RU2694744C1 - Способ прогнозирования эффективности лечения тимололом первичной открытоугольной глаукомы - Google Patents

Способ прогнозирования эффективности лечения тимололом первичной открытоугольной глаукомы Download PDF

Info

Publication number
RU2694744C1
RU2694744C1 RU2018145347A RU2018145347A RU2694744C1 RU 2694744 C1 RU2694744 C1 RU 2694744C1 RU 2018145347 A RU2018145347 A RU 2018145347A RU 2018145347 A RU2018145347 A RU 2018145347A RU 2694744 C1 RU2694744 C1 RU 2694744C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
timolol
gstp1
genotype
treatment
angle glaucoma
Prior art date
Application number
RU2018145347A
Other languages
English (en)
Inventor
Нина Васильевна Мальцева
Александр Леонидович Онищенко
Анна Шамильевна Смирнова
Иван Николаевич Исаков
Светлана Ивановна Макогон
Original Assignee
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение дополнительного профессионального образования "Российская медицинская академия непрерывного профессионального образования" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ДПО РМАНПО Минздрава России)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение дополнительного профессионального образования "Российская медицинская академия непрерывного профессионального образования" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ДПО РМАНПО Минздрава России) filed Critical Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение дополнительного профессионального образования "Российская медицинская академия непрерывного профессионального образования" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ДПО РМАНПО Минздрава России)
Priority to RU2018145347A priority Critical patent/RU2694744C1/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2694744C1 publication Critical patent/RU2694744C1/ru

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6806—Preparing nucleic acids for analysis, e.g. for polymerase chain reaction [PCR] assay
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Изобретение относится к области медицины, а именно к офтальмологии, и предназначено для прогнозирования эффективности лечения тимололом первичной открытоугольной глаукомы (ПОУГ). Способ включает забор образцов буккальных соскобов, выделение геномной ДНК, аллель-специфическую полимеразную цепную реакцию с целью генотипирования по полиморфному локусу GSTP1 Ilel05Val (rs1695) гена глутатион-8-трансферазы-P1 GSTP1 пациентов с диагнозом «первичная открытоугольная глаукома» русской национальности. У носителей генотипа GSTP1 Ilel05Ile прогнозируют офтальмогипотензивный ответ на лечение тимололом, равный и более 20%, с 5,63-кратной вероятностью, а у носителей генотипа GSTP1 Ilel05Val - офтальмогипотензивный ответ на лечение тимололом менее 20% с 9,50-кратной вероятностью. Использование изобретения позволяет прогнозировать эффективность лечения тимололом ПОУГ и определять персонализированную тактику лечения пациентов, способствующую получению максимального терапевтического офтальмогипотензивного эффекта. 1 ил., 2 табл., 2 пр.

Description

Изобретение относится к медицине, а именно, к офтальмологии, и может быть использовано для прогнозирования эффективности лечения тимололом первичной открытоугольной глаукомы.
Глаукома - прогрессирующее нейродегенеративное заболевание с повреждением структуры зрительного нерва и слоя ганглиозных клеток сетчатки, приводящее к необратимой слепоте и инвалидизации. В структуре глаукомы первое место занимает первичная открытоугольная глаукома (ПОУГ). На ее долю приходится от 72,3% до 96,1% всех форм глауком (Национальное руководство по глаукоме: для практикующих врачей. Под ред. проф. А.Е. Егорова, проф. Ю.С. Астахова, проф. Е.П. Еричева. М.: издательство ГЭОТАР-Медиа; 2015). Ключевым моментом в лечении ПОУГ является нормализация (снижение) повышенного уровня внутриглазного давления (ВГД). С этой целью применяются различные группы офтальмогипотензивных препаратов. Однако фармакологический ответ пациентов широко варьирует, что связано с генетическими отличиями. Определение вариантов генов, детерминирующих эффективность лечебного эффекта, позволит прогнозировать фармакологический ответ на лекарственное средство и выбирать тактику лечения в соответствии с генетическим профилем пациента, что способствовало бы повышению эффективности и безопасности фармакотерапии (Сычев Д.А., Рожков А.В., Алексеев И.Б. Фармакогенетика при лечении глаукомы: настоящее и будущее. Фармакогенетика и фармакогеномика. 2016; 1:13-17).
При лечении глаукомы препаратами первого выбора наряду с аналогами простагландинов являются неселективные бета-блокаторы, оказывающие офтальмогипотензивное действие путем снижения продукции внутриглазной жидкости. Однако бета-блокаторы, к которым относится тимолол, снижают уровень ВГД в лучшем случае на 20-25%, что может быть связано с индивидуальным генотипом, и половина пациентов с худшими офтальмогипотензивными результатами к концу второго года монотерапии нуждается в ее коррекции и назначении комбинированного лечения.
Описания способа прогнозирования эффективности лечения тимололом первичной открытоугольной глаукомы в литературе не представлено.
Назначением настоящего изобретения является разработка способа прогнозирования эффективности лечения тимололом первичной открытоугольной глаукомы.
Назначение изобретения достигается способом прогнозирования эффективности лечения тимололом первичной открытоугольной глаукомы. Проводят забор образцов буккальных соскобов, выделение геномной ДНК, аллель-специфическую полимеразную цепную реакцию с целью генотипирования по полиморфному локусу GSTP1Ile105Val (rs1695) гена глутатион-S-трансферазы-Р1 GSTP1 пациентов с диагнозом «первичная открытоугольная глаукома» русской национальности. У носителей генотипа GSTP1Ile105Ile прогнозируют офтальмогипотензивный ответ на лечение тимололом, равный и более 20% с 5,63-кратной вероятностью, а у носителей генотипа GSTP1Ile105Val - офтальмогипотензивный ответ на лечение тимололом менее 20% с 9,50-кратной вероятностью.
Новизна изобретения:
1. Предлагаемый способ позволяет прогнозировать эффективность лечения тимололом по результатам генотипирования по полиморфному локусу GSTP1Ile105Val (rs1695) гена глутатион-S-трансферазы-Р1 GSTP1 русских пациентов с диагнозом «первичная открытоугольная глаукома».
2. У носителей генотипа GSTP1Ile105Ile прогнозируют офтальмогипотензивный ответ на лечение тимололом, равный и более 20% с 5,63-кратной вероятностью, а у носителей генотипа GSTP1Ile105Val - офтальмогипотензивный ответ на лечение тимололом менее 20% с 9,50-кратной вероятностью.
Новый технический результат изобретения позволяет:
1. Выявить лиц русской национальности с диагнозом «первичная открытоугольная глаукома», генетически предрасположенных к эффективному фармакологическому ответу на лечение тимололом, определенных по носительству гомозиготного варианта GSTP1Ile105Ile локуса GSTP1Ile105Val (rs1695) гена глутатион-S-трансферазы-Р1 GSTP1.
2. Прогнозировать эффективность лечения тимололом ПОУГ и определять персонализированную тактику лечения пациентов, способствующую получению максимального терапевтического офтальмогипотензивного эффекта.
Суперсемейство глутатион-S-трансфераз (GST) объединяет мультифункциональные антиоксидантные ферменты фазы II системы детоксикации ксенобиотиков (СДК), одной из наиболее известных функций которых является катализ конъюгации глутатиона с различными субстратами, в том числе мутагенами и канцерогенами и их электрофильными метаболитами, генерируемыми в процессах окисления I фазы детоксикации. GST могут играть важную роль в детоксикации электрофильных α- и β-ненасыщенных карбонильных соединений, продуцируемых в реакциях окисления липидов, при воздействии ионизирующей радиации и при метаболизме лекарств (Berhane K., Widersten M., Engstrom A. et al. Detoxication of base propenals and other alpha, beta-unsaturated aldehyde products of radical reactions and lipid peroxidation by human glutathione transferases. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1994; 91(4):1480-1484. DOI:10.1073/pnas.91.4.1480). Глаз, постоянно подвергаясь воздействию света и кислорода, особенно уязвим к повреждению механизмами фотосенсибилизированного свободнорадикального окисления, поскольку в сетчатке глаза содержатся легко окисляемые ненасыщенные жирные кислоты. Они определяют большую чувствительность глаза, по сравнению с другими органами, к оксидативным процессам, и являются одним из факторов, способствующих развитию окулярной ишемии, ишемии или гипоксии сетчатки, диабетической ретинопатии и глаукомы (Augustin AJ. Oxidative Tissue Damage. Klin. Monbl. Augenheilkd. 2010; 227(2):90-98. DOI: 10.1055/s-0029-1245125.).
В глазу существует множество ферментных систем, защищающих глаз от окислительного повреждения, включая суперсемейство глутатион-S-трансфераз. GST Alpha, Mu и Pi-классов дифференциально экспрессируются в различных структурах и тканях глаза: Mu и Pi - в хрусталике, Alpha и Pi - в роговой оболочке, Mu и Pi - в сетчатке и макуле (Ahmad Н., Singh S.V., Medh R.D. et al. Differential expression of alpha, mu and pi classes of isozymes of glutathione S-transferase in bovine lens, cornea, and retina. Arch Biochem Biophys. 1988; 266(2): 416-426. DOI:10.1016/0003-9861(88)90273-1; Huang Q.L., Lou M.F., Straatsma BR, Horwitz J. Distribution and activity of glutathione-S-transferase in normal human lenses and in cataractous human epithelia. Curr. Eye Res. 1993; 5:433-437, DOI:10.3109/02713689309024625; Bhosale P., Larson A.J., Frederick J.M. et al. Identification and Characterization of a Pi Isoform of Glutathione S-Transferase (GSTP1) as a Zeaxanthin-binding Protein in the Macula of the Human Eye. J. Biol. Chem. 2004; 279(47):49447-49454. DOI:10.1074/jbc.M405334200) и играют важную роль в антиоксидации, детоксикации и ликвидации ксенобиотиков, включая канцерогены, окислители, токсины и метаболиты лекарств (Eaton D.L., Bammler Т.K. Concise review of the glutathione S-transferases and their significance to toxicology. Toxicol Sci. 1999; 49:156-164. DOI:10.1093/toxsci/49.2.156). Полагают, что присутствие GST Alpha, Mu и Pi в радужной оболочке и цилиарном теле необходимо для детоксикации и предотвращения инфильтрации в глазную жидкость эндогенных оксидантов, генерируемых при перекисном окислении липидов (Ahmad Н., Singh S.V., Srivastava S.K., Awasthi Y.C. Glutathione S-transferase of bovine iris and ciliary body: characterization of isoenzymes. Curr. EyeRes. 1989; 2:175-184. DOI:10.3109/02713688908995189).
Pi класс - наиболее распространенный член суперсемейства GST, найденный во многих нормальных и неопластических тканях, причем у человека, в отличие от других видов, обнаружена только одна Pi изоформа, глутатион-S-трансфераза-Р1 (GSTP1), кодируемая отдельным геном. Ген GSTP1 человека выделен и охарактеризован (Lo H.-W. and Ali-Osman F. Genomic Cloning of hGSTP1*C, an Allelic Human Pi Class Glutathione S-Transferase Gene Variant and Functional Characterization of Its Retinoic Acid Response Elements. J. Biol. Chem. 1997; 272(52):32743-327491. DOI: 10.1074/jbc.272.52.32743). Он локализуется в хромосомном локусе 11q13, состоит из 7 экзонов и 6 интронов, содержащих 3116 п.н., и может иметь несколько нуклеотидных транзиций (однонуклеотидные полиморфизмы), в том числе наиболее изученные A1404G и С2294Т в экзонах 5 и 6, которые меняют кодоны 105Ile на 105Val и 114Ala на 114Val, соответственно. Полиморфизмы GSTP1 снижают активность и аффинитет кодируемого фермента по отношению к различным электрофильным субстратам (Zimniak P., Nanduri В., Pikuta S. et al. Naturally occurring human glutathione S-transferase GSTP1-1 isoforms with isoleucine and valine in position 104 differ in enzymic properties. Eur. J. Biochem. 1994; 224(3):893-899. DOI:10.1111/j.l432-1033.1994.00893.x; Watson M.A., Stewart R.K., Smith G.B. et al. Human glutathione-S-transferase polymorphisms: relationship to lung tissue enzyme activity and population frequency distribution. Carcinogenesis. 1998; 19(2):275-280. DOI:10.1093/carcin/19.2.275) и могут определять чувствительность индивида к множеству заболеваний. Ранее нами было показано, что минорные аллели 105Val и 114Val гена GSTP1 значительно связаны с развитием воспалительной (хронический блефарит, хронический конъюнктивит, хронический блефароконъюнктивит) и дистрофической (пингвекула, птеригиум) офтальмопатологии у металлургов (Мельниченко М.А., Мальцева Н.В, Лыкова О.Ф., Конышева Т.В., Забелин В.И., Онищенко А.Л. Ассоциация генетических полиморфизмов глутатион-S-трансферазы-π1 с офтальмопатологией у работников металлургического производства. Молекулярная медицина. 2011; 1:22-27). По данным других авторов, полиморфизм GSTP1Ile105Val в рецессивной модели наследования (Val/Val против Ile/Ile+Ile/Val) положительно коррелирует с повышенным риском развития первичной открытоугольной глаукомы (Yu Y., Weng Y., Guo J., Chen G., Yao K. Association of glutathione S transferases polymorphisms with glaucoma: a metaanalysis. PLoS One. 2013; 8(1):e54037. DOI:10.1371/journal.pone.0054037). Возможное влияние данного полиморфизма на эффективность лечения глаукомы ранее не изучалось. Выявление вариантов генов, способствующих либо препятствующих фармакотерапии глаукомы, будет весомым вкладом геномики в разработку тактики ее персонализированного лечения.
В исследуемой выборке нами были учтены критерии исключения лиц из исследования, к которым отнесли онкологические, генетические заболевания, использование нестероидных противовоспалительных препаратов, предварительное в течение последних 7 дней до начала исследования и одновременное системное лечение антибиотиками, декомпенсация соматических заболеваний, а также какие-либо операции на глазах, проведенные в прошлом. Провели обследование 39 русских пациентов (29 женщин и 10 мужчин) в возрасте от 53 до 89 лет, проживающих на территории Кемеровской области и находившихся на обследовании и лечении в офтальмологических клиниках г. Новокузнецка с диагнозом «первичная открытоугольная глаукома» (ПОУГ), выставленным в соответствии с Национальным руководством по глаукоме (Национальное руководство по глаукоме: для практикующих врачей / под ред. проф. Е.А. Егорова, проф. Ю.С. Астахова, проф. В.П. Еричева. - М: «ГЭОТАР-Медиа», 2015. - 456 с.). Для обследования всех пациентов использовали следующие клинические офтальмологические методы - визометрию, определение рефракции субъективным и объективным методами, определение цветового зрения, тонометрию, периметрию, биомикроскопию, офтальмоскопию, проведение диагностических проб Ширмера и Норна. ВГД измерялось тонометром Маклакова 10 гр по стандартной методике.
Используемый препарат для лечения ПОУГ - неселективный бета-адреноблокатор тимолол (0,5% раствор) - от разных производителей, чаще использовали препараты Тимолол-АКОС Россия, Окумед® (Ocumed) Индия, Timolol Rompharm Company S.R.L. (Румыния). Назначали инсталляции 2 раза в день. ВГД измеряли до старта терапии (Д1) и на фоне лечения через 2 недели после старта (Д2). Вычисляли коэффициент снижения ВГД в процентах от его первоначального уровня (ΔД) на лучшем глазу по формуле
Figure 00000001
Лучшим считали глаз пациента с ПОУГ, на котором выявляли I или II стадию заболевания с относительно невысоким уровнем ВГД. Худшим считали парный глаз пациента, на котором выявляли III или IV стадию процесса с более высоким уровнем ВГД. Полагаем, что «ответ» на назначение офтальмогипотензивных капель в виде снижения ВГД более информативен и генетически предопределен в ранних стадиях глаукомы («лучшие» глаза), чем в более развитых стадиях болезни («худшие» глаза), при которых наряду с генетическими факторами нарастают «местные» прессорные механизмы на уровне корнеосклеральной трабекулы.
Для оценки влияния тестируемого полиморфизма на эффективность лечения тимололом пациентов разделили на группы: 1 группа (малоэффективное лечение) - коэффициент снижения ВГД был меньше 10% (ΔД<10%), 2 группа (среднеэффективное лечение) - коэффициент снижения ВГД варьировал от 10 до 20% (т.е. находился в диапазоне 10%≤ΔД<20%), 3 группа (высокоэффективное лечение) - коэффициент снижения ВГД был равен или превышал 20% (ΔД≥20%).
Математическую обработку результатов исследований проводили с помощью пакетов лицензионных статистических программ InStatII, Microsoft Excel, SPSS22. Критический уровень значимости при проверке статистических гипотез принимался равным 0,05 (Р). Соответствие распределения частот генотипов равновесию Харди-Вайнберга определяли стандартно при помощи программы http://www.oege.org/software/hwe-mr-calc.htm1. Достоверность различий в распределении частот аллелей и генотипов между группами обследованных лиц оценивали двусторонним точным критерием Фишера. Определяли непараметрический коэффициент корреляции Спирмена (r), относительный риск (вероятность) заболевания по искомому аллелю/генотипу вычисляли как соотношение шансов (OR-odds ratio), n - количество пациентов (генотипов).
РЕЗУЛЬТАТЫ
Результаты представлены в таблице 1. В обследованной выборке носителями гомозиготного варианта GSTP1Ile105Ile оказались 17 человек из 39 всех пациентов (44%), гетерозиготами GSTP1Ile105Val - 21 человек (54%), и 1 человек был гомозиготой по мутантному аллелю GSTP1Ile105Val (2%), т.е. распределение частот генотипов полиморфизма GSTP1Ile105Val подчинялось равновесию Харди-Вайнберга (χ2=3,39; p>0,05).
Figure 00000002
Примечание: * - число вариантов генотипов/аллелей в абсолютном значении и в круглых скобках в процентах - частота встречаемости; OR - соотношение шансов (риск развития или вероятность); подстрочно указывается сравниваемый столбец/столбцы; в квадратных скобках - 95%-доверительный интервал; (Р) - показатель статистической достоверности разницы частот генотипов/аллелей.
Носительство нормального гомозиготного варианта GSTP1Ile105Ile. Высокоэффективное лечение тимололом, т.е. фармакозависимое снижение ВГД на 20-26% (в среднем 21,7±0,8%) от достартового значения, наблюдалось почти у половины носителей данного генотипа (группа 3, 8 из 17 человек, т.е. 47%). Вероятность получения высокоэффективного офтальмогипотензивного эффекта (ΔД≥20%, группа 3) в сравнении с получением малоэффективного ответа ΔД<10% (группа 1) очень высока у нормальных гомозигот (OR=18,67; Р3/1=0,0198). Напротив, вероятность малоэффективного ответа на тимолол таких пациентов (ΔД<10%) оказалась очень мала (OR=0,05; P1/3=0,0198).
Среднеэффективный офтальмогипотензивный ответ на лечение тимололом (10%≤ΔД<20%, группа 2) выявлен у такого же количества пациентов-носителей данного генотипа (8 лиц). Только у 1 человека с носительством варианта GSTP1Ile105Ile ВГД снизилось всего на 4,35%, т.е. было <10% (группа 1). Расчет показал, что при носительстве гомозиготного варианта GSTP1Ile105Ile вероятность достичь офтальмогипотензивного ответа ΔД≥20% (группа 3) при лечении тимололом в 5,63 раз выше в сравнении с ΔД<20% (группы 1 + группа 2) - критический уровень значимости Р3/1+2 равен 0,0329.
Носительство гетерозиготного варианта GSTP1Ile105Val. У гетерозигот высокоэффективное лечение тимололом (ΔД≥20%) наблюдалось только у 2 человек, т.е. у десятой части гетерозиготных носителей (2 из 21 человека), среднеэффективное (10%≤ΔД<20%) - у 12 человек (почти половина гетерозигот) и малоэффективное (ΔД<10%) - у 7 человек (треть гетерозигот). Статистический анализ позволил выявить, что при гетерозиготном носительстве тестируемого локуса вероятность получения малоэффективного офтальмогипотензивного ответа пациентов (ΔД≤10%, группа 1) более чем 30-кратна в сравнении с ΔД≥20% (группа 3) - OR=31,50, P1/3=0,0055. Вероятность получения среднеэффективного офтальмогипотензивного ответа (10%≤ΔД<20%, группа 2) оказалась более чем 6-кратна в сравнении с высокоэффективным ответом ΔД≥20% (группа 3) - OR=6,75, Р2/3=0,0570, а вероятность получить эффект ΔД≥10% у гетерозигот (группа 2 + группа 3) в сравнении с ΔД<10% (группа 1) очень мала - OR=0,12; Р2+3/1=0,0489. Вероятность получения высокого офтальмогипотензивного эффекта тимолола (ΔД≥20%, группа 3) также мала в сравнении с ΔД<20% (группа 1 + группа 2) у гетерозигот (OR=0,11, P3/1+2=0,0107) и, наоборот, вероятность получения ΔД<20% - очень высока (OR=9,50, Р1+2/3=0,0107). Таким образом, гетерозиготный генотип GSTP1Ile105Val предрасполагает к получению худшего результата лечения тимололом ПОУГ в сравнении с гомозиготным генотипом GSTP1Ile105Ile.
Носительство мутантного гомозиготного варианта GSTP1Val105Val. В исследованной выборке носителем данного генотипа явился всего лишь один человек, вошедший в группу 3 (ΔД=26%), и связи такого носительства с эффективностью лечения не обнаружили (Р>0,05).
Подтверждением ассоциации тестируемого полиморфизма GSTP1Ile105Val с эффективностью лечения тимололом ПОУГ являются и выявленные корреляционные связи - во всей исследованной выборке носительство гомозиготного генотипа GSTP1Ile105Ile положительно коррелировало с ΔД (r=0,415, Р=0,009, n=39), а гетерозиготного генотипа GSTP1Ile105Val - отрицательно (r=-0,493, Р=0,001, n=39). Носительство нормального аллеля GSTP1Ilel05 положительно коррелировало с ΔД (r=0,353, Р=0,027, n=39), а носительство мутантного аллеля GSTP1l05Val - отрицательно (r=-0,353, Р=0,027, n=39).
Таким образом, гомозиготное носительство аллеля GSTP1Ilel05 (генотип GSTP1Ile105Ile) детерминирует получение лучшего терапевтического эффекта тимолола. Следовательно, гомозиготный вариант GSTP1Ile105Ile может быть прогностическим маркером высокоэффективного офтальмогипотензивного лечения тимололом пациентов с ПОУГ.
В соответствии с рекомендациями Р. Флетчера и соавт. (Р. Флетчер, С. Флетчер, Э. Вагнер. Клиническая эпидемиология. Основы доказательной медицины. «Медиа Сфера», М., 1998, 352 с. - стр. 66) для оценки чувствительности, специфичности, распространенности и прогностической ценности предлагаемого нами способа прогнозирования офтальмогипотензивного эффекта тимолола полученные нами данные были проанализированы с помощью четырехпольной таблицы 2.
Figure 00000003
Примечание: * - число вариантов генотипов (пациентов с указанными генотипами)
Доля лиц с положительным результатом теста, т.е. доля пациентов-носителей генотипа GSTP1Ile105Ile среди лиц с ΔД≥20% в выборке оказалась равной 8/(8+2)=0,80 (80%) (чувствительность предлагаемого теста). Доля лиц с отрицательным результатом теста, т.е. доля лиц-носителей генотипов GSTP1Ile105Val среда лиц с ΔД<20% составила 19/(19+9)=0,68 (68%) (специфичность предлагаемого теста). Распространенность генотипа GSTP1Ile105Ile среди всех обследованных лиц с ПОУГ составила (9+8)/(9+8+19+2)=0,45 (45%), среди лиц с ΔД≥20% - 8/(8+2)=0,80 (80%), среди лиц с ΔД<20% - 9/(9+19)=0,32 (32%). Прогностическая ценность положительного результата теста (вероятность достичь терапевтического эффекта, равного ΔД≥20% при носительстве генотипа GSTP1Ile105Ile равна 8/(8+9)=0,47 (47%). Прогностическая ценность отрицательного результата теста (вероятность ΔД≤20% при носительстве генотипов GSTP1Ile105Val равна 19/(19+2)=0,90 (90%).
Следовательно, предлагаемый способ прогнозирования эффективности лечения тимололом первичной открытоугольной глаукомы, обладающий чувствительностью, равной 80% и специфичностью, равной 68%, может быть использован в качестве теста с прогностической ценностью положительного результата, равной 47% и прогностической ценностью отрицательного результата, равной 90%, позволяющего сделать персонализированный выбор офтальмогипотензивного фармпрепарата для лечения ПОУГ на первых этапах клинического обследования.
Изобретение иллюстрируется фотографией - Фиг. 1.
На Фиг. 1 представлены результаты проведения генотипирования 17 обследуемых пациентов с диагнозом «первичная открытоугольная глаукома», для лечения которых применяли препарат тимолола, по полиморфному локусу rs1695 (GSTP1Ile105Val) гена глутатион-S-трансферазы-Р1 GSTP1 в виде электрофореграммы, на которой показаны продукты амплификации исследуемого локуса GSTP1Ile105Val в виде светящихся полос.
K- - отрицательный контроль; дорожки 3, 5, 9, 10, 12, 14, 15 - гомозиготный нормальный генотип GSTP1Ile105Ile; дорожки 1, 2, 4, 6, 7, 11, 13, 16, 17 - гетерозиготный генотип GSTP1Ile105Val, дорожка 8 - гомозиготный мутантный генотип GSTP1Val105Val.
Способ осуществляется следующим образом.
У пациентов с диагнозом «первичная открытоугольная глаукома» проводят забор образцов буккальных соскобов для выделения геномной ДНК и молекулярно-генетические исследования, которые осуществляют на основании информированного согласия обследованных лиц. Геномную ДНК выделяют с помощью коммерческого комплекта реагентов для экспресс-выделения ДНК из буккальных соскобов (НПФ «Литех», Москва).
Генотипирование осуществляют по полиморфному локусу rs1695 (GSTP1Ile105Val) гена глутатион-S-трансферазы-Р1 GSTP1 с использованием комплекта реагентов «SNP-экспресс» для выявления мутации-1 глутатион-S-трансферазы Пи 1 (НПФ Литех, Москва) с помощью метода аллель-специфической полимеразной цепной реакции (ПЦР). Согласно инструкции, с образцом выделенной ДНК осуществляют одновременно две реакции амплификации - с двумя парами аллель-специфичных праймеров, на параллельное выявление аллелей GSTP1105Ile (нормальный аллель) и GSTP1105Val (мутантный аллель). Реакционная смесь для ПЦР состоит из 5 мкл исследуемого образца ДНК и 20 мкл рабочей амплификационной смеси, содержащей 0,2 мкл рабочего раствора Taq полимеразы. Амплификацию проводят в автоматическом термоциклере Терцик («ДНК-Технология», Москва). Программа амплификации, соответственно инструкции, включает следующий температурный режим - 1 цикл при 93°С в течение 1 мин, 35 циклов с этапами денатурации ДНК в течение 10 сек при 93°С, отжига праймеров в течение 10 сек при 64°С и синтеза цепей в течение 20 сек при 72°С, и 1 цикл при 72°С в течение 1 мин. Анализ ПЦР-продуктов проводят после их электрофоретического разделения в 50 мл 3%-агарозного геля на 50×ТАЕ-буфере, в который до застывания вносят 5 мкл 1% раствора бромистого этидия. В каждом геле вырезают два ряда лунок - для детекции аллеля нормального типа и мутантного аллеля. Фрагменты анализируемой ДНК проявлялись в виде светящихся полос. Гели анализируют в УФ-трансиллюминаторе ЕСХ-15М (Vilber Lourmat, Франция) с помощью гельдокументирующей видеосистемы GL-2 (Россия) в проходящем ультрафиолетовом свете с длиной волны 310 нм.
По результатам детекции продуктов ПЦР устанавливают носительство вариантов генотипов тестируемого полиморфизма. У носителей генотипа GSTP1Ile105Ile прогнозируют офтальмогипотензивный ответ на лечение тимололом, равный и более 20% с 5,63-кратной вероятностью, а у носителей генотипа GSTP1Ile105Val - офтальмогипотензивный ответ на лечение тимололом менее 20% с 9,50-кратной вероятностью.
Клинические примеры.
Клинический пример №1. Больной К., 73 года с диагнозом: ПОУГ III с правого глаза; ПОУГ I с левого глаза. Сопутствующий диагноз: Артериальная гипертензия. Объективно: Острота зрения правого глаза = 0,8. Острота зрения левого глаза = 0,9. ВГД OD=35 мм. рт. ст.; ВГД OS=26 мм. рт. ст.
С помощью предложенного способа выявлено, что пациент - носитель генотипа GSTP1Ile105Ile, следовательно, прогнозируют офтальмогипотензивный ответ на лечение тимололом, равный и более 20%.
Назначены инсталляции 0,5% раствора тимолола 2 раза в день в оба глаза. Повторный осмотр через 7 дней. При осмотре пациент переносит инсталляции глазных капель удовлетворительно. Острота зрения правого глаза = 0,8. Острота зрения левого глаза = 0,9. ВГД OD=23 мм. рт. ст.; ВГД OS=18 мм. рт. ст.
Таким образом, применение капель 0,5% раствора тимолола у больного К, 73 лет, носителя генотипа GSTP1Ile105Ile, позволило снизить ВГД на «худшем» правом глазу на 34%, а на «лучшем» левом глазу на 30%. Прогноз подтвердился.
Клинический пример 2. Больная А., 78 лет с диагнозом: ПОУГ VI с правого глаза; ПОУГ II с левого глаза. Незрелая катаракта обоих глаз. Сопутствующий диагноз: Артериальная гипертензия. Дислипидемия. Объективно: острота зрения правого глаза = 0. Острота зрения левого глаза = 0,2. ВГД OD=36 мм. рт. ст.; ВГД OS=33 мм. рт. ст.
С помощью предложенного способа выявлено, что пациент - носитель генотипа GSTP1Ile105Val, следовательно, прогнозируют офтальмогипотензивный ответ на лечение тимололом менее 20%.
Назначены инсталляции 0,5% раствора тимолола 2 раза в день в оба глаза. Повторный осмотр через 9 дней. При осмотре пациент переносит инсталляции глазных капель удовлетворительно. Острота зрения правого глаза = 0. Острота зрения левого глаза = 0,3. ВГД OD=29 мм. рт. ст.; ВГД OS=28 мм. рт. ст. Добавлены инсталляции латанопроста по 1 капле 1 раз в день вечером. Через 5 дней повторный осмотр. Острота зрения правого глаза = 0. Острота зрения левого глаза = 0,3. ВГД OD=22 мм рт ст; ВГД OS=20 мм рт ст.
Таким образом, применение капель 0,5% раствора тимолола у больной А., 78 лет, носителя генотипа GSTP1Ile105Val, позволило снизить ВГД на «худшем» правом глазу на 19%, а на «лучшем» левом глазу на 12%. Прогноз подтвердился. Дополнительное назначение латанопроста больной А. позволило достичь целевого уровня ВГД.

Claims (1)

  1. Способ прогнозирования эффективности лечения тимололом первичной открытоугольной глаукомы, характеризующийся тем, что проводят забор образцов буккальных соскобов, выделение геномной ДНК, аллель-специфическую полимеразную цепную реакцию с целью генотипирования по полиморфному локусу GSTP1 Ile105Val (rs1695) гена глутатион-S-трансферазы-Р1 GSTP1 пациентов с диагнозом «первичная открытоугольная глаукома» русской национальности и у носителей генотипа GSTP1 Ile105Ile прогнозируют офтальмогипотензивный ответ на лечение тимололом, равный и более 20%, с 5,63-кратной вероятностью, а у носителей генотипа GSTP1 Ile105Val - офтальмогипотензивный ответ на лечение тимололом менее 20% с 9,50-кратной вероятностью.
RU2018145347A 2018-12-18 2018-12-18 Способ прогнозирования эффективности лечения тимололом первичной открытоугольной глаукомы RU2694744C1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2018145347A RU2694744C1 (ru) 2018-12-18 2018-12-18 Способ прогнозирования эффективности лечения тимололом первичной открытоугольной глаукомы

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2018145347A RU2694744C1 (ru) 2018-12-18 2018-12-18 Способ прогнозирования эффективности лечения тимололом первичной открытоугольной глаукомы

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2694744C1 true RU2694744C1 (ru) 2019-07-17

Family

ID=67309475

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2018145347A RU2694744C1 (ru) 2018-12-18 2018-12-18 Способ прогнозирования эффективности лечения тимололом первичной открытоугольной глаукомы

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2694744C1 (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2806911C1 (ru) * 2023-03-30 2023-11-08 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Курский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации Способ генотипирования полиморфного локуса rs6702742 (A>G) гена SERBP1 у человека методом ПЦР в режиме "реального времени" с применением аллель-специфических флуоресцентных зондов

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002082969A2 (en) * 2001-04-04 2002-10-24 Tim Hing Kong Diagnostics and therapeutics for glaucoma, retinal degenerative diseases and cardiovascular diseases based on novel nucleic acids and protein forms of myocilin (myoc)
RU2591666C1 (ru) * 2015-08-06 2016-07-20 федеральное государственное бюджетное учреждение "Межотраслевой научно-технический комплекс "Микрохирургия глаза" имени академика С.Н. Федорова" Министерства здравоохранения Российской Федерации Способ прогнозирования эффективности лазерной реконструкции зоны антиглаукоматозной операции непроникающего типа при ее блокаде корнем радужки
RU2598878C1 (ru) * 2015-03-26 2016-09-27 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") Способ прогнозирования риска развития поуг с неэффективным местным гипотензивным лечением
RU2618459C1 (ru) * 2016-07-11 2017-05-03 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение дополнительного профессионального образования "Российская медицинская академия непрерывного профессионального образования" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ДПО РМАНПО Минздрава России) Способ определения генетической предрасположенности к заболеванию инфекционным эндокардитом

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002082969A2 (en) * 2001-04-04 2002-10-24 Tim Hing Kong Diagnostics and therapeutics for glaucoma, retinal degenerative diseases and cardiovascular diseases based on novel nucleic acids and protein forms of myocilin (myoc)
RU2598878C1 (ru) * 2015-03-26 2016-09-27 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") Способ прогнозирования риска развития поуг с неэффективным местным гипотензивным лечением
RU2591666C1 (ru) * 2015-08-06 2016-07-20 федеральное государственное бюджетное учреждение "Межотраслевой научно-технический комплекс "Микрохирургия глаза" имени академика С.Н. Федорова" Министерства здравоохранения Российской Федерации Способ прогнозирования эффективности лазерной реконструкции зоны антиглаукоматозной операции непроникающего типа при ее блокаде корнем радужки
RU2618459C1 (ru) * 2016-07-11 2017-05-03 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение дополнительного профессионального образования "Российская медицинская академия непрерывного профессионального образования" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ДПО РМАНПО Минздрава России) Способ определения генетической предрасположенности к заболеванию инфекционным эндокардитом

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
HUTNIK C et al. Tolerability and effectiveness of preservative-free dorzolamide-timolol (preservative-free COSOPT&αχιρχ;) in patients with open-angle glaucoma or ocular hypertension. Clin Ophthalmol., 2010, 4, p.581-590. *
ЗАХАРОВА И.А. и др. Клиническая оценка эффективности ингибитора холинэстеразы нейромидина в лечении больных с первичной глаукомой. Вестник офтальмологии, 2017, 2, с.22-28. *
ЗАХАРОВА И.А. и др. Клиническая оценка эффективности ингибитора холинэстеразы нейромидина в лечении больных с первичной глаукомой. Вестник офтальмологии, 2017, 2, с.22-28. HUTNIK C et al. Tolerability and effectiveness of preservative-free dorzolamide-timolol (preservative-free COSOPT&αχιρχ;) in patients with open-angle glaucoma or ocular hypertension. Clin Ophthalmol., 2010, 4, p.581-590. *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2806911C1 (ru) * 2023-03-30 2023-11-08 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Курский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации Способ генотипирования полиморфного локуса rs6702742 (A>G) гена SERBP1 у человека методом ПЦР в режиме "реального времени" с применением аллель-специфических флуоресцентных зондов

Similar Documents

Publication Publication Date Title
fot the Normal Genome-wide association study of normal tension glaucoma: common variants in SRBD1 and ELOVL5 contribute to disease susceptibility
Roosing et al. Mutations in MFSD8, encoding a lysosomal membrane protein, are associated with nonsyndromic autosomal recessive macular dystrophy
Tamura et al. High frequency of open-angle glaucoma in Japanese patients with Alzheimer's disease
Ozaki et al. Association of LOXL1 gene polymorphisms with pseudoexfoliation in the Japanese
Mabuchi et al. The OPA1 gene polymorphism is associated with normal tension and high tension glaucoma
Yang et al. Genetic association of LOXL1 gene variants and exfoliation glaucoma in a Utah cohort
Markiewicz et al. Gene polymorphisms of the MMP1, MMP9, MMP12, IL‐1β and TIMP1 and the risk of primary open‐angle glaucoma
Akagi-Kurashige et al. MMP20 and ARMS2/HTRA1 are associated with neovascular lesion size in age-related macular degeneration
Hashizume et al. Genetic polymorphisms in the angiotensin II receptor gene and their association with open-angle glaucoma in a Japanese population
Ussa et al. Association between SNPs of metalloproteinases and prostaglandin F2α receptor genes and latanoprost response in open-angle glaucoma
Abu-Amero et al. Nuclear and mitochondrial analysis of patients with primary angle-closure glaucoma
Szaflik et al. Association of the 399Arg/Gln XRCC1, the 194 Arg/Trp XRCC1, the 326Ser/Cys OGG1, and the 324Gln/His MUTYH gene polymorphisms with clinical parameters and the risk for development of primary open-angle glaucoma
Sakurada et al. Association of LOC387715 A69S with vitreous hemorrhage in polypoidal choroidal vasculopathy
Shen et al. Sex-specific effect of BDNF Val66Met genotypes on the progression of open-angle glaucoma
KR20200017392A (ko) 원추 각막과 관련된 대립 유전자의 검출 방법
Nikitin et al. Leu54Phe and Val762Ala polymorphisms in the poly (ADP-ribose) polymerase-1 gene are associated with diabetic polyneuropathy in Russian type 1 diabetic patients
Chen et al. Lack of association of rs1192415 in TGFBR3-CDC7 with visual field progression: a cohort study in Chinese open angle glaucoma patients
Cuchra et al. The role of base excision repair in the development of primary open angle glaucoma in the Polish population
RU2694744C1 (ru) Способ прогнозирования эффективности лечения тимололом первичной открытоугольной глаукомы
Fassad et al. CYP1B1 and myocilin gene mutations in Egyptian patients with primary congenital glaucoma
Silva et al. Association between primary open angle glaucoma and genetic polymorphisms GSTM1/GSTT1 in patients from Goiânia Central-West Region of Brazil
Vallo The risk of primary open angle glaucoma and glutathione S-transferase M1 and T1 polymorphism among Egyptians
US20150010910A1 (en) Biomarkers for age-related macular degeneration (amd)
Cebulla et al. MIF promoter polymorphisms are associated with epiretinal membrane but not retinal detachment with PVR in an American population
Demirdöğen et al. Influence of clusterin genetic variants on IOP elevation in pseudoexfoliation syndrome and pseudoexfoliative glaucoma in Turkish population

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20201219