracted twice with ethyl acetate, while the volume of ethyl acetate at each extraction was equal to the volume of the reaction mixture. Ethyl acetate was evaporated on a rotary evaporator to form a 0.5 M solution, N, N'-dicyclohexylcarbodiimide was added to a final concentration of 0.5 M. The precipitate of N, N'-dicyclohexylurea was filtered through a porous glass filter with a pore diameter of 40 μm, and the filtrate was evaporated on rotary evaporator, the solid residue was dried in vacuum to constant weight. The yield of (3S, 6R) -3-methyl-6-phenyl-morpholine-2,5-dione was 86%, calculated on the basis of the amide of (R) -indamic acid. The structure and composition of the synthesized compound were confirmed by 1 H NMR and mass spectrometry, chemical purity according to the analysis by high performance liquid chromatography was 99.5%.
Пример 4. Синтез (3S,6S)-3-(индол-3-ил-метил)-6-фенил-морфолин-2,5-диона.Example 4. Synthesis of (3S, 6S) -3- (indol-3-yl-methyl) -6-phenyl-morpholin-2,5-dione.
Амид (S)-миндальной кислоты и D,L-триптофан (до конечных концентраций 0,2 и 0,1 М соответственно) растворили в дистиллированной воде, 5 М раствором гидроксида калия довели рН до 10,6 и начали реакцию добавлением аликвоты исходного концентрированного раствора пенициллинацилазы из Alcaligenes faecalis, создавая концентрацию активных центров фермента в реакционной смеси 1 мкМ. Реакцию проводили в термостатируемой ячейке рН-стата Titrino 719 (Metrohm, Швейцария) при 25°С. По истечении 25 минут рН реакционной смеси довели 5 М раствором KOH до 12, экстрагировали два раза бутилацетатом непрореагировавший амид (S)-миндальной кислоты, при этом объем бутилацетата при каждой экстракции был равен объему реакционной смеси. Для извлечения N-(S)-манделил-(S)-триптофана концентрированной HCl рН довели до 2, выпавшее масло центрифугировали 5 мин при 5000 об/мин, декантировали, растворили в ацетонитриле до образования 0,5 М раствора, добавили N,N'-дициклогексилкарбодиимид до конечной концентрации 0,5 М. Осадок N,N'-дициклогексилмочевины отфильтровали через стеклянный пористый фильтр с диаметром пор 40 мкм, фильтрат упарили на роторном испарителе, твердый остаток высушили в вакууме до постоянной массы. Выход (3S,6S)-3-(индол-3-ил-метил)-6-фенил-морфолин-2,5-диона составил 91% в пересчете на L-энантиомер триптофана. Структура и состав синтезированного соединения подтверждены методами 1Н ЯМР и масс-спектрометрии, химическая чистота по результатам анализа методом высокоэффективной жидкостной хроматографии составила 99,2%.Amide of (S) -mindal acid and D, L-tryptophan (to final concentrations of 0.2 and 0.1 M, respectively) were dissolved in distilled water, the pH was adjusted to 10.6 with a 5 M potassium hydroxide solution and the reaction was started by adding an aliquot of the initial concentrated a solution of penicillin acylase from Alcaligenes faecalis, creating a concentration of active sites of the enzyme in the reaction mixture of 1 μM. The reaction was carried out in a thermostatic cell of a pH stat Titrino 719 (Metrohm, Switzerland) at 25 ° С. After 25 minutes, the pH of the reaction mixture was adjusted to 12 with a 5 M KOH solution, the unreacted (S) -amndamic acid amide was extracted twice with butyl acetate, and the volume of butyl acetate at each extraction was equal to the volume of the reaction mixture. To extract N- (S) -mandelil- (S)-tryptophan with concentrated HCl, the pH was adjusted to 2, the precipitated oil was centrifuged for 5 min at 5000 rpm, decanted, dissolved in acetonitrile to form a 0.5 M solution, N, N was added 'β-dicyclohexylcarbodiimide to a final concentration of 0.5 M. The precipitate of N, N'-dicyclohexylurea was filtered through a glass porous filter with a pore diameter of 40 μm, the filtrate was evaporated on a rotary evaporator, and the solid residue was dried in vacuum to constant weight. The yield of (3S, 6S) -3- (indol-3-yl-methyl) -6-phenyl-morpholin-2,5-dione was 91% in terms of the L-enantiomer of tryptophan. The structure and composition of the synthesized compound were confirmed by 1 H NMR and mass spectrometry, chemical purity according to the analysis by high performance liquid chromatography was 99.2%.
Пример 5. Синтез (3S,6S)-3-карбамоилметил-6-фенил-морфолин-2,5-диона.Example 5. Synthesis of (3S, 6S) -3-carbamoylmethyl-6-phenyl-morpholine-2,5-dione.
Амид (S)-миндальной кислоты и D,L-аспарагин моногидрат (до конечных концентраций 0,2 и 0,1 М соответственно) растворили в дистиллированной воде, 5 М раствором гидроксида калия довели рН до 10 и начали реакцию добавлением аликвоты исходного иммобилизованного препарата пенициллинацилазы из Alcaligenes faecalis, чтобы обеспечить необходимую скорость реакции, создавая концентрацию активных центров фермента в реакционной смеси 1 мкМ. Реакцию проводили в термостатируемой ячейке рН-стата Titrino 719 (Metrohm, Швейцария) при 30°С. По истечении 30 минут фильтрованием отделили препарат иммобилизованного фермента, рН реакционной смеси (супернатанта) довели 5 М раствором KOH до 12, экстрагировали три раза этилацетатом не прореагировавший амид (S)-миндальной кислоты, при этом объем этилацетата при каждой экстракции был равен объему реакционной смеси. Для извлечения N-(S)-манделил-(S)-аспарагина концентрированной HCl рН довели до 7, упарили в вакууме водную фазу до сухого остатка, который промыли 2 раза этилацетатом. Продукт извлекли из твердого остатка ацетонитрилом до образования 0,5 М раствора, добавили N,N'-дициклогексилкарбодиимид до конечной концентрации 0,5 М. Осадок N,N'-дициклогексилмочевины отфильтровали через стеклянный пористый фильтр с диаметром пор 40 мкм, фильтрат упарили на роторном испарителе, твердый остаток высушили в вакууме до постоянной массы. Выход (3S,6S)-3-карбамоилметил-6-фенил-морфолин-2,5-диона составил 82% в пересчете на L-энантиомер аспарагина. Структура и состав синтезированного соединения подтверждены методами 1Н ЯМР и масс-спектрометрии, химическая чистота по результатам анализа методом высокоэффективной жидкостной хроматографии составила 99,0%.Amide of (S) -mindal acid and D, L-asparagine monohydrate (to final concentrations of 0.2 and 0.1 M, respectively) were dissolved in distilled water, the pH was adjusted to 10 with a 5 M potassium hydroxide solution, and the reaction was started by adding an aliquot of the original immobilized preparation penicillin acylases from Alcaligenes faecalis to provide the necessary reaction rate, creating a concentration of active sites of the enzyme in the reaction mixture of 1 μM. The reaction was carried out in a thermostatic cell of a pH stat Titrino 719 (Metrohm, Switzerland) at 30 ° С. After 30 minutes, the preparation of the immobilized enzyme was separated by filtration, the pH of the reaction mixture (supernatant) was adjusted with a 5 M KOH solution to 12, the unreacted (S) -amidic acid amide was extracted three times with ethyl acetate, and the volume of ethyl acetate at each extraction was equal to the volume of the reaction mixture . To extract N- (S) -mandelil- (S) -asparagine with concentrated HCl, the pH was adjusted to 7, the aqueous phase was evaporated in vacuo to a dry residue, which was washed 2 times with ethyl acetate. The product was removed from the solid residue with acetonitrile to form a 0.5 M solution, N, N'-dicyclohexylcarbodiimide was added to a final concentration of 0.5 M. The precipitate of N, N'-dicyclohexylurea was filtered through a porous glass filter with a pore diameter of 40 μm, and the filtrate was evaporated on rotary evaporator, the solid residue was dried in vacuum to constant weight. The yield of (3S, 6S) -3-carbamoylmethyl-6-phenyl-morpholine-2,5-dione was 82%, calculated on the L-enantiomer of asparagine. The structure and composition of the synthesized compound were confirmed by 1 H NMR and mass spectrometry, chemical purity according to the analysis by high performance liquid chromatography was 99.0%.
Пример 6. Синтез (6S)-фенил-морфолин-2,5-диона.Example 6. Synthesis of (6S) -phenyl-morpholine-2,5-dione.
Амид хлоруксусной кислоты и D,L-фенилаланин (до конечных концентраций 0,3 и 0,1 М соответственно) растворили в дистиллированной воде, 5 М раствором гидроксида калия довели рН до 10 и начали реакцию добавлением аликвоты исходного концентрированного раствора пенициллинацилазы из Alcaligenes faecalis, создавая концентрацию активных центров фермента в реакционной смеси 8 мкМ. Реакцию проводили в термостатируемой ячейке рН-стата Titrino 719 (Metrohm, Швейцария) при 35°С. По истечении 40 минут рН реакционной смеси довели 5 М раствором KOH до 12, экстрагировали три раза бутилацетатом не прореагировавший амид хлоруксусной кислоты, при этом объем бутилацетата при каждой экстракции был равен объему реакционной смеси. Для извлечения N-хлорацетил-(S)-фенилаланина концентрированной HCl значение рН довели до 2 и экстрагировали три раза бутилацетатом продукт, при этом объем бутилацетата при каждой экстракции был равен объему реакционной смеси. Бутилацетат упарили на роторном испарителе, остаток растворили в 5 М KOH и нагревали в течение 1 часа при 80°С. Концентрированной HCl значение рН довели до 2, экстрагировали три раза бутилацетатом N-оксиацетил-(S)-фенилаланин. Бутилацетат упарили на роторном испарителе до образования 0,5 М раствора, добавили N,N'-дициклогексилкарбодиимид до конечной концентрации 0,5 М. Осадок N,N'-дициклогексилмочевины отфильтровали через стеклянный пористый фильтр с диаметром пор 40 мкм, фильтрат упарили на роторном испарителе, твердый остаток высушили в вакууме до постоянной массы. Выход (6S)-фенил-морфолин-2,5-диона составил 87% в пересчете на L-энантиомер фенилаланина. Структура и состав синтезированного соединения подтверждены методами 1Н ЯМР и масс-спектрометрии, химическая чистота по результатам анализа методом высокоэффективной жидкостной хроматографии составила 99,6%.Chloroacetic acid amide and D, L-phenylalanine (to final concentrations of 0.3 and 0.1 M, respectively) were dissolved in distilled water, the pH was adjusted to 10 with a 5 M potassium hydroxide solution and the reaction started by adding an aliquot of the initial concentrated solution of penicillin acylase from Alcaligenes faecalis, creating a concentration of active sites of the enzyme in the reaction mixture of 8 μm. The reaction was carried out in a thermostatic cell of the pH stat Titrino 719 (Metrohm, Switzerland) at 35 ° С. After 40 minutes, the pH of the reaction mixture was adjusted to 12 with a 5 M KOH solution, the unreacted chloroacetic acid amide was extracted three times with butyl acetate, and the volume of butyl acetate at each extraction was equal to the volume of the reaction mixture. To extract N-chloroacetyl- (S) -phenylalanine with concentrated HCl, the pH was adjusted to 2 and the product was extracted three times with butyl acetate, and the volume of butyl acetate at each extraction was equal to the volume of the reaction mixture. Butyl acetate was evaporated on a rotary evaporator, the residue was dissolved in 5 M KOH and heated for 1 hour at 80 ° C. Concentrated HCl adjusted the pH to 2, extracted three times with butyl acetate N-hydroxyacetyl- (S) -phenylalanine. Butyl acetate was evaporated on a rotary evaporator to form a 0.5 M solution, N, N'-dicyclohexylcarbodiimide was added to a final concentration of 0.5 M. The precipitate of N, N'-dicyclohexylurea was filtered through a porous glass filter with a pore diameter of 40 μm, and the filtrate was evaporated on a rotary evaporator, the solid residue was dried in vacuum to constant weight. The yield of (6S) -phenyl-morpholine-2,5-dione was 87% in terms of the L-enantiomer of phenylalanine. The structure and composition of the synthesized compound were confirmed by 1 H NMR and mass spectrometry; chemical purity according to the results of analysis by high performance liquid chromatography was 99.6%.
Claims (8)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2019100644A RU2696099C1 (en) | 2019-01-14 | 2019-01-14 | Chemoenzymatic synthesis of 2,5-diketomorfoline derivatives |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2019100644A RU2696099C1 (en) | 2019-01-14 | 2019-01-14 | Chemoenzymatic synthesis of 2,5-diketomorfoline derivatives |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2696099C1 true RU2696099C1 (en) | 2019-07-31 |
Family
ID=67586914
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2019100644A RU2696099C1 (en) | 2019-01-14 | 2019-01-14 | Chemoenzymatic synthesis of 2,5-diketomorfoline derivatives |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2696099C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114315866A (en) * | 2020-09-30 | 2022-04-12 | 烟台药物研究所 | Synthesis method of levamisole hydrochloride |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2404169C2 (en) * | 2005-11-17 | 2010-11-20 | Синклэр Фармасьютикалс Лимитед | Method for synthesis of delmopinol and derivatives thereof |
| CN108299332A (en) * | 2018-02-26 | 2018-07-20 | 南开大学 | (3R, 6R and 3S, 6S)-morpholine -2, the synthetic method of 5- diketone |
-
2019
- 2019-01-14 RU RU2019100644A patent/RU2696099C1/en active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2404169C2 (en) * | 2005-11-17 | 2010-11-20 | Синклэр Фармасьютикалс Лимитед | Method for synthesis of delmopinol and derivatives thereof |
| CN108299332A (en) * | 2018-02-26 | 2018-07-20 | 南开大学 | (3R, 6R and 3S, 6S)-morpholine -2, the synthetic method of 5- diketone |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Tsuji, Hideto; Sato, Shotaro; Masaki, Noriaki; Arakawa, Yuki; Kuzuya, Akinori; Ohya, Yuichi, Synthesis, stereocomplex crystallization and homo-crystallization of enantiomeric poly(lactic acid-co-alanine)s with ester and amide linkages. Polymer Chemistry, 9(5), 565-575, 2018. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114315866A (en) * | 2020-09-30 | 2022-04-12 | 烟台药物研究所 | Synthesis method of levamisole hydrochloride |
| CN114315866B (en) * | 2020-09-30 | 2023-10-31 | 烟台药物研究所 | Synthesis method of levamisole hydrochloride |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP5096435B2 (en) | Process for producing optically active α-methylcysteine derivative | |
| JP2676568B2 (en) | Method for producing R (-)-mandelic acid and its derivatives | |
| RU2696099C1 (en) | Chemoenzymatic synthesis of 2,5-diketomorfoline derivatives | |
| JP3174171B2 (en) | Enantioselective enzymatic production of optically active cyanohydrins | |
| US20090030210A1 (en) | Process for Producing Optically Active 2-Alkylcysteine, Derivative Thereof, and Processes for Production | |
| KR102157917B1 (en) | AN ENZYMATIC ROUTE FOR THE PREPARATION OF CHIRAL γ-ARYL-β-AMINOBUTYRIC ACID DERIVATIVES | |
| CA2124783A1 (en) | Enzymic process for preparing aliphatic s-cyanohydrins | |
| JPH0859517A (en) | Optical resolution agent and production of optically active tetrahydrofuran-carboxylic acid using the same | |
| JP4577513B2 (en) | 2-alkylcysteine amides or salts thereof, and production methods and uses thereof | |
| JP3665976B2 (en) | Optical resolving agent and process for producing optically active N-tert-butyl-2-piperazinecarboxamide using the same | |
| KR100442040B1 (en) | Process for the recovery of ampicillin | |
| ES2211662T3 (en) | PROCEDURE FOR THE PRODUCTION OF ACTIVE CYANOHIDRINES OPTICALLY USING R-OXINITRILASE. | |
| JP3888402B2 (en) | Process for producing optically active N-carbobenzoxy-tert-leucine | |
| JP4492765B2 (en) | Method for producing L-allysine acetal | |
| KR20000029709A (en) | Solvent extraction of 3-hydroxymethylcephalosporins | |
| JP3078599B2 (en) | Method for producing L-3,4-dihydroxyphenylserine derivative | |
| JP3078597B2 (en) | Method for producing L-threo-3- (3,4-dihydroxyphenyl) serine derivative | |
| JP5307721B2 (en) | (S) -β-Phenylalanine Production Method | |
| JPH0751090A (en) | Production of optically active 3-aminobutanoic acid and its ester intermediate | |
| JP2005501561A (en) | Enzymatic method for enantiomer resolution of amino acids. | |
| EP1311700B1 (en) | Production process of l-phenylalanine derivatives by microorganisms | |
| CN115057796A (en) | Intermediates for optically active beta-hydroxy esters | |
| JP4544385B2 (en) | Process for producing optically active 2,6-diaminoheptanoic acid | |
| JP2009278914A (en) | Method for producing optically active aromatic amino acid and optically active aromatic amino acid amide | |
| JP3951126B2 (en) | Method for producing optically active (4R) -1,3-thiazolidine-4-carboxylic acid |